JP2001505428A - 染色体異常の検出 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.(a)染色体異常の一つを有すると考えられる患者由来の核酸試料を得る 段階、 (b)核酸試料を多重分子増幅過程にかける段階であって、特徴的な核酸配列の 数が十分量存在すれば増幅される段階、 (c)段階(b)による産物を回収し、増幅された特徴的な核酸配列の有無を検出す ることにより、対応する染色体異常の有無が検出される段階 を含む、染色体異常の有無を検出する方法であって、各染色体異常が患者の状態 に関連しており、かつ少なくとも一つの特徴的な核酸配列により規定される方法 において、 多重分子増幅過程が、一つの反応混合液中に少なくとも7個の相互に異なるプラ イマーの使用を含み、該少なくとも7個の相互に異なるプライマーの各々が、少 なくとも一つの特徴的な核酸配列の一端に規定され、少なくとも7個の相互に異 なるプライマーの少なくとも一つが、少なくとも二つの特徴的な核酸配列の第一 の端に規定され、該少なくとも二つの特徴的な核酸配列の各々が、少なくとも7 個の相互に異なるプライマーの残りから選択される相互に異なるプライマーによ りもう一方の端に規定され、それによって、増幅反応の結果、検出される増幅さ れた特徴的な核酸配列の数が、少なくとも1/2×n+1(式中、nは少なくとも7個 の異なるプライマーの数である)である、検出方法。 2.(a)染色体異常の一つを有すると考えられる患者由来の核酸試料を得る 段階、 (b)核酸試料を多重分子増幅過程にかける段階であって、特徴的な核酸配列の 数が十分量存在すれば増幅される段階、 (c)段階(b)による産物を回収し、増幅された特徴的な核酸配列の有無を検出す ることにより、対応する染色体異常の有無が検出される段階 を含む、染色体異常の有無を検出する方法であって、各染色体異常が患者の状態 に関連しており、かつ少なくとも一つの特徴的な核酸配列により規定される方法 において、 (1)I)試料中に存在する核酸断片と、II)該核酸断片の塩基配列を増幅するため のプライマーとを含む、内部陽性標準の使用、および (2)各々が特徴的な核酸配列の一端に規定されている相互に異なるプライマー の数、n が多重分子増幅反応に含まれ、 n個の相互に異なるプライマーの少なくとも一つが、少なくとも二つの相互に異 なる特徴的な核酸配列の第一の端に規定され、該少なくとも二つの相互に異なる 特徴的な核酸配列が、n個の相互に異なるプライマーの残りから選択される少な くとも二つの相互に異なるプライマーのもう一方の端に規定され、それによって 増幅過程の結果、検出できる増幅された特徴的な核酸配列の数が少なくとも1/2 ×n+1である、検出方法。 3.nが7である、請求項1または2記載の方法。 4.nが8である、請求項1または2記載の方法。 5.nが9である、請求項1または2記載の方法。 6.nが10である、請求項1または2記載の方法。 7.nが11である、請求項1または2記載の方法。 8.nが12である、請求項1または2記載の方法。 9.nが13である、請求項1または2記載の方法。 10.nが14である、請求項1または2記載の方法。 11.nが15である、請求項1または2記載の方法。 12.nが16である、請求項1または2記載の方法。 13.nが17である、請求項1または2記載の方法。 14.nが18である、請求項1または2記載の方法。 15.nが19である、請求項1または2記載の方法。 16.nが20である、請求項1または2記載の方法。 17.nが21である、請求項1または2記載の方法。 18.nが22である、請求項1または2記載の方法。 19.nが23である、請求項1または2記載の方法。 20.nが24である、請求項1または2記載の方法。 21.nが25である、請求項1または2記載の方法。 22.nが30から34の範囲である、請求項1または2記載の方法。 23.nが35から39の範囲である、請求項1または2記載の方法。 24.nが40から44の範囲である、請求項1または2記載の方法。 25.nが45から50の範囲である、請求項1または2記載の方法。 26.患者由来の核酸試料がcDNAの形態である、前記請求項のいずれか一項記載 の方法。 27.cDNAが分子増幅の過程で特異的または非特異的cDNAプライマーを用いるこ とにより得られ、該過程における鋳型が患者由来のmRNAの形態である、請求項2 6記載の方法。 28.cDNAプライマーが特異的である、請求項27記載の方法。 29.cDNAプライマーの数が少なくとも20である、請求項28記載の方法。 30.cDNAプライマーの数が少なくとも50である、請求項28記載の方法。 31.cDNAプライマーの数が少なくとも100である、請求項28記載の方法。 32.cDNAプライマーの数が少なくとも150である、請求項28記載の方法。 33.cDNAプライマーの数が少なくとも200である、請求項28記載の方法。 34.患者由来のcDNAを得る条件が分子増幅過程の条件と一致する、請求項26 〜33のいずれか一項記載の方法。 35.多重分子増幅が多重ポリメラーゼ連鎖反応である、前記請求項のいずれか 一項記載の方法。 36.多重ポリメラーゼ連鎖反応がネステッドポリメラーゼ連鎖反応である、請 求項8記載の方法。 37.染色体異常が、転写された融合遺伝子が存在することである、前記請求項 のいずれか一項記載の方法。 38.転写された融合遺伝子の存在が、逆位の結果である、請求項29記載の方 法。 39.転写された融合遺伝子の存在が、欠失の結果である、請求項29記載の方 法。 40.転写された融合遺伝子の存在が、重複の結果である、請求項29記載の方 法。 41.転写された融合遺伝子の存在が、Hox-11およびevi-1のような癌原遺伝子 が活性化された結果である、請求項29記載の方法。 42.少なくとも一つの染色体異常が、悪性新生物形成状態と関連している、前 記請求項のいずれか一項記載の方法。 43.悪性新生物形成状態が、全身性の新生物形成性悪性疾患である、請求項4 2記載の方法。 44.全身性の新生物形成性悪性疾患が、急性白血病(AL)、慢性白血病(CL) 、T細胞性急性白血病(T-ALL)、B細胞性急性白血病(B-ALL)、T細胞性慢性 白血病(T-CLL)、B細胞性慢性白血病(B-CLL)、前リンパ球性白血病(PLL) 、急性未分化性白血病(AUL)、急性骨髄性白血病(AML)、慢性骨髄性白血病( CML)、慢性骨髄単球性白血病(CMML)、急性前骨髄球性白血病(APL)、プレB- ALL、およびプロB-ALLのような白血病;バーキットリンパ腫(BL)、非ホジキン リンパ腫(NHL)、ホジキンリンパ腫(HL)、ろ胞性リンパ腫(FL)、びまん性 大細胞型リンバ腫(DLCL)、T細胞性リンパ腫、B細胞性リンパ腫のようなリン パ腫;脊髄形成異常;ならびに骨髄腫からなる群より選択される、請求項43記 載の方法。 45.染色体異常が、 dup(llq23)(dupエキソン5-9/2); dup(llq23)(dupエキソン5-9/4); inv(16)(p13;q22); t(1;11)(p32;q23); t(1;19)(q23;p13); t(10;11)(p14;q23); t(10;11)(p14;q23); t(10;14)(q24;q11); t(11;17)(q23;q21); t(11;19)(q23;p13.1) t(11;19)(q23;p13.3); t(12;21)(p13;q22); t(12;22)(p13;q11); t(15;17)(q21;q22); t(15;17)(q21;q22); t(16;21)(p11;q22); t(17;19)(q22;p13); t(2;3)(p21;q26); t(2;5)(p23;q35); t(3;21)(q26;q22) t(3;3)(q21;q26); t(3;5)(q25.1;q34); t(4;11)(q21;q23); t(5;12)(q33;p13); t(5;17)(q35;q22); t(6;11)(q27;q23); t(6;9)(p23;q34); t(7;10)(q35;q24); t(7;9)(q34;q32); t(8;21)(q22;q22); t(9;11)(q22;q23); t(9;12)(q34;p13); t(9;22)(q34;q11); t(9;22)(q34;q11); t(X;11)(q13;q23); およびtalld1-3(40kbの欠失)からなる群より選択されるか、または染色体異常 が、CBFβ/MYH11、SIL1/TAL1、MLL1、EVI-1、MLL1/AFX1、MLL1/AF1p、MLL1/AF1q 、E2A/PBX1、E2A/HLF、EVI1、NPM/ALK、NPM/MLF、AML1/EVI1、MLL1/AF4、TEL/PD Gfβ、NPM/RARα、DEK/CAN,SET/CAN,MLL1/AF6、HOX11、AML1/MTG8、MLL1/AF9 、BCR/ABL、MLL1/AF10、MLL1/AF17、PLZF/RARα、MLL/ELL、MLL/ENL、TEL/AML1 、PML/RARα、FUS/ERG、AML1/MDS、AML1/EAP、TEL/MN1、MLLエキソン5-9/2、お よび MLLエキソン5-9/4からなる群の遺伝子より選択される、請求項43または44記 載の方法。 46.悪性新生物形成状態が、非全身性の新生物形成性悪性疾患である、請求項 42記載の方法。 47.非全身性の新生物形成性悪性疾患が、癌腫、腺癌、脂肪肉腫、線維肉腫、 軟骨肉腫、骨肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、神経膠腫、神経芽腫、髄芽腫、悪 性黒色腫、神経線維芽腫、血管肉腫、リンパ管肉腫、悪性奇形腫、未分化胚細胞 腫、精上皮腫、および絨毛癌からなる群より選択される、請求項46記載の方法 。 48.癌腫が、胸部、気管支、結腸直腸、胃、前立腺、卵巣、リンパ組織、リン パ系髄質、子宮、膵臓、食道、膀胱、腎臓、または皮膚の癌腫より選択される、 請求項47記載の方法。 49.悪性新生物形成状態が、乳頭状甲状腺腫、ユーイング肉腫、脂肪肉腫、横 紋筋肉腫、滑膜肉腫、および軟部黒色腫からなる群より選択される、請求項47 記載の方法。 50.核酸の試料が患者の骨髄細胞に由来する、前記請求項のいずれか一項記載 の方法。 51.核酸の試料が患者の末梢血細胞に由来する、請求項1〜49のいずれか一項 記載の方法。 52.核酸の試料が胎盤細胞に由来する、請求項1〜49のいずれか一項記載の方 法。 53.核酸の試料が胎児細胞に由来する、請求項1〜49のいずれか一項記載の方 法。 54.核酸の試料が羊水に由来する、請求項1〜49のいずれか一項記載の方法。 55.多重分子増幅過程に用いられるプライマーの少なくとも一つが標識されて いる、前記請求項のいずれか一項記載の方法。 56.標識が、放射性標識、色素標識、蛍光標識、ビオチン標識、リン酸標識、 アミン標識、およびチオール標識からなる群より選択される、請求項55記載の 方法。 57.核酸の試料が、前記請求項のいずれか一項に規定されているように、少な くとも2回の多重分子増幅過程にかけられる、前記請求項のいずれか一項記載の 方法。 58.少なくとも2回の多重分子増幅過程が並行して行われる、請求項57記載 の方法。 59.少なくとも2回の多重分子増幅過程が、物理的パラメーターおよびタイミ ングに関して実質的に同じ条件下で行われる、請求項57または58記載の方法 。 60.特徴的な配列の有無が、ゲル電気泳動、塩基配列解析、HPLC,FPLCおよび 蛍光光度計を用いて決定される、前記請求項のいずれか一項記載の方法。 61.内部標準の核酸断片が患者に由来するcDNA分子である、請求項2〜60の いずれか一項記載の方法。 62.cDNA分子が、分子増幅過程において、特異的または非特異的なcDNAプライ マーを用いて得られ、該過程における鋳型が患者由来のmRNAの形態である、請求 項61記載の方法。 63.cDNA分子が請求項27記載の分子増幅過程により得られる、請求項62記 載の方法。 64.cDNA分子が構成的に発現するDNA断片に相当する、請求項62記載の方法 。 65.分子増幅過程に用いられるプライマーが、下記の条件を満たすように構築 される、前記請求項のいずれか一項記載の方法: 1)それら各々の標的配列に、実質的に同じ温度またはそれ以下の温度でハイブリ ダイズする、 2)それら各々の標的配列に実質的に特異的である、 3)実質的に分子内でハイブリダイズしない、 4)5’端の融点が、3’端の融点よりも高い、 5)分子増幅の過程において、いずれの2種のプライマーも、患者の状態とは関連 なく通常存在する配列に対応する試料中の核酸配列の増幅を、同時に開始し継続 させることができない、 6)連続して5個より多くのグアニジン残基を含むプライマーが存在しない、 7)実質的に分子間でハイブリダイズしない。 66.プライマーが、5℃以内の温度差で、各々の標的配列にハイブリダイズす る、請求項65記載の方法。 67.プライマーが、各々の配列に相補的である、請求項65および66のいず れか一項記載の方法。 68.プライマーが、該プライマー内部で-1より大きいデルタGを有する、請求 項65〜67のいずれか一項記載の方法。 69.プライマーの5’端の融点が、3’端の融点よりも少なくとも1℃、好ま しくは少なくとも6℃高い、請求項65〜68のいずれか一項記載の方法。 70.連続して3個より多くのグアニジン残基を含むプライマーが存在しない、 請求項65〜69のいずれか一項記載の方法。 71.プライマーダイマーが、-10より高いデルタGを有する、請求項65〜70 のいずれか一項記載の方法。 72.分子増幅過程に用いられるプライマーが、配列番号:1〜配列番号:18 2からなる群より選択される核酸配列を有する、前記請求項のいずれか一項記載 の方法。 73.cDNAプライマーが、配列番号:1〜配列番号:32および配列番号:17 8〜配列番号:182からなる群より選択される、請求項27〜72のいずれか 一項記載の方法。 74.試料物質が、多重分子増幅の各過程につき1μgの核酸である、前記請求 項のいずれか一項記載の方法。 75.配列番号:1〜配列番号:182からなる群より選択される核酸配列を有 する核酸断片。 76.配列番号:1〜配列番号:32および配列番号:178〜配列番号:18 2からなるcDNAプライマー;ならびに配列番号:33〜配列番号:177より選 択されるPCRプライマーの群より選択される、7種の相互に異なるプライマーを 含むキット。 77.プライマーが、ウェル、毛細管チューブ、棒、およびビーズからなる群よ り選択されるデバイスに接着されている、請求項77記載のキット。
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