JP2001124755A - 有機化合物を精製するためのｈｐｌｃ法 - Google Patents

有機化合物を精製するためのｈｐｌｃ法

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Azumi Abedei Jare
ジヤレ・アズミ・アベデイー
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Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】化合物のライブラリ、例えばコンビナトリアル
ライブラリなどからの化合物群の迅速で適切なＨＰＬＣ
による精製法を提供する。 【解決手段】化合物のライブラリの適切な代表試料を用
いて、所定の分析用ＨＰＬＣカラムでの溶出状態及び又
は所定のＴＬＣでの移動状態から、相互に関係する分離
用ＨＰＬＣの精製パラメータを変更することなく、化合
物ライブラリ全体の精製に適用する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】（発明の分野）本発明は、一般には、化合
物のライブラリ、例えば、コンビナトリアルライブラリ
及びリード生成ライブラリの精製及び／又は特徴付けに
関する。
【０００２】（発明の背景）現在、合成化合物を精製す
るための一般法が数多く存在する。これらの方法は、一
般には、単一の標的化合物を複数の不純物から精製する
ことを含む。
【０００３】化合物は、現在、比較的数多くコンビナト
リアルライブラリ及びリード生成ライブラリとして調製
されている。しばしば、化合物は、マルチウェルプレー
ト又はマルチチューブアレイにおいて、数千に達する多
くの関連化合物として合成される。化合物のライブラリ
をそれらの合成に合わせて精製し、かつ特徴付けること
は困難である。
【０００４】多数の化合物を精製するための方法の１つ
は個々の化合物をクロマトグラフィー処理する反復法を
含む。これは、各々の分子の合成、後処理、及び精製の
完全なサイクルを構成する。しばしば、精製しようとす
る化合物の適切な精製法を開発するのに多大な時間が費
やされる。
【０００５】様々な有機化合物に適用可能な、化合物の
ライブラリを精製及び／又は特徴付けるための効率的な
方法を開発することは有利である。本発明はそのような
方法を提供する。
【０００６】（発明の要約）化合物、例えば、コンビナ
トリアルライブラリ又はリード生成ライブラリのような
化合物のライブラリを精製及び／又は特徴付けるための
方法が開示される。この方法において用いることができ
る精製装置も開示される。
【０００７】この方法は、構造的に類似する化合物、例
えば、コンビナトリアルライブラリ及びリード生成ライ
ブラリにおけるものが、しばしば、大まかには類似する
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）プレート上での保持
因子（Ｒｆ）及び高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）カラムでの保持時間を有するという発見を前提に
する。この方法は、この発見を、類似化合物のライブラ
リを精製するのに最適な条件の決定に用いる。
【０００８】所定のカラム充填、溶媒系、及び流速に対
して、ほとんどの化合物は特定の程度まで分析用及び／
又は分離用ＨＰＬＣカラムから溶出する傾向にある。同
様に、ほとんどの化合物は特定の程度までＴＬＣプレー
ト上を移動する。幾つかの化合物は全く移動しない（Ｒ
ｆ＝０）のに対し、他のものは低Ｒｆ（例えば、０．０
５＜Ｒｆ＜０．２）、中Ｒｆ（例えば、０．２＜Ｒｆ＜
０．８）、又は高Ｒｆ（例えば、Ｒｆ＞０．８）で移動
する。ライブラリ中の大部分の化合物が溶出し（分析用
ＨＰＬＣの場合）、又は移動する（ＴＬＣの場合）、一
連の３つ以上、好ましくは４つ以上のＲｆの帯域、又
は、分析用ＨＰＬＣの場合には、一連の保持時間の帯
域、例えば、ＴＬＣプレート上の低、中及び高Ｒｆを容
易に決定することができる。これらの帯域は、分離用又
は半分離用ＨＰＬＣを実施するための分離又は半分離方
法と相関し得る。
【０００９】所定の分析用ＨＰＬＣ及び／又はＴＬＣプ
ロトコルに対して、１つの帯域中の化合物を他の帯域中
の化合物から分離することができる一組の分離用ＨＰＬ
Ｃ条件を同定することができる。したがって、化合物ラ
イブラリの代表試料中の化合物の全て、又は実質的に全
てが同じ帯域に存在するのであれば、そのライブラリ
を、ＴＬＣ及び／又は分析用ＨＰＬＣの帯域に容易に相
互関連付けすることができる同じＨＰＬＣプロトコルを
用いて精製することができる。
【００１０】ここに記載される方法は、化合物のライブ
ラリ、例えば、コンビナトリアルライブラリ又はリード
生成ライブラリからの化合物の代表試料をＴＬＣ及び／
又は分析用ＨＰＬＣによって評価し、ＴＬＣプレート上
でそれらが移動し、及び／又は分析用ＨＰＬＣカラムか
ら流出する帯域を決定することを含む。ひとたびそれら
の帯域が同定されたら、相関する分離又は半分離方法を
用いてそのライブラリを精製する。
【００１１】化合物のライブラリを精製するための適切
な条件は、そのライブラリの代表試料を所定の分析用Ｈ
ＰＬＣカラム、溶媒系及び流速、及び／又は所定のＴＬ
Ｃ裏層及び溶媒系について経路探索することによって実
現することができる。相関する分離又は半分離ＨＰＬＣ
法はそれらの精製パラメータを変更することなく化合物
ライブラリの精製に適用することができ、そのため単一
の方法をそのライブラリ全体に適用することができる。
【００１２】適切な試料サイズは、典型的にはライブラ
リ中の化合物の多様性に応じて、そのライブラリの２な
いし５％のオーダーである。適切な精製経路を探索する
ことから、このアプローチをここでは「経路探索（ｒｏ
ｕｔｅ ｓｃｏｕｔｉｎｇ）」と呼ぶ。
【００１３】好ましくは、ＴＬＣ及びＨＰＬＣの両者を
化合物の代表試料に対して実施する。ライブラリ全体を
精製する前にそのライブラリからの化合物の試料に対し
て分離用又は半分離用ＨＰＬＣを実施することも好まし
い。これによって、例えば、代表試料中の化合物の純度
を決定することにより、それらの条件がそのライブラリ
全体を精製するの適切であることを確認することができ
る。また、ライブラリの１０ないし１００％、好ましく
は５０ないし１００％に対してＴＬＣを行い、そのＴＬ
Ｃを代表試料におけるものと比較することもできる。ラ
イブラリ全体に対してＴＬＣを行い、及び／又は化合物
の代表試料の純度を決定することにより、そのライブラ
リの大部分が適度に精製され得ることを確実なものとす
ることができる。純度が代表試料に関して適切なもので
はない場合、又はそのライブラリのＴＬＣが代表試料の
ものと十分に一致しない場合、代わりの分離用ＨＰＬＣ
条件を用いることができる。
【００１４】可能であるならば、その方法がライブラリ
全体に適用可能であることを確実なものとする助けとな
るように、代表試料はそのライブラリにおいて合成され
た最大極性及び最小極性化合物を含むべきである。
【００１５】ここに記載される方法は、化合物のライブ
ラリの精製及び特徴付けの時間を実質的に節約すること
になり、かつ純度が９０％を上回る化合物を提供するこ
とが可能である。
【００１６】（詳細な説明）化合物はしばしばコンビナ
トリアルライブラリの形態で合成され、これらはしばし
ばマルチウェルプレート又はマルチチューブアレイの形
態にある。これらの化合物の合成、精製及び評価におけ
る主な妨げはそれらの化合物に適切な精製条件の決定で
ある。ここに記載される方法では、構造的に関連する化
合物のライブラリ全体をいかにして精製することができ
るかが詳述される。
【００１７】これらの方法は、構造的に類似する化合
物、例えば、コンビナトリアルライブラリ及びリード生
成ライブラリにおけるものが、しばしば、大まかには類
似する薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）プレート及び
高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）カラムでの
保持時間を有するという発見を前提にする。所定の吸着
剤、溶媒系、及び流速に対して、ほとんどの化合物はプ
レート上で特定の程度移動する傾向にある。例えば、幾
つかの化合物はほとんど移動することがない（ほぼ０の
Ｒｆ）。他のものは低Ｒｆ（例えば、０．０５ないし
０．２）、中Ｒｆ（例えば、０．２ないし０．８）、又
は高Ｒｆ（０．８超）で移動する。これらの方法は、こ
の発見を、類似する化合物のライブラリを精製するのに
最適な条件の決定に用いる。
【００１８】これらの方法の利点は、分析用ＨＰＬＣを
行うのであれば、分離用ＨＰＬＣを行う前に代表試料に
対してのみ行うことである。ここに記載される方法を用
いて、分離用ＨＰＬＣによって精製される化合物の全て
又は実質的に全ての純度を９０パーセントを上回るもの
にすることができる。
【００１９】（定義）ここで用いられる場合、「分離用
ＨＰＬＣ」という用語及び同様の用語は、高（５００以
上）マイクログラム、ミリグラム、又はグラムのサイズ
の生成物画分を生成することが可能であるＨＰＬＣシス
テムを意味する。「分離用」という用語には分離用及び
半分離用の両者が含まれるが、ナノグラムから低マイク
ログラムの範囲の画分をもたらす分析用カラムを含むこ
とは意図されていない。
【００２０】ここで用いられる場合、「機械的に動作可
能」という用語は、開閉弁を指す場合、その異なる位置
が手動動作以外によって、すなわち、コンピュータ選択
によって選択される弁を意味する。実際の機械的動作は
電気的（すなわち、ソレノイド制御弁）、気圧式（すな
わち、空気圧制御弁）、水力式（液圧制御弁）、又は他
のあらゆる等価手段であり得る。
【００２１】ここで用いられる場合、「ＨＰＬＣ適合性
検出器」は、化合物ピークが溶出する際に検出可能な信
号をもたらすことが可能である、ＨＰＬＣシステムにお
いて用いるのに適する検出器である。例えば、化合物が
溶出するときにその化合物から信号を生成することが可
能である検出器がＨＰＬＣ適合性検出器である。成分の
吸光度が大きく変化する場合、２つ以上の検出器を用い
ることが必要となることがある。所望の成分を検出する
ことが可能である検出器は、それが非所望ピークを検出
できないことで「不適合」検出器であるということはな
い。
【００２２】「廃棄物リザーバ」は、対象の化合物を含
まない溶出液、例えば、処理の間にカラムを再生するの
に用いられる溶媒又は対象の化合物の溶出の前後にカラ
ムから追い出される溶出液を収集するのに適する終着点
である。適切な廃棄物リザーバにはフラスコ、ボトル、
又はジャーが含まれる。
【００２３】ＨＰＬＣ装置置換クロマトグラフィー（そ
の例がＨＰＬＣである）は、試料中においては固定相
（ＳＰ）と移動相（ＭＰ）とのバランスがＳＰの方向に
シフトするという原理に基づく。試料の１つの成分が列
車のように互いに置き換わり、ＳＰに対するより大きい
親和性を有する置換剤が画分によってこの列車をカラム
の外に押し出す。ガスクロマトグラフィー、液体クロマ
トグラフィー及びＨＰＬＣクロマトグラフィーが置換ク
ロマトグラフィーの最も公知の例の幾つかである。
【００２４】ＨＰＬＣ装置は、典型的には、少なくとも
以下の構成要素を含む：適切な固定相、移動相が充填さ
れたカラム、圧力下で移動相を強制的にカラムに通すた
めのポンプ、及びカラムから溶出する化合物の存在を検
出するための検出器。これらの装置は、ここに記載され
る方法を用いてでは必要なものではないが、任意に、勾
配溶出に備えた手段を含むことができる。
【００２５】ＨＰＬＣ分離を実施するための処理時間法
及び装置は当該技術分野において公知であり、例えば、
以下の参考文献に記載されている：Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔ
ｏｇｒａｐｈｙ，１９２：２２２−２２７（１９８
０）、Ｊ．Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ
ｙ ４：６６１−６８０（１９８１）及びＪ．Ｃｈｒｏ
ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２４９：１９３−１９８（１９
８２）。
【００２６】適切な固定相は対象の化合物が溶出するも
のである。好ましいカラムは逆相カラムであり、これら
は天然（異なる長さのアルキル鎖を有するシリカゲル）
又は合成架橋ポリマー（スチレン及びジビニルベンゼン
からなる）であり得る。固定相の粒径は数μｍから数１
００μｍの範囲内である。最も好ましい固定相はＣ１ ８
カラムである。
【００２７】適切な検出装置には質量分光計及びＵＶ検
出器が含まれる。ここに記載される方法では、試料を検
出すべき時期を決定するのにこれらの検出器の両者が用
いられる。
【００２８】ここに記載される方法は、ポンプヘッド、
カラムサイズ、移動相及び吸着剤の粒径に応じて、しば
しば比較的高い圧力（例えば、約２０００ｐｓｉまで）
の使用を必要とする。これらの圧力は、標準的な分離用
ＨＰＬＣの通常の動作条件を超えるものであってもよ
い。また、これらの方法は、しばしば、標準的な分離用
ＨＰＬＣの通常の動作条件で用いられるものを超える移
動相の流速（例えば、３０ｍＬ／分超）の使用も必要と
する。
【００２９】幾つかの態様においては、メタノール／水
が移動相として用いられる。メタノール／水溶媒系は、
アセトニトリル／水を用いる他の点では等価の系（これ
はより一般的に用いられるが、より経費がかかるもので
あり得る）よりも粘性である。粘度の増加は高い背圧を
生じる傾向にあり、高圧配管に加えて通常の内径よりも
大きい配管の使用を必要とする可能性がある。さらに、
比較的小さい粒径（例えば、５ミクロン以下）でのカラ
ム充填（吸着剤）の使用は背圧を生じ、それによってよ
り広い配管の使用がさらに指示される可能性がある。
【００３０】精製方法 この方法は、構造的に類似する化合物のライブラリから
の化合物の代表試料をＴＬＣ及び／又は分析用ＨＰＬＣ
によって評価し、どの帯域にそれらがＴＬＣプレート上
で移動し、及び／又は分析用ＨＰＬＣカラムから流出す
るのかを決定することを含む。ひとたびその帯域が同定
されると、相関する分離又は半分離法を用いてそのライ
ブラリを精製する。
【００３１】ＴＬＣプレート上での保持因子及び／又は
分析用ＨＰＬＣトレースでの保持時間の一連の３つ以上
の帯域を決定し、分離用ＨＰＬＣプロトコルとそれらの
帯域の各々とを相互に関連付けることができる。これら
の帯域は、例えば、ＴＬＣプレート上での低、中、及び
高Ｒｆであり得、ここで、低、中及び高は恣意的な用語
であって、１つの帯域中の化合物を他の帯域中の化合物
から分離する相互に関連付けられた分離用又は半分離用
ＨＰＬＣプロトコルに相当するよう、あらゆる適切な様
式で定義することができる。所与の分析用ＨＰＬＣおよ
び／またはＴＬＣプロトコルについて、ＨＰＣＣ条件の
セットが同定でき、ここで、一つの帯域の化合物を他の
化合物のから分離する。
【００３２】したがって、化合物のライブラリ中の全て
の、又は実質的に全て（すなわち、９５％を超える）の
化合物が同じ帯域中に存在することをＴＬＣ又は分析用
ＨＰＬＣが示す場合、それらは全て１つの相互関連付け
られたＨＰＬＣプロトコルを用いて精製することができ
る。
【００３３】ここで用いられる場合、代表試料は、典型
的にはライブラリの１０パーセント未満、より好ましく
はライブラリの５パーセント未満、最も好ましくはライ
ブラリの２ないし５パーセントである。試料中の化合物
の数は（極性の、したがって、ＨＰＬＣカラムでの保持
時間又はＴＬＣプレートでの保持因子の点での）ライブ
ラリの多様性に依存する。代表的な化合物は、可能であ
るならば、その方法がライブラリ中の全ての化合物に適
用可能であることを確実にする助けとなるように、その
ライブラリにおいて合成された最高極性及び最低極性の
化合物を含むべきである。
【００３４】ここで用いられる場合、帯域は保持時間又
は保持因子の範囲を指す。例えば、幾つかの化合物はほ
とんど移動することがない（ほぼ０のＲｆ）。他のもの
は低Ｒｆ（例えば、０．０５ないし０．２）、中Ｒｆ
（例えば、０．２ないし０．８）、又は高Ｒｆ（０．８
超）で移動する。ＴＬＣを用いて、及びこれらの保持因
子範囲を用いて、低、中及び高の３つの帯域を同定する
ことができる。これらの帯域は、ＴＬＣプレート上を特
定のＲｆで特定の帯域内に移動する化合物を精製する分
離用又は半分離用ＨＰＬＣ条件に相互に関連付けること
ができる。一連の化合物をこれらの代表的な帯域を用い
てＴＬＣ及び分離用ＨＰＬＣにかけたが、それらの結果
は実施例１に記載する。ＴＬＣプレート上で化合物を溶
出するのに好ましい溶媒系は８０パーセントメタノール
／２０パーセント水（ｖ／ｖ）であり、これは実施例１
において用いた溶媒系である。
【００３５】好ましくは、精製プロトコルでは４つ以上
の帯域を用いる。当業者は、所定の溶媒系を用いるＴＬ
Ｃプレート上での保持因子の範囲、又は所定のカラム充
填及び溶媒系を用いる分析ＨＰＬＣカラムでの保持時間
の所定の範囲を考慮して帯域の適切な組を容易にかつ主
観的に決定し、これらの帯域を特定の帯域に入る全ての
化合物を精製するのに有効な分離用ＨＰＬＣ条件と相互
に関連付けることができる。
【００３６】ここに記載される方法を用いて、ライブラ
リに広範に適用される条件の組を迅速に同定することが
できる。これにより、ライブラリを分離用ＨＰＬＣ条件
に晒す前にそのライブラリ全体に対して分析用ＨＰＬＣ
を実施することを含む伝統的な方法と比較したとき、ラ
イブラリを精製するための非常に迅速なターンアラウン
ド・タイムが得られる。
【００３７】化合物のライブラリを精製するのに適切な
条件は、そのライブラリの代表試料を所定の分析用ＨＰ
ＬＣカラム、溶媒系及び流速、及び／又は所定のＴＬＣ
裏層及び溶媒系について経路探索することによって実現
することができる。相関する分離又は半分離ＨＰＬＣ法
はそれらの精製パラメータを変更することなく化合物ラ
イブラリの精製に適用することができ、そのため単一の
方法をそのライブラリ全体に適用することができる。
【００３８】好ましくは、ＴＬＣ及びＨＰＬＣの両者を
化合物の試料に対して行う。ライブラリ全体を精製する
前に分離用又は半分離用ＨＰＬＣをそのライブラリから
の化合物の試料に対して行うことも好ましい。これによ
って、例えば、代表試料中の化合物の純度を決定するこ
とにより、それらの条件がそのライブラリ全体を精製す
るの適切であることを確認することができる。また、ラ
イブラリの１０ないし１００％、好ましくは５０ないし
１００％に対してＴＬＣを行い、そのＴＬＣを代表試料
におけるものと比較することもできる。ライブラリ全体
に対してＴＬＣを行い、及び／又は化合物の代表試料の
純度を決定することにより、そのライブラリの大部分が
適度に精製され得ることを確実なものとすることができ
る。純度が代表試料に関して適切なものではない場合、
又はそのライブラリのＴＬＣが代表試料のものと十分に
一致しない場合、代わりの分離用ＨＰＬＣ条件を用いる
ことができる。
【００３９】ここに記載される方法は、化合物のライブ
ラリの精製及び特徴付けの時間を実質的に節約し、かつ
純度が９０％を上回る化合物を提供することが可能であ
る。
【００４０】一つの態様において、本発明は以下の工程
の実施を含む： ａ）精製しようとする化合物のライブラリを選択する工
程、 ｂ）該ライブラリの代表試料に対してＴＬＣ及び／又は
分析用ＨＰＬＣを行う工程であって、該試料は該ライブ
ラリの１０パーセント未満を構成する工程、 ｃ）該代表試料が分析用ＨＰＬＣカラムからどのように
溶出するか（保持時間の帯域の同定）、及び／又は該試
料がＴＬＣプレート上をどのように移動するか（保持因
子の帯域の同定）に応じて、相互に関連付けられた分離
用ＨＰＬＣ法を決定する工程、及び ｄ）該ライブラリの全て又は実質的に全てを精製する工
程、ここで、該相互に関連付けられた分離用ＨＰＬＣ法
は、分析用ＨＰＬＣが行われる場合には保持時間の３つ
以上の帯域の間の相関、及び／又はＴＬＣが行われる場
合には保持因子の３つ以上の帯域の間の相関に基づい
て、代表試料中の実質的に全ての化合物が特定の帯域に
入るのであれば特定の相互に関連付けられた分離用ＨＰ
ＬＣプロトコルを該帯域内に入る化合物の精製に用いる
ことができるように決定される。
【００４１】好ましくは、分析用ＨＰＬＣ及びＴＬＣの
両者を工程ａにおいて行う。代表試料は、好ましくは、
そのライブラリの全て又は実質的に全てを精製する前に
分離用ＨＰＬＣによって精製する。代表試料を精製した
後、好ましくは、その試料中の化合物の純度を決定す
る。これにより、その方法をチェックしてそれが有効に
働くことを確実なものにするための迅速かつ有効な手段
が得られる。
【００４２】純度を決定した後、任意に、工程ａにおい
て行ったＴＬＣと同じであるか、又は実質的に同じ条件
下で、そのライブラリの１０ないし１００パーセント、
好ましくは５０ないし１００パーセントに対してＴＬＣ
を行うことができる。これにより、代表試料に適合する
精製条件がそのライブラリ全体にも適合することが確認
される。
【００４３】代表試料の純度をチェックし、ライブラリ
の大部分に対してＴＬＣを行うことにより、その技術が
化合物を適度に精製し、それらの条件がライブラリ全体
に広範に適合することを確認することができる。所望の
純度が得られない場合、及び／又は代表試料及びライブ
ラリの１０ないし１００パーセントのＴＬＣが、化合物
が同じ帯域に移動することを示す場合、代わりの分離用
ＨＰＬＣプロトコルを決定する必要がある。幾つかの場
合には、別々のプロトコルをそのライブラリの一部に適
用することができる。
【００４４】ライブラリの全て又は実質的に全ての分離
用ＨＰＬＣの間、分離用ＨＰＬＣカラムから溶出する試
料中の対象の化合物の存在をＵＶ及び／又はＭＳ検出を
用いて決定することによって画分の収集を開始すること
が好ましい。
【００４５】一つの態様においては、化合物のライブラ
リは、 ａ）化合物又は化合物のライブラリからの代表試料のＲ
ｆ又は保持時間をＴＬＣ又は分析用ＨＰＬＣによって決
定し、 ｂ）該Ｒｆ又は保持時間を、該ＴＬＣ又は分析用ＨＰＬ
Ｃに用いられる条件に相互に関連付けられている一組の
パラメータを有する一組の分離用ＨＰＬＣ条件に相互に
関連付け、及び ｃ）該化合物又は該ライブラリ中の化合物に対して分離
用又は半分離用ＨＰＬＣを行い、ここで、 ｉ）該分離用又は半分離用ＨＰＬＣカラムからの溶出液
の一部はＵＶ検出器に送り、該溶出液の他方の部分は質
量分光計（ＭＳ）に送り； ｉｉ）対象の化合物が溶出していることをＵＶ及び／又
はＭＳが示すまで該溶出液を廃棄し、 ｉｉｉ）対象の化合物を含む試料をＭＳによって特徴付
け、 ｉｖ）対象の化合物を含む試料を集め、 ｖ）いかなる不純物もカラムから除去されるようにカラ
ムを適切な溶媒で洗浄し； ｖｉ）カラムを再平衡化し、及び ｖｉｉ）精製及び／又は特徴付けようとする化合物の各
々についてこれらの工程を必要に応じて反復する、こと
によって精製される。
【００４６】これらの方法により同じ時間枠でのＵＶ吸
光度及びＭＳデータの収集が可能となる。ＭＳによる画
分の収集にはそれに伴う幾つかの危険性があり、これに
は分子量の計算間違いによる所望の化合物の損失、付加
物の形成、及び用いられる条件下でイオン化しない化合
物の損失が含まれる。他方、ＭＳによる画分の収集の利
点は２、３の画分のみが集められるというものである。
ＵＶ及びＭＳの両者によって画分の収集を開始すること
により、ＭＳによる画分の収集の利点が得られ、かつ不
利益が回避される。しかしながら、そのように行うこと
に伴う困難は、ＵＶによって分画を開始すること、及び
高流速勾配を用いることが困難であることである。ＭＳ
及び画分収集に向かう信頼のおける流れの分割を保証す
るため、メークアップ・ポンプ（第２フロー・スプリッ
タの前でＭＳ器機に流入する流れを希釈するオンライン
希釈ポンプ）と探索子との間のラインにおける背圧はカ
ラム後入力と画分収集との間のラインにおける背圧より
小さいものでなければならない。望ましい圧力を達成す
るため、配管の必要条件を標準的なＨＰＬＣ装置からよ
り大きい直径に変更して増加した流速を扱い、かつ、任
意に、画分の収集を開始するのにＵＶ／ＤＡＤ（ダイオ
ードアレイ検出器）又は他の適切な検出器を用いること
ができる。
【００４７】以下の工程は任意に行うことができる。化
合物に関して集められた情報（すなわち、ＵＶ吸光度及
びＭＳ情報）は、リレーショナルデータベースに、好ま
しくはそれらの化合物に関する他の情報（すなわち、合
成条件、生物検定情報、収率等）と共に記憶することが
できる。化合物は、さらに、例えば１Ｈ ＮＭＲによっ
て特徴付けることができる。より迅速に化合物を精製す
るため、ＨＰＬＣに２つ以上のカラムを含め、そのうち
の１つが化合物を精製する間に他のもの（１つもしくは
複数）を洗浄及び再生することができる。この工程はク
ロマトグラフィーの平衡化中断時間を取り除く。
【００４８】精製することができる化合物の型 事実上、ＨＰＬＣカラムで溶出し得るあらゆる有機化合
物をここに記載される方法に従って精製することができ
る。好ましくは、精製しようとする化合物は化合物のラ
イブラリ、より好ましくは化合物のリード生成又はコン
ビナトリアルライブラリの一部である。この方法を用い
て得ることができる純度は、典型的には９０％を上回
り、好ましくは９５％を上回る。
【００４９】「ライブラリ」という用語は、少なくとも
３種類、好ましくは１０２ないし１０９種類、より好ま
しくは１０２ないし１０４種類の化合物を指す。好まし
くは、これらの化合物は、それらの容易な合成を可能に
する単一の溶液又は反応混合液の中の多数の化合物とし
て調製される。化合物のライブラリ中の各々のメンバー
は単離することができ、かつ、任意に、特徴付けること
ができる。
【００５０】典型的には、これらの化合物は、ライブラ
リ、例えば、化合物のコンビナトリアルライブラリ又は
リード最適化ライブラリを生成するため、少なくとも１
つの位置、好ましくは２つ以上の位置において様々な異
なる官能基で修飾可能である核構造を有する。
【００５１】典型的な核構造は、少なくとも３つの炭素
元素、及び通常は他の分子の付加による反応を受けてそ
の構造を変化させることが可能な少なくとも１つ、好ま
しくは少なくとも２つの部位を含む、直鎖、分岐鎖又は
環状有機化合物である。
【００５２】殺虫剤のファミリーの例には、１−アリー
ルピラゾール、ピロール、ピロリドン、及びニコチン酸
誘導体が含まれる。しかしながら、適切な結合部位に結
合することができるリガンド化合物は、例えば、ステロ
イド、ホルモン、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレ
オチド、オリゴリボヌクレオチド、酵素等であり得る。
【００５３】適切な核構造には：ペプチド、タンパク
質、オリゴヌクレオチド、オリゴリボヌクレオチド、オ
リゴ糖、アルカロイド、キノリン、イソキノリン、ベン
ズイミダゾール、ベンゾチアゾール、プリン、ピリミジ
ン、チアゾリジン、イミダゾピラジノン、オキサゾロピ
リジン、ピロール、ピロリジン、イミダゾリドン、ギノ
ロン（ｇｕｉｎｏｌｏｎｅｓ）、アミノ酸、マクロライ
ド、ペネム（ｐｅｎｅｍｓ）、糖、キサンチン、ベンゾ
チアジアジン、アントラサイクリン、ジベンゾシクロヘ
プタジエン、イノシトール、ポルフィリン、コリン、及
び幾何学的実質（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ ｓｏｌｉｄｓ）
を提示する炭素骨格（例えば、ドデカヘドラン）が含ま
れるが、これらに限定されるものではない。これらの核
構造は天然化合物から誘導することができ、又は非天然
修飾を含むことができる（すなわち、非天然アミノ酸及
びヌクレオチド）。
【００５４】核構造に適する修飾には以下のものが含ま
れる： １）アミノ酸誘導体、これには、例えば、天然アルファ
・アミノ酸の全て、誘導体を含む種、天然側鎖の変種又
は模倣体を含む天然及び合成アミノ酸残基；Ｎ−置換グ
リシン残基；機能的にアミノ酸残基を模倣することが知
られる天然及び合成種、例えば、スタチン、ベスタチン
等。
【００５５】２）ヌクレオチド誘導体、これには、天然
及び合成ヌクレオチド、例えば、アデノシン、チミン、
グアニジン、ウリジン、シトシン、これらの誘導体並び
にプリン環、糖環、リン酸結合の変種及び模倣体並びに
これらの幾つか又は全ての組み合わせが含まれる。様々
な可能性のある構造修飾の全てを含むヌクレオチドプロ
ーブ（２ないし２５ヌクレオチド）及びオリゴヌクレオ
チド（２５ヌクレオチド超）；天然ヌクレオチドのホモ
及びヘテロ合成組み合わせ及び順列；合成プリン又はピ
リミジン種を含む誘導体及び変種、又はそれらの模倣
体；様々な糖環模倣体；並びにホスホジエステル、ホス
ホロチオネート、ホスホロジチオネート、ホスホロアミ
デート、アルキルホスホトリエステル、スルファメー
ト、３’−チオホルムアセタール、メチレン（メチルイ
ミノ）、３−Ｎ−カルバメート、モルホリノカルバメー
ト及びペプチド核酸アナログを含むがこれらに限定され
るものではない、広く様々な代替骨格アナログ。
【００５６】３）炭水化物誘導体、これには天然の生理
学的活性炭水化物；関連化合物、例えば、グルコース、
ガラクトース、シアル酸、ベータ−Ｄ−グルコシルアミ
ン及びノジョリマイシン（ｎｏｊｏｒｉｍｙｃｉｎ）
（これらは両者ともグルコシダーゼの阻害剤である）；
疑似糖、例えば、５ａ−カルバ−２−Ｄ−ガラクトピラ
ノース（これは、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐ
ｎｅｕｍｏｎｉａ）の成長を阻害することが知られる）
（ｎ＝１）；合成炭水化物残基及びこれらの誘導体（ｎ
＝１）並びに高マンノースオリゴ糖、既知抗生物質スト
レプトマイシンを含む、自然界に見出されるこれらの複
合オリゴマー性順列の全て（ｎ＞１）が含まれる。
【００５７】４）天然又は合成有機構造モチーフ。「モ
チーフ」という用語は、生物学的活性を有する特定の構
造を有するか、又はそれを含む有機分子、例えば、酵素
活性部位に相補的な構造を有する分子と定義される。こ
の用語には、ファルマコフォアを含む医薬化合物のあら
ゆる公知基本構造又はそれらの代謝物が含まれる。これ
らの基本構造には、ベータラクタム、例えば、細菌細胞
壁の生合成を阻害することが知られるペニシリン；ＣＮ
Ｓ受容体に結合することが知られ、かつ抗うつ剤として
用いられるジベンズアゼピン；細菌リボシムに結合する
ことが知られるポリケチドマクロライド等が含まれる。
これらの構造モチーフは、一般には、リガンド受容器に
対する特異的で望ましい結合特性を有することが知られ
ている。
【００５８】５）天然もしくは合成色素又は写真的増幅
が可能である残基のようなレポーター要素であって、ス
ルファミンイミド構造又は反応図式に合成によって組み
込むことができる反応基を有し、かつその基のレポート
機能を妨害したり悪影響を及ぼすことなくその基を介し
て結合することができるレポーター要素。好ましい反応
基は、アミノ、チオ、ヒドロキシ、カルボン酸、カルボ
ン酸エステル、特にはメチルエステル、酸塩化物、イソ
シアネート、アルキルハロゲン化物、アリールハロゲン
化物及びオキシラン基である。
【００５９】６）二重結合のような重合性基、又は縮合
重合もしくは共重合を受けることが可能な他の官能性を
含む有機部分。適切な基には、ビニル基、オキシラン
基、カルボン酸、酸塩化物、エステル、アミド、アズラ
クトン、ラクトン及びラクタムが含まれる。Ｒ及びＲ’
について定義されるもののような他の有機部分を用いる
こともできる。
【００６０】７）巨大分子成分、例えば、上に概述され
る様々な反応基を介して、リガンド−受容体分子への結
合種の結合が悪影響を及ぼさず、かつ結合する官能性の
相互作用活性がその巨大分子によって決定又は制限され
るような様式でスルファミンイミドモジュールに結合す
ることができる巨大分子表面又は構造。巨大分子成分の
例には、多孔性及び非多孔性無機成分、例えば、通常又
は逆相クロマトグラフィー分離、水の精製、塗料用顔料
のような様々な用途に通常用いられるシリカ、アルミ
ナ、ジルコニア、チタニア等；タンパク質の精製、水の
軟化に通常用いられる、スチレンジニルベンゼンビー
ズ、様々なメタクリレートビーズ、ＰＶＡビーズのよう
な合成成分を含む多孔性及び非多孔性有機巨大分子成
分；他の適用、天然成分、例えば天然、並びに機能化セ
ルロース、例えば、アガロース及びキチン、ナイロン、
ポリエーテルスルホンもしくは上記材料のいずれかで作
製したシート及び中空繊維膜が含まれる。これらの巨大
分子の分子量は約２０００ダルトンまでの範囲であり得
る。
【００６１】適切な化学修飾には、適切な有機部分、放
射性部分、水素原子、有機部分であって適切な求電子性
基、例えば、アルデヒド、エステル、アルキルハロゲン
化物、ケトン、ニトリル、エポキシド等；適切な求核性
基、例えば、ヒドロキシ、アミノ、カルボキシレート、
アミド、カルバニオン、尿素等を含む有機部分；又は下
に定義される他の構造的多様性要素のうちの１つへの結
合も含まれる。加えて、化学修飾は、単環、二環式もし
くは三環式環系；又は前記式で定義される化合物の反復
単位の末端に結合し；もしくは他の部分に別々に結合し
てもよい構造の形態であってもよい。
【００６２】これらの修飾は同じであっても異なってい
てもよく、各々が１つ以上の炭素、窒素、イオウ、酸素
原子、あらゆる他の無機要素又はそれらの組み合わせで
あり得る。例えば、核構造をシアノ、ニトロ、ハロゲ
ン、酸素、ヒドロキシ、アルコキシ、チオ、直鎖もしく
は分岐鎖アルキル、炭素環式アリール及びそれらの置換
もしくは複素環誘導体で修飾することができる。これら
の修飾は隣接分子核が異なっていてもよく、それらが結
合する炭素原子に関して選択された立体化学配置を有し
ていてもよい。
【００６３】化合物は、論理的な方式で、マルチチュー
ブアレイ又はマルチウェルプレートにおいて、化合物の
配列の形態で配置することができる。好ましくは、これ
らの化合物は全て中心核構造を有し、かつ特定の用途に
最適な化合物を決定するための構造−活性関係の同定を
可能にする修飾を有する。
【００６４】この配列は、合成、精製、及び評価の効率
を高めてその試験から得られた情報内容を最大化し、か
つそのデータの迅速な評価を容易にするような方式で順
序付けることができる。
【００６５】これらの配列は論理的に順序付けられ、か
つ配置された、化合物の下位配列で構成することができ
る。共通の構造及びその構造の様々な修飾を有する構造
的に関連する個々の化合物の、空間的にアドレス指定可
能な組を含む下位配列を調製することができる。下位配
列は、その構造の複数の位置が修飾され、かつ所定の下
位配列内のいかなる２つの化合物の間の変動にも、例え
ば、特定の構造のゼロ（０）又は１つ（１）の変化が含
まれ得るときに特に有用である。
【００６６】これらの下位配列及び配列は、系統付けを
して配列の組を含むより高次の配列を形成することがで
き、かつより高次の配列として評価して関心のある共通
核構造についての最適構造の特徴に関する情報を得るこ
とができる。
【００６７】下位配列は、所望の用途に対するものに加
えて、物理及び反応特性の変化に対する効果に対する既
知断片が有する効果に関する情報を化合物の直接比較が
自動的に生じるような方式で配置することができる。あ
らゆる数の独立に可変の構造的な多様性要素ｎに対する
単純な集合論によってもたらされるように、ｎ個の構造
的多様性要素の各々の変動の効果に関する関係情報が適
切に配置された下位配列の相対アドレスからの試験デー
タの比較によって同様の方式で得ることができるよう
な、ｎ個の論理的な高次配列配置が存在する。
【００６８】核分子の可能性のある合成変動の全てをス
クリーニングすることにより、最適候補の選択は化合物
選択の「合理的な」基礎というよりもデータ収集方法の
機能である。望ましい物理的及び化学的特性、すなわ
ち、結合親和性及び生物活性を迅速に最適化することが
でき、特定の配列又は下位配列内で構造の変化に直接相
互に関連付けることができる。
【００６９】マルチチューブ・ラック内での各化合物の
空間アドレスは既知であるため、これらの配列を試験し
て、肯定的な結果が：（１）所定の空間アドレス内の化
合物に関する情報；（２）一組の系統的構造同属種に関
するこの情報の同時に生じる近傍位置；（３）肯定的な
結果の存在下において否定的な結果から関係構造情報を
取り出す能力をもたらすように完全な関係構造情報を生
成することができる。
【００７０】好ましくは、精製はコンピュータ制御で行
い、マルチチューブアレイにおける各チューブ又はマル
チウェルプレートにおける各ウェルの位置をコンピュー
タに保存し、合成しようとする化合物の素性を「メモリ
ーマップ」又は化合物のデータをチューブ又はウェルの
位置に相互に関連付けるための他の手段でコンピュータ
に保存する。その代わりに、精製を手動で、好ましくは
マルチチューブ・ラック又はマルチウェルプレートで行
い、その情報をコンピュータで保存することができる。
それらのチューブ内の化合物を精製し、及び／又は特徴
付けることができる。
【００７１】以下の非限定的な例を参照することで本発
明がさらに理解されるであろう。
【００７２】実施例１：分析法 一連の化合物を、Ｃ１８裏層を有するＴＬＣプレート
で、８０／２０ｖ／ｖメタノール／水溶媒系を用いて評
価した。これらの化合物は、保持因子（Ｒｆ）の４つの
範囲、Ｒｆ＝０、０．０５＜Ｒｆ＜０．２、０．２＜Ｒ
ｆ＜０．８、又はＲｆ＞０．８のうちの１つを有するこ
とが見出された。
【００７３】Ｒｆ＝０ではない化合物を、内径が４．６
ｍｍである５ミクロン、５０ｍｍＣ１８逆相ＨＰＬＣカ
ラムから溶出した。これらの化合物は様々な勾配の２溶
媒系、溶媒Ａ（水／アセトニトリル９８／１．５（ｖ／
ｖ））及び溶媒Ｂ（１００％メタノール）を用いて溶出
した。
【００７４】０．２ないし０．８のＲｆを有する化合物
は以下に記載されるプロトコルＩ又はＩＩを用いて溶出
した。０．０５ないし０．２のＲｆを有する化合物は以
下に記載されるプロトコルＩＩ又はＩＩＩを用いて溶出
した。０．８を上回るＲｆを有する化合物は以下に記載
されるプロトコルＩ又はＩＶを用いて溶出した。これら
のプロトコルを表の形態で以下に示す。
【００７５】
【表１】
【００７６】
【表２】
【００７７】
【表３】
【００７８】
【表４】
【００７９】分析用カラムに対するこれらの４つのプロ
トコルは、分離用ＨＰＬＣカラム（内径５０×２０ｍ
ｍ、５ミクロン以下の粒径を有するＣ１８吸着剤を備え
る）に対する以下の４つのプロトコル（以下に表５−８
に示す）にスケールアップすることができる。
【００８０】
【表５】
【００８１】
【表６】
【００８２】
【表７】
【００８３】
【表８】
【００８４】この例においては、オート・インジェクタ
は８１９注入弁アクチュエータを備えるＧｉｌｓｏｎ２
１５液体ハンドラであった。画分コレクタはＧｉｌｓｏ
ｎ２１５液体ハンドラであった。勾配ポンプは５０ＳＣ
ポンプヘッドを備える２つのＧｉｌｓｏｎポンプ３０６
モデルであった。希釈ポンプは１．５ＳＣポンプヘッド
を備えるＧｉｌｓｏｎ３０７ポンプであった。平衡化ポ
ンプは５０ＳＣポンプヘッドを備えるプログラム可能な
ＨＰＬＣ Ｇｉｌｓｏｎポンプ３０５モデルであった。
ミキサは８０６Ｍｏｎｏｍｅｔｒｉｃモデルを備えるＧ
ｉｌｓｏｎ８１１Ｃダイナミック・ミキサであった。圧
力モニタはＧｉｌｓｏｎ８０６モデル圧力モニタであっ
た。用いられたＨＰＬＣ検出器はｍｉｃｒｏｍａｓｓか
らのＭＳ検出器Ｐｌａｔｆｏｒｍ ＬＣモデルを備える
Ｇｉｌｓｏｎ１７０モデル・ダイオードアレイ検出器で
あった。このＭＳ検出器は、大気化学的イオン化（ＡＰ
ＣＩ）及びＭｅｇａｆｌｏｗエレクトロスプレー・イオ
ン化探索子の両者を用いることが可能な大気圧イオン化
（ＡＰＩ）源を備える４部構成質量アナライザを含む。
この質量分光計はロータリーポンプ及びトランスフォー
マを備える。開閉弁は２つのＧｉｌｓｏｎ弁メート及び
１０ポートＲｈｃｏｄｙｎｅ開閉弁であった。スプリッ
タはＬＣ充填による１つの１／１０００ ＡＣＵＲＡＴ
Ｅ及びＵｐｃｈｕｒｃｈスプリッタであった。データ収
集システムはＤｉｇｉｔａｌ ＣＥＬＥＢ ＧＬ−２コ
ンピュータ、モニタ及びＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒ
ｄ Ｌａｓｅｒ Ｊｅｔ ６Ｐプリンタであり、これは
Ｗｉｎｄｏｗｓ ＮＴ Ｖ．４．０の下で作動するｍｉ
ｃｒｏｍａｓｓ Ｍａｓｓｌｙｎｘ ＮＴ ３．１Ｂ
６、ＯｐｅｎＬｙｎｘ ＶｅｒｓｉｏｎＴＭ、Ｆｒａｃ
ｔｉｏｎＬｙｎｘＴＭ及びＧｉｌｓｏｎ製Ｕｎｉｐｏｉ
ｎｔ ｖ．１．６４ソフトウェアを含んでいた。
【００８５】自動ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ／ＵＶ／ＭＳを以
下に示すように組み立てた。
【００８６】
【化１】
【００８７】このシステムの配管のサイズは以下の通り
である：ミキサからインジェクタまで、インジェクタか
らカラムまで、カラムからＵＶダイオードアレイ検出器
まで、及びＵＶからスプリッタ・ボックスまではＧｒｅ
ｅｎ Ｐｅｅｋ、Ｕｐｃｈｕｒｃｈ Ｓｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ，ＩＮＣ ０．０３”ＩＤであった。メークアップ
・ポンプからスプリッタ・ボックスまではＧｒｅｅｎ
Ｐｅｅｋ、Ｕｐｃｈｕｒｃｈ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，
ＩＮＣ ０．０１”ＩＤであった。スプリッタ・ボック
スからｕｐｃｈｕｒｃｈスプリッタまではＧｒｅｅｎ
Ｐｅｅｋ、Ｕｐｃｈｕｒｃｈ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，
ＩＮＣ ０．００７”ＩＤであった。Ｕｐｃｈｕｒｃｈ
スプリッタから廃棄物リザーバまではＧｒｅｅｎ Ｐｅ
ｅｋ、Ｕｐｃｈｕｒｃｈ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＩＮ
Ｃ０．０１”ＩＤであった。スプリッタから画分コレク
タまでは０．０４”ＩＤ（Ｔｕｂｉｎｇ Ａｃｃｕｒａ
ｔｅ／ＦＣ カタログ番号ＰＥ−１０００ＦＣ）であっ
た。
【００８８】これらの配管サイズにより、３０ｍＬ／分
の流速及び比較的小さい吸着剤粒径（５ミクロン以下）
を以下に記載される精製方法で用いることが可能となっ
た。従来のＨＰＬＣにおいて典型的に見出されるより小
さい配管サイズでは、この流速の速さを達成することは
非常に困難であり、したがって、この精製方法を実施す
ることが非常に困難である。
【００８９】上図はＨＰＬＣが作動する間の試料単離の
経路を示す。注入後、勾配ポンプからの溶媒がカラムＡ
内の成分を分離し、その間カラムＢは再平衡化ポンプに
よって再平衡化されている。１０ポートＲｈｅｏｄｙｎ
ｅ開閉弁がこの作動を制御する。分離された成分はＵＶ
ダイオードアレイ検出器に入り、次にスプリッタ・ボッ
クスに進む。スプリッタ・ボックスでは、流れが１／１
０００の比で分割される。１部のみがＭＳに進んで残り
は廃棄物リザーバに進み、対象の化合物がＵＶ又はＭＳ
によって検出された後、画分収集が開始されて試料が集
められる。ＭＳに進む流れは希釈ポンプによって、エレ
クトロスプレー（ＥＳＰ）探索子に向かう１．５ｍＬ／
分の流れで希釈される。次に、希釈された流れは第２ス
プリッタ（Ｕｐｃｈｕｒｃｈスプリッタ）によって再度
分割され、約３００μＬのみがＥＳＰ探索子に入って残
りは廃棄物に送られる。第２スプリッタは大気圧化学的
イオン化（ＡＰＣＩ）探索子には必要ない。勾配ポンプ
はＵｎｉｐｏｉｎｔソフトウェアを用いて制御した。
【００９０】ＭＳがピークであるものと思われ、かつそ
のピークが画分コレクタに到達するときの遅延時間に加
え、ＵＶ検出器とＭＳとの間の遅延時間を、クマリンを
標準として用い、メタノール／水（５０／５０）移動相
を用いて測定した。それを以下に表９に示す。
【００９１】
【表９】
【００９２】質量分光計は、遅延時間測定に先立ち、質
量較正のためにＰＥＧ２００からＰＥＧ１０００で較正
した。質量分光計は異なる流速で２つの探索子を変え
た。
【００９３】様々な化合物を、ここに記載される方法を
用いてＨＰＬＣカラムに通した。これらの化合物は１０
０−６５０ｇ／モルの範囲の分子量を有し、試料サイズ
は０．１ないし２００ｍｇの範囲であり、かつ注入容積
は５０ないし２０００マイクロリットルの範囲であっ
た。
【００９４】以下の例はこの高スループット法の精製へ
の使用を示す。
【００９５】実施例２：化合物の小ライブラリの精製 独自に開発した化合物のライブラリを選択し、８０／２
０メタノール／水を溶離液として用いてこれらの化合物
のうちの５つのＴＬＣを得た。そのＴＬＣを以下に示
す。
【００９６】
【化２】
【００９７】このＴＬＣのＲｆは約０．１１であるもの
と算出され、予め決定された分析用ＨＰＬＣ法（実施例
１における方法ＩＩ又はＩＩＩ）に相互に関連付けられ
た。方法ＩＩ及びＩＩＩを別々に評価し、どちらが最良
の分離をもたらすのかを決定した。クロマトグラム（以
下に示す）は、方法ＩＩが不純物からの化合物の精製に
より良好であることを示した。
【００９８】対象の化合物を、２ｍＬの注入容積及び１
５０ｍｇ化合物／２ｍＬ ＤＭＦの濃度で、分離用ＨＰ
ＬＣカラムを用いて精製した。これらの化合物は、分離
用ＨＰＬＣカラムで、３分ないし３分半の保持時間を有
していた。
【００９９】
【化３】
【０１００】化合物の代表試料の精製に続き、ライブラ
リ全体に対してＴＬＣ（以下に示す）を行った。そのＴ
ＬＣは、対象の化合物全てがほぼ同じＲｆ（約０．１）
で溶出することを示す。
【０１０１】
【化４】
【０１０２】分離用ＨＰＬＣ法をライブラリ中の４５０
種類の化合物全てに適用し、平均収量２８ｍｇで９１％
の平均純度を得た。８５％を上回る化合物が９５％を上
回る純度を有していた。
【０１０３】当業者は、ここに記載される本発明の特定
の態様に対する多くの等価物を認識し、又は定型的なも
のを超えることのない実験を用いて確認することができ
るであろう。そのような等価物は以下の請求の範囲に包
含されることが意図されている。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 37/00 １０３ Ｇ０１Ｎ 37/00 １０３ // Ｃ０７Ｂ 61/00 Ｃ０７Ｂ 61/00 Ｃ

Claims (13)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 １種類以上の有機化合物を精製及び／又
    は特徴付けるための方法であって、 ａ）精製しようとする化合物のライブラリを選択する工
    程、 ｂ）該ライブラリの代表試料に対してＴＬＣ及び／又は
    分析用ＨＰＬＣを行う工程であって、該試料は該ライブ
    ラリの１０パーセント未満を構成する工程、 ｃ）該代表試料が分析用ＨＰＬＣカラムからどのように
    溶出するか、及び／又は該試料がＴＬＣプレート上をど
    のように移動するかに応じて、相互に関連付けられた分
    離用ＨＰＬＣ法を決定する工程、及び ｄ）該ライブラリの全て又は実質的に全てを精製する工
    程、を包含し、 該相互に関連付けられた分離用ＨＰＬＣ法は、分析用Ｈ
    ＰＬＣが行われる場合には保持時間の３つ以上の帯域の
    間の相関、及び／又はＴＬＣが行われる場合には保持因
    子の３つ以上の帯域の間の相関に基づいて、代表試料中
    の実質的に全ての化合物が特定の帯域に入るのであれ
    ば、特定の相互に関連付けられた分離用ＨＰＬＣプロト
    コルを該帯域内に入る化合物の精製に用いることができ
    るように決定される方法。
  2. 【請求項２】 分析用ＨＰＬＣ及びＴＬＣの両者を工程
    ａにおいて行う請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 ライブラリの全て又は実質的に全てを精
    製する前に代表試料を分離用ＨＰＬＣによって精製する
    請求項１に記載の方法。
  4. 【請求項４】 代表試料を精製した後に該試料中の化合
    物の純度を決定する請求項３に記載の方法。
  5. 【請求項５】 純度を決定した後、工程ａにおいて行っ
    たＴＬＣと同じであるか又は実質的に同じ条件下で、ラ
    イブラリの１０ないし１００パーセントに対してＴＬＣ
    を行う請求項４に記載の方法。
  6. 【請求項６】 代表試料のＴＬＣとライブラリの１０な
    いし１００パーセントのＴＬＣとを比較する請求項５に
    記載の方法。
  7. 【請求項７】 ライブラリの５０ないし１００パーセン
    トをＴＬＣによって分析する請求項５に記載の方法。
  8. 【請求項８】 代表試料及びライブラリの１０ないし１
    ００パーセントのＴＬＣが同じ帯域への化合物の移動を
    示す場合、ライブラリ全体を分離用ＨＰＬＣで精製する
    請求項６に記載の方法。
  9. 【請求項９】 代表試料及びライブラリの１０ないし１
    ００パーセントのＴＬＣが同じ帯域への化合物の移動が
    ないことを示す場合、ライブラリ全体を代替法を用いて
    分離用ＨＰＬＣによって精製する請求項６に記載の方
    法。
  10. 【請求項１０】 代表試料がライブラリ全体の２ないし
    ５パーセントである請求項１に記載の方法。
  11. 【請求項１１】 ライブラリの全て又は実質的に全ての
    分離用ＨＰＬＣの間、分離用ＨＰＬＣカラムから溶出す
    る試料中の対象の化合物の存在をＵＶ及び／又はＭＳ検
    出を用いて決定することによって画分の収集を開始する
    請求項１に記載の方法。
  12. 【請求項１２】 分離用ＨＰＬＣによって精製される化
    合物の全て又は実質的に全ての純度が９０パーセントを
    上回る請求項１に記載の方法。
  13. 【請求項１３】 分析用ＨＰＬＣを行うのであれば、分
    離用ＨＰＬＣを行う前に代表試料に対してのみ行う請求
    項１２方法。
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