JP2001231593A - 新規配糖体及びその製造方法 - Google Patents
新規配糖体及びその製造方法Info
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- JP2001231593A JP2001231593A JP2000048639A JP2000048639A JP2001231593A JP 2001231593 A JP2001231593 A JP 2001231593A JP 2000048639 A JP2000048639 A JP 2000048639A JP 2000048639 A JP2000048639 A JP 2000048639A JP 2001231593 A JP2001231593 A JP 2001231593A
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- Japan
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- glycoside
- mercaptoethanol
- producing
- product
- glycosides
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 新規な配糖体並びにその簡便な製造方法を提
供すると共に、当該配糖体を用いる酵素阻害剤などとし
ての利用法を提供すること。 【解決手段】 糖質とチオール化合物に、グリコシダー
ゼを作用させることを特徴とする配糖体の製造方法、下
記の構造式１で表される２−ヒドロキシエチルＳ−β−
Ｄ−フルクトフラノシド 【化１】 並びに下記の一般式（１）で表される２−メルカプトエ
チルグリコシド。 【化２】
供すると共に、当該配糖体を用いる酵素阻害剤などとし
ての利用法を提供すること。 【解決手段】 糖質とチオール化合物に、グリコシダー
ゼを作用させることを特徴とする配糖体の製造方法、下
記の構造式１で表される２−ヒドロキシエチルＳ−β−
Ｄ−フルクトフラノシド 【化１】 並びに下記の一般式（１）で表される２−メルカプトエ
チルグリコシド。 【化２】
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、原料として糖質と
チオール化合物を用い、グリコシダーゼを作用させるこ
とを特徴とする配糖体の製造方法及び新規物質であるチ
オグリコシドと２−メルカプトエチルグリコシドに関
し、さらにこれら配糖体の酵素阻害剤などとしての利用
に関する。本発明により得られる配糖体は、揮発性物質
の固定化、酸化に不安定なチオール基の保護、酵素阻害
剤、酵素精製用アフィニティクロマトグラフィー担体の
リガンド、タンパク質生産誘導物質、抗腫瘍活性物質な
どに利用され、化成品工業、化粧品工業、食品工業、医
薬品工業などの分野に有用である。
チオール化合物を用い、グリコシダーゼを作用させるこ
とを特徴とする配糖体の製造方法及び新規物質であるチ
オグリコシドと２−メルカプトエチルグリコシドに関
し、さらにこれら配糖体の酵素阻害剤などとしての利用
に関する。本発明により得られる配糖体は、揮発性物質
の固定化、酸化に不安定なチオール基の保護、酵素阻害
剤、酵素精製用アフィニティクロマトグラフィー担体の
リガンド、タンパク質生産誘導物質、抗腫瘍活性物質な
どに利用され、化成品工業、化粧品工業、食品工業、医
薬品工業などの分野に有用である。
【０００２】
【従来の技術】配糖体（グリコシド）は、糖のヘミアセ
タール水酸基が糖以外の化合物のアルコール又はフェノ
ール性水酸基と縮合した化合物であり、自然界には多く
存在している。一般的な配糖体は、水酸基を持つ化合物
と糖とのエーテル結合によるＯ−グリコシドであるが、
核酸やヌクレオシドのようなＮ−グリコシドやＳ−グリ
コシド（チオグリコシド）も存在する。
タール水酸基が糖以外の化合物のアルコール又はフェノ
ール性水酸基と縮合した化合物であり、自然界には多く
存在している。一般的な配糖体は、水酸基を持つ化合物
と糖とのエーテル結合によるＯ−グリコシドであるが、
核酸やヌクレオシドのようなＮ−グリコシドやＳ−グリ
コシド（チオグリコシド）も存在する。
【０００３】チオグリコシド（Ｓ−グリコシド）は、糖
に含まれる酸素原子のいずれかが硫黄原子によって置換
された化合物である。自然界にはからしに含まれるシニ
グリンや抗生物質リンコマイシン、活性メチオニンなど
多くのチオグリコシドが存在する。シニグリンは、代表
的なチオグリコシドの一つで、カラシナ、黒カラシの種
子、ワサビの根などに含まれ、共存する酵素ミロシナー
ゼ（シニグリダーゼ）で分解されると、カラシ油である
イソシアン酸アリルとグルコースを生じて特有の辛味を
呈することが知られている。また、シニグリンは、DEN
誘発肝発ガンを抑制するフードファクターとしての機能
も有する（1998年度日本農芸化学会大会；シンポジウ
ム；S-10）。
に含まれる酸素原子のいずれかが硫黄原子によって置換
された化合物である。自然界にはからしに含まれるシニ
グリンや抗生物質リンコマイシン、活性メチオニンなど
多くのチオグリコシドが存在する。シニグリンは、代表
的なチオグリコシドの一つで、カラシナ、黒カラシの種
子、ワサビの根などに含まれ、共存する酵素ミロシナー
ゼ（シニグリダーゼ）で分解されると、カラシ油である
イソシアン酸アリルとグルコースを生じて特有の辛味を
呈することが知られている。また、シニグリンは、DEN
誘発肝発ガンを抑制するフードファクターとしての機能
も有する（1998年度日本農芸化学会大会；シンポジウ
ム；S-10）。
【０００４】また、チオグリコシドの一つであるチオメ
チル−β−Ｄ−ガラクトシドは、β−ガラクトシドのア
ナログとしてβ−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシド
パーミアーゼの生成を強く誘導する。イソプロピル−１
−チオ−β−Ｄ−ガラクトシドも、β−ガラクトシド結
合の酸素原子が硫黄原子で置換しているチオグリコシド
であるため、β−ガラクトシダーゼによって分解されな
い非代謝性誘導物質である。この物質は、大腸菌をはじ
めとする微生物の細胞内に取り込まれ、ラクトースリプ
レッサーと４分子結合して、リプレッサーの立体構造を
変え、そのオペレーターへの結合を阻止する。そのた
め、前記チオメチル−β−Ｄ−ガラクトシドと同様、β
−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシドパーミアーゼの
生成を強く誘導する。
チル−β−Ｄ−ガラクトシドは、β−ガラクトシドのア
ナログとしてβ−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシド
パーミアーゼの生成を強く誘導する。イソプロピル−１
−チオ−β−Ｄ−ガラクトシドも、β−ガラクトシド結
合の酸素原子が硫黄原子で置換しているチオグリコシド
であるため、β−ガラクトシダーゼによって分解されな
い非代謝性誘導物質である。この物質は、大腸菌をはじ
めとする微生物の細胞内に取り込まれ、ラクトースリプ
レッサーと４分子結合して、リプレッサーの立体構造を
変え、そのオペレーターへの結合を阻止する。そのた
め、前記チオメチル−β−Ｄ−ガラクトシドと同様、β
−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシドパーミアーゼの
生成を強く誘導する。
【０００５】その他、チオグリコシドは、一般的なグリ
コシダーゼによって分解されないが、酵素に親和性を示
すため、グリコシダーゼ精製を目的としたアフィニティ
クロマトグラフィーなど、対応するグリコシドのアナロ
グとしての利用が考えられている。
コシダーゼによって分解されないが、酵素に親和性を示
すため、グリコシダーゼ精製を目的としたアフィニティ
クロマトグラフィーなど、対応するグリコシドのアナロ
グとしての利用が考えられている。
【０００６】このように、チオグリコシドは、対応する
糖の代謝反応に影響を与えることが期待されるため、現
在までに多くのチオグリコシドが合成されている。しか
しながら、従来の有機合成の手法を利用したものは、複
雑な多くの工程が必要であり、環境に影響を与える有機
溶媒も必要とする。現在までに、温和な条件、且つ単純
な方法でチオグリコシドを合成する方法は知られていな
い。
糖の代謝反応に影響を与えることが期待されるため、現
在までに多くのチオグリコシドが合成されている。しか
しながら、従来の有機合成の手法を利用したものは、複
雑な多くの工程が必要であり、環境に影響を与える有機
溶媒も必要とする。現在までに、温和な条件、且つ単純
な方法でチオグリコシドを合成する方法は知られていな
い。
【０００７】一方、原料として用いるチオール化合物
は、メルカプト基（−ＳＨ基）を持つ有機化合物であ
る。このものは、一般的に揮発しやすく、不快臭があ
る。配糖体は、糖質をアグリコンに結合させることによ
って、一般的に安定性が増すが、配糖化することによっ
て安定性を増したチオール化合物を温和な条件、且つ単
純な方法で合成する方法は知られていない。
は、メルカプト基（−ＳＨ基）を持つ有機化合物であ
る。このものは、一般的に揮発しやすく、不快臭があ
る。配糖体は、糖質をアグリコンに結合させることによ
って、一般的に安定性が増すが、配糖化することによっ
て安定性を増したチオール化合物を温和な条件、且つ単
純な方法で合成する方法は知られていない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、この
ような従来の合成方法を改良し、配糖体の簡便な製造方
法並びに新規なチオグリコシドと２−メルカプトエチル
グリコシド及びこれら配糖体の酵素阻害剤としての利用
を提供するものである。
ような従来の合成方法を改良し、配糖体の簡便な製造方
法並びに新規なチオグリコシドと２−メルカプトエチル
グリコシド及びこれら配糖体の酵素阻害剤としての利用
を提供するものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】そこで、このような事情
に鑑み、本発明者らは鋭意検討を重ね、チオール化合物
とショ糖をはじめとする糖質を含有する溶液に、β−フ
ラクトシダーゼ等のグリコシダーゼを作用させることに
よって、チオフラクトシドをはじめとする配糖体が効率
的に、且つ温和な条件で簡便に合成できることを見出し
た。また、チオール化合物としてメルカプトエタノール
を使用することによって、新規なチオグリコシドと新規
２−メルカプトエチルグリコシドなどの配糖体が効率よ
く、且つ温和な条件で簡便に合成できることを見出し
た。これら知見に基づいて、本発明を完成した。
に鑑み、本発明者らは鋭意検討を重ね、チオール化合物
とショ糖をはじめとする糖質を含有する溶液に、β−フ
ラクトシダーゼ等のグリコシダーゼを作用させることに
よって、チオフラクトシドをはじめとする配糖体が効率
的に、且つ温和な条件で簡便に合成できることを見出し
た。また、チオール化合物としてメルカプトエタノール
を使用することによって、新規なチオグリコシドと新規
２−メルカプトエチルグリコシドなどの配糖体が効率よ
く、且つ温和な条件で簡便に合成できることを見出し
た。これら知見に基づいて、本発明を完成した。
【００１０】請求項１記載の本発明は、糖質とチオール
化合物に、グリコシダーゼを作用させることを特徴とす
るとする配糖体の製造方法である。請求項２記載の本発
明は、グリコシダーゼが、β−フラクトシダーゼ、β−
ガラクトシダーゼ又はα−マンノシダーゼである請求項
１の配糖体の製造方法である。請求項３記載の本発明
は、チオール化合物が、メルカプトエタノール、ジチオ
スレイトール及びチオグリコール酸ナトリウムの中から
選択された少なくとも１種のものである請求項１の配糖
体の製造方法である。請求項４記載の本発明は、下記の
構造式１で表される２−ヒドロキシエチルＳ−β−Ｄ−
フルクトフラノシドである。
化合物に、グリコシダーゼを作用させることを特徴とす
るとする配糖体の製造方法である。請求項２記載の本発
明は、グリコシダーゼが、β−フラクトシダーゼ、β−
ガラクトシダーゼ又はα−マンノシダーゼである請求項
１の配糖体の製造方法である。請求項３記載の本発明
は、チオール化合物が、メルカプトエタノール、ジチオ
スレイトール及びチオグリコール酸ナトリウムの中から
選択された少なくとも１種のものである請求項１の配糖
体の製造方法である。請求項４記載の本発明は、下記の
構造式１で表される２−ヒドロキシエチルＳ−β−Ｄ−
フルクトフラノシドである。
【００１１】
【化３】
【００１２】請求項５記載の本発明は、下記の一般式
（１）で表される２−メルカプトエチルグリコシドであ
る。
（１）で表される２−メルカプトエチルグリコシドであ
る。
【００１３】
【化４】 （式中、Glycosyl基はガラクトース、フルクトース又は
マンノースである。）
マンノースである。）
【００１４】請求項６記載の本発明は、請求項１記載の
方法によって得られる配糖体を含有する酵素阻害剤であ
る。
方法によって得られる配糖体を含有する酵素阻害剤であ
る。
【００１５】
【発明の実施の形態】本発明に用いるグリコシダーゼと
しては、β−フラクトシダーゼ、β−ガラクトシダー
ゼ、α−マンノシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、β−
マンノシダーゼ、β−グルコシダーゼ、Ｎ−アセチルヘ
キソサミニダーゼ、シアリダーゼ、レバンスクラーゼ、
グルコシルトランスフェラーゼなどがある。グリコシダ
ーゼは、自然界に広く分布しているものであり、本発明
に使用するものは、微生物起源、動物起源、植物起源の
いずれでもよい。
しては、β−フラクトシダーゼ、β−ガラクトシダー
ゼ、α−マンノシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、β−
マンノシダーゼ、β−グルコシダーゼ、Ｎ−アセチルヘ
キソサミニダーゼ、シアリダーゼ、レバンスクラーゼ、
グルコシルトランスフェラーゼなどがある。グリコシダ
ーゼは、自然界に広く分布しているものであり、本発明
に使用するものは、微生物起源、動物起源、植物起源の
いずれでもよい。
【００１６】配糖体の合成の効率は、用いる酵素の起源
によって異なるが、とりわけアスペルギルス・オリゼ由
来のβ−ガラクトシダーゼ、カンディダ・ウチルスやサ
ッカロミセス・セレビジエ、アルスロバクター属由来の
β−フラクトシダーゼ、タチナタマメ由来のα−マンノ
シダーゼが最適である。
によって異なるが、とりわけアスペルギルス・オリゼ由
来のβ−ガラクトシダーゼ、カンディダ・ウチルスやサ
ッカロミセス・セレビジエ、アルスロバクター属由来の
β−フラクトシダーゼ、タチナタマメ由来のα−マンノ
シダーゼが最適である。
【００１７】本発明の方法は、グリコシダーゼの転移反
応又は縮合反応によるものであるから、反応の原料とし
て用いる糖質は、使用するグリコシダーゼの基質となり
得るものであれば、単糖、オリゴ糖、多糖、グリコシド
などのいずれの糖質も用いることができ、またそれらの
重合度、アグリコンの構造等は限定されるものではな
い。その理由は、目的とする配糖体を得ることができれ
ばよいからであり、糖質は混合物であってもよい。例え
ば、β−チオガラクトシドの合成を目的とする場合は、
酵素としてβ−ガラクトシダーゼを用い、糖質としては
ガラクトース又は乳糖などを用いる。また、β−チオフ
ラクトシドの合成を目的とする場合は、β−フラクトシ
ダーゼと糖質のフルクトース又はショ糖、ラフィノース
などを選択すればよい。
応又は縮合反応によるものであるから、反応の原料とし
て用いる糖質は、使用するグリコシダーゼの基質となり
得るものであれば、単糖、オリゴ糖、多糖、グリコシド
などのいずれの糖質も用いることができ、またそれらの
重合度、アグリコンの構造等は限定されるものではな
い。その理由は、目的とする配糖体を得ることができれ
ばよいからであり、糖質は混合物であってもよい。例え
ば、β−チオガラクトシドの合成を目的とする場合は、
酵素としてβ−ガラクトシダーゼを用い、糖質としては
ガラクトース又は乳糖などを用いる。また、β−チオフ
ラクトシドの合成を目的とする場合は、β−フラクトシ
ダーゼと糖質のフルクトース又はショ糖、ラフィノース
などを選択すればよい。
【００１８】次に、他の原料であるチオール化合物とし
ては、メルカプトエタノール、ジチオスレイトール、チ
オグリコール酸ナトリウムなどチオール基（−ＳＨ基）
を持つものであればよく、その分子量や分子構造は限定
されない。用いるチオール化合物は混合物であってもよ
いことは、糖質の場合と同じである。
ては、メルカプトエタノール、ジチオスレイトール、チ
オグリコール酸ナトリウムなどチオール基（−ＳＨ基）
を持つものであればよく、その分子量や分子構造は限定
されない。用いるチオール化合物は混合物であってもよ
いことは、糖質の場合と同じである。
【００１９】チオール化合物としてメルカプトエタノー
ルのようなチオール基以外に水酸基（−ＯＨ基）を持つ
化合物であれば、糖質との反応によって水酸基に結合し
た配糖体（Ｏ−グリコシド）も合成することができる。
なお、Ｏ−グリコシドとチオグリコシドのどちらの配糖
体を合成するかは、使用するグリコシダーゼの種類や起
源の他、反応時間を調節すること等によって決まり、そ
のときの主要生成物も決定される。例えば、アルスロバ
クター属由来のβ−フラクトシダーゼを用いると、Ｏ−
フラクトシドが特異的に生成し、アスペルギルス・オリ
ゼ由来のβ−ガラクトシダーゼを用いて、反応を長時間
行うと、チオガラクトシドが主要生成物となる。
ルのようなチオール基以外に水酸基（−ＯＨ基）を持つ
化合物であれば、糖質との反応によって水酸基に結合し
た配糖体（Ｏ−グリコシド）も合成することができる。
なお、Ｏ−グリコシドとチオグリコシドのどちらの配糖
体を合成するかは、使用するグリコシダーゼの種類や起
源の他、反応時間を調節すること等によって決まり、そ
のときの主要生成物も決定される。例えば、アルスロバ
クター属由来のβ−フラクトシダーゼを用いると、Ｏ−
フラクトシドが特異的に生成し、アスペルギルス・オリ
ゼ由来のβ−ガラクトシダーゼを用いて、反応を長時間
行うと、チオガラクトシドが主要生成物となる。
【００２０】本発明の方法において、原料のチオール化
合物の濃度は、目的とする配糖体によって異なる。一般
的には、0.1−４Ｍ、好ましくは0.5−２Ｍの範囲が適当
であるが、特にこれらに限定されるものではない。ま
た、糖質の濃度については、チオール化合物の濃度より
影響は少ないが、通常は0.1−５Ｍ、好ましくは0.5−３
Ｍの範囲が適当である。しかし、この場合もチオール化
合物と同様に、この範囲に限定されるものではない。
合物の濃度は、目的とする配糖体によって異なる。一般
的には、0.1−４Ｍ、好ましくは0.5−２Ｍの範囲が適当
であるが、特にこれらに限定されるものではない。ま
た、糖質の濃度については、チオール化合物の濃度より
影響は少ないが、通常は0.1−５Ｍ、好ましくは0.5−３
Ｍの範囲が適当である。しかし、この場合もチオール化
合物と同様に、この範囲に限定されるものではない。
【００２１】本発明の方法は、酵素反応であり、その反
応条件は使用するグリコシダーゼの種類により異なる
が、ｐＨは２−１２、好ましくは４−８、温度は２０−
８０℃、好ましくは３０−６０℃に調整して反応させる
ことが適当である。また、反応時間については、使用す
るグリコシダーゼと密接な関係がある。通常は、１−５
００時間、好ましくは５−１００時間で反応が終了する
ように酵素量を選定すればよいが、これらに限定される
ものではない。
応条件は使用するグリコシダーゼの種類により異なる
が、ｐＨは２−１２、好ましくは４−８、温度は２０−
８０℃、好ましくは３０−６０℃に調整して反応させる
ことが適当である。また、反応時間については、使用す
るグリコシダーゼと密接な関係がある。通常は、１−５
００時間、好ましくは５−１００時間で反応が終了する
ように酵素量を選定すればよいが、これらに限定される
ものではない。
【００２２】反応終了後、反応液を加熱すること等によ
りグリコシダーゼを失活させ、この液をそのまま粗配糖
体として使用してもよく、必要に応じて、既知の方法、
例えば活性炭クロマトグラフィー、分子排除クロマトグ
ラフィー、高速液体クロマトグラフィー、イオン交換ク
ロマトグラフィー、限外濾過、溶媒抽出等を利用して適
宜に精製し、目的とする配糖体を得ることができる。１
例を示すと、以上のような方法で得られた反応液を、活
性炭クロマトグラフィー及び分子排除クロマトグラフィ
ーなどを用いて精製することにより、各種配糖体を得る
ことができる。
りグリコシダーゼを失活させ、この液をそのまま粗配糖
体として使用してもよく、必要に応じて、既知の方法、
例えば活性炭クロマトグラフィー、分子排除クロマトグ
ラフィー、高速液体クロマトグラフィー、イオン交換ク
ロマトグラフィー、限外濾過、溶媒抽出等を利用して適
宜に精製し、目的とする配糖体を得ることができる。１
例を示すと、以上のような方法で得られた反応液を、活
性炭クロマトグラフィー及び分子排除クロマトグラフィ
ーなどを用いて精製することにより、各種配糖体を得る
ことができる。
【００２３】より詳しくは、２−メルカプトエタノール
とショ糖を原料とし、これにβ−フラクトシダーゼを作
用させたものから、上記方法で分画、分取を行って得た
反応生成物について、ＦＡＢ−ＭＳを用いた質量分析に
よる分子量測定及び核磁気共鳴法（ＮＭＲ）により構造
解析を行った結果、新規チオグリコシドである２−ヒド
ロキシエチル Ｓ−β−Ｄ−フルクトフラノシド（2-hy
droxyethyl S- β-D-fructofuranoside)であることを確
認した。さらに、２−メルカプトエタノールと糖質を含
む反応液にグリコシダーゼを作用させることによって、
チオグリコシドと前記一般式（１）で表される新規な２
−メルカプトエチルグリコシドを合成することができ
た。
とショ糖を原料とし、これにβ−フラクトシダーゼを作
用させたものから、上記方法で分画、分取を行って得た
反応生成物について、ＦＡＢ−ＭＳを用いた質量分析に
よる分子量測定及び核磁気共鳴法（ＮＭＲ）により構造
解析を行った結果、新規チオグリコシドである２−ヒド
ロキシエチル Ｓ−β−Ｄ−フルクトフラノシド（2-hy
droxyethyl S- β-D-fructofuranoside)であることを確
認した。さらに、２−メルカプトエタノールと糖質を含
む反応液にグリコシダーゼを作用させることによって、
チオグリコシドと前記一般式（１）で表される新規な２
−メルカプトエチルグリコシドを合成することができ
た。
【００２４】
【実施例】次に、実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１ （反応）2.５Ｍ ショ糖と２Ｍ メルカプトエタノール
を含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ5.５）５０ｍＬにカ
ンディダ・ウチルス由来のβ−フラクトシダーゼ（シグ
マ社製）３０４０Ｕを加え、４０℃で２０時間反応させ
た。反応終了後、反応液を１００℃で１０分間加熱して
酵素を失活させた後、１５０ｍＬに希釈し、これを遠心
分離し、沈殿物を除いた。反応液をＨＰＬＣにて以下の
条件で分析を行った。その結果、生成物ＡをＲｔ＝3.２
ｍｉｎに、生成物ＢをＲｔ＝4.３ｍｉｎに検出すること
ができた（図１参照）。
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。 実施例１ （反応）2.５Ｍ ショ糖と２Ｍ メルカプトエタノール
を含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ5.５）５０ｍＬにカ
ンディダ・ウチルス由来のβ−フラクトシダーゼ（シグ
マ社製）３０４０Ｕを加え、４０℃で２０時間反応させ
た。反応終了後、反応液を１００℃で１０分間加熱して
酵素を失活させた後、１５０ｍＬに希釈し、これを遠心
分離し、沈殿物を除いた。反応液をＨＰＬＣにて以下の
条件で分析を行った。その結果、生成物ＡをＲｔ＝3.２
ｍｉｎに、生成物ＢをＲｔ＝4.３ｍｉｎに検出すること
ができた（図１参照）。
【００２５】溶離液：６７％アセトニトリル−水 カラム：Asahipak NH2-P50（4.６×２５０ｍｍ、昭和電
工製） ＲＩ検出 流速：1.０ｍＬ／ｍｉｎ カラム温度：４０℃
工製） ＲＩ検出 流速：1.０ｍＬ／ｍｉｎ カラム温度：４０℃
【００２６】（精製）生成物Ａ及びＢについては、以下
のように精製を行った。2.５Ｍ ショ糖と２Ｍ メルカ
プトエタノールを含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ5.
５）５０ｍＬにカンディダ・ウチルス由来のβ−フラク
トシダーゼ３０４０Ｕを加え、４０℃で４時間反応させ
た。反応液を１００℃で１０分間加熱して酵素を失活
後、液量を１５０ｍＬに希釈したのち、遠心分離して沈
殿物を除き、その上澄液を水で平衡化した活性炭カラム
（3.２×２９ｃｍ）にアプライした。次いで、水で単糖
を溶出した後、０〜４０％エタノール濃度勾配をかけ、
生成物Ｂ、Ａの順で溶出した。さらに、生成物Ａ画分を
５％エタノールで平衡化したBio-Gel P-2 カラム（2.３
×９２ｃｍ）を用いて分子排除クロマトグラフィーを行
うことによって精製を行い、凍結乾燥粉末２０３ｍｇが
得られた。一方、生成物Ｂは再度活性炭カラムクロマト
グラフィーで精製を行い、凍結乾燥することによって、
粉末３１６ｍｇが得られた。
のように精製を行った。2.５Ｍ ショ糖と２Ｍ メルカ
プトエタノールを含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ5.
５）５０ｍＬにカンディダ・ウチルス由来のβ−フラク
トシダーゼ３０４０Ｕを加え、４０℃で４時間反応させ
た。反応液を１００℃で１０分間加熱して酵素を失活
後、液量を１５０ｍＬに希釈したのち、遠心分離して沈
殿物を除き、その上澄液を水で平衡化した活性炭カラム
（3.２×２９ｃｍ）にアプライした。次いで、水で単糖
を溶出した後、０〜４０％エタノール濃度勾配をかけ、
生成物Ｂ、Ａの順で溶出した。さらに、生成物Ａ画分を
５％エタノールで平衡化したBio-Gel P-2 カラム（2.３
×９２ｃｍ）を用いて分子排除クロマトグラフィーを行
うことによって精製を行い、凍結乾燥粉末２０３ｍｇが
得られた。一方、生成物Ｂは再度活性炭カラムクロマト
グラフィーで精製を行い、凍結乾燥することによって、
粉末３１６ｍｇが得られた。
【００２７】（構造解析）生成物ＡはＤＴＮＢ試薬（5,
5'-dithiobis) で黄色に呈色することから、その構造に
チオール基を有し、メルカプトエタノールの水酸基がβ
−ガラクトシル化したものと考えられる。さらに、単離
した生成物Ａは過酸化水素によって酸化され、ＳＳ結合
で２量体を形成し、メルカプトエタノールによって還元
され、再び単量体を形成する。このことから、転移生成
物Ａは配糖体であり、その化学式が前記一般式（１）で
表される新規２−メルカプトエチルグリコシドで、詳細
には２−メルカプトエチル Ｏ−β−Ｄ−フルクトフラ
ノシド（2-mercaptoethyl O-β-D-fructofuranoside)で
あることが確認された。このものは下記の構造式２で表
される。
5'-dithiobis) で黄色に呈色することから、その構造に
チオール基を有し、メルカプトエタノールの水酸基がβ
−ガラクトシル化したものと考えられる。さらに、単離
した生成物Ａは過酸化水素によって酸化され、ＳＳ結合
で２量体を形成し、メルカプトエタノールによって還元
され、再び単量体を形成する。このことから、転移生成
物Ａは配糖体であり、その化学式が前記一般式（１）で
表される新規２−メルカプトエチルグリコシドで、詳細
には２−メルカプトエチル Ｏ−β−Ｄ−フルクトフラ
ノシド（2-mercaptoethyl O-β-D-fructofuranoside)で
あることが確認された。このものは下記の構造式２で表
される。
【００２８】（特性）また、当該配糖体は、メルカプト
エタノール特有の不快臭は消失しており、同時に常温で
は揮発性が消失していることが確認された。
エタノール特有の不快臭は消失しており、同時に常温で
は揮発性が消失していることが確認された。
【００２９】
【化５】
【００３０】一方、転移生成物ＢはＦＡＢ−ＭＳ分析の
結果、分子量２４０であった。さらに、13C-NMR 及び1H
−NMR 分析を行ったところ、下記の第１表に示した通り
であった。
結果、分子量２４０であった。さらに、13C-NMR 及び1H
−NMR 分析を行ったところ、下記の第１表に示した通り
であった。
【００３１】
【表１】第１表
【００３２】第１表の結果より、転移生成物Ｂはメルカ
プトエタノールのチオール基（−ＳＨ基）にフルクトー
スがβ結合した配糖体であり、新規チオグリコシドであ
る２−ヒドロキシエチル Ｓ−β−Ｄ−フルクトフラノ
シド（2-hydroxyethyl S- β-D-fructofuranoside)であ
ることが分かった。このものは、構造式１で表される。
プトエタノールのチオール基（−ＳＨ基）にフルクトー
スがβ結合した配糖体であり、新規チオグリコシドであ
る２−ヒドロキシエチル Ｓ−β−Ｄ−フルクトフラノ
シド（2-hydroxyethyl S- β-D-fructofuranoside)であ
ることが分かった。このものは、構造式１で表される。
【００３３】
【化６】
【００３４】（特性）また、当該配糖体は、メルカプト
エタノール特有の不快臭は消失しており、同時に常温で
は揮発性が消失していることが確認された。
エタノール特有の不快臭は消失しており、同時に常温で
は揮発性が消失していることが確認された。
【００３５】実施例２ （反応）１Ｍ ガラクトースと１Ｍ メルカプトエタノ
ールを含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ4.５）２５ｍＬ
にアスペルギルス・オリゼ由来のβ−ガラクトシダーゼ
（ヤクルト本社製）５８６０Ｕ加えて、３７℃で４日間
反応させた。次に、反応液の一部を１００℃で１０分間
加熱して酵素を失活させた後、水で１０倍に希釈し、薄
層板（メルク社製、Kieselgel 60）にスポットし、展開
溶媒として酢酸エチル：酢酸：水＝３：１：１の混合溶
媒を使用して、上昇法で展開させた。これを乾燥後、５
０％硫酸−メタノール溶液を噴霧、１５０℃で加熱して
２種類の主要な縮合生成物を検出した。
ールを含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ4.５）２５ｍＬ
にアスペルギルス・オリゼ由来のβ−ガラクトシダーゼ
（ヤクルト本社製）５８６０Ｕ加えて、３７℃で４日間
反応させた。次に、反応液の一部を１００℃で１０分間
加熱して酵素を失活させた後、水で１０倍に希釈し、薄
層板（メルク社製、Kieselgel 60）にスポットし、展開
溶媒として酢酸エチル：酢酸：水＝３：１：１の混合溶
媒を使用して、上昇法で展開させた。これを乾燥後、５
０％硫酸−メタノール溶液を噴霧、１５０℃で加熱して
２種類の主要な縮合生成物を検出した。
【００３６】さらに、反応液をＨＰＬＣにて以下の条件
で分析を行ったところ、生成物ＣをＲｔ＝3.５ｍｉｎ
に、生成物ＤをＲｔ＝4.８ｍｉｎに検出することができ
た（図２参照）。
で分析を行ったところ、生成物ＣをＲｔ＝3.５ｍｉｎ
に、生成物ＤをＲｔ＝4.８ｍｉｎに検出することができ
た（図２参照）。
【００３７】溶離液：６７％アセトニトリル−水 カラム：Asahipak NH2-P50（4.６×２５０ｍｍ、昭和電
工製） ＲＩ検出 流速：1.０ｍＬ／ｍｉｎ カラム温度：４０℃
工製） ＲＩ検出 流速：1.０ｍＬ／ｍｉｎ カラム温度：４０℃
【００３８】（精製）上記の反応液を１００℃で１０分
間加熱して酵素を失活させた。１５０ｍＬに希釈した
後、遠心分離して沈殿物を除いた。上澄液を水で平衡化
した活性炭カラム（3.２×２９ｃｍ）にアプライした。
次いで、水でガラクトースを溶出した後、０〜４０％エ
タノール濃度勾配をかけ、縮合生成物Ｄ、Ｃの順で溶出
した。分画した生成物Ｃ画分は、５％エタノールで平衡
化したBio-Gel P-2 カラム（2.３×９２ｃｍ）を用いて
分子排除クロマトグラフィーを行い、精製を行った。さ
らに、濃縮、凍結乾燥して１１４ｍｇの生成物Ｃを得
た。一方、分画した生成物Ｄ画分は、アスペルギルス・
オリゼ由来のβ−ガラクトシダーゼを作用させた後、再
度、上記条件にて活性炭カラムクロマトグラフィーで精
製を行った。濃縮、凍結乾燥して５０６ｍｇの生成物Ｄ
を得た。
間加熱して酵素を失活させた。１５０ｍＬに希釈した
後、遠心分離して沈殿物を除いた。上澄液を水で平衡化
した活性炭カラム（3.２×２９ｃｍ）にアプライした。
次いで、水でガラクトースを溶出した後、０〜４０％エ
タノール濃度勾配をかけ、縮合生成物Ｄ、Ｃの順で溶出
した。分画した生成物Ｃ画分は、５％エタノールで平衡
化したBio-Gel P-2 カラム（2.３×９２ｃｍ）を用いて
分子排除クロマトグラフィーを行い、精製を行った。さ
らに、濃縮、凍結乾燥して１１４ｍｇの生成物Ｃを得
た。一方、分画した生成物Ｄ画分は、アスペルギルス・
オリゼ由来のβ−ガラクトシダーゼを作用させた後、再
度、上記条件にて活性炭カラムクロマトグラフィーで精
製を行った。濃縮、凍結乾燥して５０６ｍｇの生成物Ｄ
を得た。
【００３９】（構造解析）生成物Ｃは、ＤＴＮＢ試薬
（5,5'-dithiobis) で黄色に呈色することから、その構
造に遊離のチオール基を有し、メルカプトエタノールの
水酸基がβ−ガラクトシル化（配糖化）したものと考え
られる。さらに、単離した転移生成物Ｃは、過酸化水素
によって酸化され、ＳＳ結合で２量体を形成し、メルカ
プトエタノールによって還元され、再び単量体を形成す
る。このことから、生成物Ｃは配糖体であり、その化学
式が前記一般式（１）で表される新規２−メルカプトエ
チルグリコシドで、詳細には２−メルカプトエチル Ｏ
−β−Ｄ−ガラクトシド（2-mercaptoethyl O-β-D-gal
actopyranoside)であることが確認された。このものは
下記の構造式３で表される。
（5,5'-dithiobis) で黄色に呈色することから、その構
造に遊離のチオール基を有し、メルカプトエタノールの
水酸基がβ−ガラクトシル化（配糖化）したものと考え
られる。さらに、単離した転移生成物Ｃは、過酸化水素
によって酸化され、ＳＳ結合で２量体を形成し、メルカ
プトエタノールによって還元され、再び単量体を形成す
る。このことから、生成物Ｃは配糖体であり、その化学
式が前記一般式（１）で表される新規２−メルカプトエ
チルグリコシドで、詳細には２−メルカプトエチル Ｏ
−β−Ｄ−ガラクトシド（2-mercaptoethyl O-β-D-gal
actopyranoside)であることが確認された。このものは
下記の構造式３で表される。
【００４０】
【化７】
【００４１】一方、生成物ＤはＦＡＢ−ＭＳ分析の結
果、分子量２４０であった。また、FT-IR スペクトルに
よってS-CH2 とC-S 結合に由来する 1,231cm-1,706cm-1
のピークが認められるのに対して、S-H 結合に由来する
2,550cm-1のピークは消失していた。さらに、13C-NMR
及び1H−NMR 分析を行ったところ、下記の第２表に示し
た通りであった。
果、分子量２４０であった。また、FT-IR スペクトルに
よってS-CH2 とC-S 結合に由来する 1,231cm-1,706cm-1
のピークが認められるのに対して、S-H 結合に由来する
2,550cm-1のピークは消失していた。さらに、13C-NMR
及び1H−NMR 分析を行ったところ、下記の第２表に示し
た通りであった。
【００４２】
【表２】第２表
【００４３】第２表の結果より、メルカプトエタノール
のチオール基（−ＳＨ基）にガラクトースがβ結合した
配糖体（チオグリコシド）、２−ヒドロキシエチル Ｓ
−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（2-hydroxyethyl S- β
-D-galactopyranoside) であることが分かった。このも
のは下記の構造式４で表される。
のチオール基（−ＳＨ基）にガラクトースがβ結合した
配糖体（チオグリコシド）、２−ヒドロキシエチル Ｓ
−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（2-hydroxyethyl S- β
-D-galactopyranoside) であることが分かった。このも
のは下記の構造式４で表される。
【００４４】
【化８】
【００４５】（特性）また、当該配糖体はメルカプトエ
タノール特有の不快臭は消失しており、同時に揮発性が
消失していることが確認できた。
タノール特有の不快臭は消失しており、同時に揮発性が
消失していることが確認できた。
【００４６】実施例３ （反応）２Ｍ マンノースと２Ｍ メルカプトエタノー
ルを含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ4.５) ５０ｍＬに
タチナタマメ由来のα−マンノシダーゼ４０００Ｕを加
え、３７℃で４日間反応させた。次いで、反応液の一部
を薄層板（メルク社製、Kieselgel 60）にスポットし、
展開溶媒として酢酸エチル：酢酸：水＝３：１：１の混
合溶媒を使用して、上昇法で展開させた。これを乾燥
後、５０％硫酸−メタノール溶液を噴霧し、１５０℃で
加熱して２種類の主要な生成物Ｅ、Ｆを検出した。
ルを含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ4.５) ５０ｍＬに
タチナタマメ由来のα−マンノシダーゼ４０００Ｕを加
え、３７℃で４日間反応させた。次いで、反応液の一部
を薄層板（メルク社製、Kieselgel 60）にスポットし、
展開溶媒として酢酸エチル：酢酸：水＝３：１：１の混
合溶媒を使用して、上昇法で展開させた。これを乾燥
後、５０％硫酸−メタノール溶液を噴霧し、１５０℃で
加熱して２種類の主要な生成物Ｅ、Ｆを検出した。
【００４７】反応液を１００℃で１０分間加熱して酵素
を失活後、１５０ｍＬに希釈し、遠心分離を行って沈殿
物を除いた。次いで、得られた上澄液を水で平衡化した
活性炭カラム（3.２×２９ｃｍ）にアプライした。水で
単糖を溶出した後、０〜４０％エタノール濃度勾配をか
け、生成物Ｅ、Ｆを溶出した。生成物Ｅを濃縮、凍結乾
燥して白色粉末２００ｍｇを得た。一方、生成物Ｆは５
％エタノールで平衡化したBio-Gel P-2 カラム（2.３×
９２ｃｍ）を用いて分子排除クロマトグラフィーを行
い、更に精製を行った。生成物Ｆは濃縮、凍結乾燥して
粉末７０ｍｇが得られた。
を失活後、１５０ｍＬに希釈し、遠心分離を行って沈殿
物を除いた。次いで、得られた上澄液を水で平衡化した
活性炭カラム（3.２×２９ｃｍ）にアプライした。水で
単糖を溶出した後、０〜４０％エタノール濃度勾配をか
け、生成物Ｅ、Ｆを溶出した。生成物Ｅを濃縮、凍結乾
燥して白色粉末２００ｍｇを得た。一方、生成物Ｆは５
％エタノールで平衡化したBio-Gel P-2 カラム（2.３×
９２ｃｍ）を用いて分子排除クロマトグラフィーを行
い、更に精製を行った。生成物Ｆは濃縮、凍結乾燥して
粉末７０ｍｇが得られた。
【００４８】生成物ＦはＤＴＮＢ試薬（5,5'−dithiobi
s ）で黄色に呈色することから、その構造に遊離のチオ
ール基を有し、メルカプトエタノールの水酸基がマンノ
シル化したものと考えられた。さらに、単離した転移生
成物Ｆは過酸化水素によって酸化され、ＳＳ結合で２量
体を形成し、メルカプトエタノールによって還元され、
再び単量体を形成した。このことから、生成物Ｆは配糖
体、２−メルカプトエチルグリコシドで、詳細には２−
メルカプトエチル Ｏ−α−Ｄ−マンノピラノシド（2-
mercaptoethyl O-α-D-mannopyranoside) であることが
確認された。このものは下記の構造式５で表される。
s ）で黄色に呈色することから、その構造に遊離のチオ
ール基を有し、メルカプトエタノールの水酸基がマンノ
シル化したものと考えられた。さらに、単離した転移生
成物Ｆは過酸化水素によって酸化され、ＳＳ結合で２量
体を形成し、メルカプトエタノールによって還元され、
再び単量体を形成した。このことから、生成物Ｆは配糖
体、２−メルカプトエチルグリコシドで、詳細には２−
メルカプトエチル Ｏ−α−Ｄ−マンノピラノシド（2-
mercaptoethyl O-α-D-mannopyranoside) であることが
確認された。このものは下記の構造式５で表される。
【００４９】
【化９】
【００５０】生成物ＥはＦＡＢ−ＭＳ分析の結果分子量
240 であった。また、さらに、13C-NMR 及び1H−NMR 分
析の結果より、メルカプトエタノールのチオール基（−
ＳＨ基）にマンノースがα結合した配糖体（チオグリコ
シド）、２−ヒドロキシエチル Ｓ−α−Ｄ−マンノピ
ラノシド(2-hydroxyethyl S-α-D-mannopyranoside)で
あることが分かった。このものは下記の構造式６で表さ
れる。
240 であった。また、さらに、13C-NMR 及び1H−NMR 分
析の結果より、メルカプトエタノールのチオール基（−
ＳＨ基）にマンノースがα結合した配糖体（チオグリコ
シド）、２−ヒドロキシエチル Ｓ−α−Ｄ−マンノピ
ラノシド(2-hydroxyethyl S-α-D-mannopyranoside)で
あることが分かった。このものは下記の構造式６で表さ
れる。
【００５１】
【化１０】
【００５２】実施例４ 2.５Ｍ ショ糖と２Ｍ ジチオスレイトールを含む５０
ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ5.５）５ｍＬにカンディダ・ウ
チルス由来のβ−フラクトシダーゼ（シグマ社製）３０
００Ｕを作用させ、４０℃で２０時間反応させた。反応
液の一部を薄層板（メルク社製 Kieselgel 60)にスポッ
トし、展開溶媒として酢酸エチル：酢酸：水＝３：１：
１の混合溶媒を使用して、上昇法で展開させた。これを
乾燥後、５０％硫酸−メタノール溶液を噴霧、１５０℃
で加熱して生成物チオフラクトシド（ジチオスレイトー
ル配糖体）を検出した。
ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ5.５）５ｍＬにカンディダ・ウ
チルス由来のβ−フラクトシダーゼ（シグマ社製）３０
００Ｕを作用させ、４０℃で２０時間反応させた。反応
液の一部を薄層板（メルク社製 Kieselgel 60)にスポッ
トし、展開溶媒として酢酸エチル：酢酸：水＝３：１：
１の混合溶媒を使用して、上昇法で展開させた。これを
乾燥後、５０％硫酸−メタノール溶液を噴霧、１５０℃
で加熱して生成物チオフラクトシド（ジチオスレイトー
ル配糖体）を検出した。
【００５３】実施例５ 2.５Ｍ ショ糖と２Ｍ チオグリコール酸ナトリウムを
含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ5.５）５ｍＬにカンデ
ィダ・ウチルス由来のβ−フラクトシダーゼ（シグマ社
製）３００Ｕを作用させ、４０℃で２０時間反応させ
た。反応液の一部を薄層板（メルク社製 Kieselgel 60)
にスポットし、展開溶媒として酢酸エチル：酢酸：水＝
３：１：１の混合溶媒を使用して、上昇法で展開させ
た。これを乾燥後、５０％硫酸−メタノール溶液を噴
霧、１５０℃で加熱して生成物チオフラクトシド（チオ
グリコール酸ナトリウム配糖体）を検出した。
含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ5.５）５ｍＬにカンデ
ィダ・ウチルス由来のβ−フラクトシダーゼ（シグマ社
製）３００Ｕを作用させ、４０℃で２０時間反応させ
た。反応液の一部を薄層板（メルク社製 Kieselgel 60)
にスポットし、展開溶媒として酢酸エチル：酢酸：水＝
３：１：１の混合溶媒を使用して、上昇法で展開させ
た。これを乾燥後、５０％硫酸−メタノール溶液を噴
霧、１５０℃で加熱して生成物チオフラクトシド（チオ
グリコール酸ナトリウム配糖体）を検出した。
【００５４】実施例６ 1.５Ｍショ糖と１Ｍ メルカプトエタノールを含む５０
ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ5.５）１ｍＬにカンディダ・ウ
チルス（シグマ社製）、サッカロミセス・セレビジエ
（シグマ社製）、カンディダ・ｓｐ．（東洋紡績株式会
社）を、及び1.５Ｍショ糖と１Ｍ メルカプトエタノー
ルを含む５０ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ7.０）１ｍＬに
アルスロバクター・sp. に由来するβ−フラクトシダー
ゼ２０Ｕを作用させ、４０℃で１〜２０時間反応させ
た。経時的に、反応液をＨＰＬＣにて以下の条件で分析
を行い、生成物である２種類の配糖体、２−メルカプト
エチルＯ−β−Ｄ−フルクトフラノシド（2-mercaptoet
hyl O-β-D-fructofuranoside)及び２−ヒドロキシエチ
ル Ｓ−β−Ｄ−フルクトフラノシド(2-hydroxyethyl
S-β-D-fructofuranoside)を定量することができた（図
３参照）。なお、図中の白抜き部分は２−メルカプトエ
チル Ｏ−β−Ｄ−フルクトフラノシドを、黒塗り部分
は２−ヒドロキシエチル Ｓ−β−Ｄ−フルクトフラノ
シドを示す。
ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ5.５）１ｍＬにカンディダ・ウ
チルス（シグマ社製）、サッカロミセス・セレビジエ
（シグマ社製）、カンディダ・ｓｐ．（東洋紡績株式会
社）を、及び1.５Ｍショ糖と１Ｍ メルカプトエタノー
ルを含む５０ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ7.０）１ｍＬに
アルスロバクター・sp. に由来するβ−フラクトシダー
ゼ２０Ｕを作用させ、４０℃で１〜２０時間反応させ
た。経時的に、反応液をＨＰＬＣにて以下の条件で分析
を行い、生成物である２種類の配糖体、２−メルカプト
エチルＯ−β−Ｄ−フルクトフラノシド（2-mercaptoet
hyl O-β-D-fructofuranoside)及び２−ヒドロキシエチ
ル Ｓ−β−Ｄ−フルクトフラノシド(2-hydroxyethyl
S-β-D-fructofuranoside)を定量することができた（図
３参照）。なお、図中の白抜き部分は２−メルカプトエ
チル Ｏ−β−Ｄ−フルクトフラノシドを、黒塗り部分
は２−ヒドロキシエチル Ｓ−β−Ｄ−フルクトフラノ
シドを示す。
【００５５】溶離液：６７％アセトニトリル−水 カラム：Asahipak NH2-P50（4.６×２５０ｍｍ、昭和電
工製） ＲＩ検出 流速：1.０ｍＬ／ｍｉｎ カラム温度：４０℃
工製） ＲＩ検出 流速：1.０ｍＬ／ｍｉｎ カラム温度：４０℃
【００５６】実施例７ ２Ｍ ガラクトースと0.２５Ｍ メルカプトエタノール
を含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ5.５）１ｍＬにアス
ペルギルス・オリゼ（ヤクルト本社製：１０１Ｕ）、ペ
ニシリウム・マルチカラー（ＫＩ化成株式会社製、１２
７Ｕ）、バチルス・サーキュランス（大和化成工業株式
会社製、１０８Ｕ）を、及び２Ｍ ガラクトースと0.２
５Ｍ メルカプトエタノールを含む５０ｍＭ リン酸緩
衝液（ｐＨ7.０）１ｍＬに大腸菌（シグマ社製、１２２
Ｕ）、サッカロミセス・フラギルス（シグマ社製、１１
０Ｕ）、クリュウベロミセス・ラクティス（合同酒精株
式会社製、１１９Ｕ）由来のβ−ガラクトシダーゼを作
用させ、３７℃で１日間反応させた。
を含む５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ5.５）１ｍＬにアス
ペルギルス・オリゼ（ヤクルト本社製：１０１Ｕ）、ペ
ニシリウム・マルチカラー（ＫＩ化成株式会社製、１２
７Ｕ）、バチルス・サーキュランス（大和化成工業株式
会社製、１０８Ｕ）を、及び２Ｍ ガラクトースと0.２
５Ｍ メルカプトエタノールを含む５０ｍＭ リン酸緩
衝液（ｐＨ7.０）１ｍＬに大腸菌（シグマ社製、１２２
Ｕ）、サッカロミセス・フラギルス（シグマ社製、１１
０Ｕ）、クリュウベロミセス・ラクティス（合同酒精株
式会社製、１１９Ｕ）由来のβ−ガラクトシダーゼを作
用させ、３７℃で１日間反応させた。
【００５７】次いで、反応液をＨＰＬＣにて以下の条件
で分析を行い、生成物である２種類の配糖体、２−メル
カプトエチル Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド(2-mer
captoethyl O- β-D-galactopyranoside) 及び２−ヒド
ロキシエチル Ｓ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド(2-hyd
roxyethyl S-β-D-galactopyranoside) を定量すること
ができた（図４参照）。なお、図中の白抜き部分は２−
メルカプトエチル Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド
を、黒塗り部分は２−ヒドロキシエチル Ｓ−β−Ｄ−
ガラクトピラノシドを示す。
で分析を行い、生成物である２種類の配糖体、２−メル
カプトエチル Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド(2-mer
captoethyl O- β-D-galactopyranoside) 及び２−ヒド
ロキシエチル Ｓ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド(2-hyd
roxyethyl S-β-D-galactopyranoside) を定量すること
ができた（図４参照）。なお、図中の白抜き部分は２−
メルカプトエチル Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド
を、黒塗り部分は２−ヒドロキシエチル Ｓ−β−Ｄ−
ガラクトピラノシドを示す。
【００５８】溶離液：６７％アセトニトリル−水 カラム：Asahipak NH2-P50（4.６×２５０ｍｍ、昭和電
工製） ＲＩ検出 流速：1.０ｍＬ／ｍｉｎ カラム温度：４０℃
工製） ＲＩ検出 流速：1.０ｍＬ／ｍｉｎ カラム温度：４０℃
【００５９】実施例８ ５ｍＭ ｐＮＰ−Ｏ−β−ガラクトシドを基質に用いて
５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ7.０）に、先に単離したチ
オグリコシド（配糖体）である２−ヒドロキシエチル
Ｓ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（2-hydroxyethyl S-
β-D-galactopyranoside）を０〜１2.５ｍＭ加えて大腸
菌由来のβ−ガラクトシダーゼ（シグマ社製）を作用さ
せ、４０℃にて活性を測定し、当該チオグリコシドによ
る酵素活性阻害をみた。結果を第３表に示す。
５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ7.０）に、先に単離したチ
オグリコシド（配糖体）である２−ヒドロキシエチル
Ｓ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（2-hydroxyethyl S-
β-D-galactopyranoside）を０〜１2.５ｍＭ加えて大腸
菌由来のβ−ガラクトシダーゼ（シグマ社製）を作用さ
せ、４０℃にて活性を測定し、当該チオグリコシドによ
る酵素活性阻害をみた。結果を第３表に示す。
【００６０】
【表３】第３表
【００６１】第３表より明らかなように、当該チオグリ
コシドの濃度上昇に伴って酵素阻害作用が認められる。
コシドの濃度上昇に伴って酵素阻害作用が認められる。
【００６２】
【発明の効果】本発明により、新規配糖体並びにその簡
便な製造方法が提供される。本発明により得られる配糖
体は、チオール基を含む揮発性物質の固定化、酸化に不
安定なチオール基の保護、酵素阻害剤、タンパク質生産
誘導物質、抗腫瘍活性物質などに利用され、化成品工
業、化粧品工業、食品工業、医薬品工業などの分野での
活用が期待される。
便な製造方法が提供される。本発明により得られる配糖
体は、チオール基を含む揮発性物質の固定化、酸化に不
安定なチオール基の保護、酵素阻害剤、タンパク質生産
誘導物質、抗腫瘍活性物質などに利用され、化成品工
業、化粧品工業、食品工業、医薬品工業などの分野での
活用が期待される。
【図１】 実施例１の反応液の高速液体クロマトグラム
を示す。
を示す。
【図２】 実施例２の反応液の高速液体クロマトグラム
を示す。
を示す。
【図３】 実施例６の反応液中の２−メルカプトエチル
Ｏ−β−Ｄ−フルクトフラノシド及び２−ヒドロキシ
エチル Ｓ−β−Ｄ−フルクトフラノシドの定量結果を
示す。
Ｏ−β−Ｄ−フルクトフラノシド及び２−ヒドロキシ
エチル Ｓ−β−Ｄ−フルクトフラノシドの定量結果を
示す。
【図４】 実施例７の反応液中の２−メルカプトエチル
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド及び２−ヒドロキシ
エチル Ｓ−β−Ｄ−ガラクトピラノシドの定量結果を
示す。
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド及び２−ヒドロキシ
エチル Ｓ−β−Ｄ−ガラクトピラノシドの定量結果を
示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｐ 19/64 Ｃ１２Ｐ 19/64 (72)発明者 濱保 健一 神奈川県横浜市鶴見区大黒町13番46号 株 式会社横浜国際バイオ研究所内 (72)発明者 藤田 孝輝 神奈川県横浜市鶴見区大黒町13番46号 株 式会社横浜国際バイオ研究所内 (72)発明者 原 耕三 神奈川県横浜市鶴見区大黒町13番46号 株 式会社横浜国際バイオ研究所内 (72)発明者 北畑 寿美雄 大阪府泉南郡熊取町美熊台１丁目１番６号 Ｆターム(参考） 4B064 AF41 AF56 BA03 BH04 BH07 CA21 DA01 DA10 DA20 4C057 AA17 AA19 BB02 CC05 DD01 JJ04 JJ14 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 EA02 EA05 MA04 NA14 ZC20
Claims (6)
- 【請求項１】 糖質とチオール化合物に、グリコシダー
ゼを作用させることを特徴とする配糖体の製造方法。 - 【請求項２】 グリコシダーゼが、β−フラクトシダー
ゼ、β−ガラクトシダーゼ又はα−マンノシダーゼであ
る請求項１の配糖体の製造方法。 - 【請求項３】 チオール化合物が、メルカプトエタノー
ル、ジチオスレイトール及びチオグリコール酸ナトリウ
ムの中から選択された少なくとも１種のものである請求
項１の配糖体の製造方法。 - 【請求項４】 下記の構造式１で表される２−ヒドロキ
シエチル Ｓ−β−Ｄ−フルクトフラノシド。 【化１】 - 【請求項５】 下記の一般式（１）で表される２−メル
カプトエチルグリコシド。 【化２】 （式中、Glycosyl基はガラクトース、フラクトース又は
マンノースである。） - 【請求項６】 請求項１記載の方法によって得られる配
糖体を含有する酵素阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000048639A JP2001231593A (ja) | 2000-02-25 | 2000-02-25 | 新規配糖体及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000048639A JP2001231593A (ja) | 2000-02-25 | 2000-02-25 | 新規配糖体及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001231593A true JP2001231593A (ja) | 2001-08-28 |
Family
ID=18570698
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000048639A Withdrawn JP2001231593A (ja) | 2000-02-25 | 2000-02-25 | 新規配糖体及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001231593A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016520526A (ja) * | 2013-03-14 | 2016-07-14 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | チオ糖粘液溶解薬 |
| NL2028505B1 (en) * | 2021-06-21 | 2022-12-29 | Pharmacytics B V | Sugar thiol compounds and methods of producing the same |
-
2000
- 2000-02-25 JP JP2000048639A patent/JP2001231593A/ja not_active Withdrawn
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016520526A (ja) * | 2013-03-14 | 2016-07-14 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | チオ糖粘液溶解薬 |
| US10526359B2 (en) | 2013-03-14 | 2020-01-07 | The Regents Of The University Of California | Thiosaccharide mucolytic agents |
| US11021506B2 (en) | 2013-03-14 | 2021-06-01 | The Regents Of The University Of California | Thiosaccharide mucolytic agents |
| NL2028505B1 (en) * | 2021-06-21 | 2022-12-29 | Pharmacytics B V | Sugar thiol compounds and methods of producing the same |
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