JP2001296292A - 免疫測定方法 - Google Patents
免疫測定方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 遠心分離機などによって血液を前処理しなく
ても簡便にしかも短時間で測定を行うことができる免疫
測定方法を提供すること。 【解決手段】 被検体試料中の抗原あるいは抗体と特異
的に反応する抗体あるいは抗原を固定化した不溶性粒子
と被検体試料中の抗原あるいは抗体とを凝集反応させ、
生じた凝集混合液に対する光照射による吸光度変化また
は散乱光変化を測定する免疫測定方法において、前記被
検体試料として全血Ｂを用い、この全血を強制的に溶血
させるようにしている。
ても簡便にしかも短時間で測定を行うことができる免疫
測定方法を提供すること。 【解決手段】 被検体試料中の抗原あるいは抗体と特異
的に反応する抗体あるいは抗原を固定化した不溶性粒子
と被検体試料中の抗原あるいは抗体とを凝集反応させ、
生じた凝集混合液に対する光照射による吸光度変化また
は散乱光変化を測定する免疫測定方法において、前記被
検体試料として全血Ｂを用い、この全血を強制的に溶血
させるようにしている。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、免疫測定方法に
関し、より詳しくは、被検体試料中の抗原あるいは抗体
と特異的に反応する抗体あるいは抗原を固定化した不溶
性粒子と被検体試料中の抗原あるいは抗体とを凝集反応
させ、生じた凝集混合液に対して近赤外光または赤外光
を照射し、そのときの吸光度変化または散乱光変化を測
定するようにした免疫測定方法に関する。
関し、より詳しくは、被検体試料中の抗原あるいは抗体
と特異的に反応する抗体あるいは抗原を固定化した不溶
性粒子と被検体試料中の抗原あるいは抗体とを凝集反応
させ、生じた凝集混合液に対して近赤外光または赤外光
を照射し、そのときの吸光度変化または散乱光変化を測
定するようにした免疫測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術およびその欠点】前記免疫測定方法とし
て、特公昭５８−１１５７５号公報に開示されるものが
ある。すなわち、この公報の方法は、抗原あるいは抗体
を固定化した不溶性担体と体液試料中の抗体あるいは抗
原とを抗原抗体反応させ、その反応混合液に６００〜２
４００ｎｍから選ばれた波長の光を照射し、その吸光度
の増加を測定するものである。この方法は、その有用性
から所謂ラテックス免疫比濁法として、現在では免疫測
定の主流となっている。
て、特公昭５８−１１５７５号公報に開示されるものが
ある。すなわち、この公報の方法は、抗原あるいは抗体
を固定化した不溶性担体と体液試料中の抗体あるいは抗
原とを抗原抗体反応させ、その反応混合液に６００〜２
４００ｎｍから選ばれた波長の光を照射し、その吸光度
の増加を測定するものである。この方法は、その有用性
から所謂ラテックス免疫比濁法として、現在では免疫測
定の主流となっている。
【０００３】ところが、上記測定方法において用いられ
る測定試料は、水、血清、尿、食塩水などである。ま
た、臨床検査における一般的な採血の注意点としては、
溶血を極力避け、できるだけ速やかに血清・血漿分離す
ることである。この理由は、溶血による光学的測定への
影響、血球膜を通してのＮａ、Ｋ、Ｃｌなどの物質の出
入り、血球代謝による移動（解糖による乳酸、ビルビン
酸の血清中への移動）の影響、目的成分の血球中と血清
中の濃度差による影響などが挙げられる。
る測定試料は、水、血清、尿、食塩水などである。ま
た、臨床検査における一般的な採血の注意点としては、
溶血を極力避け、できるだけ速やかに血清・血漿分離す
ることである。この理由は、溶血による光学的測定への
影響、血球膜を通してのＮａ、Ｋ、Ｃｌなどの物質の出
入り、血球代謝による移動（解糖による乳酸、ビルビン
酸の血清中への移動）の影響、目的成分の血球中と血清
中の濃度差による影響などが挙げられる。
【０００４】以上のことから、被検者から得られた血液
は、遠心分離を行って血清または血漿に分離した試料を
使用しなければならなかった。このため、血液を大量に
処理できる大または中病院の中央検査室などでは支障は
ないが、開業医や緊急検査室では、遠心分離機による前
処理が行えないことがあり、したがって、上記方法は必
ずしも万全のものではない。
は、遠心分離を行って血清または血漿に分離した試料を
使用しなければならなかった。このため、血液を大量に
処理できる大または中病院の中央検査室などでは支障は
ないが、開業医や緊急検査室では、遠心分離機による前
処理が行えないことがあり、したがって、上記方法は必
ずしも万全のものではない。
【０００５】そして、このような一般的な全血の取り扱
い環境にあって、免疫検査領域において、血清・血漿分
離を行うことなく、全血を直接に測定試料とする精密定
量測定方法は存在しなかった。また、血液を溶血せずに
測定することは、光学的手段を用いて測定する場合にお
いて、赤血球による濁りが大きく、不向きであった。
い環境にあって、免疫検査領域において、血清・血漿分
離を行うことなく、全血を直接に測定試料とする精密定
量測定方法は存在しなかった。また、血液を溶血せずに
測定することは、光学的手段を用いて測定する場合にお
いて、赤血球による濁りが大きく、不向きであった。
【０００６】この発明は、上述の事柄に留意してなされ
たもので、その第１の目的は、遠心分離機などによって
血液を前処理しなくても簡便にしかも短時間で測定を行
うことができる免疫測定方法を提供することであり、第
２の目的は、免疫反応に影響しない方法によって血球を
故意かつ強制的に溶血させた試料を用いることによっ
て、各種の定量試薬と組み合わせて、精度のよいデータ
を得ることができる直接に全血を試料とした免疫測定方
法を提供することである。
たもので、その第１の目的は、遠心分離機などによって
血液を前処理しなくても簡便にしかも短時間で測定を行
うことができる免疫測定方法を提供することであり、第
２の目的は、免疫反応に影響しない方法によって血球を
故意かつ強制的に溶血させた試料を用いることによっ
て、各種の定量試薬と組み合わせて、精度のよいデータ
を得ることができる直接に全血を試料とした免疫測定方
法を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】この出願の発明者らは、
鋭意研究した結果、前記臨床検査における一般的な採血
の注意点としての溶血を極力避け、できるだけ速やかに
血清・血漿分離するという固定概念を覆し、意外にも、
凝集反応に影響しない方法を用いて故意かつ強制的に全
血を溶血させることにより、全血中の抗原あるいは抗体
を測定できることを見出した。
鋭意研究した結果、前記臨床検査における一般的な採血
の注意点としての溶血を極力避け、できるだけ速やかに
血清・血漿分離するという固定概念を覆し、意外にも、
凝集反応に影響しない方法を用いて故意かつ強制的に全
血を溶血させることにより、全血中の抗原あるいは抗体
を測定できることを見出した。
【０００８】すなわち、第１の目的を達成するため、第
１の発明では、被検体試料中の抗原あるいは抗体と特異
的に反応する抗体あるいは抗原を固定化した不溶性粒子
と被検体試料中の抗原あるいは抗体とを凝集反応させ、
生じた凝集混合液に対する光照射による吸光度変化また
は散乱光変化を測定する免疫測定方法において、前記被
検体試料として全血を用い、この全血を強制的に溶血さ
せるようにしている。
１の発明では、被検体試料中の抗原あるいは抗体と特異
的に反応する抗体あるいは抗原を固定化した不溶性粒子
と被検体試料中の抗原あるいは抗体とを凝集反応させ、
生じた凝集混合液に対する光照射による吸光度変化また
は散乱光変化を測定する免疫測定方法において、前記被
検体試料として全血を用い、この全血を強制的に溶血さ
せるようにしている。
【０００９】この場合、全血を強制的に溶血させる手段
としては、 全血を低張液と混合する、 血を溶血性サポニン類溶液と混合する、 全血を凍結融解する、 全血に超音波振動を与える、などを採用することが
できる。
としては、 全血を低張液と混合する、 血を溶血性サポニン類溶液と混合する、 全血を凍結融解する、 全血に超音波振動を与える、などを採用することが
できる。
【００１０】そして、抗原または抗体と特異的に反応す
る抗体または抗原を固定化した不溶性粒子懸濁試薬に溶
血性サポニン類を含有させてもよい。
る抗体または抗原を固定化した不溶性粒子懸濁試薬に溶
血性サポニン類を含有させてもよい。
【００１１】また、第２の目的を達成するため、第２の
発明の免疫測定方法は、全血を被検体試料とし、全血中
の抗原または抗体と特異的に反応する抗原または抗体を
固定化した不溶性粒子懸濁試薬と前記被検体試料中の抗
体または抗原とを凝集反応させる工程と、生じた凝集混
合液に対する光照射による吸光度変化または散乱光変化
を測定する工程と、被検体試料のヘマトクリット％を用
いて、 Ａ’＝Ａ×１００／（１００−ヘマトクリット％） （但し、Ａ：測定された吸光度あるいは吸光度変化量ま
たは光散乱強度あるいは光散乱変化量、Ａ’：被検体試
料中の血漿成分を１００％に換算した吸光度あるいは吸
光度変化量または光散乱強度あるいは光散乱変化量）な
る演算を行う工程とを含んだことを特徴としている。
発明の免疫測定方法は、全血を被検体試料とし、全血中
の抗原または抗体と特異的に反応する抗原または抗体を
固定化した不溶性粒子懸濁試薬と前記被検体試料中の抗
体または抗原とを凝集反応させる工程と、生じた凝集混
合液に対する光照射による吸光度変化または散乱光変化
を測定する工程と、被検体試料のヘマトクリット％を用
いて、 Ａ’＝Ａ×１００／（１００−ヘマトクリット％） （但し、Ａ：測定された吸光度あるいは吸光度変化量ま
たは光散乱強度あるいは光散乱変化量、Ａ’：被検体試
料中の血漿成分を１００％に換算した吸光度あるいは吸
光度変化量または光散乱強度あるいは光散乱変化量）な
る演算を行う工程とを含んだことを特徴としている。
【００１２】第１の発明によれば、 全血被検液を遠心分離操作などの前処理を行うこと
なく、直接、全血被検液を用いることにより、測定時間
の短縮、測定コストの低減および測定操作の簡略化が図
れる。そして、遠心分離操作を行う必要がないというこ
とは、遠心分離機や遠心分離容器の費用、被検液の採血
容器から遠心分離容器への移替えの手間および遠心分離
操作のための時間が不要になるとともに、それだけ、検
査要員が血液に接触する機械が少なくて済み、感染への
危険性が大幅に低減される。
なく、直接、全血被検液を用いることにより、測定時間
の短縮、測定コストの低減および測定操作の簡略化が図
れる。そして、遠心分離操作を行う必要がないというこ
とは、遠心分離機や遠心分離容器の費用、被検液の採血
容器から遠心分離容器への移替えの手間および遠心分離
操作のための時間が不要になるとともに、それだけ、検
査要員が血液に接触する機械が少なくて済み、感染への
危険性が大幅に低減される。
【００１３】 抗原抗体反応に影響しない方法で全血
中の血球を強制的に溶血させることにより、一般のラテ
ックス免疫比濁法を用いた測定キットと組み合わせるこ
とができ、精度のよい測定データを得ることができると
ともに、広範囲な応用が可能になる。
中の血球を強制的に溶血させることにより、一般のラテ
ックス免疫比濁法を用いた測定キットと組み合わせるこ
とができ、精度のよい測定データを得ることができると
ともに、広範囲な応用が可能になる。
【００１４】 溶血試薬をラテックス試薬に含ませる
ことによって、測定装置の構成を簡単にすることがで
き、測定時間を短縮することができる。
ことによって、測定装置の構成を簡単にすることがで
き、測定時間を短縮することができる。
【００１５】そして、第２の発明によれば、ヘマトクリ
ット補正を行うことにより、精度の優れたデータを得る
ことができる。
ット補正を行うことにより、精度の優れたデータを得る
ことができる。
【００１６】
【発明の実施の形態】以下、この発明の詳細を実施例に
よって詳細に説明する。
よって詳細に説明する。
【００１７】まず、各実施例を説明する前に、検討に用
いた試薬を下記表１に示す。なお、この表１における符
号ａ〜ｇは、以下の図５〜７における符号と同じであ
る。
いた試薬を下記表１に示す。なお、この表１における符
号ａ〜ｇは、以下の図５〜７における符号と同じであ
る。
【００１８】
【表１】
【００１９】〔実施例１〕：溶血試薬による溶血法 ＥＤＴＡ−２Ｋ抗凝固剤を用いて通常の採血法により採
血した人全血０．０４ｍＬを、図１に示すようなセル長
５ｍｍの石英製のセル５に収容し、これに、前記表１に
示した溶血試薬水溶液ａ〜ｇをそれぞれ２．０ｍＬ添加
し、図２に示すような分光光度計１（例えば日立製作所
製：Ｕ−３４１０）を用いて、波長３００〜１０００ｎ
ｍにおける吸収スペクトル（図５参照）、波長８００ｎ
ｍにおける溶血反応タイムコース（図６参照）および波
長８００ｎｍにおけるそれぞれの反応開始後５分目の吸
光度と反応開始後４〜５分目における１分間当たりの吸
光度変化（表１参照）を求め、各種溶血試薬の溶血能力
を調べた。
血した人全血０．０４ｍＬを、図１に示すようなセル長
５ｍｍの石英製のセル５に収容し、これに、前記表１に
示した溶血試薬水溶液ａ〜ｇをそれぞれ２．０ｍＬ添加
し、図２に示すような分光光度計１（例えば日立製作所
製：Ｕ−３４１０）を用いて、波長３００〜１０００ｎ
ｍにおける吸収スペクトル（図５参照）、波長８００ｎ
ｍにおける溶血反応タイムコース（図６参照）および波
長８００ｎｍにおけるそれぞれの反応開始後５分目の吸
光度と反応開始後４〜５分目における１分間当たりの吸
光度変化（表１参照）を求め、各種溶血試薬の溶血能力
を調べた。
【００２０】なお、前記図２において、２は近赤外光ま
たは赤外光などの照射光Ｌを発するハロゲンランプから
なる光源、３は集光レンズ、４は回折格子、６は増幅
器、７はコンピュータなどの演算・記録装置である。ま
た、Ｓはセル５内に収容された試料としての溶血処理を
施した全血である。
たは赤外光などの照射光Ｌを発するハロゲンランプから
なる光源、３は集光レンズ、４は回折格子、６は増幅
器、７はコンピュータなどの演算・記録装置である。ま
た、Ｓはセル５内に収容された試料としての溶血処理を
施した全血である。
【００２１】図５に示すように、試薬ｊ（生理食塩水）
の未溶血ではその濁りによって全波長での吸光度が２．
５以上となり、ラテックス凝集反応を光学的に検出する
際に影響を与える結果となった。一方、同図に示すよう
に、試薬ａ（純水）、試薬ｂ（サポニン水溶液）を用い
ることにより、上記のような濁りはなくなり、ラテック
ス凝集度合いを検出できることが判った。また。表１お
よび図６から、試薬ａ（純水）、試薬ｂ（サポニン）、
試薬ｃ（トリトンＸ−１００）、試薬ｆ（ラウリル硫酸
ナトリウム）および試薬ｇ（ベンザルコニウムクロライ
ド）は、人全血を短期間に溶血する能力があることが判
る。
の未溶血ではその濁りによって全波長での吸光度が２．
５以上となり、ラテックス凝集反応を光学的に検出する
際に影響を与える結果となった。一方、同図に示すよう
に、試薬ａ（純水）、試薬ｂ（サポニン水溶液）を用い
ることにより、上記のような濁りはなくなり、ラテック
ス凝集度合いを検出できることが判った。また。表１お
よび図６から、試薬ａ（純水）、試薬ｂ（サポニン）、
試薬ｃ（トリトンＸ−１００）、試薬ｆ（ラウリル硫酸
ナトリウム）および試薬ｇ（ベンザルコニウムクロライ
ド）は、人全血を短期間に溶血する能力があることが判
る。
【００２２】〔実施例２〕：凍結による溶血法 図３は、全血を溶血させるのに用いる凍結セルホルダー
９の一例を示すもので、セル５を挿入保持できるととも
に、測光窓１０を備えたアルミニウム製のセルブロック
１１にペルチェ素子（例えばメルコア製）１２を接合し
てなるものである。１３はペルチェ素子１２に適宜の直
流電流を供給するための電源、Ｌは光源２からの近赤外
光または赤外光である。
９の一例を示すもので、セル５を挿入保持できるととも
に、測光窓１０を備えたアルミニウム製のセルブロック
１１にペルチェ素子（例えばメルコア製）１２を接合し
てなるものである。１３はペルチェ素子１２に適宜の直
流電流を供給するための電源、Ｌは光源２からの近赤外
光または赤外光である。
【００２３】ＥＤＴＡ−２Ｋ抗凝固剤を用いて通常の採
血法により採血した人全血０．０４ｍＬを、図３に示す
ように、凍結セルホルダー９にセットされたセル５内に
収容し、ペルチェ素子１２に所定の方向の電流を１０分
間通電して人全血を完全に凍結した。その後、ペルチェ
素子１２に方向とは逆方向の電流を通電して凍結した人
全血を融解し、これに生理食塩水２．０ｍＬを添加して
融解希釈した後、分光光度計１を用いて波長８００ｎｍ
における反応開始後５分目の吸光度と反応開始後４〜５
分目における１分間当たりの吸光度変化（表１参照）を
求め、溶血試薬の溶血能力を調べた。表１においてｈで
示すように、人全血を凍結・融解することによってこれ
４溶血できることが判る。
血法により採血した人全血０．０４ｍＬを、図３に示す
ように、凍結セルホルダー９にセットされたセル５内に
収容し、ペルチェ素子１２に所定の方向の電流を１０分
間通電して人全血を完全に凍結した。その後、ペルチェ
素子１２に方向とは逆方向の電流を通電して凍結した人
全血を融解し、これに生理食塩水２．０ｍＬを添加して
融解希釈した後、分光光度計１を用いて波長８００ｎｍ
における反応開始後５分目の吸光度と反応開始後４〜５
分目における１分間当たりの吸光度変化（表１参照）を
求め、溶血試薬の溶血能力を調べた。表１においてｈで
示すように、人全血を凍結・融解することによってこれ
４溶血できることが判る。
【００２４】〔実施例３〕：超音波振動による溶血法 図４は、全血を溶血させるのに用いる超音波ノズル１４
の一例を示すもので、ステンレス鋼製のノズル１５に超
音波発振子１６を結合したもので、１７は発振回路、１
８は吸引用シリンジである。
の一例を示すもので、ステンレス鋼製のノズル１５に超
音波発振子１６を結合したもので、１７は発振回路、１
８は吸引用シリンジである。
【００２５】ＥＤＴＡ−２Ｋ抗凝固剤を用いて通常の採
血法により採血した人全血０．０４ｍＬをノズル１５内
に吸引し、その状態で超音波発振子１６を５分間動作さ
せることにより、ノズル１５内の人全血Ｂを溶血した。
その後、この溶血した人全血Ｂを全量セル５に収容し、
さらに、これに生理食塩水２．０ｍＬを添加して希釈し
た後、分光光度計１を用いて波長８００ｎｍにおける反
応開始後５分目の吸光度と反応開始後４〜５分目におけ
る１分間当たりの吸光度変化（表１参照）を求め、溶血
試薬の溶血能力を調べた。表１において符号ｉで示すよ
うに、人全血に超音波振動を与えることによりこれを溶
血できることが判る。
血法により採血した人全血０．０４ｍＬをノズル１５内
に吸引し、その状態で超音波発振子１６を５分間動作さ
せることにより、ノズル１５内の人全血Ｂを溶血した。
その後、この溶血した人全血Ｂを全量セル５に収容し、
さらに、これに生理食塩水２．０ｍＬを添加して希釈し
た後、分光光度計１を用いて波長８００ｎｍにおける反
応開始後５分目の吸光度と反応開始後４〜５分目におけ
る１分間当たりの吸光度変化（表１参照）を求め、溶血
試薬の溶血能力を調べた。表１において符号ｉで示すよ
うに、人全血に超音波振動を与えることによりこれを溶
血できることが判る。
【００２６】〔実施例４〕：ＣＲＰの測定方法１ １）抗ＣＲＰ抗体感作ラテックス液の調整 平均粒径０．２μｍのポリスチレンラテックス（例えば
日本合成ゴム社製：固形分１０％）１０ｍＬに、約１０
ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＣＲＰウサギ抗体液（ｐＨ７．５、
１００ｍｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液、０．１％アジ化
Ｎａ）を添加し、３０℃で一昼夜静置した後、３６００
ｒｐｍで遠心分離した沈澱物に０．２Ｗ／Ｖ％牛血清ア
ルブミン ｐＨ８．５、１００ｍｍｏｌ／Ｌトリス塩酸
緩衝液を添加し、抗ヒトＣＲＰ抗体感作ラテックス懸濁
液に調整した。
日本合成ゴム社製：固形分１０％）１０ｍＬに、約１０
ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＣＲＰウサギ抗体液（ｐＨ７．５、
１００ｍｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液、０．１％アジ化
Ｎａ）を添加し、３０℃で一昼夜静置した後、３６００
ｒｐｍで遠心分離した沈澱物に０．２Ｗ／Ｖ％牛血清ア
ルブミン ｐＨ８．５、１００ｍｍｏｌ／Ｌトリス塩酸
緩衝液を添加し、抗ヒトＣＲＰ抗体感作ラテックス懸濁
液に調整した。
【００２７】２）ＣＲＰ測定方法 ＥＤＴＡ−２Ｋ抗凝固剤を用いて通常の採血法により採
血した人全血０．０４ｍＬをセル１に収容し、これに、
表１に示した溶血試薬水溶液ａ〜ｇを０．５ｍＬ添加
し、３７℃で３分間インキュベーションした後、上記
１）で調整した抗ヒトＣＲＰ抗体感作ラテックス懸濁液
を１．５ｍＬ添加し、分光光度計１を用いて波長８００
ｎｍにおける反応開始後４〜５分目における１分間当た
りの吸光度変化を求めた。
血した人全血０．０４ｍＬをセル１に収容し、これに、
表１に示した溶血試薬水溶液ａ〜ｇを０．５ｍＬ添加
し、３７℃で３分間インキュベーションした後、上記
１）で調整した抗ヒトＣＲＰ抗体感作ラテックス懸濁液
を１．５ｍＬ添加し、分光光度計１を用いて波長８００
ｎｍにおける反応開始後４〜５分目における１分間当た
りの吸光度変化を求めた。
【００２８】別途、血漿を検体とした市販のラテックス
免疫比濁法ＣＲＰ測定キットを用いて前記検体を検定し
て検量線を作成した。図３は、前記ＣＲＰ測定に得られ
た結果に基づいて作成した検量線を示すもので、純水ａ
およびサポニン水溶液ｂなどを用いて全血を強制的に溶
血したものにおいては、図中の符号ａ，ｂで示すよう
に、良好な感度の検量線が得られた。しかしながら、各
種界面活性剤ｃ〜ｇを用いた場合には、凝集反応が阻害
され、図中の符号ｃ〜ｇで示すように、免疫反応には適
さないという結果となった。
免疫比濁法ＣＲＰ測定キットを用いて前記検体を検定し
て検量線を作成した。図３は、前記ＣＲＰ測定に得られ
た結果に基づいて作成した検量線を示すもので、純水ａ
およびサポニン水溶液ｂなどを用いて全血を強制的に溶
血したものにおいては、図中の符号ａ，ｂで示すよう
に、良好な感度の検量線が得られた。しかしながら、各
種界面活性剤ｃ〜ｇを用いた場合には、凝集反応が阻害
され、図中の符号ｃ〜ｇで示すように、免疫反応には適
さないという結果となった。
【００２９】〔実施例５〕：凍結法または超音波振動法
による溶血試料を用いたＣＲＰ測定方法 前記実施例２または実施例３で溶血した後の生理食塩水
による希釈操作の代わりに、実施例４で作製した抗ヒト
ＣＲＰ抗体感作ラテックス懸濁液を２．０ｍＬ添加し、
分光光度計１を用いて波長８００ｎｍにおける反応開始
後４〜５分目における１分間当たりの吸光度変化を求め
た。
による溶血試料を用いたＣＲＰ測定方法 前記実施例２または実施例３で溶血した後の生理食塩水
による希釈操作の代わりに、実施例４で作製した抗ヒト
ＣＲＰ抗体感作ラテックス懸濁液を２．０ｍＬ添加し、
分光光度計１を用いて波長８００ｎｍにおける反応開始
後４〜５分目における１分間当たりの吸光度変化を求め
た。
【００３０】別途、血清または血漿を検体とした市販の
ラテックス免疫比濁法ＣＲＰ測定キットを用いて前記検
体を検定して検量線を作成した。この場合、図３の符号
ｈ，ｉで示すように、良好な感度の検量線が得られた。
ラテックス免疫比濁法ＣＲＰ測定キットを用いて前記検
体を検定して検量線を作成した。この場合、図３の符号
ｈ，ｉで示すように、良好な感度の検量線が得られた。
【００３１】〔実施例６〕：ＣＲＰの測定方法２ 前記実施例４で用いた抗ヒトＣＲＰ抗体感作ラテックス
懸濁液の代わりに、市販のラテックス免疫比濁法ＣＲＰ
測定キットを用い、溶血試薬として０．５Ｗ／Ｖ％サポ
ニン水溶液を用いる以外は実施例４と同様の測定方法に
より、波長８００ｎｍにおける反応開始後４〜５分目に
おける１分間当たりの吸光度変化を求め、事前に作成し
た検量線より、全血を検体としたこの発明の分析値と血
清を検体とした分析値との相関試験（ｎ＝４０）を実施
したところ、図８に示すように、良好な結果が得られ
た。
懸濁液の代わりに、市販のラテックス免疫比濁法ＣＲＰ
測定キットを用い、溶血試薬として０．５Ｗ／Ｖ％サポ
ニン水溶液を用いる以外は実施例４と同様の測定方法に
より、波長８００ｎｍにおける反応開始後４〜５分目に
おける１分間当たりの吸光度変化を求め、事前に作成し
た検量線より、全血を検体としたこの発明の分析値と血
清を検体とした分析値との相関試験（ｎ＝４０）を実施
したところ、図８に示すように、良好な結果が得られ
た。
【００３２】〔実施例７〕：ヘマトクリット補正 前記実施例６において、この発明による分析値に関し
て、測定した全血検体を同時に血球カウンタ（例えば堀
場製作所製：ＬＣ−２４０Ａ）によって、そのヘマトク
リット値を測定し、 Ａ’＝Ａ×１００／（１００−ヘマトクリット％） …（１） 但し、Ａ：実際に測定された吸光度変化量、Ａ’：被検
体試料中の血漿成分を１００％に換算した吸光度変化
量）なる演算を行って求めた分析値と血清を検体とした
分析値との相関試験（ｎ＝４０）を実施したところ、図
９に示すように、実施例６の結果よりもより良好な結果
が得られた。
て、測定した全血検体を同時に血球カウンタ（例えば堀
場製作所製：ＬＣ−２４０Ａ）によって、そのヘマトク
リット値を測定し、 Ａ’＝Ａ×１００／（１００−ヘマトクリット％） …（１） 但し、Ａ：実際に測定された吸光度変化量、Ａ’：被検
体試料中の血漿成分を１００％に換算した吸光度変化
量）なる演算を行って求めた分析値と血清を検体とした
分析値との相関試験（ｎ＝４０）を実施したところ、図
９に示すように、実施例６の結果よりもより良好な結果
が得られた。
【００３３】上述の実施例では、凝集混合液に対する光
照射による吸光度変化を測定するようにしているが、こ
れに代えて、散乱光変化を測定するようにしてもよい。
照射による吸光度変化を測定するようにしているが、こ
れに代えて、散乱光変化を測定するようにしてもよい。
【００３４】
【発明の効果】この発明は、以上のような形態で実施さ
れ、以下のような効果を奏する。
れ、以下のような効果を奏する。
【００３５】第１の発明によれば、全血被検液を遠心分
離操作などの前処理を行うことなく、直接、全血被検液
を用いることができるので、測定時間の短縮、測定コス
トの低減および測定操作の簡略化が図れる。そして、検
査要員が血液に接触する機械が少なくて済み、感染への
危険性が大幅に低減される。
離操作などの前処理を行うことなく、直接、全血被検液
を用いることができるので、測定時間の短縮、測定コス
トの低減および測定操作の簡略化が図れる。そして、検
査要員が血液に接触する機械が少なくて済み、感染への
危険性が大幅に低減される。
【００３６】そして、第２の発明によれば、ヘマトクリ
ット補正を行うことにより、精度の優れたデータを得る
ことができる。
ット補正を行うことにより、精度の優れたデータを得る
ことができる。
【図１】この発明方法で用いるセルの一例を示す斜視図
である。
である。
【図２】この発明方法で用いる分光光度計の構成を概略
的に示す図である。
的に示す図である。
【図３】この発明方法で用いる凍結セルホルダーの一例
を示す斜視図である。
を示す斜視図である。
【図４】この発明方法で用いる用いる超音波ノズルの一
例を示す斜視図である。
例を示す斜視図である。
【図５】各種の溶血試薬水溶液を用いて全血を溶血させ
た試料の波長３００〜１０００ｎｍにおける吸収スペク
トルを示す図である。
た試料の波長３００〜１０００ｎｍにおける吸収スペク
トルを示す図である。
【図６】各種の溶血試薬水溶液を用いて全血を溶血させ
た試料の波長８００ｎｍにおける溶血反応タイムコース
を示す図である。
た試料の波長８００ｎｍにおける溶血反応タイムコース
を示す図である。
【図７】ＣＲＰ測定を行ったときに得られた検量線の一
例を示す図である。
例を示す図である。
【図８】ヘマトクリット補正を行わないときにおける全
血検体と血漿検体との相関関係を示す図である。
血検体と血漿検体との相関関係を示す図である。
【図９】ヘマトクリット補正を行ったときにおける全血
検体と血漿検体との相関関係を示す図である。
検体と血漿検体との相関関係を示す図である。
Ｂ…全血、Ｓ…溶血処理を施した全血、Ｌ…照射光。
Claims (7)
- 【請求項１】 被検体試料中の抗原あるいは抗体と特異
的に反応する抗体あるいは抗原を固定化した不溶性粒子
と被検体試料中の抗原あるいは抗体とを凝集反応させ、
生じた凝集混合液に対する光照射による吸光度変化また
は散乱光変化を測定する免疫測定方法において、前記被
検体試料として全血を用い、この全血を強制的に溶血さ
せるようにしたことを特徴とする免疫測定方法。 - 【請求項２】 全血を低張液と混合することにより全血
を強制的に溶血させるようにした請求項１に記載の免疫
測定方法。 - 【請求項３】 全血を溶血性サポニン類溶液と混合する
ことにより全血を強制的に溶血させるようにした請求項
１に記載の免疫測定方法。 - 【請求項４】 全血を凍結融解することにより全血を強
制的に溶血させるようにした請求項１に記載の免疫測定
方法。 - 【請求項５】 全血に超音波振動を与えることにより全
血を強制的に溶血させるようにした請求項１に記載の免
疫測定方法。 - 【請求項６】 抗原または抗体と特異的に反応する抗体
または抗原を固定化した不溶性粒子懸濁試薬に溶血性サ
ポニン類を含有させた請求項１に記載の免疫測定方法。 - 【請求項７】 全血を被検体試料とし、全血中の抗原ま
たは抗体と特異的に反応する抗原または抗体を固定化し
た不溶性粒子懸濁試薬と前記被検体試料中の抗体または
抗原とを凝集反応させる工程と、生じた凝集混合液に対
する光照射による吸光度変化または散乱光変化を測定す
る工程と、被検体試料のヘマトクリット％を用いて、 Ａ’＝Ａ×１００／（１００−ヘマトクリット％） （但し、Ａ：測定された吸光度あるいは吸光度変化量ま
たは光散乱強度あるいは光散乱変化量、Ａ’：被検体試
料中の血漿成分を１００％に換算した吸光度あるいは吸
光度変化量または光散乱強度あるいは光散乱変化量）な
る演算を行う工程とを含むことを特徴とする免疫測定方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001087253A JP3779885B2 (ja) | 2001-03-26 | 2001-03-26 | 免疫測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001087253A JP3779885B2 (ja) | 2001-03-26 | 2001-03-26 | 免疫測定方法 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21796696A Division JP3249919B2 (ja) | 1996-07-30 | 1996-07-30 | 免疫測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001296292A true JP2001296292A (ja) | 2001-10-26 |
| JP3779885B2 JP3779885B2 (ja) | 2006-05-31 |
Family
ID=18942523
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001087253A Expired - Lifetime JP3779885B2 (ja) | 2001-03-26 | 2001-03-26 | 免疫測定方法 |
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| JP (1) | JP3779885B2 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2004106930A1 (ja) * | 2003-05-27 | 2006-07-20 | 株式会社三菱化学ヤトロン | イムノクロマトグラフ法 |
| JP2007071610A (ja) * | 2005-09-06 | 2007-03-22 | Canon Inc | センシング装置、およびセンシング方法 |
| JP2011528105A (ja) * | 2008-07-16 | 2011-11-10 | ラジオメーター・メディカル・アー・ペー・エス | 血液サンプルを溶血させその少なくとも１つのパラメータを測定する装置 |
| JP2011529173A (ja) * | 2008-07-25 | 2011-12-01 | ゼボ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 体液検査における細胞性成分の崩壊 |
| WO2014054389A1 (ja) | 2012-10-03 | 2014-04-10 | コニカミノルタ株式会社 | 表面プラズモンを利用した免疫測定方法 |
| WO2014112318A1 (ja) * | 2013-01-16 | 2014-07-24 | 富士レビオ株式会社 | 検体中のヘモグロビンA1cの免疫測定方法 |
| CN110068678A (zh) * | 2013-05-31 | 2019-07-30 | 积水医疗株式会社 | 凝集免疫测定法 |
-
2001
- 2001-03-26 JP JP2001087253A patent/JP3779885B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JP2007071610A (ja) * | 2005-09-06 | 2007-03-22 | Canon Inc | センシング装置、およびセンシング方法 |
| JP2011528105A (ja) * | 2008-07-16 | 2011-11-10 | ラジオメーター・メディカル・アー・ペー・エス | 血液サンプルを溶血させその少なくとも１つのパラメータを測定する装置 |
| US9097701B2 (en) | 2008-07-16 | 2015-08-04 | Radiometer Medical Aps | Apparatus for hemolyzing a blood sample and for measuring at least one parameter thereof |
| JP2011529173A (ja) * | 2008-07-25 | 2011-12-01 | ゼボ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 体液検査における細胞性成分の崩壊 |
| WO2014054389A1 (ja) | 2012-10-03 | 2014-04-10 | コニカミノルタ株式会社 | 表面プラズモンを利用した免疫測定方法 |
| US10228326B2 (en) | 2012-10-03 | 2019-03-12 | Konica Minolta, Inc. | Immunoassay method utilizing surface plasmon |
| WO2014112318A1 (ja) * | 2013-01-16 | 2014-07-24 | 富士レビオ株式会社 | 検体中のヘモグロビンA1cの免疫測定方法 |
| JPWO2014112318A1 (ja) * | 2013-01-16 | 2017-01-19 | 富士レビオ株式会社 | 検体中のヘモグロビンＡ１ｃの免疫測定方法 |
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| JP3779885B2 (ja) | 2006-05-31 |
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