JP2000119292A

JP2000119292A - アザロマイシンｓｃ類及び細胞質ホスホリパーゼａ２阻害剤

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Publication number: JP2000119292A
Application number: JP28739998A
Authority: JP
Inventors: Kazuyoshi Yazawa; 一良矢澤; Yuiko Shinohara; 結子篠原; Tsutomu Shinohara; 力篠原; Daisuke Kamimura; 大輔上村; Kiyotake Suenaga; 聖武末永; Kaoru Yamada; 薫山田
Original assignee: Sagami Chemical Research Institute
Current assignee: Sagami Chemical Research Institute
Priority date: 1998-10-09
Filing date: 1998-10-09
Publication date: 2000-04-25

Abstract

(57)【要約】【課題】抗炎症剤または抗腫瘍剤及び新規な構造を有
するアザロマイシンＳＣ類を提供する。【解決手段】下記一般式【化１】（式中、Ｒ¹からＲ¹¹は独立して水素原子、低級アルキ
ル基またはアシル基を、Ｒ¹²は水素原子または低級アル
キル基を表す。）で表されるアザロマイシンＳＣ類及び
それを有効成分とする抗炎症剤。【効果】アザロマイシンＳＣ類は細胞質ホスホリパー
ゼＡ２阻害活性を持ち、例えば、抗炎症剤等の医薬とし
ての用途を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は細胞質ホスホリパー
ゼＡ２阻害活性を持つアザロマイシンＳＣ類及びその細
胞質ホスホリパーゼＡ２阻害剤としての用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】炎症反応は有害な刺激が生体に侵入した
場合に発効される一種の生体防御作用であるが、結果と
して腫れ、痛み、臓器機能障害などの支障を伴い、致死
的であることも少なくない。具体的には外部からの作用
に対する一型アレルギーに伴う急性の炎症から、腎炎や
リウマチ性疾患による慢性の炎症まで、その原因や発症
過程、及び症状は極めて広範囲、かつ複雑である。この
対症療法剤として用いられるのが抗炎症剤と呼ばれる物
で、ステロイド抗炎症剤と非ステロイド抗炎症剤に大別
され、各種糖質コルチコイドやインドメタシン等が代表
として挙げられる。しかし、ステロイド系抗炎症剤は、
種々の蛋白性メジエーターを含む蛋白合成阻害作用を持
ち、薬理効果が広範囲であり治癒効果も大きいものの重
篤な副作用を引き起こすことが知られている。またこれ
らの薬理効果と副作用の分離はほぼ不可能であることも
最近明らかにされた。一方、非ステロイド系抗炎症剤
は、シクロオキシゲナーゼ阻害（プロスタグランジン産
生抑制）作用が主要薬理作用であるため効果が限定され
る。そのため新たな薬理作用に基づく抗炎症剤の開発が
求められている。細胞質ホスホリパーゼＡ２は極く最近
その存在が明らかにされた酵素であり、その活性化によ
り主な炎症惹起メジエーターであるプロスタグランジ
ン、ロイコトリエン、ＰＡＦの酵素的産生が共通して開
始されることが知られている。従って細胞質ホスホリパ
ーゼＡ２阻害活性を持つ物質は、副作用の少ない新たな
抗炎症剤として注目されている。

【０００３】ストレプトミセス属に属する微生物培養液
から既に、下記式

【０００４】

【化３】

【０００５】で表される化合物群が単離されており（J.
Am. Chem. Soc., 104, 4129, 1982;Chem. Pharm. Bul
l., 30, 1669, 1982; Helv. Chim. Acta, 66, 226, 198
3; J.Antibiotics, 43, 639, 1990.）、抗真菌作用が報
告されている。しかし、これらは全て１８位またはそれ
に相当する位置に水酸基を有しており、この位置が置換
基を有していない構造のものはこれまでに報告されてい
ない。またこれらの化合物群が細胞質ホスホリパーゼＡ
２阻害活性を持つという報告も無い。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】そこで本発明は、細胞
質ホスホリパーゼＡ２阻害活性を持つ抗炎症性物質を提
供することを目的とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは微生物の培
養液に含まれる成分を検索した結果、前記一般式（１）
で表されるアザロマイシンＳＣ類が、細胞質ホスホリパ
ーゼＡ２阻害活性を有することを見出し、本発明を完成
した。

【０００８】すなわち、本発明は下記一般式（１）

【０００９】

【化４】

【００１０】（式中、Ｒ¹からＲ¹¹は独立して水素原
子、低級アルキル基またはアシル基を、Ｒ¹²は水素原子
または低級アルキル基を表す。）で表されるアザロマイ
シンＳＣ類及び下記一般式（１）

【００１１】

【化５】

【００１２】（式中、Ｒ¹からＲ¹¹は独立して水素原
子、低級アルキル基またはアシル基を、Ｒ¹²は水素原子
または低級アルキル基を表す。）で表されるアザロマイ
シンＳＣ類を有効成分とする細胞質ホスホリパーゼＡ２
阻害剤を提供する。

【００１３】

【発明の実施の形態】前記一般式（１）中の低級アルキ
ル基とは、炭素数１から６の直鎖状もしくは分枝状のア
ルキル基を意味し、その具体例としてメチル基、エチル
基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチ
ル基、ペンチル基、ヘキシル基等を挙げることができ
る。アシル基の具体例としてはアセチル基、プロピオニ
ル基、ブチリル基、オキサリル基、カルボキシアセチル
基、３−カルボキシプロピオニル基等を挙げることがで
きる。

【００１４】本発明の上記一般式（１）で表されるアザ
ロマイシンＳＣ類は、下記の微生物の培養あるいは化学
合成によって製造することができる。

【００１５】本発明において使用する微生物は放線菌の
一種で、上記のアザロマイシンＳＣを生産するものであ
って、このような微生物は自然界から新たに分離するこ
とができる。

【００１６】このような微生物の例として上記アザロマ
イシンＳＣ類生産能力を持つ微生物として本発明者らが
新たに分離した放線菌、ＳＣＲＣ−Ａ８９を挙げること
ができる。このＳＣＲＣ−Ａ８９は、工業技術院生命工
学工業技術研究所にＦＥＲＭＰ−１６９５９として寄託
されている。

【００１７】なお、本菌に変異を生じさせて一層生産性
の高い菌株を得ることもできる。また、本菌株の細胞中
に存在するアザロマイシンＳＣ類の生産に関与する遺伝
子を切り出し、これを適切なベクター例えばプラスミド
に挿入し、このベクターを用いて適当な宿主、例えば大
腸菌（Escherichia coli）や酵母のごとき異種宿主、ま
たは同種宿主を形質転換することにより、本発明のアザ
ロマイシンＳＣ類生産菌を人為的に創製することもでき
る。

【００１８】本発明において使用される菌株は、常法に
従って保存することができ、例えば寒天スラント上で、
または凍結乾燥法により保存することができる。寒天ス
ラント培地としては放線菌の保存に常用されている培地
を使用することができる。また凍結乾燥も常法に従って
行うことができる。

【００１９】前記微生物を培養してアザロマイシンＳＣ
類を製造しようとする場合、基礎栄養培地として、この
発明の微生物が増殖し得るものであればいずれを使用し
てもよい。この培地は、窒素源として例えば酵母エキ
ス、ペプトン、肉エキス等の１種類または複数種類を含
有する。またこの培地には必要に応じて炭素源として各
種の糖類を加えることができる。

【００２０】培養は固体培地または液体培地のいずれを
用いても良いが、目的とする物質を多量に得るためには
液体培地を用い、静置培養もしくは振とう培養、通気・
攪はん培養等により好気的条件下で行うのが好ましい。
培養温度は菌が生育し、アザロマイシンＳＣ類が生産さ
れる温度範囲であればいずれの温度でも良く、好ましく
は２０〜３７℃であり、より好ましくは２５〜３０℃で
ある。ｐＨは６〜９、好ましくは７〜８の範囲である。
培養時間は採取し得る量のヒドロナフタレン誘導体が生
産される時間を選べば良く、好ましくは１２時間〜１０
日間である。

【００２１】前記一般式（１）で表されるアザロマイシ
ンＳＣ類は、例えば放線菌の培養菌体または培養上清を
有機溶媒で抽出し、更にクロマトグラフィにより分離す
ることにより、通常の方法で得られる。

【００２２】抽出に用いられる溶媒としてはメタノー
ル、エタノール、酢酸エチル、クロロホルム等が挙げら
れ、クロマトグラフィはカラム、薄層及び高速液体クロ
マトグラフィが用いられ、カラムクロマトグラフィとし
てはシリカゲルの他、セファデックスＬＨ２０、逆相系
のＲＰ−１８等が用いられ、薄層及び高速液体クロマト
グラフィとしては、シリカゲルの他、ＲＰ−１８等が用
いられる。

【００２３】本発明における前記一般式（１）に含まれ
る化合物としては具体的には、

【００２４】

【化６】

【００２５】で表されるアザロマイシンＳＣがある。

【００２６】本発明の上記化合物は治療のために経口的
あるいは非経口的に投与することができる。経口投与剤
としては散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤などの固形製
剤あるいはシロップ剤、エリキシル剤などの液状製剤と
することができる。また、非経口投与剤として注射剤、
粘膜投与剤、外用剤とすることができる。これらの製剤
は活性成分に薬理学的、製剤学的に認容される製造助剤
を加えることにより常法に従って製造される。更に公知
の技術により持続性製剤とすることも可能である。当該
製造助剤を用いる場合は、本発明の製剤中の有効成分の
配合量は通常は０．１〜１０重量％、好ましくは０．２
〜５重量％である。

【００２７】上記製造助剤として、内服用製剤（経口
剤）、注射用製剤（注射剤）、粘膜投与剤（バッカル、
トロ−チ、坐剤等）、外用剤（軟膏、貼付剤等）などの
投与経路に応じた適当な製剤用成分が使用される。例え
ば、経口剤および粘膜投与剤にあっては、賦形剤（例：
澱粉、乳糖、結晶セルロース、乳酸カルシウム、メタケ
イ酸アルミン酸マグネシウム、無水ケイ酸、マンニトー
ル）、結合剤（例えばヒドロキシプロピルセルロース、
ポリビニルピロリドン等）、崩壊剤（例：カルボキシメ
チルセルロ−ス、カルボキシメチルセルロースカルシウ
ム）、滑沢剤（例：ステアリン酸マグネシム、タル
ク）、コ−テング剤（例：ヒドロキシエチルセルロ−
ス）、矯味剤などの製剤用成分が、また注射剤にあって
は、水性注射剤を構成し得る溶解剤ないし溶解補助剤
（例：注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコ−
ル）、懸濁剤（例：ポリソルベ−ト８０などの界面活性
剤）、ｐＨ調整剤（例：有機酸またはその金属塩）、安
定剤などの製剤用成分が、さらに外用剤にあっては、水
性ないし油性の溶解剤ないし溶解補助剤（例：アルコ−
ル、脂肪酸エステル類）、粘着剤（例：カルボキシビニ
ルポリマ−、多糖類）、乳化剤（例：界面活性剤）、安
定剤などの製剤用成分が使用される。

【００２８】上記構成を有する本発明の薬剤は、公知の
製造法、例えば日本薬局方第１０版製剤総則記載の方法
ないし適当な改良を加えた方法によって製造することが
できる。

【００２９】本発明に係る有効成分の投与量は、成人を
治療する場合で１〜１０００mgであり、これを１日２〜
３回に分けて投与することが好ましい。この投与量は、
患者の年齢、体重および症状によって増減することがで
きる。

【００３０】以下、実施例及び試験例により詳細に説明
する。

【００３１】

【実施例】実施例１放線菌ＳＣＲＣ−Ａ８９の培養に
よるアザロマイシンＳＣ類の生産放線菌ＳＣＲＣ−Ａ８９を可溶性でんぷん３．０％、グ
ルコース１．０％、バクトペプトン０．５％、大豆ペプ
チド２．０％、酵母エキス０．５％、炭酸カルシウム
０．２％を含む培地（pH 7.0）で２８℃、７日間好気的
に培養した。培養液（ 40 L）を遠心操作（8000 rpm, 2
0 min）により菌体と培養上清に分け、菌体をメタノー
ル（20L）で抽出した。メタノールを留去後、水（4 L）
を加え、酢酸エチル（4 L）で３回抽出した。培養上清
を酢酸エチル（20 L）で３回抽出し、菌体由来の酢酸エ
チル抽出液と合わせて濃縮し、粗抽出物３．４ｇを得
た。

【００３２】実施例２アザロマイシンＳＣの分離精
製アセトンに懸濁させたシリカゲル（136 g）をガラスカ
ラム（直径5.5 cm）に充填した。上記粗抽出物をメタノ
ールに溶解し、シリカゲル（6.8 g）を加えて溶媒を留
去したものを少量のアセトンに懸濁させて準備したシリ
カゲルカラムに乗せた。アセトン（3.4 L）、続いてメ
タノール（3.4 L）で溶出し、メタノール溶出部分を集
めた。これにシリカゲル（0.8 g）を加えて溶媒を留去
したものを少量の２０％メタノール−酢酸エチルに懸濁
させ、２０％メタノール−酢酸エチルに懸濁させてガラ
スカラム（直径1.5 cm）に充填したシリカゲル（16 g）
に乗せた。２０％メタノール−酢酸エチル（400 mL）、
続いて４０％メタノール−酢酸エチル（400 mL）で溶出
し、４０％メタノール−酢酸エチル溶出液の８１ｍＬか
ら１２０ｍＬまでを集め、溶媒を留去して３４．３ｍｇ
の黄色油状物を得た。

【００３３】上記濃縮物３４．３ｍｇを１．７ｍＬのメ
タノール溶液とし、１回に５０μＬづつ高速液体クロマ
トグラフィー（カラム：ＳＩＳＥＩＤＯＣＡＰＣＥＬ
ＬＰＡＫＵＧ１２０（Ｓ−５）、６ｍｍ×２５０ｍ
ｍ；溶媒：５０％アセトニトリル−水；流速：２．０ｍ
Ｌ／ｍｉｎ．；検出：ＵＶ２１０ｎｍ）に注入して保持
時間１０分から１１．５分までを分取した。この部分を
集めて濃縮し、アザロマイシンＳＣを白色粉末として
１．７ｍｇ得た。

【００３４】分子式 : C₆₀H₁₀₅N₃O₁₇ ¹ H-NMR(CD₃OD) :δ0.85(3H,H-52), 0.87(3H,H-55), 0.8
8(3H,H-50), 0.91(3H,H-54), 0.91(H-37), 0.92(3H,H-5
1), 1.01(3H,H-53), 1.02(3H,H-48), 1.07(H-40), 1.08
(3H,H-49), 1.10(H-20), 1.30(H-13), 1.30(H-40), 1.3
2(H-39), 1.32(H-12), 1.35(H-37), 1.38(H-26), 1.40
(H-13), 1.44(H-16), 1.49(H-8), 1.50(H-10), 1.53(H-
28), 1.57(H-14), 1.58(H-38), 1.60(H-18), 1.60(H-2
6), 1.62(H-12), 1.65(2H,H-45), 1.72(H-8), 1.73(H-2
2), 1.73(H-24), 1.81(H-22), 1.81(H-24), 1.84(H-2
0), 1.88(H-36), 1.94(H-16), 1.96(H-18), 1.98(2H,H-
41), 1.98(H-39), 2.10(2H,H-44), 2.30(H-6), 2.45(H-
2), 2.54(H-34), 2.84(3H,H-56),3.15(2H,H-46), 3.15
(3H,H-57), 3.15(H-59), 3.20(H-59), 3.72(H-15), 3.7
3(H-21), 3.74(H-7), 3.74(H-9), 3.88(H-11), 3.90(H-
25), 4.00(H-19), 4.05(H-29), 4.09 (H-3), 4.14(H-2
7), 4.74(H-35), 5.30(H-23), 5.42(H-43), 5.43(H-4),
5.49(H-42), 5.54(H-33), 5.61(H-30), 5.70(H-5), 6.
06(H-32), 6.18(H-31).¹³ C-NMR(CD₃OD) :δ 10.5, 11.2, 14.9, 15.0, 15.1, 1
6.7, 17.9, 19.5, 27.6,28.3(C-56), 29.7(C-45), 30.
3, 30.4(C-44), 30.6, 32.5(C-36), 33.5, 33.7,37.3,
39.0, 39.5(C-34), 40.4, 41.0, 42.0(C-46), 42.2(C-3
7), 42.7, 42.9,43.1(C-6), 43.3, 44.6, 45.0(C-10),
45.1(C-28), 48.1(C-2), 48.2(C-16), 48.2(C-57), 48.
5(C-59), 65.2(C-19), 65.4(C-25), 67.4(C-21), 69.2
(C-27), 71.2(C-23), 72.2(C-15), 72.4(C-11), 75.2(C
-9), 75.7(C-29), 75.8(C-3), 76.1(C-7), 79.9(C-35),
102.5(C-17), 129.8(C-43), 131.9, 132.0, 132.4, 13
3.0(C-42), 135.2, 136.5(C-5), 136.7(C-33), 158.0(C
-47), 171.4(C-58 or C-60), 173.9(C-60 or C-58), 17
6.6(C-1). FAB-MS(m/z) : 1163 (M+Na)⁺.

【００３５】試験例１細胞質ホスホリパーゼＡ２阻
害活性試験ホスホリパーゼＡ２（PLA2）としてはウサギ血小板より
既報（FEBS Lett., 282, 326, 1991）に基づき精製した
８５ｋＤａ細胞質ＰＬＡ２（cPLA2）を用い、本酵素に
対する阻害活性を以下のように測定した。アザロマイシ
ンＳＣはメタノール溶液を試験液として使用した。１Ｍ
トリス−塩酸（pH 9.0）２５μＬ、５０ｍＭ塩化カルシ
ウム溶液２０μＬの混合緩衝液に試験液とｃＰＬＡ２溶
液を加えて２００μＬとし、３７℃で２０分間反応させ
た。その後基質である１−パルミトイル−２−［¹⁴C］
アラキドノイル−グリセロホスホエタノールアミン（0.
5 nmol/50000 dpm/50 mL）を加え、更に３７℃で２０分
間反応させた。ドール試薬（イソプロパノール：ヘプタ
ン：１Ｎ硫酸＝１０：４０：１）を１．２５ｍＬ加え、
反応を停止し、ドールの方法により［¹⁴C］アラキドン
酸画分を回収してその放射活性を液体シンチレーション
カウンターで測定することにより酵素活性を測定した。
その結果得られた５０％阻害濃度は３．０μｇ／ｍＬで
あった。

【００３６】

【発明の効果】本発明のアザロマイシンＳＣ類は細胞質
ホスホリパーゼＡ２阻害活性を持ち、例えば、抗炎症剤
等の医薬品としての用途を有する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考） // Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｄ (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者末永聖武愛知県名古屋市昭和区川原通６−３−２− 102 (72)発明者山田薫東京都世田谷区成城３−10−33 Ｆターム(参考） 4B064 AE47 AE59 BA10 BG01 BG09 BH04 BH05 BH07 CA04 DA08 4C057 BB02 EE05 4C086 AA01 AA03 EA30 MA04 NA14 ZB11 ZC02

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記一般式（１）、【化１】（式中、Ｒ¹からＲ¹¹は独立して水素原子、低級アルキ
ル基またはアシル基を、Ｒ¹²は水素原子または低級アル
キル基を表す。）で表されるアザロマイシンＳＣ類。
【請求項２】下記一般式（２）、【化２】（式中、Ｘ¹、Ｘ²、Ｘ³は、Ｘ¹がＯＲ⁶を表す場合には
Ｘ²とＸ³は一体となって酸素原子を表すか、あるいはＸ
³がＯＲ⁶を表す場合にはＸ¹とＸ²は一体となって酸素原
子を表す。Ｒ⁶は独立して水素原子、低級アルキル基ま
たはアシル基を表す。）で表されるアザロマイシン類を
有効成分とする細胞質ホスホリパーゼＡ２阻害剤。