JP2001149076A

JP2001149076A - 慢性ｃ型肝炎患者におけるインターフェロン治療の有効性の判定方法

Info

Publication number: JP2001149076A
Application number: JP33270499A
Authority: JP
Inventors: Katsumi Morita; 勝巳森田; Satoshi Saito; 聡斎藤; Takehiko Kitamura; 剛彦北村; Takatake Koba; 崇剛木場; Takahito Fujii; 隆人藤井; Kazuji Numata; 和司沼田; Katsuaki Tanaka; 克明田中; Hisahiko Sekihara; 久彦関原
Original assignee: Nichi Iko Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Nichi Iko Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1999-11-24
Filing date: 1999-11-24
Publication date: 2001-06-05

Abstract

(57)【要約】【課題】ＨＣＶ−１ｂに感染したＣ型肝炎患者におけ
るＩＦＮ受容体遺伝子の発現とインターフェロン治療の
有効性との関係について解明し、インターフェロン治療
の有効性の判定方法を提供すること。【解決手段】患者の肝臓におけるＩＦＮ−α受容体
（ＩＦＮＡＲ１）およびＩＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮ
ＡＲ２）の発現の有無を検出することを含む、慢性Ｃ型
肝炎患者におけるインターフェロン治療の有効性の判定
方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、慢性Ｃ型肝炎患者
におけるインターフェロン治療の有効性の判定方法、よ
り詳細には、慢性Ｃ型肝炎患者の肝臓におけるインター
フェロン受容体の発現の有無を検出することによるイン
ターフェロン治療の有効性の判定方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】Ｃ型肝炎はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）
の感染によって肝臓が炎症をおこす病気である。このウ
イルスは血液を介して感染し、ほとんどの場合慢性肝炎
になり、放置すると肝硬変を経て肝細胞がんになる確率
が高い。慢性肝炎の状態では生命に危険はなく、継続的
な治療を要する点を除けば、健康人と同じ生活ができる
が、肝細胞がんが発生したり、肝硬変が進行して肝不全
を引き起こすようになると生命の危険に瀕する。従っ
て、Ｃ型肝炎の治療では、このような状態を回避するこ
とが目標となる。Ｃ型肝炎の治療では、肝臓の炎症の原
因になるウイルスを排除することが望ましいが、それが
不可能な場合は肝臓の炎症を押さえて病気の進行をとど
めることが必要となる。

【０００３】慢性Ｃ型肝炎の治療の一つとしてインター
フェロンが使用されている。慢性Ｃ型肝炎の約５０％の
患者はインターフェロン治療に応答するものの、そのう
ち約半数の患者では肝機能の再燃を認める。インターフ
ェロンが治療効果を示すか否かの要因の一つとして、ウ
イルスの遺伝子型がある。Ｃ型肝炎ウイルスは１型から
６型および最低５０のサブタイプがあり、日本に一番多
いのは１ｂ型である。しかしながら、１ｂ型ウイルスは
インターフェロンが最も効果を示さないウイルスである
と考えられている。また、１ｂ型ウイルスでもウイルス
量が少ない場合には比較的インターフェロンによる治療
効果がみられるが、ウイルス量が多い場合には治療効果
がなくなる傾向がある。また、一般的には肝臓の病変が
進むほどインタフェロンの治療効果がなくなる傾向も見
られる。

【０００４】また、インターフェロン分子自体が直接的
に抗ウイルス作用を発揮するのではなく、インターフェ
ロンの作用は特異的細胞表面受容体との相互作用によっ
て仲介されるものと考えられている。肝臓におけるイン
ターフェロン（ＩＦＮ）受容体遺伝子の発現の有無が、
Ｃ型肝炎ウイルス感染患者におけるインターフェロン治
療の有効性と相関性を有する可能性があることは既に示
唆されている。最近では、本発明者らにより、Ｃ型肝炎
ウイルス（ＨＣＶ）−２ａまたはＨＣＶ−２ｂに感染し
た患者において、肝臓におけるＩＦＮ受容体遺伝子の発
現がＩＦＮの有効性と有意に相関していることが報告さ
れた（Morita他、J.Clin.Gastroenterol, 1998, 26:135
-140）。

【０００５】しかしながら、ＨＣＶ−１ｂに感染した患
者を含む慢性Ｃ型肝炎患者において、これらの予測用の
指標がＩＦＮ治療の有効性の正確な判定にどの程度寄与
するのか、あるいは肝臓におけるＩＦＮ受容体遺伝子の
発現とＩＦＮの有効性とは互いにどのように相関してい
るのかは依然として不明なままである。また、ＨＣＶ−
２ａまたはＨＣＶ−２ｂに感染した患者はＣ型肝炎患者
の中でもマイナーな群であるため、これらの患者におい
てＩＦＮ受容体遺伝子の発現とＩＦＮの有効性との間に
相関関係が存在していることが判明したとしても、この
ような相関関係がＣ型肝炎患者の他の群においても認め
られるとは限らない。特に、Ｃ型肝炎患者の最もメジャ
ーな群であり（日本のＨＣＶキャリアの約７０％がＨＣ
Ｖ１ｂ型である）、最もＩＦＮ抵抗性が高く、また肝細
胞がんへの進展率も有意に高いＨＣＶ−１ｂに感染した
患者におけるＩＦＮ受容体遺伝子の発現とＩＦＮ治療の
有効性との関係についてはこれまでに報告されていな
い。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、ＨＣＶ−１
ｂに感染したＣ型肝炎患者におけるＩＦＮ受容体遺伝子
の発現とインターフェロン治療の有効性との関係につい
て解明し、インターフェロン治療の有効性の判定方法を
提供することを解決すべき課題とした。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するために鋭意研究した結果、ＨＣＶ−１ｂに感染
した患者の約７０％においてはＩＦＮＡＲ１とＩＦＮＡ
Ｒ２の何れか片方または両方が発現していないこと、そ
してこれらの患者では、インターフェロンの有効性が有
意に低いことを見出し、本発明を完成するに至った。即
ち、本発明によれば、患者の肝臓におけるＩＦＮ−α受
容体（ＩＦＮＡＲ１）およびＩＦＮ−α／β受容体（Ｉ
ＦＮＡＲ２）の発現の有無を検出することを含む、慢性
Ｃ型肝炎患者におけるインターフェロン治療の有効性の
判定方法が提供される。

【０００８】本発明の判定方法の一つの態様によれば、
慢性Ｃ型肝炎患者の多くはＣ型肝炎ウイルス遺伝子型１
ｂを有する。本発明の判定方法の一つの態様によれば、
患者の肝臓におけるＩＦＮ−α受容体（ＩＦＮＡＲ１）
およびＩＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮＡＲ２）の発現の
有無を検出し、上記受容体の両方を発現している患者に
ついてはインターフェロン治療が有効であると判断され
る。本発明の判定方法の一つの態様によれば、患者の肝
臓におけるＩＦＮ−α受容体（ＩＦＮＡＲ１）およびＩ
ＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮＡＲ２）の発現の有無はＲ
Ｔ−ＰＣＲ法で検出される。

【０００９】本発明の別の側面によれば、（１）ＩＦＮ
−α受容体（ＩＦＮＡＲ１）遺伝子を増幅するためのプ
ライマー、（２）ＩＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮＡＲ
２）遺伝子を増幅するためのプライマー、（３）逆転写
酵素、（４）ＴａｑＤＮＡポリメラーゼおよび（５）ｄ
ＮＴＰｓ混合物を含む、本発明の判定方法に用いるため
の判定用キットが提供される。本発明のさらに別の側面
によれば、本発明の方法によりインターフェロン治療が
有効であると判定された患者に投与するためのインター
フェロンが提供される。本発明のさらに別の側面によれ
ば、ＩＦＮ−α受容体（ＩＦＮＡＲ１）および／または
ＩＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮＡＲ２）をコードするＤ
ＮＡを含む、慢性Ｃ型肝炎患者におけるインターフェロ
ン治療の有効性を高めるための発現ベクターが提供され
る。

【００１０】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施態様および実
施方法について詳細に説明する。本発明は、患者の肝臓
におけるＩＦＮ−α受容体（ＩＦＮＡＲ１）およびＩＦ
Ｎ−α／β受容体（ＩＦＮＡＲ２）の発現の有無を検出
することを含む、慢性Ｃ型肝炎患者におけるインターフ
ェロン治療の有効性の判定方法に関するものである。

【００１１】Ｃ型肝炎とは、Ｃ型肝炎ウイルスの感染に
より生じる肝炎であり、身体的症状としては、軽度から
重症の傾眠状態、食欲不振、悪心・嘔吐、腹部・右季肋
部痛、発熱、関節痛、皮膚および眼の黄染、尿の着色
（暗褐色）などが見られ、精神的症状としては、集中力
欠乏、気分の動揺、いらいら、うつ病などが見られる疾
患である。臨床的特徴としては、約１／３が急性肝炎で
発症するが、大部分は潜在的に進行する。本発明の判定
方法の対象となる患者は好ましくは、Ｃ型肝炎ウイルス
遺伝子型１ｂを有する患者である。Ｃ型肝炎ウイルス遺
伝子型１ｂは、Ｃ型肝炎ウイルスの複数ある遺伝子型の
一つであり、その構造は公知である（加藤ら、Proc. Na
tl. Acad. Sci. USA 87:9524-9528, 1990）。

【００１２】インターフェロンは、生体内に微量存在す
る生理活性タンパク質の一つであり、１９８６年に白血
病を治療するために認可を受け、遺伝子工学的に大量生
産されるようになった。また。インターフェロンは１９
９１年にＦＤＡ食品医薬品局よりC型肝炎への使用が認
められた。α−インターフェロン製剤は、Ｃ型肝炎に対
する効果的な治療法の一つである。例えば、C型肝炎治
療を目的として週３回３００万単位のインターフェロン
を投与した場合に、約２５％の治療効果があるという報
告がある。しかしながら、インターフェロン投与には副
作用を伴う場合もあり、またインターフェロンは比較的
高価な薬剤である。従って、治療効果を示さないま患者
には投与しないことが好ましい。本発明は、このような
インターフェロン治療の効果の有無をインターフェロン
投与の前に予測／判定する方法を提供するものである。
また、本発明は、本発明の判定方法でインターフェロン
治療が有効であると判定された患者に投与するためのイ
ンターフェロンに関する。ここで言うインターフェロン
とは、例えば、上記したように既に臨床使用されている
インターフェロン製剤を言うが、それらに限定されるわ
けではない。

【００１３】本発明の方法は、患者の肝臓におけるＩＦ
Ｎ−α受容体（ＩＦＮＡＲ１）およびＩＦＮ−α／β受
容体（ＩＦＮＡＲ２）の発現の有無を検出するものであ
る。ＩＦＮ−α受容体（ＩＦＮＡＲ１）およびＩＦＮ−
α／β受容体（ＩＦＮＡＲ２）は、インターフェロンの
受容体の２つのサブユニットであり、その構造は既知で
ある（Uze他、1990，Cell, 60, 225-234）。

【００１４】インターフェロン受容体の検出の方法は特
には限定されず、任意の方法で行うことができ、例え
ば、ノザーンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ法などによって
ｍＲＮＡレベルで検出してもよいし、インターフェロン
受容体に対する抗体などを用いたウエスタンブロット
法、免疫沈降法などによって蛋白質レベルで検出しても
よい。操作性の観点からは、ｍＲＮＡレベルで検出する
方が好ましく、特にＲＴ−ＰＣＲ法で検出する方法が好
ましい。

【００１５】ＲＴ−ＰＣＲ法は、検出すべきＲＮＡを含
む試料に、逆転写酵素（例えば、ＭＭＬＶ逆転写酵
素）、ｄＮＴＰmixture（ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴ
Ｐ、ｄＴＴＰ）、プライマー、緩衝液などを加えて逆
転写反応を行った後に、ＰＣＲ反応を行い、検出すべき
ＲＮＡから逆転写されたｃＤＮＡを増幅して検出する方
法である。ＲＴ−ＰＣＲ法自体の実験手順は当業者に周
知である。本発明では、ＩＦＮ−α受容体（ＩＦＮＡＲ
１）およびＩＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮＡＲ２）の発
現の有無の検出を目的とするため、これら受容体の遺伝
子の配列に基づいて設計したプライマーを使用すること
ができる。

【００１６】本発明は、（１）ＩＦＮ−α受容体（ＩＦ
ＮＡＲ１）遺伝子を増幅するためのプライマー、（２）
ＩＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮＡＲ２）遺伝子を増幅す
るためのプライマー、（３）逆転写酵素、（４）Ｔａｑ
ＤＮＡポリメラーゼおよび（５）ｄＮＴＰｓ混合物を含
む、本発明の判定方法に用いるための判定用キットにも
関する。ＩＦＮ−α受容体（ＩＦＮＡＲ１）遺伝子を増
幅するためのプライマーおよびＩＦＮ−α／β受容体
（ＩＦＮＡＲ２）遺伝子を増幅するためのプライマーと
しては、上記したようにこれら受容体の遺伝子の配列に
基づいて設計したプライマーを使用することができ、例
えば、配列表の配列番号１から８に記載の配列を有する
プライマーを使用することができる。また、キットに
は、ＲＴ−ＰＣＲを行うために必要な他の試薬（例え
ば、緩衝液および精製水など）を適宜含めることができ
る。また、肝臓試料からＲＮＡを回収するために必要な
試薬などを含めてもよい。本発明によれば、ＩＦＮ−α
受容体（ＩＦＮＡＲ１）および／またはＩＦＮ−α／β
受容体（ＩＦＮＡＲ２）をコードするＤＮＡを含む、慢
性Ｃ型肝炎患者におけるインターフェロン治療の有効性
を高めるための発現ベクターも提供される。かかる発現
ベクターは、ＩＦＮ−α受容体（ＩＦＮＡＲ１）および
／またはＩＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮＡＲ２）をコー
ドするＤＮＡを生体内で発現できるものであればその種
類は限定されず、通常は好適なプロモーター配列を含む
ものが使用される。以下の実施例により本発明をさらに
具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定され
ることはない。

【００１７】

【実施例】（Ａ）材料と方法（１）患者集団Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染した８２人（５１人
の男性と３１人の女性で、２１歳から６８歳で平均４７
歳）の慢性Ｃ型肝炎患者で試験を行った。患者は全て６
カ月以上の期間を通じて異常なアラニントランスアミナ
ーゼ（ＡＬＴ）値を示し、肝生検により慢性肝炎である
ことが確認された。患者は全てアルコール又は薬物乱用
の経歴を有さず、代謝性疾患または自己免疫疾患の形跡
もなく、コルチコステロイド、免疫抑制剤または抗ウイ
ルス治療を以前に受けていない。

【００１８】全患者に２４週間ＩＦＮ−αを投与した。
６００万単位の天然ＩＦＮ−α（ヒトリンパ芽球インタ
ーフェロン、住友製薬株式会社）を７５名の患者に筋肉
内投与し、５００万単位の天然ＩＦＮ−α（ヒトリンパ
芽球インターフェロン、大塚製薬株式会社）を７名の患
者に投与した。最初の２週間は連日投与し、次いで、２
２週間に渡り週３回の割合で隔日投与とした。ＩＦＮ治
療の間、何れの患者も重大な副作用を示さず、ＩＦＮ投
与量も減少することなく維持できた。全患者について、
ＩＦＮ治療前に肝生検を行った。肝臓試料は液体窒素中
で直ちに凍結し、分析まで−８０℃で保存した。血清試
料を使用して、ＨＣＶの遺伝子型およびＨＣＶ濃度を既
報の通り測定した（Morita他、J.Clin.Gastroenterol,
1998, 26(29)135-140）。ＩＦＮ治療に対する生化学的
およびウイルス学的応答を治療期間の終了時（２４週
目：初期応答）と、追跡期間の終了時（４８週目：持続
応答）に評価した。生化学的寛解は血清ＡＬＴ濃度が正
常範囲内として定義し、ウイルス学的寛解はＲＴ−ＰＣ
Ｒ法で測定した血清ＨＣＶＲＮＡが陰性となった場合
と定義した。

【００１９】（２）肝臓ＩＦＮ受容体遺伝子の発現の測
定予備処理肝臓試料を使用して、１型ＩＦＮ受容体の２つ
のサブユニット［ＩＦＮＡＲ１（ＩＦＮ−α受容体）、
およびＩＦＮＡＲ２（ＩＦＮ−α／β受容体）］（Uze
他、1990，Cell, 60, 225-234）を既報の通りＲＴ−nes
tedＰＣＲ法により測定した。ＩＦＮＡＲ１用のプライ
マー配列としては、外側センス：５’−AGTGTTATGTGGGC
TTTGGATGGTTTAAGC−３’（ヌクレオチド５３５−５６
４：配列番号１）、外側アンチセンス５’−TCTGGCTTTC
ACACAATATACAGTCAGTGG−３’（ヌクレオチド１２７０−
１２９９：配列番号２）、内側センス５’−GACCTTTCAA
GTTCAGTGGCTCCACGCC−３’（ヌクレオチド８４３−８７
０：配列番号３）、および内側アンチセンス５’−GGAT
CACAGGCGTGTTTCCAGACTG−３’（ヌクレオチド１１４１
−１１６５：配列番号４）を使用した。ＩＦＮＡＲ２用
のプライマー配列としては、外側センス：５’−GCTTTT
GAGCGAGAATGCCT−３’（ヌクレオチド３２９−３４８：
配列番号５）、外側アンチセンス５’−CCCTCTGACTGTTC
TTCAATG−３’（ヌクレオチド８３３−８５３：配列番
号６）、内側センス５’−GAAGGTGGTTAAGAACTGTGC−
３’（ヌクレオチド５６３−５８３：配列番号７）、お
よび内側アンチセンス５’−CCCGCTGAATCCTTCTAGGACGG
−３’（ヌクレオチド６４９−６７１：配列番号８）を
使用した。ＰＣＲ増幅は、９４℃で１分間の変性、５５
℃で４５秒のアニーリングおよび７２℃で２分間の伸長
を３５サイクル行った。グリセロール−３−リン酸デヒ
ドロゲナーゼ（Ｇ３ＰＤＨ）ｍＲＮＡを使用して肝臓試
料からのＲＮＡ抽出の可否を確認し、ＲＴ−ＰＣＲ分析
のコントロールとした。最終ＰＣＲ産物を２％アガロー
スゲル上で電気泳動し、バンドをエチジウムブロミド染
色により可視化した。

【００２０】（３）ＮＳ５Ａ_2200-2248遺伝子のヌクレ
オチド配列の決定ＨＣＶ−１ｂに感染した患者からの血清試料を用いて、
ＮＳ５Ａ_2200-2248遺伝子のヌクレオチド配列の測定の
ために血清ＲＮＡを抽出した。ヌクレオチド６７０３−
７３２０（ＨＣＶ−Ｊの配列に基づく番号（Kato他、19
90, Proc.Natl.Acad.Sci.USA., 87:9524-9528））をＲ
Ｔ−nestedＰＣＲによって増幅した。この領域のヌクレ
オチド配列を決定するために、ダイレクトシークエンス
を自動ＤＮＡ配列決定装置（377 DNA配列決定装置、パ
ーキンエルマーシータス）で行った。ＮＳ５Ａ
_2200-2248の得られたアミノ酸配列を、ＨＣＶ−Ｊで同
定されたＮＳ５Ａ_2200-2248の配列と比較した。

【００２１】（４）組織学的検査組織学的分類を慢性肝炎のヨーロッパ分類により行った
（Groote他、1968, l,ancot, 2:625-628）。組織学的活
性を評価するために、組織学的活性インデックス（ＨＡ
Ｉ）スコアを使用した（Knodell,他、1981, Hepatolog
y, 1:431-436）。

【００２２】（５）統計分析データは平均±ＳＥで表示した。通常の統計分析はStud
ent's ｔ試験またはＸ ²検定を使用した。血清ＡＬＴ値
の変化は、バリンネの２式反復測定分析で評価した。Ｉ
ＦＮ治療の有効性に関連する独立特性を決めるために記
号論理回帰による多変量解析を行った。マルチプル記号
論理回帰モデルは以下の解釈上の変数を用いて構築し
た：年齢、性別（女性＝０、男性＝１）、血清ＡＬＴ濃
度、ＨＣＶ遺伝子型（遺伝子型１ｂ＝０、遺伝子型非１
ｂ＝１）、血清ＨＣＶＲＮＡ濃度、通常の組織学的診
断（慢性活性肝炎（ＣＡＨ）２Ａ＝０、ＣＡＨ２Ｂ＝
１）、ＨＡＩスコア、および肝臓における受容体ｍＲＮ
Ａ発現（陰性＝０、陽性＝１）。データ分析はコンピュ
ータープログラムＳＰＳＳ（ＳＰＳＳジャパン）を用い
て行った。Ｐ値は全て両側検定であり、Ｐ＜０．０５を
もって統計的に有意であるとみなした。

【００２３】（Ｂ）結果（１）ＩＦＮ治療前の患者の臨床的特徴被験患者の特徴を表１に示す。ＨＣＶ−１ｂの確率は６
１％（８２名中の５０名）であり、ＨＣＶ−非１ｂ（Ｈ
ＣＶ−２ａまたは２ｂ）の確率は３９％（８２名中の３
２名）であった。血清ＨＣＶＲＮＡ濃度および血清Ａ
ＬＴ値は各々５．６±０．１ｌｏｇ₁₀コピー／ｍｌお
よび１００±８．５ＩＵ／ｌであった。

【００２４】

【表１】

【００２５】（２）肝臓におけるＩＦＮＡＲ１およびＩ
ＦＮＡＲ２のｍＲＮＡの発現ＩＦＮＡＲ１およびＩＦＮＡＲ２のｍＲＮＡを含有する
肝臓試料中で、ＰＣＲは予想されたサイズのＤＮＡのシ
ングルバンド（各々、３２３および１０９ｂｐ）を生成
した。ＩＦＮＡＲ１ｍＲＮＡの検出率は３５％（８２名
中の２９名）であり、ＩＦＮＡＲ２ｍＲＮＡの検出率は
４０％（８２名中の３３名）であった。ＩＦＮＡＲ１お
よびＩＦＮＡＲ２のｍＲＮＡの両方が検出できた患者は
２５名であり、ＩＦＮＡＲ１ｍＲＮＡのみが検出できた
のは４名の患者であり、ＩＦＮＡＲ２ｍＲＮＡのみが検
出できたのは８名の患者であった。ＩＦＮＡＲ１とＩＦ
ＮＡＲ２のｍＲＮＡのいずれも検出できなかった患者は
４５名であった。ＩＦＮＡＲ１とＩＦＮＡＲ２の両方の
ＲＮＡが発現する確率（これは、ＩＦＮ受容体ｍＲＮＡ
陽性と定義される）は、３０％（８２名中の２５名）で
あり、ＩＦＮＡＲ１とＩＦＮＡＲ２の何れかまたは両方
のＲＮＡが発現しない確率（これは、ＩＦＮ受容体ｍＲ
ＮＡ陰性と定義される）は、７０％（８２名中の５７
名）であった。

【００２６】（３）ＩＦＮ治療に対する初期（治療の終
了時）および持続（追跡期間の終了時）応答と肝臓ＩＦ
Ｎ受容体ｍＲＮＡ発現ＩＦＮ治療の終了時に、５２名（６３％）の患者が、生
化学的寛解状態にあり、３８名（４６％）の患者がウイ
ルス学的寛解状態にあった（表２）。ＩＦＮ受容体ｍＲ
ＮＡ陽性群では患者全て（１００％）、そしてＩＦＮ受
容体ｍＲＮＡ陰性群では２７名の患者（４７％）が生化
学的寛解状態にあり、この差は有意であった（Ｐ＜０．
０００１）。ウイルス学的寛解は、ＩＦＮ受容体ｍＲＮ
Ａ陽性群では患者全て（１００％）において、そしてＩ
ＦＮ受容体ｍＲＮＡ陰性群では１３名の患者（２３％）
において見られ、この差も有意であった（Ｐ＜０．００
０１）。追跡期間の終了時では、３８名（４８％）の患
者が、生化学的寛解状態にあり、２６名（３２％）の患
者がウイルス学的寛解状態にあった。ＩＦＮ受容体ｍＲ
ＮＡ陽性群では２１名の患者（８４％）が生化学的寛解
状態にあり、１９名の患者（７６％）がウイルス学的寛
解状態にあった。これに対し、ＩＦＮ受容体ｍＲＮＡ陰
性群では１７名の患者（３０％）のみが生物学的寛解状
態にあり、７名の患者（１２％）のみがウイルス学的寛
解状態にあった。追跡期間の終了時に生化学的またはウ
イルス学的寛解を示す患者の割合は、ＩＦＮ受容体ｍＲ
ＮＡ陽性群とＩＦＮ受容体ｍＲＮＡ陰性群との間では有
意の差を認めた（共にＰ＜０．０００１）。

【００２７】

【表２】

【００２８】ＩＦＮ受容体ｍＲＮＡ陽性患者は、ＩＦＮ
受容体ｍＲＮＡ陰性患者（５７名中の１８名：３２％）
よりも高い確率でＨＣＶ非１ｂに感染する傾向があった
（２５名中の１４名：５６％）。しかし、これら２群の
間に有意差はなかった。血清ＨＣＶＲＮＡ濃度に関し
ては、ＩＦＮ受容体ｍＲＮＡ陽性患者（５．３±０．２
ｌｏｇ₁₀コピー／ｍｌ）および陰性患者（５．７±
０．１ｌｏｇ₁₀コピー／ｍｌ）の間で有意差はなかっ
た。ＩＦＮ受容体ｍＲＮＡ陽性患者（４．４±０．５）
および陰性患者（４．３±０．３）の間で、ＨＡＩスコ
アに有意差はなかった。多変量解析により、ＩＦＮ受容
体ｍＲＮＡ発現に有意に影響を及ぼす因子は存在しない
ことが判明した。図１は、ＩＦＮ受容体ｍＲＮＡが陽性
および陰性の患者群における血清ＡＬＴ値の変化率の推
移を示す。血清ＡＬＴ値は、ＩＦＮ受容体ｍＲＮＡ陽性
患者の場合、陰性の患者と比較して、基底レベルから有
意に減少した（Ｐ＝０．００３６）。

【００２９】（４）ＩＦＮ治療に対する応答を予測する
因子表３は、ＩＦＮに対する生化学的またはウイルス学的な
持続寛解（治療効果）に関与する単変量解析の結果を示
す。上記両応答は、ＩＦＮ受容体ｍＲＮＡが陽性である
こと、遺伝子型が非ＨＣＶ−１ｂであること、および血
清ＨＣＶＲＮＡ量が有意に治療効果に寄与する因子と
なった。次に多変量解析を使用して、ＩＦＮに対する治
療効果に寄与している可能性がある各変数因子について
評価した（表４）。このモデルでは、ＩＦＮ受容体ｍＲ
ＮＡが陽性であることと、ＨＣＶ−１ｂが存在しないこ
とが、ＩＦＮ治療の有効性を予測できる独立因子である
こと、さらにＩＦＮ受容体ｍＲＮＡ発現が最も効果的に
治療効果に寄与していることが示された。年齢、性別、
ＨＣＶＲＮＡ濃度、血清ＡＬＴ値、組織学的状態、お
よびＨＡＩスコアなどの他の臨床因子はＩＦＮ治療の有
効性を予測できる独立因子ではなかった。

【００３０】

【表３】

【００３１】

【表４】

【００３２】（５）ＨＣＶ−１ｂ患者におけるＮＳ５Ａ
遺伝子変異とＩＦＮに対する応答ＨＣＶ−１ｂに感染した患者におけるＮＳ５Ａ
_2200-2248のアミノ酸配列およびＩＦＮ受容体ｍＲＮＡ
の発現の有無を図２に示す。患者はＮＳ５Ａ遺伝子の変
異の数によって３つのカテゴリーに分類した。２６名の
患者（５６％）はアミノ酸変異を有さない野生型配列を
有し、１９名の患者（４０％）は１〜３個のアミノ酸変
異を有する中間型を有し、２名の患者（４％）は４個以
上のアミノ酸変異を有する変異型を有していた。しか
し、ＮＳ５Ａ_2200-2248領域におけるアミノ酸変異の数
については、ウイルス学的寛解を示す群と示さない群と
の間には有意差はなかった。ＮＳ５Ａ_2200-2248領域に
おけるアミノ酸置換の数とＩＦＮ受容体ｍＲＮＡ発現と
の関連については、ＩＦＮ受容体ｍＲＮＡ陽性患者と陰
性患者との間に有意差はなく、ＮＳ５Ａ_2200-2248領域
におけるアミノ酸変異の数は血清ＨＣＶＲＮＡ値との
関連もなかった。

【００３３】（６）ＨＣＶの各遺伝子型におけるＩＦＮ
受容体ｍＲＮＡ発現とＩＦＮ応答との関連初期ウイルス学的寛解および持続ウイルス学的寛解に寄
与する、２つの予測因子（ＨＣＶ遺伝子型と肝臓ＩＦＮ
受容体ｍＲＮＡ発現）との関係を表５に示す。ＩＦＮ受
容体ｍＲＮＡの発現が陽性であれば、ＨＣＶ−１ｂ患者
およびＨＣＶ−非１ｂ患者の両方において、１００%の
陽性予測率で、ＩＦＮ治療に対する初期ウイルス学的寛
解を予測した。ＩＦＮ受容体ｍＲＮＡの発現が陽性であ
れば、遺伝子型非１ｂの患者については１００％の陽性
予測率でＩＦＮ治療に対する持続ウイルス学的寛解を予
測したが、対照的に、遺伝子型１ｂの患者についてはＩ
ＦＮ受容体ｍＲＮＡの発現が陰性であれば９７％の陰性
予測率でＩＦＮ治療がウイルス学的に効果がないことを
予測した。

【００３４】

【表５】

【００３５】（７）結果のまとめインターフェロン受容体は、IFNAR1および、IFNAR2の２
つのサブユニットから構成されることが知られている。
はじめにIFN治療前の慢性Ｃ型肝炎患者の肝組織よりRNA
を抽出し、IFNAR1および、IFNAR2のmRNAをRT-PCR法で検
出した。IFNAR1とIFNAR2のいずれも陽性のものをインタ
ーフェロン受容体mRNA陽性、いずれか一方のみ陽性か、
両方とも陰性のものをインターフェロン受容体mRNA陰性
とした。82人の慢性Ｃ型肝炎患者のうちインターフェロ
ン受容体mRNA陽性のものが25人、インターフェロン受容
体mRNA陰性の者が57人であった。両群をインターフェロ
ン治療終了時(24週目)の時点で比較するとHCV RNA陰性
化例は、インターフェロン受容体mRNA陽性群で25人(100
%)、インターフェロン受容体mRNA陰性群で13人(23%)で
あった。さらに、インターフェロン治療終了後24週目の
時点ではHCV RNA陰性化例は、インターフェロン受容体m
RNA陽性群で19人(76%)、インターフェロン受容体mRNA陰
性群で７人(12%)であった。以上の結果より,インターフ
ェロン受容体がインターフェロン治療の効果判定の予測
に有用であることが判明した。

【００３６】

【発明の効果】本発明により、慢性肝炎患者に対するイ
ンターフェロン治療の有効性を判断する方法が提供され
ることになり、治療の有効性がないと考えられる患者に
対するインターフェロン投与を回避できるようになる。
これは、医療経済上の観点から好ましく、またインター
フェロン投与による無用な副作用を回避できるという利
点もある。

【００３７】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Kenji Okuda et al <120> A method of predicting the effectiveness of interferon therapy in patients with chronic hepatitis C <130> 99358M <160> 8 <210> 1 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial DNA <400> 1 agtgttatgt gggctttgga tggtttaagc 30 <210> 2 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial DNA <400> 2 tctggctttc acacaatata cagtcagtgg 30 <210> 3 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial DNA <400> 3 gacctttcaa gttcagtggc tccacgcc 28 <210> 4 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial DNA <400> 4 ggatcacagg cgtgtttcca gactg 25 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial DNA <400> 5 gcttttgagc gagaatgcct 20 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial DNA <400> 6 ccctctgact gttcttcaat g 21 <210> 7 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial DNA <400> 7 gaaggtggtt aagaactgtg c 21 <210> 8 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial DNA <400> 8 cccgctgaat ccttctagga cgg 23

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ＩＦＮ受容体ｍＲＮＡが陽性および陰
性の患者群における血清ＡＬＴ値の変化率の推移を示
す。

【図２】図２は、ＨＣＶ−１ｂに感染した患者における
ＮＳ５Ａ_2200-2248のアミノ酸配列およびＩＦＮ受容体
ｍＲＮＡの発現の有無を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/576 Ｚ 33/576 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (71)出願人 599164938 池田正徳東京都目黒区上目黒５−31−10 (71)出願人 599164949 関原久彦神奈川県横浜市青葉区美しが丘４−35−10 (72)発明者森田勝巳神奈川県横浜市金沢区富岡西３−３−11 フラッツドルチェ201号 (72)発明者斎藤聡神奈川県横浜市金沢区西柴４−１−３ (72)発明者北村剛彦神奈川県横浜市磯子区杉田３−10−12 クレール杉田204 (72)発明者木場崇剛東京都足立区綾瀬３−29−15 エステート大塚101号 (72)発明者藤井隆人神奈川県横浜市和泉町5625−27 (72)発明者沼田和司神奈川県横浜市磯子区東町７−７ (72)発明者田中克明東京都杉並区宮前５−13−21 (72)発明者関原久彦神奈川県横浜市青葉区美しが丘４−35−10 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 CB26 DA36 DA77 FB01 4B024 AA01 AA11 BA63 CA04 DA06 EA04 GA11 HA01 4B063 QA01 QQ10 QQ43 QR32 QS25 4H045 AA10 AA11 BA10 CA40 DA51 EA20 EA53 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】患者の肝臓におけるＩＦＮ−α受容体
（ＩＦＮＡＲ１）およびＩＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮ
ＡＲ２）の発現の有無を検出することを含む、慢性Ｃ型
肝炎患者におけるインターフェロン治療の有効性の判定
方法。
【請求項２】慢性Ｃ型肝炎患者がＣ型肝炎ウイルス遺
伝子型１ｂを有する、請求項１に記載の判定方法。
【請求項３】患者の肝臓におけるＩＦＮ−α受容体
（ＩＦＮＡＲ１）およびＩＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮ
ＡＲ２）の発現の有無を検出し、上記受容体の両方を発
現している患者についてはインターフェロン治療が有効
であると判定する、請求項１または２に記載の判定方
法。
【請求項４】患者の肝臓におけるＩＦＮ−α受容体
（ＩＦＮＡＲ１）およびＩＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮ
ＡＲ２）の発現の有無をＲＴ−ＰＣＲ法で検出する、請
求項１から３の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】（１）ＩＦＮ−α受容体（ＩＦＮＡＲ
１）遺伝子を増幅するためのプライマー、（２）ＩＦＮ
−α／β受容体（ＩＦＮＡＲ２）遺伝子を増幅するため
のプライマー、（３）逆転写酵素、（４）ＴａｑＤＮＡ
ポリメラーゼおよび（５）ｄＮＴＰｓ混合物を含む、請
求項１から４の何れか１項に記載の方法に用いるための
判定用キット。
【請求項６】請求項１から４の何れか１項に記載の方
法によりインターフェロン治療が有効であると判定され
た患者に投与するためのインターフェロン。
【請求項７】ＩＦＮ−α受容体（ＩＦＮＡＲ１）およ
び／またはＩＦＮ−α／β受容体（ＩＦＮＡＲ２）をコ
ードするＤＮＡを含む、慢性Ｃ型肝炎患者におけるイン
ターフェロン治療の有効性を高めるための発現ベクタ
ー。