JP2001197886A - 多様なヌクレオチド混合物を用いるｄｎａ塩基配列決定方法及び、これに使用されるキット - Google Patents
多様なヌクレオチド混合物を用いるｄｎａ塩基配列決定方法及び、これに使用されるキットInfo
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 従来のサンガー法によるＤＮＡ配列決定方法
を改良して、ＤＮＡ両末端部位の塩基配列を容易に決定
できるようにして、１回の塩基配列決定で従来の方法よ
り、もっと長鎖のＤＮＡ配列が決定できる方法及び、こ
れに使用されるキットを提供すること。 【解決手段】 従来のジデオキシヌクレオチド鎖終結法
を用いるＤＮＡ配列決定方法においては、ｄＮＴＰに対
するｄｄＮＴＰのモル比率が約０．０２のヌクレオチド
混合物が使用される。しかし、本発明の方法において
は、ｄｄＮＴＰの量を従来技術の場合より増加させたヌ
クレオチド混合物を用いるにより、比較的短鎖の相補Ｄ
ＮＡ断片を生成させ、これと別にｄｄＮＴＰの量を従来
の場合より減少させたヌクレオチド混合物を用いるによ
り、比較的長鎖の相補ＤＮＡ断片を生成させた後、この
ように製造された相補ＤＮＡ断片を混合して１回の分離
過程を通じて相補ＤＮＡ断片を分子量順に従って分離し
た後、相補ＤＮＡ断片各々の末端の塩基を決定すること
を特徴とする。
を改良して、ＤＮＡ両末端部位の塩基配列を容易に決定
できるようにして、１回の塩基配列決定で従来の方法よ
り、もっと長鎖のＤＮＡ配列が決定できる方法及び、こ
れに使用されるキットを提供すること。 【解決手段】 従来のジデオキシヌクレオチド鎖終結法
を用いるＤＮＡ配列決定方法においては、ｄＮＴＰに対
するｄｄＮＴＰのモル比率が約０．０２のヌクレオチド
混合物が使用される。しかし、本発明の方法において
は、ｄｄＮＴＰの量を従来技術の場合より増加させたヌ
クレオチド混合物を用いるにより、比較的短鎖の相補Ｄ
ＮＡ断片を生成させ、これと別にｄｄＮＴＰの量を従来
の場合より減少させたヌクレオチド混合物を用いるによ
り、比較的長鎖の相補ＤＮＡ断片を生成させた後、この
ように製造された相補ＤＮＡ断片を混合して１回の分離
過程を通じて相補ＤＮＡ断片を分子量順に従って分離し
た後、相補ＤＮＡ断片各々の末端の塩基を決定すること
を特徴とする。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ｄｄＮＴＰ鎖終結
法を用いるＤＮＡ配列決定方法及び、これに使用される
キットに関するものである。より詳細には、鎖終結法を
用いるＤＮＡ塩基配列決定方法において、デオキシヌク
レオチドとジデオキシヌクレオチドのモル比率が互い異
なる２種以上のヌクレオチド混合物を各々用いることに
より、相補ＤＮＡ断片を生成させた後、これらを混合し
て１回の分離過程を通じて分子量順に従って分離して末
端の塩基を決定することにより、もっと長鎖のＤＮＡ塩
基配列をより正確に決定する方法と、これに使用される
キットに関するものである。
法を用いるＤＮＡ配列決定方法及び、これに使用される
キットに関するものである。より詳細には、鎖終結法を
用いるＤＮＡ塩基配列決定方法において、デオキシヌク
レオチドとジデオキシヌクレオチドのモル比率が互い異
なる２種以上のヌクレオチド混合物を各々用いることに
より、相補ＤＮＡ断片を生成させた後、これらを混合し
て１回の分離過程を通じて分子量順に従って分離して末
端の塩基を決定することにより、もっと長鎖のＤＮＡ塩
基配列をより正確に決定する方法と、これに使用される
キットに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】現在まで知られたＤＮＡ配列決定のため
の一般の方法は、サンガーのジデオキシヌクレオチド鎖
終結法である。サンガーの方法は、ＤＮＡ重合酵素を用
いることにより、３'位置の炭素に水酸基（−OH）が結
合されたデオキシヌクレオチド（ｄＮＴＰ）を基質とし
て鎖を伸長させ、３'位置の炭素に水酸基（−OH）が結
合されないジデオキシヌクレオチド（ｄｄＮＴＰ）を基
質として鎖伸長反応を終結させる。
の一般の方法は、サンガーのジデオキシヌクレオチド鎖
終結法である。サンガーの方法は、ＤＮＡ重合酵素を用
いることにより、３'位置の炭素に水酸基（−OH）が結
合されたデオキシヌクレオチド（ｄＮＴＰ）を基質とし
て鎖を伸長させ、３'位置の炭素に水酸基（−OH）が結
合されないジデオキシヌクレオチド（ｄｄＮＴＰ）を基
質として鎖伸長反応を終結させる。
【０００３】かかるサンガー法によるＤＮＡ配列決定方
法においては、主形ＤＮＡに相補的であるＤＮＡ断片を
構成する基質として、４種類のｄＮＴＰ即ち、デオキシ
グアノシン−３'−リンサン（ｄＧＴＰ），デオキシア
デノシン−３'−リンサン（ｄＡＴＰ）、デオキシチミ
ジン−３'−リンサン（ｄＴＴＰ）及び、デオキシシチ
ジン−３'−リンサン（ｄＣＴＰ）が使用され、相補Ｄ
ＮＡ断片の重合反応を終結させる基質として、４種類の
ｄｄＮＴＰ即ち、ジデオキシグアノシン−３'−リンサ
ン（ｄｄＧＴＰ），ジデオキシアデノシン−３'−リン
サン（ｄｄＡＴＰ）、ジデオキシチミジン−３'−リン
サン（ｄｄＴＴＰ）及び、ジデオキシシチジン−３'−
リンサン（ｄｄＣＴＰ）が使用される。ｄｄＮＴＰはｄ
ＮＴＰと相違して、３'位置炭素に結合された水酸基の
不存在により、生成中のＤＮＡ断片の末端にｄｄＮＴＰ
が結合される場合には、これ以上のＤＮＡ鎖伸長は起き
ない。
法においては、主形ＤＮＡに相補的であるＤＮＡ断片を
構成する基質として、４種類のｄＮＴＰ即ち、デオキシ
グアノシン−３'−リンサン（ｄＧＴＰ），デオキシア
デノシン−３'−リンサン（ｄＡＴＰ）、デオキシチミ
ジン−３'−リンサン（ｄＴＴＰ）及び、デオキシシチ
ジン−３'−リンサン（ｄＣＴＰ）が使用され、相補Ｄ
ＮＡ断片の重合反応を終結させる基質として、４種類の
ｄｄＮＴＰ即ち、ジデオキシグアノシン−３'−リンサ
ン（ｄｄＧＴＰ），ジデオキシアデノシン−３'−リン
サン（ｄｄＡＴＰ）、ジデオキシチミジン−３'−リン
サン（ｄｄＴＴＰ）及び、ジデオキシシチジン−３'−
リンサン（ｄｄＣＴＰ）が使用される。ｄｄＮＴＰはｄ
ＮＴＰと相違して、３'位置炭素に結合された水酸基の
不存在により、生成中のＤＮＡ断片の末端にｄｄＮＴＰ
が結合される場合には、これ以上のＤＮＡ鎖伸長は起き
ない。
【０００４】従って、サンガー法によるＤＮＡ配列決定
方法においては、末端にｄｄＮＴＰが結合された多様な
長さのＤＮＡ断片が生成される。サンガー法において
は、主形ＤＮＡを構成するヌクレオチド数に相当する数
字の多様な種類の相補ＤＮＡ断片が生成され、これらを
電気泳動法を通じて、分子量順に従って分離した後、各
ＤＮＡ断片の末端塩基を決定することにより、主形ＤＮ
Ａ全体の塩基配列を決定する。
方法においては、末端にｄｄＮＴＰが結合された多様な
長さのＤＮＡ断片が生成される。サンガー法において
は、主形ＤＮＡを構成するヌクレオチド数に相当する数
字の多様な種類の相補ＤＮＡ断片が生成され、これらを
電気泳動法を通じて、分子量順に従って分離した後、各
ＤＮＡ断片の末端塩基を決定することにより、主形ＤＮ
Ａ全体の塩基配列を決定する。
【０００５】しかし、かかるサンガーの方法が便利であ
るにもかかわらず、これまでは、相補ＤＮＡ断片生成反
応の反応進行度の限界に因って、通常５００〜７００塩
基対のＤＮＡしか正確に決定できないという問題があ
る。例えば、人間の相補ＤＮＡは平均２Kb程度なのに、
これを完全に決定するためには、分割して、３回以上の
塩基配列決定過程を通さなければならないので、多くの
時間と努力及び、費用が必要とされる。
るにもかかわらず、これまでは、相補ＤＮＡ断片生成反
応の反応進行度の限界に因って、通常５００〜７００塩
基対のＤＮＡしか正確に決定できないという問題があ
る。例えば、人間の相補ＤＮＡは平均２Kb程度なのに、
これを完全に決定するためには、分割して、３回以上の
塩基配列決定過程を通さなければならないので、多くの
時間と努力及び、費用が必要とされる。
【０００６】また、大規模遺伝体の塩基配列決定の方法
として知られているショッドガン（Ｓｈｏｔｇｕｎ）法
即ち、長鎖のＤＮＡを多数のＤＮＡ断片に分割して塩基
配列を決定した後、これらをコンピューター上で重複部
位を対比して、全体遺伝子の塩基配列を決定する方法に
おいても、1回の配列決定過程で決定できるＤＮＡ断片
の長さをもっと長くさせたら全体ＤＮＡ塩基配列の決定
する時間を短縮することができる。
として知られているショッドガン（Ｓｈｏｔｇｕｎ）法
即ち、長鎖のＤＮＡを多数のＤＮＡ断片に分割して塩基
配列を決定した後、これらをコンピューター上で重複部
位を対比して、全体遺伝子の塩基配列を決定する方法に
おいても、1回の配列決定過程で決定できるＤＮＡ断片
の長さをもっと長くさせたら全体ＤＮＡ塩基配列の決定
する時間を短縮することができる。
【０００７】通常的なサンガーの鎖終結法においては、
ｄＮＴＰに対するｄｄＮＴＰのモル比率が単一なヌクレ
オチド混合物が使用されるため、主形ＤＮＡの２０〜３
０番目の塩基対に対応される比較的短鎖の相補ＤＮＡ断
片と、主形ＤＮＡの６００〜００番目の塩基対に対応さ
れる比較的長鎖の相補ＤＮＡ断片は少なく生成され、主
に主形ＤＮＡの４０〜５００番目の塩基対に対応するＤ
ＮＡ断片が多く生成される。
ｄＮＴＰに対するｄｄＮＴＰのモル比率が単一なヌクレ
オチド混合物が使用されるため、主形ＤＮＡの２０〜３
０番目の塩基対に対応される比較的短鎖の相補ＤＮＡ断
片と、主形ＤＮＡの６００〜００番目の塩基対に対応さ
れる比較的長鎖の相補ＤＮＡ断片は少なく生成され、主
に主形ＤＮＡの４０〜５００番目の塩基対に対応するＤ
ＮＡ断片が多く生成される。
【０００８】従って、比較的短鎖のＤＮＡ断片と、比較
的長鎖のＤＮＡ断片の濃度が低いから、ＤＮＡの中間部
位塩基配列に比して両末端部位の塩基配列は決定しがた
いので、サンガー法によって１回の塩基配列決定を通じ
て決定できるＤＮＡの長さの制限がある。だから、主形
ＤＮＡの両末端部位塩基配列をより正確に決定できるよ
うにして、１回の配列決定を通じて完全に決定できるＤ
ＮＡの長さをより長くできる方法の開発が必要である。
的長鎖のＤＮＡ断片の濃度が低いから、ＤＮＡの中間部
位塩基配列に比して両末端部位の塩基配列は決定しがた
いので、サンガー法によって１回の塩基配列決定を通じ
て決定できるＤＮＡの長さの制限がある。だから、主形
ＤＮＡの両末端部位塩基配列をより正確に決定できるよ
うにして、１回の配列決定を通じて完全に決定できるＤ
ＮＡの長さをより長くできる方法の開発が必要である。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、かかる従来
の問題点を解決するためのもので、その目的は、従来の
サンガー法によるＤＮＡ配列決定方法を改良し、ＤＮＡ
両末端部位の塩基配列を容易に決定できるようにして、
１回の塩基配列決定で、従来の方法より、もっと長鎖の
ＤＮＡ配列が決定できる方法及び、これに使用されるキ
ットを提供するものである。
の問題点を解決するためのもので、その目的は、従来の
サンガー法によるＤＮＡ配列決定方法を改良し、ＤＮＡ
両末端部位の塩基配列を容易に決定できるようにして、
１回の塩基配列決定で、従来の方法より、もっと長鎖の
ＤＮＡ配列が決定できる方法及び、これに使用されるキ
ットを提供するものである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】従来のジデオキシヌクレ
オチド鎖終結法を用いるＤＮＡ配列決定方法において
は、ｄＮＴＰに対するｄｄＮＴＰのモル比率が約０．０
２のヌクレオチド混合物が使用される。従って、従来の
鎖終結法によるＤＮＡ決定にはｄｄＧＴＰ/ｄＧＴＰモ
ル比率が０．０２〜０．０５であり、ｄｄＡＴＰ/ｄＡ
ＴＰモル比率が０．０２〜０．０５８であり、ｄｄＴＴ
Ｐ/ｄＴＴＰモル比率が０．０２〜０．１であり、ｄｄ
ＣＴＰ/ｄＣＴＰモル比率が０．０２〜０．０３３であ
るヌクレオチド混合物が使用されている。
オチド鎖終結法を用いるＤＮＡ配列決定方法において
は、ｄＮＴＰに対するｄｄＮＴＰのモル比率が約０．０
２のヌクレオチド混合物が使用される。従って、従来の
鎖終結法によるＤＮＡ決定にはｄｄＧＴＰ/ｄＧＴＰモ
ル比率が０．０２〜０．０５であり、ｄｄＡＴＰ/ｄＡ
ＴＰモル比率が０．０２〜０．０５８であり、ｄｄＴＴ
Ｐ/ｄＴＴＰモル比率が０．０２〜０．１であり、ｄｄ
ＣＴＰ/ｄＣＴＰモル比率が０．０２〜０．０３３であ
るヌクレオチド混合物が使用されている。
【００１１】本発明の方法においては、ｄｄＮＴＰの量
を従来技術の場合より増加させ、ｄＮＴＰに対するｄｄ
ＮＴＰのモル比率即ち、ｄｄＧＴＰ/ｄＧＴＰのモル比
率が０．０５を超過し、好ましくは０．１以上、より好
ましくは０．１５以上であり、ｄｄＡＴＰ/ｄＡＴＰの
モル比率が０．０５８を超過し、好ましくは０．１１６
以上、より好ましくは０．１７４以上であり、ｄｄＴＴ
Ｐ/ｄＴＴＰのモル比率が０．１を超過し、好ましくは
０．２以上、より好ましくは０．３以上であり、ｄｄＣ
ＴＰ/ｄＣＴＰのモル比率が０．０３３を超過し、好ま
しくは０．０６６以上、より好ましくは０．０９９以上
であるヌクレオチド混合物を用いるにより、比較的短鎖
の相補ＤＮＡ断片を生成させ、これと別にｄｄＮＴＰの
量を従来の場合より減少させたヌクレオチド混合物即
ち、ｄＮＴＰに対するｄｄＮＴＰのモル比率即ち、ｄｄ
ＧＴＰ/ｄＧＴＰのモル比率が０．０２を未満、 好まし
くは０．０１以下、より好ましくは０．００５以下であ
り、ｄｄＡＴＰ/ｄＡＴＰのモル比率が０．０２を未
満、好ましくは０．０１１６以下、より好ましくは０．
００５８以下であり、ｄｄＴＴＰ/ｄＴＴＰのモル比率
が０．０２を未満、好ましくは０．０１５以下、より好
ましくは０．０１以下であり、ｄｄＣＴＰ/ｄＣＴＰの
モル比率が０．０２を未満、好ましくは０．００６６以
下、より好ましくは０．００３３以下であるヌクレオチ
ド混合物を用いるにより、比較的長鎖の相補ＤＮＡ断片
を生成させた後、このように製造された相補ＤＮＡ断片
を混合して１回の分離過程を通じて相補ＤＮＡ断片を分
子量順に従って分離した後、相補ＤＮＡ断片各々の末端
の塩基を決定する。
を従来技術の場合より増加させ、ｄＮＴＰに対するｄｄ
ＮＴＰのモル比率即ち、ｄｄＧＴＰ/ｄＧＴＰのモル比
率が０．０５を超過し、好ましくは０．１以上、より好
ましくは０．１５以上であり、ｄｄＡＴＰ/ｄＡＴＰの
モル比率が０．０５８を超過し、好ましくは０．１１６
以上、より好ましくは０．１７４以上であり、ｄｄＴＴ
Ｐ/ｄＴＴＰのモル比率が０．１を超過し、好ましくは
０．２以上、より好ましくは０．３以上であり、ｄｄＣ
ＴＰ/ｄＣＴＰのモル比率が０．０３３を超過し、好ま
しくは０．０６６以上、より好ましくは０．０９９以上
であるヌクレオチド混合物を用いるにより、比較的短鎖
の相補ＤＮＡ断片を生成させ、これと別にｄｄＮＴＰの
量を従来の場合より減少させたヌクレオチド混合物即
ち、ｄＮＴＰに対するｄｄＮＴＰのモル比率即ち、ｄｄ
ＧＴＰ/ｄＧＴＰのモル比率が０．０２を未満、 好まし
くは０．０１以下、より好ましくは０．００５以下であ
り、ｄｄＡＴＰ/ｄＡＴＰのモル比率が０．０２を未
満、好ましくは０．０１１６以下、より好ましくは０．
００５８以下であり、ｄｄＴＴＰ/ｄＴＴＰのモル比率
が０．０２を未満、好ましくは０．０１５以下、より好
ましくは０．０１以下であり、ｄｄＣＴＰ/ｄＣＴＰの
モル比率が０．０２を未満、好ましくは０．００６６以
下、より好ましくは０．００３３以下であるヌクレオチ
ド混合物を用いるにより、比較的長鎖の相補ＤＮＡ断片
を生成させた後、このように製造された相補ＤＮＡ断片
を混合して１回の分離過程を通じて相補ＤＮＡ断片を分
子量順に従って分離した後、相補ＤＮＡ断片各々の末端
の塩基を決定する。
【００１２】かかる本発明の方法を通じて主形ＤＮＡ両
末端部位の塩基配列をより正確に決定することにより、
従来のサンガー法で配列決定が可能な範囲の４０〜５０
０塩基対範囲より、もっと長鎖ＤＮＡの塩基配列決定が
可能になる。
末端部位の塩基配列をより正確に決定することにより、
従来のサンガー法で配列決定が可能な範囲の４０〜５０
０塩基対範囲より、もっと長鎖ＤＮＡの塩基配列決定が
可能になる。
【００１３】本発明においては、ｄＮＴＰに対するｄｄ
ＮＴＰのモル比率が高いヌクレオチド混合物は、比較的
短鎖のＤＮＡ断片を多く生成させ、ｄＮＴＰに対するｄ
ｄＮＴＰのモル比率が低いヌクレオチド混合物は、比較
的長鎖のＤＮＡ断片を多く生成させるようになり、主形
ＤＮＡの１０〜１、０００塩基対に対応する多様な長さ
の相補ＤＮＡ断片を得ることができる。このように製造
された多様な長さの相補ＤＮＡ断片を混合して、１回の
分離過程を通じて分子量順に従って分離させて相補ＤＮ
Ａ断片の末端塩基を決定する。かかる本発明の方法を通
じて主形ＤＮＡの１０〜１０００塩基対以上まで、より
正確に決定できることによって、もっと長鎖のＤＮＡ配
列決定が可能になる。
ＮＴＰのモル比率が高いヌクレオチド混合物は、比較的
短鎖のＤＮＡ断片を多く生成させ、ｄＮＴＰに対するｄ
ｄＮＴＰのモル比率が低いヌクレオチド混合物は、比較
的長鎖のＤＮＡ断片を多く生成させるようになり、主形
ＤＮＡの１０〜１、０００塩基対に対応する多様な長さ
の相補ＤＮＡ断片を得ることができる。このように製造
された多様な長さの相補ＤＮＡ断片を混合して、１回の
分離過程を通じて分子量順に従って分離させて相補ＤＮ
Ａ断片の末端塩基を決定する。かかる本発明の方法を通
じて主形ＤＮＡの１０〜１０００塩基対以上まで、より
正確に決定できることによって、もっと長鎖のＤＮＡ配
列決定が可能になる。
【００１４】従って、本発明の方法は、サンガー法によ
るＤＮＡ塩基配列決定方法において、ｄＧＴＰに対する
ｄｄＧＴＰのモル比率が０．０５超過、好ましくは０．
０１以上、より好ましくは０．１５以上であり、ｄＡＴ
Ｐに対するｄｄＡＴＰのモル比率が０．０５８超過、好
ましくは０．１１６以上、より好ましくは０．１７４以
上であり、ｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率が
０．１超過、好ましくは０．２以上、より好ましくは
０．３以上であり、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル
比率が０．０３３超過、好ましくは０．０６６以上、よ
り好ましくは０．０９９以上であるヌクレオチド混合物
を製造する段階；ｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比
率が０．０２未満、好ましくは０．０１以下、より好ま
しくは０．００５以下であり、ｄＡＴＰに対するｄｄＡ
ＴＰのモル比率が０．０２未満、好ましくは０．１１６
以下、より好ましくは０．００５８以下であり、ｄＴＴ
Ｐに対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．０２未満、好ま
しくは０．０１５以下、より好ましくは０．０１以下で
あり、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．０
２未満、好ましくは０．００６６以下、より好ましくは
０．００３３以下であるヌクレオチド混合物を製造する
段階；前記ヌクレオチド混合物の各々に塩基配列を決定
しようとするＤＮＡとプライマーを添加して相補ＤＮＡ
断片を生成させる段階；前記で生成された相補ＤＮＡ断
片を混合し、分子量順に従って分離させる段階；また、
前記の分子量順に従って分離させた相補ＤＮＡ断片の末
端に結合された塩基を決定してＤＮＡの塩基配列を認識
する段階を含むことを特徴とする。
るＤＮＡ塩基配列決定方法において、ｄＧＴＰに対する
ｄｄＧＴＰのモル比率が０．０５超過、好ましくは０．
０１以上、より好ましくは０．１５以上であり、ｄＡＴ
Ｐに対するｄｄＡＴＰのモル比率が０．０５８超過、好
ましくは０．１１６以上、より好ましくは０．１７４以
上であり、ｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率が
０．１超過、好ましくは０．２以上、より好ましくは
０．３以上であり、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル
比率が０．０３３超過、好ましくは０．０６６以上、よ
り好ましくは０．０９９以上であるヌクレオチド混合物
を製造する段階；ｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比
率が０．０２未満、好ましくは０．０１以下、より好ま
しくは０．００５以下であり、ｄＡＴＰに対するｄｄＡ
ＴＰのモル比率が０．０２未満、好ましくは０．１１６
以下、より好ましくは０．００５８以下であり、ｄＴＴ
Ｐに対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．０２未満、好ま
しくは０．０１５以下、より好ましくは０．０１以下で
あり、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．０
２未満、好ましくは０．００６６以下、より好ましくは
０．００３３以下であるヌクレオチド混合物を製造する
段階；前記ヌクレオチド混合物の各々に塩基配列を決定
しようとするＤＮＡとプライマーを添加して相補ＤＮＡ
断片を生成させる段階；前記で生成された相補ＤＮＡ断
片を混合し、分子量順に従って分離させる段階；また、
前記の分子量順に従って分離させた相補ＤＮＡ断片の末
端に結合された塩基を決定してＤＮＡの塩基配列を認識
する段階を含むことを特徴とする。
【００１５】本発明のまた他の目的のＤＮＡ配列決定用
キットは、ｄＧＴＰに対する、ｄｄＧＴＰのモル比率が
０．０５超過、好ましくは０．１以上、より好ましくは
０．１５以上であるヌクレオチド混合物を含む溶液が満
たされた密閉容器；ｄＡＴＰに対する、ｄｄＡＴＰのモ
ル比率が０．０５８超過、好ましくは０．１１６以上、
より好ましくは０．１７４以上であるヌクレオチド混合
物を含む溶液が満たされた密閉容器；ｄＴＴＰに対す
る、ｄｄＴＴＰのモル比率が０．１超過、好ましくは
０．２以上、より好ましくは０．３以上のヌクレオチド
混合物を含む溶液が満たされた密閉容器；ｄＣＴＰに対
する、ｄｄＣＴＰのモル比率が０．０３３超過、好まし
くは０．０６６以上、より好ましくは０．０９９以上の
ヌクレオチド混合物を含む溶液が満たされた密閉容器；
また、ｄＧＴＰに対する、ｄｄＧＴＰのモル比率が０．
０２未満、好ましくは０．０１以下、より好ましくは
０．００５以下であるヌクレオチド混合物を含む溶液が
満たされた密閉容器；ｄＡＴＰに対する、ｄｄＡＴＰの
モル比率が０．０２未満、好ましくは０．０１１６以
下、より好ましくは０．００５８以下であるヌクレオチ
ド混合物を含む溶液が満たされた密閉容器；ｄＴＴＰに
対する、ｄｄＴＴＰのモル比率が０．０２未満、好まし
くは０．０１５以下、より好ましくは０．０１以下であ
るヌクレオチド混合物を含む溶液が満たされた密閉容
器；ｄＣＴＰに対する、ｄｄＣＴＰのモル比率が０．０
２未満、好ましくは０．００６６以下、より好ましくは
０．００３３以下であるヌクレオチド混合物を含む溶液
が満たされた８種類の密閉容器で構成される。
キットは、ｄＧＴＰに対する、ｄｄＧＴＰのモル比率が
０．０５超過、好ましくは０．１以上、より好ましくは
０．１５以上であるヌクレオチド混合物を含む溶液が満
たされた密閉容器；ｄＡＴＰに対する、ｄｄＡＴＰのモ
ル比率が０．０５８超過、好ましくは０．１１６以上、
より好ましくは０．１７４以上であるヌクレオチド混合
物を含む溶液が満たされた密閉容器；ｄＴＴＰに対す
る、ｄｄＴＴＰのモル比率が０．１超過、好ましくは
０．２以上、より好ましくは０．３以上のヌクレオチド
混合物を含む溶液が満たされた密閉容器；ｄＣＴＰに対
する、ｄｄＣＴＰのモル比率が０．０３３超過、好まし
くは０．０６６以上、より好ましくは０．０９９以上の
ヌクレオチド混合物を含む溶液が満たされた密閉容器；
また、ｄＧＴＰに対する、ｄｄＧＴＰのモル比率が０．
０２未満、好ましくは０．０１以下、より好ましくは
０．００５以下であるヌクレオチド混合物を含む溶液が
満たされた密閉容器；ｄＡＴＰに対する、ｄｄＡＴＰの
モル比率が０．０２未満、好ましくは０．０１１６以
下、より好ましくは０．００５８以下であるヌクレオチ
ド混合物を含む溶液が満たされた密閉容器；ｄＴＴＰに
対する、ｄｄＴＴＰのモル比率が０．０２未満、好まし
くは０．０１５以下、より好ましくは０．０１以下であ
るヌクレオチド混合物を含む溶液が満たされた密閉容
器；ｄＣＴＰに対する、ｄｄＣＴＰのモル比率が０．０
２未満、好ましくは０．００６６以下、より好ましくは
０．００３３以下であるヌクレオチド混合物を含む溶液
が満たされた８種類の密閉容器で構成される。
【００１６】即ち、本発明のＤＮＡ塩基配列決定用キッ
トは緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素とｄＧＴＰ、
ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＧＴＰのモル数
に比して０.０５倍超過し、好ましくは０.１倍以上、よ
り好ましくは０.１５倍以上の量のｄｄＧＴＰからなる
ヌクレオチド混合物が満たされた密閉容器；緩衝溶液、
安定化剤、ＤＮＡ重合酵素とｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴ
ＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＡＴＰのモル数に比して０.０
５８倍超過し、好ましくは０.１１６倍以上、より好ま
しくは０.１７４倍以上の量のｄｄＡＴＰからなるヌク
レオチド混合物が満たされた密閉容器；緩衝溶液、安定
化剤、ＤＮＡ重合酵素とｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴ
Ｐ、ｄＣＴＰ及び、ｄＴＴＰのモル数に比して０.１倍
超過し、好ましくは０.２倍以上、より好ましくは０.３
倍以上の量のｄｄＴＴＰからなるヌクレオチド混合物が
満たされた密閉容器；緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合
酵素とｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、
ｄＣＴＰのモル数に比して０.０３３倍超過し、好まし
くは０.０６６倍以上、より好ましくは０.０９９倍以上
の量のｄｄＣＴＰからなるヌクレオチド混合物が満たさ
れた密閉容器と緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と
ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＧＴ
Ｐのモル数に比して０.０２倍未満、好ましくは０.０１
倍以下、より好ましくは０.００５倍以下の量のｄｄＧ
ＴＰからなるヌクレオチド混合物が満たされた密閉容
器；緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素とｄＧＴＰ、
ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＡＴＰのモル数
に比して０.０２倍未満、好ましくは０.０１１６倍以
下、より好ましくは０.００５８倍以下の量のｄｄＡＴ
Ｐからなるヌクレオチド混合物が満たされた密閉容器；
緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素とｄＧＴＰ、ｄＡ
ＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＴＴＰのモル数に比
して０.０２倍未満、好ましくは０.０１５倍以下、より
好ましくは０.０１倍以下の量のｄｄＴＴＰからなるヌ
クレオチド混合物が満たされた密閉容器；また、緩衝溶
液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素とｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、
ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＣＴＰのモル数に比して
０.０２倍未満、好ましくは０.００６６倍以下、より好
ましくは０.００３３倍以下の量のｄｄＣＴＰからなる
ヌクレオチド混合物が満たされた密閉容器で構成され、
混合比率が相違なヌクレオチド混合物が満たされた８種
類の密閉容器で製造される。
トは緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素とｄＧＴＰ、
ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＧＴＰのモル数
に比して０.０５倍超過し、好ましくは０.１倍以上、よ
り好ましくは０.１５倍以上の量のｄｄＧＴＰからなる
ヌクレオチド混合物が満たされた密閉容器；緩衝溶液、
安定化剤、ＤＮＡ重合酵素とｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴ
ＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＡＴＰのモル数に比して０.０
５８倍超過し、好ましくは０.１１６倍以上、より好ま
しくは０.１７４倍以上の量のｄｄＡＴＰからなるヌク
レオチド混合物が満たされた密閉容器；緩衝溶液、安定
化剤、ＤＮＡ重合酵素とｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴ
Ｐ、ｄＣＴＰ及び、ｄＴＴＰのモル数に比して０.１倍
超過し、好ましくは０.２倍以上、より好ましくは０.３
倍以上の量のｄｄＴＴＰからなるヌクレオチド混合物が
満たされた密閉容器；緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合
酵素とｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、
ｄＣＴＰのモル数に比して０.０３３倍超過し、好まし
くは０.０６６倍以上、より好ましくは０.０９９倍以上
の量のｄｄＣＴＰからなるヌクレオチド混合物が満たさ
れた密閉容器と緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と
ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＧＴ
Ｐのモル数に比して０.０２倍未満、好ましくは０.０１
倍以下、より好ましくは０.００５倍以下の量のｄｄＧ
ＴＰからなるヌクレオチド混合物が満たされた密閉容
器；緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素とｄＧＴＰ、
ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＡＴＰのモル数
に比して０.０２倍未満、好ましくは０.０１１６倍以
下、より好ましくは０.００５８倍以下の量のｄｄＡＴ
Ｐからなるヌクレオチド混合物が満たされた密閉容器；
緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素とｄＧＴＰ、ｄＡ
ＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＴＴＰのモル数に比
して０.０２倍未満、好ましくは０.０１５倍以下、より
好ましくは０.０１倍以下の量のｄｄＴＴＰからなるヌ
クレオチド混合物が満たされた密閉容器；また、緩衝溶
液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素とｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、
ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＣＴＰのモル数に比して
０.０２倍未満、好ましくは０.００６６倍以下、より好
ましくは０.００３３倍以下の量のｄｄＣＴＰからなる
ヌクレオチド混合物が満たされた密閉容器で構成され、
混合比率が相違なヌクレオチド混合物が満たされた８種
類の密閉容器で製造される。
【００１７】
【発明の実施の形態】以下、実施例に基づいて本発明の
構成をより具体的に説明するが、本発明の普通の範囲が
下記実施例の内容に限定されるものではない。
構成をより具体的に説明するが、本発明の普通の範囲が
下記実施例の内容に限定されるものではない。
【００１８】実施例１ ３μＭのｄＧＴＰ，３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄ
ＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、４５０ｎＭのｄｄＧＴ
Ｐを混合してｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比率が
０．１５であるヌクレオチド混合物を製造し、３μＭの
ｄＧＴＰ，３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、
３０μＭのｄＣＴＰと、５．２６２μＭのｄｄＡＴＰを
混合してｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が０．
１７４であるヌクレオチド混合物を製造し、３μＭのｄ
ＧＴＰ，３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３
０μＭのｄＣＴＰと、９．０６μＭのｄｄＴＴＰを混合
してｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．３で
あるヌクレオチド混合物を製造し、３μＭのｄＧＴＰ，
３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭの
ｄＣＴＰと、３μＭのｄｄＣＴＰを混合してｄＣＴＰに
対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．０９９であるヌクレ
オチド混合物を製造した。
ＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、４５０ｎＭのｄｄＧＴ
Ｐを混合してｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比率が
０．１５であるヌクレオチド混合物を製造し、３μＭの
ｄＧＴＰ，３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、
３０μＭのｄＣＴＰと、５．２６２μＭのｄｄＡＴＰを
混合してｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が０．
１７４であるヌクレオチド混合物を製造し、３μＭのｄ
ＧＴＰ，３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３
０μＭのｄＣＴＰと、９．０６μＭのｄｄＴＴＰを混合
してｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．３で
あるヌクレオチド混合物を製造し、３μＭのｄＧＴＰ，
３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭの
ｄＣＴＰと、３μＭのｄｄＣＴＰを混合してｄＣＴＰに
対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．０９９であるヌクレ
オチド混合物を製造した。
【００１９】３μＭのｄＧＴＰ，３０μＭのｄＡＴＰ、
３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、１５ｎＭ
のｄｄＧＴＰを混合してｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰの
モル比率が０．００５であるヌクレオチド混合物を製造
し、３μＭのｄＧＴＰ，３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭ
のｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、１７５．４ｎＭの
ｄｄＡＴＰを混合してｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモ
ル比率が０．００５８であるヌクレオチド混合物を製造
し、３μＭのｄＧＴＰ，３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭ
のｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、０．３０２μＭの
ｄｄＴＴＰを混合してｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモ
ル比率が０．０１であるヌクレオチド混合物を製造し、
３μＭのｄＧＴＰ，３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄ
ＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、０．１μＭのｄｄＣＴ
Ｐを混合してｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が
０．００３３であるヌクレオチド混合物を製造した。
３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、１５ｎＭ
のｄｄＧＴＰを混合してｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰの
モル比率が０．００５であるヌクレオチド混合物を製造
し、３μＭのｄＧＴＰ，３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭ
のｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、１７５．４ｎＭの
ｄｄＡＴＰを混合してｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモ
ル比率が０．００５８であるヌクレオチド混合物を製造
し、３μＭのｄＧＴＰ，３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭ
のｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、０．３０２μＭの
ｄｄＴＴＰを混合してｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモ
ル比率が０．０１であるヌクレオチド混合物を製造し、
３μＭのｄＧＴＰ，３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄ
ＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、０．１μＭのｄｄＣＴ
Ｐを混合してｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が
０．００３３であるヌクレオチド混合物を製造した。
【００２０】このように製造された混合物に、１０倍に
希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、Ｔｏ
ｐＴＭＤＮＡ重合酵素、プライマー及び、主形ＤＮＡを
添加して、相補ＤＮＡ断片生成反応を進行させた後、生
成された相補ＤＮＡ断片を分子量順に従って分離して、
末端塩基を決定した。主形ＤＮＡとしてはＭ１３ Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉａｌ Ｆｏｒｗａｒｄ １７ｍｅｒ（５’-
ｇｔａａａａｃｇａｃｇｇｃｃａｇｔ、３０ｐｍｏｌｅ
ｓ）、及び、蒸留水を加えて相補ＤＮＡ断片生成反応混
合物の総量を４０μｇで製造した。相補ＤＮＡ断片の生
成反応を順次的に９４℃で２４０秒、９４℃で３０秒、
５０℃で３０秒、７２℃で６０秒を３０回繰り返してか
ら、最後に７２℃で３００秒間もう１回反応を進行させ
た。終結溶液（２．５％、ブロムフェノブール、２．５
％キシレンシアノ-ル、１０ｍＭ ＮａＯＨ）を４０μl
加えて相補ＤＮＡ断片の生成反応を終結させた。このよ
うに製造された相補ＤＮＡ断片を８Ｍの尿素(Urea)、６
％アクリルアミドゲルを使用して電気泳動法で分子量順
に従って分離させた後、銀染色法(sｉｌｖｅｒｓｔａｒ
ｓｔａｉｎｉｎｇ)で塩基配列を決定した。
希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、Ｔｏ
ｐＴＭＤＮＡ重合酵素、プライマー及び、主形ＤＮＡを
添加して、相補ＤＮＡ断片生成反応を進行させた後、生
成された相補ＤＮＡ断片を分子量順に従って分離して、
末端塩基を決定した。主形ＤＮＡとしてはＭ１３ Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉａｌ Ｆｏｒｗａｒｄ １７ｍｅｒ（５’-
ｇｔａａａａｃｇａｃｇｇｃｃａｇｔ、３０ｐｍｏｌｅ
ｓ）、及び、蒸留水を加えて相補ＤＮＡ断片生成反応混
合物の総量を４０μｇで製造した。相補ＤＮＡ断片の生
成反応を順次的に９４℃で２４０秒、９４℃で３０秒、
５０℃で３０秒、７２℃で６０秒を３０回繰り返してか
ら、最後に７２℃で３００秒間もう１回反応を進行させ
た。終結溶液（２．５％、ブロムフェノブール、２．５
％キシレンシアノ-ル、１０ｍＭ ＮａＯＨ）を４０μl
加えて相補ＤＮＡ断片の生成反応を終結させた。このよ
うに製造された相補ＤＮＡ断片を８Ｍの尿素(Urea)、６
％アクリルアミドゲルを使用して電気泳動法で分子量順
に従って分離させた後、銀染色法(sｉｌｖｅｒｓｔａｒ
ｓｔａｉｎｉｎｇ)で塩基配列を決定した。
【００２１】実施例２ １０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣ
ｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、5Ｍべタイン(Betain)安定化
剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３
０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄ
ＣＴＰと、４５０ｎＭのｄｄＧＴＰを混合して製造した
ｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．１５であ
るヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に
希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、Ｔｏ
ｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭの
ｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰ
と、５．２６２ｎＭのｄｄＡＴＰを混合して製造したｄ
ＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が０．１７４であ
るヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に
希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、Ｔｏ
ｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭの
ｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰ
と、９．０６μＭのｄｄＴＴＰを混合して製造したｄＴ
ＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．３であるヌク
レオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に希釈さ
せた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ Ｍｇ
Ｃｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤ
ＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴ
Ｐ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、３μ
ＭｄｄＣＴＰを混合して製造したｄＣＴＰに対するｄｄ
ＣＴＰのモル比率が０．１であるヌクレオチド混合物を
密閉容器に満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５
００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべ
タイン(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、
３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄ
ＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、１５ｎＭのｄｄＧＴＰ
を混合して製造したｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル
比率が０．００５であるヌクレオチド混合物を密閉容器
に満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ
トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Bet
ain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄ
ＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３
０μＭのｄＣＴＰと、１７５．４ｎＭのｄｄＡＴＰを混
合して製造したｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率
が０．００５８であるヌクレオチド混合物を密閉容器に
満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ ト
リス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betai
n)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧ
ＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０
μＭのｄＣＴＰと、０．３０２μＭｄｄＴＴＰを混合し
て製造したｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率が
０．０１であるヌクレオチド混合物を密閉容器に満たし
て；また、１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ ト
リス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betai
n)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧ
ＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０
μＭのｄＣＴＰと、０．１μＭｄｄＣＴＰを混合して製
造したｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．０
０３３であるヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして
８種類の密閉容器で構成された本発明のＤＮＡ塩基配列
決定キットを製作した。
ｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、5Ｍべタイン(Betain)安定化
剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３
０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄ
ＣＴＰと、４５０ｎＭのｄｄＧＴＰを混合して製造した
ｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．１５であ
るヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に
希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、Ｔｏ
ｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭの
ｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰ
と、５．２６２ｎＭのｄｄＡＴＰを混合して製造したｄ
ＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が０．１７４であ
るヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に
希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、Ｔｏ
ｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭの
ｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰ
と、９．０６μＭのｄｄＴＴＰを混合して製造したｄＴ
ＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．３であるヌク
レオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に希釈さ
せた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ Ｍｇ
Ｃｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤ
ＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴ
Ｐ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、３μ
ＭｄｄＣＴＰを混合して製造したｄＣＴＰに対するｄｄ
ＣＴＰのモル比率が０．１であるヌクレオチド混合物を
密閉容器に満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５
００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべ
タイン(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、
３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄ
ＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、１５ｎＭのｄｄＧＴＰ
を混合して製造したｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル
比率が０．００５であるヌクレオチド混合物を密閉容器
に満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ
トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Bet
ain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄ
ＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３
０μＭのｄＣＴＰと、１７５．４ｎＭのｄｄＡＴＰを混
合して製造したｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率
が０．００５８であるヌクレオチド混合物を密閉容器に
満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ ト
リス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betai
n)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧ
ＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０
μＭのｄＣＴＰと、０．３０２μＭｄｄＴＴＰを混合し
て製造したｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率が
０．０１であるヌクレオチド混合物を密閉容器に満たし
て；また、１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ ト
リス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betai
n)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧ
ＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０
μＭのｄＣＴＰと、０．１μＭｄｄＣＴＰを混合して製
造したｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．０
０３３であるヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして
８種類の密閉容器で構成された本発明のＤＮＡ塩基配列
決定キットを製作した。
【００２２】このように製造されたＤＮＡ決定キット各
々の密閉容器に主形ＤＮＡとしてはｐＵＣ１９プラスミ
ドＤＮＡ１．５μｇ、プライマーとしてはＭ１３ Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉａｌ Ｆｏｒｗａｒｄ １７ｍｅｒ（５’-
ｇｔａａａａｃｇａｃｇｇｃｃａｇｔ、３０ｐｍｏｌｅ
ｓ）、及び蒸留水を加えて４０μｇの相補ＤＮＡ断片生
成反応用混合物を製造した。このように製造された混合
物を実施例１の方法に従って反応させ、相補ＤＮＡ断片
を生成させ、これらを混合して塩基配列を決定した。
々の密閉容器に主形ＤＮＡとしてはｐＵＣ１９プラスミ
ドＤＮＡ１．５μｇ、プライマーとしてはＭ１３ Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉａｌ Ｆｏｒｗａｒｄ １７ｍｅｒ（５’-
ｇｔａａａａｃｇａｃｇｇｃｃａｇｔ、３０ｐｍｏｌｅ
ｓ）、及び蒸留水を加えて４０μｇの相補ＤＮＡ断片生
成反応用混合物を製造した。このように製造された混合
物を実施例１の方法に従って反応させ、相補ＤＮＡ断片
を生成させ、これらを混合して塩基配列を決定した。
【００２３】実施例３ １０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣ
ｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化
剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３
０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄ
ＣＴＰと、４５０ｎＭのｄｄＧＴＰを混合して製造した
ｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．１５であ
るヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に
希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、Ｔｏ
ｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭの
ｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰ
と、５．２６２ｎＭのｄｄＡＴＰを混合して製造したｄ
ＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が０．１７４であ
るヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に
希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、Ｔｏ
ｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭの
ｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰ
と、９．０６μＭのｄｄＴＴＰを混合して製造したｄＴ
ＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．３であるヌク
レオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に希釈さ
せた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ Ｍｇ
Ｃｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤ
ＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴ
Ｐ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、３μ
ＭｄｄＣＴＰを混合して製造したｄＣＴＰに対するｄｄ
ＣＴＰのモル比率が０．１であるヌクレオチド混合物を
密閉容器に満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５
００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべ
タイン(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、
３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄ
ＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、１５ｎＭのｄｄＧＴＰ
がを混合して製造したｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモ
ル比率が０．００５であるヌクレオチド混合物を密閉容
器に満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍ
Ｍ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン
(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭ
のｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴ
Ｐ、３０μＭのｄＣＴＰと、１７５．４ｎＭのｄｄＡＴ
Ｐを混合して製造したｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモ
ル比率が０．００５８であるヌクレオチド混合物を密閉
容器に満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００
ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイ
ン(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μ
ＭのｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴ
Ｐ、３０μＭのｄＣＴＰと、０．３０２μＭｄｄＴＴＰ
を混合して製造したｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル
比率が０．０１であるヌクレオチド混合物を密閉容器に
満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ ト
リス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betai
n)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧ
ＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０
μＭのｄＣＴＰと、０．１μＭｄｄＣＴＰを混合して製
造したｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．０
０３３であるヌクレオチド混合物を密閉容器に満たし
て；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-
ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安
定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴ
Ｐ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μ
ＭのｄＣＴＰと、１５０ｎＭのｄｄＧＴＰを混合して製
造したｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．０
５であるヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして；１
０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ,
20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、
ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μ
ＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴ
Ｐと、１．７５４μＭのｄｄＡＴＰを混合して製造した
ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が０．０５８で
あるヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍
に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20
ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、Ｔ
ｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭ
のｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰ
と、３．０２μＭのｄｄＴＴＰを混合して製造したｄＴ
ＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．１であるヌク
レオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に希釈さ
せた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ Ｍｇ
Ｃｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤ
ＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴ
Ｐ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、１μ
ＭのｄｄＣＴＰを混合して製造したｄＣＴＰに対するｄ
ｄＣＴＰのモル比率が０．０３３であるヌクレオチド混
合物を密閉容器に満たして１２種類の密閉容器で構成さ
れる本発明のＤＮＡ塩基配列決定キットを製作した。
ｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化
剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３
０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄ
ＣＴＰと、４５０ｎＭのｄｄＧＴＰを混合して製造した
ｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．１５であ
るヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に
希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、Ｔｏ
ｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭの
ｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰ
と、５．２６２ｎＭのｄｄＡＴＰを混合して製造したｄ
ＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が０．１７４であ
るヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に
希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、Ｔｏ
ｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭの
ｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰ
と、９．０６μＭのｄｄＴＴＰを混合して製造したｄＴ
ＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．３であるヌク
レオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に希釈さ
せた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ Ｍｇ
Ｃｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤ
ＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴ
Ｐ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、３μ
ＭｄｄＣＴＰを混合して製造したｄＣＴＰに対するｄｄ
ＣＴＰのモル比率が０．１であるヌクレオチド混合物を
密閉容器に満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５
００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべ
タイン(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、
３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄ
ＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、１５ｎＭのｄｄＧＴＰ
がを混合して製造したｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモ
ル比率が０．００５であるヌクレオチド混合物を密閉容
器に満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍ
Ｍ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン
(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭ
のｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴ
Ｐ、３０μＭのｄＣＴＰと、１７５．４ｎＭのｄｄＡＴ
Ｐを混合して製造したｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモ
ル比率が０．００５８であるヌクレオチド混合物を密閉
容器に満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００
ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイ
ン(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μ
ＭのｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴ
Ｐ、３０μＭのｄＣＴＰと、０．３０２μＭｄｄＴＴＰ
を混合して製造したｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル
比率が０．０１であるヌクレオチド混合物を密閉容器に
満たして；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ ト
リス-ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betai
n)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧ
ＴＰ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０
μＭのｄＣＴＰと、０．１μＭｄｄＣＴＰを混合して製
造したｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．０
０３３であるヌクレオチド混合物を密閉容器に満たし
て；１０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-
ＨＣｌ, 20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安
定化剤、ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴ
Ｐ、３０μＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μ
ＭのｄＣＴＰと、１５０ｎＭのｄｄＧＴＰを混合して製
造したｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．０
５であるヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして；１
０倍に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ,
20ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、
ＴｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μ
ＭのｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴ
Ｐと、１．７５４μＭのｄｄＡＴＰを混合して製造した
ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が０．０５８で
あるヌクレオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍
に希釈させた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20
ｍＭ ＭｇＣｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、Ｔ
ｏｐＴＭＤＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭ
のｄＡＴＰ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰ
と、３．０２μＭのｄｄＴＴＰを混合して製造したｄＴ
ＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．１であるヌク
レオチド混合物を密閉容器に満たして；１０倍に希釈さ
せた緩衝溶液(５００ｍＭ トリス-ＨＣｌ, 20ｍＭ Ｍｇ
Ｃｌ2)、 5Ｍべタイン(Betain)安定化剤、ＴｏｐＴＭＤ
ＮＡ重合酵素、３μＭのｄＧＴＰ、３０μＭのｄＡＴ
Ｐ、３０μＭのｄＴＴＰ、３０μＭのｄＣＴＰと、１μ
ＭのｄｄＣＴＰを混合して製造したｄＣＴＰに対するｄ
ｄＣＴＰのモル比率が０．０３３であるヌクレオチド混
合物を密閉容器に満たして１２種類の密閉容器で構成さ
れる本発明のＤＮＡ塩基配列決定キットを製作した。
【００２４】このように製造されたＤＮＡ決定キット各
々の密閉容器に主形ＤＮＡとしてはｐＵＣ１９プラスミ
ドＤＮＡ１．５μｇ、プライマーとしてはＭ１３ Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉａｌ Ｆｏｒｗａｒｄ １７ｍｅｒ（５’-
ｇｔａａａａｃｇａｃｇｇｃｃａｇｔ、３０ｐｍｏｌｅ
ｓ）、及び蒸留水を加えて４０μｇの相補ＤＮＡ断片生
成反応用混合物を製造した。このように製造された混合
物を実施例１の方法に従って反応させて相補ＤＮＡ断片
を生成させ、これらを混合して塩基配列を決定した。
々の密閉容器に主形ＤＮＡとしてはｐＵＣ１９プラスミ
ドＤＮＡ１．５μｇ、プライマーとしてはＭ１３ Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉａｌ Ｆｏｒｗａｒｄ １７ｍｅｒ（５’-
ｇｔａａａａｃｇａｃｇｇｃｃａｇｔ、３０ｐｍｏｌｅ
ｓ）、及び蒸留水を加えて４０μｇの相補ＤＮＡ断片生
成反応用混合物を製造した。このように製造された混合
物を実施例１の方法に従って反応させて相補ＤＮＡ断片
を生成させ、これらを混合して塩基配列を決定した。
【００２５】図１はｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル
比率が０.０５であり、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰの
モル比率が０．０５８であり、 ｄＴＴＰに対するｄｄ
ＴＴＰのモル比率が０．１であり、ｄＣＴＰに対するｄ
ｄＣＴＰのモル比率が０．０３３のヌクレオチド混合物
で製造された配列決定キットを使用して生成させた相補
ＤＮＡ断片を電気泳動法で分離させた結果として、４０
~５００塩基対に対応するＤＮＡ断片を見ることができ
る。
比率が０.０５であり、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰの
モル比率が０．０５８であり、 ｄＴＴＰに対するｄｄ
ＴＴＰのモル比率が０．１であり、ｄＣＴＰに対するｄ
ｄＣＴＰのモル比率が０．０３３のヌクレオチド混合物
で製造された配列決定キットを使用して生成させた相補
ＤＮＡ断片を電気泳動法で分離させた結果として、４０
~５００塩基対に対応するＤＮＡ断片を見ることができ
る。
【００２６】図２はｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル
比率が０.１５であり、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰの
モル比率が０．１７４であり、ｄＴＴＰに対するｄｄＴ
ＴＰのモル比率が０．３であり、ｄＣＴＰに対するｄｄ
ＣＴＰのモル比率が０.１であるヌクレオチド混合物で
製造された配列決定キットを使用して生成させた相補Ｄ
ＮＡ断片を電気泳動法で分離させた結果として、２０~
３００塩基対に対応するＤＮＡ断片を見ることができ
る。
比率が０.１５であり、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰの
モル比率が０．１７４であり、ｄＴＴＰに対するｄｄＴ
ＴＰのモル比率が０．３であり、ｄＣＴＰに対するｄｄ
ＣＴＰのモル比率が０.１であるヌクレオチド混合物で
製造された配列決定キットを使用して生成させた相補Ｄ
ＮＡ断片を電気泳動法で分離させた結果として、２０~
３００塩基対に対応するＤＮＡ断片を見ることができ
る。
【００２７】図３はｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル
比率が０.００５であり、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰ
のモル比率が０．００５８であり、ｄＴＴＰに対するｄ
ｄＴＴＰのモル比率が０．０１であり、ｄＣＴＰに対す
るｄｄＣＴＰのモル比率が０.００３３であるヌクレオ
チド混合物で製造された配列決定キットを使用して生成
させた相補ＤＮＡ断片を電気泳動法で分離させた結果と
して、１００~１、０００塩基対に対応するＤＮＡ断片
を見ることができる。
比率が０.００５であり、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰ
のモル比率が０．００５８であり、ｄＴＴＰに対するｄ
ｄＴＴＰのモル比率が０．０１であり、ｄＣＴＰに対す
るｄｄＣＴＰのモル比率が０.００３３であるヌクレオ
チド混合物で製造された配列決定キットを使用して生成
させた相補ＤＮＡ断片を電気泳動法で分離させた結果と
して、１００~１、０００塩基対に対応するＤＮＡ断片
を見ることができる。
【００２８】図４は図１~図３の反応物を混合して生成
させた相補ＤＮＡ断片を電気泳動で分離させた結果とし
て２０~１、０００塩基対に対応するＤＮＡ断片を見る
ことができる。
させた相補ＤＮＡ断片を電気泳動で分離させた結果とし
て２０~１、０００塩基対に対応するＤＮＡ断片を見る
ことができる。
【００２９】図５は図２と図３の反応物を混合して生成
させた相補ＤＮＡ断片を電気泳動で分離させた結果とし
て、２０~１、０００塩基対に対応するＤＮＡ断片を見
ることができる。
させた相補ＤＮＡ断片を電気泳動で分離させた結果とし
て、２０~１、０００塩基対に対応するＤＮＡ断片を見
ることができる。
【００３０】
【発明の効果】以上説明したように、本発明の方法及び
キットを使用すると、１０~１、０００塩基対を有する
ＤＮＡの塩基配列を容易に決定できるので、１回の塩基
配列決定を通じて従来の方法に比して、もっと長鎖のＤ
ＮＡ塩基配列の決定ができ得る。
キットを使用すると、１０~１、０００塩基対を有する
ＤＮＡの塩基配列を容易に決定できるので、１回の塩基
配列決定を通じて従来の方法に比して、もっと長鎖のＤ
ＮＡ塩基配列の決定ができ得る。
【図１】 ｄＮＴＰに対するｄｄＮＴＰのモル比率即
ち、ｄｄＧＴＰ/ｄＧＴＰが０．０５であり、ｄｄＡＴ
Ｐ/ｄＡＴＰが０．０５８であり、ｄｄＴＴＰ/ｄＴＴＰ
が０．１であり、ｄｄＣＴＰ/ｄＣＴＰが０．０３３で
あるヌクレオチド混合物を使用して生成させた相補ＤＮ
Ａ断片を電気泳動法で分離した結果である。
ち、ｄｄＧＴＰ/ｄＧＴＰが０．０５であり、ｄｄＡＴ
Ｐ/ｄＡＴＰが０．０５８であり、ｄｄＴＴＰ/ｄＴＴＰ
が０．１であり、ｄｄＣＴＰ/ｄＣＴＰが０．０３３で
あるヌクレオチド混合物を使用して生成させた相補ＤＮ
Ａ断片を電気泳動法で分離した結果である。
【図２】 ｄＮＴＰに対するｄｄＮＴＰのモル比率即
ち、ｄｄＧＴＰ/ｄＧＴＰが０．１５であり、ｄｄＡＴ
Ｐ/ｄＡＴＰが０．１７４であり、ｄｄＴＴＰ/ｄＴＴＰ
が０．３であり、ｄｄＣＴＰ/ｄＣＴＰが０．０９９で
あるヌクレオチド混合物を使用して生成させた相補ＤＮ
Ａ断片を電気泳動法で分離した結果である。
ち、ｄｄＧＴＰ/ｄＧＴＰが０．１５であり、ｄｄＡＴ
Ｐ/ｄＡＴＰが０．１７４であり、ｄｄＴＴＰ/ｄＴＴＰ
が０．３であり、ｄｄＣＴＰ/ｄＣＴＰが０．０９９で
あるヌクレオチド混合物を使用して生成させた相補ＤＮ
Ａ断片を電気泳動法で分離した結果である。
【図３】 ｄＮＴＰに対するｄｄＮＴＰのモル比率即
ち、ｄｄＧＴＰ/ｄＧＴＰが０．００５であり、ｄｄＡ
ＴＰ/ｄＡＴＰが０．００５８であり、ｄｄＴＴＰ/ｄＴ
ＴＰが０．０１であり、ｄｄＣＴＰ/ｄＣＴＰが０．０
０３３であるヌクレオチド混合物を使用して生成させた
相補ＤＮＡ断片を電気泳動法で分離した結果である。
ち、ｄｄＧＴＰ/ｄＧＴＰが０．００５であり、ｄｄＡ
ＴＰ/ｄＡＴＰが０．００５８であり、ｄｄＴＴＰ/ｄＴ
ＴＰが０．０１であり、ｄｄＣＴＰ/ｄＣＴＰが０．０
０３３であるヌクレオチド混合物を使用して生成させた
相補ＤＮＡ断片を電気泳動法で分離した結果である。
【図４】 前記図１~図３の場合で生成された相補ＤＮ
Ａ断片を混合して電気泳動法で分離させた結果である。
Ａ断片を混合して電気泳動法で分離させた結果である。
【図５】 前記図２、図３の場合で生成された相補ＤＮ
Ａ断片を混合して電気泳動法で分離させた結果である。
Ａ断片を混合して電気泳動法で分離させた結果である。
Claims (24)
- 【請求項１】 ジデオキシヌクレオチド鎖終結法を用い
るＤＮＡ塩基配列決定方法において、ｄＧＴＰに対する
ｄｄＧＴＰのモル比率が０．０５を超過するヌクレオチ
ド混合物 、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が
０．０５８を超過するヌクレオチド混合物、 ｄＴＴＰ
に対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．１を超過するヌク
レオチド混合物、 ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル
比率が０．０３３を超過するヌクレオチド混合物と、ｄ
ＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．０２未満の
ヌクレオチド混合物、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモ
ル比率が０．０２未満のヌクレオチド混合物、ｄＴＴＰ
に対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．０２未満のヌクレ
オチド混合物、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率
が０．０２未満のヌクレオチド混合物を含むＤＮＡ断片
生成反応溶液を製造する段階；前記相補ＤＮＡ断片生成
反応溶液の各々に塩基配列を決定しようとするＤＮＡ
と、プライマーを各々添加して、相補ＤＮＡ断片を生成
させる段階；前記で生成された相補ＤＮＡ断片を各ヌク
レオチド種類別に混合して、分子量順に従って分離させ
る段階；また、前記の分子量順に従って分離された相補
ＤＮＡ断片の末端に結合された塩基を決定して、核酸の
塩基配列を認識する段階を含むことを特徴とする、ＤＮ
Ａ塩基配列決定方法。 - 【請求項２】 前記ヌクレオチド混合物が、各々ｄＧＴ
Ｐに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．１以上のヌクレ
オチド混合物、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率
が０．１１６以上のヌクレオチド混合物 、ｄＴＴＰに
対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．２以上のヌクレオチ
ド混合物、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が
０．０６６以上のヌクレオチド混合物と、ｄＧＴＰに対
するｄｄＧＴＰのモル比率が０．０１以下のヌクレオチ
ド混合物、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が
０．０１１６以下のヌクレオチド混合物、ｄＴＴＰに対
するｄｄＴＴＰのモル比率が０．０１５以下のヌクレオ
チド混合物、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が
０．００６６以下のヌクレオチド混合物であることを特
徴とする、請求項１記載のＤＮＡ塩基配列決定方法。 - 【請求項３】 前記ヌクレオチド混合物が、各々ｄＧＴ
Ｐに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．１５以上のヌク
レオチド混合物、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比
率が０．１７４以上のヌクレオチド混合物 、ｄＴＴＰ
に対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．３以上のヌクレオ
チド混合物、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が
０．０９９以上のヌクレオチド混合物と、ｄＧＴＰに対
するｄｄＧＴＰのモル比率が０．００５以下のヌクレオ
チド混合物、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が
０．００５８以下のヌクレオチド混合物、 ｄＴＴＰに
対するｄｄＴＴＰのモル比率が０．０１以下のヌクレオ
チド混合物、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が
０．００３３以下のヌクレオチド混合物であることを特
徴とする、請求項１記載のＤＮＡ塩基配列決定方法。 - 【請求項４】 前記相補ＤＮＡ断片生成反応溶液が、各
々ｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．０２〜
０．０５のヌクレオチド混合物と、ｄＡＴＰに対するｄ
ｄＡＴＰのモル比率が０．０２〜０．０５８のヌクレオ
チド混合物と 、ｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比
率が０．０２〜０．１のヌクレオチド混合物と、ｄＣＴ
Ｐに対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．０２〜０．０３
３のヌクレオチド混合物を含む相補ＤＮＡ断片生成反応
混合物を追加で、もっと含むことを特徴とする、請求項
１記載のＤＮＡ塩基配列決定方法。 - 【請求項５】 前記相補ＤＮＡ断片生成反応溶液が、各
々ｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．０２〜
０．０５のヌクレオチド混合物と、ｄＡＴＰに対するｄ
ｄＡＴＰのモル比率が０．０２〜０．０５８のヌクレオ
チド混合物と 、ｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比
率が０．０２〜０．１のヌクレオチド混合物と、ｄＣＴ
Ｐに対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．０２〜０．０３
３のヌクレオチド混合物を含む相補ＤＮＡ断片生成反応
混合物を追加で、もっと含むことを特徴とする、請求項
２記載のＤＮＡ塩基配列決定方法。 - 【請求項６】 前記相補ＤＮＡ断片生成反応溶液が、各
々ｄＧＴＰに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．０２〜
０．０５のヌクレオチド混合物と、ｄＡＴＰに対するｄ
ｄＡＴＰのモル比率が０．０２〜０．０５８のヌクレオ
チド混合物と、ｄＴＴＰに対するｄｄＴＴＰのモル比率
が０．０２〜０．１のヌクレオチド混合物と、ｄＣＴＰ
に対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．０２〜０．０３３
のヌクレオチド混合物を含む相補ＤＮＡ断片生成反応混
合物を追加で、もっと含むことを特徴とする、請求項３
記載のＤＮＡ塩基配列決定方法。 - 【請求項７】 前記相補ＤＮＡ断片混合物を分子量順に
従って分離することにおいて、電気泳動法を用いること
を特徴とする、請求項１記載のＤＮＡ塩基配列決定方
法。 - 【請求項８】前記相補ＤＮＡ断片の末端に結合された塩
基を決定することにおいて、銀染色法を用いることを特
徴とする、請求項１記載のＤＮＡ塩基配列決定方法。 - 【請求項９】前記相補ＤＮＡ断片混合物を分子量順に従
って分離することにおいて、電気泳動法を用いることを
特徴とする、請求項２記載のＤＮＡ塩基配列決定方法。 - 【請求項１０】前記相補ＤＮＡ断片の末端に結合された
塩基を決定することにおいて、 銀染色法を用いること
を特徴とする、請求項２記載のＤＮＡ塩基配列決定方
法。 - 【請求項１１】前記相補ＤＮＡ断片混合物を分子量順に
従って分離することにおいて、電気泳動法を用いること
を特徴とする、請求項３記載のＤＮＡ塩基配列決定方
法。 - 【請求項１２】前記相補ＤＮＡ断片の末端に結合された
塩基を決定することにおいて、 銀染色法を用いること
を特徴とする、請求項３記載のＤＮＡ塩基配列決定方
法。 - 【請求項１３】前記相補ＤＮＡ断片混合物を分子量順に
従って分離することにおいて、電気泳動法を用いること
を特徴とする、請求項４記載のＤＮＡ塩基配列決定方
法。 - 【請求項１４】前記相補ＤＮＡ断片の末端に結合された
塩基を決定することにおいて、銀染色法を用いることを
特徴とする、請求項４記載のＤＮＡ塩基配列決定方法。 - 【請求項１５】前記相補ＤＮＡ断片混合物を分子量順に
従って分離することにおいて、電気泳動法を用いること
を特徴とする、請求項５記載のＤＮＡ塩基配列決定方
法。 - 【請求項１６】前記相補ＤＮＡ断片の末端に結合された
塩基を決定することにおいて、銀染色法を用いることを
特徴とする、請求項５記載のＤＮＡ塩基配列決定方法。 - 【請求項１７】前記相補ＤＮＡ断片混合物を分子量順に
従って分離することにおいて、電気泳動法を用いること
を特徴とする、請求項６記載のＤＮＡ塩基配列決定方
法。 - 【請求項１８】前記相補ＤＮＡ断片の末端に結合された
塩基を決定することにおいて、銀染色法を用いることを
特徴とする、請求項６記載のＤＮＡ塩基配列決定方法。 - 【請求項１９】 緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素
と、ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄ
ＧＰＴのモル数に比して０.０５倍を超過する量のｄｄ
ＧＴＰからなるヌクレオチド混合物が満たされた密閉容
器；緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素、ｄＧＴＰ、
ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＡＴＰのモル数
に比して０．０５８倍を超過する量のｄｄＡＴＰからな
るヌクレオチド混合物が満たされた密閉容器；緩衝溶
液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴＰ、ｄＡＴ
Ｐ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＴＴＰのモル数に比し
て０.１倍を超過する量のｄｄＴＴＰからなるヌクレオ
チド混合物が満たされた密閉容器；緩衝溶液、安定化
剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴ
Ｐ、ｄＣＴＰ及び、ｄＣＴＰのモル数に比して０．０３
３倍を超過する量のｄｄＣＴＰからなるヌクレオチド混
合物が満たされた密閉容器と、緩衝溶液、安定化剤、Ｄ
ＮＡ重合酵素と、ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣ
ＴＰ及び、ｄＧＴＰのモル数に比して０．０２倍未満の
量のｄｄＧＴＰからなるヌクレオチド混合物が満たされ
た密閉容器；緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と、
ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＡＴ
Ｐのモル数に比して０．０２倍未満の量のｄｄＡＴＰか
らなるヌクレオチド混合物が満たされた密閉容器；緩衝
溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴＰ、ｄＡＴ
Ｐ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＴＴＰのモル数に比し
て０．０２倍未満の量のｄｄＴＴＰからなるヌクレオチ
ド混合物が満たされた密閉容器；また、緩衝溶液、安定
化剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴ
Ｐ、ｄＣＴＰ及び、ｄＣＴＰのモル数に比して、０．０
２倍未満の量のｄｄＣＴＰからなるヌクレオチド混合物
が満たされた密閉容器で構成された、混合比率が互いに
異なるヌクレオチド混合物で満たされた８種類の密閉容
器からなることを特徴とする、ＤＮＡ塩基配列決定キッ
ト。 - 【請求項２０】前記各々のヌクレオチド混合物がｄＧＴ
Ｐに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．１以上のヌクレ
オチド混合物、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率
が０．１１６以上のヌクレオチド混合物、ｄＴＴＰに対
するｄｄＴＴＰのモル比率が０．０２以上のヌクレオチ
ド混合物、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が
０．０６６以上のヌクレオチド混合物とｄＧＴＰに対す
るｄｄＧＴＰのモル比率が０．０１以下のヌクレオチド
混合物、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が０．
０１１６以下のヌクレオチド混合物、ｄＴＴＰに対する
ｄｄＴＴＰのモル比率が０．０１５以下のヌクレオチド
混合物、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．
００６６以下のヌクレオチド混合物であることを特徴と
する、請求項１９記載のＤＮＡ塩基配列決定キット。 - 【請求項２１】前記各々のヌクレオチド混合物がｄＧＴ
Ｐに対するｄｄＧＴＰのモル比率が０．１5以上のヌク
レオチド混合物、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比
率が０．１74以上のヌクレオチド混合物、ｄＴＴＰに対
するｄｄＴＴＰのモル比率が０．３以上のヌクレオチド
混合物、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．
０９９以上のヌクレオチド混合物とｄＧＴＰに対するｄ
ｄＧＴＰのモル比率が０．００５以下のヌクレオチド混
合物、ｄＡＴＰに対するｄｄＡＴＰのモル比率が０．０
０５８以下のヌクレオチド混合物、ｄＴＴＰに対するｄ
ｄＴＴＰのモル比率が０．０１以下のヌクレオチド混合
物、ｄＣＴＰに対するｄｄＣＴＰのモル比率が０．００
３３以下のヌクレオチド混合物であることを特徴とす
る、請求項１９記載のＤＮＡ塩基配列決定キット。 - 【請求項２２】 緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素
と、ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄ
ＧＴＰのモル数に比して０.０２〜０．０５倍の量のｄ
ｄＧＴＰからなるヌクレオチド混合物が満たされた密閉
容器；緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴ
Ｐ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＡＴＰのモ
ル数に比して０．０２〜０．０５８倍の量のｄｄＡＴＰ
からなるヌクレオチド混合物が満たされた密閉容器；緩
衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴＰ、ｄＡ
ＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＴＴＰのモル数に比
して０.０２〜０．１倍の量のｄｄＴＴＰからなるヌク
レオチド混合物が満たされた密閉容器；また、緩衝溶
液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴＰ、ｄＡＴ
Ｐ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＣＴＰのモル数に比し
て０．０２〜０．０３３倍の量のｄｄＣＴＰからなるヌ
クレオチド混合物が満たされた４種類の密閉容器を追加
で、もっと含むことを特徴とする、請求項１９記載のＤ
ＮＡ塩基配列決定キット。 - 【請求項２３】 緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素
と、ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄ
ＧＴＰのモル数に比して０.０２〜０．０５倍の量のｄ
ｄＧＴＰからなるヌクレオチド混合物が満たされた密閉
容器；緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴ
Ｐ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＡＴＰのモ
ル数に比して０．０２〜０．０５８倍の量のｄｄＡＴＰ
からなるヌクレオチド混合物が満たされた密閉容器；緩
衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴＰ、ｄＡ
ＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＴＴＰのモル数に比
して０.０２〜０．１倍の量のｄｄＴＴＰからなるヌク
レオチド混合物が満たされた密閉容器；また、緩衝溶
液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴＰ、ｄＡＴ
Ｐ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＣＴＰのモル数に比し
て０．０２〜０．０３３倍の量のｄｄＣＴＰからなるヌ
クレオチド混合物が満たされた４種類の密閉容器を追加
で、もっと含むことを特徴とする請求項２０記載のＤＮ
Ａ塩基配列決定キット。 - 【請求項２４】 緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素
と、ｄＧＴＰ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄ
ＧＴＰのモル数に比して０.０２〜０．０５倍の量のｄ
ｄＧＴＰからなるヌクレオチド混合物が満たされた密閉
容器；緩衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴ
Ｐ、ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＡＴＰのモ
ル数に比して０．０２〜０．０５８倍の量のｄｄＡＴＰ
からなるヌクレオチド混合物が満たされた密閉容器；緩
衝溶液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴＰ、ｄＡ
ＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＴＴＰのモル数に比
して０.０２〜０．１倍の量のｄｄＴＴＰからなるヌク
レオチド混合物が満たされた密閉容器；また、緩衝溶
液、安定化剤、ＤＮＡ重合酵素と、ｄＧＴＰ、ｄＡＴ
Ｐ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ及び、ｄＣＴＰのモル数に比し
て０．０２〜０．０３３倍の量のｄｄＣＴＰからなるヌ
クレオチド混合物が満たされた４種類の密閉容器を追加
で、もっと含むことを特徴とするＤＮＡ塩基配列決定キ
ット。
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| JP2008241523A (ja) * | 2007-03-28 | 2008-10-09 | Shimadzu Corp | 電気泳動装置及び該装置を用いたｄｎａ解析方法 |
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- 2000-11-27 JP JP2000359456A patent/JP2001197886A/ja active Pending
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