JP2000515863A - Ｃｆｔｒチャネルアクチベーター化合物及びこれらを含む医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ベンゾ[ｃ]キノリジニウムファミリーからのＣＦＴＲチャネルアクチベーター化合物、又はそこから誘導される化合物のファミリー、更には該化合物を含有する医薬組成物、及び特に嚢胞性線維症の治療のための、その用途が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】 ＣＦＴＲチャネルアクチベーター化合物及びこれらを含む医薬組成物 本発明は、ＣＦＴＲチャネルアクチベーター化合物、これらを含む医薬組成物 、及び嚢胞性線維症のような病態の治療に関連するこれらの用途に関する。 上皮細胞では、水及び電解質の輸送はイオンＫ⁺、Ｎａ⁺及びＣｌ^-に対する膜 の透過性の上昇に結びついている。これらの運動は、イオンチャネル、すなわち 、イオンの受動拡散を可能とする膜の内に組み込まれた特殊化タンパク質の活性 に連動している。分子電気生理学の技術（パッチクランプ法）により、イオンチ ャネルの開放と閉鎖の単位レベルでの記録が可能になり、そして経上皮イオン輸 送、これらの調節及びこれらの病的調節不全の研究が可能になる。 上皮細胞の生理学に関連する多くの病態の中で、関与するタンパク質が塩化物 チャネルのＣＦＴＲチャネル（「嚢胞性線維症経膜コンダクタンス調節物質（cy stic fibrosis transmembrane conductance regulator）」を意味する）である 範囲で、嚢胞性線維症もイオンチャネルの病理と見なされる。ムコビシドーシス （Mucoviscidosis）、すなわちアングロサクソン語で嚢胞性線維症（ＣＦ）は、 コーカサス人種で最も普通の劣性常染色体遺伝子病である。米国及びヨーロッパ 諸国の大部分では、ＣＦ遺伝子の保因者の出現率は、１／２０〜１／３０である 。嚢胞性線維症は、ヒト臓器の外分泌腺に影響を与える。ＣＦＴＲタンパク質の 主要な発現部位は、膵臓外分泌腺、肺、汗腺、腸及び心臓組織である。この疾患 に払われる配慮が、正常上皮細胞の分泌機構の理解に非常に重要であった。腸、 膵臓又は肺の外分泌腺の上皮細胞は、これらの臓器への塩と水の輸送を制御して いる。嚢胞性線維症の場合には、ＣＦ遺伝子の突然変異がＣＦＴＲチャネルの性 質と機能を変化させる。そして電解質の輸送が異常になって、慢性肺閉塞性障害 、膵不全、細菌性肺症状、異常濃縮汗分泌（abnormally concentrated sudoripa rous secretion）及び男性不妊症に至る。分泌不全は、細胞の頂端膜に位置する 塩化物イオンに対する選択的イオンチャネル（ＣＦＴＲチャネル）の機能性、及 びサイクリックＡＭＰ経路により制御される活性に関連している。 タンパク質ＣＦＴＲは、５つのフィールド（Riordan et al.，1989）、それぞ れ６つのアルファーらせん（それぞれ２１〜２２アミノ酸を含む、１〜１２と番 号付けされたもの）を有する２つの膜貫通セグメント、２つのヌクレオチド結合 フィールド（ＮＢＦ１及び２）及び大きな親水性調節フィールド（フィールドＲ ）に分割される、分子量１７０kDの１，４８０アミノ酸の糖タンパク質である。 タンパク質ＣＦＴＲは、その分子構造から、膜輸送体（ＡＴＰ結合カセット（AT P-binding cassette）を意味するＡＢＣ）のファミリーに属する。 ＡＢＣ輸送体は、進化において高度に保存されている膜タンパク質のファミリ ーを構成する。これらは、細胞膜を通る種々の基質の移動に関係する。しかし、 原核生物では幾つかの輸送体／基質の対が明らかにされているのに、この情報は 真核細胞では少ない。哺乳動物では、ＡＢＳ輸送体の大部分は病理に関連してい る。嚢胞性線維症に関係するタンパク質ＣＦＴＲ、抗腫瘍性細胞毒性薬の拒絶に 関係する糖タンパク質Ｐ（ＭＤＲ：多剤耐性）、及びマクロファージによるアポ トーシス体のエンドサイトーシスにおいて本質的な役割を演じることが最近報告 されたタンパク質ＡＢＣ１に言及することができる。ＣＦＴＲは、経上皮塩化物 の輸送及び粘膜区画の水分補給を制御し、その一方でＭＤＲのアイソフォームの １つは、ホスファチジルコリンの移動に関係している。２×６個の膜貫通セグメ ント構造を有するこれらの３つのＡＢＣタンパク質は、ヌクレオチドを結合して 加水分解する２つのフィールド（ＮＢＦ）と調節フィールドを有する。ＣＦＴＲ の調節が特に研究されている。 ２つの複雑なプロセスが、ＣＦＴＲチャネルの活性を制御する：キナーゼタン パク質によるフィールドＲのリン酸化及び２つのＮＢＦフィールドへのＡＴＰの 結合（及び恐らく加水分解）。ＣＦＴＲチャネルの脱リン酸化は、その閉鎖まで のチャネルの活性の消失を引き起こす（Tabcharani et al.，1991，Becq et al. ，1993a，Becq et al.，1994）。更に、ＣＦＴＲチャネルは、チャネルの活性と リン酸化の状態を制御する膜ホスファターゼに結合している（Becq et al.，199 3b，Becq et al.，1994）。 タンパク質ＣＦＴＲをコードする遺伝子は、分子クローニングにより単離され 、染色体７上で同定された（Kerem et al.，1989，Riordan et al.，1989）。遺 伝子の同定及びその嚢胞性線維症への関わりは、ＣＦ患者に由来するＣＦ遺伝子 のコード領域（エキソン１０）内の３つの塩基対の欠失の位置により確認された 。 この突然変異は、ＮＢＦ１内のタンパク質の５０８位のフェニルアラニンの欠失 （ΔＦ５０８）に対応する。この突然変異の出現頻度は、遺伝子解析で平均７０ ％である（Tsui & Buchwaid，1991）。突然変異遺伝子（ΔＦ５０８）の転写に より産生する異常タンパク質が、侵された上皮細胞の塩化物の輸送においてもは やその機能を確保することができないため、この突然変異の結果は劇的である。 ｃＡＭＰによる外分泌腺の上皮細胞の刺激後、塩化物の流動が存在しないことは 、ＣＦ遺伝子の異常、そして特に突然変異（ΔＦ５０８）の存在を証明する主要 な特徴である。今までにＣＦ遺伝子上に３００以上の突然変異が同定されている 。最高密度の突然変異は、２つのヌクレオチド結合フィールドで見い出される。 突然変異（ΔＦ５０８）は、７０％の症例で見い出され、そして５０％の患者は この突然変異についてホモ接合である。７つの他の顕著な突然変異は、１％を超 える発生率で存在する。突然変異Ｇ５５１Ｄは、アスパラギン酸（Ｄ）によるタ ンパク質の５５１位のグリシン残基（Ｇ）の置換に対応する。この突然変異を有 する患者は、膵不全及び重篤な肺障害を伴う重篤な病態を呈する（Cutting et a l.，1990）。この突然変異を観察する発生率は、あるＣＦ集団では３〜５％に達 する。ΔＦ５０８欠失とは対照的に、突然変異Ｇ５５１Ｄを含むタンパク質ＣＦ ＴＲは、成熟しており、膜に組み込まれる（Gregory et al.，1991）。しかし、 この突然変異は膜の不透過性を引き起こし、ｃＡＭＰ経路の刺激はこの変異体の 発現に関係するチャネルを開放しない（Gregory et al.，1991，Becq et al.，1 994）。 Ｒ１１７Ｈ、Ｒ３３４Ｗ及びＲ３４７Ｐのような他の突然変異は、順に０．８ 、０．４及び０．５％の低い発生率で出現し、そしてあまり重篤でない病態に関 係している（Sheppard et al.，1993）。これら３つの変異体の発現は、膜内へ の挿入と調和した、成熟したグリコシル化型のタンパク質を発生させる。 しかし、この３つの変異体は、チャネルの開放によりＡＭＰ経路の刺激に応答 することができる。流動の大きさ、単位コンダクタンス及び３つの変異体のそれ ぞれに関係するチャネルの開放の確率は、正常ＣＦＴＲチャネルに対して修飾さ れている（Sheppard et al.，1993，Becq et al.，1994）。しかし、キナーゼ／ ホスファターゼによる調節は、変異体Ｇ５５１Ｄ及びΔＦ５０８を含むこれらの 種々の変異体については正常であるようである（Becq et al.，1994）。 そしてこれらの観察は、Ｇ５５１Ｄ及びΔＦ５０８を含む多数のＣＦＴＲ変異 体を薬理学的に活性化することが可能であることを示す。嚢胞性線維症に侵され た上皮細胞の膜内ではタンパク質ΔＦ５０８の指令の欠乏にも関わらず、幾つか のチームは、このタンパク質が膜内で機能的に存在しうることを証明した（Dale mans et al.，1991,Drumm et al.，1991，Becq et al.，1994）。したがって治 療の成功の機会を最適化するためのＣＦＴＲチャネル開放のための方策を開発す ること、またこれが必要でない場合（ΔＦ５０８以外の突然変異）に遺伝子治療 を置換することも必要かつ非常に重要であると考えられる。 嚢胞性線維症の遺伝学及びタンパク質ＣＦＴＲの生物学と生化学における進歩 にも関わらず、ＣＦＴＲチャネルのオープナーの薬理学はさほど発展していない 。現在３つのファミリーの分子が、ＣＦＴＲチャネルのアクチベーター又はオー プナーとしてのこれらの性質について提唱されている：フェニルイミダゾチアゾ ール(レバミゾール及びブロモテトラミゾール)、ベンズイミダゾロン(ＮＳ００ ４)及びキサンチン（ＩＢＭＸ、テオフィリン…）。 １）フェニルイミダゾチアゾール（レバミゾール及びブロモテトラミゾール） 最近レバミゾールとブロモテトラミゾールは、膜ホスファターゼを阻害するこ とにより、ＣＦＴＲチャネルの活性及びリン酸化のレベルの制御が可能であるこ とが証明された（Becq et al.，1994）。これらの化合物は、用量依存的にＣＦ ＴＲチャネルを開放し（Becq et al.，1996）、疾患の出所で突然変異を有する ＣＦＴＲチャネルに作用する（Becq et al.，1994）。これらのアクチベーター の作用の様式は未だ判然としない。これらの分子は、ｃＡＭＰ又は細胞内カルシ ウムの従来の経路により作用するものではない。ブロモテトラミゾールファミリ ーの化合物は既に治療に使用されており（Grem，1990）、そしてレバミゾールは ある種の肺治療に使用されている（Van Eygen et al.，1976，Dils，1979）。後 者の性質は、臨床試験を開始するためのある種の利点を示している。しかし、こ れらの分子は全ての細胞で作用できるとは考えられない。腸細胞は応答が悪く、 アフリカツメガエル卵母細胞では発現後ＣＦＴＲの開放を開始させることができ ない。更には、突然変異Ｇ５５１Ｄ／Ｇ５５１Ｄを有するトランスジェニックマ ウスモデルでは、ブロモテトラミゾールは期待されるアクチベーター効果を持た ない。したがってこれらの分子の効果は限定されていると考えられる。 ２）ベンズイミダゾロン（ＮＳ００４） Gribkoff et al.，1994は、最近ＮＳ００４（イミダゾール核から誘導される 化合物（ベンズイミダゾロン））が、レバミゾールと同様にある条件下では（Ｃ ＦＴＲがリン酸化されていないならば）チャネルを開放することができることを 証明した。しかし、ベンズイミダゾロンはまた、多くのカリウムチャネルのアク チベーターでもあり（Olesen et al.，1994）、その結果ＣＦＴＲにさほど特異 的ではない。 ３）キサンチン（ＩＢＭＸ、テオフィリン…） ＩＢＭＸ（３−イソブチル−１−メチルキサンチン）のようなキサンチンはＣ ＦＴＲアクチベーターである。その作用機構は、未だほとんど知られておらず、 幾つかの可能性が存在する。細胞内ホスホジエステラーゼ(ｃＡＭＰの分解酵素) を阻害することにより、キサンチンはｃＡＭＰのレベルを上昇させることができ 、このためＣＦＴＲを活性化することができる。ＣＦＴＲのヌクレオチド結合フ ィールド（ＮＢＦ）へのキサンチンの結合のような、他の可能性が現在提唱され ている。 本発明の目的は、今までに報告されているＣＦＴＲチャネルアクチベーターよ りもＣＦＴＲに対して特異的な、ＣＦＴＲチャネルアクチベーター化合物を提供 することである。 これに関連して、本発明の目的は、ヒト又は動物の上皮細胞における、特に塩 化物の経膜イオン流の障害に関係する病理の治療のための新しい医薬を提供する ことである。 本発明の目的は、更に特定して、嚢胞性線維症の治療、細胞毒性薬（特に抗腫 瘍薬）の拒絶の予防、又は気管支若しくは消化管（特に膵臓又は腸）の閉塞の予 防若しくは治療に関して使用することができる新しい医薬、あるいは心臓血管疾 患の治療に関しても使用することができる新しい医薬を提供することである。 本発明の別の目的は、本発明の化合物及び医薬組成物の製造方法を提供するこ とである。 本発明の主題は、以下の一般式（Ｉ）： ［式中、 − 複素環Ａは、芳香族又は非芳香族であり（後者の場合には、この複素環の 窒素原子は、二重結合により４ａ位の炭素に結合していると解される）； − Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、相互に独立に、 ・水素、又は臭素若しくはフッ素原子、又は ・ハロゲン原子、特に塩素原子、又は ・約１〜約１０個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐鎖の、アルキル、ア ルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基｛これらの基は、適宜、特に ハロゲン、及び／又はヒドロキシル、及び／又はアミン（第一級、第二級又は第 三級）、及び／又は環に約５〜約１０個の炭素原子を含む、芳香族及び／若しく は脂肪族環〔これらの環は、これら自体、適宜、特にハロゲン、及び／又はヒド ロキシル、及び／又はアミン（第一級、第二級又は第三級）、及び／又はアルキ ル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上記 と同義である）により置換されている〕により置換されている｝、又は ・環に約５〜約１０個の炭素原子を含む、芳香族若しくは脂肪族環〔これら の環は、これら自体、適宜、特にハロゲン、及び／又はヒドロキシル、及び／又 はアミン（第一級、第二級又は第三級）、及び／又はアルキル、アルコキシ、カ ルボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上記と同義である）によ り置換されている〕、又は ・ＯＲ_a基〔Ｒ_aは、水素原子、又は直鎖若しくは分岐鎖の、アルキル、カ ルボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上記と同義である）、又 は芳香族若しくは脂肪族環（これらの環は、上記と同義である）を表す〕、又は ・ＮＲ_bＲ_c基〔Ｒ_b及びＲ_cは、相互に独立に、直鎖若しくは分岐鎖の、アル キル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上 記と同義である）、又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの環は、上記と同義で ある）を表す］を表すか、あるいは ・ Ｒ₁とＲ₂、又はＲ₃とＲ₄、及び／又はＲ₄とＲ₅、及び／又はＲ₇とＲ₈、 及び／又はＲ₈とＲ₉、及び／又はＲ₉とＲ₁₀が、上述の異なる原子又は基又は環 を表さないとき、Ｒ₁はＲ₂と共同して、又はＲ₂はＲ₃と共同して、及び／又はＲ₃ はＲ₄と共同して、及び／又はＲ₄はＲ₅と共同して、及び／又はＲ₇はＲ₈と共同 して、及び／又はＲ₈はＲ₉と共同して、及び／又はＲ₉はＲ₁₀と共同して、順に Ｃ₁及びＣ₂と共に、又はＣ₂及びＣ₃と共に、又はＣ₃及びＣ₄と共に、又はＣ₄、 Ｃ_4a及びＣ₅と共に、又はＣ₇及びＣ₈と共に、又はＣ₈及びＣ₉と共に、又はＣ₉及 びＣ₁₀と共に、５〜１０個の炭素原子を含む、芳香族又は脂肪族環〔適宜、この 環は、特にハロゲン、及び／又はアルキル、アルコキシ、カルボニル若しくはオ キシカルボニル基、及び／又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの基又は環は、 上記と同義である）により置換されている〕を形成するか、又は ・Ｒ₃とＲ₄が、上述の異なる原子若しくは基若しくは環を表さないとき、Ｒ₃ はＲ₄と共同して、下記式：（式中、Ｒ_aは、上記と同義である）で示されるインドール基を形成し； −Ｙは、 ・ＯＲ_d基〔Ｒ_dは、水素原子、又は直鎖若しくは分岐鎖の、アルキル、カル ボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上記と同義である）、又は 芳香族若しくは脂肪族環（これらの環は、上記と同義である）を表す〕、又は ・ＮＲ_eＲ_f基〔Ｒ_e及びＲ_fは、相互に独立に、直鎖若しくは分岐鎖の、アル キル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上 記と同義である）、又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの環は、上記と同義で ある）を表す〕を表し、 ・Ｒ_d、又はＲ_e及びＲ_fの少なくとも１つが、上述の異なる原子又は基又は 環の１つを表さないとき、Ｒ_d、又はＲ_e及びＲ_fの少なくとも１つは、Ｒ₅と共同 して、又はＲ₇と共同して、それぞれＣ₅若しくはＣ₆と共に、又はＣ₆、Ｃ_6a及び Ｃ₇と共に、５〜１０個の炭素原子を含む、芳香族又は脂肪族複素環〔適宜、特 にハロゲン、及び／又はアルキル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカル ボニル基、及び／又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの基又は環は、上記と同 義である）により置換されている〕を形成すると解され； − ｎは、０又は１に等しく、そして ・ｎが０に等しいとき、 ＊Ｘは、ハロゲン原子（特に臭素又は塩素原子）のようなアニオン型の原 子、又はペルクロラートのようなアニオン型の原子の基を表し、そして式（Ｉ） の複素環Ａの窒素は、第四級型であって、一方では共有結合により１１位の炭素 に結合し、かつ他方ではイオン結合により上記のＸに結合し、 ＊Ｒ₁とＲ₁₀が、上述の異なる原子又は基又は環の１つを表さないとき、 Ｒ₁はＲ₁₀と共同して、Ｃ₁、式（Ｉ）の複素環Ａの窒素、Ｃ₁₁、及びＣ₁₀と共に 、５〜１０個の炭素原子を含む、芳香族又は脂肪族複素環〔適宜、ハロゲン、及 び／又はアルキル、カルボニル若しくはオキシカルボニル基、及び／又は芳香族 若しくは脂肪族環（これらの基又は環は、上記と同義である〕により置換されて いる）を形成すると解され、 ・ｎが１に等しいとき、Ｘは、水素原子、又はハロゲン原子、特に臭素、若 しくは塩素、若しくはフッ素原子を表す］で示される誘導体の使用である。 生物（ヒト又は動物）における、経膜イオン流動障害、特に塩素、及び適宜重 炭酸塩に結びついた病態（特に、肺、消化器又は心臓）の治療を目的とする医薬 の調製のため、特にムコビシドーシスの治療、又は細胞毒性薬（特に抗腫瘍薬） の拒絶の予防、気管支若しくは消化管（特に膵臓又は腸）に対する閉塞の治療を 目的とする医薬の調製のため。 本発明の更に特定の主題は、一般式（Ｉ）［式中、ｎ＝１であり、そして以下 の一般式（II）： （式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、上記と 同義である）で示される誘導体に対応する］の化合物の上記と同義の使用である 。 したがって、本発明はまた、更に特定して以下の一般式（IIａ）：［式中、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表すか、又はＣ₁及びＣ₂と共同して、６個の炭 素原子を含む芳香族環を形成し、 − Ｙは、−ＯＨ又はＮＨ₂基を表し、 −Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、水素原子を表すか、又はＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉若しくは Ｒ₁₀の１つは、ハロゲン原子、特に臭素、塩素若しくはフッ素原子を表し、 − Ｘは、水素原子又はハロゲン原子、特に臭素、塩素若しくはフッ素原子を 表す］で示される誘導体の上記と同義の使用に関する。 本発明の範囲で有利に使用される一般式（IIａ）の化合物は、下記式： から選択される化合物である。 更に特定して本発明はまた、以下の一般式（IIｂ）：［式中、Ｒ_a、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、上記と同義 である］で示される化合物、及び特に式（IIｂ）［式中、 − Ｒ_aは、水素原子を表し、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表し、そしてＲ₁とＲ₂を有する２つの炭素の間 に二重結合は存在せず、 − Ｒ₅は、水素原子を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、及びＲ₁₀は、水素原子を表すか、又はＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、及 びＲ₁₀の１つは、ハロゲン原子、特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表し、 − Ｙは、−ＮＨ₂を表し、 − Ｘは、ハロゲン原子、特に臭素、塩素若しくはフッ素原子を表す］の化合 物の上記と同義の使用に関する。 本発明の範囲で有利に使用される式（IIb）の化合物は、下記式： ［化合物Ａ：Ｒ₇＝Ｃｌ、Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｂ：Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｃ：Ｒ₈＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｄ：Ｒ₉＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｅ：Ｒ₁₀＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｈ、 化合物Ｆ：Ｒ₉＝Ｂｒ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₁₀＝Ｈ］から選択される化合物である。 本発明の更に特定の主題は、一般式（Ｉ）［式中、ｎ＝０であり、そして以下 の一般式（III）： （式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、上記と 同義である）で示されるベンゾ［ｃ］キノリジニウム誘導体に対応する］の化合 物について上記と同義の使用である。 したがって、本発明は更に特定して以下の一般式（IIIａ）： ［式中、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表すか、又はＣ₁及びＣ₂と共同して、６個の炭 素原子を含む芳香族環を形成し、 − Ｙは、−ＯＨ又は−ＮＨ₂又はＮＨＣＯＣＨ₃基を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、水素原子を表すか、又はＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀ の１つは、ハロゲン原子、特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表し、 − Ｘは、アニオン型のハロゲン原子、特に臭素原子Ｂｒ^-、若しくは塩素原 子Ｃｌ^-、又はアニオン型の原子の基、特にペルクロラートＣｌＯ₄ ^-を表す］で 示される化合物の上記と同義の使用に関する。 本発明の範囲の特に好ましい化合物は、式（IIIａ）［式中、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表し、 − Ｙは、−ＯＨ基を表し、 − Ｘは、アニオン型のハロゲン原子、特に臭素原子Ｂｒ^-、若しくは塩素原 子Ｃｌ^-、又はアニオン型の原子の基、特にペルクロラートＣｌＯ₄ ^-を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、相互に独立に、水素原子又はハロゲン原子、 特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表す］の化合物である。 本発明の範囲で有利に使用される一般式（IIIａ）の化合物は、下記式： から選択される化合物である。 更に特定して本発明は、以下の一般式（IIIｂ）：［式中、Ｒ_a、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、上記と同義 である］で示される化合物、及び特に式（IIIｂ）［式中、 − Ｒ_aは、水素原子を表し、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表し、そしてＲ₁とＲ₂を有する２つの炭素の間 に二重結合は存在せず、 − Ｒ₅は、水素原子を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、及びＲ₁₀は、水素原子を表すか、又はＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、及 びＲ₁₀の１つは、ハロゲン原子、特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表し、 − Ｙは、−ＮＨ₂を表し、 − Ｘは、アニオン型のハロゲン原子、特に臭素原子Ｂｒ^-、若しくは塩素原 子Ｃｌ^-、又はアニオン型の原子の基、特にペルクロラートＣｌＯ₄ ^-を表す］の 化合物の上記と同義の使用に関する。 本発明の範囲で有利に使用される式（IIIb）の化合物は、下記式： ［化合物Ｇ：Ｒ₇＝Ｃｌ、Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｈ：Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｉ：Ｒ₈＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｊ：Ｒ₉＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｋ：Ｒ₁₀＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｈ、 化合物Ｌ：Ｒ₉＝Ｂｒ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₁₀＝Ｈ］から選択される化合物である。 本発明の主題は、活性成分として、少なくとも１つの上述の一般式（Ｉ）の化 合物を、生理学的に許容しうる賦形剤との組合せで含有する、任意の医薬組成物 である。 本発明の更に特定の主題は、活性成分として、上述の少なくとも１つの式（II ）及び更に特定して式（IIａ）の化合物、そして特に少なくとも１つの上述の化 合物１〜１０、及び更になお特定して上記と同義の式（IIｂ）の化合物、そして 特に少なくとも１つの上述の化合物Ａ〜Ｆを含有する、上述の任意の医薬組成物 である。 本発明の更に特定の主題は、活性成分として、上述の少なくとも1つの一般式 （III）及び更に特定して式（IIIａ）の化合物、そして特に少なくとも１つの上 述の化合物１１〜２７、及び更になお特定して上記と同義の式（IIIｂ）、そし て特に少なくとも１つの上述の化合物Ｇ〜Ｌを含有する、上述の任意の医薬組成 物である。 本発明の好ましい医薬組成物は、化合物１９（ＭＰＢ−０７とも称される）を 、適宜、上述の本発明の１つ（又はそれ以上）の他の化合物との組合せで含有す る 組成物である。 有利には、本発明の医薬組成物は、経口経路により投与することができる形態 、特に錠剤若しくはカプセル剤の形態で、又は非経口経路により投与することが できる形態、特に静脈内、筋肉内若しくは皮下経路により注射可能な調剤の形態 で、あるいはまた気道による、特にエーロゾルの形態で肺経路による、形態で提 供される。 更に有利には、本発明の医薬組成物は、活性成分の量が、活性成分の１日用量 で、１回以上の投薬において約０．１mg/kg〜５mg/kg、特に約３mg/kgである量 であることを特徴とする。 本発明はまた、上述の化合物２、３、９、１０、１１（又はＭＰＢ−２６）、 １２又は（ＭＰＢ−５）、２２、２３及び２４を除いた、それ自体、上述の一般 式（Ｉ）の化合物に関する。 更に特定して本発明の主題は、化合物２、３、９及び１０を除いた、ｎ＝１で あり、かつ上述の一般式（II）の化合物に対応する、上述の一般式（Ｉ）の化合 物である。 更に特定して本発明は、上述の一般式（IIａ）の化合物（その内特に上述の化 合物１、４、５、６、７及び８）に関する。 更に特定して本発明はまた、上述の一般式（IIｂ）の化合物（その内特に上述 の化合物Ａ〜Ｆ）に関する。 更に特定して本発明の主題は、化合物１１、１２、２２、２３及び２４を除い た、ｎ＝０であり、かつ上述の式（III）のベンゾ［ｃ］キノリジニウム誘導体 に対応する、上述の一般式（Ｉ）の化合物である。 更に特定して本発明は、上述の一般式（IIIａ）の化合物（その内特に上述の 化合物１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２５、２６及 び２７）に関する。 更に特定して本発明はまた、上述の一般式（IIIｂ）の化合物（その内特に上 述の化合物Ｇ〜Ｌ）に関する。 本発明の主題はまた、以下の工程を含むことを特徴とする、一般式（Ｉ）の化 合物の製造方法である： − 式（Ａ）［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄及びＲ₅は、式（Ｉ）と同義である ］の誘導体の、フェニルリチウム又はリチウムジイソプロピルアミドによる、有 利にはエーテル又はＴＨＦ中での処理（これにより、以下の反応図：に従い、式（Ｂ）［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄及びＲ₅は、式（Ｉ）と同義であ る］の誘導体が得られる）、 − 前段階で得られた式（Ｂ）の誘導体の、式（Ｃ）［式中、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉ 、Ｒ₁₀及びＸは、式（Ｉ）と同義である］の誘導体との縮合（これにより、以下 の反応図：に従い、式（Ｄ）［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀及び Ｘは、式（Ｉ）と同義である］の誘導体が得られる）、 − Ｈ₂Ｏの添加による式（Ｄ）の化合物の処理（これにより、上述の式（II ）［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀、及びＸは、式（Ｉ）と同義であり、そしてＹ は、−ＮＨ₂を表す］の誘導体に対応する、以下の式（II）： で示される誘導体が得られる）、 − 適宜、上述の式（II）の化合物の、式（Ｉ）と同義のＲ_e及びＲ_f基を含有 する誘導体〔この誘導体は、上述の式（II）の化合物の６位の炭素に結合してい る窒素原子と、特にＲ_e及び／又はＲ_fのハロゲン化物により（必要であれば、上 述の式（II）の化合物に存在し、上述のＲ_e及びＲ_f基を含有する誘導体と反応す ることができる他の官能基を事前に保護すべく処理しながら）反応することがで きる〕による処理（これにより、以下の式（II）： ［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀及びＸは、上記と同義であり、そしてＹは、式（ Ｉ）と同義の−ＮＲ_eＲ_f基を表す］で示される化合物が得られる）、 − 適宜、特に４０℃で硫酸（pH３）の作用による、上述の式（II）［式中、 Ｙは、ＮＨ₂を表す］の化合物の加水分解（これにより、上述の式（II）［式中 、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀及びＸは、式（Ｉ）と同義であり、そしてＹは、−ＯＨ 基を表す］の誘導体に対応する、以下の式（II）：で示される化合物が得られる）、 − 適宜、上述の式（II）［式中、Ｙは、−ＯＨ基を表す］の化合物の、式（ Ｉ）と同義のＲ_d基を含有する誘導体〔この誘導体は、上述の式（II）の化合物 の７位の炭素に結合している酸素原子と、特にＲ_dのハロゲン化物により（必要 であれば、上述の式（II）の化合物に存在し、上述のＲ_d基を含有する誘導体と 反応することができる他の官能基を事前に保護すべく処理しながら）反応するこ とができる〕による処理（これにより、以下の式（II）： ［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀及びＸは、上記と同義であり、そしてＹは、式（ Ｉ）と同義の−ＯＲ_d基を表す］で示される化合物が得られる）、 − 適宜、上述の式（II）［式中、Ｙは、−ＮＨ₂又は−ＯＨを表す］の化合 物の有利には２００℃での加熱（これにより、上述の式（III）［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅ 、Ｒ₇〜Ｒ₁₀及びＸは、式（Ｉ）と同義であり、そしてＹは、−ＮＨ₂又は−Ｏ Ｈ基を表す］の化合物に対応する、それぞれ以下の式（III）： で示される化合物が得られる）、 − 適宜、上述の式（III）［式中、Ｙは、−ＮＨ₂基を表す］の化合物の、式 （Ｉ）と同義のＲ_e及びＲ_f基を含有する誘導体にの誘導体は、上述の式（III） の化合物の６位の炭素に結合している窒素原子と、特にＲ_e及び／又はＲ_fのハロ ゲン化物により（必要であれば、上述の式（III）の化合物に存在し、上述のＲ_e 及びＲ_f基を含有する誘導体と反応することができる他の官能基を事前に保護す べく処理しながら）反応することができる〕による処理（これにより、以下 の式（III）：［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀及びＸは、上記と同義であり、そしてＹは、式（ Ｉ）と同義の−ＮＲ_eＲ_f基を表す］で示される化合物が得られる）、 − 適宜、上述の式（III）［式中、Ｙは、−ＯＨ基を表す］の化合物の、式 （Ｉ）と同義のＲ_d基を含有する誘導体〔この誘導体は、上述の式（III）の化合 物の７位の炭素に結合している酸素原子と、特にＲ_dのハロゲン化物により（必 要であれば、上述の式（III）の化合物に存在し、上述のＲ_d基を含有する誘導体 と反応することができる他の官能基を事前に保護すべく処理しながら）反応する ことができる〕による処理（これにより、以下の式（III）： ［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀及びＸは、上記と同義であり、そしてＹは、式（ Ｉ） と同義の−ＯＲ_d基を表す］で示される化合物が得られる）、 −適宜、上述の式（II）又は（III）の化合物の、特に減圧下の酸化白金の存 在下での接触水素化による水素化（これにより、以下の式（II）又は（III）： ［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、上記と同義である］で示される化 合物が得られる）。 上述の化合物Ａ〜Ｌは、有利には−４０℃でハルマラン（harmalane）でブチ ルリチウム（ＢｕＬｉ、２当量）の処理、その後に２−クロロベンゾニトリル（ 適宜、１つ以上の上記と同義のＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀基により置換されている ）の付加（これにより、式Ａ〜Ｆの化合物が得られ、これを窒素下で１９５℃で 加熱することにより、それぞれ化合物Ｇ〜Ｌとなる）により得られる。 本発明は、上述の化合物１〜２４の製造法の以下の詳細な説明、更にはＣＦＴ Ｒに及ぼす幾つかのこれらの化合物の作用の試験を利用して更に明らかにされる 。 Ｉ−化合物１〜２４の製造法： ａ）１−ヒドロキシ−１−フェニル−２−（２−ピリジル）エチレン（化合物 １） 化合物１は、２−クロロベンゾニトリルの代わりにベンゾニトリルを使用する 他は、化合物２の調製の範囲で以後に記載される方法と同一の任意の操作法によ り調製した。 ｂ）１−ヒドロキシ−１−（２−クロロフェニル）−２−（２−ピリジル）エ チレン（化合物２） 無水ＴＨＦ３０ml中のジイソプロピルアミン２．２２ｇ（０．０２２mol）を 、塩化カルシウム乾燥管と窒素の供給を伴う還流冷却器を取り付けた５００ml反 応器に入れた。溶液を０℃にし、次にＢｕＬｉの１.６Mヘキサン溶液１３.７５m l（０．０２２mol）を加えた。０℃で３０分間撹拌し、次に温度を−４０℃まで 下げ、次いで２−メチルピリジン１．８６ｇ（０．０２mol）を加えた。−４０ ℃で３０分間撹拌し、次に無水ＴＨＦ２０ml中の２−クロロベンゾニトリル２． ７５ｇを加えた。反応媒体を周囲温度に戻して、水２０mlを加え、次に２NＨ₂Ｓ Ｏ₄の添加によりpHを２に調整した。１時間撹拌しながら加熱還流し、続けてク ロロホルムで抽出して硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去して、残渣を無水 エーテル最少量に溶解し、次に塩酸塩が完全に沈殿するまで、ＨＣｌで飽和した エタノールを滴下により加えた。こうして化合物２の２.９９ｇを得た（すなわ ち５６％の収率）。 ｃ）１−アミノ−１−（２−クロロフェニル）−２−（２−ピリジル）エチレ ン（化合物３） 化合物３は、Ｈ₂ＳＯ₄の添加による加水分解段階を経ない他は、化合物２の 調製の範囲で上述の方法と同一の任意の操作法により調製した。 ｄ）１−ヒドロキシ−１−（２−ブロモフェニル）−２−（２−ピリジル）エ チレン（化合物４） 化合物４は、２−クロロベンゾニトリルの代わりに２−ベンゾベンゾニトリル を使用する他は、化合物２の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の操作法によ り調製した。 ｅ）１−ヒドロキシ−１−（２，３−ジクロロフェニル）−２−（２−ピリジ ル）エチレン（化合物５） 無水ＴＨＦ３０ml中のジイソプロピルアミン２．２２ｇ（０．０２２mol）を 、塩化カルシウム乾燥管と窒素の供給を伴う還流冷却器を取り付けた５００ml反 応器に入れた。溶液を０℃にし、次にＢｕＬｉの１.６Mヘキサン溶液１３.７５m l（０．０２２mol）を加えた。０℃で３０分間撹拌し、次に温度を−４０℃まで 下げ、次いで２−メチルピリジン１．８６ｇ（０．０２mol）を加えた。−４０ ℃で３０分間撹拌し、次に無水ＴＨＦ２０ml中の２，３−ジクロロベンゾニトリ ル２.５８ｇ(０．０１５mol)を加えた。反応媒体を周囲温度に戻して、水２０ml を加え、次に２N Ｈ₂ＳＯ₄の添加によりpHを２に調整した。２時間撹拌しなが ら加熱還流し、次に有機相を分離して硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し て、残渣をシリカカラムのクロマトグラフィーに付してクロロホルムで溶出し、 純粋なケトン３．１９ｇ（８０％）を得た。 ¹Ｈ ＮＭＲスペクトル(ＣＤＣｌ₃)（δppm、シグナル、Ｎプロトン、属性） ：８、二重項、ピリジンの６位のＨ；7.6.5、多重項、６、芳香族Ｈ；5.55、ｓ 、ｂ（８０％）ビニルＨ；4.25、ｓ ｓ２（２０％）ＣＨ₂。 こうして得られた塩基は、塩酸塩に変換することができた：塩基を無水エーテ ルに溶解して、ＨＣｌで飽和した無水エタノールを滴下により加えた。 f）１−ヒドロキシ−１−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（２−ピリジ ル）エチレン（化合物６） 化合物６は、２−クロロベンゾニトリルの代わりに２，４−ジクロロベンゾニ トリルを使用する他は、化合物２の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の操作 法により調製した。 ｇ）１−ヒドロキシ−１−（２，５−ジクロロフェニル）−２−（２−ピリジ ル）エチレン（化合物７） 化合物７は、２−クロロベンゾニトリルの代わりに２，５−ジクロロベンゾニ トリルを使用する他は、化合物２の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の操作 法により調製した。 ｈ）１−ヒドロキシ−１−（２，６−ジクロロフェニル）−２−（２−ピリジ ル）エチレン（化合物８） 化合物８は、２−クロロベンゾニトリルの代わりに２，６−ジクロロベンゾニ トリルを使用する他は、化合物２の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の操作 法により調製した。 i）１−ヒドロキシ−１−（２−クロロフェニル）−２−（２−キノリル）エ チレン（化合物９） 化合物９は、２−メチルピリジンの代わりに２−メチルキノリンを使用する他 は、化合物２の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の操作法により調製した。 ｊ）１−アミノ−１−（２−クロロフェニル）−２−（２−キノリル）エチレ ン（化合物１０） 化合物１０は、Ｈ₂ＳＯ₄の添加による加水分解段階を経ない他は、化合物９の 調製の範囲で上述の方法と同一の任意の操作法により調製した。 ｋ）６−アミノベンゾ［ｃ］キノリジニウムＭＰＢ−２６（化合物１１） 無水ＴＨＦ３０ml中のジイソプロピルアミン２．２２ｇ（０．０２２mol）を 、塩化カルシウム乾燥管と窒素の供給を伴う還流冷却器を取り付けた５００ml反 応器に入れた。溶液を０℃にし、次にＢｕＬｉの１.６Mヘキサン溶液１３.７５m l（０．０２２mol）を加えた。０℃で３０分間撹拌し、次に温度を−４０℃まで 下げ、次いで２−メチルピリジン１．８６ｇ（０．０２mol）を加えた。−４０ ℃で３０分間撹拌し、次に無水ＴＨＦ２０ml中の２−クロロベンゾニトリル２． ７５ｇ（０．０２mol）を加えた。反応媒体を周囲温度に戻して、塩化アンモニ ウムの１０％溶液を加えた。有機相を分離し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、溶媒を留去 して、残渣を窒素流下で１５分間２００℃にした。白色の蒸気の発生を観察した 後、残渣が帯掲色の塊状に凝固した。生成物を最初にアセトンで洗浄し、次にエ タノールに溶解して酢酸エチルで沈殿させることにより精製した。精製は、中性 アルミナカラムのクロマトグラフィーに付して酢酸エチルで溶出しても行うこと ができた。こうして水１molと結晶化する生成物１．７３ｇ（３５％）を得た。 −質量スペクトル：ｍ／ｅ 194（Ｍ⁺−ＨＣｌ−Ｈ₂Ｏ）。 −赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）（νcm^-、属性）：3460、3360、ＮＨ₂；1660 、1640、1660、Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｃ；760、オルト置換したベンゼン。 ¹Ｈ ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯｄ６）（δppm、シグナル、ｎプロトン、属 性）：3.2〜4、交換可能なピーク Ｄ₂Ｏ（ＮＨ₂＋Ｈ₂Ｏ）；7.1、一重項、５位 のＨ；7.4〜8.15、２つの塊状、芳香族５Ｈ；9.00、２Ｈ、芳香族；9.8、二重項 Ｊ＝８Hz、１位のＨ。 １）６−ヒドロキシベンゾ［ｃ］キノリジニウムクロリドＭＰＢ−０５（化合 物１２） １−ヒドロキシ−１−（２−クロロフェニル）−２−（２−ピリジル）エチレ ン（化合物２）を炭酸ナトリウムの水溶液で中和し、この塩基をエーテルで抽出 し、この溶液をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、次に溶媒を留去した。淡黄色油状物の形態 の塩基１．１６ｇ（０．００５mol）を窒素下で１９５℃で１５分間加熱した。 こうして得られた残渣をアセトンで洗浄し、次にエタノールに溶解して酢酸エチ ルの添加により沈殿させた。水１molと結晶化したクリーム白色の生成物０．７ ５ｇ（６０％）を得た。 −質量スペクトル：ｍ／ｅ 195（Ｍ⁺−ＨＣｌ−Ｈ₂Ｏ）、167（Ｍ⁺−ＨＣｌ −Ｈ₂Ｏ−ＣＯ）。 −赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）（νcm^-1、属性）：3250、ＯＨ；1640、Ｃ＝ Ｎ；770、オルト置換したベンゼン。 ¹Ｈ ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯｄ６）（δppm、シグナル、ｎプロトン、属 性）：6.60、広い交換可能なピーク Ｄ₂Ｏ、ＨＯ；7.75、一重項、５位のＨ；7 .9〜8.6、多重項、６Ｈ芳香族；9.15、二重項、Ｊ＝６．５Hz、１Ｈ；10、二重 項、Ｊ＝６Hz、１位のＨ。 ｍ）６−アミノベンゾ［ｃ］キノリジニウムブロミドＭＰＢ−０１（化合物１ ３）： 化合物１３は、２−クロロベンゾニトリルの代わりに２−ブロモベンゾニトリ ルを使用する他は、化合物１１の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の操作法 により調製した。 ｎ）６−アミノ−１０−クロロベンゾ［ｃ］キノリジニウムクロリドＭＰＢ− ０２（化合物１４）： 化合物１４は、２−クロロベンゾニトリルの代わりに２，３−ジクロロベンゾ ニトリルを使用する他は、化合物１１の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の 操作法により調製した。 ｏ）６−アミノ−９−クロロベンゾ［ｃ］キノリジニウムクロリド（化合物１ ５）： 化合物１５は、２−クロロベンゾニトリルの代わりに２，４−ジクロロベンゾ ニトリルを使用する他は、化合物１１の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の 操作法により調製した。 ｐ）６−アミノ−７−クロロベンゾ［ｃ］キノリジニウムクロリド（化合物１ ６）： 化合物１６は、２−クロロベンゾニトリルの代わりに２，６−ジクロロベンゾ ニトリルを使用する他は、化合物１１の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の 操作法により調製した。 ｑ）６−アミノ−８−クロロベンゾ［ｃ］キノリジニウムクロリド（化合物１ ７）： 化合物１７は、２−クロロベンゾニトリルの代わりに２，５−ジクロロベンゾ ニトリルを使用する他は、化合物１１の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の 操作法により調製した。 ｒ）６−ヒドロキシベンゾ［ｃ］キノリジニウムブロミドＭＰＢ−０６（化合 物１８）： 化合物１８は、化合物５の代わりに化合物４から出発して実施する他は、化合 物１９の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の操作法により調製した。 ｓ）６−ヒドロキシ−１０−クロロベンゾ［ｃ］キノリジニウムクロリドＭＰ Ｂ−０７（化合物１９）： １−ヒドロキシ−１−（２−ブロモフェニル）−２−（２−ピリジル）エチレ ン（化合物５）１．４０ｇ（０．００５３ｍｏｌ）を窒素下で２１５℃で加熱し た。約１９０℃でＨＣｌの白色煙の出現を認めてから、１０分間２２０℃で加熱 を続けた。生成物をクロロホルムで洗浄し、次に残渣（１．８２ｇ）を、酢酸及 びアルコールで溶出するシリカカラムのクロマトグラフィーにより精製した。こ うして生成物０．５８ｇ（４２％）を得た。 ｔ）６−ヒドロキシ−９−クロロベンゾ［ｃ］キノリジニウムクロリドＭＰＢ −０８（化合物２０）： 化合物２０は、化合物５の代わりに化合物６から出発して実施する他は、化合 物１９の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の操作法により調製した。 ｕ）６−ヒドロキシ−７−クロロベンゾ［ｃ］キノリジニウムクロリド（化合 物２１）： 化合物２１は、化合物５の代わりに化合物８から出発して実施する他は、化合 物１９の調製の範囲で上述の方法と同一の任意の操作法により調製した。 ｖ)８−アミノジベンゾ[ｃ,ｆ]キノリジニウムペルクロラート(化合物２２): 無水ＴＨＦ３０ml中のジイソプロピルアミン２．２２ｇ（０．０２２mol）を 、塩化カルシウム乾燥管と窒素の供給を伴う還流冷却器を取り付けた５００ml反 応器に入れた。溶液を０℃にし、次にＢｕＬｉの１.６Mヘキサン溶液１３.７５m l（０．０２２mol）を加えた。０℃で３０分間撹拌し、次に温度を−４０℃まで 下げ、次いでキナルジン２．８６ｇ（０．０２mol）を加えた。−４０℃で３０ 分間撹拌し、次に無水ＴＨＦ２０ml中の２−クロロベンゾニトリル２．７５ｇ（ ０．０２mol）を加えた。反応媒体を周囲温度に戻して、塩化アンモニウムの１ ０％溶液を加えた。有機相を分離し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、溶媒を留去して、残 渣を窒素流下で３０分間２３０℃にした。白色の塩酸蒸気の発生を観察した後、 残渣が帯褐色の塊状に凝固した。生成物を最初にアセトンで洗浄し、次にエタノ ールに溶解して酢酸エチルで沈殿させることにより精製した。生成物を最少量の 水に溶解して、沈殿が完了するまで過塩素酸の溶液を加えた。化合物を濾過して ２．２０ｇ（３２％）を回収した。 −赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）(νcm^-1、属性)：3400、3280、ＮＨ₂；1650 、1600、1000、広いバンド、ＣｌＯ₄。 ¹Ｈ ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯｄ６）（δppm、シグナル、ｎプロトン、属 性）：7.0、一重項、５位の１Ｈ；7.5〜8.7、多重項、芳香族１０Ｈ；9.0、一重 項、２Ｈ、交換可能なＤ₂Ｏ。 ｗ）６−アセトアミドベンゾ［ｃ］キノリジニウムクロリド（化合物２３） ６−アミノベンゾ［ｃ］キノリジニウム１ｇ（０．００４mol）を酢酸１０ml に溶解し、次に無水酢酸２５mlを加えた。反応媒体を２４時間還流し、次に無水 酢酸及び酢酸を減圧下で留去した。 得られた生成物は青紫色であり、これを酢酸エチルで洗浄し、次にエタノール から再結晶した。クリーム白色の生成物０．９３ｇ（８５％）を得た。 −融点＝＞２８０℃ −赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）（νcm^-1、属性）：3450、ＮＨ；1700、Ｃ＝ Ｏ。 ｘ）１，２，３，４−テトラヒドロ−６−アミノベンゾ［ｃ，ｆ］キノリジニ ウムペルクロラート（化合物２４）： ６−アミノベンゾ［ｃ］キノリジニウム塩酸塩０．５０ｇ（０．００２mol） をエタノール２０mlに溶解して、大気圧で酸化白金及び水素の存在下に置いた。 数分間で水素化を行い、次に溶液を濾過し、アルコールを留去し、残渣を蒸留水 １０mlにとって、過塩素酸の２５％溶液を加えると沈殿物が生成した。白色の生 成物をメタノールから再結晶して、ペルクロラート０．５４ｇ（９１％）を得た 。 −赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）（νcm^-1、属性）：3460、3360、ＮＨ₂；165 0、1600、1100、広いバンド、ＣｌＯ₄。 ¹Ｈ ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯｄ６）（δppm、シグナル、ｎプロトン、属 性）：2.1、多重項、２位及び３位のＣＨ₂；3.20、三重項、４位のＣＨ₂；4.45 、三重項、１位のＣＨ₂；6.60、一重項、５位のＨ；7.6〜8.4、多重項、４Ｈ、 芳 香族；8.6、一重項、２Ｈ、交換可能なＤ₂Ｏ。 II−化合物Ａ〜Ｆの製造法： ａ）１−アミノ−１−（２，６−ジクロロフェニル）−２−［１−（３，４− ジヒドロピリド［３，４−ｂ］インドリル）］エチレン（化合物Ａ） ハルマラン１．８４ｇ（０．０１mol）を、窒素供給を取り付けた反応器中で ＴＨＦ４０mlに可溶化し、反応媒体を−４０℃にした。ＢｕＬｉの１３．７５ml （０．０２２mol）を滴下により加えると、暗赤色になり、この溶液を３０分間 撹拌した。２，６−ジクロロベンゾニトリル１．７１ｇ（０．０１mol）をＴＨ Ｆ１５mlに可溶化し、次に滴下により加えた。−４０℃で１時間後、混合物を室 温で４時間撹拌した。反応の進展は、ＴＬＣによりモニターしたが、出発物質の 消失はイミンを特徴づける黄色の蛍光スポットの出現に相関していた。ＮＨ₄Ｃ ｌの１０％溶液５mlでの加水分解により、イミンを含有するＴＨＦ相を回収する ことができた。この相をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濾過して次に蒸発乾固した。生成 物を、ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＣＨ₃ＣＯＯＣ₂Ｈ₅の５％混合物で溶出するシリカゲルのカ ラムクロマトグラフィーにより精製した。こうして化合物Ａ２.０６ｇを得た（ すなわち５８％の収率）。 −赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）（νcm^-1、属性）：3428、3255、3134cm^-1、 ＮＨ；ＮＨ₂；3134cm^-1、Ｃ＝Ｃ−Ｈ；2932、2843cm^-1、ＣＨ₂。 ¹Ｈ ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯｄ６）（δppm、シグナル、ｎプロトン、属 性）：8.40、Ｄ₂Ｏにより交換可能な一重項、３Ｈ、ＮＨ及びＮＨ₂；7.20、多重 項、７Ｈ、芳香族プロトン；5.00、一重項、１Ｈ、ビニルＨ；3.70、三重項、Ｊ ＝６Hz、２Ｈ、ＣＨ₂；3.00、三重項、Ｊ＝６Hz、２Ｈ、ＣＨ₂。 ｂ）１−アミノ−１−（ｏ−クロロフェニル）−２−［１−（３，４−ジヒド ロピリド［３，４−ｂ］インドリル）］エチレン（化合物Ｂ） 化合物Ｂは、２，６−ジクロロベンゾニトリルの代わりにオルトクロロベンゾ ニトリルを使用する他は、化合物Ａの調製の範囲で上述の方法と同一の任意の操 作法により調製した。 ｃ）１−アミノ−１−（２，５−ジクロロフェニル）−２−［１−（３，４− ジヒドロピリド［３，４−ｂ］インドリル）］エチレン（化合物Ｃ） 化合物Ｃは、２，６−ジクロロベンゾニトリルの代わりに２，５−ジクロロベ ンゾニトリルを使用する他は、化合物Ａの調製の範囲で上述の方法と同一の任意 の操作法により調製した。 ｄ）１−アミノ−１−（２，４−ジクロロフェニル）−２−［１−（３，４− ジヒドロピリド［３，４−ｂ］インドリル）］エチレン（化合物Ｄ） 化合物Ｄは、２，６−ジクロロベンゾニトリルの代わりに２，４−ジクロロベ ンゾニトリルを使用する他は、化合物Ａの調製の範囲で上述の方法と同一の任意 の操作法により調製した。 ｅ）１−アミノ−１−（２，３−ジクロロフェニル）−２−［１−（３，４− ジヒドロピリド［３，４−ｂ］インドリル）］エチレン（化合物Ｅ） 化合物Ｅは、２，６−ジクロロベンゾニトリルの代わりに２，３−ジクロロベ ンゾニトリルを使用する他は、化合物Ａの調製の範囲で上述の方法と同一の任意 の操作法により調製した。 ｆ)１−アミノ−１−(４−ブロモ−２−クロロフェニル)−２−[１−(３,４− ジヒドロピリド［３，４−ｂ］インドリル)]エチレン（化合物Ｆ） 化合物Ｆは、２，６−ジクロロベンゾニトリルの代わりに２−クロロ−４−ブ ロモベンゾニトリルを使用する他は、化合物Ａの調製の範囲で上述の方法と同一 の任意の操作法により調製した。 III−化合物Ｇ〜Ｌの製造法： キノリジニウムＧ〜Ｌへの化合物Ａ〜Ｆの環化。 ａ）１４−アミノ−６，７−ジヒドロ−１２Ｈ−１−クロロ−ベンゾ−［ｎ］ インドロ［２，３−ａ］キノリジニウムクロリド（化合物Ｇ） 精製したエナミンＡを窒素下で加熱した：この生成物は、約１５０℃で融解し 、次に１９５℃で白色煙が出現して生成物が凝固した。この温度で加熱を１０分 間維持した。ＴＬＣを用いて以下を観察した：ＣＨ₂Ｃｌ₂中シリカ上で０．３の Ｒｆを有するイミンの黄色の蛍光スポットの消失、及びアルコール中アルミナ上 で０．１のＲｆを有する環化生成物の黄緑色の蛍光スポットの出現。生成物を、 アセトンでの洗浄、次にアルコールからの再結晶、又はクロマトグラフィー：ア ルミナ−アルコールにより精製した。 こうして得られた生成物は、明褐色であり１７％の収率であった。 ¹Ｈ ＮＭＲスペクトル（ＣＦ₃ＣＯＯＤ）（δppm、シグナル、ｎプロトン、 属性）：8.10〜6.20、塊状、１１Ｈ、芳香族プロトン＋ＮＨ＋ＮＨ₂；3.90、分 離が不充分な三重項、２Ｈ、６位のＣＨ₂；3.00、分離が不充分な三重項、２Ｈ 、７位のＣＨ₂。 −赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）（νcm^-1、属性）全て同一の吸収を示す：34 58、3371cm^-1、ＮＨ；ＮＨ₂；3073cm^-1、Ｃ＝Ｃ−Ｈ；1638cm^-1、Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝ Ｃ。 ｂ)１４−アミノ−６,７−ジヒドロ−１２Ｈ−ベンゾ−[ｆ]インドロ[２,３− ａ]キノリジニウムクロリド（化合物Ｈ） 化合物Ｈは、化合物Ａの代わりに化合物Ｂを使用する他は、化合物Ｇの調製の 範囲で上述の方法と同一の任意の操作法により調製した。 得られた生成物は、からし黄色であり５６％の収率であった。 ｃ）１４−アミノ−６，７−ジヒドロ−１２Ｈ−２−クロロ−ベンゾ−［ｌ］ インドロ［２，３−ａ］キノリジニウムクロリド（化合物Ｉ） 化合物Ｉは、化合物Ａの代わりに化合物Ｃを使用する他は、化合物Ｇの調製の 範囲で上述の方法と同一の任意の操作法により調製した。 得られた生成物は、明褐色であり７％の収率であった。 ｄ）１４−アミノ−６，７−ジヒドロ−１２Ｈ−３−クロロ−ベンゾ−［ｌ］ インドロ［２，３−ａ］キノリジニウムクロリド（化合物Ｊ） 化合物Ｊは、化合物Ａの代わりに化合物Ｄを使用する他は、化合物Ｇの調製の 範囲で上述の方法と同一の任意の操作法により調製した。 得られた生成物は、明褐色であり５２％の収率であった。 ｅ）１４−アミノ−６，７−ジヒドロ−１２Ｈ−４−クロロ−ベンゾ−［ｌ］ インドロ［２，３−ａ］キノリジニウムクロリド（化合物Ｋ） 化合物Ｋは、化合物Ａの代わりに化合物Ｅを使用する他は、化合物Ｇの調製の 範囲で上述の方法と同一の任意の操作法により調製した。 得られた生成物は、明褐色であり６％の収率であった。 ｆ）１４−アミノ−６，７−ジヒドロ−１２Ｈ−３−ブロモ−ベンゾ−［ｌ］ インドロ［２，３−ａ］キノリジニウムクロリド（化合物Ｌ） 化合物Ｌは、化合物Ａの代わりに化合物Ｆを使用する他は、化合物Ｇの調製の 範囲で上述の方法と同一の任意の操作法により調製した。 得られた生成物は、からし黄色であり１２％の収率であった。 IV−ＣＦＴＲに及ぼす本発明の化合物の作用の検討： Ａ）方法 ａ）ヒト上皮細胞及び組換えＣＨＯ細胞の培養： 本試験のために幾つかの型の細胞を使用する：腸細胞系統Ｔ８４、Ｃａｃｏ− ２ 及びＨＴ２９。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ−Ｋ１）細胞は、正常又 は突然変異ＣＦＴＲｃＤＮＡ（Chang et al.，1993）の組み込みを伴うか、又は 伴わない（対照細胞）ベクターｐＮＵＴ（Tabcharani et al.，1991）によりト ランスフェクションした。細胞をこの特異的培地で保持し、次にスライドガラス 上に低密度で接種し、３７℃（５％ ＣＯ₂）でパッチクランプ法の実験まで培 養する。細胞の生存培地は、ウシ胎児血清（７％）及び抗生物質：５０IU/mlペ ニシリン及び５０μｇ/mlストレプトマイシン及びメトトレキサート（１００μ Ｍ〜２００μＭ）を含むαＭＥＭからなる。 ｂ）分子電気生理学の技術又はパッチクランプ法の原理： 細胞の電気活性は、膜貫通孔の存在と機能、イオンチャネルにより制御される 。イオンチャネルは、タンパク質であり、そのコンホメーション状態は、種々の 因子に応じて修飾することができる：経膜電場、リガンドの結合又は転写後の生 化学反応。イオンチャネルを通過する電流は、１０億分の１アンペアの桁である (ピカ−アンペア、１pA＝１０^-12Ａ）。これは、分子電気生理学の技術（更に普 通にはパッチクランプ法と呼ばれる）により測定することができる。 細胞内微小電極により経膜電流を測定する従来法では、熱力学的基本ノイズは 、単一のイオンチャネルを通過する電流よりも少なくとも１００倍高い。このよ うな条件下では、チャネル内の流動はこのノイズにより遮蔽され、その変化は平 均電流と共に上昇する。ゲッティンゲンのマックスプランク研究所のErwin Nehe rとBert Sackman（Hamill et al.，1981を参照のこと）は、このノイズの解析に より、イオンチャネルを通過する電流を概算することが可能であることを証明し た。熱力学的基本ノイズは、膜の面積に比例する。これを限定することにより、 基本ノイズはチャネルを通過する電流よりも低くなる。 パッチクランプ法は、これら２名の研究者とその同僚により行われた観察から 誘導される：膜表面に適用するガラスマイクロピペットを、ピペットと膜の間に 確立する電気抵抗がギガオーム値（１Gohm＝１０⁹ohm）に達するようにそこに付 着させる。オームの法則により、電流強度Ｉ（アンペア）と適用される電位Ｕ（ ボルト）に対して電気抵抗（Ｒ）が与えられ（式１）、そしてチャネルの単位コ ンダクタンスｇ（単位：ピコジーメンス、ps）が求められる（式２）。 （式１） Ｕ＝Ｒ・Ｉ （式２） ｇ＝１／Ｒ ピペットのガラスと膜のリン脂質の間の相互作用力により、漏れ電流を低下さ せることができる（イオンチャネルを通過する電流の測定に本質的な段階）。こ うして得られた立体配置は、「細胞付着」という用語で呼ばれる。細胞付着立体 配置から出発してピペットを引き出すことにより、膜の断片（パッチ）が引き裂 かれて、ピペットの末端に固定されたままになる。こうして得られた立体配置は 、膜の細胞内表面が浴中にあるため「裏返し」と呼ぶ。膜の細胞外表面は、ピペ ットに含まれる溶液に接触するが、細胞内部分は、実験チャンバーの灌流媒体と 接触している。電子的集成体により、浴の参照電極（Ｖｒｅｆ）とピペット（Ｖ ｐ）の間の電位差（Ｖｒｅｆ−Ｖｐ）の適用（クランプ）及び発生電流Ｉの測定 が可能になる。膜の両側でイオン組成が同一であれば（対称性媒体）、電流強度 Ｉは膜に適用される電位差に正比例する。ポイントＩ（Ｖ）は、一般に直線（そ の勾配と位置が、チャネルの単位コンダクタンス（ｇ）と電流の逆電位（Ｅｒｅ ｖ）を規定する）に沿って分布する。逆電位では、膜を通る電荷の流動はゼロで ある。逆電位は、ネルンスト式（式３）［ここで、Ｅは、考慮されるイオンのネ ルンスト電位を表し、Ｃは、細胞外（Ｃｏ）及び細胞内（Ｃi）区画のイオン濃 度を表す］により規定される。 （式３） Ｅ＝ＲＴ／ｚＦ ＬｏｇＣｏ／Ｃｉ 細胞付着立体配置において、電極の電位が膜の電位に加えられるが、これは約 −６０mVである。全ての細胞において、カリウム（Ｋ⁺）と塩素（Ｃｌ^-）イオ ンの濃度は、それぞれ約１５０mM及び１０mMである。１５０mM ＫＣｌを含有す るピペットにより、Ｋ⁺（Ｅ_K）及びＣｌ^-（Ｅ_Cl）イオンのネルンスト電位は、 それぞれゼロ及び−５０mVに近づく。したがって塩素電流の逆転は、静止電位付 近で、すなわち膜への電位の適用なし（Ｖｐ＝０mV）で得られる。他方で、カリ ウム電流の逆転は、膜の電位をうち消すことで、５０〜６０mVで脱分極すること により得られる。この例は、チャネルのイオン性を評価するために使用される方 策を例示している。この方法により収集される情報は、チャネルのコンダクタン スの種々の状態の間の転移を伝える電流のゆらぎ（ミリ秒の桁、ms）により表さ れる。 ｃ）培養上皮細胞の検討に適用されるパッチクランプ法 パッチクランプ法の実験は、コンフルエントな細胞で行われる。ガラススライ ド（細胞支持体）の断片を、位相差照明（オリンパス（Olympus）ＩＭＴ２）を 取り付けた倒立顕微鏡のプラテン上の実験チャンバー（容量６００μｌ又は１ml ）におく。細胞付着及び裏返しの立体配置を用いる（Hamil1 et al.，1981）。 本実験は、室温（２０〜２２℃）で行われる。電流は、２〜５kHzの低域フィル ター（６ポールベッセルフィルター）を伴うＬＩＳＴ ＥＰＣ７増幅器（ダルム シュタット、ドイツ）（３kHzのフィルター）で増幅して、４４kHzでディジタル 化（１６ビット）後ＤＡＴ（ディジタルオーディオテープ）で記録する。次にデ ータをＯｌｉｖｅｔｔｉＭ２８ＰＣコンピュータに移す。ピペットは直径１mmの ガラス管〔クラーク電気医学装置（Clarke Electromedical Instrument）〕から 水平ドロワー〔フラミング／ブラウン（Flaming/Brown）型、モデルＰ−８７、 サッター研究所（Sutter.Tnst.Co.）、米国〕により２又は３段階で作られる。 １５０mMのＮａＣｌの溶液を充填したピペットは、４〜１２ＭΩの間の抵抗を有 する。電位は、パッチ電極の電位と浴の電位の間の差として表される。細胞付着 立体配置では、これらは細胞の静止電位に対する電位の変化を表す。拡散電位は 、ゼロ電流(チャネルが閉鎖しているとき)に対応する電極の電位から評価される 。これらは、浴と参照電極の間の接続を確立し（アース）、ピペットと同じ溶液 を含有する寒天橋を使用して最小化する。電流の逆電位及びチャネルの単位コン ダクタンスは、線形回帰により電流−電圧比（Ｉ／Ｖ）から得られる。電流−電 圧 比を求めるために、イオン電流振幅を振幅ヒストグラムから測定する。振幅ヒス トグラムは、そのピークが、電極に存在するチャネルの開放及び閉鎖状態に対応 する、２つ以上のガウス分布の和として示される。これらのヒストグラムから以 下を求めることが可能である：Ｎ、パッチに存在するチャネルの総数；ｎ、同時 に開放しているチャネルの数（ｎ＝０、１、２…Ｎ）；Ｐｏ、チャネルの開放の 確率；及びＩ、チャネルの電流の平均強度。存在するチャネルが同じ型であり、 かつ相互に独立に開放及び閉鎖すると仮定されるならば、ｎ個のチャネルが同時 に開放している確率は、二項分布（式４）により与えられ、ここから個々の確率 Ｐｏが導き出される（式５）。 （式４） Ｐ（ｎ）＝（Ｎ！／ｎ！（Ｎ−ｎ）Ｐｏⁿ．（１−Ｐｏ）^N-n （式５） Ｐｏ＝Ｐ（ｎ）／Ｎ 本試験はＣｌ^-チャネルのみに関するため、流出電流は、細胞の細胞内媒体又 は灌流媒体へピペットから流出するＣｌ^-イオンの運動として解釈されるべきで ある。Ｃｌ^-イオンに関するアニオンＸ-の相対透過性Ｐ_X／Ｐ_CIは、裏返し立体 配置のチャネルのイオン選択性を評価するために使用される。ゴールドマン−ホ ジキン−キャッツ（Goldman-Hodgkin-Katz）式（式６）は、実験的に得られた逆 電位（Ｅｒｅｖ）と存在するアニオンの各濃度の関数として透過性の比を関連づ ける。 （式６） Ｅｒｅｖ＝−ＲＴ／Ｆ Ｉｎ（[Ｃｌ^-]_e＋Ｐ_X／Ｐ_Cl[Ｘ^-]_e／[Ｃ ｌ^-]_i＋Ｐ_X／P_Cl[Ｘ^-]_i) ｉ及びe：細胞内及び細胞外イオン濃度。Ｒ、Ｔ及びＦは、これらの通常の 意味を有する。 パッチ電極を充填するために、生理食塩水の組成は以下の通りである（mM）： １５０ ＮａＣｌ、２ ＭｇＣｌ₂、１０ ＴＥＳ（pH７．４）。細胞の灌流浴 は、以下を含有する（mM）：１４５ ＮａＣｌ、４ ＫＣｌ、２ ＭｇＣｌ₂、 ０．５ ＣａＣｌ₂、１０ ＴＥＳ（pH７．４）。 ｄ）ウシングチャンバーのショートサーキット電流の測定 透過性底部を有するチャンバーでの上皮、特に消化器上皮（ＨＴ２９系統及び その種々のクローン、Ｔ８４又はＣａｃｏ２系統）の培養の利点は、細胞生物学 の研究において広く証明されている。この方法では、底部が穿孔（孔の直径（０ ．４５〜３μｍの間）と分布は慎重に測定される）したポリスチレンの膜から作 られたカップの内側で細胞を培養する。これにより補足マトリックスの添加なし に細胞の付着が可能になる。屈折率が水の屈折率に近い媒体中ではこれは透明で あり、細胞層の目視検査が可能になる。しかし限界はある。膜厚の薄さは流体の 保持を限定するが、ゲロソーム（gelosomes）のような高分子又は複合体のトラ ップを構成する可能性を除外することはできない。表面積５cm²のこのカップを ６ウェルプレートに入れる。そこでの細胞の付着及び培養は、従来法で行われる 。接種の２週間後、細胞は不浸透性単層を形成する。この不浸透性は、電気抵抗 の発生、又は２つの粘液性及び漿液性区画の間の高分子の非拡散により証明され る。培養は、２つの区画に同一の培地を維持しながら約１０日間安定である。透 過性底部を伴うチャンバーでの上皮のこの培養は、上皮を通る荷電又は非荷電分 子の分泌及び通過の性質及び調節を研究するのにかなり有用である。経上皮輸送 は、クランプした接合点のいずれかの側の２つの先端部又は底側部フィールドに 存在する透過酵素の性質に依存する。荷電分子の通過により顕われる上皮の性質 は、経上皮電位又はショートサーキット電流の測定から容易に導き出すことがで きる。分子が中性であるとき、これらの運動を追跡するのに標識分子が使用され る。 ｅ）測定法の原理 概略、上皮輸送は、細胞輸送と接合点を通る選択的拡散の均衡である。細胞輸 送は、それぞれ細胞の先端部ポール及び底部ポールに位置する特異的な透過酵素 の対の活性（Ｎａ⁺及びＮａ⁺／Ｋ⁺ＡＴＰアーゼチャネル、Ｃｌ^-チャネル及びＮ ａ⁺／Ｋ⁺／Ｃｌ^-共輸送体、Ｎａ／グルコース共輸送体及び拡散性グルコース輸 送体…）に由来する。輸送体上皮が不浸透性であるとき、クランプした接合点は 、媒体に対して異なる電位を有する２つの部分の膜に分離する。単純な電気的類 推を使用することができ、そしてそれぞれ電位Ｖｍ（粘液性）及びＶｓ（漿液性 ）を有する回路素子と考えることができる。これら直列の２つの膜は、こうして 、代数和Ｖｍ＋Ｖｓである電位Ｖｔを有する。使用される組織では、Ｖｔは標準 的条件下で−５mVに達する。上皮の特質を決定するために、３つの型の測 定法を使用することができる。 開回路による測定 細胞層の各側に存在する電位の差を測定する。一定の時間に、パラメーター化 が可能な電流ｉ（μＡ）を回路に送りこみ、これが回路の抵抗に比例する電位差 ΔＶを変化させる。 ショートサーキット電流による測定 存在する電位に代数的に加える電位差を作るために、組織の抵抗を使用する調 整可能な電流ｉを回路に導入する。電流が値Ｉｓｃ（ショートサーキット電流） を有するとき、Ｖｔはゼロであり；Ｉｓｃ×Ｒｔ−Ｅｔ＝０又はＩｓｃ＝Ｅｔ／ Ｒｔである。Ｖｍ−Ｖｓ＝０かつＶｍ＝Ｖｓの条件下で、２つの粘液性及び漿液 性膜は同じ電位である。抵抗を求めるために、所定の電位差を回路に適用して抵 抗を測定し、生じる電流Ｉｓｃの偏差を評価する。 加電圧による測定 これは、ショートサーキット電流による測定の特別な例であり、ここではゼロ 電位を与えるために上皮に適用される。これらの条件下では、膜の各々の電位を 知ることなく、経上皮電位が固定される。このために、電位差を積み上げ、抵抗 の測定に使用される電流の代数和を延長する。ショートサーキット電流には短時 間を選択し、そして積み上げ電位差には長時間を選択する。所定の抵抗について 、電位差は最大電流を送達する装置の能力に依存するが（１００μＡ；５００oh mについて電位差は５０mVである）、また生じる電位差（ＩＶ）を測定する能力 にも依存することは明らかである。 これらの測定を実施するために、カップを修飾ウシングチャンバーにマウント する。我々は、強度／電圧曲線をプロットすることができるパルス発生器に結合 した「電流−電圧クランプ」（ＷＰＩ）制御ユニットを使用する。集めたシグナ ルをディジタル化（MacLab）して、マッキントッシュアップルコンピュータでチ ャートソフトウェアを使用して処理する。 ｆ）試験上皮の性質 ＨＴ２９細胞により形成される上皮を最初に使用する。粘液性区画の基本培地 （対称性生理食塩水培地、刺激物質は存在しない）へのグルコースの添加は、抵 抗に影響することなく経上皮電位及びショートサーキット電流の上昇を引き起こ す。上皮は、粘液性側のＮａ依存性グルコース輸送体を利用するグルコース吸収 物質、及び疑いなく漿液性側の拡散輸送体として機能する。グルコースを伴うナ トリウムの輸送は、電位差（これは、フロリジンにより阻害することができる） を引き起こし、一方グルコースの全流量は、粘液性又は漿液性区画に入れる放射 標識グルコース類似体により測定される。 ｃＡＭＰのレベルを上昇させる作因の培地への添加は、グルコースと無関係な ｖｔ及びＩｓｃの上昇を誘導する。これは、Ｃｌ^-の経上皮輸送（漿液性側から 粘液性側へ）の確立に関係していると考えられ、漿液性側の底側部塩化物輸送体 及び粘液性側の塩化物チャネルに関連する。このＣｌ^-の輸送は、同じ方向の水 の輸送に関係している。ｃＡＭＰレベルの上昇後の、細胞内Ｃａ²⁺のレベルの上 昇を引き起こす作因の適用は、疑いなくＣａ²⁺の粘液性から漿液性への通過及び 新しいＣｌ^-の漿液性から粘液性への通過に関係している、Ｖｔ及びＩｓｃの新 しい上昇を引き起こす。 ｇ）培養上皮細胞の研究に適用される放射活性トレーサーの流動の測定 この 方法により、ヨウ化物の流出の速度論をモニターすることができる。細胞は、継 代後１／１０に希釈して１２ウェルプレートで培養する。３日目に、試験薬剤を 必要な濃度に媒体Ｂ（３７℃）に溶解する。ウェルを媒体ＢのＮａＯＨ、０．１ ％グルコース１mlで２回洗浄し、次に補充溶液１mlにより３０分間置換する。 ヨウ化物の流出の速度論は、補充溶液を除去して、ウェルを媒体Ｂの１．５ml で３回洗浄後に求める。このために、媒体Ｂの１mlをウェルに１分間放置して、 新鮮媒体Ｂの１mlにより置換するため溶血管に集める。最初の１分を対照とし、 試験すべき生成物を２分目から加える。この操作を１０分にわたって繰り返し、 次に細胞をＮａＯＨ ０．１N ＳＤＳ ０．１％の１mlで剥離する。各ウェル の内容物を、２５分間撹拌後溶血管に集めて、管をガンマ計数管で２分間計数す る。 Ｂ）結果 本試験は、上述のベンゾキノリジニウムファミリーの分子に関する。これらを ＣＦＴＲチャネルを活性化するその能力について試験する。ＣＦＴＲチャネルの オープナーとしての分子のスクリ−ニングは、放射活性ヨウ化物の流出及び経膜 塩化物電流に及ぼすこれらの作用を測定することにより行った（Becq et al.,19 93a）。これらのデータは、細胞内サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）のレベル及 び種々の実験状況でのその変動の測定により補足した。 ３細胞モデルを使用して、ベンゾキノリジニウムによるＣＦＴＲ活性化の作用 を評価した：ＣＦＴＲをコードするＲＮＡ（このＲＮＡは以降ｃＲＮＡ−ＣＦＴ Ｒと呼ばれる）を注入したアフリカツメガエル卵母細胞；安定にタンパク質ＣＦ ＴＲを発現する組換えＣＨＯ細胞、及びタンパク質ＣＦＴＲを構成性に発現する ＨＴ２９系統のヒト結腸細胞。ＣＦＴＲチャネルは、細胞内ｃＡＭＰのレベルに より刺激されるキナーゼＡタンパク質により主として調節されるため、対照実験 では、細胞膜を通過することができるｃＡＭＰの誘導体、及び細胞でのｃＡＭＰ の合成を導く酵素アデニル酸シクラーゼのフォルスコリン（forskoline）アクチ ベーターを使用した。図１は、５００μＭ ｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰ（サイクリック ８−（４−クロロフェニルチオ）−アデノシン３’，５’−一リン酸）（細胞の 膜を通過するｃＡＭＰの類似体）により得られるこのような活性化を示す。ヨウ 化物の流出により測定されるＣＦＴＲチャネルの活性化は、ヨウ化物の流出の大 きさ（ｔ＝０時点の細胞含量の％で表現される）及びヨウ化物の流出の速度（原 点での曲線の勾配）の上昇を誘導する。 ＣＦＴＲチャネルの活性について試験分子の効力を評価できるようにする対照 実験は、以下の通りである： １）アフリカツメガエル卵母細胞：以下における放射活性ヨウ化物の流出及び 経膜塩化物電流： − ｃＲＮＡ−ＣＦＴＲ（図１ＢではＣＦＴＲと標識）を注入した卵母細胞； − ｃＡＭＰ経路のアクチベーター（ｃ−ｃｔｐ−ＡＭＰ、フォルスコリン） の存在下での同じ卵母細胞； − ｃＲＮＡ−ＣＦＴＲの代わりに水（図１Ｂでは「水」と標識）を注入した 卵母細胞； − ｃＡＭＰ経路の上述のアクチベーターの存在下の同じ卵母細胞。 ２）ＣＨＯ細胞：以下における放射活性ヨウ化物の流出： − 上述のアクチベーターの存在下又は非存在下のタンパク質ＣＦＴＲ（図２ ＢではＣＨＯ−ＣＦＴＲ（−）と標識）でトランスフェクションしていないＣＨ Ｏ細胞； − 上述のアクチベーターの存在下又は非存在下のＣＦＴＲ鎖（図２ＢではＣ ＨＯ−ＣＦＴＲ（＋）と標識）でトランスフェクションしたＣＨＯ細胞。 ３）ＨＴ２９細胞：以下における放射活性ヨウ化物の流出： − アクチベーターの非存在下のＨＴ２９細胞（図３ではベースと標識）； − 上述のアクチベーターの存在下の細胞（図３ではｃＡＭＰと標識）。 細胞内カルシウムのレベルの上昇により活性化される塩化物チャネルの存在を 、カルシウムイオノホアＡ２３１８７の存在下で試験した。ｃＡＭＰのアクチベ ーター、Ａ２３１８７及びベンゾキノリジニウムの作用を、これら種々の実験条 件下で（標識付したベースを必要に応じて対照と見なす）、放射活性ヨウ化物の 流出を促進するこれらの能力、及び経膜塩化物電流を上昇させるこれらの能力に より評価した。 図２Ａ及び２Ｂは、ＣＦＴＲを発現する組換えＣＨＯ細胞中での５００μＭｃ −ｃｐｔ−ＡＭＰによるＣＦＴＲ活性化を示す。対照ＣＨＯ（ＣＦＴＲ−）細胞 では、ｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰは作用しない。ＨＴ２９細胞では、５００μＭｃ−ｃ ｐｔ−ＡＭＰの存在下でヨウ化物流動の大きさの上昇が示されるため、ＣＦＴＲ チャネルはｃＡＭＰにより刺激することができる（図３Ａ及びＢ）。 ＣＨＯ細胞においてＣＦＴＲチャネル活性化に及ぼすベンゾキノリジニウムの 作用 図４は、ＣＨＯ（ＣＦＴＲ＋）及びＣＨＯ（ＣＦＴＲ−）細胞におけるヨウ化 物の流出に及ぼす誘導体ＭＰＢ−０７（５００μＭ）の作用を示す。ＣＨＯ（Ｃ ＦＴＲ＋）細胞におけるヨウ化物の流出の活性化は、強度と速度においてＣＨＯ （ＣＦＴＲ＋）細胞でフォルスコリン（５μＭ）（ｃＡＭＰのアクチベーター） により誘導されるそれらに匹敵する（図５）。ＣＨＯ（ＣＦＴＲ−）及びＣＨＯ (ＣＦＴＲ＋)細胞におけるヨウ化物の流出に及ぼす誘導体ＭＰＢ−０７の作用に 関する結果は、それぞれ図６及び７のヒストグラムに要約される。ＭＰＢ −０７（５００μＭ）は、また、フォルスコリン（５μＭ）がＣＨＯ（ＣＦＴＲ ＋）細胞上に引き起こすヨウ化物の流出をも有効に刺激する（図７）。これらの 同じ細胞で、Ａ２３１８７（１０μＭ）は作用しない。ＣＨＯ（ＣＦＴＲ−）細 胞では、フォルスコリン（５μＭ）、Ａ２３１８７（１０μＭ）（別々に又は一 緒に加えられて）及びＭＰＢ−０７（５００μＭ）は、ヨウ化物の流出のベース レベルを有意に修飾しない（図６）。 ＨＴ２９細胞においてＣＦＴＲチャネル活性化に及ぼすベンゾキノリジニウム の作用 組換えＣＨＯ細胞におけるヨウ化物の流出に及ぼすＭＰＢ−０７の作用は、Ｈ Ｔ２９上皮細胞において再現される。５００μＭｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰ（図８Ａ） 又は５００μＭ ＭＰＢ−０７（図８Ｂ）の適用により、ベースレベル（アクチ ベーターなし）に対して上昇する、同様な速度と大きさでヨウ化物の流出を誘導 する（図９）。 アフリカツメガエル卵母細胞において発現するＣＦＴＲチャネル活性化に及ぼ すベンゾキノリジニウムの作用 ＭＰＢ−０７（５００μＭ）は、アフリカツメガエル卵母細胞においてヨウ化 物の流出を刺激する。この活性化（図１０Ａ）は、５００μＭ ｃ−ｃｐｔ−Ａ ＭＰの適用（図１０Ｂ）により得られる活性化に匹敵し、刺激（ｃＡＭＰ及びＭ ＰＢ−０７）及び非刺激（ベース）非注入卵母細胞（図１１、水）、並びに刺激 されないがＣＦＴＲを発現する卵母細胞（図１０Ａ、流出標識ベースＣＦＴＲ） において測定される流出とは有意に異なる（図１１）。 ベンゾキノリジニウムの構造−機能検討及びＣＦＴＲ開放との相関 本検討は、ベンゾキノリジニウム核の１６個の誘導体で行った。 表１及び２は、ＣＦＴＲチャネルアクチベーターとしてここで試験されるベン ゾキノリジニウムの化合物の化学構造を示す。 表１及び２は、組換えＣＨＯ（ＣＦＴＲ＋）細胞で試験される種々の化合物の 存在下で測定される流出に関する結果を示す。基本化合物のフェナントレン（表 ２）は、ＣＦＴＲチャネルを活性化しない。２種のシリーズの分子を試験した： ＮＨ₂シリーズ（表１、ＭＰＢ−２６、ＭＰＢ−０１〜０４；表２：ＭＰＢ−２ ４） 及びＯＨシリーズ（表１、ＭＰＢ−０５〜０８、ＭＰＢ−２７、２９、３０及び ３２；表２：ＭＰＢ−２５）。ＣＦＴＲチャネル活性化の百分率は、対応する表 に与えられる。これらは、ＯＨシリーズが１５〜１１０％の百分率でＣＦＴＲを 活性化することを示している。ＮＨ₂シリーズは、それほど活性ではない（１０ 〜３０％）。 ＯＨシリーズでは、効力は以下の通りである： ＭＰＢ−０５、０８、２５、３２＜３０＜２９＜０６＜２７、０７ 検討した全ての化合物から、６位のＯＨ基の存在が、ＣＦＴＲチャネルを活性 化する能力に関して決定因子であると考えられる： ・ ６位にＯＨを有する９化合物：４５％ ＣＦＴＲチャネル活性化 ・ ６位にＮＨ₂を有する６化合物：１３％ ＣＦＴＲチャネル活性化。 細胞内ｃＡＭＰに及ぼすベンゾキノリジニウムの作用 図１２は、５μＭフォルスコリン（ｃＡＭＰの合成の酵素：アデニル酸シクラ ーゼのアクチベーター）、１０μＭロリプラム（ｃＡＭＰ分解の酵素：IV型ホス ホジエステラーゼのインヒビター）及び５００μＭ ＭＰＢ−０７の存在下で５ 分後に測定される、組換えＣＨＯ細胞における細胞ｃＡＭＰのレベルを示す。化 合物ＭＰＢ−０７及びロリプラムの存在下では、ｃＡＭＰの同じレベルに達する が、ＭＰＢ−０７のみがＣＦＴＲチャネル活性化を誘導する。ｃＡＭＰに及ぼす フォルスコリンの作用は、約４倍であり、このことは、この作用が純粋にｃＡＭ Ｐに依存することを示唆している。ロリプラムは、ヨウ化物の流動及びパッチク ランプ法により測定されるＣＦＴＲアクチベーターとしての作用がない。これら の結果は、化合物ＭＰＢ−０７が、細胞ｃＡＭＰ経路とは独立した経路によりＣ ＦＴＲチャネルを刺激することを示している。 Ｃ）結論 これらの結果は、化合物ＭＰＢ−０７及びベンゾキノリジニウムファミリーの 幾つかのメンバーが、ｃＡＭＰ又は細胞内カルシウムとは独立した経路によりＣ ＦＴＲチャネルの開放を刺激することを示している。したがってこれらの分子は 、ＣＦＴＲチャネルアクチベーターの新しいファミリーを代表する。 図面の凡例 − 図１：アフリカツメガエル卵母細胞における放射活性ヨウ化物の流出に及 ぼすｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰの作用； ・ 図１Ａ：時間（横軸上、分）の関数としての¹²⁵Ｉの流出（縦軸上、％） の曲線：黒四角により表される点を通る曲線は、ｃＲＮＡ−ＣＦＴＲを注入した 卵母細胞において時間の関数として測定される¹²⁵Ｉの流出に対応する（ベース ＣＦＴＲと称される曲線）；白四角により表される点を通る曲線は、ｃＲＮＡ− ＣＦＴＲを注入し、かつｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性化した卵母細胞において 時間の関数として測定される¹²⁵Ｉの流出に対応する（ＣＦＴＲ＋ｃＡＭＰと称 される曲線）； ・ 図１Ｂ：ｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性化していない卵母細胞（黒で示さ れる）及びｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性化した卵母細胞（白で示される）にお ける¹²⁵Ｉの流出のヒストグラム：ｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性化したか又は していなく、かつ水を注入した卵母細胞は、左側に示される（「水」と標識）； ｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性化したか又はしていなく、かつｃＲＮＡ−ＣＦＴ Ｒを注入した卵母細胞は、右側に示される（「ＣＦＴＲ」と標識）；ｎは、実験 の数を表す。 − 図２：ＣＨＯ細胞における放射活性ヨウ化物の流出に及ぼすｃ−ｃｐｔ− ＡＭＰの作用； ・ 図２Ａ：時間（横軸上、分）の関数としての¹²⁵Ｉの流出（縦軸上、％） の曲線：黒三角により表される点を通る曲線は、ｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性 化していないＣＨＯ細胞において時聞の関数として測定される¹²⁵Ｉの流出に対 応する（ベースと称される曲線）；白三角により表される点を通る曲線は、ｃ− ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性化したＣＨＯ細胞において時間の関数として測定され る¹²⁵Ｉの流出に対応する（ｃＡＭＰと称される曲線）； ・ 図２Ｂ：ｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性化していないＣＨＯ細胞における¹²⁵ Ｉの流出のヒストグラム（白で示される）；ｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性 化したか又はしていなく、かつＣＦＴＲ遺伝子でトランスフェクションしていな いＣＨＯ細胞は、左側に示される（ＣＨＯ（ＣＦＴＲ−）と標識）；ｃ−ｃｐｔ −ＡＭＰにより活性化したか又はしていなく、かつＣＦＴＲ遺伝子でトランス フェクションしたＣＨＯ細胞は、右側に示される（ＣＨＯ（ＣＦＴＲ＋）と標識 ）；ｎは、実験の数を表す。 − 図３：ＨＴ２９細胞における放射活性ヨウ化物の流出に及ぼすｃ−ｃｐｔ −ＡＭＰの作用； ・ 図３Ａ：時間（横軸上、分）の関数としての¹²⁵Ｉの流出（縦軸上、％） の曲線：黒四角により表される点を通る曲線は、ｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性 化していないＨＴ２９細胞において時間の関数として測定される¹²⁵Ｉの流出に 対応する（ベースと称される曲線）；白四角により表される点を通る曲線は、ｃ −ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性化したＨＴ２９細胞において時間の関数として測定 される¹²⁵Ｉの流出に対応する（ｃＡＭＰと称される曲線）； ・ 図３Ｂ：ｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性化していないＨＴ２９細胞（黒） 及びｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰにより活性化したＨＴ２９細胞（白）における¹²⁵Ｉの 流出のヒストグラム。 − 図４：ＣＨＯ細胞における時間（横軸上、分）の関数としての¹²⁵Ｉの流 出（縦軸上、％）に及ぼす誘導体ＭＰＢ−０７（５００μＭ）の作用：白丸によ り表される点を通る曲線は、ＭＰＢ−０７により活性化し、かつＣＦＴＲ遺伝子 でトランスフェクションしたＣＨＯ細胞における時間の関数としての¹²⁵Ｉの流 出の測定に対応する（ＭＰＢ−０７（ＣＦＴＲ＋）と称される曲線）；黒丸によ り表される点を通る曲線は、ＭＰＢ−０７により活性化しているが、ＣＦＴＲ遺 伝子でトランスフェクションしていないＣＨＯ細胞における時間の関数としての¹²⁵ Ｉの流出の測定に対応する（ＭＰＢ−０７（ＣＦＴＲ−）と称される曲線） 。 − 図５：ＣＨＯ細胞における時間（横軸上、分）の関数としての¹²⁵Ｉの流 出（縦軸上、％）に及ぼす「フォルスコリン」（５００μＭ）の作用：白三角に より表される点を通る曲線は、フォルスコリンにより活性化し、かつＣＦＴＲ遺 伝子でトランスフェクションしたＣＨＯ細胞における時間の関数としての¹²⁵Ｉ の流出の測定に対応する(フォルスコリンＣＨＯ(ＣＦＴＲ＋)と称される曲線)； 黒三角により表される点を通る曲線は、フォルスコリンにより活性化していなく 、かつＣＦＴＲ遺伝子でトランスフェクションしたＣＨＯ細胞における時間の関 数としての¹²⁵Ｉの流出の測定に対応する（ベースＣＨＯ（ＣＦＴＲ＋）と称さ れ る曲線）。 − 図６：ＣＦＴＲ遺伝子でトランスフェクションしていなく（ＣＨＯ（ＣＦ ＴＲ−）と称される）、かつ ・ 活性化していない（ベース）、 ・ フォルスコリンにより活性化した（フオルスコリン）、 ・ Ａ２３１８７により活性化した（Ａ２３１８７）、 ・ Ａ２３１８７及びフォルスコリンにより活性化した（Ａ２３１８７＋ｆｓ ｋ）、 ・ ＭＰＢ−０７により活性化した（ＭＰＢ−０７）、 ＣＨＯ細胞における¹²⁵Ｉの流出のヒストグラム。 ｎは、実験の数を表す。 − 図７：ＣＦＴＲ遺伝子でトランスフェクションし（ＣＨＯ（ＣＦＴＲ＋） と称される）、かつ ・ 活性化していない（ベース）、 ・ フォルスコリンにより活性化した（フォルスコリン）、 ・ ＭＰＢ−０７により活性化した（ＭＰＢ−０７）、 ・ Ａ２３１８７により活性化した（Ａ２３１８７）、 ＣＨＯ細胞における¹²⁵Ｉの流出のヒストグラム。 ｎは、実験の数を表す。 − 図８：ＨＴ２９細胞における時間（横軸上、分）の関数としての¹²⁵Ｉの 流出（縦軸上、％）に及ぼすｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰ（５００μＭ）及びＭＰＢ−０ ７（５００μＭ）の作用の比較： ・ 図８Ａ：黒四角により表される点を通る曲線は、活性化していないＨＴ２ ９細胞における時間の関数としての¹²⁵Ｉの流出の測定に対応する（ベースと称 される曲線）；白四角により表される点を通る曲線は、ｃ−ｃｐｔ−ＡＭＰによ り活性化したＨＴ２９細胞における時間の関数としての¹²⁵Ｉの流出の測定に対 応する（ｃＡＭＰと称される曲線）。 ・ 図８Ｂ：白四角により表される点を通る曲線は、活性化していないＨＴ２ ９細胞における時間の関数としての¹²⁵Ｉの流出の測定に対応する（ベー スと称される曲線）；黒四角により表される点を通る曲線は、ＭＰＢ−０７によ り活性化したＨＴ２９細胞における時間の関数としての¹²⁵Ｉの流出の測定に対 応する（ＭＰＢ−０７と称される曲線）。 − 図９：活性化していない（ベース）、ｃ−ｃｔｐ−ＡＭＰにより活性化し た（ｃＡＭＰ）及びＭＰＢ−０７により活性化した（ＭＰＢ−０７）ＨＴ２９細 胞における¹²⁵Ｉの流出のヒストグラム：ｎは、実験の数を表す。 − 図１０：アフリカツメガエル卵母細胞における時間（横軸上、分）の関数 としての¹²⁵Ｉの流出（縦軸上、％）に及ぼすｃ−ｃｔｐ−ＡＭＰ（５００μＭ ）の作用の比較： ・ 図１０Ａ：白丸により表される点を通る曲線は、水を注入した卵母細胞に おける時間の関数としての¹²⁵Ｉの流出の測定に対応する（ベースの水と称され る曲線）；黒四角により表される点を通る曲線は、ｃＲＮＡ−ＣＦＴＲを注入し た卵母細胞における時間の関数としての¹²⁵Ｉの流出の測定に対応する（ベース ＣＦＴＲと称される曲線）；白四角により表される点を通る曲線は、ｃＲＮＡ− ＣＦＴＲを注入し、かつｃ−ｃｔｐ−ＡＭＰで活性化した卵母細胞における時間 の関数としての¹²⁵Ｉの流出の測定に対応する（ＣＦＴＲ＋ｃＡＭＰと称される 曲線）； ・ 図１０Ｂ：白四角により表される点を通る曲線は、ｃＲＮＡ−ＣＦＴＲを 注入し、かつＭＰＢ−０７で活性化した卵母細胞における時間の関数としての^{12 5} Ｉの流出の測定に対応する（ＭＰＢ−０７と称される曲線）。 − 図１１：活性化していない（ベース）か、又はｃ−ｃｔｐ−ＡＭＰにより 活性化した（ｃＡＭＰ）か、又はＭＰＢ−０７により活性化した（ＭＰＢ−０７ ）アフリカツメガエル卵母細胞における¹²⁵Ｉの流出のヒストグラム、これらの 卵母細胞は、水を注入した（左側の「水」と標識）か、又はｃＲＮＡ−ＣＦＴＲ を注入した（右側の「ＣＦＴＲ」と標識）；ｎは、実験の数を表す。 − 図１２：ＣＦＴＲ遺伝子でトランスフェクションし、かつ活性化していな い（ベース）か、又はフォルスコリンにより活性化した（フォルスコリン）か、 又はロリプラムにより活性化した（ロリプラム）か、又はＭＰＢ−０７により活 性化した（ＭＰＢ−０７）、ＣＨＯ細胞におけるｃＡＭＰ（タンパク質１mg当 たりのnmolで測定）のレベルを表すヒストグラム。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １０５ Ａ６１Ｐ 43/00 １０５ Ｃ０７Ｄ 215/12 Ｃ０７Ｄ 215/12 215/14 215/14 455/04 455/04 471/04 １０３ 471/04 １０３Ａ 471/14 １０１ 471/14 １０１ (72)発明者 ヴィエルフォン，ジャン―ミッシェル フランス国、エフ―94700 メゾン・アル フォル、リュ・モリエール、２ (72)発明者 ヴェリエ，ベルナール フランス国、エフ―13360 ロクヴェール、 ラ・ロミキエール（番地なし) (72)発明者 ゴラ，モーリス フランス国、エフ―13400 オバーニュ、 レ・ジャルダン・デウール、17

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．一般式（Ｉ）： ｛式中、 − 複素環Ａは、芳香族又は非芳香族であり（後者の場合には、この複素環の 窒素原子は、二重結合により４ａ位の炭素に結合していると解される）； − Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、相互に独立に、 ・水素、又は臭素若しくはフッ素原子、又は ・ハロゲン原子、特に塩素原子、又は ・約１〜約１０個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐鎖の、アルキル、ア ルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基〔これらの基は、適宜、特に ハロゲン、及び／又はヒドロキシル、及び／又はアミン（第一級、第二級又は第 三級）、及び／又は環に約５〜約１０個の炭素原子を含む、芳香族及び／若しく は脂肪族環（これらの環は、これら自体、適宜、特にハロゲン、及び／又はヒド ロキシル、及び／又はアミン（第一級、第二級又は第三級）、及び／又はアルキ ル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上記 と同義である）により置換されている）により置換されている〕、又は ・環に約５〜約１０個の炭素原子を含む、芳香族若しくは脂肪族環〔この環 は、これ自体、適宜、特にハロゲン、及び／又はヒドロキシル、及び／又はアミ ン（第一級、第二級又は第三級）、及び／又はアルキル、アルコキシ、カルボニ ル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上記と同義である）により置換 されている〕、又は ・ＯＲ_a基〔Ｒ_aは、水素原子、又は直鎖若しくは分岐鎖の、アルキル、カル ボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上記と同義である）、又は 芳香族若しくは脂肪族環（これらの環は、上記と同義である）を表す〕を表すか 、あるいは ・ＮＲ_bＲ_c基〔Ｒ_b及びＲ_cは、相互に独立に、直鎖若しくは分岐鎖の、アル キル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上 記と同義である）、又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの環は、上記と同義で ある）を表す〕を表すか、あるいは ・ Ｒ₁とＲ₂、又はＲ₃とＲ₄、及び／又はＲ₄とＲ₅、及び／又はＲ₇とＲ₈、 及び／又はＲ₈とＲ₉、及び／又はＲ₉とＲ₁₀が、上述の異なる原子又は基又は環 を表さないとき、Ｒ₁はＲ₂と共同して、又はＲ₂はＲ₃と共同して、及び／又はＲ₃ はＲ₄と共同して、及び／又はＲ₄はＲ₅と共同して、及び／又はＲ₇Ｒ₈と共同し て、及び／又はＲ₈はＲ₉と共同して、及び／又はＲ₉はＲ₁₀と共同して、それぞ れＣ₁及びＣ₂と共に、又はＣ₂及びＣ₃と共に、又はＣ₃及びＣ₄と共に、又はＣ₄ 、Ｃ_4a及びＣ₅と共に、又はＣ₇及びＣ₈と共に、又はＣ₈及びＣ₉と共に、又はＣ₉ 及びＣ₁₀と共に、５〜１０個の炭素原子を含む、芳香族又は脂肪族環〔適宜、こ の環は、特にハロゲン、及び／又はアルキル、アルコキシ、カルボニル若しくは オキシカルボニル基、及び／又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの基又は環は 、上記と同義である）により置換されている〕を形成するか、又は ・Ｒ₃とＲ₄が、上述の異なる原子若しくは基若しくは環を表さないとき、Ｒ₃ はＲ₄と共同して、下記式： （式中、Ｒ_aは、上記と同義である）で示されるインドール基を形成し； − Ｙは、 ・ＯＲ_d基〔Ｒ_dは、水素原子、又は直鎖若しくは分岐鎖の、アルキル、カル ボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上記と同義である）、又は 芳香族若しくは脂肪族環（これらの環は、上記と同義である）を表す〕、又は ・ＮＲ_eＲ_f基［Ｒ_e及びＲ_fは、相互に独立に、直鎖若しくは分岐鎖の、アル キル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上 記と同義である）、又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの環は、上記と同義で ある）を表す〕を表し、 ・Ｒ_d、又はＲ_e及びＲ_fの少なくとも１つが、上述の異なる原子又は基又は 環の１つを表さないとき、Ｒ_d、又はＲ_e及びＲ_fの少なくとも１つは、Ｒ₅と共同 して、又はＲ₇と共同して、それぞれＣ₅若しくはＣ₆と共に、又はＣ₆、Ｃ_6a若し くはＣ₇と共に、５〜１０個の炭素原子を含む、芳香族又は脂肪族複素環〔適宜 、特にハロゲン、及び／又はアルキル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシ カルボニル基、及び／又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの基又は環は、上記 と同義である）により置換されている〕を形成すると解され； − ｎは、０又は１に等しく、そして ・ｎが０に等しいとき、 ＊Ｘは、ハロゲン原子（特に臭素又は塩素原子）のようなアニオン型の原 子、又はペルクロラートのようなアニオン型の原子の基を表し、そして式（Ｉ） の複素環Ａの窒素は、第四級型であって、一方では共有結合により１１位の炭素 に結合し、かつ他方ではイオン結合により上記のＸに結合し、 ＊Ｒ₁とＲ₁₀が、上述の異なる原子又は基又は環を表さないとき、Ｒ₁はＲ₁₀ と共同して、Ｃ₁、式（Ｉ）の複素環Ａの窒素、Ｃ₁₁、及びＣ₁₀と共に、５〜 １０個の炭素原子を含む、芳香族又は脂肪族複素環〔適宜、特にハロゲン、及び ／又はアルキル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基、及び／ 又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの基又は環は、上記と同義である）により 置換されている〕を形成すると解され、 ・ｎが１に等しいとき、Ｘは、水素原子、又はハロゲン原子、特に臭素、若 しくは塩素、若しくはフッ素原子を表す｝で示される誘導体の、 生物（ヒト又は動物）における、経膜イオン流動障害、特に塩素、及び適宜重 炭酸塩に結びついた病態（特に、肺、消化器又は心臓）の治療を目的とする医薬 の調製のため、特にムコビシドーシスの治療、又は細胞毒性薬（特に抗腫瘍薬） の拒絶の予防、気管支若しくは消化管（特に膵臓又は腸）に対する閉塞の治療を 目的とする医薬の調製のための使用。 ２．一般式（Ｉ）［式中、ｎ＝１であり、そして以下の一般式（II）： （式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、請求の 範囲第１項と同義である）で示される誘導体に対応する］の誘導体の、請求項１ 記載の使用。 ３．以下の一般式（IIａ）： ［式中、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表すか、又はＣ₁及びＣ₂と共同して、６個の 炭素原子を含む芳香族環を形成し、 − Ｙは、−ＯＨ又は−ＮＨ₂基を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、水素原子を表すか、又はＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉若しく はＲ₁₀の１つは、ハロゲン原子、特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表し、 − Ｘは、水素原子又はハロゲン原子、特に臭素、塩素若しくはフッ素原子を 表す］で示される誘導体の、請求項１又は２記載の使用。 ４．下記式： から選択される一般式（IIａ）の誘導体の、請求項１〜３のいずれか１項記載の 使用。 ５．一般式（IIｂ）：［式中、Ｒ_a、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、上記と同義 である］で示される化合物、及び特に式（IIｂ）［式中、 − Ｒ_aは、水素原子を表し、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表し、そしてＲ₁とＲ₂を有する２つの炭素の間 に二重結合は存在せず、 − Ｒ₅は、水素原子を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、及びＲ₁₀は、水素原子を表すか、又はＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、及 びＲ₁₀の１つは、ハロゲン原子、特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表す］ の化合物の、請求項１又は２記載の使用。 ６．下記式： ［化合物Ａ：Ｒ₇＝Ｃｌ、Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｂ：Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｃ：Ｒ₈＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｄ：Ｒ₉＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｅ：Ｒ₁₀＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｈ、 化合物Ｆ：Ｒ₉＝Ｂｒ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₁₀＝Ｈ］から選択される式（IIｂ）の誘 導体の、請求項５記載の使用。 ７．一般式（Ｉ）［式中、ｎ＝０であり、そして以下の式（III）： （式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、請求項 １と同義である）で示されるベンゾ［ｃ］キノリジニウム誘導体に対応する］の 誘導体の、請求項１記載の使用。 ８．以下の一般式（IIIａ）： ［式中、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表すか、又はＣ₁及びＣ₂と共同して、６個の 炭素原子を含む芳香族環を形成し、 − Ｙは、−ＯＨ又は−ＮＨ₂又は−ＮＨＣＯＣＨ₃基を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、水素原子を表すか、又はＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀ の１つは、ハロゲン原子、特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表し、 − Ｘは、アニオン型のハロゲン原子、特に臭素原子Ｂｒ^-、若しくは塩素原 子Ｃｌ^-、又はアニオン型の原子の基、特にペルクロラートＣｌＯ₄ ^-を表す］で 示される誘導体の、請求項１又は７記載の使用。 ９．式（IIIａ）［式中、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表し、 − Ｙは、−ＯＨ基を表し、 − Ｘは、アニオン型のハロゲン原子、特に臭素原子Ｂｒ^-、若しくは塩素原 子Ｃｌ^-、又はアニオン型の原子の基、特にペルクロラートＣｌＯ₄ ^-を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、相互に独立に、水素原子又はハロゲン原子、 特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表す］の化合物の、請求項８記載の使用。 １０．下記式： から選択される一般式（IIIａ）のベンゾ［ｃ］キノリジニウム誘導体の、請求 の範囲第１項又は請求項７〜９のいずれか１項記載の使用。 １１．以下の一般式（IIIｂ）：［式中、Ｒ_a、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、上記と同義 である］で示される誘導体、及び特に式（IIIｂ）［式中、 − Ｒ_aは、水素原子を表し、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表し、そしてＲ₁とＲ₂を有する２つの炭素の間 に二重結合は存在せず、 − Ｒ₅は、水素原子を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、及びＲ₁₀は、水素原子を表すか、又はＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、及 びＲ₁₀の１つは、ハロゲン原子、特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表し、 − Ｙは、−ＮＨ₂を表し、 − Ｘは、アニオン型のハロゲン原子、特に臭素原子Ｂｒ^-、若しくは塩素原 子Ｃｌ^-、又はアニオン型の原子の基、特にペルクロラートＣｌＯ₄ ^-を表す］の 化合物の、請求項１又は５記載の使用。 １２．下記式： ［化合物Ｇ：Ｒ₇＝Ｃｌ、Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｈ：Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｉ：Ｒ₈＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｊ：Ｒ₉＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｋ：Ｒ₁₀＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｈ、 化合物Ｌ：Ｒ₉＝Ｂｒ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₁₀＝Ｈ］から選択される一般式（IIIｂ） の誘導体の、請求項１記載の使用。 １３．活性成分として、少なくとも１つの以下の一般式（Ｉ）： ［式中、 − 複素環Ａは、芳香族又は非芳香族であり（後者の場合には、この複素環の 窒素原子は、二重結合により４ａ位の炭素に結合していると解される）； − Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、相互に独立に、 ・水素、又は臭素若しくはフッ素原子、又は ・ハロゲン原子、特に塩素原子、又は ・約１〜約１０個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐鎖の、アルキル、ア ルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基｛これらの基は、適宜、特に ハロゲン、及び／又はヒドロキシル、及び／又はアミン（第一級、第二級又は第 三級）、及び／又は環に約５〜約１０個の炭素原子を含む、芳香族及び／若しく は脂肪族環〔これらの環は、これら自体、適宜、特にハロゲン、及び／又はヒド ロキシル、及び／又はアミン（第一級、第二級又は第三級）、及び／又はアルキ ル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上記 と同義である）により置換されている〕により置換されている｝、又は ・環に約５〜約１０個の炭素原子を含む、芳香族若しくは脂肪族環〔この環 は、これ自体、適宜、特にハロゲン、及び／又はヒドロキシル、及び／又はアミ ン（第一級、第二級又は第三級）、及び／又はアルキル、アルコキシ、カルボニ ル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上記と同義である）により置換 されている〕、又は ・ＯＲ_a基〔Ｒ_aは、水素原子、又は直鎖若しくは分岐鎖の、アルキル、カル ボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上記と同義である）、又は 芳香族若しくは脂肪族環（これらの環は、上記と同義である）を表す〕、又は ・ＮＲ_bＲ_c基〔Ｒ_b及びＲ_cは、相互に独立に、直鎖若しくは分岐鎖の、アル キル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上 記と同義である）、又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの環は、上記と同義で ある）を表す〕を表すか、あるいは ・ Ｒ₁とＲ₂、又はＲ₃とＲ₄、及び／又はＲ₄とＲ₅、及び／又はＲ₇とＲ₈、 及び／又はＲ₈とＲ₉、及び／又はＲ₉とＲ₁₀が、上述の異なる原子又は基又は環 を表さないとき、Ｒ₁はＲ₂と共同して、又はＲ₂はＲ₃と共同して、及び／又はＲ₃ はＲ₄と共同して、及び／又はＲ₄はＲ₅と共同して、及び／又はＲ₇はＲ₈と共同 して、及び／又はＲ₈はＲ₉と共同して、及び／又はＲ₉はＲ₁₀と共同して、それ ぞれＣ₁及びＣ₂と共に、又はＣ₂及びＣ₃と共に、又はＣ₃及びＣ₄と共に、又はＣ₄ 、Ｃ_4a及びＣ₅と共に、又はＣ₇及びＣ₈と共に、又はＣ₈及びＣ₉と共に、 又はＣ₉及びＣ₁₀と共に、５〜１０個の炭素原子を含む、芳香族又は脂肪族環〔 適宜、この環は、特にハロゲン、及び／又はアルキル、アルコキシ、カルボニル 若しくはオキシカルボニル基、及び／又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの基 又は環は、上記と同義である）により置換されている〕を形成するか、又は ・Ｒ₃とＲ₄が、上述の異なる原子若しくは基若しくは環を表さないとき、Ｒ₃ はＲ₄と共同して、下記式：（式中、Ｒ_aは、上記と同義である）で示されるインドール基を形成し； − Ｙは、 ・ＯＲ_d基〔Ｒ_dは、水素原子、又は直鎖若しくは分岐鎖の、アルキル、カル ボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上記と同義である）、又は 芳香族若しくは脂肪族環（これらの環は、上記と同義である）を表す〕、又は ・ＮＲ_eＲ_f基〔Ｒ_e及びＲ_fは、相互に独立に、直鎖若しくは分岐鎖の、アル キル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基（これらの基は、上 記と同義である）、又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの環は、上記と同義で ある）を表す〕を表し、 ・Ｒ_d、又はＲ_e及びＲ_fの少なくとも１つが、上述の異なる原子又は基又は 環の１つを表さないとき、Ｒ_d、又はＲ_e及びＲ_fの少なくとも１つは、Ｒ₅と共同 して、又はＲ₇と共同して、それぞれＣ₅及びＣ₆と共に、又はＣ₆、Ｃ_6a及びＣ₇ と共に、５〜１０個の炭素原子を含む、芳香族又は脂肪族複素環〔適宜、特にハ ロゲン、及び／又はアルキル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニ ル基、及び／又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの基又は環は、上記と同義で ある）により置換されている〕を形成すると解され； − ｎは、０又は１に等しく、そして ・ｎが０に等しいとき、 ＊Ｘは、ハロゲン原子（特に臭素又は塩素原子）のようなアニオン型の原 子、又はペルクロラートのようなアニオン型の原子の基を表し、そして式（Ｉ） の複素環Ａの窒素は、第四級型であって、一方では共有結合により１１位の炭素 に結合し、かつ他方ではイオン結合により上記のＸに結合し、 ＊Ｒ₁とＲ₁₀が、上述の異なる原子又は基又は環の１つを表さないとき、 Ｒ₁はＲ₁₀と共同して、Ｃ₁、式（Ｉ）の複素環Ａの窒素、Ｃ₁₁、及びＣ₁₀と共に 、５〜１０個の炭素原子を含む、芳香族又は脂肪族複素環〔適宜、特にハロゲン 、及び／又はアルキル、アルコキシ、カルボニル若しくはオキシカルボニル基、 及び／又は芳香族若しくは脂肪族環（これらの基又は環は、上記と同義である） により置換されている〕を形成すると解され、 ・ｎが１に等しいとき、Ｘは、水素原子、又はハロゲン原子、特に臭素、若 しくは塩素、若しくはフッ素原子を表す］で示される誘導体を、生理学に許容し うる賦形剤との組合せで含有することを特徴とする、医薬組成物。 １４．活性成分として、少なくとも１つの請求項１〜６のいずれか１項記載の式 （II）の誘導体を含有することを特徴とする、請求項１３記載の医薬組成物。 １５．活性成分として、少なくとも１つの請求項７〜１２のいずれか１項記載の 式（III）の誘導体を含有することを特徴とする、請求項１３記載の医薬組成物 。 １６．経口経路により投与することができる形態、特に錠剤若しくはカプセル剤 の形態で、又は非経口経路により投与することができる形態、特に静脈内、筋肉 内若しくは皮下経路により注射可能な調剤の形態で、又は更に気道による、特に エーロゾルの形態で肺経路による、形態で提供されることを特徴とする、請求項 １３〜１５のいずれか１項記載の医薬組成物。 １７．活性成分の量が、活性成分の１日用量で、１回以上の投薬において約０． １mg/kg〜５mg/kg、特に約３mg/kgである量であることを特徴とする、請求項１ ３〜１６のいずれか１項記載の医薬組成物。 １８．以下の一般式（IIａ）：［式中、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表すか、又はＣ₁及びＣ₂と共同して、６個の炭 素原子を含む芳香族環を形成し、 − Ｙは、−ＯＨ又はＮＨ₂基を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、水素原子を表すか、又はＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉若しく はＲ₁₀の１つは、ハロゲン原子、特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表し、 − Ｘは、水素原子又はハロゲン原子、特に臭素、塩素若しくはフッ素原子を 表す（但し、下記式： を有する化合物は除く）］で示される誘導体。 １９．下記式： から選択される一般式（IIａ）で示される請求項１８記載の誘導体。 ２０．以下の一般式（IIｂ）： ［式中、Ｒ_a、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、上記と同義 である］で示される誘導体、及び特に式（IIｂ）［式中、 − Ｒ_aは、水素原子を表し、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表し、そしてＲ₁とＲ₂を有する２つの炭素の間 に二重結合は存在せず、 − Ｒ₅は、水素原子を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、及びＲ₁₀は、水素原子を表すか、又はＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、及 びＲ₁₀の１つは、ハロゲン原子、特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表し、 − Ｙは、−ＮＨ₂を表し、 − Ｘは、ハロゲン原子、特に臭素、塩素若しくはフッ素原子を表す］の化合 物。 ２１．下記式：［化合物Ａ：Ｒ₇＝Ｃｌ、Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｂ：Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｃ：Ｒ₈＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｄ：Ｒ₉＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｅ：Ｒ₁₀＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｈ、 化合物Ｆ：Ｒ₉＝Ｂｒ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₁₀＝Ｈ］から選択される一般式（IIｂ） で示される請求項２０記載の誘導体。 ２２．以下の一般式（III）： ［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、請求項 １と同義である（但し、下記式： で示される化合物は除く）］で示されるベンゾ［ｃ］キノリジニウム誘導体。 ２３．以下の一般式（IIIａ）： ［式中、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表すか、又はＣ₁及びＣ₂と共同して、６個の炭 素原子を含む芳香族環を形成し、 − Ｙは、−ＯＨ又は−ＮＨ₂又はＮＨＣＯＣＨ₃基を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、水素原子を表すか、又はＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀ の１つは、ハロゲン原子、特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表し、 − Ｘは、アニオン型のハロゲン原子、特に臭素原子Ｂｒ^-、若しくは塩素原 子Ｃｌ^-、又はアニオン型の原子の基、特にペルクロラートＣｌＯ₄ ^-を表す］で 示される、請求項２２記載の誘導体。 ２４．式（IIIａ）［式中、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表し、 − Ｙは、−ＯＨ基を表し、 − Ｘは、アニオン型のハロゲン原子、特に臭素原子Ｂｒ^-、若しくは塩素原 子Ｃｌ^-、又はアニオン型の原子の基、特にペルクロラートＣｌＯ₄ ^-を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉及びＲ₁₀は、相互に独立に、水素原子又はハロゲン原子、 特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表す］で示される請求項２３記載の誘導体 。 ２５．下記式： から選択される一般式（IIIａ）の、請求項２２〜２４のいずれか１項記載のベ ンゾ［ｃ］キノリジニウム誘導体。 ２６．以下の一般式（IIIｂ）： ［式中、Ｒ_a、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、上記と同義 である］で示される、請求項２２記載の誘導体、及び特に式（IIIｂ）［式中、 − Ｒ_aは、水素原子を表し、 − Ｒ₁及びＲ₂は、水素原子を表し、そしてＲ₁とＲ₂を有する２つの炭素の間 に二重結合は存在せず、 − Ｒ₅は、水素原子を表し、 − Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、及びＲ₁₀は、水素原子を表すか、又はＲ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、及 びＲ₁₀の１つは、ハロゲン原子、特に塩素、臭素若しくはフッ素原子を表し、 − Ｙは、−ＮＨ₂を表し、 − Ｘは、アニオン型のハロゲン原子、特に臭素原子Ｂｒ^-、若しくは塩素原 子Ｃｌ^-、又はアニオン型の原子の基、特にペルクロラートＣｌＯ₄ ^-を表す］の 化合物。 ２７．下記式： ［化合物Ｇ：Ｒ₇＝Ｃｌ、Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｈ：Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｉ：Ｒ₈＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₉＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｊ：Ｒ₉＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₁₀＝Ｈ、 化合物Ｋ：Ｒ₁₀＝Ｃｌ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₉＝Ｈ、 化合物Ｌ：Ｒ₉＝Ｂｒ、Ｒ₇＝Ｒ₈＝Ｒ₁₀＝Ｈ］から選択される一般式（IIIｂ） で示される請求項２６記載の誘導体。 ２８．請求項１記載の誘導体の製造方法であって、以下の工程： − 式（Ａ）［式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄及びＲ₅は、請求項１と同義である ］の誘導体の、フェニルリチウム又はリチウムジイソプロピルアミドによる、有 利にはエーテル又はＴＨＦ中での処理〔これにより、以下の反応図：に従い、式（Ｂ）（式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄及びＲ₅は、請求項１と同義であ る）の誘導体が得られる〕、 − 前段階で得られた式（Ｂ）の誘導体の、式（Ｃ）［式中、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉ 、Ｒ₁₀及びＸは、式（Ｉ）と同義である］の誘導体との縮合〔これにより、以下 の反応図：に従い、式（Ｄ）（式中、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉、Ｒ₁₀及び Ｘは、請求項１と同義である）の誘導体が得られる〕、 − Ｈ₂Ｏの添加による式（Ｄ）の化合物の処理（これにより、以下の式（II ）： ［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀、及びＸは、請求項１と同義であり、そしてＹは 、−ＮＨ₂を表す］で示される誘導体が得られる）、 − 適宜、上述の式（II）の化合物の、請求項１と同義のＲ_e及びＲ_f基を含 有する誘導体〔この誘導体は、上述の式（II）の化合物の６位の炭素に結合して いる窒素原子と、特にＲ_e及び／又はＲ_fのハロゲン化物により（必要であれば、 上述の式（II）の化合物に存在し、上述のＲ_e及びＲ_f基を含有する誘導体と反応 することができる他の官能基を事前に保護すべく処理しながら）反応することが できる〕による処理（これにより、以下の式（II）： ［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀及びＸは、上記と同義であり、そしてＹは、請求 項１と同義の−ＮＲ_eＲ_f基を表す］で示される化合物が得られる）、 − 適宜、特に４０℃で硫酸（pH３）の作用による、上述の式（II）［式中、 Ｙは、ＮＨ₂を表す］の化合物の加水分解（これにより、以下の式（II）： ［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀及びＸは、請求項１と同義であり、そしてＹは、 −ＯＨ基を表す］で示される化合物が得られる）、 − 適宜、上述の式（II）［式中、Ｙは、−ＯＨ基を表す］の化合物の、請求 項１と同義のＲ_d基を含有する誘導体〔この誘導体は、上述の式（II）の化合物 の７位の炭素に結合している酸素原子と、特にＲ_dのハロゲン化物により（必要 であれば、上述の式（II）の化合物に存在し、上述のＲ_d基を含有する誘導体と 反応することができる他の官能基を事前に保護すべく処理しながら）反応するこ とができる〕による処理（これにより、以下の式（II）： ［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀及びＸは、上記と同義であり、そしてＹは、請求 項１と同義の−ＯＲ_d基を表す］で示される化合物が得られる）、 − 適宜、上述の式（II）［式中、Ｙは、−ＮＨ₂又は−ＯＨを表す］の化合 物の有利には２００℃での加熱（これにより、それぞれ以下の式（III）：［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀及びＸは、請求項１と同義であり、そしてＹは、 −ＮＨ₂又は−ＯＨ基を表す］で示される化合物が得られる）、 − 適宜、上述の式（III）［式中、Ｙは、−ＮＨ₂基を表す］の化合物の、請 求項１と同義のＲ_e及びＲ_f基を含有する誘導体〔この誘導体は、上述の式（III ）の化合物の６位の炭素に結合している窒素原子と、特にＲ_e及び／又はＲ_fのハ ロゲン化物により（必要であれば、上述の式（III）の化合物に存在し、上述の Ｒ_e及びＲ_f基を含有する誘導体と反応することができる他の官能基を事前に保護 すべく処理しながら）反応することができる〕による処理(これにより、以下の 式（III）：［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀及びＸは、上記と同義であり、そしてＹは、請求 項１と同義の−ＮＲ_eＲ_f基を表す］で示される化合物が得られる）、 − 適宜、上述の式（III）［式中、Ｙは、−ＯＨ基を表す］の化合物の、請 求項１と同義のＲ_d基を含有する誘導体〔この誘導体は、上述の式（III）の化合 物の７位の炭素に結合している酸素原子と、特にＲ_dのハロゲン化物により（必 要であれば、上述の式（III）の化合物に存在し、上述のＲ_d基を含有する誘導体 と反応することができる他の官能基を事前に保護すべく処理しながら）反応する ことができる〕による処理（これにより、以下の式（III）： ［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀及びＸは、上記と同義であり、そしてＹは、請求 項１と同義の−ＯＲ_d基を表す］で示される化合物が得られる）、 −適宜、上述の式（II）又は（III）の化合物の、特に減圧下の酸化白金の存 在下での接触水素化による水素化（これにより、以下の式（II）又は（III）： ［式中、Ｒ₁〜Ｒ₅、Ｒ₇〜Ｒ₁₀、Ｘ及びＹは、上記と同義である］で示される化 合物が得られる）を含むことを特徴とする方法。