TWI837950B - 芒果苷醣苷及其製備方法 - Google Patents
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Abstract
本發明關於一種芒果苷醣苷及其製備方法；製備方法包含以半乳糖副桿菌的麥芽糖澱粉酶，於含有醣授予體的環境中，催化將芒果苷，以獲得芒果苷醣苷；本發明之芒果苷醣苷的水溶性明顯優於芒果苷，且具有優秀的抗氧化功能。
Description
本發明關於一種芒果苷醣苷及其製備方法，所製得的芒果苷醣苷具有良好的水溶性與抗氧化活性。
芒果苷(Mangiferin)是一種從芒果(Mangifera indica)植物中純化的天然C-糖苷氧葱酮(C-glucosidic xanthone)，目前研究已知芒果苷具有多種有益於健康的生物活性，包含抗氧化、抗發炎、抗骨關節炎(osteoarthritis)、抗癌、避免器官纖維化、預防記憶力下降等等、甚至可以降低重金屬的傷害；但是芒果苷的水溶性以及生物利用性不佳，因此尚未能有效利用芒果苷。
生物轉換(biotransformation)是指將化合物進行生化修飾的過程，其可以利用酵素催化或是非酵素催化等方式達成；生物轉換包含將化合物氧化還原、水解、醣化等等，以暴露或是增加該化合物的官能基團。醣化(glycosylation)是指於化合物上鍵接醣基團的反應，其可藉由酵素催化的方式將一化合物醣化，具有醣化功能的酵素包含醣基轉移酶(glycosyltransferase)與醣苷水解酶(glycoside hydrolase)，其中醣基轉移酶的受質包含尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate-glucose)，而醣苷水解酶的受質包含澱粉(starch)、麥芽糖糊精(maltodextrin)、麥芽糖(maltose)與蔗糖(sucrose)等等，此外目前已發現了117個家族的醣苷水解酶。
研究顯示，經過生物轉換後的化合物，其化學性質甚至生物活性可能產生改變，但是酵素因具有受質專一性，因此將特定的受質以適當的酵素進行催化，仍具有相當大的研究空間。
本發明關於一種芒果苷醣苷(mangiferin glycoside)及其製備方法，本發明之芒果苷醣苷，具有如下式(I)或式(II)之結構式。
本發明之芒果苷的製備方法包含：以一半乳糖副桿菌(Parageobacillus galactosidasius)的麥芽糖澱粉酶(Maltogenic amylase；PgMA)，於一醣授予體的存在下，催化一芒果苷，以獲得芒果苷醣苷。
於一實施例中，半乳糖副桿菌的麥芽糖澱粉酶於55-75℃催化芒果苷。
於一實施例中，半乳糖副桿菌的麥芽糖澱粉酶於酸鹼值pH 5.0~8.0之反應環境下催化芒果苷。
於一實施例中，醣授予體包含環湖精與麥芽糖糊精。
本發明也關於一種芒果苷醣苷於製作抗氧化組成物之用途。
於一實施例中，抗氧化組成物可為醫藥組成物或式保健食品組成物。
於一實施例中，組成物包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑、輔劑、抗氧化劑或是食品添加劑其中至少之一。
藉此，本發明利用生物轉換的方法，將芒果苷轉化為芒果苷醣苷，所獲得的芒果苷醣苷具有優秀的自由基清除能力，且水溶性大幅提高，提高其應用方便性。
第一圖：蛋白質樣品的SDS PAGE分析圖。
第二圖：重組PgMA水解不同醣類之活性分析圖。
第三圖：酸鹼值與溫度影響重組PgMA水解活性分析圖。
第四圖：金屬離子影響PgMA水解活性分析圖。
第五圖：轉醣苷化之葛根素與芒果苷的HPLC分析圖。
第六圖：不同轉醣苷化的反應條件與芒果苷醣苷產率分析圖。
第七圖：芒果苷醣苷於不同反應時間的產率分析圖。
第八圖：芒果苷轉醣苷化之後生成芒果苷醣苷之示意圖。
第九圖：芒果苷醣苷的DPPH自由基清除力分析圖。
為令本發明之技術手段其所能達成之效果，能夠有更完整且清楚的揭露，茲詳細說明如下，請一併參閱揭露之圖式。
一、重組半乳糖副桿菌麥芽糖澱粉酶之製備
此實施例中使用的酵素，為半乳糖副桿菌(Parageobacillus galactosidasius)DSM 18751T菌株的麥芽糖澱粉酶(maltogenic amylase，MA)，將其簡稱為PgMA；PgMA具有醣化(glycosylation)的活性，且根據比對，PgMA的胺基酸序列與嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillus stearothermophilus)的麥芽糖澱粉酶(BsMA)的胺基酸序列具有79.1%相似度；經過分析，PgMA的胺基酸序列中也具有α-澱粉酶(alpha-amylase)以及麥芽糖澱粉酶(MA)的功能性序列；序列表SEQ ID NO：1為PgMA的胺基酸序列，SEQ ID NO：2為BsMA的胺基酸序列。
(一)、製備重組PgMA
本實施例使用的半乳糖副桿菌(Parageobacillus galactosidasius)DSM 18751T菌株，購自於財團法人食品工業發展研究所的生物資源保存及研究中心|(Bioresources Collection and Research Center)，其編號為BCRC 80657；本實施例使用的大腸桿菌(Escherichia.coli)BL21(DE3)菌株以及使用的pET-Duet-1表現質體是購自於Novagen Inc.(Madison,WI,USA)。
首先，萃取半乳糖副桿菌DSM 18751T菌株的基因體DNA，再使用專一性的引子對、經由聚合酶鏈鎖反應(PCR)、放大其麥芽糖澱粉酶(maltogenic amylase，後簡稱PgMA)的去氧核醣核酸(DNA)片段，所使用的引子對序列請參見序列表的SEQ ID NO：3與SEQ ID NO：4，接著再將放大後的PgMA DNA片段接合到pET-Duet-1表現質體，以獲得一重組質體，再將此重組質體轉化大腸桿菌BL21(DE3)，以獲得一重組大腸桿菌。
將重組大腸桿菌培養於含有1%(w/v)胰蛋白腖與氯化鈉(sodium chloride)、0.5%(w/v)酵母萃取物的LB(Luria-Bertani)培養液中培養，並當菌液生長到於波長560nm的吸光值為0.6時，於菌液中加入0.2mM的IPTG(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside)，並將繼續菌液培養於18℃，以誘發重組質體表現PgMA蛋白質；於加入IPTG培養後的20小時，收集菌液並離心，保留菌塊，再以50mM、pH6.8
的磷酸鹽緩充液(phosphate buffer)清洗菌塊，最後再以超音波震盪的方式萃取細菌中的蛋白質，並獲得一蛋白質粗萃液；因利用pET-Duet-1表現質體所表現的PgMA重組蛋白質的N端融合有組胺酸標籤(his-tag)，故可使用鎳親合管柱(Ni2+ affinity column)純化PgMA重組蛋白質。純化並且濃縮後的PgMA重組蛋白質會保存於-80℃備用。
請參見第一圖，為不同蛋白質樣本的十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS PAGE)的分析結果，蛋白質樣本包含未加入IPTG誘導的菌液的蛋白質粗萃液(圖中標示為「-IPTG樣品」)、加入IPTG誘導的菌液的蛋白質粗萃液(圖中標示為「+IPTG樣品」)、以及使用鎳親合管柱純化「+IPTG樣品」的蛋白質(圖中標是為「純化樣品」)；第一圖中，「+IPTG樣品」與「-IPTG樣品」相比，於分子量約68kD處觀察到較強的訊號，又純化樣品中，於分子量約68kD處觀察到大量的蛋白質，與預計中的PgMA重組蛋白質分子量相同；此結果顯示本發明確實有成功製作並純化PgMA重組蛋白質。此試驗中，PgMA重組蛋白質的產率為18.73mg/L。
(二)、水解(Hydrolysis)活性測試
製備一反應溶液，反應溶液中含有5.6g/mL之重組PgMA、1%(w/v)之受質，以及不同酸鹼值的緩衝溶液，將反應溶液於60℃作用30分鐘，接著加熱以中止反應；最後以3,5-二硝基水楊酸方法(dinitrosalicylic acid method)測量反應溶液中的還原糖含量；將上述反應條件下、一分鐘內可以釋放1莫爾(mol)還原糖(例如麥芽糖)的酵素量、定義為一活性單位的MA。
其中，緩衝溶液可分別為pH 5.0的醋酸緩衝溶液、pH 6.0~7.0的磷酸鹽緩衝溶液、或是pH 8.0~10.0的甘胺酸(glycine)緩衝溶液；以及受質可包含α-環糊精(cyclodextrin，後簡稱CD)、β-CD、γ-CD、澱粉(starch)或普魯蘭糖(pullulan)。
請參見第二圖，為使用α-環糊精(cyclodextrin，後簡稱CD)、β-CD、γ-CD、澱粉或普魯蘭糖作為受質，測試其被PgMA水解的情形。反應溶液中包含1%(w/v)的受質、5.6μg/mL的PgMA.、以及50mM的PB緩衝溶液(pH 7.0)，反應溫度為65℃，且反應時間為30分鐘；結果顯示，PgMA對於α-CD、β-CD與γ-CD具有明顯的水解活性，PgMA對此三種環糊精的水解活性相當；又PgMA對於澱粉與普魯蘭糖的水解活性較低；此外，PgMA對環糊精的水解活性是對環糊精水解活性的65倍、以及是對澱粉水解活性的650倍。在pH 7與60℃，PgMA針對β-CD所測得之比活性為91.46U/mg。
再請參見第三圖，為以β-CD為受質，並於不同的反應酸鹼值或是反應溫度下作用，以測試PgMA的較佳作用條件。反應溶液中包含1%(w/v)的β-CD、5.6μg/mL的PgMA以及50mM不同酸鹼值的緩衝溶液；根據第三圖(A)，PgMA水解β-CD的較佳作用酸鹼值為pH 7.0，且根據第三圖(B)，PgMA水解β-CD的較佳作用溫度介於65~75℃，後續會以65℃作為水解溫度。
又，也於反應溶液中加入10mM的氯化鎂(MgCl2，提供鎂離子)、氯化鉀(KCL，提供鉀離子)、乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid)、或是5~20%(v/v)的二甲基亞颯(DMSO)，測試金屬離子對於PgMA活性的影響。請參見第四圖，鎂離子、鉀離子或是EDTA都不會顯著影響PgMA的活性，但是DMSO會降低PgMA的活性，且有劑量依存的現象。
(三)、轉醣苷化(transglycosylation)活性測試
此試驗中是以β-CD為醣授予體(sugar donor)、以三萜化合物(triterpenoids)、三萜皂苷(triterpenoid saponins)、類黃酮(flavonoids)、類黃酮醣苷(flavonoid glycosides)或是氧葱酮醣苷(xanthone glycoside)做為醣受體(sugar acceptor)，測試PgMA的轉醣苷化活性，此實施例使用的醣受體請參見表一。
表一
反應溶液中包含1%(w/v)的β-CD、5.6g/mL的PgMA、1mg/mL的醣受體(醣受體的溶劑為DMSO)、以及50mM的PB緩衝液，反應溶液的酸鹼值為pH
7.0，反應溫度為65℃，以及作用時間為24小時；反應24小時之後，再反應溶液與等體積的甲醇混合均勻，並以高效液相層析法(HPLC)進行分析。
此實施例的HPLC分析系統為配備梯度泵(Waters 600,Waters,Milford,MA,USA)的Agilent 1100 series HPLC系統(Santa Clara,CA,USA)，靜止相為C18管柱(5m,4.6 i.d.250mm；Sharpsil H-C18,Sharpsil,Bei-jing,China)，移動相為(A)1%醋酸水溶液或是(B)甲醇。本試驗的洗脫條件如下：於開始洗脫的0~20分鐘，為線性梯度(linear gradient)洗脫，使用的甲醇濃度為0分鐘的以40(v/v)%，漸進增加至沖提後20分鐘的70(v/v)%；接著進行等度洗脫(isocratic elution)，於洗脫後20~25分鐘，以70(v/v)%甲醇進行洗脫；接著，再進行線性梯度(linear gradient)洗脫，於洗脫後25~28分鐘，使用的甲醇濃度由70(v/v)%線性降低至40(v/v)%；最後，於洗脫的28~35分鐘，以40(v/v)%甲醇進行等度洗脫。洗脫的液體流速皆維持在1mL/min，注入的樣品體積為10L、且最後測量洗脫液於波長254nm的吸光值。
試驗結果顯示僅有葛根素與芒果苷會被PgMA轉糖苷化，第五圖(A)與第五圖(B)分別為葛根素與芒果苷的HPLC分析圖，而其他測試的化合物都無法被PgMA轉糖苷化。
葛跟素具有isoflavone-8-C-glucosdie結構，但是PgMA並不能轉醣苷化具有isoflavone-7-O-glucoside(8-hydroxydaidzein-7-α-O-glucoside)或是flavone-8-C-glucoside結構的化合物(例如牡荊素)。此結果顯示PgMA的受質專一性高，僅能轉醣苷化特定種類的受質。
根據第五圖(A)，葛跟素被PgMA轉醣苷化之後，會偵測到到三種主要的產物，圖中標示為P1、P2與P3；又，根據第五圖(B)，芒果苷被PgMA轉醣苷化之後，會偵測到到一種產物，簡稱為化合物1(M1)，根據第五圖(B)，M1的產率約為2.3%。
二、芒果苷醣苷化後的產物純化
(一)、優化以PgMA催化芒果苷的作用條件
由於化合物1(M1)的產量相當少，因此進一步測試於以PgMA進行芒果苷的轉醣苷化時，使用不同種類的醣授予體、或是添加不同濃度的醣授予體對於化合物1(M1)產量的影響；此外也測試不同的催化時間對化合物1(M1)產量的影響。
此試驗中，除了以α-CD、β-CD與γ-CD作為醣授予體之外，也選用麥芽糖糊精(maltodextrin)作為糖授予體，此外也將反應溶液中的醣授予體濃度增加到50%(w/v)；請參見第六圖(A)，以麥芽糖糊精與α-CD作為醣授予體的組別，其M1的產量較高，但因為麥芽糖糊精的水溶性較佳且價格較低，因此後續選用麥芽糖糊精作為PgMA催化芒果苷的醣授予體。
第六圖(B)為以50%(w/v)麥芽糖糊精為醣授予體、催化芒果苷轉醣苷化後、獲得產物的HPLC分析圖，圖中顯示除了化合物1(M1)之外，還偵測到兩種新的化合物，將其命名為化合物2(M2)與化合物3(M3)；但因為M3目前不容易與芒果苷分離，因此後續先針對化合物1(M1)與化合物2(M2)進行研究。
又，分別1~50%(w/v)麥芽糖糊精為醣授予體，以PgMA將芒果苷轉醣苷化，並分別測量化合物1(M1)與化合物2(M2)的產率；請參見第六圖(C)，當麥芽糖糊精添加量為1%(w/v)時，化合物1(M1)與化合物2(M2)的產率都很低；麥芽糖糊精添加量為5%(w/v)時，化合物1(M1)與化合物2(M2)的產率已有上升的情形；當麥芽糖糊精添加量為10~50%(w/v)時，化合物1(M1)的產率都高於1~5%(w/v)組，但在10~50%(w/v)的範圍內，化合物1(M1)產率變化較不顯著，化合物2(M2)的產率仍會隨著麥芽糖糊精的添加比例上升而增加；當麥芽糖糊精添加比例為50%(w/v)時，化合物2(M2)的產率達到最高，為21%，而此條件下化合物1(M1)的產率為10%。
又，請再參見第七圖，為反應開始後的不同時間，收集產物並以HPLC分析、以分別計算化合物1(M1)與化合物2(M2)的產率；此試驗的反應溶液中包含50%(w/v)麥芽糖糊精、5.6μg/mL PgMA與1mg/mL芒果苷，反應溶液緩衝液為50mM的磷酸緩衝液(pH=7)，以及反應溫度為65℃。根據第七圖的結果，化合物1(M1)於反應後的168小時產率最高，為13.2%；化合物2(M2)的產綠則是於反應後72小時達到最高，為33.8%。
(二)、化合物1與化合物2之純化
將PgMA催化芒果苷的反應溶液的體積放大至100mL，100mL的反應溶液中包含50%(w/v)之麥芽糖糊精、1mg/mL之芒果苷、5.6g/mL之PgMA、與50mM、pH 7.0之磷酸鹽緩衝液，並將反應溶液於65℃作用24小時；作用後，與反應溶液中加入等體積的甲醇以中止轉醣苷化作用，並以配備製備型C18反相管柱(10m,20.0 i.d.250mm,ODS 3；Inertsil,GL Sciences,Eindhoven,The Netherlands)的製備型YoungLin HPLC系統(YL9100,YL Instrument,Gyeonggi-do,South Korea)純化產物，並將收集到的物質真空濃縮並凍乾；此實施例中獲得20.1mg的化合物(1)與9.3mg的化合物(2)。
進一步，以核磁共振(NMR)與質譜法(mass spectral analyses)分析化合物(1)與化合物(2)的化學結構；此實施例的質譜分析是以搭配電噴離噴霧(electrospray ionization，ESI)的Finnigan LCQ Duo質譜儀(ThermoQuest Corp.,San Jose,CA,USA)進行。又，1H-and 13C-核磁共振，是於室溫下進行，以DEPT(polarization transfer)、HSQC(heteronuclear single quantum coherence)、HMBC(heteronuclear multiple bond connectivity)、COSY(correlation spectroscopy)與NOESY(nuclear Overhauser effect spectroscopy)光譜進行無失真增強、以Bruker AV-700 NMR光譜儀紀錄；核磁
共振分析時使用標準脈衝序列與參數，且所有的化學位移以「ppm,δ(parts per million)」呈現。
化合物1(M1)的電噴霧電離質譜(ESI-MS)的分析結果顯示其於m/z：583.4處具有一明顯的[M-H]-離子峰，且表示化合物1(M1)對應的分子式為C25H28O16。，此質譜分析結果顯示化合物1(M1)的結構為在芒果苷的結構上接上一葡萄醣基的部分(glucosyl moiety)，化合物1(M1)為一種芒果苷醣苷(mangiferin glycoside)。
化合物2(M2)的電噴霧電離質譜(ESI-MS)的分析結果顯示其於m/z：745.3處具有一明顯的[M-H]-離子峰，且表示化合物1(M1)對應的分子式為C3H38O21，此質譜分析結果顯示化合物1(M2)的結構為在芒果苷的結構上接上二葡萄醣基(glucosyl moiety)，化合物2(M2)也是一種芒果苷醣苷(mangiferin glycoside)。
為進一步確認化合物1(M1)與化合物2(M2)的結構，以核磁共振(NMR)分析此二種化合物；於DMSO-d6、700MHz與175MHz中，化合物1(M1)與化合物2((M2)的1H與13C-NMR的賦值(assignment)請參見表二，其中(化學位移δ的單位為ppm，自旋耦合常數J的單位為Hz)：
經由一維(1-D)與二維(2-D)NMR試驗，化合物1(M1)的，1H-NMR與13C-NMR的醣訊號被判斷為C-葡萄糖基(C-glucosyl moieties)與O-葡萄糖基(O-glucosyl moieties)；化合物1(M1)於DMSO-d6溶劑中的1H光譜顯示於6.36、6.86和7.37ppm有三個單波峰，以及在3.0至5.0ppm之間具有一複雜10-旋系統(complex 10-spin system)。又，分析此二級系統，顯示了兩個典型的葡萄糖基的耦合常數。藉由C-2/H-1'(107.5/4.58ppm)的HMBC關聯的存在，顯示化合物1(M1)的C-葡萄糖基的醣苷鍵接於氧葱酮醣苷的C-2位置。以及，H-1'、4.58(d,J=9.1Hz)的異頭質子(anomeric proton)，揭露芒果苷具有C-β構型。HSQC的分析結果顯示芒果苷的O-葡萄糖基於H1"(4.73ppm,d,J=4.2Hz)為雙波峰訊號，與C-1"(98.7ppm)相對應的碳原子為異頭質子，代表其為一O-αe構型。芒果苷的H-1"(d=4.73ppm)與HMBC交叉發出訊號H-1"/C-6'(4.73/66.9ppm)與H-6'a,6'b/C-1"(3.46,3.52/98.7ppm)。C-6'的13C信號的顯著低場位移表示化合物1(M1)具有第二個葡萄糖基的鍵結，且其為α-(1→6)鍵結。配合表二的分析結果，可確認化合物1(M1)為葡萄糖-α-(1→6)-芒果苷(glucosyl-α-(1→6)-mangiferin)，化合物1(M1)的分子結構圖請參見第八圖。
化合物2(M2)於DMSO-d6溶劑中的1H光譜顯示於6.36、6.86與7.37ppm有三個單波峰，且於3.0~6.0ppm之間具有一複雜11-旋系統(complex 11-spin system)；又，分析此二級系統，顯示了三個典型的葡萄糖基的耦合常數，包含列在表二中的化學位移。根據對應的HMBC分析結果，C-2於107.4ppm以及H-1'於4.58ppm(d,J=9.8Hz)的化學位移，顯示化合物2在糖基與芒果苷的苷元(aglycone)之間具有一C-C鍵結(C-glucosyl-xanthone)。以HMBC對異頭碳C-6'(66.9ppm)進行分
析，確認化合物2(M2)的芒果苷鍵接到一O-麥芽糖基(maltosyl)，以及確認相對應的異頭質子H-1"位於4.75(d,J=3.5Hz)，確認此O-麥芽糖基為O-α構型。麥芽糖於δH H-1"(d,J=3.5Hz)與H-1''' 4.95(100.9ppm)的雙峰訊號，以及對應的C-1"(98.6ppm)與C-1'''(100.9ppm)被指配為異頭質子，經HSQC分析確認為兩個O-α構型。又以HMBC分析，於C-1"/H-6'(98.6/3.64,3.71ppm)and C-1'''/H-4"(100.9/3.34ppm)的交叉波峰，確認兩個葡萄糖基的鍵結為α-(1→4)鍵結。配合表二的分析結果，可確認化合物2(M2)為麥芽糖-α-(1→6)-芒果苷(maltosyl-α-(1→6)-mangiferin)，化合物2(M2)的分子結構圖請參見第八圖。
此外，也確定了化合物(1)淡黃色粉末、熔點233~235℃；化合物(2)也為淡黃色粉末、熔點227~229℃。
三、芒果乾糖苷的特性測試
(一)、水溶性測試
水溶性測試方法如下：將待測物加入二次去離子水(double-deionized H2O)中，並於25℃震盪1小時；接著將水溶液以10000g之轉速、於25℃離心30分鐘；收集離心後的上清液、並以0.2μM的尼龍濾膜過濾，再以HPLC分析濾過液；最後根據HPLC分析結果並與標準品進行比對，以計算溶液中待測物的濃度。水溶性測試的結果請參見表三：
請參見表三，芒果苷的水溶性相當差，僅有92.2±4.60mg/L，因此其應用上的方便性也不佳；本案的化合物2(M2)，其水溶性大幅提高至5.11 X 105
±2.64 X 103mg/L，為芒果苷水溶性的5500倍；因化合物1(M1)產量過低，無法進行水溶性測試。
(二)、自由基清除力測試
以DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazine)自由基清除力測試，測量待測物自由基清除能力；檢測方法簡述如下：將待測物與1mM的DPPH甲醇溶液混合，並於室溫反應30分鐘；30分鐘後，測量反應溶液於波長517nm的吸光值；因為DPPH自由基與具有抗氧化力的物質作用後，溶液顏色會由藍紫色轉變成淡黃色，因此可以藉由反應溶液於517nm吸光質的改變，評估待測物的抗氧化能力。
此試驗中，以抗壞血酸(ascorbic acid)做為清除DPPH自由基的正對照組；DPPH自由基清除力的計算公式如下：DPPH自由基清除率(%)=[(對照組OD517-待測物OD517)/(對照組OD517)]X 100
又，將清除50% DPPH自由基的待測物最低濃度定義為半抑制濃度(IC50)。
請參見第九圖，抗壞血酸的IC50為71.9μM、芒果苷的IC50為45.5μM、化合物1(M1)的IC50為58.3μM，以及化合物2(M2)的IC50為54.4μM；此結果顯示芒果苷、化合物1(M1)與化合物2(M2)的DPPH自由基清除率優於抗壞血酸，且芒果苷轉醣苷化之後的化合物1(M1)與化合物2(M2)的抗氧化能力不會受到影響。
綜上，本發明藉由分子生物學技術，製作一重組半乳糖副桿菌的麥芽糖澱粉酶PgMA、並使用PgMA催化芒果苷，以獲得至少兩種芒果苷醣苷；本發明製得的芒果苷醣苷具有優秀的抗氧化能力，且其水溶性顯著上升，提高芒果苷醣的應用方便性。
綜上所述，本發明之芒果苷醣苷及其製備方法，的確能藉由上述所揭露之實施例，達到所預期之使用功效，且本發明亦未曾公開於申請前，誠已
完全符合專利法之規定與要求。爰依法提出發明專利之申請，懇請惠予審查，並賜准專利，則實感德便。
惟，上述所揭之說明，僅為本發明之較佳實施例，非為限定本發明之保護範圍；其；大凡熟悉該項技藝之人士，其所依本發明之特徵範疇，所作之其它等效變化或修飾，皆應視為不脫離本發明之設計範疇。
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Claims (4)
- 一種芒果苷醣苷的製備方法，其係以一半乳糖副桿菌(Parageobacillus galactosidasius)的麥芽糖澱粉酶(PgMA)，於一醣授予體的存在下，催化一芒果苷，以獲得該芒果苷醣苷；其中，該芒果苷醣苷具有如下式(I)或式(II)之結構式：
- 如請求項1所述之方法，其中該半乳糖副桿菌的麥芽糖澱粉酶於55-75℃催化該芒果苷。
- 如請求項1所述之方法，其中該半乳糖副桿菌的麥芽糖澱粉酶於酸鹼值pH 5.0~8.0之反應環境下催化該芒果苷。
- 如請求項1所述之方法，其中該醣授予體包含環糊精與麥芽糖糊精。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| TW111143800A TWI837950B (zh) | 2022-11-16 | 2022-11-16 | 芒果苷醣苷及其製備方法 |
Applications Claiming Priority (1)
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| TW111143800A TWI837950B (zh) | 2022-11-16 | 2022-11-16 | 芒果苷醣苷及其製備方法 |
Publications (2)
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| TWI837950B true TWI837950B (zh) | 2024-04-01 |
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| TW111143800A TWI837950B (zh) | 2022-11-16 | 2022-11-16 | 芒果苷醣苷及其製備方法 |
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| Country | Link |
|---|---|
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-
2022
- 2022-11-16 TW TW111143800A patent/TWI837950B/zh active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 期刊 Lee JY, et al. "Enhancement of the water solubility and antioxidant capacities of mangiferin by transglucosylation using a cyclodextrin glycosyltransferase" Enzyme and Microbial Technology 159, Elsevier 2022; Available online: 2022/5/8 110065. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW202421109A (zh) | 2024-06-01 |
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