JP2000513338A

JP2000513338A - 経皮粒子送達に使用するための高密度化された粒子組成物を提供する方法

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Publication number: JP2000513338A
Application number: JP10500963A
Authority: JP
Inventors: フランシスサーフィー，デイビッド; リーバーコス，テリー
Original assignee: パウダージェクトリサーチリミテッド
Priority date: 1996-06-17
Filing date: 1997-06-17
Publication date: 2000-10-10
Also published as: AU3102597A; PT912239E; WO1997048485A1; EP0912239B1; EP0912239A1; DK0912239T3; CA2258554C; ES2164348T3; CA2258554A1; DE69706988T2; GB9612629D0; DE69706988D1; ATE206067T1

Abstract

(57)【要約】高密度化処理された薬学組成物を提供するための方法が提供される。この方法は、非高密度化薬学粉体または粒子状処方物を、針なしシリンジを用いる経皮送達に最適な高密度化粒子に変換するために使用される。この方法はまた、粉体および粒子状処方物の密度および粒子サイズを、続くそれの経皮送達のために最適化するために使用される。本発明の方法によって形成された高密度化薬学組成物もまた、提供される。

Description

【発明の詳細な説明】経皮粒子送達に使用するための高密度化された粒子組成物を提供する方法技術分野本発明は、加工された薬学組成物を高密度化するための方法に関する。より詳細には、本発明は、高密度でない粒子状薬学組成物（例えば、凍結乾燥または噴霧乾燥技術を使用して調製された組成物）からの、高密度な、実質的に固体の粒子を形成するための方法に関する。この方法を使用して得られた高密度化された組成物は、針なしのシリンジシステムからの経皮粒子送達に特に適する。発明の背景皮膚表面を介する薬物の送達能力（経皮送達）は、経口または非経口送達技術を超える多くの利点を提供する。詳細には、経皮送達は、伝統的な薬物投与システムに対して、安全、好都合、および非侵襲性の代替物を提供する。これは、経口送達に関連した主要な問題（例えば、吸収および代謝の可変速度、胃腸管刺激、および／または苦みもしくは好ましくない薬物味）を好都合に回避する。経皮送達はまた、非経口送達に関連する問題（例えば、針による痛み、処置された個体への感染の導入の危険性、事故的な針芯および使用済みの針の処分により引き起こされる保健医療作業者の汚染または感染の危険性）を回避する。さらに、このような送達は、投与される薬物の血中濃度にわたり高度な制御を提供する。しかし、その明らかな利点にもかかわらず、経皮薬物送達には、それ自身の固有の多数のロジスティックな問題を提示する。インタクトな皮膚を介する薬物の受動的な送達は、薬物が血液またはリンパ系に浸透するために、多数の構造的に異なる組織（角質層、生存可能な表皮、真皮層、および毛細管壁）を介する分子の輸送を必然的に必要とする。従って、経皮送達システムは、各組織型により示される種々の抵抗を克服し得なければならない。上記の点において、受動的な経皮送達に対する多くの代替物が開発されている。これらの代替物は、皮膚浸透増強剤、または皮膚透過性を増加するための「透過増強剤」、ならびにイオントフォレーシス、エレクトロポレーション、または超音波の使用のような非化学的態様の使用を含む。しかし、このような技術は、しばしば、皮膚刺激または皮膚感作のような所望でない副作用を引き起こす。従って、伝統的な経皮送達方法を使用して安全に有効に投与され得る薬物の数は、限られたままである。より最近では、インタクトな皮膚への制御された用量およびインタクトな皮膚を介する制御された用量における固形薬物含有粒子を発射するための針なしシリンジの使用を必要とする新規の経皮薬物送達システムが、記載されている。詳細には、「経皮薬物送達」と表題され、そしてBellhouseらにより1995年６月７日に出願された、一般に譲渡された米国特許出願第08/474,367号は、超音波気体流中で運ばれる薬学粒子を送達する針なしシリンジを記載する。針なしシリンジは、粉体化薬物化合物および粉体化薬物組成物の経皮送達、生細胞への遺伝的物質の送達（例えば、遺伝子治療）、および皮膚、筋肉、血液、またはリンパへの生物薬剤の送達のために使用される。針なしシリンジはまた、薬物および生物製剤を、器官表面、固形腫瘍、および／または外科的腔（例えば、腫瘍基盤（tumor bed）または腫瘍摘出後の空洞）に送達するために、手術と組合わせて使用され得る。理論的には、実質的に固体の、粒子状形態で調製され得る実際的に任意の薬剤が、このようなデバイスを使用して、安全にそして容易に送達され得る。１つの特定の針なしシリンジは、一般に、最初にノズルを通して通路を閉じ、そしてノズルの上流末端に実質的に隣接するように配置された破裂性膜を有する伸長した管状のノズルを含む。送達される治療剤の粒子は、破裂性膜に隣接して配置され、そしてエネルギーを与える手段を使用して送達される。この手段は、膜の下流末端からの送達のためのノズルを通して、膜の上流側に、膜を破裂させそして超音波気体流（薬学粒子を含む）を生成するために十分な気体圧を提供する。従って、粒子は、破裂性膜の破裂において容易に入手可能であるマッハ１とマッハ８との間の送達速度で、針なしシリンジから送達され得る。別の針なしシリンジの配置は、一般に上記と同様の要素を含む。但し、超音波気体流内で運ばれる薬学粒子を有する代わりに、ノズルの下流末端が、静止の「内に向いた（inverted）」位置（ここで、隔壁は、薬学粒子を含むために下流面に陥没部を提供する）と活性の「外に裏返った（everted）」位置（ここで、隔壁の上流面に適用された超音波衝撃波の結果として、隔壁は、下流面に外向きに突出する）との間で移動可能である双安定の隔壁と共に提供される。このようにして、隔壁の陥没部内に含まれた薬学粒子は、それらの経皮送達のためのデバイスから、標的化された皮膚または粘膜表面へ、超音波初速度で放出される。上記の針なしシリンジ配置を使用する経皮送達は、一般に0.1と250μｍとの間の範囲のおよそのサイズを有する粒子を用いて実行される。薬物送達のために、最適の粒子サイズは、通常少なくとも約10から15μｍ（典型的な細胞のサイズ）である。遺伝子送達のために、最適の粒子サイズは、一般には、10μｍより実質的に小さい。約250μｍより大きい粒子もまた、デバイスから送達され得、上限は、粒子のサイズが皮膚細胞に有害に損傷を与え得る点である。送達される粒子が浸透する実際の距離は、粒子サイズ（例えば、ほぼ球状の粒子幾何学を仮定して名目の粒子直径）、粒子密度、粒子が皮膚表面に衝撃を与える初速度、および皮膚の密度および動粘性係数に依存して浸透し得る。この点において、針なし注入における使用のための最適な粒子密度は、一般に、約0.1と25g/cm³との間の範囲、好ましくは、約0.8と1.5g/cm³との間、そして注入速度は一般に約200と3,00 0m/秒との間の範囲である。針なしシリンジの特に特有の特徴は、送達される粒子の浸透深度を密に制御する能力である。それにより、薬物の種々の部位への標的化された投与を可能にする。例えば、粒子特性および／またはデバイス操作パラメーターが、皮内送達のための約１mm未満の浸透深度、または皮下送達のための約1〜2mmの浸透深度を提供するように選択され得る。１つのアプローチは、約2と10kg/秒/mとの間、そしてより好ましくは約4と7kg/秒/mとの間の運動量密度（例えば、粒子前面面積で割った粒子運動量）を提供するための粒子サイズ、粒子密度、および初速度の選択を必要とする。運動量密度にわたるこのような制御は、薬学粒子の正確に制御された、組織選択的送達を可能にする。従って、広範な種々の薬学組成物から約0.1〜150μｍの平均サイズを有する十分に高密度な粒子（約0.8〜1.5g/cm³の密度を有する）を調製するための確実な方法を提供する必要性がある。従って、高密度化された薬学粒子が、針なしシリンジシステムを用いて被験体に経皮送達され得る。発明の要旨本発明の１つの実施態様において、薬学粉体または粒子状処方物（例えば、超音波速度での経皮送達に必要とされる粒子密度未満を有する）を、針なしシリンジを用いる経皮送達に最適である高密度化粒子に変換するための方法が提供される。このような粒子は、約0.1〜約25g/cm³の範囲、好ましくは約0.5〜約3.0g/cm³ の範囲、および最も好ましくは約0.8〜約1.5g/cm³の範囲の最適粒子密度を有する。高密度化粒子は処理され、約0.1〜約250μｍの範囲、好ましくは約0.1〜約1 50μｍの範囲、および最も好ましくは約20〜約60μｍの範囲の最適粒子サイズが得られる。本方法は、高圧力、そして必要に応じて真空を用いる薬学組成物の圧縮（compaction）を必要とし、組成物を高密度化する。次いで、生じる圧縮された物質は、従来の方法を用いてサイズ減少され、最適サイズの高密度化粒子が提供される。本発明の関連した実施態様において、上記の圧縮およびサイズ減少技術を用いて上記の範囲内にある粒子サイズおよび密度特徴を有する粒子状薬学組成物の密度および粒子サイズを最適化する方法が提供される。この様式において、最適化粒子が、針なしシリンジを用いて超音波速度で送達された場合に得られる浸透深度は、標的化内皮送達（例えば、粒子サイズおよび密度が、約１mm未満の浸透に最適化される）または皮下送達（例えば、粒子サイズおよび密度が約１〜２mmの浸透に最適化される）を提供するために調製され得る。さらに関連する実施態様において、本発明は、凍結乾燥または噴霧乾燥された生物薬学組成物（biopharmaceutical composition）の粒子サイズおよび密度を最適化する方法に関する。この方法は、高密度化物質を得るために凍結乾燥または噴霧乾燥された薬学粉体の圧縮を必要とする。次いで、高密度化物質は、再製粉されて組成物を産生し得る。この組成において、個々の粒子は理論的最大密度に接近し、従って針なしシリンジから送達される場合の超音波速度の衝撃による送達および超音波速度での皮膚への浸透に最適である。特定の実施態様において、凍結乾燥した組換えヒト成長ホルモン（rhGH）粉体は高密度化され、約20〜50 μｍの範囲および約0.8〜1.5g/cc³の密度を有する粒子が得られる。高密度化rhG H 粒子は、針なしシリンジデバイスからの送達に理想的に適切である。本発明のこれらおよび他の実施態様は、本明細書中の開示を参照すれば当業者に容易に思い浮かぶ。図面の簡単な説明図１は、針なし注入によって凍結乾燥したrhGH粉体を投与された動物（▲）、針なし注射によって高密度化rhGH粒子（本発明の方法によって調製された）を投与された動物（■）、または皮下注入によって凍結乾燥したrhGH粉体（●）を投与された動物における組換えヒト成長ホルモン（rhGH）のインビボでの血清レベルの平均の比較を示す。好ましい実施態様の詳細な説明本発明を詳細に説明する前に、本発明は、特定の粒子状薬学処方物またはプロセスのパラメーターに制限されず、それ自体が、もちろん改変され得ることが理解されるべきである。本明細書中で用いられる専門用語は、本発明の特定の実施態様を記載するためだけのものであり、制限する意図はないこともまた、理解されるべきである。本明細書中に引用されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、前出のものでも後出のものでも、その全体が本明細書中に参考として援用される。本明細書および添付の請求の範囲で用いられるように、単数の形態「a」、［a n」、および「the」は、その内容がそうでないことを明らかに指示しない限りは、複数の対象を含むことに注意されなければならない。従って、例えば、「薬剤」に関しては、２つ以上の薬剤の混合物を含み、「賦形剤」に関しては、２つ以上の賦形剤の混合物を含む、などである。Ａ．定義他に定義されない限りは、本明細書中で用いられるすべての技術的および科学的用語は、本発明に関係する当業者に通常理解されているものと同じ意味を有する。本明細書中に記載されるものと類似または同等の多数の方法および材料が、本発明の実施に使用され得るが、好ましい材料および方法が本明細書中に記載される。本発明の記載において、以下の用語が使用され、そして以下に示されるように定義されることが意図される。「経皮」送達によって、発明者らは、経皮（または「皮膚を通して」）および経粘膜投与の両方（すなわち、皮膚または粘膜組織を介する薬物または薬剤の通過によって送達される）を含むことを意図する。例えば、Transdermal Drug Del ivery:Developmental Issues and Research Initiatives，HadgraftおよびGuy（編）、Marcel Dekker，Inc.，(1989)；Controlled Drug Delivery:Fundamentals and Applications，RobinsonおよびLee（編）、Marcel Dekker Inc.，(1987)；およびTransdermal Delivery of Drugs,第１〜３巻、KydonieusおよびBerner（編）、CRC Press，(1987)を参照のこと。「経皮」送達の文脈において本明細書中に記載される本発明の局面は、他に特定されない限り、経皮および経粘膜送達の両方への適用を意味する。すなわち、本発明の組成物、システム、および方法が、他に明白に規定されない限りは、送達の経皮および経粘膜様式に等しく適用可能であると考えられるべきである。本発明で用いられる場合、用語「薬物」または「薬剤」は、生物（ヒトまたは動物）に投与された場合に、局所および／または全身性作用による所望の薬理学的および／または生理的効果を誘導する要件の任意の化合物または組成物を意図する。従って、この用語は、薬物として伝統的にみなされる化合物または化学物質、ならびにペプチド、ホルモン、核酸、遺伝子構築物などのような分子を含む生理薬剤的を含む。より詳細には、用語「薬物」または「薬剤」は、すべての主要な治療領域における使用のための化合物または組成物を含み、以下を含むがそれらに限定されない：抗生物質および抗ウイルス剤のような抗感染剤；鎮痛薬および鎮痛薬の組合せ；局所および全体麻酔薬；拒食症薬（anorexics）；抗関節炎薬；抗喘息薬；抗痙攣薬；抗鬱剤；抗ヒスタミン剤；抗炎症剤；制嘔吐剤；抗悪性腫瘍薬；鎮痒薬；抗精神病薬；解熱剤；鎮痙薬；循環器調製物（カルシウムチャンネルブロッカー、βブロッカー、βアゴニスト、および抗不整脈薬を含む）；降圧剤；利尿剤；血管拡張剤；中枢神経系刺激剤；咳および風邪調製物；消炎剤；診断薬；ホルモン；骨成長刺激剤および骨吸収阻害剤；免疫抑制剤；筋弛緩剤；覚醒剤；鎮痛剤；精神安定剤；タンパク質、ペプチドおよびそのフラグメント（天然に存在するか、化学的に合成されるか、または組換え的に産生される）；ならびに核酸分子（２つ以上のヌクレオチドの重合形態、二本鎖および一本鎖分子の両方を含むリボヌクレオチド（RNA）またはデオキシリボヌクレオチド（DNA）のいずれか、遺伝子構築物、発現ベクター、アンチセンス分子など）。上記の薬物または薬剤（単独または他の薬物または薬剤との組合せ）は、代表的には、薬学組成物として調製され、これらは、キャリア、ビヒクル、および／または賦形剤のような１つ以上の添加された物質を含み得る。「キャリア」、「ビヒクル」、および「賦形剤」は、一般的には、実質的に不活性な物質をいい、これらは無毒であり、そして有害な様式で組成物の他の成分と相互作用しない。これらの物質は、噴霧乾燥または凍結乾燥技術によって調製されるもののような特定の薬学組成物中の固体の量を増加させるために使用され得る。適切なキャリアの例としては、水、シリコン、ゼラチン、ワックスなどのような物質が挙げられる。通常使用される「賦形剤」の例としては、薬学的グレードのデキストロース、スクロース、ラクトース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、デキストラン、デンプン、セルロース、リン酸ナトリウムおよびリン酸カルシウム、硫酸カルシウム、クエン酸、酒石酸、グリシン、高分子量ポリエチレングリコール（PEG）、ならびにそれらの組合せが挙げられる。「遺伝子送達」は、外来DNAを宿主細胞に信頼的に挿入するための方法またはシステムをいう。このような方法は、組み込まれていない移入DNAの発現、移入レプリコン（例えば、エピソーム）の染色体外複製および発現、または宿主細胞のゲノムDNAへの移入遺伝物質の組み込みを生じ得る。「ベクター」によって、任意の遺伝的要素（例えば、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、染色体、ウイルス、ビリオンなど）が意味される。これらは、適切な制御エレメントと関連する場合に複製され得、そして細胞間で遺伝子配列を転移し得る。Ｂ．一般的な方法１つの実施態様において、本発明は、低密度の粒子状薬学調製物から高密度粒子を形成する手順を必要とする。特に、タンパク質またはペプチドのような繊細な分子から薬学粒子を調製するための製造プロセスは、中空球状または開口格子モノリス構造のいずれかを有する低密度粒子を一般に生じる。このような粒子は、針なしシリンジ送達システムにおける使用にあまり適切ではない。ここで、粒子は、音速の数倍への突然加速ならびに皮膚および組織との衝撃、ならびに皮膚および組織の通過を耐えるに十分な物理的強度を有さなければならない。薬剤、特に熱感受性生物薬学粒子を調製するための一般的な方法の１つは、凍結乾燥（冷凍-乾燥）である。凍結乾燥は、物質から水分を除去するための技術に関し、そして非常に低い温度での迅速な冷凍、およびそれに続く高真空での昇華による迅速な脱水を含む。この技術は、代表的には、開口マトリックス構造を有する低密度の多孔性粒子を生じる。このような粒子は化学的に安定であるが、水性環境に誘導される場合、迅速に再構築（分解および／または溶液への運搬）される。凍結乾燥粒子として入手可能な例示的な生物薬学は、以下を含む：組換 ch，S．San Francisco，CA）。繊細または熱感受性の生物粒子とともにしばしば使用される薬学粒子を調製するための別の方法は、噴霧乾燥である。噴霧乾燥は、ノズル、回転ディスク、または他のデバイスを用いる、１つ以上の固体の溶液の微粒化、およびそれに続く液滴からの溶媒の蒸発に関連する。より詳細には、噴霧乾燥は、高分散型液体薬学調製物（例えば、溶液、スラリー、エマルジョンなど）と適切な量の熱空気を組み合わせて、液状液滴の蒸発および乾燥を行うことを含む。噴霧乾燥した薬剤は、一般的には、頻繁に中空である同種の球状粒子として特徴づけられる。このような粒子は低い密度を有し、そして迅速な速度の溶解を示す。噴霧乾燥技術を用いて調製される例示的な熱感受性薬剤としては、以下が挙げられる：アミノ酸；オーレオマイシン、バシトラシン、ペニシリン、およびストレプトマイシンのような抗生物質；アスコルビン酸；カスカラ抽出物；ペプシンおよび類似の酵素；タンパク質加水分解物；ならびにチアミン。噴霧乾燥および凍結乾燥した薬学粒子が粉砕または製粉される場合、それらは、非常に小さくて軽い非高密度な粒子を生じ、これらは、皮膚または粘膜組織を通しての送達にはあまり適切ではない。特に、このような粒子は、針なしシリンジから送達される場合、しばしば軽すぎて、インタクトな皮膚を貫通する（例えば、角質層を通過する）のに必要な運動量を有さず、従って、全身性循環に浸透できない。この点において、角質層は、高密度に封入された高ケラチン化細胞の薄い層であり、一般的には、約10〜15μｍの厚さであり、そしてヒト身体のほとんどを覆っている。従って、角質層は、経皮送達された粒子が通過せねばならない一次皮膚障壁を提供する。従って、本発明の方法は、そのような調製物を高密度化して、針なしシリンジからの送達のためにずっとより良好に適した粒子（例えば、約50μｍのサイズおよび少なくとも約0.8〜1.5g/cc³の密度を有する実質的に固体の粒子）を提供することを伴う。特に、噴霧乾燥または凍結乾燥により提供される開放格子（open lattice）または中空シェル粒子は、加熱または剪断なしに濃縮されて、密な物質を提供し、これは粉砕され得るか、またはそうでなければサイズ減少され得、針なし注射による送達のために適切なサイズおよび密度の両方の特徴を有する薬学的粒子を生じ得る。噴霧乾燥または凍結乾燥された粉体の濃縮は、適切な圧力での圧縮により実施される（例えば、油圧プレス、錠剤化プレス、またはロータリープレス）。ここで、粉体は、約1,000〜24,000ポンド／平方インチ（0.5〜12トン／平方インチ）で、適切な時間圧縮される。圧縮は、所望であれば、真空下で実施され得る。次いで、得られる圧縮された物質は、可視的に破砕されるまで粗く再粉砕される。次いで、粒子サイズは、約20〜50μｍの平均サイズまで減少されて、ほぼ0.8〜1 .5g/cc³の密度を生じる。粒子サイズの減少は、以下を含むがそれらに限定されない当該分野において周知の方法を使用して実施され得る：ローラーミル、ボールミル、ハンマーミルもしくは衝撃ミル、アトリションミル、ふるい分け、超音波処理、またはその組み合わせ。圧縮パラメーターおよび粒子サイズ分けは、当然、使用される出発物質、所望される標的粒子のサイズおよび密度などの考慮に依存して変動する。出発物質は、針なしシリンジにおける使用のためにより最適なサイズおよび密度特徴を得るために変化させることが所望される粒子サイズおよび密度を有する、任意の薬学的調製物であり得る。実際の粒子密度、または「絶対密度」は、ヘリウム比重びん法などのような公知の定量技術を使用して容易に確認され得る。あるいは、包絡密度（envelope d ensity）測定が、粒子薬学的組成物の適切な高密度化を評価するために使用され得る。包絡密度情報は、不規則なサイズおよび形状の多孔性物体の密度の特徴付けにおいて有用である。包絡密度、または「かさ密度」は、その体積で割られた物体の質量である。ここで体積は、その細孔および小空隙の体積を含む。ろう浸透（wax immersion）、水銀押しのけ量（mercury displacement）、吸水、およびみかけ比重技術を含む、包絡密度を決定する多数の方法が、当該分野において公知である。多数の適切なデバイスもまた包絡密度を決定するために利用可能である（例えば、Micromeritics Instrument Corpから入手可能であるGeoPyc^TMMod el 1360）。サンプル薬学的組成物の絶対密度と包絡密度との間の差は、サンプルの％総多孔度および比細孔容積についての情報を提供する。本発明の実施において、多孔性粒子薬学的組成物の圧縮は、一般に、多孔性の減少、および付随する包絡密度の増加を生じる。従って、この方法は、約0.1〜約250μｍ、好ましくは約0.1〜約150μｍ、および最も好ましくは約20〜約60μｍの範囲のサイズ；ならびに約0.1〜約25g/cm³、好ましくは約0.5〜約3.0g/cm³、および最も好ましくは約0.8〜約1.5g/cm³の範囲の粒子密度を有する粒子を得るために使用され得る。上記の方法はまた、上記の範囲内に入る粒子サイズおよび密度特徴を有する粒子薬学的組成物の密度および粒子サイズを最適化するために使用され得る。この方法において、最適化された粒子が、針なしシリンジを使用して、超音波速度で送達される場合に得られる浸透深度は、標的化された皮内送達（例えば、粒子サイズおよび密度は、約１mm未満の浸透のために最適化される）または皮下送達（例えば、粒子サイズおよび密度は、約１〜２mmの浸透のために最適化される）を提供するように調整され得る。しかし、本明細書中上記で示したように、本発明は、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、および他のそのような生物学的分子の熱感受性生物薬学的調製物から、最適化された密度を有する高密度化された粒子を調製するために、特に適している。本発明の方法を使用して高密度化され得る例示的なペプチドおよびタンパク質処方物は、限定なしに、以下を含む：インスリン；カルシトニン；オクトレオチド；エンドルフィン；リプレシン（liprecin）；下垂体ホルモン（例えば、ヒト成長ホルモンおよび組換えヒト成長ホルモン（hGHおよびrhGH）、HMG、酢酸デスモプレシンなど）；濾胞ルテオイド（follicle luteoid）；増殖因子（例えば、増殖因子放出因子（GFRF）、ソマトスタチン、ソマトトロピン、および血小板由来因子）；アスパラギナーゼ；絨毛性生殖刺激ホルモン；コルチコトロピン（ACTH）；エリトロポエチン（EPO）；エポプロステノール（血小板凝集阻害因子）；グルカゴン；インターフェロン；インターロイキン；メノトロピン（尿性卵胞性刺激ホルモン、濾胞刺激ホルモン（FSH）、および黄体形成ホルモン（LH））；オキシトシン；ストレプトキナーゼ；組織プラスミノーゲンアクチベーター（TPA）；ウロキナーゼ；バソプレシン；デスモプレシン；ACTHアナログ；アンギオテンシンIIアンタゴニスト；抗利尿ホルモンアゴニスト；ブラジキニンアンタゴニスト；CD4分子；抗体分子および抗体フラグメント（例えば、Fab、 Fab₂、Fv、およびsFv分子）；IGF-1；神経栄養因子；コロニー刺激因子；副甲状腺ホルモンおよびアゴニスト；副甲状腺ホルモンアンタゴニスト；プロスタグランジンアンタゴニスト；プロテインＣ；プロテインＳ；レニンインヒビター；血栓溶解因子（thrombolytic）；腫瘍壊死因子（TNF）；ワクチン（特にペプチドワクチン（サブユニットおよび合成ペプチド調製物を含む））；バソプレシンアンタゴニストアナログ；およびα-1抗トリプシン。さらに、後の遺伝子送達における使用のためのベクターまたは遺伝子構築物の高密度でない調製物もまた、本発明の方法を使用する高密度化のために特に良好に適している。Ｃ．実験以下は、本発明を実施するための特定の実施態様の例である。実施例は例示的目的のためのみに提供され、そしていかにしても本発明の範囲を限定することは意図されない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関して正確さを確実にするために努力がなされているが、いくらかの実験誤差および偏差は、当然許容されるべきである。実施例１組換えヒト成長ホルモン（rhGH）の高密度化 NJから入手可能である）を入手し、そして本発明の方法を使用して再処理した。詳細には、約30mgのGenotropinを、Carver Laboratory Pellet Press（Model 36 20、Carver，Inc.，Wabash，INから入手可能である）を使用して、加圧下で圧縮した。圧縮の圧力は15,000lbs/in²であり、これを約45秒間かけた。ペレットを得、これを可視的に破砕されるまで乳鉢および乳棒を使用して粉砕した。次いで、得られた減少されたペレットを、53μｍふるい（Endecott，London）を使用してふるい分けした。53μｍより大きなサイズを有する粒子を選択し、そしてその適切な用量を、針なしシリンジからの送達のために、薬物カセット中に量り取った。実施例２ rhGH 粒子の浸透の視覚的評価凍結乾燥した組換えヒト成長ホルモン（rhGH）粉体、および実施例１に記載のように調製した高密度化rhGH粒子を、針なしシリンジを用いてブタ被験体に投与した。粒子の浸透の程度を、以下のように視覚的に確認した。の用量に秤量し、そして送達のために針なしシリンジデバイスに充填した。高密子を送達のための針なしシリンジデバイスに充填した。ブタ被験体を、後躯の十分な領域を刈り込むことによって準備した。凍結乾燥粉体および高密度化粒子を、高速でブタの皮膚に送達した。並べて比較すると、皮膚の表面に残存する高密度化粒子は実質的に観察されなかったが、皮膚の表面に豊富に残存する凍結乾燥粉体の目に見える存在によって明らかであるように、より多い割合の高密度化粒子が皮膚に浸透したことが観察された。実施例３経皮送達されたrhGHの血清レベル高密度化rhGHが針なしシリンジシステムを使用して送達される効率を決定するために、以下の研究を行った。５匹の健常なニュージーランド白ウサギの３つの群を、針なしシリンジによる凍結乾燥した組換えヒト成長ホルモン粉体（rhGH）または高密度化rhGHの送達のために十分な領域を露呈させるために、脇腹の領域から毛皮を刈り取ることによって準備した。緩衝液（例えば、滅菌のリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)）中で再構成して、20I 量を採集し、そして１mLの緩衝液と穏やかに混合して10IU/mLの濃度を有する注射溶液を提供した。第１群の各動物に、0.1mL/kgの注射溶液を皮下注射によって与え、そして投与後の注射溶液の漏れがないことを確認するために、注射部位を観察した。静脈血サンプルを、投与後、０、30分、１、２、４、６、12、および24時間で各動物の右耳の周辺耳静脈から採取した。rhGHの血清レベルを、標識した抗rhGH抗体を用いるイムノアッセイを使用して確認した。各時点で第１群の動物中に見出される乾燥した粉体を、針なし注射によって高速で第２群の各動物に投与した。静脈血サンプルを、投与後、０、30分、１、２、４、６、12、および24時間で各動物の右耳の周辺耳静脈から採取した。投与したrhGHの血清レベルを、標識した抗hGH 抗体を用いるイムノアッセイを使用して確認した。各時点で第２群の動物中に見ベルを、図１に示す。しシリンジに充填した。高密度化粒子を、針なし注射によって高速で第３群の各動物に投与した。静脈血サンプルを、投与後、０、30分、１、２、４、６、12、および24時間で各動物の右耳の周辺耳静脈から採取した。投与したrhGHの血清レベルを、標識した抗rhGH抗体を用いるイムノアッセイを使用して確認した。各時（■）の平均の血清レベルを、図１に示す。られた。実施例４ rhGH の針なしシリンジ送達のための最適条件の決定針なしシリンジ送達システムを用いるrhGHの送達のための最適条件を決定するために、以下の研究を行う。８匹の健常なニュージーランド白ウサギ（２±0.25 kg）の１つの群を、針なしシリンジでの皮下（SC）または静脈内（IV）注射による凍結乾燥した組換えヒト成長ホルモン粉体（rhGH）または高密度化rhGHの送達のために十分な領域を露呈させるために、脇腹の領域から毛を刈り取って準備す研究を通じて一週間の基準で体重測定する。統計学的に有意なデータを得るために、動物を１つの大きな群のままにする。乾燥粉体を穏やかに製粉し、そしてガラス製のバイアルに入れる。製粉した凍結乾燥粉体を、個別の用量に秤量し、そして約0.8mg粉体/kgで針なしシリンジデバイスに充填する。注射を、研究の第１週に行い、そして複数の静脈血サンプル（１mLの全血）を、投与後、０、30分、１、２、４、６、12、24、および48時間で各動物の周辺耳静脈から採取する。動物を、全ての時点で、適宜入手可能な食物および水とともに、個々に収容する。血液サンプルを、以下のように取り扱い、そして処理する：各静脈血サンプルを室温で約30分間凝血させ、次いでさらに30分間約４℃で放置する。凝血したサンプルを10分間遠心分離し、そして血清を吸引して分析のために−20℃で保存する。研究の第２週（最初の針なし注射の約１週間後）に、動物に以下のように調製を提供する。シリンジによって１mLの投与量を採集し、そして１mLの緩衝液と穏やかに混合して10IU/mLの濃度を有する注射溶液を提供する。各動物に、左耳に0 .1mL/kgの溶液のIV注射を与える。 IV注射後、複数の静脈血サンプルを、注射後、０、５、10、30分、１、２、４、６、および12時間で右耳の周辺耳静脈から採取する。調製した）を皮下注射によって投与する。投与後の漏れがないことを確認するために、注射部位を観察する。SC注射後、複数の静脈血サンプルを、投与後、０、 30分、１、２、４、６、12、24、および48時間で右耳の周辺耳静脈から採取する。載のように調製した）を、針なしシリンジを使用して各動物に投与し、そして複数の静脈血サンプルを、投与後、０、30分、１、２、４、６、12、24および48時間で右耳の周辺耳静脈から採取する。血清rhGHレベルを以前に記載したように決定し、そして薬物動態学的な変動ジでの投与が、投与した薬物のインビボの治療的レベルの達成および維持を生じることが予想される。実施例５成長ホルモン欠乏ラットにインビボで送達される高密度化rhGHの生物活性。本発明の方法を用いて高密度化されている組換えヒト成長ホルモンの生物活性を評価するために、以下の研究を行う。ドワーフまたは下垂体切除した（成長ホルモン欠乏）ラットに高密度化したGe 有する薬学調製物を、日周の皮下（SC）注射によって動物/週あたり約４IU rhGH で投薬する。詳細には、５日間続けて、動物被験体の腹膜領域の毛皮を、SC注射による高密度化rhGH、凍結乾燥rhGH、またはプラセボの投与の前に刈り込む。体重、および所望であれば、骨のサイズおよび長さを、日周基準でモニターする。高密度化されたrhGH粒子処方物の生物活性を、時間経過に伴う体重変化を測定することによって決定する。高密度化されたrhGH粒子処方物が十分な生物活性を保持することが予想される。実施例６一般に使用される賦形剤の高密度化薬学等級のマンニトールおよびラクトースの細かく粉砕された粉体を入手し、そして本発明の方法を用いて再処理する。詳細には、約30〜50mgのマンニトールまたはラクトースを、Carver Laboratory Pellet Press(Model 3620、Carver，I nc.，Wabash，INから入手可能)を用いて圧力下で圧縮した。圧縮の圧力は10,000 lbs/in²であり、これを約30秒間適用した。生じた圧縮化ペレットを、見た目に崩壊するまで、乳鉢および乳棒を用いて粉砕し、次いで実施例１に記載の方法を用いて、約50μｍよりも大きなサイズを有する粒子を選択するために篩い分けた。マンニトールおよびラクトース調製物の両方において、圧縮化粒子を非高密度化出発物質の同様の重量に対して比較した場合に、有意なサイズの減少を観察した。実施例７高密度化賦形剤の定量化薬学等級のトレハロースおよびマンニトール賦形剤を入手し、そして本発明の方法に従って再処理した。両方の賦形剤調製物を、いくつかの異なる方法で処理し、そして生じた調製物の絶対密度、包絡密度、および平均粒子サイズを以下のように測定した。トレハロース45H3830（Sigma）およびマンニトールK91698380-703（Merck）を、篩い分けるか、または凍結乾燥させ、圧縮し、粉砕し、次いで篩い分けるかのいずれかを行った。次いで、生じた一連の調製物を、粒子サイズおよび密度測定について分析した。各々の糖賦形剤の一部を篩い分けして、減少したサイズを有する調製物を得た。篩い分けを、３つの篩サイズ（75μｍ、53μｍおよび38μｍ）を用いて、さらなる処理を伴うことなく３mm振幅で二時間、ステンレススチール篩を用いて行った。あるいは、各々の糖賦形剤の一部を、以下のように本発明の方法を用いて処理した。40gの各々の糖を、水に溶解させ、瞬間冷凍し、次いで一晩凍結乾燥させた。各々の凍結乾燥調製物のサンプルを保持し、そして残りを13mm圧縮打ち型(d ie)においてディスクに圧縮した(15,000lbs/インチ²で45秒間)。マンニトールディスクを、乳鉢および乳棒を用いて粉砕し、次いで３つの篩サイズを用いて、３ mm振幅で上記のように篩い分けた。トレハロースディスクを、最初に振動性ボールミル（Retsch mill）中で粉砕し、次いで乳鉢および乳棒を用いて粉砕し、上記のように篩い分けた。次いで、各々の上記の賦形剤調製物からのサンプルを、絶対および包絡密度について分析した。絶対密度をヘリウム比重分析計(pyconometry)を用いて、そして包絡密度をGeoPyc^TMModel 1360 Envelope Density Analyzer（Micromeritics Instrument Corp.）を用いて測定した。分析の結果を下記の表１に記載する。表１において理解され得るように、種々の処理法のいずれも粉体の賦形剤の絶対密度に有意な影響を有さなかった。さらに、予測されるように、非圧縮の凍結乾燥糖は、他の調製物よりも大いに低い包絡密度を有しており、そして同時により高い空隙率を有していた（測定値示さず）。トレハロースおよびマンニトールサンプルについての密度測定によって、本発明の方法（圧縮、製粉、篩い分け）が、凍結乾燥調製物および篩い分け調製物の両方と比較して包絡密度において有意な増大を導くことが明白に実証される。これらの結果により、本明細書中に記載の新規方法が、針なし注射技術を介する送達に適切である高密度化された粒子状薬学組成物を提供するために用いられ得ることが示される。従って、粒子状薬学組成物を高密度化する新規方法、およびそこから形成される高密度化薬学組成物が記載されている。本発明の好ましい実施態様は、ある程度詳細に記載されているが、明白な改変物が、付随される請求の範囲によって規定されるような本発明の精神および範囲から逸脱することなく作製され得ることが理解される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．高密度化粒子を粒子状薬学調製物から形成する方法であって、該調製物を圧縮して圧縮された薬学調製物を提供する工程、該圧縮された調製物を高密度化粒子にサイズ減少させる工程、および次いで針なし注入によるそれらの経皮送達に適切なサイズおよび密度の高密度化粒子を選択する工程、を包含する方法。２．前記適切なサイズが、約0.1〜250μｍ、好ましくは0.1〜150μｍ、そして最も好ましくは20〜60μｍの範囲である、請求項１に記載の方法。３．前記適切な密度が、約0.1〜25g/cm³、好ましくは約0.5〜3.0g/cm³、そして最も好ましくは約0.8〜1.5g/cm³の範囲である、請求項１または請求項２に記載の方法。４．前記粒子状薬学調製物が凍結乾燥された組成物または噴霧乾燥された組成物である、請求項１〜３のいずれか１つに記載の方法。５．前記圧縮が、１平方インチあたり約1,000〜24,000パウンドでプレス機において行われる、請求項１〜４のいずれか１つに記載の方法。６．前記圧縮が真空下で行われる、請求項５に記載の方法。７．前記圧縮が加熱または剪断をともなわずに行われる、請求項１〜６のいずれか１つに記載の方法。８．前記圧縮された物質のサイズ減少が、製粉および／または篩い分けによって行われる、請求項１〜７のいずれか１つに記載の方法。９．前記高密度化粒子のサイズ選択が、篩い分けを用いて行われる、請求項１〜８のいずれか１つに記載の方法。１０．凍結乾燥または噴霧乾燥された薬学調製物から形成された、高密度化された粒子状薬学組成物であって、該高密度化組成物が、約0.1〜250μｍ、好ましくは約0.1〜150μｍ、そして最も好ましくは約20〜60μｍの範囲の平均粒子サイズ、ならびに約0.1〜25g/cm³、好ましくは約0.5〜3.0g/cm³、そして最も好ましくは約0.8〜1.5g/cm³の範囲の密度を有する、高密度化された粒子状薬学組成物。１１．前記凍結乾燥または噴霧乾燥された薬学調製物が、熱感受性生物薬学調製物である、請求項１０に記載の組成物。