JP2000510121A - クラミジア・シッタチを含有するネコのワクチンおよびその作製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ネコにおけるクラミジア病の予防および治療のための不活化された非反応性のクラミジア・シッタチを含有するネコのワクチンに関する。

Description

【発明の詳細な説明】 クラミジア・シッタチを含有するネコのワクチンおよびその作製法 発明の背景 ネコ・クラミジア病は、ネコ・肺炎（ＦＰｎ）として知られるネコ類の共通の 結膜および呼吸器疾患である。この高い接触伝染病は、クシャミやせきを特徴と し、そして粘液膿の眼および鼻からの排出を伴う。あらゆる年令のネコが感受性 であり、そして死亡率は高くはないけれども、感染した子ネコや高令ネコは、ひ どい衰弱を起こすようになる。その顕著な感染性のために、ネコ・クラミジア病 は、ペットの病院、診療所およびネコの飼育、保護所（キャッテリー）における 重大な問題になっている。クラミジア・シッタチ(Chlamudia psittaci)による存 続性器路感染が、キャッテリーにおける繁殖失敗の原因であることが考えられて いる。 クラミジア・シッタチの改変された生（ｌｉｖｅ）の組成物による予防接種の 研究は、矛盾する結果を生み出した。Cello（Am．J．Vet．Med．Assoc．158:932 -938，1971）は、そのようなワクチンが、ネコの有意な防御を例証しないことを 示した。Shewen，et al．（Can．J．Comp．Vet．Res．44:244-251,1980）は、部 分的防御を提示したが、一方、Mckercher（Am．J．Vet．Res．13:557-561，1952 ）および他の研究者は、そのようなワクチンによるほとんど完全な防御を提示し た。しかしながら、予防接種されたネコは、生のクラミジア・シッタチを受けて いるので、若干のワクチンの生物体が、他のネコに伝播することができ、そして 復 帰が起きることが指摘された。 不活化クラミジア・ワクチンによる研究は、予防接種されたネコにおいて、混 同した結果と、許容できない局所的および全身的反応を引き起こした。４種の不 活化ワクチン標品および１種の市販の改変生ワクチンを用いて遂行されたチャレ ンジの研究により、不活化標品は、ネコのクラミジア感染に対して、事実上、防 御を与えなかったことが例証された（Shewen et al，Can．J．Comp．Med．44:24 4-251，1980）。不活化クラミジア・シッタチ・ワクチンは、Chu et al.によっ て記述された（米国特許第5,242,686号）。しかしながら、このワクチンは、精 製されてなく、そしてネコに投与された時に、許容できない局所反応を惹起した （COMPENDIUM）。 改変生クラミジア・ワクチンが、他の動物に伝播することができ、クラミジア ・シッタチの野生株と組み換えされ、そして毒性株に復帰することができるとい う知見、ならびに近年市販された不活化クラミジア・ワクチンが、無効力であっ たり、許容できない局所反応を惹起したりするという知見によって、有効な、非 反応性のクラミジア・ワクチンに対する必要性が生まれる。本発明の目的は、高 い抗原量(autigen mass)を用いることなく高い免疫原性をもつ不活化ネコ・クラ ミジア・ワクチン組成物を提供することである。本発明のその他の目的は、一価 標品としての、または他のネコの抗原との組み合わせ物における、非反応性で、 有効なワクチンの生産のための適切に精製されたクラミジア・シッタチの簡易な 製造法を提供することである。 本発明は、不活化された免疫学的に有効なクラミジア・シッタチであって、ク ラミジア・ワクチン中に微量（低抗原負荷または低抗原量）で組 み入れられ、そしてネコに投与された時、非反応性であるが高度に有効であるワ クチンを製造するために、それが増殖された細胞から純化される、クラミジア・ シッタチを開示する。そのようなワクチンでは、免疫学的に有効な、低い抗原量 の精製クラミジア・シッタチが、有効量のアジュバントおよびワクチンのための 薬剤学的に許容できるキャリヤーまたは賦形剤と組み合わされる。クラミジア・ シッタチの作製のための精製法は、バッファロー・グリーン・モンキー（Ｂｕｆ ｆａｌｏ Ｇｒｅｅｎ Ｍｏｎｋｅｙ）（ＢＧＭ）細胞株（ＡＴＣＣ ＮＯ． ）のような哺乳動物細胞系に接種するためのシード（ｓｅｅｄ）とし ての、卵黄物質を洗浄除去された卵黄嚢膜の使用、ならびにクラミジアによる細 胞破壊（細胞変性効果またはＣＰＥ）の終了後、不活化前にワクチン調製液から の細胞と細胞砕片の除去を含む、数段階を組み入れる。本発明の主要な要件の１ つは、クラミジア・シッタチの増殖のために使用される細胞株が、クラミジア・ シッタチによる感染７日内に、その生物体によって破壊される（クラミジアによ る感染７日内に少なくとも８０％ＣＰＥを示す）ということである。 図面の簡単な説明 図１は、臨床スコア（表１においてさらに報告される平均スコア／日）の群別 総括のグラフである：大量（Chu et al.によって示されたような５０〜１０００ μｇ／ｍｌ）のクラミジア・シッタチと同様に、ワクチンに作製された場合の微 量（５０μｇ／ｄｏｓｅ未満）のクラミジア・シッタチが、防御したことを示し ている。 発明の詳細な記述 本発明は、有効量のアジュバントとの組み合わせにおける微量の精製 され、不活化された免疫学的に有効量のクラミジア・シッタチ；および他のネコ の抗原と組み合わされていてもよいワクチンのための薬剤学的に許容できるキャ リヤーまたは賦形剤を含んでなる、ワクチン組成物を提供する。ネコに投与され た場合、本ワクチンは、非反応性であるが高度に有効である。 本明細書に使用される用語「免疫学的有効量」は、ネコが予防接種された後ク ラミジア・シッタチによる感染からネコを防御するための、ワクチンにおけるク ラミジア・シッタチの能力を指す。用語「微量」は、５０μｇ／用量未満である 、ワクチンに添加されたクラミジア・シッタチの量を指す。用語「精製される］ は、最終ワクチン中の卵黄物質の存在を除く工程を指す。これらの工程は、生理 食塩水によって卵黄物質を洗浄除去され、粉砕され、そしてリン酸バッファー生 理食塩水中に再懸濁された卵黄嚢膜による組織培養物を接種すること、クラミジ ア・シッタチによって破壊された細胞系を使用すること、そしてクラミジア・シ ッタチを不活化する前に、細胞と細胞砕片を除去することを含むが、それには限 定されない。 また、本発明は、卵黄嚢においてクラミジア・シッタチを培養し、該卵黄嚢か ら卵黄嚢膜を回収し、そしてマスターシードとしてそれを凍結し、該マスターシ ードか、または該マスターシードの継代物を、表面に増殖している高度に感受性 の細胞株において、少なくとも８０％の細胞株がクラミジア・シッタチによって 破壊されるまで培養し、該細胞株を随伴しているクラミジア・シッタチを含有し ている、破壊された感受性細胞株および培地を収穫し、クラミジア・シッタチか ら破壊された細胞系を除去し、クラミジア・シッタチを不活化し、そして不活化 されたク ラミジア・シッタチをアジュバントおよび生理学的に許容できるキャリヤーと混 合することを含んでなる、クラミジア感染に対するワクチン組成物の製造方法を 包含する。 クラミジア・シッタチは、明白な増殖（網様体（ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅ ｂｏ ｄｉｅｓ））型と感染（基本体（ｅｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｂｏｄｉｅｓ））型を 含む発生サイクルをもつ。クラミジアの増殖のために最も普通に使用される細胞 株（例えば、イヌ腎細胞、ＭｃＣｏｙ細胞およびＣＲＦＫ細胞）において増殖さ れた場合、この生物体は、細胞シートに対して完全なる細胞変性効果を及ぼさな い。このことは、生産設定において収穫の最適時間を決定するのを困難にする。 また、それは、低い免疫原性をもつクラミジア生物体を生産するので、細胞から 何度も収穫されるか、または収穫後高く濃縮される必要がある。ある場合（米国 特許第5,242,686号に記載）には、それらは、継代培養中に不活化されるに違い ない。これらの操作は、高い抗原負荷（５０〜１０００μｇ／用量を含有する高 抗原量）をもち、そして予防接種後ネコに反応性であるワクチンをもたらす。ク ラミジア・シッタチ生物体による感染に高度に感受性である細胞、例えばバッフ ァロー・グリーン・モンキー細胞株の感染は、細胞シートの完全な破壊をもたら し、その時には、培養中の感染性生物体の数は非常に高い。これらの生物体は、 濾過、遠心分離または限外濾過によって細胞および細胞砕片から容易に精製でき 、そして微量（＜５０μｇ／用量）の収穫精製されたクラミジア・シッタチが、 アジュバントおよび許容できる薬物キャリヤーを含有するワクチンに製剤化され た場合、免疫学的効果を発揮する。 本発明によれば、クラミジア・シッタチのＣｅｌｌｏ株のようなクラ ミジア分離株は、先ず、ニワトリの孵化卵の卵黄嚢膜において増殖された。クラ ミジア・シッタチ分離株は、ニワトリの孵化卵の卵黄嚢中に接種され、そして３ ７℃で５〜１０日間培養された。卵は、５日目から毎日、明かりに透かして生存 を確認した。卵の２５％が、死んだ日に、まだ生存している卵の卵黄嚢膜が収穫 され、リン酸バッファー食塩水で洗浄されて過剰の卵黄タンパク質が除去され、 そして無菌的に破砕されて破砕された膜がリン酸バッファー食塩水に再懸濁され た。この破砕され、再懸濁されたシード材料の１ｍｌづつが、−７０℃で凍結保 存された。このシードの５継代までが、同じ操作を用いて作製されて組織培養細 胞に接種するために有用な生産シードが調製された。 クラミジア・シッタチのワクチン抗原の生産は、最初に組織細胞培養物を調製 することから始められる。バッファロー・グリーン・モンキー細胞が、高濃度グ ルコースを含むダルベッコのＭＥＭ（ＤＭＥＭ／Ｈ）、５％ウシ胎児血清、１０ ｍＭ ＨＥＲＰＥＳバッファーおよびネオマイシン中で成長された。細胞が集密 になった時、それらは、ネオマイシンを含むＤＭＥＭ／Ｈ中でクラミジア・シッ タチによって感染された。クラミジア・シッタチは、低容量の培地とともに細胞 に吸着され、次いで、より多量のＤＭＥＭ／Ｈ培地が添加された。感染された細 胞は、３７℃で５〜７日間培養された。正常には、感染後６日目に、細胞シート の９０〜１００％が破壊された。この時点で、クラミジア・シッタチは、残って いる全細胞を取り除くために、容器を回転しながら収穫された（収穫液）。細胞 と細胞砕片は、５μ濾過または遠心分離によって収穫液から除去された。次に、 精製された収穫液は不活化された。不活化剤は、バイナリー（ｂｉｎａｒｙ）エ チレンイミン、ホルマリン、チメロサルお よびβ−プロピオラクトンを含むが、これらに限定されない。ｐＨは、中性に調 整され、精製収穫液は、リン酸バッファー食塩水への希釈によって、アジュバン トとともに製剤化するための免疫学的有効量に調整された。クラミジア・シッタ チの免疫学的有効量は、通常、５０μｇ／用量未満、好ましくは１０μｇ／用量 未満であった。いかなるアジュバントが使用されてもよい。本発明において使用 されるアジュバントの非限定的な例は、ポリマーおよびコポリマー、アクリル酸 ポリマーおよびコポえばヘキサデシルアミン、サポニン、Ｑｕｉｌ Ａ、水酸化アルミニウム、リン 酸アルミニウム、ペプチド、例えばムラミルジペプチド、油乳液、免疫調節因子 、例えばインターロイキンおよびインターフェロン、インターフェロン誘導物質 、エチレン無水マレイン酸コポリマー、例え （MVP Laboratories）である。上記いずれのアジュバントまたはアジュバント系 の混合物も使用できる。 上記アジュバントが、総ワクチン用量の０．０１％〜５０％ｖ／ｖの有効量で 作用することが発見された。好ましくは、アジュバント濃度は、 ０．１％〜０．５％で使用される。 また、本発明のワクチン組成物は、薬物学的に許容できるキャリヤーまたは賦 形剤を含有し、そして付加的なネコの抗原、例えばネコ鼻気管炎、ネコ白血病、 ネコ・カリシウイルスおよびネコ汎白血球減少症、ネコ免疫不全ウイルス、ネコ 感染性腹膜炎、トキソプラズマ・ゴンディイ （Toxoplasma gondii）および狂犬病に関する抗原を含んでもよい。 表１ 臨床スコアーの群別総括−平均スコアー／日 表２は、本発明により作製された、不活化ネコ鼻気管炎、ネコ・カリシウイル ス、ネコ汎白血球減少症ウイルス、ネコ白血病ウイルスおよびネコ・クラミジア ・シッタチを含有している多成分ワクチンが、有効であることを例証している。表２ ネコ・クラミジア・シッタチ、ネコ鼻気管炎、ネコ白血病、ネコ・カリシウイ ルスおよびネコ汎白血球減少症ウイルスを含有している５成分ネコ・ワクチンの 有効性試験の結果 Ｃ.Ｍ.＝累積平均スコアー ＡＶ.Ｍ.Ｓ.＝平均平均スコアー ’Ｔ’＝ワクチンの臨床スコアーと対照のスコアーとを比較する統計学的計算 （ワン−テイルド（ｏｎｅ−ｔａｉｌｅｄ）、Ｗｉｌｃｏｘｏｎの２サンプル試 験のＭａｎｎ Ｗｈｉｔｎｅｙ改良）（９ＣＦＲ１１５．１３０，１１３．１４ ９，１１３．１３１，１１５．１５０，ＳＡＭ３１０ ＡＮＤ ＳＡＭ３１１に よって定義される。≧３１の’Ｔ’は、防御に等しい。 本発明のさらなる実施態様として、ワクチン組成物は、例えばラクチド−グリ コリドコポリマーとともに製剤化された持続放出製剤、持続的放出をもたらす微 粒子として、および移植物として投与することができる。また、本発明は、前記 ワクチン組成物の免疫学的有効量を、ネコに投与することを含む、ネコにおける クラミジア感染防御のための方法を提供する。本発明の投与経路は、非経口的（ 皮下、筋肉内、腹腔内および皮内）または経口／経鼻的である。好適な投与経路 は、皮下および筋肉内である。治療の有効な方法は、ワクチン組成物を少なくと も約２回、各投与を約２〜約４週間隔で、好ましくは、約１４〜約３０日間隔で 投与することを含む。 以下に示される作業実施例は、本発明を具体的に説明することを意図し、その 範囲を限定するものではない。 実施例 例１ 一価のネコ・クラミジア・シッタチ バッファロー・グリーン・モンキー細胞の細胞保存株を融解し、ＤＭ ＥＭ／Ｈ＋５％ウシ胎児血清、１０ｍＭ ＨＥＲＰＥＳバッファーおよびネオマ イシン３０μｇ／ｍｌを含む成長培地に添加し、そして４００〜６００ｘｇで１ ０〜１５分間遠心した。遠心された細胞保存株を、新しい成長培地に懸濁し、回 転びん中に移した。回転びんを、３７℃で回転させながら細胞が集密になるまで 培養した。細胞の継代物は、生産目的のための所望の回転びん数が得られるまで 作製された。通常の生産ロットは、回転びん５０本から５００本まで変化する。 ＢＧＭ細胞の生産継代物回転びんが３〜５日経過し、少なくとも９５％集密にな った時点で、成長培地を除去し、そしてクラミジア・シッタチのシードを、感染 多重度（ＭＯＩ）０．０１〜０．１で添加した。クラミジアの増殖に使用された 培地は、ネオマイシン３０μｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ／Ｈであった。回転びんを 、クラミジアの吸着のために３６〜３８℃で１時間再培養し、次いで、培地２０ ０ｍｌを、さらに回転びんに添加した。３６〜３８℃における培養を、５〜７日 間か、またはＣＰＥが＞８０％になるまで継続した。回転びんの液を、残ってい る全細胞を表面から取り除くために、回転びんを振盪しながら収穫し、そして収 穫液を容器中に移した。収穫液を、５μポリプロピレンフィルターを通しての濾 過によって清澄化（精製）して、外来の細胞砕片を除去した。清澄液を、０．０ １Ｍバイナリーエチレンイミン（ＢＥＩ）を用いて、２〜８℃で７２時間不活化 した。不活化後、ＢＥＩをチオ硫酸ナトリウムにより最終濃度０．０２Ｍにおい て中和した。 精製、不活化したクラミジア・シッタチを、３種の異なる抗原レベル（３種の 異なる抗原量）に希釈した。試験される最高抗原量は、約１００μｇ／用量と等 価である１００μｌ／用量であり、試験される中間抗 原量は、約５０μｇ／用量と等価である５０μｌ／用量であったが、試験される 最低抗原量は、２５μｌ／用量または約２５μｇ／用量であった。全抗原量は、 リン酸バッファー食塩水で希釈して、各調製液とも０． ジュバントとして添加して、最終ワクチンを調製した。１ｍｌ用量のこれらのワ クチンを、血清学的陰性のネコ５匹の群に３週間間隔で投与した。最初の用量を 、０日目に投与し、そして２回目の用量を２１日目に投与した。年令と環境の一 致する血清学的陰性のネコ５匹の１群を、ワクチン接種せずに、非予防接種対照 として保った。すべてのネコに、２回目の用量による追加免疫後２〜８週目、毒 性クラミジア・シッタチを鼻内および眼内の両方にチャレンジさせた。すべての ネコは、体温、眼の排泄液、結膜炎、鼻浸出液、クシャミ、せき、呼吸困難、食 欲不良、脱水症および抑鬱を含む、クラミジア・シッタチ症の臨床徴候に関して 、２８日間毎日モニターされた。加重スコアリングシステムがデータを解析する ために使用された。病気のより重篤な徴候が、より高い数値を与えられた。全デ ータは４日間隔で統計的に解析され、表１に示される。 表１と図１に示された結果は、クラミジア・シッタチが、本発明により作製さ れた場合、２５μｇ／用量と同程度の少ない抗原量において有効であることを、 明らかに例証した。この低い抗原量のワクチンは、高い抗原量のワクチンと同等 の防御を付与したので、本発明による方法にしたがって作製された場合、２５μ ｇ／用量以下のレベルも、また防御するであろうと期待される。例２ 本発明の例１により作製された不活化ネコ・クラミジア・シッタチを、 ４種の他の不活化されたネコの抗原と混合して多成分ワクチンを作製し バントを添加した抗原用量１．２５ＥＬＩＳＡ相対力価単位／用量にお した１０^7.8ＴＣＩＤ₅₀／用量のネコ・カリシウイルスおよびＰＯＬＹ 血球減少症ウイルスと混合した。この５成分ワクチンを、ネコに導入した予防接 種／対抗試験において効力を試験した。実験の始めに、すべてのネコから、血清 および全血サンプル用に採血した。血清を、ネコ鼻気管炎、ネコ・カリシウイル スおよびネコ汎白血球減少症ウイルスタイターに対する抗体についてスクリーニ ングした。すべてのネコは、それらのウイルスについて１：２未満のタイターを もって開始した。ＦｅｌＶプロトコールにおいて使用されたネコは、ｐ２７抗原 に関して陰性であった。ネコ、１３〜１５週令の５群（ｎ＝７４）を、５成分ワ クチン１．０ｍｌを用いて予防接種し、３週後追加免疫した。ネコの約１／２は 、皮下に予防接種し、そして１／２は、筋肉内に予防接種した。 ８匹の予防接種（４匹皮下にそして４匹筋肉内に）したネコおよび１匹の対照 のネコを、予防接種後および追加免疫後、ネコ汎白血球減少症に対する血清学的 応答について評価した。１：８の血清学的応答は、この成分に関して防御されて いると考えられる。予防接種後結果は表２に示される。 １２匹の５成分で予防接種（６匹皮下にそして６匹筋肉内に）したネ コおよび４匹の予防接種しない対照のネコを、毒性のネコ鼻気管炎ウイルスによ りチャレンジさせた。喉の綿棒採取物および血液サンプルをチャレンジ前に採取 した。すべてのネコを、チャレンジ後の病気の徴候についてモニターした。臨床 疾病徴候および体温を記録し、そして表２に示した平均スコアーによって解析し た。効力は、予防接種区および対照区の間の臨床スコアーの統計学的に有意な差 によって例証される。 １２匹の５成分で予防接種（６匹皮下にそして６匹筋肉内に）したネコおよび ４匹の予防接種しない対照のネコを、毒性のネコ・カリシウイルスによりチャレ ンジさせた。喉の綿棒採取物および血液サンプルをチャレンジ後に採取した。さ らに、ネコを、体温および病気の臨床徴候についてモニターした。臨床徴候を記 録し、スコアーし、解析し、そして表２に示す。効力は、予防接種区および対照 区の間の臨床スコアーの統計学的に有意な差によって例証される。 ２０匹の５成分で予防接種（１０匹皮下にそして１０匹筋肉内に）したネコお よび１０匹の予防接種しない対照のネコを、毒性のネコ・クラミジア・シッタチ によりチャレンジさせ、そして例１に述べた臨床徴候についてモニターし、スコ アーした。効力は、予防接種区および対照区の平均スコアーの統計学的に有意な 差によって例証される。また、このチャレンジの総括結果が表２に示される。 ２２匹の５成分で予防接種（１１匹皮下にそして１１匹筋肉内に）したネコお よび９匹の予防接種しない対照のネコを、毒性のＦｅＬＶによりチャレンジさせ た。このチャレンジは、ネコを最初に免疫抑制処理し、そして続く２日間チャレ ンジすることを必要とする。ネコを、チャレンジ後３週〜１２週目から、間接免 疫蛍光法アッセイ（ＩＦＡ）を用いて 血液中のｐ２７抗原を検出することによってウイルス血症について検査した。防 御は、Shibley et al．（JAVMA 1991，199:1402-1406）記載のガイドラインを用 いて測定され、そして表２に示される。 本発明のネコ・クラミジア・シッタチを含有するこの多成分ワクチンのすべて ５成分が有効であったことが表２から証明される。また、クラミジア・シッタチ ・ワクチンまたはクラミジア・シッタチを含有する多成分ワクチンにおいて実施 されたこの研究における予防接種ネコまたは他の研究における予防接種ネコのい ずれも、本ワクチンに対する局所または全身反応を現さなかったことは、注目す べきである。低抗原量のクラミジア・シッタチが、この反応性を欠如するのが主 な理由であった。 本発明は、上記の特定の態様に関して記述されたが、当業者にとって明白な本 発明に属する種々の改変および変更が、次に示す請求の範囲によって定義される 本発明の範囲を形成し、またその範囲内に入るであろうことを認識すべきである 。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＨ，ＣＮ， ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｇ Ｅ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ， ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｐ Ｔ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ハルストロム，ジーン・エイ アメリカ合衆国カンザス州66202メリア ム・ハーデイ6636 (72)発明者 レイン，ジエニフアー・ケイ アメリカ合衆国カンザス州66216シヨーニ ー・ハスキンス5804 (72)発明者 ヘネシー，クリステイナ・ジエイ アメリカ合衆国ミズーリ州64152パークビ ル・ノースウエストブラフドライブ5215

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 微量のクラミジア・シッタチ(Chiamudia psittaci)を含有する、不活化 された免疫学的に有効な、非反応性のクラミジア・シッタチ・ワクチン。 ２． 微量のクラミジア・シッタチが５０μｇ／用量未満の量である、請求の 範囲１記載の不活化された免疫学的に有効な、非反応性のクラミジア・シッタチ ・ワクチン。 ３． さらに、クラミジア・シッタチ以外のネコの抗原を含有している、請求 の範囲１記載の不活化された免疫学的に有効な、非反応性のクラミジア・シッタ チ・ワクチン。 ４． 他のネコの抗原が、ネコ鼻気管炎、ネコ・カリシウイルス、ネコ白血病 ウイルス、トキソプラズマ・ゴンディイ(Toxopiasma gondii)、狂犬病、ネコ汎 白血球減少症ウイルス、ネコ免疫不全ウイルスおよびネコ感染性腹膜炎ウイルス からなる群から選ばれる、請求の範囲３記載の不活化された免疫学的に有効な、 非反応性のクラミジア・シッタチ・ワクチン。 ５． クラミジア感染に対するワクチンの製造方法であって、 ａ）卵黄嚢においてクラミジア・シッタチを培養し； ｂ）該卵黄嚢から卵黄嚢膜を収穫し、そしてマスターシードとしてその収穫物 を凍結し； ｃ）該マスターシードか、または該マスターシードの継代物を、表面に増殖し ている高度に感受性の細胞株において、少なくとも８０％の細胞株がクラミジア ・シッタチによって破壊されるまで培養し； ｄ）該細胞株を随伴しているクラミジア・シッタチを含有している、 破壊された感受性細胞株および培地を収穫し； ｅ）クラミジア・シッタチから破壊された細胞株を除去し； ｆ）クラミジア・シッタチを不活化し； ｇ）不活化されたクラミジア・シッタチをアジュバントおよび生理学的に許容 できるキャリヤーと混合すること： を含んでなる方法。 ６． 該高度に感受性の細胞株が、バッファロー・グリーン・モンキー（Ｂｕ ｆｆａｌｏ Ｇｒｅｅｎ Ｍｏｎｋｅｙ）細胞である、請求の範囲５の方法。 ７． 該不活化が、クラミジア・シッタチを不活化する有効量の不活化剤を、 その免疫原性をなお維持しながら添加することを含む、請求の範囲５の方法。 ８． 該不活化剤が、バイナリー（ｂｉｎａｒｙ）エチレンイミン、β−プロ ピオラクトン、ホルマリン、マーシオレート、チメロサル、グルタルアルデヒド および界面活性剤からなる群から選ばれる、請求の範囲７の方法。 ９． 該不活化剤がバイナリーエチレンイミンである、請求の範囲７の方法。 １０．アジュバントが、ポリマーおよびコポリマー、アクリル酸ポリ 界面活性剤、例えばヘキサデシルアミン、サポニン、Ｑｕｉｌ Ａ、水酸化アル ミニウム、リン酸アルミニウム、ペプチド、例えばムラミルジペプチド、油乳液 、免疫調節因子、例えばインターロイキンおよびインターフェロン、インターフ ェロン誘導物質、エチレン無水マレイン酸コ ポリマー、例えばＥＭＡ−３１，ＮＥＯＣＲＹＬ Ａ６４０およびＰＯ 囲５の方法。 １２．生理学的に許容できるキャリヤーが、リン酸バッファー食塩水、生理食 塩水および最少必須培地からなる群から選ばれる、請求の範囲５の方法。 １３．請求の範囲３の免疫学的に有効量のワクチンを、ネコに投与することを 含む、ネコにおけるクラミジア感染を防御する方法。 １４．請求の範囲５の免疫学的に有効量のワクチンを、ネコに投与することを 含む、ネコにおけるクラミジア感染を防御する方法。