JP2000512752A - 血清および血漿検体中の干渉体測定機器用較正材料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 血清または血漿検体中の干渉体の検査に用いられる機器類の較正状態の監視または再較正に使用する品質管理材料。特に、血漿または血清試料中の溶血、混濁、ビリルビン血症およびビリルビン血症を個別あるいは二つ、三つまたは四つまとめて同時に評価する機器類の較正状態の監視または再較正に使用される品質管理材料。この品質管理材料は血漿脂質、胆汁色素あるいはヘモグロビン等の血液成分を一切含まず、室温で安定しており、四つまでの構成成分が使用が可能。

Description

【発明の詳細な説明】 血清および血漿検体中の干渉体測定機器用較正材料技術分野 本発明は溶液中の物質の濃度を分光測光法で測定する方法に関するものであり 、毎日の作業として機器精度を監視する際に用いられる品質管理（ＱＣ）材料に 関するものである。 このＱＣ材料はチューブ、ピペット先端に入れた試料または光線が通過可能な 材料を透過した近紫外線（NIR）および隣接可視光線を測定して、血清または血 漿検体について各種干渉体（interferents）の量を検査する機器類をモニターす るために用いられる。このＱＣ材料は較正材料（calibrators）として用いるこ ともできる。発明の背景 臨床研究では血清または血漿に対してテストがルーチンで行われている。通常 のアッセイでは遠心分離によって血漿から赤血球を分離したり、赤血球や各種血 漿タンパクを凝固によって血漿から分離した後に遠心分離する。ヘモグロビン（ Ｈｂ）、脂質粒子、胆汁色素のビリルビン（ＢＲ）、ビリベルジン（ＢＶ）等は 光散乱物質で、分光測光法および血液分析測定機器と干渉し、それに影響を与え る典型的な物質である。これらの物質は干渉体（interferents）とよばれ、分光 測光法で測定できる。これら干渉体の存在は血清または血漿に関する試験の実施 能力に影響を及ぼし、検体の統合性（integrity）を損なうこともある。実際に は目視検査に代わりに装置または機器を用いて血清、血漿中の干渉体を測定(検 体の統合性評価)する。この測定に使用いる機器に対しては干渉体は分析物と考 えることができる。この干渉体の濃度測定で得られた定量的結果は、一定の較正 アルゴリズムに基づいて記録されるので、較正機能は毎日監視しておく必要があ る。 機器類の較正機能、特に精度または再現性の監視で用いられる内部品質管理は 全ての臨床研究室で用いられる方法である。この方法は対象とする分析物に対し て安定した材料を毎日試験し、各分析物に対して目標値を設定する。所定波長で 問題の干渉体に似たスペクトル特性を持つ安定した材料に特定分析物の目標値が 指定できれば、その材料をＱＣ材料として使用することができる。また、目標値 からのずれが生じて、予め設定した規則、例えばウェストガード（Westgard）の 複数規則に従がわなくなった場合には較正の調節または再較正の必要性を表示し なければならない。一般に、ＱＣ材料は所定のアッセイのダイナミックレンジを カバーするように、低レベル、中レベルおよび高レベルで毎日試験される。予め 設定した規則に従っている限り、その分析物に対する較正アルゴリズムは有効と 考えることができる。 内部ＱＣの最も重要な点は精度（すなわち特定分析物の真の値（実際の濃度） との一致性）ではないので、ＱＣ材料中に分析物が正確な量で存在する必要はな いが、干渉体の濃度をＱＣ材料に割り当て、予測した割り当て値を用いて初期較 正アルゴリズムを調節することができる。 再較正の必要が示された時には一連の分析物濃度が割り当てられた３〜５つの ＱＣ試料（較正材料と考えられる）を用いて較正調節を行うことができる。再較 正は単純な方法ではなく、バイアス（biases）に関する初期較正の調節をするこ とになる。発明の開示 本発明は近紫外線および隣接可視光線を用いて干渉体の濃度を測定する分光測 光機器の較正状態（calibration）をモニターするための室温で長期間安定な較 正材料を提供する。この較正材料はバイアスの較正調節に使用することもでき、 これは再較正としても考えられる。 広義には、本発明は血清または血漿検体中の干渉体の検査に使用する機器の較 正状態を監視するための品質管理材料を提供する。別の観点からいうと、本発明 は溶血(hemolysis)、混濁(turbidity)、ビリルビン血症（bilirubinemia）お よびビリベルジン血症（biliverdinemia）用の機器の較正状態を（個別またはこ れらのいずれか二つ、三つあるいは四つ全部を同時に）監視するための品質管理 材料を提供する。本発明の較正材料は血漿脂質、胆汁色素、ヘモグロビン等の血 液成分を一切含んでおらず、室温で安定しており、四つまでの成分まで使用可能 である。 さらに別の観点からいうと、本発明は本発明の品質管理材料を用いた血清また は血漿検体中の干渉体検査に使用される機器の較正状態を監視する材料および方 法を提供する。 さらに別の観点からいうと、本発明は、ｘ軸上に各干渉体の指定値をプロット し、ｙ軸に当初の較正アルゴリズムに基づいた予測値をプロットして得られる線 形回帰方程式の傾きと切片とを用いることによってバイアスに関する較正状態を 調節する較正材料および方法を提供する。この手順はここでは再較正と考える。 さらに別の観点からいうと、本発明は490〜1085nm領域における選択された波 長で、ヘモグロビン、混濁、ビリルビンおよびビリベルジンの存在の組合せを擬 態するスペクトル吸光度を持つ安定した組成物となる物質を提供する。この物質 は四つまで組合せることができる。 本発明の一つの実施態様では、本発明はアマラント、二酸化チタン、メチルオ レンジおよび二塩酸ビリベルジンを含む組成物に関する。この組成物はｐＨを約 7.4に調節したリン酸塩緩衝塩中で製造されるのが好ましい。本発明の別の実施 態様では、二酸化チタンの代わりに市場で入手可能な脂質乳濁液、例えばイント ラリピド（Intralipid）ＴＭ（IL）を使用することができ、二塩酸ビリベルジン の代わりにメチレンブルーを用いることができる。リン酸緩衝塩類の代わりには 10ミリモル／リットルの炭酸水素ナトリウムを使用しなければならない。安定化 のために上記組成物をオートクレーブ処理で滅菌することができる。アマラント はヘモグロビンを擬態するため、二酸化チタンまたはＩＬは混濁を擬態するため 、メチルオレンジはビリルビンを擬態するため、またメチレンブルーはビリベル ジンを擬態するためにそれぞれ使用する。その他の染料を使用することも可能で あり、例えばヘモグロビンを擬態するためにフェノールレッドまたは塩基性フ クシンを使用することができ、ビリルビンを擬態するために酸性ｐＨのフェノー ルレッドまたはそれよりｐＨが若干高いアマラントを使用することができ、ビリ ベルジンを擬態するためにアズール、チオニンまたはトルイジンブルーをアマラ ントと組み合わせて用いることができる。また、混濁を擬態するための代替要素 として、較正アルゴリズムで使用する領域での「見かけ」吸光度に類似した吸光 度パターンを示す任意の物質を使用することができる。その一例は酸銅である。 混濁は「見かけ」吸光度増加の原因になる。見かけ吸光度は透過光が測定されて 吸光度単位に変換されることをベースにしており、散乱による光の損失と真の吸 光度とを機器は識別することができない。混濁によって波長に反比例する吸光度 が生じる場合もある。混濁は単一の波長すなわち800nm以上の領域での吸光度曲 線の傾きでモニターする。 本発明の好ましい態様では、本発明はｐＨ３〜４の１リットル酢酸塩緩衝液中 に100ミリモルのアマラント、フェノールレッド、硫酸銅およびトルイジンブル ーから構成される。ＢＲが低レベルの場合にはアマラントがＨｂおよびＢＲの両 方を擬態することができるので、フェノールレッドを省くことが可能である。同 じＱＣ材料ではｐＨがスペクトル吸光度に影響を及ぼすのでｐＨを一定に維持す ることが望ましい。従って、本発明のさらに他の観点では同じバッチのＱＣ材料 のｐＨは一定に維持される。図面の簡単な説明 図１は干渉体を表示した添加量で含む三つの異なる血清検体の吸光度スペクト ルを示すグラフ。 図２は干渉体を表示した予測濃度で含む三つの異なる混合物の品質管理材料の 吸光度スペクトルを示すグラフ。 図で用いられているｇ／Ｌはグラム／リットルを意味し、ｍｇ／ｄＬはミリグ ラム／デシリットルを意味する。好ましい態様の説明 溶血現象の基準としてＨｂを測定し、混濁度の基準としてＩＬ当量濃度、ＢＲ およびＢＶを測定するように設計された機器は一定時間毎に較正調節または再較 正する必要がある。本発明ではこれら機器の精度または再現性の較正状態の監視 手段としてｐＨ３〜４の１リットル酢酸塩緩衝液中に100ミリモルのアマラント 、フェノールレッド、硫酸銅およびトルイジンブルーから成る組成物を使用する ことができる。これら物質の濃度は分析物の指定値または目標値を決定する。 一定の安定した組成物になる限り、これら四つの物質を組み合わせた材料を使 用することができる。しかし、一定の安定した組成物が得られる限り、監視を行 う状況に応じて、上記物質のいずれかを単独で用いたり、その二つまたは三つを 組合せて用いることも可能であることは当業者に理解できよう。 ＱＣ材料はｐＨ３〜４の１リットル酢酸塩緩衝液中に100ミリモルのアマラン ト、フェノールレッド、硫酸銅およびトルイジンブルーの各原液を種種の量で組 合せて製造することができる。ｐＨが変わると分析物の指定値も変わる。原液の 濃度はＱＣ材料のロットを製造するために添加すべき原液量の指標として役立つ にすぎない。分析物の指定値または目標値は使用する機器に設定した較正アルゴ リズムを用いて干渉体の予測濃度を平均化して決定される。 長期貯蔵のために材料をオートクレーブで滅菌する場合には、滅菌後に目標値 を同じ濃度の「干渉体」のロットに対して指定しなければならない。長期貯蔵の ための別の手段としてアジ化ナトリウムを添加してもよい。ｐＨが３〜４前後の 本発明の実施態様では、細菌の繁殖を防ぐには酸性ｐＨで十分である。 チューブ、ピペット先端、その他類似の半透明材料に対してそれぞれ異なる較 正アルゴリズムを作成することができ、また、組み合せたチューブや各種半透明 材料に対するアルゴリズムを作成することができる。本明細書のＱＣ材料の試験 で使用した機器に設定した較正アルゴリズムは半透明ピペット先端での測定用に 作成されたものである。これらのアルゴリズムは下記の通りである：溶血アルゴリズム （ｇ/Ｌ）Ｈｂ＝30.14（591ｎｍ）−27.98（610ｎｍ） ここで（Ｗｎｍ）は特定波長での吸光度測定値の第１導関数である。混濁アルゴリズム ｇ/Ｌ IL＝296.01（900ｎｍ)−0.04 ここで、(Wnm)は、指定された波長での未処理の吸光度測定値である。ビリルビンアルゴリズム ｍｇ／ｄＬ ＢＲ＝142.09（511ｎｍ）＋89.9（554ｎｍ）−4.47 ここで、（Ｙｎｍ）は特定波長での吸光度測定値の第１導関数である。ビリベルジンアルゴリズム ｍｇ／ｄＬ ＢＶ＝160.29（716ｎｍ）−200.15（701ｎｍ）＋4.42 ここで、（Ｚｎｍ）は特定波長での吸光度測定値の第１導関数である。 上記較正アルゴリズムはスペクトルを該当レベルの四つの分析物または干渉体 と関係させるのに使用した単なる例に過ぎない。これらのアルゴリズムおよび各 試料の吸光度測定は四つの分析物のレベルを予測するのに用いた。干渉体を添加 した三つの異なる血清検体の試料スペクトルは図１に示してある。ＱＣ材料の三 つの異なる混合物の試料スペクトルは図２に示してある。このＱＣ試料中の干渉 体の予測濃度は図２に示してある。 図１および図２では、各血清検体は異なる溶血現象、混濁度および胆汁色素を 有し、ＱＣ検体は異なるレベルの干渉体を含む血清または血漿を擬態した。上記 説明は四つの物質を含むＱＣ材料に関するものであるが、このＱＣ材料を使用し て四つの干渉体のいずれか一つ、二つ、三つあるいは四つ全部についての較正状 態を同時に監視することもできる。 以上、本発明を好ましい実施態様を参照にして詳しく説明してきたが、本発明 の精神および範囲を逸脱することなく、形および詳細を変更できるということは 当業者には理解できよう。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．較正または再較正が必要な、ヘモグロビン、混濁、ビリルビンまたはビリベ ルジンの一つまたは複数を測定する機器で用いられる較正材料であって、 この較正材料はヘモグロビン、混濁、ビリルビンおよびビリベルジンをそれぞ れ擬態する一つまたは複数の物質で構成され、これら物質はそれを単独で使用し た場合でも二つ以上組合せて使用した場合でも安定な組成物となり、また、品質 管理にも使用できることを特徴とする較正材料。 ２． ｐＨが一定値に維持された請求項１に記載の較正材料。 ３． ヘモグロビンを擬態するのに使用される物質がアマラント、フェノールレ ッドおよび塩基性フクシンから成る群の中から選択される請求項１に記載の較正 材料。 ４． 混濁を擬態するのに使用される物質が二酸化チタン、硫酸銅およびイント ラリピドＴＭから成る群の中から選択される請求項１に記載の較正材料。 ５． ビリルビンを擬態するのに使用される物質がメチルオレンジ、アマラント およびフェノールレッドから成る群の中から選択される請求項１に記載の較正材 料。 ６． ビリベルジンを擬態するのに使用される物質がメチルブルー、アズール、 チオニン、およびトルイジンブルーから成る群の中から選択される請求項１に記 載の較正材料。 ７． ヘモグロビンを擬態するのに使用される物質がアマラント、フェノールレ ッドおよび塩基性フクシンから成る群の中から選択され、混濁を擬態するのに使 用される物質が二酸化チタン、硫酸銅およびイントラリピドＴＭから成る群の中 から選択され、ビリルビンを擬態するのに使用される物質がメチルオレンジ、ア マラントおよびフェノールレッドから成る群の中から選択され、ビリベルジンを 擬態するのに使用される物質がメチルブルー、アズール、チオニンおよびトルイ ジンブルーから成る群の中から選択される請求項１に記載の較正材料。 ８． ｐＨが一定値で維持された請求項７に記載の較正材料。 ９． 較正または再較正を必要とする、ヘモグロビン、混濁、ビリルビンまたは ビリベルジンの中の一つまたは複数を測定するための機器で使用される較正用材 料において、 ｐＨが３〜４である１リットルの酢酸塩緩衝液中に100ミリモルのアマラント 、フェノールレッド、硫酸銅およびトルイジンブルーから構成され、品質管理に も使用できることを特徴とする較正材料。 10． ビリルビンが低レベルである場合に、アマラントがヘモグロビンおよびビ リルビンの両方を擬態するために使用される請求項９に記載の較正材料。 11． 較正または再較正を必要とする、ヘモグロビン、混濁、ビリルビンまたは ビリベルジンの中の一つまたは複数を測定するための機器で使用する較正用材料 において、アマラント、イントラリピドＴＭおよびメチレンブルーあるいはアズ ール、チオニンまたはトルイジンブルーで構成され、品質管理にも使用できるこ とを特徴とする較正材料。 １２． ヘモグロビン、混濁、ビリルビンまたはビリベルジンの中の一つまたは 複数を測定するための機器の較正状態を監視する方法において、 ヘモグロビン、混濁、ビリルビンおよびビリベルジンをそれぞれ擬態する一つ または複数の異なる物質から構成される較正用材料を使用し、これら物質は単独 あるいは二つ以上を組合せて使用され、一定の安定した組成物となり、品質管理 にも使用できることを特徴とする方法。 20． ヘモグロビン、混濁、ビリルビンまたはビリベルジンの中の一つまたは複 数を測定するための機器の較正状態を監視する方法であって、ｐＨは３〜４であ る１リットルの酢酸塩緩衝液中に100ミリモルのアマラント、フェノールレッド 、硫酸銅およびトルイジンブルーから構成される較正用材料を使用し、この材料 が品質管理にも使用できることを特徴とする方法。 22． ヘモグロビン、混濁、ビリルビンまたはビリベルジンの中の一つまたは複 数を測定するための機器の較正状態を監視する方法であって、アマラント、イン トラリピドＴＭおよびメチレンブルーあるいはアズールもしくはチオニンまたは トルイジンブルーならびに炭酸水素ナトリウムから構成される較正用材料を使用 し、この材料が品質管理にも使用できることを特徴とする方法。 23． ヘモグロビン、混濁、ビリルビンもしくはビリベルジンの中の一つまたは 複数を測定するための機器を再較正する方法であって、ヘモグロビン、混濁、ビ リルビンおよびビリベルジンをそれぞれ擬態する一つまたは複数の異なる物質か ら構成される較正用材料を使用し、これら物質は単独の場合でも二つ以上を組合 せて使用した場合でも一定の安定した組成物となり、品質管理にも使用できるこ とを特徴とする方法。 31． ヘモグロビン、混濁、ビリルビンまたはビリベルジンの中の一つまたは複 数を測定するための機器を再較正する方法であって、ｐＨは３〜４である１リッ トルの酢酸塩緩衝液中に100ミリモルのアマラント、フェノールレッド、硫酸銅 およびトルイジンブルーから構成される較正用材料を使用し、この材料が品質管 理にも使用できることを特徴とする方法。 33． ヘモグロビン、混濁、ビリルビンまたはビリベルジンの中の一つまたは複 数を測定するための機器を再較正する方法であって、アマラント、イントラリピ ドＴＭおよびメチレンブルーまたはアズールもしくはチオニンまたはトルイジン ブルーならびに水素炭酸ナトリから構成される較正材料を使用し、この材料が品 質管理にも使用できることを特徴とする方法。