JP2001021529A - バイオセンサを用いた測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 バイオセンサを用いて試料溶液中の測定対象
物質の定量を行う際に、電極自体による酸化還元反応の
影響を低減し、高感度な測定を行うことのできる方法を
提供する。 【解決手段】 電極上に生体触媒を固定してなる作用極
と対極とを有する構成のバイオセンサの各電極を測定対
象物質を含有する溶液に浸漬した状態で、前記測定対象
物質と前記生体触媒との反応が十分に進行するまでの時
間放置した後に、前記作用極と前記対極との間に定電圧
を所定時間印加したときの両極間に流れる電流値を計測
する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、酵素や微生物など
の生体触媒が固定された作用極と対極とを有するバイオ
センサを用いた測定対象物質濃度の測定方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、ＢＯＤセンサやグルコースセンサ
などのバイオセンサによる測定対象物質の計測方法とし
ては、測定開始から終了までの測定系における反応変化
を連続的に計測し、反応が測定系において定常状態に達
した時点での計測値を利用する方法が主に用いられてい
る。この定常状態とは、計測装置による検出反応と生体
触媒反応とが定常状態に達した状態を意味している。

【０００３】例えば、酵素や微生物を酸素電極上に固定
したバイオセンサを用いてＢＯＤ濃度の計測を行う場
合、計測中は、生体触媒反応のみならず酸素電極自体に
よる酸素の還元反応によっても電極近傍の溶存酸素が消
費されてしまう。結果として、一定時間後の計測値は電
圧印加中の生体触媒反応および電極反応による消費酸素
量の合計値として検出されるため、生体触媒反応のみに
よる消費酸素量とは異なる値が得られることとなる。

【０００４】また、カーボン電極や白金電極などを電子
受容体（メディエータ）と組み合わせたバイオセンサに
おいても、計測時間中には電極自体による電子受容体の
酸化還元反応が促進されるため、本来の生体触媒による
酸化還元反応量のみを厳密に計測することは困難であ
る。このように、バイオセンサによる測定を従来の定常
法を用いて行った場合、計測値は電極自体による酸化還
元反応の影響を受けるため、測定対象物質を正確に定量
することが困難であるという問題があった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記観点から
なされたものであり、バイオセンサを用いて試料溶液中
の測定対象物質の定量を行う際に、電極自体による酸化
還元反応の影響を低減し、高感度な測定を行うことので
きる方法を提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決するために、以下のような、バイオセンサを用いた
測定方法を提供する。

【０００７】すなわち、本発明は、金属または炭素から
なる電極上に生体触媒を固定してなる作用極と、対極と
を測定対象物質を含有する溶液に浸漬し、この作用極と
対極との間に電圧を印加したときに両極間に流れる電流
を計測することにより、前記測定対象物質の測定を行う
バイオセンサを用いた測定方法であって、前記溶液中に
前記両電極を浸漬した状態で、前記測定対象物質と前記
生体触媒との反応が十分に進行するまでの時間放置した
後に、前記作用極と前記対極との間に定電圧を所定時間
印加したときの両極間に流れる電流値を計測することを
特徴とする。

【０００８】このような方法を用いて測定を行うことに
より、生体触媒反応以外の電極自体による酸化還元反応
の影響を最小限に抑えることができるため、測定対象物
質の定量を従来よりも厳密に行うことができる。このと
き、前記作用極と前記対極との間に電圧を印加する時間
は１０秒以下であることが好ましい。

【０００９】また、本発明は、測定対象物質を含有する
溶液中に生体触媒が固定された作用極と対極とを有する
バイオセンサを浸漬し、前記測定対象物質と前記生体触
媒との反応が十分に進行するまでの時間放置した後に、
この作用極と対極との間に定電圧を印加する代わりに両
極間に定電流を流したときにこの両極間に生じる電位差
を計測するものであってもよい。

【００１０】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態を詳細
に説明する。

【００１１】本発明の測定方法は、金属または炭素から
なる電極上に生体触媒を固定してなる作用極と、対極と
を有するバイオセンサを用いた測定方法であって、測定
対象を含む溶液中に両電極を浸漬した状態で、測定対象
物質と生体触媒との反応が十分に進行するまでの時間放
置した後に、作用極と対極との間に定電圧を所定時間印
加したときの両極間に流れる電流値を計測することを特
徴とする。

【００１２】〈バイオセンサ〉まず、本発明の測定方法
において用いられるバイオセンサについて説明する。本
発明で用いられるバイオセンサは、金属または炭素から
なる電極上に生体触媒を固定してなる作用極と、対極と
を測定対象物質を含有する溶液に浸漬し、この作用極と
対極との間に電圧を印加したときに両極間に流れる電流
を計測することにより、前記測定対象物質の測定を行う
ものであり、従来より一般に使用されているものを用い
ることができる。すなわち、本発明においてバイオセン
サとは、測定対象物質とこの測定対象物質に対して選択
的に反応する生体触媒との間で起こる生体触媒反応によ
って消費・生成する化学物質の量を電気化学的に測定す
ることにより、測定対象物質を測定するものであれば、
特に限定されない。ここで、生体触媒とは、測定対象物
質に対して選択性よく反応する酵素や微生物細胞または
その破砕物若しくは抽出物などが挙げられる。また、測
定とは、測定対象物質の検出および定量を含む。

【００１３】例えば、酵素をその基質（測定対象物質）
を含む試料溶液中に存在させると、基質が酵素と接触さ
れることにより酵素反応が生じる。この酵素反応により
消費または生成する化学物質の量は、試料溶液中の基質
の濃度に依存する。従って、酵素反応による化学物質の
消費／生成量を電気化学的に測定することにより、試料
溶液中の基質の量を定量することができる。このような
測定対象物質と酵素の組み合わせとしては、例えば、グ
ルコース濃度を測定する場合には、酵素としてグルコー
スオキシダーゼを用いることができる。このように、測
定対象物質と選択的に反応する酵素を適宜選択して用い
ることが好ましい。

【００１４】また、微生物を有機化合物を含む試料溶液
に存在させると、微生物は特定の有機化合物をエネルギ
ー獲得のために代謝する。この過程において、微生物に
よって消費される試料溶液中の溶存酸素の濃度変化、す
なわち微生物の呼吸活性変化を測定することにより、試
料溶液中の有機化合物濃度を測定することができる。

【００１５】また、微生物が有機化合物を代謝する際
に、呼吸鎖の電子伝達系に電子の移動が起こる。この
際、代謝される有機化合物濃度と移動する電子との量に
は相関がある。従って、この移動する電子の量、すなわ
ち微生物の酸化還元活性変化を測定することによって微
生物の周りに存在する有機化合物の濃度を測定すること
ができる。このような測定対象物質と微生物との組み合
わせとしては、例えば、グルコース濃度を測定する場合
には、微生物としてシュードモナス・フルオレセンス
（Pseudomonas fluorescens）を用いることができる。
また、ＢＯＤ測定の場合には、微生物として、大腸菌、
バチルス属、グルコノバクター属あるいはシュードモナ
ス属に属する細菌、放線菌などの前核微生物や、トリコ
スポロン属に属する酵母等の真核微生物を挙げることが
できる。

【００１６】上述したような、酵素や微生物などの生体
触媒による反応において消費または生成される化学物質
の量や移動される電子の量を電気化学的に測定するため
に、上記構成を有するバイオセンサを試料溶液に浸漬
し、このバイオセンサの作用極と対極との間に一定電位
を付加し、両極間に流れる電流を計測する。

【００１７】作用電極は金属または炭素からなる電極上
に生体触媒を固定させたものである。金属または炭素か
らなる電極は、上述の酵素や微生物などの生体触媒によ
る反応において消費または生成される化学物質から電子
の授受を行う。また、微生物が有機化合物を代謝される
際に移動する電子を受け取る。これにより、生体触媒に
よる反応を電気信号に変換する。このような電極の材質
としては、安定であり、かつ、導電性が大きく、生体触
媒に対して実質的に無害であればよく、例えば、白金、
金、銀などの金属、またはグラファイト、カーボンなど
の炭素素材が挙げられる。このような材質のうち、測定
対象物質や生体触媒との組み合わせにより最適な素材が
選択される。また、電極の形状としては特に制限はない
が、棒状、筒状、シート状が挙げられる。

【００１８】上述の電極上に生体触媒を固定させるため
の具体的方法としては、金属電極表面に官能基を介して
生体触媒を固定する方法、生体触媒を含むゲル膜を金属
電極接着する方法、金属電極端に透析膜を被せ、金属電
極と透析膜の間に生体触媒を入れる方法などが挙げられ
る。また、生体触媒の懸濁液をアセチルセルロース等の
薄膜上で吸引濾過し、この薄膜上に生体触媒を膜状に集
菌し、アセチルセルロース膜の外側から透析膜で覆うよ
うにして金属電極に被せてもよい。また、金属電極と生
体触媒との接触面積は大きいことが好ましい。

【００１９】本発明の測定方法に用いられるバイオセン
サは、上記作用電極と対極とを有し、必要に応じてさら
に参照電極を有するものであってもよい。対極の素材と
しては、白金、金、銀、カーボン等が挙げられる。バイ
オセンサを測定対象の試料溶液に浸漬し、作用極と対極
との間に電圧を印加したときに、電極反応が進行するに
従って、電極表面での反応種の濃度は減少し、また生成
物の濃度が増加するなどして対極の電極電位が設定した
値からずれてしまうことがある。そこで、Ａｇ／ＡｇＣ
ｌ電極などの参照電極を試料溶液に浸漬し、参照電極を
電位設定の基準として作用電極の電位を設定することが
好ましい。

【００２０】〈測定方法〉次に、上記バイオセンサを用
いた本発明の測定方法の説明を行う。本発明の測定方法
は、測定対象物質を含有する試料溶液中に上記構成のバ
イオセンサの作用極および対極を浸漬した状態で、測定
対象物質と生体触媒との反応が十分に進行するまでの時
間放置した後に、前記作用極と前記対極との間に定電圧
を所定時間印加したときの両極間に流れる電流値を計測
することを特徴とする。

【００２１】具体的には、例えば、上記構成のバイオセ
ンサを上記試料溶液中に浸漬し、作用極と対極との間に
電圧を印加しない状態で一定時間放置する。その後、作
用極と対極との間に定電圧を所定時間印加して、このと
きの両極間に流れる電流値を計測する。

【００２２】上記構成のバイオセンサを試料溶液中に浸
漬すると、上述のように、作用極の生体触媒と試料溶液
中の測定対象物質との間で生体触媒反応が起こる。この
反応によって特定の化学物質が消費または生成される。
あるいは、生体触媒に微生物を用いた場合、微生物が有
機物を代謝することにより、電子が電子伝達系に移動す
る。本発明の測定方法では、このような生体触媒反応が
充分に進行するまで、各電極間に電圧を付加せずに放置
しておく。このときの放置時間は、上記生体触媒反応が
充分に進行する時間であれば特に制限されないが、例え
ば、生体触媒反応の反応速度が定常状態に達するまでの
時間を目安にしてもよい。また、この放置時間は測定対
象物質と生体触媒との組み合わせにより適宜設定するこ
とができる。すなわち、放置時間を変化させ、各放置時
間において両極間に流れる電流をそれぞれ測定し、好ま
しい電流を得られるときの放置時間を、好ましい放置時
間として選択することができる。

【００２３】このような放置時間の例として、測定対象
物質をグルコースとし、生体触媒に微生物を用い、この
微生物の呼吸活性変化により消費される溶存酸素の濃度
変化を検出するバイオセンサの場合は、放置時間を１０
分〜３０分とすることが望ましい。

【００２４】バイオセンサを試料溶液中に浸漬した状態
で一定時間放置した後、作用極と対極の間に定電圧を一
定時間印加し、このときの両極間に流れる電流値を測定
する。電圧の印加および電流の測定は、ポテンシオスタ
ット等を用いるとよい。

【００２５】上記放置時間の間に生体触媒反応は十分に
進行しているため、この生体触媒反応により消費・生成
された化学物質の作用極近傍における濃度は減少または
増加している。従って、両電極間に電圧を印加したとき
に、この化学物質と電極の間で授受される電子の量が測
定対象物質の濃度によって変化するため、両極間に流れ
る電流の量が変化する。よって、この電流を計測するこ
とによって、測定対象物質の測定を行うことができる。

【００２６】このとき、両極間に電圧が印加される時間
は、１０秒以下であることが好ましく、さらに好ましく
は２〜７秒である。最適な電圧印加時間の設定は、電圧
印加時間を上記範囲で変化させ、各電圧印加時間におい
て両極間に流れる電流をそれぞれ測定し、好ましい電流
を得られるときの電圧印加時間を選択することにより行
うことができる。

【００２７】前述したように、両極間に電圧を印加した
場合、生体触媒反応のみならず、作用極上における酸化
／還元反応によっても、溶液中の化学物質濃度は変化す
る。このため、作用極−対極間に電圧を印加する時間が
長すぎると、得られる電流値は、生体触媒反応だけでな
く、電極反応の影響も受けることとなるため、生体触媒
反応のみによる電流の正確な値は得られにくい。そこ
で、生体触媒が固定された作用極を測定溶液中に浸漬し
た状態で一定時間放置することにより、生体触媒反応を
充分に進行させた後に、定電圧を短時間印加することに
よって、電極反応の影響を最小限に抑えて生体触媒反応
のみによる電流値に近い計測値を得ることができるので
ある。

【００２８】また、電圧を印加する時間が短いほど、計
測される電流値が大きくなるため高感度の測定を行うこ
とができるが、一方、電圧印加時間が短すぎると、計測
される電流値のバラツキが大きくなり、安定性が小さく
なってしまう。従って、本発明の測定方法においては、
バイオセンサの感度や測定対象物質の濃度、計測される
電流値等を考慮して、電圧印加時間を上記範囲で最適な
時間とすることが好ましい。

【００２９】上記作用極−対極間に定電圧を所定時間印
加したときの両極間に流れる電流値の計測は、次のよう
に行うことができる。例えば、電圧印加時間を１０秒と
した場合に、電圧を印加して１０秒目の電流値を計測値
としてもよい。また、例えば、電圧を印加して１０秒目
までの間に電流値の値を複数回数測定して、その平均値
を計測値としてもよい。

【００３０】また、本発明の測定方法に用いられるバイ
オセンサが酵素や微生物の酸化還元活性量を検出するも
のである場合には、試料溶液にメディエータを添加して
おくと、より高感度な測定が可能となるので好ましい。
あるいは、メディエータを生体触媒とともに電極上に固
定しておいてもよい。

【００３１】メディエータは、微生物により有機物が代
謝されて生じる電子が金属電極に移行するのを促進する
ものである。メディエータとしては、微生物から電極に
電子が移行するのを促進するものであればよく、具体的
には１−メトキシ−５−メチルフェナジニウムメチルス
ルフォネート（１−Ｍ−ＰＭＳ）、２，６−ジクロロイ
ンドフェノール（ＤＣＩＰ）、９−ジメチルアミノベン
ゾ−α−フェナゾキソニウムクロライド、メチレンブル
ー、インジゴトリスルホン酸、フェノサフラン、チオニ
ン、ニューメチレンブルー、２，６−ジクロロフェノー
ル、インドフェノール、アズレＢ、Ｎ，Ｎ，Ｎ’、Ｎ’
−テトラメチル−ｐ−フェニレンジアミンジヒドロクロ
リド、レゾルフィン、サフラニン、ソディウムアントラ
キノンβ−スルフォネート、インジゴカーミン等の色
素、リボフラビン、Ｌ−アスコルビン酸、フラビンアデ
ニンジヌクレオチド、フラビンモノヌクレオチド、ニコ
チンアデニンジヌクレオチド、ルミクロム、ユビキノ
ン、ハイドロキノン、２，６−ジクロロベンゾキノン、
２−メチルベンゾキノン、２，５−ジヒドロキシベンゾ
キノン、２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン、グル
タチオン、パーオキシダーゼ、チトクロムＣ、フェレド
キシン等の生体酸化還元物質またはその誘導体、その他
Ｆｅ−ＥＤＴＡ、Ｍｎ−ＥＤＴＡ、Ｚｎ−ＥＤＴＡ、メ
ソスルフェート、２，３，５，６−テトラメチル−ｐ−
フェニレンジアミン、フェリシアン化カリウム等が挙げ
られる。これらのメディエータの濃度は、４０ｎＭ以上
程度であることが好ましい。

【００３２】上記化合物の中では、１−Ｍ−ＰＭＳ、Ｄ
ＣＩＰ、フェリシアン化カリウムおよび９−ジメチルア
ミノベンゾ−α−フェナゾキソニウムクロライドが好ま
しい。

【００３３】測定対象物質濃度の測定は、当該測定対象
物質を含有しない緩衝液を用いて作用極と対極との間に
流れる電流を測定し、続いて測定対象の試料溶液を用い
て同様に電流を測定し、これらの電流の差を、標準試料
を用いたときの電流の差と比較することにより行う。

【００３４】以下、グルコースを測定対象物質とし、作
用極にカーボン材料からなる電極を、生体触媒に微生物
であるシュードモナス・フルオレセンスを用いた場合を
例として、本発明の測定方法の一例を具体的に説明す
る。まず、測定対象物質（グルコース）を含む試料溶液
中に上記構成のバイオセンサを浸漬し、作用極−対極間
に電位を印加しない状態で、２０分間放置する。このと
き、グルコースと微生物との生体触媒反応は十分に進行
し、試料溶液中のメディエータが微生物により還元され
るため、作用極近傍でこの作用極が再酸化できる還元型
メディエータ濃度が増加する。

【００３５】次に、作用極−対極間に定電圧を５秒間印
加し、このときに両極間に流れる電流を測定する。上記
放置時間の間に生体触媒反応は十分に進行しているた
め、グルコースが試料溶液中に存在しない場合に比べ
て、作用極近傍の還元型メディエータ濃度が増加してい
る。従って、両極間に流れる電流値を計測することによ
り、試料溶液中のグルコースの濃度を計測することがで
きる。また、このとき両極間に電圧が印加される時間は
５秒間と短いので、作用極における電極反応による還元
型メディエータの濃度変化の電流値への影響を極めて小
さく抑えることができ、試料溶液中のグルコース濃度を
より厳密に測定することができる。

【００３６】なお、本発明の測定方法は、バイオセンサ
を用いて測定を行う際に、ある生体触媒反応が進行して
いる間に、その経時的変化を連続的に検知する必要がな
い場合に、特に有効に用いることができる。

【００３７】

【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に説
明するが、本発明はこれらの実施例にのみ限定されるも
のではない。

【００３８】

【実施例１】まず、バイオセンサの作製を行った。カー
ボン材料よりなる電極の作用極上に微生物（シュードモ
ナス・フルオレセンス：Pseudonomas fluoresens）を固
定化したものを作用極とした。固定化は３％アルギン酸
ナトリウム溶液に同容量の微生物溶液（ＯＤ＝３０）を
均一に混合したものを電極上に２０μｌ滴下した後、こ
れを２％塩化カルシウム溶液に３０分間漬けてゲル化さ
せることにより行った。また、対極にはカーボン材料か
らなる電極を用いた。

【００３９】また、試料溶液は、０．１Ｍのリン酸緩衝
液、０．１Ｍ塩化ナトリウム溶液及び４０ｍＭフェリシ
アン化カリウム（メディエータ）を含む溶液に、測定対
象物質として各種濃度のグルコースを添加して調製し
た。

【００４０】本発明の測定法の検討は、図１に示す測定
系を用いて行った。上記作用極２０と対極７とをポテン
シオスタット６に接続し、上記のように調製した試料溶
液３０を入れた試料槽９に浸漬した。試料溶液３０はマ
グネティックスターラ１０およびスターラバー１１によ
って攪拌した。この状態で、作用極２０と対極７との間
に電圧を印加せずに、約２０分間放置した。

【００４１】次に、ポテンシオスタットによって、対極
に対して作用極に＋４００ｍＶの電圧を印加し、５秒目
の電流値を計測した。測定値はレコーダ１２で記録し
た。この操作をグルコース濃度別に繰り返した。図２に
本実施例によるグルコース濃度（ｍＭ）と電流値との関
係を示す。

【００４２】

【比較例１】上記実施例１で用いたバイオセンサの各電
極を上記試料溶液に浸漬すると同時に、対極に対して作
用極に＋４００ｍＶの電圧を印加し続け、２０分後の電
流値を計測した他は、上記実施例１と同様にしてグルコ
ース濃度の測定を行った。この結果を図２に示す。

【００４３】図２より上記実施例１および比較例１のい
ずれも、グルコース濃度が０〜１ｍＭの範囲において、
試料溶液中のグルコース濃度と電流値との間に直線関係
が得られた。また、電流応答値を比較すると、実施例１
が比較例１と比べて２倍以上の感度を示した。この現象
は、電圧を印加し続けた比較例１では、作用極近傍で微
生物によって生成したフェロシアン化カリウムが、作用
極により連続的に酸化されているために蓄積せずに消費
されるのに対し、本提案法では微生物反応の生成物であ
るフェロシアン化カリウムは電圧印加の直前まで酸化さ
れずに作用極近傍に蓄積されるため、高感度かつ本来の
微生物のみによる酸化還元反応に近い測定結果が得られ
たと考えられる。

【００４４】

【実施例２】上記実施例１で用いたバイオセンサおよび
測定系を用いてＢＯＤ濃度の測定を行った。試料溶液と
しては、ＯＥＣＤ（経済協力開発機構）の報告書で採用
されている下記組成（表１）の人工下水を使用した。ポ
テンシオスタットに接続された作用極と対極と上記試料
溶液に浸漬し、作用極２０と対極７との間に電圧を印加
せずに、約２０分間放置した。

【００４５】次に、ポテンシオスタットによって、対極
に対して作用極に＋４００ｍＶの電圧を印加し、２秒目
の電流値を計測した。この操作をＢＯＤ濃度別に繰り返
した。また、電圧を印加して５秒目、１０秒目の電流値
の計測もＢＯＤ濃度別に行った。この結果を図３に示
す。なお、図３において横軸はＢＯＤ５日間法（ＪＩＳ
Ｋ０１０２、ウィンクラーアジ化ナトリウム変法）で測
定した前記人工下水のＢＯＤ₅濃度（ｍｇＯ／ｌ）を示
し、縦軸が上記バイオセンサにより計測された電流値
（μＡ）を示す。

【００４６】

【表１】

【００４７】

【比較例２】上記実施例１で用いたバイオセンサの各電
極を上記実施例２の試料溶液に浸漬すると同時に、対極
に対して作用極に＋４００ｍＶの電圧を印加し続け、２
０分後の電流値を計測した他は、上記実施例２と同様に
してＢＯＤ濃度の測定を行った。この結果を図３に示
す。

【００４８】図３より、上記実施例２において、電圧印
加後２〜１０秒目の範囲で電流値を測定した場合には、
試料溶液中のＢＯＤ濃度と電流値との間に直線関係が得
られた。また、電流応答値を比較すると、実施例２が比
較例２と比べて非常に高い感度を示した。

【００４９】

【発明の効果】本発明によれば、バイオセンサを用いて
試料溶液中の測定対象物質の定量を行う際に、電極自体
による酸化還元反応の影響を低減し、高感度な測定を行
うことができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 本発明の測定方法が適用される測定系の一例
を示す正面図。

【図２】 実施例１の測定方法を用いてグルコース濃度
を測定したときの結果を示すグラフ。

【図３】 実施例２の測定方法を用いてＢＯＤ濃度を測
定したときの結果を示すグラフ。

【符号の説明】

６ ポテンシオスタット ７ 対極 ９ 試料槽 １０ マグネティックスターラ １１ スターラ棒 １２ レコーダ ２０ 作用極 ３０ 試料溶液

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 吉田 信行 埼玉県羽生市東５丁目４番71号株式会社曙 ブレーキ中央技術研究所内 (72)発明者 吉田 明 埼玉県羽生市東５丁目４番71号株式会社曙 ブレーキ中央技術研究所内

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 金属または炭素からなる電極上に生体触
   媒を固定してなる作用極と、対極とを測定対象物質を含
   有する溶液に浸漬し、この作用極と対極との間に電圧を
   印加したときに両極間に流れる電流を計測することによ
   り、前記測定対象物質の測定を行うバイオセンサを用い
   た測定方法であって、前記溶液中に前記両電極を浸漬し
   た状態で、前記測定対象物質と前記生体触媒との反応が
   十分に進行するまでの時間放置した後に、前記作用極と
   前記対極との間に定電圧を所定時間印加したときの両極
   間に流れる電流値を計測することを特徴とする測定方
   法。
2. 【請求項２】 前記作用極と前記対極との間に電圧を印
   加する時間は１０秒以下であることを特徴とする請求項
   １に記載の測定方法。