JP2001235477A - ペプチドのアミノ酸配列解析方法 - Google Patents
ペプチドのアミノ酸配列解析方法Info
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- JP2001235477A JP2001235477A JP2000046302A JP2000046302A JP2001235477A JP 2001235477 A JP2001235477 A JP 2001235477A JP 2000046302 A JP2000046302 A JP 2000046302A JP 2000046302 A JP2000046302 A JP 2000046302A JP 2001235477 A JP2001235477 A JP 2001235477A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明は、ペプチドの効率的なアミノ酸解析
方法を提供することを目的とする。より詳細には、従来
の質量分析法では断片イオン化できないペプチドでも、
アミノ酸配列を解析できる方法を提供することを目的と
する。 【解決手段】 ペプチドを蛍光化合物で標識し、得られ
た蛍光標識化ペプチドを、ＰＳＤ法を用いるＭＡＬＤＩ
−ＴＯＦ質量分析により分析することを特徴とするペプ
チドのアミノ酸配列解析方法。
方法を提供することを目的とする。より詳細には、従来
の質量分析法では断片イオン化できないペプチドでも、
アミノ酸配列を解析できる方法を提供することを目的と
する。 【解決手段】 ペプチドを蛍光化合物で標識し、得られ
た蛍光標識化ペプチドを、ＰＳＤ法を用いるＭＡＬＤＩ
−ＴＯＦ質量分析により分析することを特徴とするペプ
チドのアミノ酸配列解析方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はペプチドのアミノ酸
残基配列の解析方法に関する。
残基配列の解析方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ペプチドや蛋白質のアミノ酸残基配列を
決定することは生命体の主要成分である蛋白質の多彩な
機能の解明をするためにも重要なことである。従来、ペ
プチドや高分子の蛋白質を酵素などで断片化したペプチ
ドのアミノ酸残基配列解析は、エドマン分解法などの化
学的方法やその他の生化学的方法で行われてきたが、効
率が非常に悪かった。近年、質量分析法を用いてペプチ
ドや小分子蛋白質の配列解析が行われるようになった。
この方法は微量のペプチド試料で分析できることが利点
であり、また、ペプチドのアミノ酸が置換されたり、修
飾されている場合にも非常に有用である。最近は、質量
分析法のいくつかの手法のなかでもMALDI-TOF-MS法（Ma
trix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-
Flight Mass Spectrometry 、マトリクス支援レーザー
吸収イオン化飛行時間型質量分析器）のPost-Sourse De
cay(PSD)手法を用いたペプチド配列解析が最有力の手段
として用いられるようになってきている。
決定することは生命体の主要成分である蛋白質の多彩な
機能の解明をするためにも重要なことである。従来、ペ
プチドや高分子の蛋白質を酵素などで断片化したペプチ
ドのアミノ酸残基配列解析は、エドマン分解法などの化
学的方法やその他の生化学的方法で行われてきたが、効
率が非常に悪かった。近年、質量分析法を用いてペプチ
ドや小分子蛋白質の配列解析が行われるようになった。
この方法は微量のペプチド試料で分析できることが利点
であり、また、ペプチドのアミノ酸が置換されたり、修
飾されている場合にも非常に有用である。最近は、質量
分析法のいくつかの手法のなかでもMALDI-TOF-MS法（Ma
trix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-
Flight Mass Spectrometry 、マトリクス支援レーザー
吸収イオン化飛行時間型質量分析器）のPost-Sourse De
cay(PSD)手法を用いたペプチド配列解析が最有力の手段
として用いられるようになってきている。
【０００３】しかしながら、ある種のペプチドや小蛋白
質では、このMALDI-TOF-MS-PSD法で測定しても、アミノ
酸残基断片のイオンが検出されず、従ってそのようなペ
プチドや小蛋白質の配列解析はできない。TOF-MS-PDS法
のこの技術点困難の原因は現在のところ解明されていな
い。また、ペプチドの配列解析における上記MALDI-TOF-
MS-PSD法において、レーザーによる励起で試料を断片イ
オンにすることが、ある種のペプチドや小蛋白質では困
難であることがしばしば起こり、その非断片化のメカニ
ズムが解明されていないので、現時点では、MALDI-TOF-
MS分光器の改良を行って、この困難な問題点を克服する
ことは容易ではない。このことから、これらの問題点を
解決するためには、試料のペプチド及び小蛋白質の方を
レーザー光によって励起して、断片イオンが出やすいよ
うに工夫することが必要である。
質では、このMALDI-TOF-MS-PSD法で測定しても、アミノ
酸残基断片のイオンが検出されず、従ってそのようなペ
プチドや小蛋白質の配列解析はできない。TOF-MS-PDS法
のこの技術点困難の原因は現在のところ解明されていな
い。また、ペプチドの配列解析における上記MALDI-TOF-
MS-PSD法において、レーザーによる励起で試料を断片イ
オンにすることが、ある種のペプチドや小蛋白質では困
難であることがしばしば起こり、その非断片化のメカニ
ズムが解明されていないので、現時点では、MALDI-TOF-
MS分光器の改良を行って、この困難な問題点を克服する
ことは容易ではない。このことから、これらの問題点を
解決するためには、試料のペプチド及び小蛋白質の方を
レーザー光によって励起して、断片イオンが出やすいよ
うに工夫することが必要である。
【０００４】この方向の手法として、MALDI-TOF-MS手法
でなく、質量分析法の ChemicallyInduced Detection(C
ID)法を用い、ペプチドのN末端をジメチルアルキルアン
モニウム塩に電荷を固定したペプチド試料でアミノ酸配
列を決定する方法が試みられている［インターナショナ
ル ジャーナル マス スペクトロメトリー、イオンプ
ロセス（Int. J. Mass Spectrometry, Ion Process）第
100巻、第287〜299頁（1988）］。この手法はCID法であ
り、TOF-MS-PSD法よりも測定が困難であり（イオン化し
にくい）、一般的な方法とはいえないという問題点があ
る。
でなく、質量分析法の ChemicallyInduced Detection(C
ID)法を用い、ペプチドのN末端をジメチルアルキルアン
モニウム塩に電荷を固定したペプチド試料でアミノ酸配
列を決定する方法が試みられている［インターナショナ
ル ジャーナル マス スペクトロメトリー、イオンプ
ロセス（Int. J. Mass Spectrometry, Ion Process）第
100巻、第287〜299頁（1988）］。この手法はCID法であ
り、TOF-MS-PSD法よりも測定が困難であり（イオン化し
にくい）、一般的な方法とはいえないという問題点があ
る。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題点
を解決し、ペプチドの効率的なアミノ酸解析方法を提供
することを目的とする。より詳細には、従来の質量分析
法では断片イオン化できないペプチドでも、アミノ酸配
列を解析できる方法を提供することを目的とする。
を解決し、ペプチドの効率的なアミノ酸解析方法を提供
することを目的とする。より詳細には、従来の質量分析
法では断片イオン化できないペプチドでも、アミノ酸配
列を解析できる方法を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意研究を行った結果、ペプチドに特定の
蛍光物質を付加し、そのMALDI-TOF-MAS-PSDスペクトル
を分析することにより、ペプチドのアミノ酸残基配列を
決定することができることを見出し本発明を完成するに
至った。
を解決すべく鋭意研究を行った結果、ペプチドに特定の
蛍光物質を付加し、そのMALDI-TOF-MAS-PSDスペクトル
を分析することにより、ペプチドのアミノ酸残基配列を
決定することができることを見出し本発明を完成するに
至った。
【０００７】即ち、本発明は以下の発明を包含する。 （１）ペプチドを蛍光化合物で標識し、得られた蛍光標
識化ペプチドを、ＰＳＤ法を用いるＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ
質量分析により分析することを特徴とするペプチドのア
ミノ酸配列解析方法。 （２）蛍光化合物がフルオレセイン化合物である前記
（１）記載の方法。
識化ペプチドを、ＰＳＤ法を用いるＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ
質量分析により分析することを特徴とするペプチドのア
ミノ酸配列解析方法。 （２）蛍光化合物がフルオレセイン化合物である前記
（１）記載の方法。
【０００８】
【発明の実施の形態】以下、本発明を具体的に説明す
る。本明細書でいう「蛍光化合物」とは、蛍光を出す能
力を持つ化合物のことをいう。また、本明細書でいう
「ペプチド」とは、２個以上のアミノ酸がペプチド結合
により結合して生じる化合物のことをいう。
る。本明細書でいう「蛍光化合物」とは、蛍光を出す能
力を持つ化合物のことをいう。また、本明細書でいう
「ペプチド」とは、２個以上のアミノ酸がペプチド結合
により結合して生じる化合物のことをいう。
【０００９】本発明において試料として用いられるペプ
チドは、特に限定されないが、分子量５０００以下のペ
プチドが好ましい。複数のペプチド鎖（多量体）からな
る蛋白質、あるいはジスルフィド結合が存在するペプチ
ドを分析する場合には、それぞれ通常用いられる方法に
よりジスルフィド結合を持たない１本のペプチド鎖に分
解してから分析を行う。
チドは、特に限定されないが、分子量５０００以下のペ
プチドが好ましい。複数のペプチド鎖（多量体）からな
る蛋白質、あるいはジスルフィド結合が存在するペプチ
ドを分析する場合には、それぞれ通常用いられる方法に
よりジスルフィド結合を持たない１本のペプチド鎖に分
解してから分析を行う。
【００１０】ここでは、ペプチド試料として細胞内の蛋
白質が分解した核ペプチド（CDYEGRLI）を例に用いて説
明するが、その他のペプチドについても以下に記載する
方法に準じて本発明を実施できる。図１に示したMALDI-
TOF-MS分光器（PSD法）によるCDYEGRLIのマススペクト
ルからもわかるように、このペプチドは従来用いられて
いるMALDI-TOF-MS分光器でPSD法を用いて測定を行って
も断片イオンは検出できず、従来法ではアミノ酸残基配
列は決定できないペプチドである。
白質が分解した核ペプチド（CDYEGRLI）を例に用いて説
明するが、その他のペプチドについても以下に記載する
方法に準じて本発明を実施できる。図１に示したMALDI-
TOF-MS分光器（PSD法）によるCDYEGRLIのマススペクト
ルからもわかるように、このペプチドは従来用いられて
いるMALDI-TOF-MS分光器でPSD法を用いて測定を行って
も断片イオンは検出できず、従来法ではアミノ酸残基配
列は決定できないペプチドである。
【００１１】本発明では、ペプチドを質量分析器で測定
する前に、当該ペプチドを蛍光化合物で標識する。蛍光
化合物としては、蛋白質やペプチドの蛍光標識試薬とし
て当技術分野で一般に使用されているものであれば特に
限定されないが、好ましくはフルオレセイン化合物で標
識する。例えば、フルオレセイン化合物で標識する場
合、下記式：
する前に、当該ペプチドを蛍光化合物で標識する。蛍光
化合物としては、蛋白質やペプチドの蛍光標識試薬とし
て当技術分野で一般に使用されているものであれば特に
限定されないが、好ましくはフルオレセイン化合物で標
識する。例えば、フルオレセイン化合物で標識する場
合、下記式：
【００１２】ハロゲン化アセトアミドフルオレセイン
【化１】 ［式中、Ｘはハロゲン原子を表す。］
【００１３】フルオレセインイソチオシアネート、
【化２】
【００１４】又は、エオシンイソチオシアネート、
【化３】 で表される化合物とペプチドとを反応させて標識するこ
とが好ましい。フルオレセイン化合物としてハロゲン化
アセトアミドフルオレセインを用いる場合は、ペプチド
中のシステイン（Ｃ）に結合させるが、システインの位
置はN末端であることが好ましい。ペプチドのN末端がシ
ステインでない場合は、ペプチドのN末端側にシステイ
ンを付加させるか、又は、ペプチド鎖内にシステイン又
はシスチンが存在する場合には、当該ペプチド鎖をシス
テインがN末端になる位置で切断する。また、フルオレ
セインイソチオシアネート、エオシンイソチオシアネー
トを用いる場合には、ペプチドのN末端のアミノ基又は
ライシン若しくはアルギニンのアミノ基に結合させるこ
とが好ましい。
とが好ましい。フルオレセイン化合物としてハロゲン化
アセトアミドフルオレセインを用いる場合は、ペプチド
中のシステイン（Ｃ）に結合させるが、システインの位
置はN末端であることが好ましい。ペプチドのN末端がシ
ステインでない場合は、ペプチドのN末端側にシステイ
ンを付加させるか、又は、ペプチド鎖内にシステイン又
はシスチンが存在する場合には、当該ペプチド鎖をシス
テインがN末端になる位置で切断する。また、フルオレ
セインイソチオシアネート、エオシンイソチオシアネー
トを用いる場合には、ペプチドのN末端のアミノ基又は
ライシン若しくはアルギニンのアミノ基に結合させるこ
とが好ましい。
【００１５】アミノ酸配列解析をするペプチドと上記蛍
光化合物とを反応させ、蛍光標識化ペプチドを得る。上
記反応で得た蛍光標識化ペプチドC(FL)DYEGRLI（FL：フ
ルオレセイン化合物）を高速液体クロマトグラフィー等
の通常の方法により精製して純品を得る。図２にフルオ
レセイン化合物で蛍光標識化したCDYEGRLIの構造式を示
す。その他のペプチドについても、当技術分野で通常用
いられる方法により蛍光標識化ペプチドを得ることがで
きる。
光化合物とを反応させ、蛍光標識化ペプチドを得る。上
記反応で得た蛍光標識化ペプチドC(FL)DYEGRLI（FL：フ
ルオレセイン化合物）を高速液体クロマトグラフィー等
の通常の方法により精製して純品を得る。図２にフルオ
レセイン化合物で蛍光標識化したCDYEGRLIの構造式を示
す。その他のペプチドについても、当技術分野で通常用
いられる方法により蛍光標識化ペプチドを得ることがで
きる。
【００１６】次に、蛍光標識化ペプチド誘導体の質量分
析法による分析を行う。得られた蛍光標識化ペプチド誘
導体C(FL)DYEGRLIを、MALDI-TOF-MS分光法のPSD手法を
用いてイオンをレーザーで励起し、断片・分画化してそ
の断片イオンを検知する。このように蛍光化合物で標識
化したペプチドでは多数の断片イオンが得られる。
析法による分析を行う。得られた蛍光標識化ペプチド誘
導体C(FL)DYEGRLIを、MALDI-TOF-MS分光法のPSD手法を
用いてイオンをレーザーで励起し、断片・分画化してそ
の断片イオンを検知する。このように蛍光化合物で標識
化したペプチドでは多数の断片イオンが得られる。
【００１７】上記測定の結果得られた断片イオンは、図
３に示すようなペプチドの断片（Fragmentation）パタ
ーンのうちamとbn（m,n＜アミノ酸残基数）及びそれか
ら水（H2O）分子が除去されたイオンの質量数に相当す
る多数のピークを示す。これらのピークから読み取れる
上記am,bn等の各断片イオンの質量数を各アミノ酸の質
量数と比較して、当該ペプチドのアミノ酸残基配列を決
定・同定することができる。
３に示すようなペプチドの断片（Fragmentation）パタ
ーンのうちamとbn（m,n＜アミノ酸残基数）及びそれか
ら水（H2O）分子が除去されたイオンの質量数に相当す
る多数のピークを示す。これらのピークから読み取れる
上記am,bn等の各断片イオンの質量数を各アミノ酸の質
量数と比較して、当該ペプチドのアミノ酸残基配列を決
定・同定することができる。
【００１８】
【実施例】以下に本発明について実施例を挙げ、さらに
詳細に説明するが、本発明は、これら実施例に限定され
るものではない。 （ペプチド試料）細胞内で侵入してきたウイルスの核タ
ンパク質が分解され核ペプチド断片を生成する。この核
ペプチドの一部は細胞内で抗原蛋白質と特異的に結合す
る。本実施例では、そのような断片ペプチドの一つであ
る８個のアミノ酸残基より構成されるペプチドCDYEGRLI
は、細胞から抽出・分離するには非常に微量であり、不
純物を含むので、ペプチドの新しい解析法を確立するた
めの測定には化学合成した試料を用いた。
詳細に説明するが、本発明は、これら実施例に限定され
るものではない。 （ペプチド試料）細胞内で侵入してきたウイルスの核タ
ンパク質が分解され核ペプチド断片を生成する。この核
ペプチドの一部は細胞内で抗原蛋白質と特異的に結合す
る。本実施例では、そのような断片ペプチドの一つであ
る８個のアミノ酸残基より構成されるペプチドCDYEGRLI
は、細胞から抽出・分離するには非常に微量であり、不
純物を含むので、ペプチドの新しい解析法を確立するた
めの測定には化学合成した試料を用いた。
【００１９】（ペプチドの化学合成）上記配列のペプチ
ドの化学合成は島津製作所製PSSM-8合成器を用い、固相
合成法で行った。合成品の保護基の除去は従来から行わ
れている標準的な方法で行った。反応物を高速液体クロ
マトグラフィーで精製した。１回の合成で約15mgの純品
のペプチドを得た（純度98％）。ペプチド試料の同定は
島津製作所製MALDI IV質量分析器を用いて親イオンピー
ク（m/z：970）の存在を確認することにより行った。 （ペプチドの標識化）上記ペプチドのシステイン（Ｃ）
末端を蛍光標識化合物4(5)-(ヨウ化アセトアミド)フル
オレセイン［4(5)-(Iodoacetamide）Fluorescein］
ドの化学合成は島津製作所製PSSM-8合成器を用い、固相
合成法で行った。合成品の保護基の除去は従来から行わ
れている標準的な方法で行った。反応物を高速液体クロ
マトグラフィーで精製した。１回の合成で約15mgの純品
のペプチドを得た（純度98％）。ペプチド試料の同定は
島津製作所製MALDI IV質量分析器を用いて親イオンピー
ク（m/z：970）の存在を確認することにより行った。 （ペプチドの標識化）上記ペプチドのシステイン（Ｃ）
末端を蛍光標識化合物4(5)-(ヨウ化アセトアミド)フル
オレセイン［4(5)-(Iodoacetamide）Fluorescein］
【００２０】
【化４】 で標識化した。
【００２１】反応条件等は以下のとおりである。ペプチ
ドCDYEGRLI2.8mgと4(5)-(ヨウ化アセトアミド)フルオレ
セイン１mgを水とアセトニトリル（1：２）のリン酸緩
衝溶液（pH：7.5）8mlに溶解し、室温で40分間攪拌し
た。粗反応生成物の精製は、島津製作所製高速液体クロ
マトグラフィー装置を用いて行なった。溶出溶液は20％
アセトニトリル、80％0.01N塩酸水溶液を用いた。原料
のペプチドのピーク以外に２個のピークが得られたが、
主要ピークがフルオレセインが付加した目的とするペプ
チド標識化合物であった。収率約70％。この分離画分の
溶液を凍結乾燥して純品試料を得た。
ドCDYEGRLI2.8mgと4(5)-(ヨウ化アセトアミド)フルオレ
セイン１mgを水とアセトニトリル（1：２）のリン酸緩
衝溶液（pH：7.5）8mlに溶解し、室温で40分間攪拌し
た。粗反応生成物の精製は、島津製作所製高速液体クロ
マトグラフィー装置を用いて行なった。溶出溶液は20％
アセトニトリル、80％0.01N塩酸水溶液を用いた。原料
のペプチドのピーク以外に２個のピークが得られたが、
主要ピークがフルオレセインが付加した目的とするペプ
チド標識化合物であった。収率約70％。この分離画分の
溶液を凍結乾燥して純品試料を得た。
【００２２】（標識ペプチドの質量分析法MALDI-TOF-MS
法による分析）上述した実験で得られた標識ペプチド試
料を島津製作所製Kompact MALDI IV分光器で測定した。
まず分子全体の親イオンピーク（m/z：1356）を得、フ
ルオレセインが付加していることを確認した。標識ペプ
チドのアミノ酸残基のPSD法による測定は以下のような
条件下で行ない、良好な断片イオンシグナルを含むスぺ
クトルを得ることに成功した。得られたスペクトルを図
４に示す。 装置 ：curved field reflection方式をもつKompact MALDI IV 分光器 測定条件 ：窒素レーザー（337nm）、リフレクトロンmode 陽イオン検出、acceleration potentialは20KVまたは8KV マトリックス ：CHCA（α-シアノ-4-ヒドロキシ桂皮酸） 試料プレート条件：プレート上に、ペプチドとマトリックスを加え溶かしたアセ トニトリル水溶液の0.5μLを滴加し、完全に乾燥させて測定する。
法による分析）上述した実験で得られた標識ペプチド試
料を島津製作所製Kompact MALDI IV分光器で測定した。
まず分子全体の親イオンピーク（m/z：1356）を得、フ
ルオレセインが付加していることを確認した。標識ペプ
チドのアミノ酸残基のPSD法による測定は以下のような
条件下で行ない、良好な断片イオンシグナルを含むスぺ
クトルを得ることに成功した。得られたスペクトルを図
４に示す。 装置 ：curved field reflection方式をもつKompact MALDI IV 分光器 測定条件 ：窒素レーザー（337nm）、リフレクトロンmode 陽イオン検出、acceleration potentialは20KVまたは8KV マトリックス ：CHCA（α-シアノ-4-ヒドロキシ桂皮酸） 試料プレート条件：プレート上に、ペプチドとマトリックスを加え溶かしたアセ トニトリル水溶液の0.5μLを滴加し、完全に乾燥させて測定する。
【００２３】（TOF-MS-PSDスペクトルの解析）上記測定
条件で得られたスペクトル（図４）では、親イオンピー
ク（m/z：1356）やフルオレセイン（FL）以外にa3,a4,a
7,b2,b3,b4,b5,b6-17,b6などの主要ピークが検出された
（フラグメントの様式は図３を参照）。これらのピーク
の質量数を比較検討することにより、ペプチドのアミノ
酸残基配列CDYEGRLIが同定できた。
条件で得られたスペクトル（図４）では、親イオンピー
ク（m/z：1356）やフルオレセイン（FL）以外にa3,a4,a
7,b2,b3,b4,b5,b6-17,b6などの主要ピークが検出された
（フラグメントの様式は図３を参照）。これらのピーク
の質量数を比較検討することにより、ペプチドのアミノ
酸残基配列CDYEGRLIが同定できた。
【００２４】
【発明の効果】本発明により、ペプチドを蛍光試薬で標
識化したペプチド誘導体を調製し、その試料をMALDI-TO
F-MS質量分光器のPSD手法を用いて測定を行なうと、ペ
プチドのアミノ酸残基の配列解析が感度良く完全に行わ
れるようになった。本発明の方法は、ペプチド、蛋白質
の構造解析に有用であり、特に最近、アルツハイマー蛋
白質やペプチドのような病因蛋白質の解析技術が、ポス
トゲノム解析技術のプロテオーム技術として注目されて
おり、この分野の重要な技術的成果として非常に有効性
が大きい。
識化したペプチド誘導体を調製し、その試料をMALDI-TO
F-MS質量分光器のPSD手法を用いて測定を行なうと、ペ
プチドのアミノ酸残基の配列解析が感度良く完全に行わ
れるようになった。本発明の方法は、ペプチド、蛋白質
の構造解析に有用であり、特に最近、アルツハイマー蛋
白質やペプチドのような病因蛋白質の解析技術が、ポス
トゲノム解析技術のプロテオーム技術として注目されて
おり、この分野の重要な技術的成果として非常に有効性
が大きい。
【図１】 細胞内の核蛋白質が分解されてできた核ペプ
チドCDYEGRLIのMALDI-TOF-MS法のPSDスペクトル。
チドCDYEGRLIのMALDI-TOF-MS法のPSDスペクトル。
【図２】 核ペプチドCDYEGRLIに結合したフルオレセイ
ンの構造式。
ンの構造式。
【図３】 MALDI-TOF-MS法のPSD手法による一般的なペ
プチドの切断図及びその命名法。
プチドの切断図及びその命名法。
【図４】 フルオレセインで標識化されたペプチドCDYE
GRLIのMALDI-TOF-MS-PSDスペクトル。
GRLIのMALDI-TOF-MS-PSDスペクトル。
Claims (2)
- 【請求項１】 ペプチドを蛍光化合物で標識し、得られ
た蛍光標識化ペプチドを、ＰＳＤ法を用いるＭＡＬＤＩ
−ＴＯＦ質量分析により分析することを特徴とするペプ
チドのアミノ酸配列解析方法。 - 【請求項２】 蛍光化合物がフルオレセイン化合物であ
る請求項１記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000046302A JP3341041B2 (ja) | 2000-02-23 | 2000-02-23 | ペプチドのアミノ酸配列解析方法 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000046302A JP3341041B2 (ja) | 2000-02-23 | 2000-02-23 | ペプチドのアミノ酸配列解析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001235477A true JP2001235477A (ja) | 2001-08-31 |
| JP3341041B2 JP3341041B2 (ja) | 2002-11-05 |
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ID=18568737
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000046302A Expired - Lifetime JP3341041B2 (ja) | 2000-02-23 | 2000-02-23 | ペプチドのアミノ酸配列解析方法 |
Country Status (1)
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|---|---|
| JP (1) | JP3341041B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003069328A1 (fr) * | 2002-02-14 | 2003-08-21 | Ajinomoto Co., Inc. | Procede d'analyse aminofonctionnelle et reactif analytique |
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2000
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