JP2001083153A - 免疫学的クロマト方式を利用した測定方法 - Google Patents
免疫学的クロマト方式を利用した測定方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 免疫学的クロマト方式を用いた測定方法にお
いて，その同一膜上に一定の色調が現れる部分と検体の
濃度依存性の色調が現れる部分を備え，それらの色調を
光学的濃度測定装置または目視的に読み取り未知検体の
濃度を測定する方法。 【解決の手段】区分Ａに少なくとも２種類以上の異種の
標識抗体を移動可能なように設置し，区分Ｂには測定項
目の抗体を，区分Ｃには一定の色調が現れる測定項目に
関係ない抗体を固定してなる免疫学的クロマト分析片に
おいて，未知濃度の検体を２のサンプル注入部より注入
しクロマト展開させた後，区分ＢとＣを光学的に無比書
くし定量する。また区分ＢとＣの色調を目視で比較して
おおよその未知検体の濃度を知る。
いて，その同一膜上に一定の色調が現れる部分と検体の
濃度依存性の色調が現れる部分を備え，それらの色調を
光学的濃度測定装置または目視的に読み取り未知検体の
濃度を測定する方法。 【解決の手段】区分Ａに少なくとも２種類以上の異種の
標識抗体を移動可能なように設置し，区分Ｂには測定項
目の抗体を，区分Ｃには一定の色調が現れる測定項目に
関係ない抗体を固定してなる免疫学的クロマト分析片に
おいて，未知濃度の検体を２のサンプル注入部より注入
しクロマト展開させた後，区分ＢとＣを光学的に無比書
くし定量する。また区分ＢとＣの色調を目視で比較して
おおよその未知検体の濃度を知る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】臨床検査に使用する免疫学的
クロマト（グラフィー）を使用した体液成分測定方法。
クロマト（グラフィー）を使用した体液成分測定方法。
【０００２】
【従来の技術】クロマトを使用した体液成分測定キット
は，一般的には尿糖試験紙や尿蛋白試験紙で使われてお
り，これらは特定成分を化学反応により発色させてその
色調を目視や電気光学的に読みとる方式を取っていた。
尿糖試験紙片を例にとれば，被検査尿による発色度を目
視で，別に印刷した階段状の色調表と比較して，大体の
濃度をつかもうとする方式である。これらの自動読み取
り装置も既に発売され臨床検査に使われている。また化
学反応で検出できない測定対象例えば極微量の蛋白成分
やウイルスなどの測定に、最近は免疫学的クロマト方式
を用いた測定法が普及し，既に多くのキットが発売され
ている。一例を挙げると，妊娠判定試薬やＬＨホルモン
測定試薬や大腸癌（便潜血反応）の試薬，肝炎ウイルス
（ＨＢｓＡｇやＨＢｓＡｂ，ＨＣＡｂなど）の試薬およ
びクラミジア検出試薬などが発売されている。免疫学的
クロマト方式を用いた測定法は，既に原理等も公開され
ており実用化されている。この測定法は，図５に示すよ
うに血液や血清、尿などの検体（４）を所定の検体注入
部（２）へ注入すると，ペーパクロマトの原理に従って
検体は移動する。この展開の途中，区分Ａに金コロイド
標識抗体や色素標識ラテックス抗体（５）が設置してあ
り，検体（４）が移動し標識抗体（５）と接触する事に
より抗原抗体複合物が形成される。この複合物はさらに
移動し，区分Ｂ（６）や区分（７）でそれぞれ免疫学的
に補足されるように構成されているのが一般的であっ
た。またこれらの免疫学的クロマト方式の標識抗体
（５）は，測定項目が２つであれば２種類の標識抗体が
使われていた。これらは区分ＢとＣでそれぞれ別の測定
項目の測定に利用されている。これらは標識抗体の残り
がさらに移動し区分Ｄで捉えられる方法であった。当然
区分Ｂで捉えられる標識抗体は，被検検体の濃度で変わ
る。残った標識抗体も当然被検検体濃度で変化し，区分
Ｄの濃度は変わる。今まで市販されている免疫学的クロ
マト方式を用いた測定法は，区分Ｄを一般的にコントロ
ールラインと称しているが，それは単に被検検体がクロ
マト方式の最後まで移動したことを示すだけに留まって
いた。図５には，従来法である免疫学的クロマト方式の
測定法である妊娠診断薬を例に取り説明する。区分Ａに
は金コロイド標識抗ヒトｈＣＧマウス抗体（５）が移動
可能なように設置され，区分Ｂには抗ヒトｈＣＧマウス
抗体（６）が固定されており，区分Ｃには抗マウスヤギ
抗体（７）が固定されている。妊娠している尿検体
（４）を所定の注入部（２）へ注入すると，ペーパクロ
マトの原理に従って検体（４）は移動する。この尿中の
ｈＣＧは展開の途中の区分Ａで金コロイド標識抗体
（５）と結合し，この複合物はさらに移動し区分Ｂに固
定された抗ヒトｈＣＧマウス抗体（６）に捉えられる
（ヒトのｈＣＧ側を認識）。余った標識抗体（５）はさ
らに移動し区分Ｃで抗マウスヤギ抗体（７）に捉えられ
る（標識抗体側を認識）。また尿中にｈＣＧがない場合
は，標識抗体が区分Ｂに結合することなく通過し，区分
Ｃで捉えられる。従って妊娠反応陽性なら区分ＢとＣに
ラインが出現し，陰性なら区分Ｃにのみラインが出現す
る。この従来法では，区分Ｃに捉えられた金コロイド標
識抗体は，検体のｈＣＧの量により変化する。いわゆる
区分Ｃの色調は一定でないことになる。 参考文献 丸尾 猛他：高感度ｈＣＧ検出キット、ＨＣＧテスト
パック・プラスの基礎的検討と臨床応用、産科と婦人科
５８（８）１４２３，１９９１ 特許公報，特公平７−４６１０７ 公開特許公報，特開平１０−４８２１２
は，一般的には尿糖試験紙や尿蛋白試験紙で使われてお
り，これらは特定成分を化学反応により発色させてその
色調を目視や電気光学的に読みとる方式を取っていた。
尿糖試験紙片を例にとれば，被検査尿による発色度を目
視で，別に印刷した階段状の色調表と比較して，大体の
濃度をつかもうとする方式である。これらの自動読み取
り装置も既に発売され臨床検査に使われている。また化
学反応で検出できない測定対象例えば極微量の蛋白成分
やウイルスなどの測定に、最近は免疫学的クロマト方式
を用いた測定法が普及し，既に多くのキットが発売され
ている。一例を挙げると，妊娠判定試薬やＬＨホルモン
測定試薬や大腸癌（便潜血反応）の試薬，肝炎ウイルス
（ＨＢｓＡｇやＨＢｓＡｂ，ＨＣＡｂなど）の試薬およ
びクラミジア検出試薬などが発売されている。免疫学的
クロマト方式を用いた測定法は，既に原理等も公開され
ており実用化されている。この測定法は，図５に示すよ
うに血液や血清、尿などの検体（４）を所定の検体注入
部（２）へ注入すると，ペーパクロマトの原理に従って
検体は移動する。この展開の途中，区分Ａに金コロイド
標識抗体や色素標識ラテックス抗体（５）が設置してあ
り，検体（４）が移動し標識抗体（５）と接触する事に
より抗原抗体複合物が形成される。この複合物はさらに
移動し，区分Ｂ（６）や区分（７）でそれぞれ免疫学的
に補足されるように構成されているのが一般的であっ
た。またこれらの免疫学的クロマト方式の標識抗体
（５）は，測定項目が２つであれば２種類の標識抗体が
使われていた。これらは区分ＢとＣでそれぞれ別の測定
項目の測定に利用されている。これらは標識抗体の残り
がさらに移動し区分Ｄで捉えられる方法であった。当然
区分Ｂで捉えられる標識抗体は，被検検体の濃度で変わ
る。残った標識抗体も当然被検検体濃度で変化し，区分
Ｄの濃度は変わる。今まで市販されている免疫学的クロ
マト方式を用いた測定法は，区分Ｄを一般的にコントロ
ールラインと称しているが，それは単に被検検体がクロ
マト方式の最後まで移動したことを示すだけに留まって
いた。図５には，従来法である免疫学的クロマト方式の
測定法である妊娠診断薬を例に取り説明する。区分Ａに
は金コロイド標識抗ヒトｈＣＧマウス抗体（５）が移動
可能なように設置され，区分Ｂには抗ヒトｈＣＧマウス
抗体（６）が固定されており，区分Ｃには抗マウスヤギ
抗体（７）が固定されている。妊娠している尿検体
（４）を所定の注入部（２）へ注入すると，ペーパクロ
マトの原理に従って検体（４）は移動する。この尿中の
ｈＣＧは展開の途中の区分Ａで金コロイド標識抗体
（５）と結合し，この複合物はさらに移動し区分Ｂに固
定された抗ヒトｈＣＧマウス抗体（６）に捉えられる
（ヒトのｈＣＧ側を認識）。余った標識抗体（５）はさ
らに移動し区分Ｃで抗マウスヤギ抗体（７）に捉えられ
る（標識抗体側を認識）。また尿中にｈＣＧがない場合
は，標識抗体が区分Ｂに結合することなく通過し，区分
Ｃで捉えられる。従って妊娠反応陽性なら区分ＢとＣに
ラインが出現し，陰性なら区分Ｃにのみラインが出現す
る。この従来法では，区分Ｃに捉えられた金コロイド標
識抗体は，検体のｈＣＧの量により変化する。いわゆる
区分Ｃの色調は一定でないことになる。 参考文献 丸尾 猛他：高感度ｈＣＧ検出キット、ＨＣＧテスト
パック・プラスの基礎的検討と臨床応用、産科と婦人科
５８（８）１４２３，１９９１ 特許公報，特公平７−４６１０７ 公開特許公報，特開平１０−４８２１２
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】免疫学的クロマト方式
は一般的に定性の測定法であった。本発明はこの定性法
を，ある程度濃度の変化が分かる方法または定量法とし
て使える新しい方法に関するものである。免疫学的クロ
マト方式の測定法は、定量性が乏しいと言われている。
その定量性が乏しい理由は，たとえ光学的に出現した色
調を読み取ったとしても，バックグランドである支持体
が検体上の物質で僅かに着色したり支持体そのものが不
均一であるため，再現性が良くかった事が原因である。
支持体上を検体が移動するのでその検体の一部や標識抗
体の一部が支持体に残ることは避けられない。測定結果
の色調を光学的に読み取っても検体毎にバックグランド
が変わるので正確な測定が出来なかった。本発明では，
検体毎に異なる支持体のバックグランドの色調に影響を
受けなく，より簡便に正確に測定出来る方法を提供する
ことにある。
は一般的に定性の測定法であった。本発明はこの定性法
を，ある程度濃度の変化が分かる方法または定量法とし
て使える新しい方法に関するものである。免疫学的クロ
マト方式の測定法は、定量性が乏しいと言われている。
その定量性が乏しい理由は，たとえ光学的に出現した色
調を読み取ったとしても，バックグランドである支持体
が検体上の物質で僅かに着色したり支持体そのものが不
均一であるため，再現性が良くかった事が原因である。
支持体上を検体が移動するのでその検体の一部や標識抗
体の一部が支持体に残ることは避けられない。測定結果
の色調を光学的に読み取っても検体毎にバックグランド
が変わるので正確な測定が出来なかった。本発明では，
検体毎に異なる支持体のバックグランドの色調に影響を
受けなく，より簡便に正確に測定出来る方法を提供する
ことにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明においては，担体
の不均一性やバックグランドの相違を考慮し，１検査毎
にまたは同一試験片毎に同じ膜面に検量線を作るための
区分Ｃまたは区分ＣとＤ及び未知検体をとらえる場所で
ある区分Ｂを持ち，その区分Ｂおよび区分Ｃまたは区分
ＣとＤにそれぞれ特異的に結合する金コロイド標識抗体
またはブルーラテックス標識抗体（以後これらを単に標
識抗体という）をあらかじめ区分Ａに設置する。区分Ｃ
または区分ＣとＤには未知検体と密接な関係のある一定
の濃度が抗原抗体反応により現れるよう調整した抗原ま
たは抗体を設置しておく。本発明においては，区分Ｃま
たは区分ＣとＤにのみそれぞれ結合する標識抗体の他，
未知検体とのみ結合する別の標識抗体を合わせて設置す
ることで，区分Ｂの色調と区分Ｃまたは区分ＣとＤの色
調がそれぞれ異なる色調が現れるよう配置した。（図
１）
の不均一性やバックグランドの相違を考慮し，１検査毎
にまたは同一試験片毎に同じ膜面に検量線を作るための
区分Ｃまたは区分ＣとＤ及び未知検体をとらえる場所で
ある区分Ｂを持ち，その区分Ｂおよび区分Ｃまたは区分
ＣとＤにそれぞれ特異的に結合する金コロイド標識抗体
またはブルーラテックス標識抗体（以後これらを単に標
識抗体という）をあらかじめ区分Ａに設置する。区分Ｃ
または区分ＣとＤには未知検体と密接な関係のある一定
の濃度が抗原抗体反応により現れるよう調整した抗原ま
たは抗体を設置しておく。本発明においては，区分Ｃま
たは区分ＣとＤにのみそれぞれ結合する標識抗体の他，
未知検体とのみ結合する別の標識抗体を合わせて設置す
ることで，区分Ｂの色調と区分Ｃまたは区分ＣとＤの色
調がそれぞれ異なる色調が現れるよう配置した。（図
１）
【０００５】
【発明の実施の形態】発明の実施形態には大きく２通り
ある。１つは自動機器による測定で，一定の色調をもつ
１つの（区分Ｃ）ラインか２つの（区分ＣとＤ）ライン
と被測定ライン（区分Ｂ）の色調をそれぞれ光学的自動
機器で読み取り，それらの相互比較により検体の濃度を
定量しようとした。もう１つは一定の色調をもつ上記区
分Ｃラインを目視で読み取った場合についてであり，こ
れは当然数字にすることができません。そこで１個の区
分Ｃラインをもつ場合（図２）について実施形態を説明
する。一定の濃度が現れる区分Ｃラインの色調と区分Ｂ
の被測定ラインとを肉眼で比較して少なくともラインが
「無い」「薄い」「同じ」「濃い」の４つの比較判定
（２０）は簡単である。図３にその記録紙を示した。こ
れによると３つの色調と検査日（１９）をＸ軸Ｙ軸と
し，測定結果に従ってただ白丸を黒く塗りつぶす。その
記録紙上の黒丸を線で結べば１つのグラフ（２２）が得
られる。このグラフは，一般的に人間の体液いわゆる血
液や尿中にある物質いわゆるタンパク質・糖質・無機質
などの濃度が刻々変化している状態をこのグラフは表し
ている事になる。
ある。１つは自動機器による測定で，一定の色調をもつ
１つの（区分Ｃ）ラインか２つの（区分ＣとＤ）ライン
と被測定ライン（区分Ｂ）の色調をそれぞれ光学的自動
機器で読み取り，それらの相互比較により検体の濃度を
定量しようとした。もう１つは一定の色調をもつ上記区
分Ｃラインを目視で読み取った場合についてであり，こ
れは当然数字にすることができません。そこで１個の区
分Ｃラインをもつ場合（図２）について実施形態を説明
する。一定の濃度が現れる区分Ｃラインの色調と区分Ｂ
の被測定ラインとを肉眼で比較して少なくともラインが
「無い」「薄い」「同じ」「濃い」の４つの比較判定
（２０）は簡単である。図３にその記録紙を示した。こ
れによると３つの色調と検査日（１９）をＸ軸Ｙ軸と
し，測定結果に従ってただ白丸を黒く塗りつぶす。その
記録紙上の黒丸を線で結べば１つのグラフ（２２）が得
られる。このグラフは，一般的に人間の体液いわゆる血
液や尿中にある物質いわゆるタンパク質・糖質・無機質
などの濃度が刻々変化している状態をこのグラフは表し
ている事になる。
【０００６】
【実施例１】本実施例（図１）では，区分Ａの標識抗体
を２種類配合し，区分Ｃで全量捉えることにより予め配
合された一定量の色調が現れるよう工夫した。この実施
例は，定量が必要な癌マーカーである前立腺特異抗原
（ＰＳＡ）の定量法で説明する。区分Ａに，金コロイド
標識抗ヒトＰＳＡウサギ抗体（１１）と金コロイド標識
抗ヤギ抗体（１２）を移動可能な状態で設置し，区分Ｂ
には抗ヒトＰＳＡモノクローナルマウス抗体（１３）を
固定し，区分Ｃには抗ウサギｌｇＧヤギ抗体（１４）を
固定した。区分Ａの金コロイド標識抗ヤギ抗体（１２）
の量は，区分Ｃで捉えられる金コロイドの色調がＰＡＳ
濃度に換算して丁度４ｎｇ／ｍＬになるよう調整した。
これらを反射型光学的濃度計で測定した。結果を図４に
示した。図４の未知検体１，２，３の濃度ＸＣは次の計
算式で表現される。 ＸＣ＝未知検体の区分Ｂの読み×４．０（ｎｇ／ｍＬ）
÷区分Ｃの読み この計算式より未知検体の測定結果は，１ ４．７ｎｇ
／ｍＬ ２ ７．１ｎｇ／ｍＬ ３ ９．１ｎｇ／ｍＬ のようになる。もし，区分Ｄに別の濃度値と同等の色調
が得られる区分を設定すれば，区分Ｃと区分Ｄとから次
の計算式から容易に未知検体の測定値が得られる。区分
Ｃの値が４ｎｇ／ｍＬ、区分Ｄの値が１０ｎｇ／ｍＬの
場合の未知検体の濃度ＸＣＤは次の計算式で与えられ
る。 ＸＣＤ＝（４×未知検体の区分Ｂの読み−１０×区分Ｃ
の読み＋４×区分Ｄの読み）÷（区分Ｄの読み−区分Ｃ
の読み）
を２種類配合し，区分Ｃで全量捉えることにより予め配
合された一定量の色調が現れるよう工夫した。この実施
例は，定量が必要な癌マーカーである前立腺特異抗原
（ＰＳＡ）の定量法で説明する。区分Ａに，金コロイド
標識抗ヒトＰＳＡウサギ抗体（１１）と金コロイド標識
抗ヤギ抗体（１２）を移動可能な状態で設置し，区分Ｂ
には抗ヒトＰＳＡモノクローナルマウス抗体（１３）を
固定し，区分Ｃには抗ウサギｌｇＧヤギ抗体（１４）を
固定した。区分Ａの金コロイド標識抗ヤギ抗体（１２）
の量は，区分Ｃで捉えられる金コロイドの色調がＰＡＳ
濃度に換算して丁度４ｎｇ／ｍＬになるよう調整した。
これらを反射型光学的濃度計で測定した。結果を図４に
示した。図４の未知検体１，２，３の濃度ＸＣは次の計
算式で表現される。 ＸＣ＝未知検体の区分Ｂの読み×４．０（ｎｇ／ｍＬ）
÷区分Ｃの読み この計算式より未知検体の測定結果は，１ ４．７ｎｇ
／ｍＬ ２ ７．１ｎｇ／ｍＬ ３ ９．１ｎｇ／ｍＬ のようになる。もし，区分Ｄに別の濃度値と同等の色調
が得られる区分を設定すれば，区分Ｃと区分Ｄとから次
の計算式から容易に未知検体の測定値が得られる。区分
Ｃの値が４ｎｇ／ｍＬ、区分Ｄの値が１０ｎｇ／ｍＬの
場合の未知検体の濃度ＸＣＤは次の計算式で与えられ
る。 ＸＣＤ＝（４×未知検体の区分Ｂの読み−１０×区分Ｃ
の読み＋４×区分Ｄの読み）÷（区分Ｄの読み−区分Ｃ
の読み）
【０００７】
【実施例２】実施例１の場合は，出現したラインを光学
的に読み取りその結果から未知検体の濃度を測定しよう
とするものであった。この実施例においては，結果の判
定を目視で行った場合の未知検体のおおよその測定値を
得る方法について述べる。本実施例は，黄体形成ホルモ
ン（ＬＨ）の測定について述べる。図２において，区分
Ａには金コロイド標識抗ヒトＬＨマウス抗体（１６）
と，金コロイド標識抗ウサギ抗体（１５）を設置し，区
分Ｂには抗ヒトＬＨマウス抗体（１７）を固定しまた区
分Ｃには抗ウサギヤギ抗体（１８）を固定した。また区
分Ａの金コロイド標識抗ウサギ抗体の量は，区分Ｃで捉
えられる金コロイドの色調がＬＨ濃度に換算して丁度２
０ｍｌＵ／ｍＬになるよう調整した。本実施例は，婦人
の尿中の黄体形成ホルモン（ＬＨ）が，排卵の開始直前
に急激に上昇することを利用して，不妊症の治療を目的
とした診断薬に適用する。このホルモンは一般的に朝一
番の尿中が一番安定しており濃度も濃い。従って排卵予
定日の数日前から本診断薬を使って，１日一回少なくと
も４日から７日間試験を続ける。結果は図３の検査結果
表に記録する。区分Ｃのラインと区分Ｂにラインを目で
見て，図３の２０にある判定基準にあるように「無い」
「薄い」「同じ」「濃い」を比較して対応する白丸を黒
く塗りつぶす等の手段を用いて記録する。この記録紙の
黒丸を図３の２２のように線で結べば折れ線グラフが得
られる。このグラフを読むと，ピークが出た５月４日前
後が，このホルモンがいちばん多く分泌されて時であ
り，臨床的にその時期が一番妊娠しやすい頃にあたる事
が誰にでも読み取れる。
的に読み取りその結果から未知検体の濃度を測定しよう
とするものであった。この実施例においては，結果の判
定を目視で行った場合の未知検体のおおよその測定値を
得る方法について述べる。本実施例は，黄体形成ホルモ
ン（ＬＨ）の測定について述べる。図２において，区分
Ａには金コロイド標識抗ヒトＬＨマウス抗体（１６）
と，金コロイド標識抗ウサギ抗体（１５）を設置し，区
分Ｂには抗ヒトＬＨマウス抗体（１７）を固定しまた区
分Ｃには抗ウサギヤギ抗体（１８）を固定した。また区
分Ａの金コロイド標識抗ウサギ抗体の量は，区分Ｃで捉
えられる金コロイドの色調がＬＨ濃度に換算して丁度２
０ｍｌＵ／ｍＬになるよう調整した。本実施例は，婦人
の尿中の黄体形成ホルモン（ＬＨ）が，排卵の開始直前
に急激に上昇することを利用して，不妊症の治療を目的
とした診断薬に適用する。このホルモンは一般的に朝一
番の尿中が一番安定しており濃度も濃い。従って排卵予
定日の数日前から本診断薬を使って，１日一回少なくと
も４日から７日間試験を続ける。結果は図３の検査結果
表に記録する。区分Ｃのラインと区分Ｂにラインを目で
見て，図３の２０にある判定基準にあるように「無い」
「薄い」「同じ」「濃い」を比較して対応する白丸を黒
く塗りつぶす等の手段を用いて記録する。この記録紙の
黒丸を図３の２２のように線で結べば折れ線グラフが得
られる。このグラフを読むと，ピークが出た５月４日前
後が，このホルモンがいちばん多く分泌されて時であ
り，臨床的にその時期が一番妊娠しやすい頃にあたる事
が誰にでも読み取れる。
【０００８】
【発明の効果】現在，癌マーカの測定は，癌かそれとも
正常かの判別や治療中にいかにその値が減少するかが重
大な関心事であるのでどうしても定量法でないといけな
いと言われている。中小病院や開業医において，この測
定項目を定量測定をするには高価な免疫測定装置を使用
するか，検査センターに外注するしか有りませんでし
た。また，微量のホルモンや肝炎ウイルスの測定におい
ても同様専用測定機器の導入や検査センター頼りの状況
であった。本発明により免疫学的クロマト方式が定量ま
たは半定量で使用出来るようになったことは，次の面で
効果的である。 １．感度の非常に高い免疫学的クロマト方式が定量また
は半定量測定法として使用出来るようになった。 ２．癌マーカが本発明により定量できるようになった。 ３．試薬のほとんどが固相化されているため測定機器を
小型化・低コスト化ができるようになった。 ４．ベットサイドや中小の病院，開業医でも本測定法な
ら使用できるようになった。 ５．測定項目によっては，測定試薬が室温保存で出来る
ので簡便で非常に扱い易くなった。 ６．測定項目によっては，機器による測定でなく，目視
で判定し，本発明実施例２のように，読み取り機器が不
要となった。 ７．測定項目によっては，本発明実施例２のように患者
自らが，検査することも可能でかつその結果の判定もで
きるようになった。 ８．測定後の取り扱いについては，被測定物いわゆる血
清，全血，尿，糞便などは，吸着パットに吸着されてい
るので，外部に漏れることもなく比較的衛生的である。 以上のように本発明によって，その効果は将来のこの分
野の発展をさらに進展させる事が可能になった。
正常かの判別や治療中にいかにその値が減少するかが重
大な関心事であるのでどうしても定量法でないといけな
いと言われている。中小病院や開業医において，この測
定項目を定量測定をするには高価な免疫測定装置を使用
するか，検査センターに外注するしか有りませんでし
た。また，微量のホルモンや肝炎ウイルスの測定におい
ても同様専用測定機器の導入や検査センター頼りの状況
であった。本発明により免疫学的クロマト方式が定量ま
たは半定量で使用出来るようになったことは，次の面で
効果的である。 １．感度の非常に高い免疫学的クロマト方式が定量また
は半定量測定法として使用出来るようになった。 ２．癌マーカが本発明により定量できるようになった。 ３．試薬のほとんどが固相化されているため測定機器を
小型化・低コスト化ができるようになった。 ４．ベットサイドや中小の病院，開業医でも本測定法な
ら使用できるようになった。 ５．測定項目によっては，測定試薬が室温保存で出来る
ので簡便で非常に扱い易くなった。 ６．測定項目によっては，機器による測定でなく，目視
で判定し，本発明実施例２のように，読み取り機器が不
要となった。 ７．測定項目によっては，本発明実施例２のように患者
自らが，検査することも可能でかつその結果の判定もで
きるようになった。 ８．測定後の取り扱いについては，被測定物いわゆる血
清，全血，尿，糞便などは，吸着パットに吸着されてい
るので，外部に漏れることもなく比較的衛生的である。 以上のように本発明によって，その効果は将来のこの分
野の発展をさらに進展させる事が可能になった。
【図１】「実施例１の説明図」 （ａ） 検査前の状態 （ｂ） 検査後の状態
【図２】「実施例２の説明図」 （ａ） 検査前の状態 （ｂ） 検査後の状態
【図３】「実施例２による目視測定例」
【図４】「実施例１による光学濃度計による定量 例」
【図５】「従来の免疫学的クロマト方式の説明図」 （ａ） 検査前の状態 （ｂ） 検査後の状態
１ 支持体 ２ 検体注入部 ３ 検体注入ピペット ４ ヒトの尿中のｈＣＧ ５ 金コロイド標識抗ヒトｈＣＧマウス抗体 ６ 抗ヒトｈＣＧマウス抗体 ７ 抗マウスヤギ抗体 ８ 吸着濾紙 ９ 展開終了した余った検体尿 １０ 区分Ｂに結合したｈＣＧ結合金コロイド標
識抗ヒトｈＣＧマウス抗体 １１ 金コロイド標識ヒトＰＳＡウサギ抗体 １２ 金コロイド標識抗ヤギ抗体 １３ 抗ヒトＰＳＡモノクローナルマウス抗体 １４ 抗ウサギｌｇＧヤギ抗体 １５ 金コロイド標識抗ウサギ抗体（２０ｍｌＵ
／ｍＬ） １６ 金コロイド標識抗ヒトＬＨマウス抗体 １７ 抗ヒトＬＨマウス抗体 １８ 抗ウサギヤギ抗体 １９ 検査日欄 ２０ 判定基準 ２１ 記録欄 ２２ グラフ
識抗ヒトｈＣＧマウス抗体 １１ 金コロイド標識ヒトＰＳＡウサギ抗体 １２ 金コロイド標識抗ヤギ抗体 １３ 抗ヒトＰＳＡモノクローナルマウス抗体 １４ 抗ウサギｌｇＧヤギ抗体 １５ 金コロイド標識抗ウサギ抗体（２０ｍｌＵ
／ｍＬ） １６ 金コロイド標識抗ヒトＬＨマウス抗体 １７ 抗ヒトＬＨマウス抗体 １８ 抗ウサギヤギ抗体 １９ 検査日欄 ２０ 判定基準 ２１ 記録欄 ２２ グラフ
Claims (5)
- 【請求項１】セルローズアセテート膜やニトロセルロー
ズ膜などの支持担体上の最初の区分Ａに金コロイド標識
抗体や色素標識ラテックス抗体等の複数の標識抗体が移
動可能なように乾燥状態で配置されており，その第１の
標識抗体と特異的に結合する第１の抗体が，クロマトグ
ラフイ展開の次の区分Ｂに固定され，かつ第２，第３の
標識抗体と特異的に結合する第２，第３の抗体がさらに
次の区分Ｃまたは区分Ｄに固定された支持担体におい
て，注入された検体がクロマトグラフィ的に標識抗体と
結合または一緒に移動し，区分Ｂ，Ｃ，Ｄの抗体にそれ
ぞれ特異的に結合する。その時現れた同一支持担体上の
区分Ｂ，Ｃ，Ｄの色調を光学的測定手段で測定しまたは
単に目視で検出し，区分Ｃ，Ｄの色調を参照として検量
線から区分Ｂの検体の濃度を測定または判定することを
特徴とした免疫学的クロマト方式を利用した測定方法。 - 【請求項２】複数の標識抗体が，測定対照物（測定項
目）と結合する１個または複数の標識抗体と測定対照物
とは直接関係ない１個または複数の標識抗体を含むこと
を特徴とする請求項１の免疫学的クロマト方式を利用し
た測定方法。 - 【請求項３】区分Ｃ，Ｄの色調が，第２，第３の標識抗
体の抗体量により規定された一定の色調になるようあら
かじめ調整されていることを特徴とする請求項１および
請求項２の免疫学的クロマト方式を利用した測定方法。 - 【請求項４】区分Ｃ，Ｄには，第２，第３の標識抗体を
それぞれ特異的に結合する抗体を固定し，かつその抗体
量は，あらかじめ定められた一定の色調になるよう調整
されていることを特徴とする請求項１および請求項２の
免疫学的クロマト方式を利用した測定方法。 - 【請求項５】区分Ｃ，Ｄには，第２の標識抗体と特異的
に結合する抗体を固定し，かつその抗体量は，あらかじ
め定められた一定の色調比になるよう調整されているこ
とを特徴とする請求項１および請求項２の免疫学的クロ
マト方式を利用した測定方法。
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|---|---|---|---|
| JP29570899A JP3481894B2 (ja) | 1999-09-10 | 1999-09-10 | 免疫学的クロマト方式を利用した測定方法 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| JP29570899A JP3481894B2 (ja) | 1999-09-10 | 1999-09-10 | 免疫学的クロマト方式を利用した測定方法 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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| JP3481894B2 JP3481894B2 (ja) | 2003-12-22 |
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ID=17824140
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| JP29570899A Expired - Fee Related JP3481894B2 (ja) | 1999-09-10 | 1999-09-10 | 免疫学的クロマト方式を利用した測定方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006266764A (ja) * | 2005-03-22 | 2006-10-05 | Kobayashi Pharmaceut Co Ltd | 更年期ステージ判定具 |
| WO2010122990A1 (ja) * | 2009-04-20 | 2010-10-28 | ユニバーサル・バイオ・リサーチ株式会社 | 生体関連物質測定用チューブおよび定量システム |
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-
1999
- 1999-09-10 JP JP29570899A patent/JP3481894B2/ja not_active Expired - Fee Related
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|---|---|---|---|---|
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