JP2000504923A

JP2000504923A - ヒト子宮内膜特異的ステロイド結合因子▲ｉ▼、▲ｉｉ▼、および▲ｉｉｉ▼

Info

Publication number: JP2000504923A
Application number: JP09512228A
Authority: JP
Inventors: ニ，ジアン; ユ，ゴ―リエン; エル．ゲンツ，ライナー
Original assignee: ヒューマンジノームサイエンシーズ，インコーポレイテッド
Priority date: 1996-03-21
Filing date: 1996-03-21
Publication date: 2000-04-25

Abstract

(57)【要約】本発明は、hESF I、IIおよびIIIポリペプチド、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ポリペプチドを、特にポリヌクレオチドを発現させることにより産生するための方法、およびポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニストに関する。本発明はさらに、そのようなポリヌクレオチド、ポリペプチド、アゴニストおよびアンタゴニストを、一部、研究、診断および臨床技術に関する適用のために使用する方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】ヒト子宮内膜特異的ステロイド結合因子I、II、およびIII 本発明は、一部では、新たに同定されたポリヌクレオチドおよびポリペプチド；ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの変異体および誘導体;ポリヌクレオチドおよびポリペプチドならびにそれらの変異体および誘導体の作製のためのプロセス；ポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニスト；ならびにポリヌクレオチド、ポリペプチド、変異体、誘導体、アゴニストおよびアンタゴニストの使用に関する。特に、これらおよび他の関連において、本発明はヒト子宮内膜特異的ステロイド結合因子I、IIおよびIII（時々、本明細書中以下で「hESF I、IIおよびIII」という）のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する。発明の背景細胞および組織の調節は、ホルモンの作用を調節または仲介する全身のホルモンおよび因子のような自己分泌および傍分泌因子によって制御されている。局所的に発現される多くのペプチドは、咄乳動物系での特定の生物活性に影響し得、上皮の細胞の調節に大変重要である。これらの因子は、特にヒトにおいては十分に同定または特徴づけがなさてれいない。成人および胎児の両方で、肺や子宮の機能調節の役割を果たす２、３の因子が、ヒト以外の生物で同定されている。そのような因子の一つは、すなわちヒト、ラット、およびウサギCC10のような啼乳動物CC10である(Wolf，M.ら，Human Mol ecular Genetics ，1(6):371-378(1992))。Clara細胞１７kDaタンパク質とも呼ばれるClara細胞１０kDa分泌タンパク質（CC10）は、２つのジスルフィド結合により結合される、8.5kDaのモノマーからなるホモダイマーである(Umland，T.C．ら，J ．Mol．Biol.，224:441-448(1992))。それは、気管支の上皮の内層である肺C lara細胞の主要な分泌タンパク質である(Singh，G.およびKatyal，S.L.，J ．His tochem．Cytochem. ，32:49-54(1984))。このタンパク質の生理的役割についてはまだ完全に理解されてはいない。CC10は特にメチルスルホニル−ポリ塩化ビフェニル（PCB）と結合し(Nordlund，Moler，L.ら，J ．Biol．Chem.,265:12690-12693( 1990))、そしてホスホリパーゼA₂を阻害すること(Singh，G.ら，Biochem ．Bioph ys．Acta, 1039:348-355(1990))が報告されている。この数年間に、ラット(Katy al，S.L.ら，Prog ．Respir．Res.，25:29-35(1990);およびHagen，G.ら，Nuclei c Acids Res. ，18:2939-2946(1990))、およびヒト(Singh，G.ら，Biochem ．Biop hys．Acta, 950:329-337(1988))のCC10のcDNAの配列が報告されている。cDNAおよび由来のアミノ酸配列は、ラットのウテログロビンと著しい相同性を示す。(S ingh，G.ら，Biochem ．Biophys．Acta, 1039:348-355(1990);およびhagen,G.ら，Nucleic Acids Res.，18:2939-2946(1990)) CC10のように、ラットウテログロビンは、これらの３次元構造が周知である、共有結合的なホモダイマーである（Morize，I.ら，J ．Mol．Biol.，194:725-739 (1987)。ウサギでのウテログロビン発現は、着床前期間の子宮で最初に報告された(Beier，H.M.，Biochem ．Biophys．Acta，160:289-290(1968))。さらに最近では、このタンパク質は卵管(Kirchner，C.，Cell Tissue Res.，170:490-492(197 6))、雄の生殖器官(Beler，H.M.ら，Cell Tissue Res.，165:1-11(1975))、食道 (Noske，I.G.およびFeigelson，M.，Biol ．Reprod.，15:704-713(1976))、および肺(Noske,前出;およびTorkkeli，T.ら,Biochem ．Biophys Acta，544:578-592( 1978))でも検出された。インビトロでは、ウテログロビンのいくつかの異なった特性が述べられた。その発見からまもなく、ステロイドホルモンであるプロゲステロンがこのタンパク質により特異的に結合されることが示され得た(Beato，M.およびBaier，R.，Bio chem ．Biophys．Acta ，392:346-356(1975);およびBeato，M.ら，J ．Steroid Bio chem. ，8:725-730(1977))。それゆえ、ウサギウテログロビンは、子宮内膜でのプロゲステロン濃度を調節する、プロゲステロンの潜在的なキャリアーまたは捕捉剤であると信じられた(Atger，M.ら，J ．Steroid Biochem.，13:1157-1162(19 80))。また、それはポリ塩化ビフェニルの特定のメチルスルホニル代謝物に、プロゲステロンよりいっそう高い親和性で結合することが示された(Gillner，M.ら，J ．Steroid Biochem.，31:27-33(1988))。さらに、ウテログロビンはホスホリパーゼA₂を阻害することが見出された。これらの全ての特性と生理学的意義との関係についてはまだ理解されておらず、そして大部分が推論の事項として残っている。ラットCC10 mRNAの発現は、ラットウテログロビンのように、肺だけでなく、食道で発現し、その上エストロゲンおよびプロゲステロン処理した雌のラットの子宮(Hagen，G.1990前出)でも発現される。このことはラットCC10がラットウテログロビンのラットでの対応物であることを示唆する(一般にはWolf，M.ら，Hum an Molecular Genetics ，1(6):371-378(1992)を参照のこと)。ヒトCC10の発現は非腫瘍性のヒト肺で豊富であり、そしてそれは対応する細胞系列の腫瘍において著しく低いレベルで検出され得る(Broers，J.L.V.らLab ．In vest. ，66:337-346(1992);Linnoila，R.I.ら，Amer ．J．Clin．Pathol.，90:1-1 2(1988)。CC10のレベルはまた、血清および、喫煙者および肺ガン患者から得られた気管支肺胞の洗浄標本では、健常な非喫煙者からの標本と比べて有意に低かった(Bernard，A.ら，Europ ．Resp．J.，5:1231-1238(1992))。これらの知見は、CC10 mRNAの発現は、別個の肺区画で変化されるようになることを示唆し、そして肺ガンへの発達におけるCC10の役割と関係があり得る(Jen sen，S.M.ら，Int ．J．Cancer，58:629-637(1994)。 UGの生物学的特性のいくつかである、例えば卵割球(Mukherjee，A.B.,ら，Med .Hypotheses ，6:1043-1055(1980))および精巣上体精子(Mukherjee，D.C.ら,Scie nce(Wash ．D.C. )，219:89-991(1983))の抗原性のマスキング、インビトロでの単球および好中球の走化性および食食性の阻害(Schiffman，E.V.ら，Agents Actio ns Suppl. ，12:106-120(1983))、そしてADP-およびトロンビン誘導（しかしアラキドン酸誘導ではない）血小板凝集の阻害(Manjunath，R.ら，Biochem．Pharmac ol.，36:741-746(1987))は、少なくとも一部ではこのタンパク質のPLA₂活性の強力な阻害効果に起因し得る（Levin，S.W.ら，Life Sci.，38:1813-1819(1986)) 。UGモノマーのαヘリックス３のアミノ酸配列由来の９ペプチド（残基39-47）は、インタクトなタンパク質の全ての生物学的特性を有し、そしてそのPLA₂の阻害および抗炎症活性をになうUGの活性部位として同定された(Miele，L.,ら，Nat ure(Lond.) ，335:726-730(1988))。 CC10kD特異的転写物は、いくつかの非呼吸器系のヒト器官および組織に存在することが示された。ウサギUGに対する抗体を用いることによって、ヒト子宮内膜 (Kikukawa，T.ら，J ．Clin．Endocrinol．Metab.，67:315-321(1988))、前立腺( Manyak，M.J.ら，J ．Urol.，140:176-182(1988))、および気道(Dhanireddy，R. ら，Biochem ．Biophys．Res．Commun.，152:1447-1454(1988))のUG様免疫活性が述べられた。最近、ウサギUG(rUG)の対応物であるヒトウテログロビン(hUG)をコードする遺伝子のcDNA(Singh，G.ら，Biochem ．Biophys．Acta，950:329-337(1988))および 5'領域(Wolf，M.ら、Human Mol ．Genet.，1:371-378(1922))が特徴づけされた。ヒトUGまたはClara細胞10-kDタンパク質は、rUGと61.5%のアミノ酸配列同一性(S ingh，G.ら，Biochem ．Biophys．Acta，950:329-337(1988))、ラットUGと54.2% の類似性(Singh，G.ら，Biochem ．Biophys．Acta,1039:348-355(1990))、およびマウスUGと52.8%(Singh，G.ら，Exp ．Lung Res.，19:67-75(1993))を有する。このタンパク質は最初肺胞のClara細胞で発見されたが(Singh，G.ら，J ．Histoche m. ，36:73-80(1988))、rUGが発現されている細胞と同様に肺外の組織の多くでそれは検出され得る(Peri，A.ら，DNA Cell Biol.，5:495-503(1994))。そしてこの発現はプロゲステロンによって誘導される。hUGの生物学的特質のいくつかは、rUGと実質的に同一であることが明らかである(Mantile，G.らJ ．Biol．Chem. ，27:20343-20351(1993))。ウサギ子宮液中のUGは妊娠の３日目に最初に検出され得、そしてピークレベルには５日目に到達することが報告された(総説については、Miele，L.らEndocr.R ev.，8:474-490(1987)を参照のこと)。UGは、PLA₂活性の阻害によって、子宮平滑筋の収縮および運動性を促進する炎症誘発性の脂質メディエーターの生成を下方制御し得る。それゆえ、UGは妊娠期間での予宮筋の鎮静の維持を促進すると示唆される。哺乳動物Clara細胞の10kD分泌タンパク質およびラット前立腺ステロイド結合タンパク質のホモログであるタンパク質を、さらに単離および特徴づけすることが、当該分野で明らかに必要とされる。本発明の遺伝子と遺伝子産物は、ラット前立腺ステロイド結合タンパク質およびClara細胞10kD分泌タンパク質との相同性を示す。発明の要旨これらおよび他の目的のために、本発明の目的は、とりわけ図１、２および３ (配列番号2，4および6)に示されたアミノ酸配列と、ラット前立腺ステロイド結合タンパク質のような他のタンパク質の公知のアミノ酸配列との間の相同性により新規のhESF I、IIおよびIIIと同定されたポリペプチドを提供することである。本発明のさらなる目的は、さらに、hESF I、IIおよびIIIをコードするポリヌクレオチド、特に本明細書中でhESF I、IIおよびIIIと称されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供することである。本発明のこの局面の特に好ましい実施態様では、ポリヌクレオチドは、図１、２および３(配列番号2，4,および6)に示された配列の中の、ヒトhESF I、IIおよびIIIをコードする領域を含む。本発明のこの局面によれば、ATCC寄託番号97401(ESF I)，97402(ESF II),および97403(ESF III)に包含されるヒトcDNAにより発現される成熟ポリペプチドをコードする単離核酸分子を提供される。本発明のこの局面によれば、mRNA、cDNA、ゲノムDNAを含むヒトhESF I、IIおよびIIIをコードする単離核酸分子を提供し、本発明のこの局面のさらなる実施態様では、その生物学的、診断上、臨床上、または治療的に有用な変異体、アナログまたは誘導体、あるいは変異体、アナログおよび誘導体のフラグメントを含むそのフラグメントを提供する。本発明のこの局面の特に好ましい実施態様は、天然に存在するヒトhESF I、II およびIIIの対立遺伝子変異体である。本発明の目的はまた、炎症、喘息、鼻炎、嚢胞性繊維症、気道の疾患、悪性新生物、アトピーを処置および／または予防する、ホスホリパーゼA₂活性を阻害する、ポリ塩化ビフェニルと結合する、外来タンパク質の抗原性を減少させる、単球および好中球の走化性および貪食性を阻害する、血小板凝集を阻害する、ヒト子宮内のエイコサノイドのレベルを調節する、ならびに子宮内膜細胞の成長を制御するヒトhESF I、IIおよびIIIのポリペプチド、特にヒトhESF I、IIおよびIII を提供することである。本発明のこの局面によれば、本明細書中でヒト起源hESF I、IIおよびIIIと称される新規ポリペプチド、ならびにその生物学的、診断上、または治療上有用なフラグメント、変異体およびそれらの誘導体、フラグメントの変異体および誘導体、ならびに前述のアナログを提供する。本発明のこの局面の特に好ましい実施態様は、ヒトhESF I、IIおよびIII遺伝子の天然に存在する対立遺伝子によってコードされるヒトhESF I、IIおよびIII の変異体である。本発明の別の目的は、前述のポリペプチド、ポリペプチドフラグメント、変異体および誘導体、変異体および誘導体のフラグメント、ならびに前記のアナログを産生するためのプロセスを提供することである。本発明のこの局面の好ましい実施態様において、宿主内でヒトhESF I、IIおよびIIIを発現する状態下で、その中で発現し得るように組み込まれた外来性由来のヒトhESF I、IIまたはIIIをコードするポリヌクレオチドを有する宿主細胞を培養する工程、および次いで発現されたポリペプチドを回収する工程を含む、前述のhESF I、IIおよびIIIポリペプチドを産生するための方法を提供することである。本発明の別の目的によれば、とりわけ前述のポリペプチドおよびポリヌクレオチドを利用する、研究用、生物学的、臨床上および治療目的のための生産物、組成物、プロセスおよび方法を提供する。本発明の局面の特定の好ましい実施態様によれば、とりわけ以下のための産物、組成物および方法を提供する：このhESF I、IIおよびIIIポリペプチドまたはh ESF I、IIおよびIIIをコードするmRNAの決定による細胞内でのhESF I、IIおよび III発現の評価；本明細書中に開示されるhESF I、IIおよびIIIのポリペプチドまたはポリヌクレオチドに細胞を曝すことによるhESF I、IIおよびIIIの、インビトロ、エキソビボまたはインビボでの発現；hESF I、IIおよびIII遺伝子内での欠損のような遺伝的な変異および異常の分析；ならびにhESF I、IIおよびIIIの機能の増強またはhESF I、IIおよびIIIの機能喪失の改善のためのhESF I、IIおよびIIIポリペプチドまたはポリヌクレオチドの生物への投与。本発明のこのおよび他の局面の特定の好ましい実施態様によれば、ヒトhESF I 、IIおよびIII配列にハイブリダイズするプローブを提供する。本発明のこの局面の特定のさらに好ましい実施態様において、hESF I、IIおよびIIIポリペプチドに対する抗体を提供する。この関連の特定の特に好ましい実施態様では、抗体はヒトhESF I、IIおよびIIIに高度に選択的である。本発明の別の局面によれば、hESF I、IIおよびIIIのアゴニストを提供する。好ましいアゴニストは、hESF I、IIおよびIIIを模倣し、hESF I、IIおよびIII− 結合分子またはレセプター分子に結合し、そしてhESF I、IIおよびIII誘導性応答を誘発または増大させる分子である。好ましいアゴニストはまた、hESF I、II およびIIIポリペプチド、またはhESF I、IIおよびIII活性を有する他の修飾因子と相互作用し、その結果、hESF I、IIおよびIIIの効果を増強または増大させる分子である。本発明のなお別の局面によれば、hESF I、IIおよびIIIのアンタゴニストを提供する。好ましいアンタゴニストは、hESF I、IIおよびIIIレセプターまたは結合分子に結合するが、１つまたはそれ以上のhESF I、IIおよびIII誘導性応答は誘導しないように、hESF I、IIおよびIIIを模倣したもの、またはhESF I、IIおよびIIIの発現を阻害するものである。好ましいアンタゴニストはまた、hESF I 、IIおよびIIIの効果を阻害するようにhESF I、IIおよびIIIに結合あるいは相互作用する分子である。アゴニストおよびアンタゴニストはhESF I、IIおよびIIIポリペプチドの作用を模倣、増強または阻害するために使用され得る。それらは、例えば喘息の遺伝的な罹患性の処置および予防するために使用され得る。本発明のさらなる局面において、インビトロで細胞に、エキソビボで細胞に、およびインビボで細胞に、あるいは多細胞生物に投与するためのhESF I、IIまたはIIIのポリヌクレオチド、あるいはhESF I、IIまたはIIIのポリペプチドを含む組成物を提供する。本発明のこの局面の特定の特に好ましい実施態様では、組成物は宿主生物の疾患処置のために、hESF I、IIおよびIIIポリペプチドを発現する、hESF I、IIまたはIIIのポリヌクレオチドを含む。この関連で特に好ましいことは、異常な内因性の活性に関連する機能障害を処置するためのヒト患者内での発現である。本発明の他の目的、特徴、利点および局面は、後の説明から当業者に明らかになる。しかし、後の説明および特定の実施例は、本発明の好ましい実施態様を示し、例示のみを与えることが理解されるべきである。開示された本発明の精神および範囲内での種々の変更および改正は、後の説明を読むことによって、および本開示の他の部分を読むことによって、当業者に容易に明らかになる。図面の簡単な説明以下の図面は、本発明の特定の実施態様を表す。これらは単なる例示であって、本明細書中で開示されない限り、本発明を制限しない。図１は、ヒトhESF Iのヌクレオチドおよび推定アミノ酸配列を示す。図２は、ヒトhESF IIのヌクレオチドおよび推定アミノ酸配列を示す。図３は、ヒトhESF IIIのヌクレオチドおよび推定アミノ酸配列を示す。図４は、hESF Iおよびラット前立腺ステロイド結合タンパク質ポリペプチド( 配列番号25)のアミノ酸配列での類似性の領域を示す。図５は、hESF IIおよびラット前立腺ステロイド結合タンパク質ポリペプチド( 配列番号26)のアミノ酸配列間の類似性の領域を示す。図６は、hESF IIIおよびラット前立腺ステロイド結合タンパク質ポリペプチド (配列番号27)のアミノ酸配列での類似性の領域を示す。図７は、示された技術によって推定されたhESF Iの構造的および機能的特徴を、アミノ酸配列の機能として示す。図８は、示された技術によって推定されたhESF IIの構造的および機能的特徴を、アミノ酸配列の機能として示す。図９は、示された技術によって推定されたhESF IIIの構造的および機能的特徴を、アミノ酸配列の機能として示す。用語解説以下の例証的な説明は、本明細書中、特に実施例中で頻繁に用いられる特定の用語についての理解を容易にするために提供される。説明は便宜的に提供され、そして本発明を限定しない。 DNAの消化は、DNA中の特定の配列のみに作用する制限酵素でのDNAの触媒的切断をいう。本明細書中で言及される種々の制限酵素は市販されており、そしてそれらの反応条件、補因子、および使用のための他の必要物は公知であり、当業者にとって日常的なものである。分析的な目的のためには、代表的には、１μgのプラスミドまたはDNAフラグメントが、約20μlの反応緩衝液中で、約２ユニットの酵素で消化される。プラスミド構築のためにDNAフラグメントを単離する目的のために、代表的には、５〜5 0μｇのDNAが、比例してより多い容量中で、20〜250ユニットの酵素で消化される。特定の制限酵素についての適切な緩衝液および基質量は、下記に参考されるような標準的な研究室のマニュアルに記載されており、そしてそれらは商業的供給者によって明記されている。 37℃で約１時間のインキュベーション時間が通常使用されているが、条件は標準的な手順、供給者の使用説明書、および反応の特質に従って変動し得る。消化後、反応物は分析され得、そしてフラグメントは、当業者に慣用的な周知の方法を使用して、アガロースまたはポリアクリルアミドゲルを通しての電気泳動により精製され得る。遺伝子エレメントは、一般に、ポリペプチドをコードする領域、または転写もしくは翻訳もしくは宿主細胞におけるポリペプチドの発現に重要なその他のプロセスを調節する領域を含むポリヌクレオチド、あるいはポリペプチドをコードする領域および発現を調節するそれに作動可能に連結した領域の両方を含むポリヌクレオチドを意味する。遺伝子エレメントは、エピソーム因子として、すなわち宿主細胞ゲノムとは物理的に独立した分子として複製するベクター内に含まれ得る。それらは、真核生物細胞におけるメトトレキセート選択によるトランスフェクトされたDNAの増幅中に生じるようなミニ染色体中に含まれ得る。遺伝子エレメントはまた、それらの天然の状態ではなく、むしろ、とりわけ、単離、クローニング、および精製されたDNAの形態での、またはベクター中での、宿主細胞への導入のような操作後に、宿主細胞ゲノム中に含まれ得る。単離されたは、天然の状態から「人の手によって」変化させられたこと、すなわち、もしそれが天然に生じれば、それはその本来の環境から変化もしくは除去、またはその両方されていることを意味する。例えば、天然に生じるポリヌクレオチド、またはそれの天然の状態で生存する動物中に天然に存在するポリペプチドは「単離」されていないが、その天然の状態で共存している物質から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、この用語が本明細書中において使用されるように、「単離」されている。例えば、ポリヌクレオチドに関しては、用語、単離されたは、それが天然に生じる染色体および細胞から分離されていることを意味する。単離の一部としてまたは単離の後に、そのようなポリヌクレオチドは、例えば、突然変異誘発のために、融合タンパク質を形成するために、または宿主細胞における増殖または発現のために、別のポリヌクレオチド（例えば、DNA）に連結され得る。単離されたポリヌクレオチドは、単独でまたはベクターのような他のポリヌクレオチドと連結されて、培養物中のまたは全体の生物中の宿主細胞へ導入され得る。培養物中のまたは全体の生物中の宿主細胞へ導入されて、そのようなDNAは、本明細書中でその用語が使用されるように、なお単離されている。なぜなら、それらはそれらが天然に生じる形態または環境にはないからである。同様に、ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、例えば培地の組成物、例えば細胞にポリヌクレオチドまたはポリペプチドを導入するための溶液、化学的または酵素的反応のための組成物または溶液（これらは天然に生じる組成物ではない）のような組成物中に生じ得、そしてそこにおいて、本明細書中で使用されているようなその用語の意味内の、単離されたポリヌクレオチドまたはポリペプチドのままである。連結は、２つ以上のポリヌクレオチド（これは大体は２本鎖DNAである）間に、ホスホジエステル結合を形成させるプロセスのことをいう。連結のための技術は当該分野に周知であり、そして連結のためのプロトコルは、例えば、Sambrook ら、MOLECULAR CLONING，A LABORATORY MANUAL，第２版；Cold Spring Harbor L aboratory Press，Cold Spring Harbor，New York(1989)および下記に引用するM aniatisら、146頁のような標準的な研究室マニュアルおよび参考文献に記載されている。オリゴヌクレオチド（単数または複数）は、比較的短いポリヌクレオチドをいう。しばしばこの用語は一本鎖デオキシリボヌクレオチドをいうが、とりわけその上、一本鎖または二本鎖リボヌクレオチド、RNA:DNAのハイブリッド、および二本鎖DNAをいい得る。一本鎖DNAプローブオリゴヌクレオチドのようなオリゴヌクレオチドは、しばしば自動オリゴヌクレオチド合成機で実施されるような、化学的方法により合成される。しかし、オリゴヌクレオチドはインビトロ組換えDNA-媒介技術を含む種々他の方法および細胞および生物中でのDNAの発現によって作製され得る。最初に、化学的に合成されたDNAは、代表的には、5'リン酸なしで得られる。そのようなオリゴヌクレオチド5'末端は、組換えDNA分子を形成させるために代表的に使用されているDNAリガーゼを用いる連結反応による、ホスホジエステル結合形成の基質とはならない。そのようなオリゴヌクレオチドの連結が所望される場合は、リン酸はキナーゼおよびATPを用いる技術のような標準的な技術によって付加され得る。化学的に合成されたオリゴヌクレオチドの3'末端は、一般的には遊離ヒドロキシル基を有し、そしてT4 DNAリガーゼのようなリガーゼの存在下で、容易に別のポリヌクレオチド（例えば、別のオリゴヌクレオチド）の5'リン酸とホスホジエステル結合を形成する。周知のように、この反応は、所望であれば、連結前に、他のポリヌクレオチド（単数または複数）の5'リン酸を除くことによって、選択的に防止され得る。プラスミドは、本明細書中において、当業者によく知られている標準的な命名慣習に従って、大文字および／または数字によって先行される、および／または後続される小文字のpで称される。本明細書中において開示される出発プラスミドは、市販されているか、非限定的な基準で公的に入手可能であるか、または周知の公表された手順の日常的な適用により、入手可能なプラスミドから構築され得る。本発明に従って使用され得る多くのプラスミドならびに他のクローニングおよび発現ベクターは周知であり、そしてこれらは当業者に容易に入手可能である。さらに、当業者は、本発明での使用に適切な任意の数の他のプラスミドを容易に構築し得る。本発明における、そのようなプラスミドおよび他のベクターの特性、構築、および使用は、本開示から当業者に容易に明らかになる。ポリヌクレオチド（単数または複数）は、一般に、ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチド（未修飾のRNAもしくはDNA、または修飾された RNAまたはDNAであり得る）をいう。それゆえ、例えば、本明細書中で用いられるポリヌクレオチドは、とりわけ、一本鎖および二本鎖DNA、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるDNA、一本鎖および二本鎖RNA、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物であるRNA、一本鎖またはより代表的には二本鎖または一本鎖および二本鎖領域の混合物であり得るDNAおよびRNAを含むハイブリッド分子をいう。さらに、本明細書中で用いられるポリヌクレオチドは、RNAもしくはDNA、または RNAおよびDNAの両方を含む三本鎖領域をいう。そのような領域における鎖は、同じ分子由来であるか異なる分子由来であり得る。この領域は、１つ以上の分子の全てを含み得るが、より代表的には分子のいくつかの領域のみを含み得る。三重らせん領域の分子の一つは、しばしばオリゴヌクレオチドである。本明細書中において使用されるように、用語、ポリヌクレオチドは、１つ以上の修飾された塩基を含む、上記のようなDNAまたはRNAを含む。それゆえ、安定性または他の理由のために修飾された骨格を有するDNAまたはRNAは、本明細書中においてその用語が意図されるように「ポリヌクレオチド」である。さらに、ちようど２つの例を挙げると、イノシンのような通常でない塩基、またはトリチル化塩基のような修飾塩基を含むDNAおよびRNAは、その用語が本明細書中において使用されるようにポリヌクレオチドである。当業者に公知である多くの有用な目的に役立つDNAおよびRNAに、非常に多様な修飾がなされたことが理解される。本明細書中で使用される場合、用語ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態、ならびにとりわけ、ウイルスおよび細胞（単細胞および複合細胞を含む）に特徴的なDNAおよびRNAの化学的形態を包含する。本明細書中で使用される場合、ポリペプチドは、下記の全てのポリペプチドを含む。ポリペプチドの基本構造は周知であり、無数の教科書および当該分野における他の刊行物に述べられている。この文脈では、この用語は本明細書において、ペプチド結合によって直鎖において互いに連結された２つ以上のアミノ酸を含む、任意のペプチドまたはタンパク質をいうために用いられる。本明細書中で使用されるように、この用語は、例えば、当該分野において一般的にペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーといわれる短鎖、ならびに当該分野において一般的にタンパク質といわれるより長い鎖（その多くのタイプが存在する）の両方をいう。ポリペプチドがしばしば、20の天然に生じるアミノ酸と一般にいわれる20のアミノ酸以外のアミノ酸を含むこと、ならびに多くのアミノ酸（末端アミノ酸を含む）が、プロセシングおよび他の翻訳後修飾のような天然のプロセスによるか、また、当該分野において周知の化学修飾技術によるかのいずれかで、所定のポリペプチド中で修飾され得ることが理解される。ポリペプチドにおいて天然に生じる一般的な修飾でさえ、あまりに多すぎてここでは徹底的に列挙できないが、それらは基礎的な教科書およびより詳細なモノグラフ、ならびに数巻にわたる研究論文に十分に記載されており、そしてそれらは当業者には周知である。本発明のポリペプチドに存在し得る公知の修飾の中には、いくつかの例を挙げると、アセチル化、アシル化、ADP-リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトール(phosphotidylinositol)の共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γカルボキシル化、グリコシル化、GPIアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解性プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレン化、硫酸化、アルギニル化のような転移RNA媒介性のアミノ酸のタンパク質への付加、およびユビキチン化がある。そのような修飾は当業者に周知であり、そして科学論文において非常に詳細に記載されている。いくつかの、特に一般的な修飾（例えば、グリコシル化、脂質付加、硫酸化、グルタミン酸残基のγカルボキシル化、ヒドロキシル化およびAD P−リボシル化）は、例えばPROTEINS-STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES、第２版、T．E．Creighton，W．H．Freeman and Company，New York(1993)、のようなほとんどの基礎的な教科書に記載されている。より詳細な総説がこの主題について利用可能である。例えば、Wold，F.,翻訳後タンパク質修飾；展望および予想、POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICATION OF PROTEINS，B．C．Johnson 編，Acacemic Press，New York(1983)の１〜12頁；Seifterら、タンパク質修飾および非タンパク質性補因子についての分析、Meth．Enzymol．182：626-646(19 90)ならびにRattanら、タンパク質合成：翻訳後修飾および老化、Ann．N.Y．Aca d．Sci．663:48-62(1992)によって提供される。周知でありそして上記のように、ポリペプチドは常に完全に直鎖であるわけではない。例えば、ポリペプチドは、ユビキチン化の結果として分岐し得、そしてそれらは、一般的には、翻訳後事象（天然のプロセシング事象および天然には生じない人為的な操作によってもたらされる事象を含む）の結果として、分岐を有してまたは分岐なしで、環状であり得る。同様に、環状、分岐、および環状分岐ポリペプチドは、非翻訳天然プロセスおよび完全に合成の方法によって合成され得る。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、およびアミノ末端またはカルボキシ末端を含む、ポリペプチド内のどこででも生じ得る。事実、共有結合的な修飾による、ポリペプチド内のアミノ基もしくはカルボキシル基またはその両方の保護は、天然に生じるポリペプチドおよび合成ポリペプチドにおいて一般的であり、そしてそのような修飾は、同様に、本発明のポリペプチドに存在し得る。例えば、 E.coliにおいて作製されたポリペプチドのアミノ末端残基は、タンパク質分解プロセシングの前に、ほとんど必ずN-ホルミルメチオニンである。ポリペプチドにおいて生じる修飾は、しばしば、それがどのように作製されたかの関数である。例えば、宿主においてクローン化遺伝子を発現することによって作製されたポリペプチドについて、修飾の性質および程度は、大部分、宿主細胞の翻訳後修飾能力およびポリペプチドのアミノ酸配列中に存在する修飾シグナルによって決定される。例えば、周知のように、グリコシル化は、E．coliのような細菌宿主中ではしばしば生じない。従って、グリコシル化が所望される場合は、ポリペプチドはグリコシル化宿主（一般的には真核生物細胞）中で発現させるべきである。昆虫細胞は、しばしば噛乳動物細胞と同じ翻訳後のグリコシル化を生じ、そして、とりわけ、この理由のために、昆虫細胞発現系は、天然のパターンのグリコシル化を有する哺乳動物タンパク質を、効率良く発現させるように開発されている。同様の考察が、他の修飾に適用される。同じ型の修飾が、所定のポリペプチド中のいくつかの部位で、同じまたは変動する程度で存在し得ることが理解される。また、所定のポリペプチドは多くの型の修飾を含み得る。一般的に、本明細書において使用されるように、用語ポリペプチドは、そのような修飾の全てを、特に宿主細胞においてポリヌクレオチドを発現させることによって合成されたポリペプチド中に存在する修飾を包含する。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの改変体（単数または複数）は、この用語が本明細書中で用いられる場合、参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドそれぞれとは異なったポリヌクレオチドまたはポリペプチドである。この意味での改変体は、以下および本開示の他所において、より詳細に述べられる。 (1)別の参照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列が異なるポリヌクレオチド。一般的に、相違は限られており、その結果、参照および改変体のヌクレオチド配列は全体に密接に類似しており、そして多くの領域において同一である。下記のように、改変体のヌクレオチド配列内での変化は、サイレントであり得る。すなわち、それらはポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸を変化させないかもしれない。変化がこの型のサイレントな変化に限られている場合、改変体は参照ポリヌクレオチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。また下記のように、改変体のヌクレオチド配列内での変化は、参照ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変化させ得る。そのようなヌクレオチドの変化は、以下で論じるように、参照配列によってコードされるポリペプチド内でのアミノ酸の置換、付加、欠失、融合および短縮化を生じ得る。（２）別の参照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なるポリペプチド。一般的に、変化は限られており、その結果参照および改変体対の配列は、全体に密接に類似しており、そして多くの領域において同一である。改変体および参照ポリペプチドは、アミノ酸配列が、１つ以上の置換、付加、欠失、融合および短縮化で異なり得、これらは任意の組合せで存在し得る。本明細書において使用されるレセプター分子は、本発明のhESF I、IIおよびII Iポリペプチドに特異的に結合または相互作用する分子をいい、古典的なレセプター（これが好ましい）だけでなく、本発明のポリペプチドと特異的に結合または相互作用する他の分子（それらはまた、それぞれ「結合分子」および「相互作用分子」ならびに「hESF I、IIおよびIII結合分子」および「hESF I、IIおよびI II相互作用分子」といわれる）を含む。本発明のペプチドと、そのような分子（レセプターまたは結合もしくは相互作用分子を含む）との間の結合は、本発明のポリペプチドに排他的であり得（これは非常に高度に好ましい）、または本発明のポリペプチドに高度に特異的であり得（これは高度に好ましい）、または本発明のポリペプチドを含むタンパク質の群に高度に特異的であり得（これは好ましい）、またはその少なくとも１つが、本発明のポリペプチド含むタンパク質のいくつかの群に特異的であり得る。レセプターはまた、本発明のポリペプチドに結合する抗体および抗体由来の試薬のように、非天然であり得る。発明の説明本発明は、以下により詳細に記載するように、特に、新規hESF I、IIおよびII Iポリペプチドおよびポリヌクレオチドに関する。特に、本発明は、新規ヒトhES F I、IIおよびIIIのポリペプチドおよびポリヌクレオチドに関し、これらはラット前立腺ステロイド結合タンパク質とアミノ酸配列相同性で関連する。本発明は、特に、図１、２および３（配列番号１〜６）に示されるヌクレオチドおよびアミノ酸配列を有するhESF I、IIおよびIIIに関し、そしてATCC寄託番号97401、97 402および97403のヒトcDNAのhESF I、IIおよびIIIヌクレオチドおよびアミノ酸配列に関する。これは、本明細書中で、「寄託クローン」または「寄託クローンのcDNA」と称される。図１、２および３（配列番号２、４および６）に示されるヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、寄託クローンのcDNAを配列決定することにより得られたことが理解される。それゆえ、寄託クローンの配列は、２つの間の任意の差、ならびに寄託請求物のヒトcDNAの配列との関連性を含む、図１、２および３の配列（配列番号１、３および５）との任意の関連性について制御している。ボリヌクレオチド本発明の１つの局面によれば、図１、２および３（配列番号２、４および６）の推定アミノ酸配列を有するhESF I、IIおよびIIIポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドが提供される。本明細書中で提供される情報（例えば、図１、２および３（配列番号１、３および５）に示されるポリヌクレオチド配列）を使用して、ヒトhESF I、IIおよび IIIポリペプチドをコードする本発明のポリヌクレオチドが、標準的なクローニングおよびスクリーニング手順（例えば、出発物質としてヒト子宮体腫瘍の細胞からのmRNAを使用する、cDNAをクローニングするための技術）を使用して得られ得る。本発明の例である、図１（配列番号１）に示されるポリヌクレオチドは、ヒト子宮体腫瘍の細胞から得られたcDNAライブラリーにおいて発見された。図２（配列番号３）のポリヌクレオチドは、シクロヘキサミド処理CEM細胞から得られたcDNAライブラリーにおいて発見された。図３（配列番号５）のポリヌクレオチドは、ヒト子宮体腫瘍から得られたcDNAライブラリーにおいて発見された。本発明のヒトhESF Iは、寄託クローンのヒトhESF IをコードするcDNAの配列決定の結果に示されるように、Clara細胞分泌タンパク質ファミリーの他のタンパク質に構造的に関連する。このように得られたcDNA配列は図１（配列番号１）に示される。それは約90アミノ酸残基のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含み（ここで、最初の21アミノ酸残基は推定リーダー配列を表す）、これは約9.8kDaの全長タンパク質の推定分子量を有する。このタンパク質は、とりわけ、ラット前立腺ステロイド結合タンパク質に対して最大の相同性を示す。タンパク質hESF Iは、ラット前立腺ステロイド結合タンパク質のアミノ酸配列と約46.067％の同一性および約66.3％の類似性を有する。ヒトhESF IIは約90アミノ酸残基のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含み（ここで、最初の21アミノ酸残基は推定リーダー配列を表す）、これは約9.9kDaの全長タンパク質の推定分子量を有する。このタンパク質は、とりわけ、ラット前立腺ステロイド結合タンパク質に対して最大の相同性を示す。タンパク質hESF IIは、ラット前立腺ステロイド結合タンパク質C2のアミノ酸配列と約49.438％の同一性および約71.910％の類似性を有する。ヒトhESF IIIは約95アミノ酸残基のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含み（ここで、最初の21アミノ酸残基は推定リーダー配列を表す）、これは約8.10kDaの全長タンパク質の推定分子量を有する。このタンパク質は、とりわけ、ラット前立腺ステロイド結合タンパク質C3に対して最大の相同性を示す。タンパク質hESF IIIは、ラット前立腺ステロイド結合タンパク質C3のアミノ酸配列と約36.2％の同一性および約64.9％の類似性を有する。本発明のポリヌクレオチドは、RNAの形態（例えば、mRNA）、あるいはDNAの形態（例えば、クローニングにより得られるかまたは化学合成技術により産生されるかまたはそれらの組み合わせによるcDNAおよびゲノムDNAを含む）であり得る。DNAは二本鎖であり得るかまたは一本鎖であり得る。一本鎖DNAはコード鎖（センス鎖としてもまた知られる）であり得るか、またはそれは非コード鎖（アンチセンス鎖としてもまた称される）であり得る。ポリペプチドをコードするコード配列は、図１、２および３（配列番号１、３および５）に示されるポリヌクレオチドのコード配列に同一であり得る。それはまた、図１、２および３（配列番号１、３および５）のヒトcDNAのポリペプチドをコードする異なる配列（遺伝コードの重複（縮重）の結果による）を有するポリヌクレオチドであり得る。図１、２および３（配列番号１、３および５）のポリペプチドをコードする本発明のポリヌクレオチドは、成熟ポリペプチドのコード配列それ自身；成熟ポリペプチドのコード配列およびさらなるコード配列（例えば、リーダーまたは分泌配列（例えば、プレ、プロ、またはプレプロタンパク質配列）をコードする配列）；さらなる非コード配列（例えば、イントロンならびに非コード5'および3'配列（例えば、転写、mRNAプロセシング（例えば、スプライシングおよびポリアデニル化シグナルを含む）、リボソーム結合、およびmRNAの安定の役割を果たす転写された非翻訳配列）を含むがこれらに限定されない）をともに有し、上記のさらなるコード配列を有するかまたは有さない成熟ポリペプチドのコード配列；さらなるアミノ酸（例えば、さらなる機能を提供するアミノ酸）をコードするさらなるコード配列を含むが、これらに限定されない。従って、例えば、ポリペプチドは、融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列（例えば、ペプチド）に融合され得る。本発明のこの局面の特定の実施態様において、マーカー配列は、ヘキサヒスチジンペプチド（例えば、pQEベクターで提供されるタグ（Qia gen，Inc.,）であり、特に、これらの多くは市販されている。Gentzら、Proc.Na tl．Acad．Sci.，USA 86:821-824(1989)に記載のように、例えば、ヘキサヒスチジンは融合タンパク質の簡便な精製を提供する。HAタグは、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する。これは、例えば、Wilsonら、 Cell 37:767(1984)に記載される。上記によれば、本明細書中で使用される用語「ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」は、本発明のポリペプチド、特に図１、２および３（配列番号２、４および６）に示されるアミノ酸配列を有するヒトhESF I、IIおよびIIIをコードする配列を含むポリヌクレオチドを包含する。この用語は、ポリペプチドをコードする１つの連続領域または不連続領域（例えば、イントロンにより中断されている）をさらなる領域とともに含み、またコードおよび／または非コード配列を含み得るポリヌクレオチドを包含する。本発明はさらに、図１、２および３（配列番号２、４および６）の推定アミノ酸配列を有するポリペプチドのフラグメント、アナログ、および誘導体をコードする、本明細書中上記のポリヌクレオチドの変異体に関する。ポリヌクレオチドの変異体は、天然に存在する対立遺伝子変異体のような天然に存在する変異体であり得るか、またはそれは天然に存在することが知られていない変異体であり得る。このようなポリヌクレオチドの天然に存在しない変異体は、ポリヌクレオチド、細胞、または器官に適用される技術を含む、変異誘発技術によりなされ得る。変異体のうちでも、本発明の目的であるものは、ヌクレオチド置換、欠失または付加により前記ポリヌクレオチドとは異なる変異体である。置換、欠失または付加は、１つ以上のヌクレオチドを含み得る。変異体は、コードまたは非コード領域あるいは両方において改変され得る。コード領域における改変は、保存的または非保存的なアミノ酸置換、欠失または付加を生じ得る。本発明の特に好ましい実施態様のうちでも、本発明の目的であるものは、図１、２および３（配列番号２、４および６）に示されるhESF I、IIおよびIIIのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；その変異体、アナログ、誘導体およびフラグメント、ならびに変異体、アナログおよび誘導体のフラグメントである。さらに特に好ましい本発明の目的であるものは、hESF I、IIおよびIIIの変異体、アナログ、誘導体およびフラグメント、ならびにそのフラグメントの変異体、アナログおよび誘導体（これらは、図１、２および３（配列番号２、４および６）のhESF I、IIおよびIIIポリペプチドのアミノ酸配列を有し、いくつか、数個、５〜10、１〜５、１〜３、２、１または０個のアミノ酸残基が、任意の組み合わせで、置換、欠失または付加されている）をコードするポリヌクレオチドである。これらのうちで特に好ましいものは、サイレント置換、欠失または付加である。これは、hESF I、IIおよびIIIの特性および活性を改変しない。特に好ましい本発明の目的であるものはまた、保存的な置換である。もっとも好ましいものは、置換のない図１、２および３（配列番号２、４および６）のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。本発明のさらに好ましい実施態様は、図１、２および３（配列番号２、４および６）に示されるアミノ酸配列を有するhESF I、IIおよびIIIポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも70％同一であるポリヌクレオチド、およびこのようなポリヌクレオチドに相補的であるポリヌクレオチドである。あるいは、最も好ましいものは、寄託クローンのcDNAのhESF I、IIおよびIIIポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも80％同一である領域を含むポリヌクレオチド、およびそれに相補的なポリヌクレオチドである。本発明の目的において、上記と少なくとも90％同一であるポリヌクレオチドが特に好ましく、そしてこれらの特に好ましいポリヌクレオチドのうち、少なくとも95％同一であるポリヌクレオチドが特に好ましい。さらに、少なくとも97％同一であるポリヌクレオチドが少なくとも95％同一であるポリヌクレオチドのうちで高度に好ましく、そしてこれらのうちで少なくとも98％および少なくとも99％同一であるポリヌクレオチドが特に高度に好ましく、少なくとも99％同一であるポリヌクレオチドがなおさら好ましい。さらに、本発明の目的において、特に好ましい実施態様は、図１、２および３（配列番号１、３および５）のヒトcDNAによりコードされる成熟ポリペプチドと実質的に同一の生物学的機能または活性を保持するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。本発明はさらに、本明細書中上記配列にハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。本発明の目的において、本発明は特に、ストリンジェントな条件下で本明細書中上記ポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。本明細書中で使用される用語「ストリンジェントな条件」は、配列間で少なくとも95％および好ましくは少なくとも97％の同一性が存在する場合にのみハイブリダイゼーションが起こることを意味する。本発明のポリヌクレオチドアッセイについて本明細書中でさらに議論されるように、例えば、上記本発明のポリヌクレオチドは、cDNAおよびゲノムDNAのハイブリダイゼーションプローブとして、hESF I、IIまたはIIIをコードする全長cDN Aおよびゲノムクローンを単離するためおよびヒトhESF I、IIまたはIII遺伝子に対して高い配列類似性を有する他の遺伝子のcDNAおよびゲノムクローンを単離するために使用され得る。このようなプローブは、一般に、少なくとも15塩基を含む。好ましくは、このようなプローブは、少なくとも30塩基を有し、そして少なくとも50塩基を有し得る。例えば、hESF I、IIおよびIII遺伝子のコード領域は、オリゴヌクレオチドプローブを合成するための公知のDNA配列を用いてスクリーニングにより単離され得る。本発明の遺伝子の配列に相補的な配列を有する標識オリゴヌクレオチドは、次いで、ヒトcDNA、ゲノムDNAまたはmRNAのライブラリーをスクリーニングするために使用されて、どのライブラリーのメンバーがプローブにハイブリダイズするかを決定する。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、ポリヌクレオチドアッセイに関して本明細書中でさらに議論されるように、特に、研究試薬ならびにヒト疾患に対する処置および診断の踏査のための物質として利用され得る。ポリヌクレオチドは、成熟タンパク質およびさらなるアミノまたはカルボキシ末端アミノ酸、または成熟ポリペプチドの内部のアミノ酸（例えば、成熟形態が１つより多いポリペプチド鎖を有する場合）であるポリペプチドをコードし得る。このような配列は、特に、前駆体から成熟形態へのタンパク質のプロセシングにおける役割を果たし得るか、タンパク質輸送を容易にし得るか、タンパク質の半減期を延長または短縮し得るか、またはアッセイまたは産生のためのタンパク質の操作を容易にし得る。インサイチュの場合で一般的なように、さらなるアミノ酸は、細胞性酵素により成熟タンパク質から離れるようにプロセスされ得る。 1つ以上のプロ配列が融合したポリペプチドの成熟形態を有する前駆体タンパク質は、ポリペプチドの不活性な形態であり得る。プロ配列は一般的に不活性な前駆体が活性化されるように除去される。プロ配列のいくつかまたは全てが活性化の前に除去され得る。一般に、このような前駆体はプロタンパク質と呼ばれる。要約すると、本発明のポリヌクレオチドは、成熟タンパク質、成熟タンパク質およびリーダー配列（プレタンパク質と称され得る）、１つ以上のプロ配列（これはプレタンパク質のリーダー配列ではない）を有する成熟タンパク質の前駆体、またはリーダー配列および1つ以上のプロ配列を有するプレプロタンパク質（これはプロタンパク質の前駆体である）をコードし得る。これらのタンパク質は、一般に、ポリペプチドの活性な形態および成熟な形態を産生するプロセシング工程の間に除去される。寄託物ヒトhESF I、IIおよびIII cDNAを含む寄託物は、上記のように、American Typ e Culture Collectionに寄託されている。上記のように、cDNA寄託物はまた、本明細書中で「寄託クローン」または「寄託クローンのcDNA」と称される。寄託クローンは、1996年１月２日にAmerican Type Culture Collection、1230 1 Park Lawn Drive，Rockville，Maryland 20852、USAに寄託され、そしてATCC 寄託番号97401、97402および97403を与えられた。寄託物質は、全長hESF I、IIおよびIII cDNAを含むpBluescript SK(-)プラスミド（Stratagene，La Jolla，CA）である。寄託物は、特許手続きの目的のための微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の条項下に維持される。株は、特許の発行に際し、変更なく、そして制限および条件なく、公に発表される。寄託物は、当業者に便宜上のみ提供され、そして米国特許法第112条の下で寄託が必要とされることを容認するものではない。寄託物に含まれるポリヌクレオチドの配列、ならびにそれによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、本明細書中に参考として援用されており、そして本明細書中の配列の記載とのいかなる矛盾の場合も制御されている。寄託物を製造し、使用し、または販売するためには実施許諾が必要とされ得、そしてこのような実施許諾はこれによって与えられるわけではない。ポリペプチド本発明はさらに、図１、２および３（配列番号２、４および６）の推定アミノ酸配列を有するヒトhESF I、IIおよびIIIポリペプチドに関する。本発明はまた、これらのポリペプチドのフラグメント、アナログ、および誘導体に関する。用語「フラグメント」、「誘導体」および「アナログ」は、図１、２および３（配列番号２、４および６）のポリペプチドをいう場合、このようなポリペプチドと実質的に同じ生物学的機能または活性を有するポリペプチドを意味する。従って、アナログは、プロタンパク質部分の切断により活性化されて活性な成熟ポリペプチドを産生し得るプロタンパク質を含む。本発明のポリペプチドは、組換えポリペプチド、天然ポリペプチド、または合成ポリペプチドであり得る。特に好ましい実施態様において、それは組換えポリペプチドである。図１、２および３（配列番号２、４および６）のポリペプチドのフラグメント、誘導体、またはアナログは、（i）１つ以上のアミノ酸残基が保存または非保存アミノ酸残基（好ましくは保存アミノ酸残基）で置換され、そしてこのような置換アミノ酸残基は遺伝コードによりコードされるものであってもなくても良いものであり得るか、または（ii）１つ以上のアミノ酸残基が置換基を含むものであり得るか、または（iii）成熟ポリペプチドが別の化合物（例えば、ポリエチレングリコールのようなポリペプチドの半減期を増大する化合物）に融合されているものであり得るか、または（iv）さらなるアミノ酸（リーダー配列もしくは分泌配列または成熟ポリペプチドもしくはプロタンパク質配列の精製のために利用される配列）が成熟ポリペプチドに融合されているものであり得る。このようなフラグメント、誘導体およびアナログは、本明細書中の教示から当業者の範囲内であると考えられる。変異体のうちでも、好ましい変異体は、保存的なアミノ酸置換に関して変化する変異体である。このような置換は、ポリペプチド中の所定のアミノ酸を同様の特性を有する別のアミノ酸で置換する置換である。保存的な置換で代表的に見られるものは、脂肪族アミノ酸Ala、Val、LeuおよびIleのうちのあるものから別のものへの置換；ヒドロキシル残基SerおよびThrの交換、酸性残基AspおよびGluの交換、アミド残基AsnおよびGln間の置換、塩基性残基LysおよびArgの交換、ならびに芳香族残基Phe、Tyr間の置換である。本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、好ましくは単離された形態で提供され、そして好ましくは均一にまで精製される。本発明のポリペプチドは、配列番号２のポリペプチド（特に、成熟ポリペプチド）、ならびに配列番号２のポリペプチドに少なくとも75％の類似性（好ましくは少なくとも75％の同一性）を有するポリペプチド、およびより好ましくは、配列番号２のポリペプチドに少なくとも90％の類似性（より好ましくは少なくとも 90％の同一性）を有するポリペプチド、およびなおより好ましくは配列番号２のポリペプチドに少なくとも95％の類似性（なおより好ましくは少なくとも95％の同一性）を有するポリペプチドを含み、そしてまた一般的に少なくとも30アミノ酸およびより好ましくは少なくとも50アミノ酸を含むポリペプチドのこのような部分を有するこのようなポリペプチドの部分を含む。当該分野で公知のように、２つのポリペプチド間の「類似性」は、アミノ酸配列および１つのポリペプチドのその保存されたアミノ酸置換を第２のポリペプチドの配列と比較することにより決定される。本発明のポリペプチドのフラグメントおよび部分は、ペプチド合成により対応する全長ポリペプチドを産生するために利用され得る；それゆえ、フラグメントは、全長ポリペプチドを産生するための中間体として利用され得る。本発明のポリヌクレオチドのフラグメントまたは部分が、本発明の全長ポリヌクレオチドを合成するために使用され得る。フラグメント本発明のこの局面の好ましい実施態様のうち、hESF I、IIおよびIIIのフラグメント、より詳細には図１、２および３（配列番号２、４および６）に示されるアミノ酸配列を有するhESF I、IIおよびIIIのフラグメント、ならびに図１、２および３（配列番号２、４および６）のhESF I、IIおよびIIIの変異体および誘導体のフラグメントを含むポリペプチドがまた好ましい。本発明の目的において、フラグメントは、前述のhESF I、IIおよびIIIポリペプチドならびにその誘導体またはフラグメントのアミノ酸配列の一部（全てではない）と完全に同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドである。このようなフラグメントは、「独立した立場（free-standing）」（すなわち、他のアミノ酸もしくはポリペプチドの一部でないか、またはそれに融合されていない）であり得るか、またはそれらは、それらが領域の一部を形成するより大きなポリペプチド内に含まれ得る。より大きなポリペプチド内に含まれる場合、本明細書中で議論されるフラグメントは、最も好ましくは、１つの連続する領域を形成する。しかし、いくつかのフラグメントは、１つのより大きなポリペプチド内に含まれ得る。例えば、特定の好ましい実施態様は、宿主での発現のために設計された前駆体ポリペプチド内に含まれ、そしてhESF I、IIおよびIIIフラグメントのアミノ末端に融合した異種プレおよびプロポリペプチド領域ならびにフラグメントのカルボキシ末端に融合したさらなる領域を有する本発明のhESF I、II またはIIIポリペプチドのフラグメントに関する。それゆえ、本明細書中で意図される意味を有する１つの局面におけるフラグメントは、hESF I、IIおよびIIIから得られる融合ポリペプチドまたは融合タンパク質の一部（単数または複数）をいう。本発明のポリペプチドフラグメントの代表的な例として、約15〜約139アミノ酸を有する前述されたものが存在し得る。この状況において、それは具体的に記載した範囲を含み、そしていくつか、数個、５、４、３、２または１個のアミノ酸によっていずれかの極値または両方の極値として大きくまたは小さく変化する。本発明の目的において高度に好ましいのは、記載した範囲プラスマイナス５アミノ酸（いずれかまたは両方の極値）である。特に高度に好ましいのは、記載した範囲プラスマイナス３アミノ酸（いずれかまたは両方の記載した極値）である。とりわけ好ましいのは、記載した範囲プラスマイナス１アミノ酸（いずれかまたは両方の極値）または付加または欠失を有さない記載した範囲である。本発明の目的全てにおいて最も高度に好ましいのは、約15〜約45アミノ酸のフラグメントである。本発明のフラグメントのうち特に好ましいものは、hESF I、IIおよびIIIの短縮変異体である。短縮変異体は、図１、２および３（配列番号２、４および６）のアミノ酸配列を有するhESF I、IIおよびIIIポリペプチド、またはその変異体もしくは誘導体を含む。これらは、アミノ末端を含む連続する一連の残基（すなわち、連続する領域、区画、または部分）またはカルボキシル末端を含む連続する一連の残基の欠失、あるいは（二重短縮変異体におけるような）２つの連続する一連の残基（１つはアミノ末端を含み、そして１つはカルボキシル末端を含む）の欠失を除く。上記サイズ範囲を有するフラグメントはまた、短縮フラグメントの好ましい実施態様である。これらは一般に、フラグメントのうちで特に好ましい。また、本発明のこの局面において好ましいのは、hESF I、IIおよびIIIの構造または機能特性により特徴づけられるフラグメントである。本発明の目的における本発明の好ましい実施態様は、αヘリックスおよびαヘリックス形成領域（「α 領域」）、βシートおよびβシート形成領域（「β領域」）、ターンおよびターン形成領域（「ターン領域」）、コイルおよびコイル形成領域（「コイル領域」）、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、β両親媒性領域、可撓性領域、表面形成領域、ならびにhESF I、IIおよびIIIの高抗原性指標領域を含むフラグメントを含む。本発明の目的における特定の好ましい領域は図４、５および６に示され、そして図１、２および３（配列番号２、４および６）に示されるアミノ酸配列の分析により同定される前述のタイプの領域を含むがこれらに限定されない。図４、５および６に示されるように、そのような好ましい領域は、Garnier-Robson α領域、β領域、ターン領域およびコイル領域、Chou-Fasmanα領域、β領域およびターン領域、Kyte-Doolittle疎水性領域および疎水性領域、Eisenbergαおよび β両親媒性領域、Karplus-Schulz可撓性領域、Emini表面形成領域、ならびにJam eson-Wolf高抗原性指標領域を含む。本発明の目的におけるフラグメントのうち高度に好ましいものは、上記のいくつかの特徴のようないくつかの構造特徴をあわせ持つhESF I、IIおよびIIIの領域を含むフラグメントである。本発明の目的において、図１、２および３（配列番号２、４および６）の残基により規定される領域（これらのすべては、ターン領域、疎水性領域、可撓性領域、表面形成領域および高抗原性指標領域に高度に特徴的であるアミノ酸組成により特徴づけられる）が特に高度に好ましい領域である。このような領域は、より大きなポリペプチド内に含まれ得るか、または上記のような本発明の好ましいフラグメント自身であり得る。このパラグラフで使用される用語「約」は一般に、上記フラグメントで説明されるような意味を有することが認識される。さらに好ましい領域は、hESF I、IIおよびIIIの活性を媒介する領域である。本発明において最も高度に好ましいものは、hESF I、IIおよびIIIの化学的、生物学的または他の活性を有するフラグメントである。このフラグメントは、類似の活性または改良された活性を有するものか、あるいは減少した所望されない活性を有するフラグメントを含む。本発明の目的において高度に好ましいものは、関連するポリペプチド（図４、５および６（配列番号２、４および６）に示される関連するポリペプチドならびにこれはラット前立腺特異的結合タンパク質を含む）の配列に、または位置に、または両方の配列および活性な領域に相同である領域を含むフラグメントである。本発明の目的のフラグメントのうち特に好ましいものは、上記の短縮変異体である。本発明はまた、特に、前述のフラグメントをコードするポリヌクレオチド、このフラグメントをコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチド（特に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするもの）、およびこのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを増幅するためのポリヌクレオチド（例えば、PCRプライマー）に関することが認識される。本発明の目的において、好ましいポリヌクレオチドは、上記の好ましいフラグメントに対応するポリヌクレオチドである。ベクター、宿主細胞、発現本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、本発明のベクターにより遺伝的に操作された宿主細胞、および組換え技術による本発明のポリペプチドの産生に関する。宿主細胞は遺伝的に操作されてポリヌクレオチドを組み込み、そして本発明のポリペプチドを発現し得る。例えば、ポリヌクレオチドは、感染、形質導入、トランスフェクション、トランスベクションおよび形質導入の周知技術を使用して、宿主細胞中に組み込まれ得る。ポリヌクレオチドは単独でまたは他のポリヌクレオチドとともに導入され得る。このような他のポリヌクレオチドは、独立して導入され得るか、同時に導入され得るか、または本発明のポリヌクレオチドに結合されて導入され得る。従って、例えば、本発明のポリヌクレオチドは、選択マーカーをコードする別の異なるポリヌクレオチドともに、例えば、哺乳動物細胞でのコトランスフェクションおよび選択のための標準的な技術を使用して、宿主細胞中にトランスフェクトされ得る。この場合、ポリヌクレオチドは、一般に、宿主細胞ゲノム中に安定に組み込まれる。あるいは、ポリヌクレオチドは、宿主での増殖のための選択マーカーを含むベクターに結合され得る。ベクター構築物は、前述の技術により、宿主細胞中に導入され得る。一般に、プラスミドベクターは、DNAのように、カルシウムホスフェート沈殿のような沈殿で、または荷電した脂質との複合体で導入される。エレクトロポレーションはまた、ポリヌクレオチドを宿主中に導入するために使用され得る。ベクターがウイルスである場合、それはインビトロでパッケージされ得るか、またはパッケージング細胞中に導入され得、そしてパッケージされたウイルスは細胞中に形質導入され得る。本発明のこの局面に従ってポリヌクレオチドを作製するためおよびポリヌクレオチドを細胞中に導入するために適切である広範な種々の技術は周知であり、そして当業者には日常的である。このような技術は、先に引用したSambrookらに詳細に概説され、これはこれらの技術を説明する多くの研究マニュアル例である。本発明のこの局面において、ベクターは、例えば、プラスミドベクター、一本鎖または二本鎖ファージベクター、一本鎖または二本鎖RNAまたはDNAウイルスベクターであり得る。このようなベクターは、DNA およびRNAを細胞に導入するための周知の技術により、ポリヌクレオチド、好ましくはDNAのように細胞中に導入され得る。ベクター（ファージおよびウイルスベクターの場合）はまた、感染および形質導入のための周知の技術により、パッケージされたまたはキャプシド化されたウイルスのように細胞中に導入され得、そして好ましくはそのようにされる。ウイルスベクターは、複製可能であり得るかまたは複製欠損であり得る。後者の場合、ウイルス増殖は一般に、宿主細胞と適合する場合にのみ生じる。ベクターのうち特定の局面において好ましいものは、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの発現のためのベクターである。一般に、このようなベクターは、宿主での発現に効果的で、発現されるポリヌクレオチドに作動可能に連結されたシス作用性の制御領域を含む。適切なトランス作用性因子は、宿主により供給されるか、適合するベクターにより供給されるか、または宿主中への導入の際にベクター自身により供給されるか、のいずれかである。本発明の目的における特定の好ましい実施態様において、ベクターは、特異的な発現を提供する。このような特異的な発現は、誘導可能な発現または特定のタイプの細胞のみでの発現、あるいは誘導可能かつ細胞特異的の両方の発現であり得る。誘導可能なベクターのうちで特に好ましいものは、発現のために環境因子により誘導され得るベクターである。環境因子は、温度および栄養添加物のような操作の容易なものである。本発明のこの局面に適切であり、原核生物および真核生物宿主において使用するための構造性および誘導可能発現ベクターを含む種々のベクターは周知であり、そして当業者により日常的に利用される。操作された宿主細胞は、従来の栄養培地において培養され得る。この培地は、特に、プロモーターの活性化、トランスフォーマントの選択、または遺伝子の増幅に適切なように改変され得る。発現について選択された宿主細胞で先に使用された培養条件（例えば、温度、pHなど）は一般に、当業者に明らかなように、本発明のポリペプチドの発現に適切である。多くの種々の発現ベクターが本発明のポリペプチドを発現させるために使用され得る。このようなベクターは、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクター（例えば、細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由来、酵母エピソーム由来、酵母染色体エレメント由来、ウイルス（例えば、バキュロウイルス、SV40 のようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス）由来のベクター、ならびにコスミドおよびファージミドのようなプラスミドおよびバクテリオファージの遺伝的エレメント由来のベクターのような、それらの組み合わせから得られるベクター）を含む。これら全ては、本発明の局面に従って、発現のために使用され得る。一般に、宿主中でポリペプチドを発現するためのポリヌクレオチドを維持、増殖または発現させるのに適切な任意のベクターは、本発明の目的において発現のために使用され得る。適切なDNA配列は、任意の種々の周知および日常的な技術によりベクター中に挿入され得る。一般に、発現のためのDNA配列は、DNA配列および発現ベクターを１つ以上の制限エンドヌクレアーゼで切断し、そして次いで制限フラグメントを T4DNAリガーゼを使用してともに結合することにより、発現ベクターに結合される。この目的のために使用され得る制限および連結のための手順は当業者に周知かつ日常的である。本発明の目的において適切であり、そして別の技術を使用して発現ベクターを構築するための手順（これはまた当業者に周知かつ日常的である）は、本明細書中で他の箇所に引用されるSambrookらに非常に詳細に示されている。発現ベクター中のDNA配列は、適切な発現制御配列（例えば、mRNAの転写を指向するプロモーターを含む）に作動可能に連結される。このようなプロモーターの代表的な例は、λファージPLプロモーター、E．coli lac．trpおよびtacプロモーター、SV40初期および後期プロモーター、ならびにレトロウイルスLTRのプロモーターを含む。これらは周知のプロモーターのごくわずかである。述べられていない多数のプロモーターが、本発明のこの局面での使用に適切であり、周知であり、そして当業者により本明細書中の議論および実施例により例示される様式で容易に利用され得ることが理解される。一般に、発現構築物は、転写の開始および終結のための部位、ならびに、転写された領域において、翻訳のためのリボソーム結合部位を含む。構築物により発現される成熟転写物のコード部分は、翻訳されるポリペプチドの末端に適切に配置される開始および終結コドンにおいて翻訳開始AUGを含む。さらに、構築物は、発現を調節ならびに発生する制御領域を含む。一般に、多くの通常実施される手順によれば、このような領域は、例えば、とりわけリプレッサー結合部位およびエンハンサーを転写を制御することにより操作する。増殖および発現のためのベクターは一般に、選択マーカーを含む。このようなマーカーはまた、増幅に適切であり得るか、またはベクターはこの目的のためのさらなるマーカーを含み得る。本発明の目的において、発現ベクターは、好ましくは、形質転換宿主細胞の選択のための表現型的特徴を提供する１つ以上の選択マーカー遺伝子を含む。好ましいマーカーは、真核生物細胞培養のためのジヒドロ葉酸レダクターゼまたはネオマイシン耐性、ならびにE．coliおよび他の細菌の培養のためのテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性遺伝子を含む。本明細書中の他の箇所に記載の適切なDNA配列、ならびに適切なプロモーター、および他の適切な制御配列を含むベクターは、所望のポリペプチドをそこで発現するに適切な種々の周知の技術を使用して、適切な宿主中に導入され得る。適切な宿主の代表的な例としては、以下が挙げられ得る：細菌細胞（例えば、E．c oli、StreptomycesおよびSalmonella typhimurium細胞）；真菌細胞（例えば、酵母）；昆虫細胞（例えば、Drosophila S2およびSpodoptera Sf9細胞）；動物細胞（例えば、CHO、COSおよびBowes黒色腫）；および植物細胞。多くの種々の発現構築物のための宿主は周知であり、そして当業者は、本開示により、本発明のこの局面のポリペプチドを発現するための宿主を容易に選択し得る。さらに詳細には、本発明はまた、１つ以上の上記の配列を含む組換え構築物（例えば、発現構築物）を包含する。構築物は、ベクター（例えば、プラスミドベクターまたはウイルスベクター）を包含し、このベクターの中にはこのような本発明の配列が挿入されている。この配列は、正方向または逆方向に挿入され得る。本発明の目的における特定の好ましい実施態様によれば、構築物はさらに、配列に作動可能に連結された調節配列（例えば、プロモーターを包含する）を含む。多数の適切なベクターおよびプロモーターが当業者には公知であり、そして本発明での使用に適切な多くの市販のベクターが存在する。以下のベクター（市販されている）が例として提供される。ベクターのうちで、細菌での使用に好ましいものは、pQE70、pQE60、およびpQE-9(Qiagenから市販される)、pBSベクター、Phagescriptベクター、Bluescriptベクター、pNH8A、pNH1 6a，pNH18A，pNH46A（Stratageneから市販される）；およびptrc99a，pKK223-3 、pKK233-3、pDR540、pRIT5(Pharmaciaから市販される)。真核生物ベクターのうちで好ましいものは、pWLNEO、pSV2CAT、pOG44、pXT1およびpSG（Stratageneから市販される）；ならびにpSVK3、pBPV、pMSGおよびpSVL(Pharmaciaから市販される)。これらのベクターは、本発明のこの局面での使用のために当業者が入手可能である多くの市販されかつ周知のベクターの例としてのみ列挙される。しかし、例えば、宿主において本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドを導入、維持、増殖、または発現するために適切である任意の他のプラスミドまたはベクターが、本発明のこの局面において使用され得ることが認識される。プロモーター領域は、プロモーター領域を欠くレポーター転写ユニット（例えば、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（「cat」）転写ユニット）、候補プロモーターフラグメント（すなわち、プロモーターを含み得るフラグメント）を導入するための制限部位（単数または複数）の下流を含むベクターを使用して、任意の所望の遺伝子から選択され得る。周知のように、ベクター中にプロモーター含有フラグメントをcat遺伝子の上流の制限部位で導入することは、CAT活性の産生を生じる。これは標準的なCATアッセイにより検出され得る。この目的に適切であるベクターは周知であり、そして容易に入手可能である。２つのこのようなベクターは、pKK232-8およびpCM7である。従って、本発明のポリヌクレオチドの発現のためのプロモーターは、周知かつ容易に入手可能なプロモーターだけでなく、レポーター遺伝子を使用して前記の技術により容易に得られるプロモーターを含む。公知の細菌性プロモーターのうちで、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの発現に適切なものは、E．coli lacIおよびlacZ、ならびにT3およびT7プロモーター、gptプロモーター、λPR、PLプロモーターおよびtrpプロモーターである。公知の真核生物プロモーターうちで、本発明の目的において適切なものは、CMV即時初期プロモーター、HSVチミジンキナーゼプロモーター、初期および後期SV40プロモーター、レトロウイルスLTRのプロモーター（例えば、ラウス肉腫ウイルス（「RSV」）のプロモーター）およびメタロチオネインプロモーター（例えば、マウスメタロチオネイン-Iプロモーター）である。宿主細胞での発現に適切であるベクターおよびプロモーターの選択は周知の手順であり、そして発現ベクターの構築、宿主へのベクターの導入、および宿主での発現のために必要な技術は、当該分野において日常的な技術である。本発明はまた、先に議論した上記構築物を含む宿主細胞に関する。宿主細胞は、高等真核生物細胞（例えば、哺乳動物細胞）であり得るか、または下等真核生物細胞（例えば、酵母細胞）であり得る。あるいは宿主細胞は、原核生物細胞（例えば、細菌細胞）であり得る。構築物の宿主細胞への導入は、カルシウムホスフェートトランスフェクション、DEAE-デキストラン媒介性トランスフェクション、カチオン性脂質媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染または他の方法によってなされ得る。このような方法は、多くの標準的な研究室マニュアル（例えば、Davisら、BASIC METHODS IN MOLECULAR BIOL0GY，(1986)）に記載される。宿主細胞中の構築物は従来の様式で使用されて、組換え配列によりコードされる遺伝子産物を産生し得る。あるいは、本発明のポリペプチドは、従来のペプチド合成機により合成的に産生され得る。成熟タンパク質は、哺乳動物細胞、酵母、細菌または他の細胞において、適切なプロモーターの制御下で発現され得る。細胞非含有翻訳系がまた、本発明のDN A構築物から得られたRNAを使用してこのようなタンパク質を産生するために利用され得る。原核生物および真核生物宿主での使用のための適切なクローニングおよび発現ベクターは、Sambrookら、MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL，第２版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y．(1 989)により記載される。一般に、組換え発現ベクターは、複製起点、下流の構造配列の転写を指向する高度に発現した遺伝子から得られたプロモーター、およびベクターに曝した後のベクター含有細胞の単離を許容する選択マーカーを含む。プロモーターのうちで適切なものは、特に、3-ホスホグリセレートキナーゼ（「PGK」）のような糖分解性酵素、a-因子、酸ホスファターゼおよび熱ショックタンパク質をコードする遺伝子から得られたプロモーターである。選択マーカーは、E．coliのアンピシリン耐性遺伝子およびS．cerevisiaeのtrp1遺伝子を含む。本発明のポリペプチドをコードするDNAの高等真核生物による転写は、エンハンサー配列をベクター中に挿入することにより増加され得る。エンハンサーは、 DNAのシス作用エレメントであり、通常、所定の宿主細胞型においてプロモーターの転写活性を増加するように作用する約10〜300bpである。エンハンサーの例は、SV40エンハンサー（これは、複製起点の後期側のbp 100〜270に位置する）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーを含む。本発明のポリペプチドの異種構造配列をコードする本発明のポリヌクレオチドは、一般に、標準的な技術を使用して、発現のためのプロモーターに作動可能に結合されるようにベクター中に挿入される。ポリヌクレオチドは、転写開始部位がリボソーム結合部位に対して5'に適切に位置するように配置される。リボソーム結合部位は、発現されるポリペプチドの翻訳を開始するAUGに対して5'にある。一般に、開始コドン（通常AUG）で始まり、そしてリボソーム結合部位と開始A UGとの間に横たわる他のオープンリーディングフレームは存在しない。また、一般に、ポリペプチドの末端に翻訳停止コドンが存在し、そして転写領域の3'末端に適切に配置されたポリアデニル化シグナルおよび転写終結シグナルが存在する。翻訳されたタンパク質の、小胞体の管腔への、末梢空間への、または細胞外環境への分泌のために、適切な分泌シグナルが発現されるポリペプチドに組み込まれ得る。シグナルはポリペプチドに対して内因的であり得るか、またはそれらは異種シグナルであり得る。ポリペプチドは、改変された形態（例えば、融合タンパク質）で発現され得、そして分泌シグナルだけでなくさらなる異種機能領域を含み得る。従って、例えば、さらなるアミノ酸（特に荷電したアミノ酸）の領域が、宿主細胞中での、精製の間の、または続く操作および保存の間の安定性および持続性を改善するために、ポリペプチドのN末端に付加され得る。また、領域はまた、精製を容易にするためにポリペプチドに付加され得る。このような領域は、ポリペプチドの最後の精製の前に除去され得る。特に、分泌または排出を生じるための、安定性を改良するための、および精製を容易にするためのペプチド部分のポリペプチドへの付加は、当該分野において良く知られかつ日常的な技術である。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの増殖、維持、または発現のために適切である原核生物宿主は、Escherischia coli、Bacillus subtilisおよび Salmonella typhimuriumを含む。種々の種のPseudomonas、StreptomycesおよびS taphylococcusが、本発明の目的において適切な宿主である。さらに、当業者に公知の多くの他の宿主がまた本発明の目的において利用され得る。代表的であるが制限されない例として、細菌での使用に有用な発現ベクターは、周知のクローニングベクターpBR322(ATCC 37017)の遺伝的エレメントを含む市販のプラスミドから得られる選択マーカーおよび細菌の複製起点を含み得る。このような市販のベクターは、例えば、pKK223-3(Pharmacia Fine Chemicals，Upp sala，Sweden)およびGEM1(Promega Biotec，Madison，WI，USA)を含む。これらのpBR322「骨格」区分は、適切なプロモーターおよび発現される構造配列と合わせられる。適切な宿主株の形質転換および適切な細胞密度までの宿主株の増殖の後、選択されたプロモーターが誘導可能である場合、それは適切な手段（例えば、温度シフト、または化学誘導剤への曝露）により誘導され、そして細胞はさらなる期間培養される。次いで、細胞は代表的には遠心分離により採集され、物理学的または化学的手段により破壊され、そして得られた粗抽出物はさらなる精製にために保持される。タンパク質の発現に利用される微生物細胞は、凍結融解サイクル、ソニケーション、機械的破壊、または細胞溶解剤の使用を含む、任意の簡便な方法により破壊され得る。このような方法は、当業者に周知である。種々の哺乳動物細胞培養系が、同様に、発現のために利用され得る。哺乳動物発現系の例は、サル腎臓線維芽細胞のCOS-7系統（Gluzmanら、Cell 23:175(1981 )に記載される）を含む。適合性のベクターを発現し得る他の細胞系統は、例えば、C127、3T3、CHO、HeLa、ヒト腎臓293およびBHK細胞系統を含む。哺乳動物発現ベクターは、複製起点、適切なプロモーターおよびエンハンサーを含み、そしてまた適宜必要であるリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナーおよびアクセプター部位、転写終結配列、および5'隣接非転写配列（発現に必要である）を含む。本発明の目的における特定の好ましい実施態様において、SV40スプライス部位およびSV40ポリアデニル化部位から得られるDN A配列が、要求されるこれらのタイプの非転写遺伝的エレメントのために使用される。 hESF I、IIおよびIIIポリペプチドは、組換え細胞培養物から周知の方法により回収および精製され得る。これらの方法は、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈澱、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含む。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィー（「HPLC」）が精製のために利用され得る。タンパク質の再折り畳みのための周知の技術は、ポリペプチドが単離および／または精製の間に変性される場合、活性な高次構造を再形成するために利用され得る。本発明のポリペプチドは、自然の過程により精製された産物、化学合成手順の産物、および原核生物または真核生物宿主（例えば、細菌、酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞を含む）から組換え技術により産生された産物を含む。組換え産生手順において利用される宿主に依存して、本発明のポリペプチドはグリコシル化されてもされなくても良い。さらに、本発明のポリペプチドはまた、いくつかの場合において、宿主媒介性プロセスの結果として、最初の改変メチオニン残基を含み得る。 hESF I、IIおよびIIIポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、本発明に従って、種々の適用、特にhESF I、IIおよびIIIの化学的および生物学的特性を利用する適用のために使用され得る。さらなる適用は、細胞、組織、および器官の障害の診断および処置に関する。本発明のこれらの局面は、以下の議論でさらに例示される。ポリヌクレオチドアッセイ本発明はまた、相補的なポリヌクレオチドを検出するためのhESF I、IIおよび IIIポリヌクレオチドの使用（例えば、診断試薬）に関する。機能障害に関連する変異形態のhESF I、IIおよびIIIの検出は、hESF I、IIおよびIIIの過小発現、過剰発現、または改変された発現に起因する疾患または疾患に対する罹患性（例えば、遺伝的な喘息および子宮内膜ガンに対する罹患性）の診断の一助となり得るまたは規定し得る診断ツールを提供する。ヒトhESF I、IIおよびIII遺伝子に変異を有する個体は、種々の技術によりDNA レベルで検出され得る。診断のための核酸は、患者の細胞（例えば、血液、尿、唾液、組織生検および剖検材料由来）から得られ得る。ゲノムDNAが検出のために直接使用され得るか、または分析前にPCRを使用することにより酵素的に増幅され得る。PCR(Saikiら、Nature，324:163-166(1986))。RNAまたはcDNAはまた同じ様式で使用され得る。例えば、hESF I、IIおよびIIIをコードする核酸に相補的なPCRプライマーが、hESF I、IIおよびIIIの発現および変異を同定および分析するために使用され得る。例えば、欠失および挿入が、正常な遺伝子型と比較した増幅産物のサイズの変化により検出され得る。点変異は、増幅したDNAを、放射標識hESF I、IIおよびIII RNA配列、あるいは放射標識hESF I、IIおよびIIIアンチセンスDNA配列にハイブリダイズさせることにより同定され得る。完全にマッチした配列が、RNaseA消化によりまたは融解温度の差異により、ミスマッチを有する二本鎖と区別され得る。参照遺伝子と変異を有する遺伝子との間の配列の相違はまた、直接DNA配列決定により示され得る。さらに、クローニングされたDNAセグメントは、特定のDNA セグメントを検出するためのプローブとして利用され得る。このような方法の感度は、PCRまたは別の増幅方法の適切な使用により著しく増強され得る。例えば、配列決定プライマーは、改変PCRにより生成された二本鎖PCR産物または一本鎖テンプレート分子とともに使用される。配列決定は、放射性標識ヌクレオチドでの従来の手順により、または蛍光タグでの自動配列決定手順により行われる。 DNA配列の相違に基づく遺伝子試験は、（変性試薬を含むかまたは含まない）ゲル中のDNAフラグメントの電気泳動移動度の変化の検出により達成され得る。小さな配列欠失および挿入は、高解像度ゲル電気泳動により視覚化され得る。異なる配列のDNAフラグメントは、変性ホルムアミドグラジエントゲル上で区別され得る。ここでは、異なるDNAフラグメントの移動度は、ゲル中で、異なる位置で、それらの特定の融解または部分融解温度に従って遅延される（例えば、Myer sら、Science，230:1242(1985)を参照のこと）。特定の位置での配列変化はまた、ヌクレアーゼ保護アッセイ（例えば、RNase およびS1保護）または化学切断方法（例えば、Cottonら、Proc．Natl．Acad．Sc i．USA，85:4397-4401(1985)）により示され得る。従って、特定のDNA配列の検出は、ハイブリダイゼーション、RNase保護、化学切断、直接DNA配列決定または制限酵素の使用（例えば、制限フラグメント長の多型性（「RFLP」）およびゲノムDNAのサザンブロッティング）のような方法により達成され得る。より従来的なゲル電気泳動およびDNA配列決定に加えて、変異はまたインサイチュ分析により検出され得る。染色体アッセイ本発明の配列はまた、染色体の同定に有用である。配列は、個々のヒト染色体上の特定の位置に特異的に標的化され、そしてハイブリダイズし得る。さらに、染色体上の特定の部位を同定する必要性が現在存在する。実際の配列データ（反復性の多型）に基づくいくつかの染色体マーキング試薬が、現在、染色体位置をマークするために利用可能である。本発明に従うDNAの染色体へのマッピングは、これらの配列と疾患に関連する遺伝子とを相関させる重要な第１の工程である。本発明の目的における特定の好ましい実施態様において、本明細書中で開示されるcDNAは、hESF I、IIおよびIII遺伝子のゲノムDNAをクローニングするために使用される。これは、種々の周知の技術およびライブラリー（これは、一般に市販されている）を使用して達成され得る。ゲノムDNAが、インサイチュ染色体マッピングのために、この目的のための周知技術を使用して使用される。代表的には、染色体マッピングのための日常的な手順によれば、何回かの試行錯誤が、良好なインサイチュハイブリダイゼーションシグナルを与えるゲノムプローブを同定するために必要であり得る。さらに、いくつかの場合、配列は、cDNA由来のPCRプライマー（好ましくは、1 5〜25bp）を調製することにより染色体にマッピングされ得る。遺伝子の3'非翻訳領域のコンピューター分析が、ゲノムDNA中の１つのエキソンを超えてまたがらない（従って、増幅工程を複雑にする）プライマーを迅速に選択するために使用される。次いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのPCRスクリーニングのために使用される。プライマーに対応するヒト遺伝子を含むこれらのハイブリッドのみが増幅されたフラグメントを生じる。体細胞ハイブリッドのPCRマッピングは、特定のDNAを特定の染色体に割り当てるための迅速な手順である。同じオリゴヌクレオチドプライマーとともに本発明を使用することで、特定の染色体からのフラグメントのパネルまたは大きなゲノムクローンのプールにより、次善の位置決定が同様の様式で達成され得る。その染色体にマッピングするために同様に使用され得る他のマッピングストラテジーは、インサイチュハイブリダイゼーション、標識フローソートされた（labelled flow-sorted）染色体によるプレスクリーニング、および染色体特異的-cDNAライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによるプレ選択を含む。 cDNAクローンのメタフェース染色体拡散物への蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（「FISH」）は、正確な染色体位置を１工程で提供するために使用され得る。この技術は、50または60程度の短さのcDNAとともに使用され得る。この技術の総説については、Vermaら、HUMAN CHROMOSOMES:A MANUAL OF BASIC TECH NIQUES，Pergamon Press，New York(1988)を参照のこと。一旦配列が正確な染色体位置にマッピングされると、染色体上の配列の物理学的位置は遺伝子マップデータと相関され得る。このようなデータは、例えば、V. McKusick，MENDELIAN INHERITANCE IN MAN（Johns Hopkins University，Welch Medical Libraryを通じてオンラインで入手可能である）に見出される。次いで、遺伝子と同じ染色体領域にマッピングされた疾患との間の関係は、連結分析により同定される（物理学的に隣接する遺伝子の共同相続）。次いで、罹患した個体と正常な個体との間のcDNAまたはゲノム配列における相違を決定することが必要である。罹患した個体のいくつかまたは全てで変異が観察されるが、正常な個体では全く観察されない場合、変異は疾患の原因遺伝子であるようである。物理学的マッピングおよび遺伝子マッピング技術の現在の解像度により、疾患に関連する染色体領域に正確に位置されるcDNAは、50〜500の間の潜在的な原因遺伝子の１つであり得る（これは、１メガ塩基のマッピング解像度および20kbあたり１遺伝子を仮定する）。ポリペプチドアッセイ本発明はまた、細胞および組織ならびに生物学的液体（例えば、血液および尿）中のhESF I、IIおよびIIIタンパク質のレベルを検出するための定量および診断アッセイのような診断アッセイに関し、これは正常および異常なレベルの決定を含む。従って、例えば、正常コントロール組織サンプルと比較したhESF I、II およびIIIタンパク質の過剰発現まだは過小発現を検出するための本発明の診断アッセイは、例えば、新生物の存在を検出するために使用され得る。宿主から得られたサンプル中のタンパク質（例えば、本発明のhESF I、IIおよびIIIタンパク質）のレベルを決定するために使用され得るアッセイ技術は、当業者に周知である。このようなアッセイ方法は、ラジオイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウェスタンブロット分析およびELISAアッセイを含む。これらのうちで、ELISAが頻繁に好まれる。ELISAアッセイは、最初に、hESF I、IIおよびIIIに特異的な抗体、好ましくはモノクローナル抗体を調製する工程を含む。さらに、レポーター抗体が一般に調製される。これはモノクローナル抗体に結合する。レポーター抗体は、放射性試薬、蛍光試薬または酵素試薬（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ酵素）のような検出試薬に結合される。 ELISAを行うために、サンプルを宿主から除去し、そしてサンプル中のタンパク質に結合する固体支持体（例えば、ポリスチレンディッシュ）上でインキュベートする。次いで、ディッシュ上の任意の遊離のタンパク質結合部位をウシ血清アルブミンのような非特異的タンパク質とともにインキュベートすることによってカバーする。次に、モノクローナル抗体をディッシュ中でインキュベートし、その間モノクローナル抗体が、ポリスチレンディッシュに結合した任意のhESF I 、IIまたはIIIタンパク質に結合する。未結合のモノクローナル抗体を、緩衝液で洗浄除去する。西洋ワサビペルオキシダーゼに連結したレポーター抗体をディッシュ中に置き、その結果、レポーター抗体がhESF I、IIまたはIIIに結合した任意のモノクローナル抗体に結合する。次いで、未結合のレポーター抗体を洗浄除去する。次いで、ペルオキシダーゼ活性についての試薬（熱量測定用の基質を含む）をディッシュに添加する。固定化されたペルオキシダーゼは、hESF I、IIまたはIIIに一次および二次抗体を介して連結され、着色された反応生成物を生成する。所定の時間に発色した色の量は、サンプル中に存在するhESF I、IIまたは IIIタンパク質の量を示す。定量的な結果は、代表的には標準曲線への参照によって得られる。競合アッセイが使用され得、ここで固体支持体に結合したhESF I、IIまたはII Iに特異的な抗体、および標識されたhESF I、IIまたはIII、ならびに宿主由来のサンプルは、固体支持体上を通され、そして固体支持体に結合した検出された標識の量は、サンプル中のhESF I、IIまたはIIIの量に相関し得る。抗体ポリペプチド、そのフラグメントもしくは他の誘導体、またはそれらのアナログ、あるいはそれらを発現する細胞は、それらに対する抗体を産生する免疫原として使用され得る。これらの抗体は、例えば、ポリクローナルもしくはモノクローナル抗体であり得る。本発明はまた、キメラの、単鎖の、およびヒト化された抗体、ならびにFabフラグメント、またはFab発現ライブラリーの産物を含む。当該分野で公知の種々の手順が、このような抗体およびフラグメントの産生のために使用され得る。本発明の配列に対応するポリペプチドに対して産生された抗体は、ポリペプチドの動物への直接的注射によって、またはポリペプチドを動物（好ましくはヒトではない）に投与することによって得られ得る。次いで、このようにして得られた抗体は、ポリペプチドそれ自体に結合する。この様式で、ポリペプチドのフラグメントのみをコードする配列でさえ、天然のポリペプチド全体に結合する抗体を産生するために用いられ得る。次いで、このような抗体は、そのポリペプチドを発現する組織からポリペプチドを単離するために用いられ得る。モノクローナル抗体の調製のために、連続的細胞株培養によって産生された抗体を提供する任意の技術が用いられ得る。例には、ハイブリドーマ技術（Kohler ，G.およびMilstein，C.，Nature 256:495-497(1975)、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Kozborら、Immunology Today 4:72(1983)、およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのEBV-ハイブリドーマ技術（Coleら、77〜 96頁、MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY，Alan R．Liss，Inc．(1985 )）が含まれる。単鎖抗体の産生について記載される技術（米国特許第4,946,778号）は、本発明の免疫原性ポリペプチド産物に対する単鎖抗体を産生するために適合され得る。また、トランスジェニックマウス、または他の咄乳動物のような他の生物が、本発明の免疫原性ポリペプチド産物に対するヒト化抗体を発現するために用いられ得る。上記の抗体は、アフィニティークロマトグラフィーによる単離および/または精製のための固体支持体に抗体を結合させることによって、ポリペプチドを発現するクローンを単離するかもしくは同定するために、または本発明のポリペプチドを精製するために用いられ得る。従って、とりわけ、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、炎症、喘息、鼻炎、嚢胞性線維症、気道疾患を予防および/または処置するため、新生物形成、アトピーを予防および/または処置するため、ホスホリパーゼA₂を阻害するため、ポリ塩化ビフェニルに結合させるため、外来タンパク質の抗原性を低減させるため、単球および好中球の走化性およびファゴサイトーシスを阻害するため、血小板凝集を阻害するため、ヒト子宮におけるエイコサノイドレベルを調節するため、子宮内膜細胞の増殖を制御するために使用され得る。 hESF I、IIおよびIII結合分子およびアッセイ本発明はまた、hESF I、IIおよびIIIに結合するレセプター分子のような分子の同定のための方法を提供する。hESF I、IIおよびIIIに結合するタンパク質（例えば、レセプタータンパク質）をコードする遺伝子は、当業者に公知の多数の方法（例えば、リガンドパニングおよびFACSソーティング）によって同定され得る。このような方法は、多くの実験室マニュアル（例えば、Coliganら、Curre nt Protocols in Immunology 1(2):Chapter 5(1991)）に記載されている。例えば、発現クローニングは、この目的のために使用され得る。この目的のために、ポリアデニル化RNAが、hESF I、IIおよびIIIに対して応答性の細胞から調製され、cDNAライブラリーがこのRNAから作製され、このライブラリーはプールに分割され、そしてこのプールは、hESF I、IIおよびIIIに応答性でない細胞に個々にトランスフェクトされる。次いで、トランスフェクトされた細胞が標識されたhESF I、IIおよびIIIに曝露される。(hESF I、IIおよびIIIは、種々の周知の技術（放射ヨウ素標識または部位特異的タンパク質キナーゼに対する認識部位の包含の標準的な方法を含む）によって標識され得る。）曝露の後に、細胞を固定し、そしてサイトスタチン（cytostatin）の結合が測定される。これらの手順は、簡便にはガラススライド上で行われる。 hESF I、IIまたはIII結合細胞を産生したcDNAのプールが同定される。これらの陽性のプールからサブプールを調製し、宿主細胞中にトランスフェクトし、そして上記のようにスクリーニングする。繰り返しサブプーリングおよび再スクリーニングプロセスを用いて、推定の結合分子（例えば、レセプター分子）をコードする１つ以上の単一のクローンが単離され得る。あるいは、標識リガンドは、それが結合する分子（例えば、レセプター分子）を発現する細胞から調製される膜または膜抽出物のような細胞抽出物に光親和性連結され得る。架橋される物質は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（「PAGE」）によって分離され、そしてＸ線フィルムに曝露される。リガンドレセプターを含む標識複合体は、切り出され、ペプチドフラグメントに分離され、そしてタンパク質ミクロシークエンシングに供され得る。ミクロシークエンシングにより得られるアミノ酸配列を用いて、cDNAライブラリーをスクリーニングするための単一のまたは縮重オリゴヌクレオチドプローブを設計し、推定レセプター分子をコードする遺伝子を同定し得る。本発明のポリペプチドはまた、hESF I、IIおよびIII結合分子（例えば、細胞中のまたは細胞を含まない調製物中のレセプター分子）のhESF I、IIおよびIII 結合能力を評価するために用いられ得る。アゴニストおよびアンタゴニスト−アッセイおよび分子本発明はまた、化合物をスクリーニングし、細胞上でのhESF I、IIおよびIII の作用（例えば、レセプター分子のようなhESF I、IIおよびIII結合分子とのその相互作用）を増強またはブロックする化合物を同定するための方法を提供する。アゴニストは、hESF I、IIおよびIIIの天然の生物学的機能を増大させるかまたはhESF I、IIおよびIIIに類似する様式で機能する化合物であり、一方アンタゴニストは、これらの機能を減少または排除する化合物である。例えば、膜のような細胞区画、または膜調製物のようなそれらの調製物は、hE SF I、IIおよびIIIに結合する分子（例えば、hESF I、IIおよびIIIによって調整されるシグナリングまたは調節経路の分子）を発現する細胞から調製され得る。調製物は、標識hESF I、IIおよびIIIとともに、hESF I、IIおよびIIIアゴニストかまたはアンタゴニストであり得る候補分子の非存在下または存在下でインキュベートされる。候補分子の結合分子に結合する能力は、標識リガンドの減少した結合に反映される。無報酬で（すなわち、hESF I、IIおよびIII結合分子の結合に対するhESF I、IIおよびIIIの効果を誘導することなしに）結合する分子は、よいアンタゴニストである可能性が大きい。良好に結合しそしてhESF I、IIおよびIIIと同一であるかまたは密接に関連した効果を誘発する分子は、アゴニストである。潜在的なアゴニストおよびアンタゴニストのhESF I、IIおよびIII様効果は、例えば、細胞または適切な細胞調製物との候補分子の相互作用に続いてセカンドメッセンジャー系の活性を決定することによって、そしてhESF I、IIおよびIII またはhESF I、IIおよびIIIと同一の効果を誘発する分子と効果を比較することによって測定され得る。この点に関して有用であり得るセカンドメッセンジャー系は、AMPグアニル酸シクラーゼ、イオンチャンネル、またはホスホイノシチド加水分解セカンドメッセンジャー系を含むがこれらに限定されない。 hESF I、IIおよびIIIアンタゴニストのためのアッセイの別の例は、hESF I、I IおよびIIIならびに潜在的なアンタゴニストを膜結合hESF I、IIおよびIIIレセプター分子または組換えhESF I、IIおよびIIIレセプター分子と、競合阻害アッセイのための適切な条件下で組合わせる競合アッセイである。hESF I、IIおよび IIIは、レセプター分子に結合したhESF I、IIおよびIII分子の数が正確に決定され潜在的なアンタゴニストの有効性を評価し得るように、例えば、放射標識によって標識され得る。潜在的なアンタゴニストには、本発明のポリペプチドに結合し、それによってその活性を阻害または消失する小有機分子、ペプチド、ポリペプチド、および抗体が含まれる。潜在的アンタゴニストはまた、結合分子（例えば、レセプター分子）上の同一の部位にhESF I、IIおよびIII誘導化活性を誘導せずに結合し、それによってhESF I、IIおよびIIIを結合から排除することによって、hESF I、II およびIIIの作用を防止する小有機分子、ペプチド、ポリペプチド（例えば、密接に関連するタンパク質、または抗体）であり得る。潜在的なアンタゴニストには、ポリペプチドの結合部位に結合しそしてそれを占有し、それにより細胞性結合分子（例えば、レセプター分子）への結合を防止し、その結果、正常な生物学的活性が防止されるような小分子が含まれる。小分子の例には、小有機分子、ペプチド、またはペプチド様分子が含まれるがこれらに限定されない。他の潜在的なアンタゴニストには、アンチセンス分子が含まれる。アンチセンス技術は、遺伝子発現をアンチセンスDNAもしくはRNAを介して、またはトリプルヘリックス形成を介して制御するために用いられ得る。アンチセンス技術は、例えば、Okano，J．Neurochem．56:560(1991);OLIGODEOXYNUCLEOTIDES AS ANTISEN SE INHIBITORS OF GENE EXPRESSION，CRC Press，Boca Raton，FL(1988)において議論されている。トリプルヘリックス形成は、例えば、Leeら、Nucleic Acids Research 6:3073(1979);Cooneyら、Science 241:456(1988);およびDervanら、S cience 251:1360(1991)において議論されている。これらの方法は、ポリヌクレオチドの相補的DNAまたはRNAへの結合に基づいている。例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの5'コード部分は、約10〜40塩基対長のアンチセンスRNAオリゴヌクレオチドを設計するために用いられ得る。DNAオリゴヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子の領域に相補的になるように設計され、それによってhESF I、IIおよびIIIの転写および産生が防止される。アンチセンスRNAオリゴヌクレオチドは、mRNAにインビボでハイブリダイズし、そしてmRNA分子のhESF I、IIおよびIIIポリペプチドへの翻訳をブロックする。上記のオリゴヌクレオチドはまた、アンチセンスRNAまたはDNAがインビボで発現されてhESF I、IIおよびIIIの産生を阻害し得るように、細胞に送達され得る。アンタゴニストは、薬学的に受容可能なキャリア（例えば、本明細書中以下に記載されるようなもの）とともに組成物中において使用され得る。アンタゴニストはまた、例えば、喘息に対する遺伝された感受性を処置するために使用され得る。組成物本発明はまた、上記のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドまたはアゴニストもしくはアンタゴニストを含む組成物に関する。従って、本発明のポリペプチドは、細胞、組織、または器官での使用のための滅菌されていないかまたは滅菌されたキャリア（例えば、被験体への投与に適切な薬学的キャリア）と組み合わせて用いられ得る。このような組成物は、例えば、培地添加剤または治療的有効量の本発明のポリペプチドおよび薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を含む。このようなキャリアには生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組合せを含むがこれらに限定されない。処方物は投与の態様に適合するべきである。キット本発明はさらに、本発明の前述の組成物の１つ以上の成分を満たした１つ以上の容器を含む薬学的パックおよびキットに関する。このような容器には、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって指示された形態での注意書であって、ヒト投与のための製品の製造、使用、または販売のその機関による許可を反映するものが伴い得る。投与本発明のポリペプチドおよび他の化合物は、単独でまたは他の化合物（例えば、治療的化合物）と組み合わせて使用され得る。薬学的組成物は、とりわけ、例えば、局所、経口、経肛門、経膣、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内、または皮内経路による投与を含む、任意の効果的な、簡便な様式で投与され得る。薬学的組成物は、一般に特定の症状の処置または予防のために有効な量で投与される。一般に、組成物は、少なくとも約10μg/kg体重の量で投与される。ほとんどの場合には、１日あたり約８mg/kg体重を超えない量で投与される。好ましくは、ほとんどの場合、用量は、１日ごとに約10μg/kg体重〜約１mg/kg体重である。最適な投薬量は、各処置様式および症状について、その症状、重篤度、投与の経路、合併症的症状などを考慮に入れて、標準的な方法によって決定される。遺伝子治療 hESF I、IIおよびIIIポリヌクレオチド、ポリペプチド、ポリペプチドであるアゴニストならびにアンタゴニストは、このようなポリペプチドのインビボでの発現による本発明に従って、「遺伝子治療」としばしばいわれる処置様式において使用され得る。従って、例えば、患者由来の細胞が、エクスビボでポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、DNAまたはRNA）を用いて操作され得、次いで操作された細胞はそのポリペプチドで処置される患者に提供され得る。例えば、細胞は、本発明のポリペプチドをコードするRNAを含むレトロウイルスプラスミドベクターの使用によってエクスビボで操作され得る。このような方法は当該分野で周知であり、そして本発明におけるそれらの使用は、本明細書の教示から明らかである。同様に、インビボでのポリペプチドの発現のために、当該分野で公知の手順によってインビボで細胞が操作され得る。例えば、本発明のポリヌクレオチドは、上記のように、複製欠損レトロウイルスベクターにおける発現のために操作され得る。次いで、レトロウイルス発現構築物は、単離されそしてパッケージング細胞へ導入され得、パッケージング細胞がそこで目的の遺伝子を含む感染性のウイルス粒子を産生するように、本発明のポリペプチドをコードするRNAを含むレトロウイルスプラスミドベクターを用いて形質導入される。これらのプロデューサー細胞は、細胞をインビボで操作するためにそしてインビボでポリペプチドを発現するために患者に投与され得る。このような方法によって本発明のポリペプチドを投与するためのこれらおよび他の方法は、本発明の教示から当業者には明らかであるべきである。本明細書中上記のレトロウイルスプラスミドベクターがそれから由来し得るレトロウイルスには、モロニーマウス白血病ウイルス、牌臓壊死ウイルス、ラウス肉腫ウイスルおよびハーベイ肉腫ウイルスのようなレトロウイルス、ニワトリ白血病ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、アデノウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、ならびに乳ガンウイルスが含まれるが、これらに限定されない。１つの実施態様において、レトロウイルスプラスミドベクターは、モロニーマウス白血病ウイルスに由来する。このようなベクターは、ポリペプチドを発現するための１つ以上のプロモーターを含む。利用され得る適切なプロモーターには、レトロウイルスLTR;SV40プロモーター；およびMillerら、Biotechniques 7:980-990(1989)に記載されるヒトサイトメガロウイルス（CMV）プロモーター、または任意の他のプロモーター（例えば、真核生物細胞プロモーターのような細胞性プロモーター（ヒストン、RN AポリメラーゼIII、およびβアクチンプロモーターを含むがこれらに限定されない））が含まれるが、これらに限定されない。使用され得る他のウイルスプロモーターには、アデノウイルスプロモーター、チミジンキナーゼ（TK）プロモーター、およびB19パルボウイルスプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。適切なプロモーターの選択は、本明細書中に含まれる教示から当業者に明らかである。本発明のポリペプチドをコードする核酸配列は、適切なプロモーターの制御の下に置かれる。使用され得る適切なプロモーターには、アデノウイルス主要後期プロモーターのようなアデノウイルスプロモーター；またはサイトメガロウイルス(CMV)プロモーターのような異種プロモーター；呼吸器合胞体ウイルス（RSV）プロモーター；MMTプロモーターのような誘導性プロモーター；メタロチオネインプロモーター；熱ショックプロモーター；アルブミンプロモーター；ApoAI プロモーター；ヒトグロビンプロモーター；単純ヘルペスチミジンキナーゼプロモーターのようなウイルスチミジンキナーゼプロモーター；レトロウイルスLTR （本明細書中上記の改変レトロウイルスLTRを含む）；βアクチンプロモーター；およびヒト成長ホルモンプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。プロモーターはまた、ポリペプチドをコードする遺伝子を制御する天然のプロモーターであり得る。レトロウイルスプラスミドベクターは、パッケージング細胞株を形質導入してプロデューサー細胞株を形成するために用いられる。トランスフェクトされ得るパッケージング細胞の例には、PE501、PA317、Y-2、Y-AM、PA12、T19-14X、VT-1 9-17-H2、YCRE，YCRIP、GP+E-86、GP+envAml2、およびMiller，A.，Human Gene Therapy 1:5-14(1990)に記載されるDAN細胞株が含まれるが、これらに限定されない。ベクターは、当該分野で公知の任意の手段によりパッケージング細胞中へ形質導入され得る。このような手段には、エレクトロポレーション、リポソームの使用、およびCaPO₄沈澱が含まれるが、これらに限定されない。１つの代替において、レトロウイルスプラスミドベクターは、リポソーム中にカプセル化されるか、または脂質にカップリングされ、次いで宿主に投与され得る。プロデューサー細胞株は、感染性レトロウイルスベクター粒子を生成し、これはポリペプチドをコードする核酸配列を含む。次いで、このようなレトロウイルスベクター粒子は、真核生物細胞をインビトロまたはインビボのいずれかで形質導入するために用いられ得る。形質導入された真核生物は、ポリペプチドをコードする核酸配列を発現する。形質導入され得る真核生物細胞には、胚幹細胞、胚性癌腫細胞、ならびに造血幹細胞、肝実質細胞、線維芽細胞、筋芽細胞、ケラチノサイト、内皮細胞、および気管支上皮細胞が含まれるが、これらに限定されない。実施例本発明は以下の実施例により、さらに記載される。実施例を特定の実施態様を参照することで本発明を単に例示するために提供される。これらの例示は、ある特定の本発明の局面を例示する一方、制限を表現しないか、または開示した本発明の範囲を狭めるものではない。本明細書中で使用する特定の用語を上述の用語解説において説明する。全ての実施例を別に詳細に記載した場合を除き、当業者に周知でかつ日常的な標準的な技術を使用することにより実施した。以下の実施例の日常的な分子生物学技術を標準の研究室マニュアル（例えば、Sambrookら、MOLECULAR CLONING、A LABORATORY MANUAL（第2版）Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spr ing Harbor、N.Y．（1989））（本明細書中「Sambrook」という）で記載するように、実施され得る。以下の実施例に示す全ての部または量は、特に明記しない限り、重量による。特に記さない限り、以下の実施例におけるフラグメントのサイズ分離を、Samb rookおよび多数の他の参考文献（例えばGoeddelらに、Nucleic Acids Res．8、4 057（1980））のアガロースおよびポリアクリルアミドゲル電気泳動（「PAGE」）の標準技術を使用することにより実施した。。特に記載しない限り、連結を標準的な緩衝液、インキュベーション温度および時間（0.5μgのDNAにつきおよそ等モル量の連結されるDNAフラグメントおよび約 10ユニットのT4 DNAリガーゼ（「ligase」））を使用して達成した。実施例１細菌を使用したヒトhESF I，IIおよびIIIの発現および精製寄託したポリヌクレオチドにおけるヒトhESF I，IIまたはIIIをコードするDNA 配列を、ヒトhESF I、IIまたはIIIのアミノ酸カルボキシル末端配列および遺伝子の3'のベクター配列に特異的なPCRオリゴヌクレオチドプライマーを使用して増幅した。クローニングを容易にするための制限部位を含むさらなるヌクレオチドを、それぞれ5'および3'配列に加えた。 5'オリゴヌクレオチドプライマーを以下の配列を有した：下線が引かれたSph I制限部位を含み、開始AUG、続く図１（配列番号１）に示したヒトhESF Iコード配列の15のヌクレオチドをコードし、アミノ酸22（ロイシン）のコドンの第１塩基で始まる。下線が引かれたNcoI制限部位を含み、開始ATG、続く図２（配列番号３）に示したヒトhESF IIコード配列の16のヌクレオチドをコードし、アミノ酸22のコドンの第１塩基で始まる。これは下線が引かれたSphI制限部位を含み、開始ATG、続く図３（配列番号５）に示したヒトhESF IIIコード配列の16のヌクレオチドをコードする。 3'プライマーを以下の配列を有する。線が引かれたHind III制限部位、続く図１（配列番号１）に示したhESF I非コード配列の15のヌクレオチドに相補的な15のヌクレオチドを含み、終止コドンを含む。下線が引かれたHind III制限部位、続く図２（配列番号３）に示したhESF II非コード配列の15のヌクレオチドに相補的な終わりの15のヌクレオチドを含み、終止コドンを含む。 2）、これは下線が引かれたHind III制限部位、続く図３（配列番号５）に示したhESF III非コード配列に相補的な１８のヌクレオチドを含み、終止コドンを含む。制限部位は、細菌性発現ベクターpQE-60（hESF IおよびII）（Qiagen，Inc.）中の制限酵素部位にとって好都合であった。これをこれらの実施例において細菌性発現のために使用した。（Qiagen Inc．Chatsworth，CA）。pQE-60はアンピシリン抗生物質耐性（「Ampr」）をコードし、そして細菌性複製起点（「ori」）、IPTG誘導可能なプロモーター、リボソーム結合部位（「RBS」）、6-Hisタグおよび制限酵素部位を含む。増幅したヒトhESF I、IIおよびIII DNAおよびベクターpQE-60の両方を、Sph I およびHind III（hESF I）、NcoIおよびHindIII（hESF II）、ならびにSph1およびHindIII（hESF III）で消化し、次いで消化したDNAをともに連結した。制限したベクターへのhESF I DNAの挿入を、それぞれのコード領域を、ベクターのIPTG 誘導可能なプロモーターの下流および作動可能に配置し、そしてhESF I、IIおよびIIIの翻訳のために適切に配置された開始AUGにインフレームで配置した。連結混合物により、標準的な手順を使用してコンピテントE．coli細胞を形質転換した。このような手順はSambrookら、MOLECULAR CLONING：LABORATORY MANU AL（第2版）；Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、N ．Y．（1989）に記載される。lacリプレッサーを発現し、そしてカナマイシン耐性（「Kanr」）を与えるE．coli M15/rep4株（プラスミドpREP4の複数コピーを含む）を、本明細書で記載する例示的な実施例を実施する際に使用した。この株（これをhESF I、IIおよびIIIを発現するために適切である多くの株のうちの唯一の株である）はQiagenから市販されている。トランスフォーマントをアンピシリンの存在下で、LBプレート上で増殖するそれらの能力により同定した。プラスミドDNAを耐性コロニーから単離し、そしてクローン化したDNAの同一性を制限分析により確証した。所望の構築物を含むクローンを、一晩（「O/N」）アンピシリン（100μg/ml）およびカナマイシン（25μg/ml）の両方を補充したLB培地での液体培養において、増殖させた。 O/N培養物を使用して、約1：100〜1：250の希釈で、大培養物に接種した。細胞を光学密度600nm（「OD600」）で0.4と0.6との間にまで培養した。次いで、イソプロピル-B-D-チオガラクトピラノシド（「IPTG」）を、最終濃度が1mMとなるように添加し、lacリプレッサーを不活性化することにより、lacリプレッサー感受性プロモーターから転写を誘発した。細胞を、その後さらに３〜４時間インキュベートした。次いで、細胞を遠心分離により収穫し、そして標準的な方法により破壊した。封入体を日常的な収集技術を使用して破壊した細胞から精製し、そしてタンパク質を封入体から8M尿素で可溶化した。可溶化したタンパク質を含む 8M尿素溶液を、2×リン酸緩衝化生理食塩水（「PBS」）中のPD-10カラムに通過させ、これにより尿素を除去して、緩衝液を交換し、そしてタンパク質を再折り畳みさせた。タンパク質をクロマトグラフィのさらなる工程により精製して、エンドトキシンを除去した。次いで、これを無菌的に濾過した。無菌的に濾過したタンパク質調製物を、2×PBS中に、１mLあたり95マイクログラムの濃度で保存した。ポリアクリルアミドゲル電気泳動の標準的な方法による調製物の分析は調製物が約95%の予想した分子量を有するモノマーhESF I、IIおよびIIIを含むことを示した。実施例２バキュロウイルス発現系におけるヒトhESF I、IIおよびIIIのクローニングおよび発現寄託クローン内の全長ヒトhESF I、IIおよびIIIのタンパク質をコードするcDN A配列を、この遺伝子の5'および3'の配列に対応するPCRオリゴヌクレオチドプライマーを使用して増幅する。 TCT 3'（配列番号13）を有し、これはBamHI制限酵素部位（太字）、続いてkozak 配列（GCC ATC）および図１（配列番号１）のhESF Iの配列の20の塩基を含む； TCG GTG 3'（配列番号14）を有し、これはBamHI制限酵素部位（太字）、続いて図２（配列番号３）のhESF IIの配列の15の塩基を含む； CTG ATG GTC 3'（配列番号15）を有し、これはBamHI制限酵素部位（太字）、続いて図３（配列番号５）のhESF IIIの配列の15の塩基を含む。下記のように、発現ベクターに挿入されると、ヒトhESF I、IIまたはIIIをコードする増幅したフラグメントの5'末端は効率的なシグナルペプチドを提供する。真核生物細胞における翻訳の開始のための効率的なシグナルを（Kozak，M.、J ．Mol．Biol．196：947-950（1987）に記載のように）、構築物のベクター部分に適切に配置する。（配列番号16）を有し、これは下線が引かれたAsp718制限部位に続いてポリＡテールに対して相補的な18のヌクレオチドを含む； '（配列番号17）を有し、これを下線が引かれたAsp718制限に続いて図２（配列番号３）に示したhESF IIの非コード配列の15ヌクレオチドに相補的なヌクレオチドを含み、終止コドンを含む；AG TTA 3'（配列番号18）を有し、これは、下線が引かれたAsp718制限に続いて図3（配列番号、5）に示したhESF IIIの非コード配列の18のヌクレオチドに相補的なヌクレオチドを含み、終止コドンを含む。増幅したフラグメントを市販のキット（「Geneclean、」BIO 101 Inc.、La Jo lla、Ca.）を使用して１%アガロースゲルから単離する。次いで、フラグメントをそれぞれの制限酵素で消化し、そして１%アガロースゲルで再び精製する。このフラグメントを本明細書中でF2と命名する。標準的な方法を使用して（例えば、Summersら、MANUAL OF METHODS FOR BACUL OVIRUS VECTORS AND INSECT CELL CULTURE PROCEDURES、Texas Agricultural E xperimental Station Bulletin No.1555（1987）に記載される系）、ベクターpR GIを使用してhESF I、IIまたはIIIタンパク質をバキュロウイルス系で発現する。この発現ベクターはAutographa californica核多角体病ウイルス（AcMNPV）の強力なポリヘドリンプロモーターに続いて便利な制限部位を含む。シミアンウイルス40（「SV40」）のポリアデニル化部位は効率よいポリアデニル化のために使用する。組換えウイルスの簡単な選択のためにE.coli由来βガラクトシダーゼ遺伝子をポリヘドリンプロモーターと同じ方向に挿入し、そしてそれにポリヘドリン遺伝子のポリヘドリンポリアデニル化シグナルが続く。ポリヘドリン配列を野生型ウイルスDNAとの細胞媒介性相同組換えのためのウイルス配列に隣接させて、クローン化したポリヌクレオチドを発現する生存ウイルスを生成する。多くの他のバキュロウイルスベクターを、pA2（例えば提供したpAc373、pVL94 1およびpAcIM1）の代わりに使用し得る。当業者が容易に理解するように、構築物を転写、翻訳、輸送などのための適切に配置されたシグナルを提供する。とりわけ、このようなベクターをLuckowらVirology 170:31-39に記載する。プラスミドを、それぞれの制限酵素で消化し、次いでウシ腸ホスファターゼを用いて、当該分野で公知の日常的な手順を用いて、脱リン酸化する。次いで、DN Aを、市販キット（「Geneclean」BIO 101，Inc.、La Jolla，Ca.）を使用して1% アガロースゲルから単離する。このベクターDNAを本明細書中で「V2」と称する。フラグメントF2および脱リン酸化プラスミドV2を、T4 DNAリガーゼでともに連結する。E.coli HB101細胞を、連結混合物で形質転換し、そして培養プレート上に播種する。ヒトhESF I、IIまたはIII遺伝子を有するプラスミドを含む細菌をそれぞれの制限酵素を使用して個々のコロニーからのDNAを消化し、次いでゲル電気泳動により消化産物を分析することにより同定した。クローン化したフラグメントの配列をDNA配列決定により確証する。このプラスミドを本明細書中でpBa chESF I、IIまたはIIIと称する。５μgのプラスミドpBachESF I、IIまたはIIIを、1.0μgの市販の線形バキュロウイルスDNA（「BaculoGold^TMバキュロウイルスDNA」Pharmingen、San Diego、C A.）で、Felgnerら、Proc．Natl.Acad.Sci.USA 84：7413-7417（1987）に記載されるリポフェクション法を使用して同時トランスフェクトした。１μgのBaculoG old^TMウイルスDNAおよび5μgのプラスミドpBachESF I、IIまたはIIIを、50μlの無血清グレース培地（Life Technologies Inc.、Gaithersburg、MD）を含むマイクロタイタープレートの無菌ウェルで混合した。10μlのリポフェクチンおよび9 0μlのグレース培地を加えた後、混合し、そして15分間室温でインキュベートした。次いで、トランスフェクション混合物を、１mlの無血清グレース培地を含む 35mm組織培養プレートに播種したSf9昆虫細胞（ATCC CRL 1711）に滴下して加える。プレートを前後に揺り動かして新しく加えた溶液を混ぜる。次いで、プレートを、５時間27℃でインキュベートする。５時間後、トランスフェクション溶液をプレートから除去し、そして10%ウシ胎児血清を補充したグレース昆虫培地１m lを加える。プレートをインキュベーターへと戻し、そして培養を27℃で４日間続ける。４日後、上清を回収し、そしてSummersおよびSmith（上記）により記載されるようにプラークアッセイを実施する。「Blue Gal」（Life Technologies Inc．G aithersburg）を含むアガロースゲルを使用してgal発現しているクローンの同定および単離を容易にし得る。これは青色染色プラークを産生する。（このタイプの「プラークアッセイ」の詳細な説明はまた、昆虫細胞培養およびバキュロウイルス学のための使用者のガイド（Life Technologies Inc.、Gaithersburg、９〜 10頁）中に見い出され得る）。連続希釈の４日後、ウイルスを細胞に加える。適切なインキュベーション後、青色染色プラークをエッペンドルフピペットの先端で拾う。次いで、組換えウイルスを含む寒天を、200μlのグレース培地を含むエッペンドルフチューブで再懸濁する。寒天を簡単な遠心分離により除去し、そして組換えバキュロウイルスを含む上清を使用して35mmのディッシュにまかれたSf9細胞を感染させる。４日後に、これらの培養ディッシュの上清を回収し、次いで、それらを４℃で保存する。適切に挿入したhESF I、IIまたはIIIを含むクローンを、制限マッピングおよび配列決定を含むDNA分析により同定する。これを、本明細書中でV-hESF I、II またはIIIと命名する。 Sf9細胞を、10%熱不活化FBSで補充したグレース培地で増殖する。細胞を、組換えバキュロウイルスV-hESF I、IIまたはIIIで約2の感染多重度（「MOI」）で感染させる。６時間後に、培地を除去しそしてメチオニンおよびシステインを含まないSF900 II培地（Life Technologies Inc.、Gaithersburgから入手可能)に交換する。42時間後、５μCiの35Sメチオニンおよび５μCiの35Sシステイン（Am ershamから入手可能）を加える。細胞を、16時間さらにインキュベートし、次いで、それらを遠心分離により回収し、溶解し、そして標識タンパク質を、SDS-PA GEおよびオートラジオグラフィーにより可視化する。実施例３ COS細胞におけるhESF I、IIおよびIIIの発現発現プラスミド、hESF I、IIおよびIII HAを、hESF I、IIおよびIIIをコードするcDNAを発現ベクターpcDNAI/Amp（これをInvitrogen Inc.から得られ得る）にクローニングすることにより作製する。発現ベクターpcDNAI/ampを以下を含む：（1）E.coliおよび他の原核生物細胞における増殖に効果的なE.coli複製起点；（2）プラスミド含有原核生物細胞の選択のためのアンピシリン耐性遺伝子；（3）真核生物細胞における増殖のためのSV40複製起点；（4）CMVプロモーター、ポリリンカー、SV40イントロン、およびポリリンカー内の制限部位によりcDNAが簡便にCMVプロモーターの発現調節下に置かれ得そしてSV40イントロンおよびポリアデニル化シグナルに作動可能に連結し得るように配置したポリアデニル化シグナル。全長hESF I、IIおよびIII前駆体ならびにその3'末端においてインフレームで融合したHAタグをコードするDNAフラグメントを、組換えタンパク質発現がCMVプロモーターにより指向されるように、ベクターのポリリンカー領域にクローン化した。HAタグはWilsonら、Cell 37:767(1984)に記載されるインフルエンザ血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する。標的タンパク質へのHAタグの融合はHAエピトープを認識する抗体での組換えタンパク質の簡単な検出を可能にする。プラスミド構築ストラテジーは以下のようである：寄託クローンのhESF I、IIおよびIII cDNAを、便利な制限部位を含んだプライマーを使用して増幅する。E.coliおよびS.fugiperdaにおけるhESF I、IIおよびI IIの発現のための発現ベクターの構築に関しては大部分が上記される。発現したhESF I、IIおよびIIIの検出、精製および特徴付けを容易にするために、プライマーの一つは上記の血液凝集素タグ（「HAタグ」）を含む。この実施例で使用する適切なプライマーは以下を含む：下線を引いたBamHI部位、AUG開始コドンを含む5'プライマーは、以下の配列を下線を引いたXbal部位、終止コドン、HAタグ、および15bpの3'コード配列（3' 末端）を含む3'プライマーを以下の配列を有する： PCR増幅したDNAフラグメントおよびベクター（pcDNAI/Amp）を消化し、次いで連結した。連結混合物で、E.coli株SURE（Stratagene Cloning Systems、11099 North Torrey Pines Road、La Jolla、CA 92037から入手可能）を形質転換し、次いでアンピシリン培地プレートに、形質転換した培養物を塗布し、アンピシリン耐性コロニーの増殖を可能にするようにインキュベートした。プラスミドDNA を耐性コロニーから単離し、そしてhESF I、IIおよびIIIをコードするフラグメントの存在について制限分析およびゲルサイジングにより検査する。組換えhESF I、IIおよびIIIの発現のために、DEAE-DEXTRANを使用して、COS細胞を発現ベクターで、上記のように（例えば、Sambrookら、MOLECULAR CLONING ：A LABORATORY MANUAL、Cold Spring Laboratory Press，Cold Spring Harbor 、New York（1989）に記載するように）トランスフェクトする。細胞をhESF I、 IIおよびIIIのベクターによる発現のための条件下でインキュベートする。 hESF I、IIおよびIIIのHA融合タンパク質の発現を、放射能標識および免疫沈降法により、例えばHarlowら、ANTIBODIES：A LABORATORY MANUAL（第2版）；Co ld Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、New York（1988）で記載される方法を使用して検出する。この目的のため、トランスフェクションの２日後、細胞を、８時間35Sシステインを含む培地中でのインキュベーションにより、標識する。細胞および培地を回収し、そして細胞を洗浄し、そして界面活性剤含有RIPA緩衝液（150mM NaCl、1% NP-40、0.1% SDS、1% NP-40、0.5% DOC 、50mM TRlS、pH 7.5）（Wilsonら、上記により記載する）で溶解する。タンパク質を、HA-特異的なモノクローナル抗体を使用して、細胞溶解物からおよび培養培地から沈澱させる。次いで、沈澱タンパク質をSDS-PAGEゲルおよびオートラジオグラフィーにより分析する。予想したサイズの発現産物が細胞溶解物に見られ、それはネガティブコントロールに見られない。実施例４ hESF I IIおよびIIIの発現の組織分布ノーザンブロット分析を、ヒト組織内のhESF I、IIおよびIIIの発現のレベルを調べるために、特にSambrookらにより記載される方法（上記）を使用して実行する。全細胞性RNA試料を、RNAzol^TMBシステム（Biotecx Laboratories、Inc ．6023 South Loop East，Houston，TX 77033）で単離する。約10μgの全量RNAを、組織サンプルから単離する。RNAを、強力な変性条件下において1%アガロースゲル電気泳動によりサイズ分離する。RNAをゲルからナイロンフィルターにブロットし、次いでこのフィルターを、検出可能な標識をつけたポリヌクレオチドプローブに対するハイブリダイゼーションのために調製する。 hESF I、IIおよびIIIをコードするmRNAを検出するプローブとして、寄託クローンにおけるcDNA挿入物のコード領域のアンチセンス鎖を高標識活性に標識する。cDNAを、プライマー伸長法により、Prime-Itキット（Stratageneから入手可能）を使用して、標識する。反応を、50ngのcDNAを使用し、供給元により推薦される標準的な反応プロトコルに従って実施する。標識したポリヌクレオチドを、Se lect-G-50カラム（5Prime-3Prime，Inc．5603 Arapahoe Road、Boulder、CO 803 03から得られる）を使用するカラムクロマトグラフィにより他の標識した反応成分から分離精製する。標識したプローブを、1,000,000cpm/mlの濃度で、7% SDS、0.5 M NaPO₄（pH 7 .4）の小体積中で65℃にて一晩、フィルターにハイブリダイズさせる。その後、プローブ溶液を水抜きし、そしてフィルターを室温で２回および60℃ で２回、0.5 ｘ SSC．0.1% SDSで洗浄する。次いで、フィルターを乾燥し、そして-70℃で一晩で増感スクリーンを用いてフィルムに曝露する。実施例５ヒトhESF I、IIおよびIIIの遺伝子治療的発現線維芽細胞を、皮膚生検により、被験体から得る。得られた組織を、組織培養培地に配置し、そして小片に分ける。組織の小さな塊を、組織培養フラスコの湿った表面に配置し、各フラスコあたり約10断片を配置する。フラスコを倒置し、きつく閉じ、そして室温で一晩放置する。室温で24時間後、フラスコを逆にし（組織の塊はフラスコの底に固定されるままである）、そして新鮮な培地を加える（例えば10％FBS、ペニシリンおよびストレプトマイシンを有するハムF12培地）。次いで、組織を37℃で約1週間インキュベートする。この時間において、新鮮な培地を加え、そしてその後数日ごとに交換する。さらに２週培養後、線維芽細胞の単層が形成する。単層を、トリプシン処理して、そしてより大きいフラスコに播いた。発現されるべきフラグメントをクローニングするために、遺伝子治療のためのベクターを、制限酵素で消化する。消化したベクターを、ウシ腸ホスファターゼで自己連結を防ぐために処理する。脱リン酸化した、線形ベクターをアガロースゲルで分画し、そして精製する．活性hESF I、IIおよびIIIを発現し得るhESF I、IIおよびIIIcDNAを、単離する。必要に応じて、フラグメントの末端を、ベクターにクローニングするために改変する。例えば、5'側の突出をDNAポリメラーゼで処理して平滑末端を作製し得る。3'側の突出末端を、Slヌクレアーゼを用いて除去し得る。リンカーをT4 DNA リガーゼで平滑末端に連結し得る。等量のモロニーマウス白血病ウイルス線形骨格およびhESF I、IIまたはIIIフラグメントをいっしよに混合し、T4 DNAリガーゼを使用して結合する。連結混合物を使用し、E.coliを形質転換させ、次いで細菌をカナマイシン含有寒天上へ塗布する。カナマイシン表現型および制限分析により、ベクターが適切に挿入した遺伝子を有することを検証する。パッケージング細胞を、組織培養物中で、10%仔ウシ血清（CS）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むダルベッコ改変Eagles培地（DMEM）中でコンフルエントな濃度にまで増殖する。hESF I、IIまたはIIIの遺伝子を含むベクターを、標準的な技術により、パッケージング細胞に導入する。hESF I、IIまたはII Iの遺伝子を含む感染性のウイルス性粒子をパッケージング細胞から回収する。これは現在プロデューサー細胞と呼ばれる。新鮮な培地をプロデューサー細胞に加え、そして適切なインキュベーション時間後、培地をコンフルエントなプロデューサー細胞のプレートから回収する。感染性ウイルス粒子を含む培地を、ミリポアフィルターにより濾過して、分離したプロデューサー細胞を除去する。次いで、濾過した培地を使用して、線維芽細胞を感染させる。培地を、線維芽細胞のサブコンフルエントなプレートから除去し、そして濾過した培地で迅速に交換する。Polybrene（Aldrich）を、形質導入を容易にするために培地に含め得る。適切なインキュベーションの後、培地を除去し、そして新鮮な培地へと交換する。ウイルスの力価が高い場合、実質的に全ての線維芽細胞を感染するので選択は必要でない。力価が低い場合、拡大について形質転換した細胞を選択するために、neoまたはhisのような選択マーカーを有するレトロウイルスベクターを使用することは必要である。次いで、操作した線維芽細胞を、単独でまたはcytodex 3ビーズのようなマイクロキャリアビーズ上でコンフルエントにまで増殖させた後、ラットに注射し得る。注射した線維芽細胞はhESF I、IIまたはIIIの産物を産生し、そしてタンパク質の生物学的活性が宿主へと運ばれる。本発明を以上の説明および実施例において特に記載した方法とは別な方法で実施され得ることを明らかである。本発明の多くの改変および変形を上記の教示を考慮することにより可能であり、そして、それゆえに添付の請求の範囲の範囲内である。

【手続補正書】【提出日】１９９８年１１月１２日（１９９８．１１．１２）【補正内容】請求の範囲１．(a)配列番号２のアミノ酸１から69を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも70%の同一性を持つポリヌクレオチド； (b)配列番号４に示すアミノ酸１からアミノ酸69を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも70%の同一性を持つポリヌクレオチド； (c)配列番号６に示すアミノ酸１からアミノ酸74を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも70%の同一性を持つポリヌクレオチド； (d)(a),(b)または(c)のポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチド；および (e)(a),(b),(c)または(d)のポリヌクレオチドの少なくとも15塩基を含むポリヌクレオチドからなる群より選択されるメンバーを含む、単離されたポリヌクレオチド。２．前記ポリヌクレオチドがDNAである、請求項１に記載のポリヌクレオチド。３．前記ポリヌクレオチドがRNAである、請求項１に記載のポリヌクレオチド。４．前記ポリヌクレオチドがゲノムDNAである、請求項１に記載のポリヌクレオチド。５．配列番号２のアミノ酸１〜69を含むポリペプチドをコードする、請求項２に記載のポリヌクレオチド。６．配列番号４のアミノ酸１〜69を含むポリペプチドをコードする、請求項２に記載のポリヌクレオチド。７．配列番号６のアミノ酸１〜74を含むポリペプチドをコードする、請求項２に記載のポリヌクレオチド。８．(a)ATCC寄託番号97401に含まれるヒトcDNAによって発現されるアミノ酸配列を持つ成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド； (b)ATCC寄託番号97402に含まれるヒトcDNAによって発現されるアミノ酸配列を持つ成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド； (c)ATCC寄託番号97403に含まれるヒトcDNAによって発現されるアミノ酸配列を持つ成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド； (d)(a)，(b)または(c)のポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチド；および (e)(a)，(b),(c)または(d)のポリヌクレオチドの少なくとも１５塩基を含むポリヌクレオチドからなる群より選択されるメンバーを含む、単離されたポリヌクレオチド。９．配列番号１のヌクレオチド106からヌクレオチド312を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。１０．配列番号３のヌクレオチド103からヌクレオチド309を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。１１．配列番号５のヌクレオチド109からヌクレオチド330を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。１２．請求項２に記載のDNAを含むベクター。１３．請求項１２に記載のベクターを含む宿主細胞。１４．ポリペプチドを産生するプロセスであって、前記DNAによってコードされるポリペプチドを請求項１３に記載の宿主細胞から発現する工程を含む、プロセス。１５．ポリペプチドを発現する細胞を産生するためのプロセスであって、細胞がベクター内のヒトcDNAによってコードされるポリペプチドを発現するように、請求項１２に記載のベクターで細胞を遺伝的に操作する工程を含む、プロセス。１６．(a)配列番号２のアミノ酸１〜69を含むポリペプチド； (b)配列番号４のアミノ酸１〜69を含むポリペプチド； (c)配列番号６のアミノ酸１〜74を含むポリペプチド； (d)(a)、(b)または(c)のポリペプチドと少なくとも70%が同一であるポリペプチドからなる群より選択されるメンバーを含む、ポリペプチド。１７．前記ポリペプチドが配列番号２のアミノ酸１からアミノ酸69を含む、請求項１６に記載のポリペプチド。１８．前記ポリペプチドが配列番号４のアミノ酸１からアミノ酸69を含む、請求項１６に記載のポリペプチド。１９．前記ポリペプチドが配列番号６のアミノ酸１からアミノ酸74を含む、請求項１６に記載のポリペプチド。２０．請求項１６のポリペプチドの活性化を阻害する化合物。２１．hESF I、IIまたはIIIを必要とする患者を処置するための薬学的組成物であって、請求項１６に記載のポリペプチドの治療的に有効な量を含む、薬学的組成物。２２．hESF I 、IIまたはIIIを必要とする患者を処置するための薬学的組成物であって、請求項１６に記載のポリペプチドをコードし、そしてインビボで該ポリペプチドを治療的に有効な量で発現するDNAを含む、薬学的組成物。２３．hESF I、IIまたはIIIポリペプチドを阻害することが必要である患者を処置するための薬学的組成物であって、治療的に有効な量の請求項２０に記載の化合物を含む、薬学的組成物。２４．請求項１６に記載のポリペプチドの過小発現に関連する疾患またはその疾患に対する罹患性を診断するためのプロセスであって、該ポリペプチドをコードする核酸配列中の変異を決定する工程を包含する、プロセス。２５．診断プロセスであって、宿主由来のサンプル中の請求項１６に記載のポリペプチドの存在について分析する工程を包含する、プロセス。２６．請求項１６に記載のポリペプチドに結合し、そして該ポリペプチドの活性化を阻害する化合物を同定するための方法であって：その表面上でポリペプチドのためのレセプターを発現する細胞を、分析的に検出可能なhESF I、IIまたはIIIポリペプチドおよび化合物と、レセプターへの結合を許容する条件下で接触させる工程、該レセプターは、化合物のレセプターへの結合に応答して検出可能なシグナルを提供し得る第２の成分に関連する；および、化合物がレセプターに結合し、そして該レセプターを阻害するかどうかを、hE SF I、IIまたはIIIとレセプターとの相互作用から生じるシグナルの不在を検出することにより決定する工程、を包含する、方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 15/00 Ａ６１Ｋ 31/00 ６１５ 17/00 ６１７ 27/16 ６２７Ｈ 29/00 ６２９ 35/00 ６３５ 43/00 ６４３ＤＡ６１Ｋ 38/00 45/00 45/00 48/00 48/00 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 ＺＣ１２Ｐ 21/02 33/50 ＴＧ０１Ｎ 33/15 Ｐ 33/50 33/566 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ 33/566 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者ユ，ゴ―リエンアメリカ合衆国メリーランド 20878, ダーネスタウン，ストローベールレーン 13524 (72)発明者ゲンツ，ライナーエル. アメリカ合衆国メリーランド 20904, シルバースプリング，フェアランドパークドライブ 13404

Claims

【特許請求の範囲】１．(a)配列番号２のアミノ酸１から69を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも70%の同一性を持つポリヌクレオチド； (b)配列番号４に示すアミノ酸１からアミノ酸69を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも70%の同一性を持つポリヌクレオチド； (c)配列番号６に示すアミノ酸１からアミノ酸74を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも70%の同一性を持つポリヌクレオチド； (d)(a),(b)または(c)のポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチド；および (e)(a),(b),(c)または(d)のポリヌクレオチドの少なくとも15塩基を含むポリヌクレオチドからなる群より選択されるメンバーを含む、単離されたポリヌクレオチド。２．前記ポリヌクレオチドがDNAである、請求項１に記載のポリヌクレオチド。３．前記ポリヌクレオチドがRNAである、請求項１に記載のポリヌクレオチド。４．前記ポリヌクレオチドがゲノムDNAである、請求項１に記載のポリヌクレオチド。５．配列番号２のアミノ酸１〜69を含むポリペプチドをコードする、請求項２に記載のポリヌクレオチド。６．配列番号４のアミノ酸１〜69を含むポリペプチドをコードする、請求項２に記載のポリヌクレオチド。７．配列番号６のアミノ酸１〜74を含むポリペプチドをコードする、請求項２に記載のポリヌクレオチド。８．(a)ATCC寄託番号97401に含まれるヒトcDNAによって発現されるアミノ酸配列を持つ成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド； (b)ATCC寄託番号97402に含まれるヒトcDNAによって発現されるアミノ酸配列を持つ成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド； (c)ATCC寄託番号97403に含まれるヒトcDNAによって発現されるアミノ酸配列を持つ成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド； (d)(a)，(b)または(c)のポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチド；および (e)(a)，(b),(c)または(d)のポリヌクレオチドの少なくとも１５塩基を含むポリヌクレオチドからなる群より選択されるメンバーを含む、単離されたポリヌクレオチド。９．配列番号１のヌクレオチド106からヌクレオチド312を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。１０．配列番号３のヌクレオチド103からヌクレオチド309を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。１１．配列番号５のヌクレオチド109からヌクレオチド330を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。１２．請求項２に記載のDNAを含むベクター。１３．請求項１２に記載のベクターを含む宿主細胞。１４．ポリペプチドを産生するプロセスであって、前記DNAによってコードされるポリペプチドを請求項１３に記載の宿主細胞から発現する工程を含む、プロセス。１５．ポリペプチドを発現する細胞を産生するためのプロセスであって、細胞がベクター内のヒトcDNAによってコードされるポリペプチドを発現するように、請求項１２に記載のベクターで細胞を遺伝的に操作する工程を含む、プロセス。１６．(a)配列番号２のアミノ酸１〜69を含むポリペプチド； (b)配列番号４のアミノ酸１〜69を含むポリペプチド； (c)配列番号６のアミノ酸１〜74を含むポリペプチド； (d)(a)、(b)または(c)のポリペプチドと少なくとも70%が同一であるポリペプチドからなる群より選択されるメンバーを含む、ポリペプチド。１７．前記ポリペプチドが配列番号２のアミノ酸1からアミノ酸69を含む、請求項１６に記載のポリペプチド。１８．前記ポリペプチドが配列番号４のアミノ酸１からアミノ酸69を含む、請求項１６に記載のポリペプチド。１９．前記ポリペプチドが配列番号６のアミノ酸1からアミノ酸74を含む、請求項１６に記載のポリペプチド。２０．請求項１６のポリペプチドの活性化を阻害する化合物。２１．hESF I、IIまたはIIIを必要とする患者を処置するための方法であって、請求項１６に記載のポリペプチドの治療的に有効な量を患者に投与する工程を含む、方法。２２．前記治療的に有効な量のポリペプチドが、該ポリペプチドをコードするDN Aを患者に投与し、そしてインビボで該ポリペプチドを発現することにより投与される、請求項２１に記載の方法。２３．hESF I、IIまたはIIIポリペプチドを阻害することが必要である患者を処置するための方法であって、治療的に有効な量の請求項２０に記載の化合物を患者に投与する工程を包含する、方法。２４．請求項１６に記載のポリペプチドの過小発現に関連する疾患またはその疾患に対する罹患性を診断するためのプロセスであって、該ポリペプチドをコードする核酸配列中の変異を決定する工程を包含する、プロセス。２５．診断プロセスであって、宿主由来のサンプル中の請求項１６に記載のポリペプチドの存在について分析する工程を包含する、プロセス。２６．請求項１６に記載のポリペプチドに結合し、そして該ポリペプチドの活性化を阻害する化合物を同定するための方法であって：その表面上でポリペプチドのためのレセプターを発現する細胞を、分析的に検出可能なhESF I、IIまたはIIIポリペプチドおよび化合物と、レセプターへの結合を許容する条件下で接触させる工程、該レセプターは、化合物のレセプターへの結合に応答して検出可能なシグナルを提供し得る第２の成分に関連する；および、化合物がレセプターに結合し、そして該レセプターを阻害するかどうかを、hE SF I、IIまたはIIIとレセプターとの相互作用から生じるシグナルの不在を検出することにより決定する工程、を包含する、方法。