JP2000041679A - 骨密度の予測方法 - Google Patents
骨密度の予測方法Info
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- JP2000041679A JP2000041679A JP10216741A JP21674198A JP2000041679A JP 2000041679 A JP2000041679 A JP 2000041679A JP 10216741 A JP10216741 A JP 10216741A JP 21674198 A JP21674198 A JP 21674198A JP 2000041679 A JP2000041679 A JP 2000041679A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】ヒトにおける遺伝子の変異を測定し、その結果
から骨密度を予測し、容易に骨疾患、例えば骨粗鬆症罹
患リスクを予測する遺伝子診断法を提供する。 【解決手段】メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素をコー
ドするＤＮＡの第６７７番目の遺伝子を含む領域におい
て、制限酵素ＨｉｎｆＩで切断される遺伝子Ｖおよび同
部において切断されない遺伝子Ａを検出し、これらの遺
伝子の組み合わせで決定される遺伝子多型ＡＡ、ＡＶま
たはＶＶの中から、該遺伝子多型ＶＶを低骨密度と判定
する骨密度の予測方法、予測される骨密度から骨疾患の
罹患リスクを予測する方法ならびに骨密度予測用遺伝子
多型検出試薬キット。
から骨密度を予測し、容易に骨疾患、例えば骨粗鬆症罹
患リスクを予測する遺伝子診断法を提供する。 【解決手段】メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素をコー
ドするＤＮＡの第６７７番目の遺伝子を含む領域におい
て、制限酵素ＨｉｎｆＩで切断される遺伝子Ｖおよび同
部において切断されない遺伝子Ａを検出し、これらの遺
伝子の組み合わせで決定される遺伝子多型ＡＡ、ＡＶま
たはＶＶの中から、該遺伝子多型ＶＶを低骨密度と判定
する骨密度の予測方法、予測される骨密度から骨疾患の
罹患リスクを予測する方法ならびに骨密度予測用遺伝子
多型検出試薬キット。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はメチレンテトラヒド
ロ葉酸還元酵素の遺伝子多型を検出することにより、骨
密度を予測する方法、その結果から骨疾患を予測する方
法ならびに骨密度予測用遺伝子多型検出試薬キットに関
する。
ロ葉酸還元酵素の遺伝子多型を検出することにより、骨
密度を予測する方法、その結果から骨疾患を予測する方
法ならびに骨密度予測用遺伝子多型検出試薬キットに関
する。
【０００２】
【従来の技術】骨質が萎縮し、もろく折れ易くなる骨粗
鬆症は、高齢者、閉経後の女性あるいはステロイド過剰
投与後の患者らに起ることがよく知られている。高齢
者、特に女性の高齢者における骨粗鬆症の発症は近年、
特に問題となり、高齢者の骨密度に関して大きな関心が
寄せられている。また、骨粗鬆症の治療方法、治療薬の
研究も大いに行われているが、その原因の研究および遺
伝的要因の検討も広く進められている。
鬆症は、高齢者、閉経後の女性あるいはステロイド過剰
投与後の患者らに起ることがよく知られている。高齢
者、特に女性の高齢者における骨粗鬆症の発症は近年、
特に問題となり、高齢者の骨密度に関して大きな関心が
寄せられている。また、骨粗鬆症の治療方法、治療薬の
研究も大いに行われているが、その原因の研究および遺
伝的要因の検討も広く進められている。
【０００３】骨に関する要因としては、ビタミンＤ受容
体（Vitamin-D Receptor:VDR）、エストロゲン受容体
（Estrogen receptor:ER）、アポリポ蛋白Ｅ（Apolipop
roteinE:ApoE ）、副甲状腺ホルモン（PTH:Parathyroid
hormone)などをコードする遺伝子が挙げられる。
体（Vitamin-D Receptor:VDR）、エストロゲン受容体
（Estrogen receptor:ER）、アポリポ蛋白Ｅ（Apolipop
roteinE:ApoE ）、副甲状腺ホルモン（PTH:Parathyroid
hormone)などをコードする遺伝子が挙げられる。
【０００４】白人人種(Caucassuan)に関して、ビタミン
Ｄ受容体遺伝子の制限酵素ＢｓｍＩによる多型と骨密度
の関係を調べ、２本の対立遺伝子がともに制限酵素Ｂｓ
ｍＩの切断を受けないＢＢ型が低骨密度と関係があるこ
とが示されている（N.A.Moriosn ら、Nature，vol.367
，1994，2130-2134 ）。また、同じ白色人種において
もアメリカ人はこの結果が再現されないことが報告され
ている(F.G.Hustmyer ら、J.Clin.Invest., Vol.94, 19
95, 2130-2134)。
Ｄ受容体遺伝子の制限酵素ＢｓｍＩによる多型と骨密度
の関係を調べ、２本の対立遺伝子がともに制限酵素Ｂｓ
ｍＩの切断を受けないＢＢ型が低骨密度と関係があるこ
とが示されている（N.A.Moriosn ら、Nature，vol.367
，1994，2130-2134 ）。また、同じ白色人種において
もアメリカ人はこの結果が再現されないことが報告され
ている(F.G.Hustmyer ら、J.Clin.Invest., Vol.94, 19
95, 2130-2134)。
【０００５】また、エストロゲンレセプター遺伝子の多
型性と骨密度の関係を調べ、２本鎖ＤＮＡが、制限酵素
ＰｖｕＩＩで切断されない遺伝子型Ｐおよび制限酵素Ｘ
ｂａＩで切断されない遺伝子型ＸであるＰＰｘｘ型は低
骨密度であると報告されている（特開平 8-214899 号公
報) 。さらに、アポリポ蛋白Ｅの多型と骨密度に基づく
骨疾患とを関連付けることも知られている（特開平 9-2
99337 号公報) 。
型性と骨密度の関係を調べ、２本鎖ＤＮＡが、制限酵素
ＰｖｕＩＩで切断されない遺伝子型Ｐおよび制限酵素Ｘ
ｂａＩで切断されない遺伝子型ＸであるＰＰｘｘ型は低
骨密度であると報告されている（特開平 8-214899 号公
報) 。さらに、アポリポ蛋白Ｅの多型と骨密度に基づく
骨疾患とを関連付けることも知られている（特開平 9-2
99337 号公報) 。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明はヒトにおける
遺伝子の変異を測定し、その結果から新規に骨密度を予
測し、容易に骨疾患、例えば骨粗鬆症罹患リスクを予測
する遺伝子診断法を提供する。
遺伝子の変異を測定し、その結果から新規に骨密度を予
測し、容易に骨疾患、例えば骨粗鬆症罹患リスクを予測
する遺伝子診断法を提供する。
【０００７】
【課題を解決するための手段】従来から、メチレンテト
ラヒドロ葉酸還元酵素（以下、ＭＴＨＦＲと略記する）
は血中ホモシステン値を制御する酵素であり、その欠損
症がシスタチオニンβ合成酵素の欠損症とともに、ホモ
シスチン尿症の原因として知られている（Muddら、Ame
r.J.Hum.Genet, 1985,37,1-31) 。また、該酵素には、
該酵素をコードするＤＮＡの第６７７番目のシトシン
（Ｃ）がチミン（Ｔ）に部位特異的に変異して、アラニ
ン（Ａｌａ）からバリン（Ｖａｌ）へのアミノ酸置換を
生じる遺伝子多型が存在することが知られている。該遺
伝子の完全変異が、重症骨粗鬆症を伴うホモシステイン
尿症の原因となることも知られている。この遺伝子多型
は酵素活性の低下を介して、血中のホモシステイン値の
上昇をきたすことが明らかにされ、環動脈疾患、脊椎２
分症の遺伝子的危険因子として検討されているが、骨粗
鬆症の病態との関連については、未だ検討されていな
い。
ラヒドロ葉酸還元酵素（以下、ＭＴＨＦＲと略記する）
は血中ホモシステン値を制御する酵素であり、その欠損
症がシスタチオニンβ合成酵素の欠損症とともに、ホモ
シスチン尿症の原因として知られている（Muddら、Ame
r.J.Hum.Genet, 1985,37,1-31) 。また、該酵素には、
該酵素をコードするＤＮＡの第６７７番目のシトシン
（Ｃ）がチミン（Ｔ）に部位特異的に変異して、アラニ
ン（Ａｌａ）からバリン（Ｖａｌ）へのアミノ酸置換を
生じる遺伝子多型が存在することが知られている。該遺
伝子の完全変異が、重症骨粗鬆症を伴うホモシステイン
尿症の原因となることも知られている。この遺伝子多型
は酵素活性の低下を介して、血中のホモシステイン値の
上昇をきたすことが明らかにされ、環動脈疾患、脊椎２
分症の遺伝子的危険因子として検討されているが、骨粗
鬆症の病態との関連については、未だ検討されていな
い。
【０００８】本発明者らは、ＭＴＨＦＲ遺伝子多型が、
閉経後の女性の骨密度、骨疾患罹患リスクに何らかの関
係があるとの予測のもとに研究を進めた結果、骨密度に
直接に関係していることを見出し、本発明に到達した。
閉経後の女性の骨密度、骨疾患罹患リスクに何らかの関
係があるとの予測のもとに研究を進めた結果、骨密度に
直接に関係していることを見出し、本発明に到達した。
【０００９】すなわち、本発明はメチレンテトラヒドロ
葉酸還元酵素をコードする遺伝子多型を検出し、該遺伝
子多型と骨密度とを結びつけることを特徴とする骨密度
の予測方法である。
葉酸還元酵素をコードする遺伝子多型を検出し、該遺伝
子多型と骨密度とを結びつけることを特徴とする骨密度
の予測方法である。
【００１０】また、本発明は上記方法により予測された
骨密度から、骨疾患の罹患リスクを予測することを特徴
とする骨疾患の予測方法である。
骨密度から、骨疾患の罹患リスクを予測することを特徴
とする骨疾患の予測方法である。
【００１１】さらに、本発明はメチレンテトラヒドロ葉
酸還元酵素をコードするＤＮＡの塩基配列から選択され
た少なくとも１５塩基配列を有するオリゴヌクレオチド
であって、該酵素をコードするＤＮＡの第６７７番目の
遺伝子を含む領域を挟む塩基配列を有する少なくとも２
種以上のプライマー、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ、ｄＮ
ＴＰおよび反応緩衝液、および制限酵素ＨｉｎｆＩ溶液
を含む骨密度予測用遺伝子多型検出試薬キットである。
酸還元酵素をコードするＤＮＡの塩基配列から選択され
た少なくとも１５塩基配列を有するオリゴヌクレオチド
であって、該酵素をコードするＤＮＡの第６７７番目の
遺伝子を含む領域を挟む塩基配列を有する少なくとも２
種以上のプライマー、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ、ｄＮ
ＴＰおよび反応緩衝液、および制限酵素ＨｉｎｆＩ溶液
を含む骨密度予測用遺伝子多型検出試薬キットである。
【００１２】
【発明の実施の態様】ＭＴＨＦＲは、血中ホモシステイ
ン値を制御する重要な酵素であり、その欠損はシスタチ
オニンβ合成酵素の欠損症とともにホモシスチン尿性の
原因として知られている。そのアミノ酸配列および塩基
配列は、Frosstら、Nat.Genet, 1995,10,111-113に記載
されている。
ン値を制御する重要な酵素であり、その欠損はシスタチ
オニンβ合成酵素の欠損症とともにホモシスチン尿性の
原因として知られている。そのアミノ酸配列および塩基
配列は、Frosstら、Nat.Genet, 1995,10,111-113に記載
されている。
【００１３】ＭＴＨＦＲ遺伝子型は、ＭＴＨＦＲをコー
ドするＤＮＡの第６７７番目の遺伝子がシトシン（Ｃ）
かチミン（Ｔ）であるかによって決定され、また、該遺
伝子を含む領域が、制限酵素ＨｉｎｆＩで切断されるか
否かによっても決定される。該部において制限酵素Ｈｉ
ｎｆＩで切断される型がＶであり、同部において切断さ
れない型がＡである。ＭＴＨＦＲ遺伝子多型とは、遺伝
子Ｖおよび遺伝子Ａとの組み合わせで決定され、遺伝子
多型ＡＡ、ＡＶまたはＶＶがある。
ドするＤＮＡの第６７７番目の遺伝子がシトシン（Ｃ）
かチミン（Ｔ）であるかによって決定され、また、該遺
伝子を含む領域が、制限酵素ＨｉｎｆＩで切断されるか
否かによっても決定される。該部において制限酵素Ｈｉ
ｎｆＩで切断される型がＶであり、同部において切断さ
れない型がＡである。ＭＴＨＦＲ遺伝子多型とは、遺伝
子Ｖおよび遺伝子Ａとの組み合わせで決定され、遺伝子
多型ＡＡ、ＡＶまたはＶＶがある。
【００１４】該遺伝子多型の決定をおこなう生体試料
は、その採取源は特に限定されないが、通常、ヒト血球
成分が好ましく、例えば末梢血白血球が例示される。
は、その採取源は特に限定されないが、通常、ヒト血球
成分が好ましく、例えば末梢血白血球が例示される。
【００１５】本発明では、まず生体試料からゲノムＤＮ
Ａを抽出する。抽出方法としては、標準的な操作に従
う。例えば、全血をマイクロ遠心管に入れ、１×ＳＳＣ
（NaCl17.5g、クエン酸ナトリウム 88.2gを含む10N NaO
Hで、pH7.0 に調整した20×SSC を20倍希釈したもの)
を加え、該溶液を混合する。遠心分離後、上清を除く。
さらに１×ＳＳＣを加えて攪拌、遠心分離および上清の
除去を数回繰り返して、ＤＮＡを抽出する。
Ａを抽出する。抽出方法としては、標準的な操作に従
う。例えば、全血をマイクロ遠心管に入れ、１×ＳＳＣ
（NaCl17.5g、クエン酸ナトリウム 88.2gを含む10N NaO
Hで、pH7.0 に調整した20×SSC を20倍希釈したもの)
を加え、該溶液を混合する。遠心分離後、上清を除く。
さらに１×ＳＳＣを加えて攪拌、遠心分離および上清の
除去を数回繰り返して、ＤＮＡを抽出する。
【００１６】次いで、抽出したＤＮＡの増幅を行う。増
幅方法としては、種々の核酸増幅法が適用され得るが、
例えば、よく知られているＰＣＲにより増幅を行う。Ｍ
ＴＨＦＲをコードするゲノムＤＮＡは、第１染色体上に
存在することが知られており、プライマーは、該遺伝子
多型を有する領域を含む増幅領域の端部に特異的なプラ
イマーとして、該ゲノムＤＮＡの塩基配列から設計する
ことができる。
幅方法としては、種々の核酸増幅法が適用され得るが、
例えば、よく知られているＰＣＲにより増幅を行う。Ｍ
ＴＨＦＲをコードするゲノムＤＮＡは、第１染色体上に
存在することが知られており、プライマーは、該遺伝子
多型を有する領域を含む増幅領域の端部に特異的なプラ
イマーとして、該ゲノムＤＮＡの塩基配列から設計する
ことができる。
【００１７】本発明において使用するプライマーとして
は、ＭＴＨＦＲをコードするＤＮＡの塩基配列から選択
された少なくとも１５塩基配列を有するオリゴヌクレオ
チドであって、該酵素をコードするＤＮＡの第６７７番
目の遺伝子を含む領域を挟む塩基配列を有する。本発明
においては、例えば、下記塩基配列を有するオリゴヌク
レオチドを使用する。 5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3' 5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3'
は、ＭＴＨＦＲをコードするＤＮＡの塩基配列から選択
された少なくとも１５塩基配列を有するオリゴヌクレオ
チドであって、該酵素をコードするＤＮＡの第６７７番
目の遺伝子を含む領域を挟む塩基配列を有する。本発明
においては、例えば、下記塩基配列を有するオリゴヌク
レオチドを使用する。 5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3' 5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3'
【００１８】次いで、本発明では増幅したＤＮＡ断片か
ら制限酵素ＨｉｎｆＩによる切断を行う。具体例とし
て、増幅したＤＮＡ断片に反応液（500mM Tris-HCl pH
7.5, 100mM MgCl2, 10mM ジチオスレイトール、100mM N
aCl) および10U/mlの制限酵素ＨｉｎｆＩ溶液を加えて
混合し、３７℃、約１時間保温する。
ら制限酵素ＨｉｎｆＩによる切断を行う。具体例とし
て、増幅したＤＮＡ断片に反応液（500mM Tris-HCl pH
7.5, 100mM MgCl2, 10mM ジチオスレイトール、100mM N
aCl) および10U/mlの制限酵素ＨｉｎｆＩ溶液を加えて
混合し、３７℃、約１時間保温する。
【００１９】さらに、切断されたＤＮＡ断片および切断
されないＤＮＡ断片を電気泳動させる。電気泳動は常法
に従う。
されないＤＮＡ断片を電気泳動させる。電気泳動は常法
に従う。
【００２０】本発明の具体例では上記プライマーを用い
て増幅した、長さ１９８ｂｐのＤＮＡ断片を制限酵素Ｈ
ｉｎｆＩで処理し、電気泳動した場合、切断されずに、
１９８ｂｐのバンドが検出されるのがＡ型であり、１７
５ｂｐと２３ｂｐに切断されるのがＶ型である。１９８
ｂｐのバンドのみが検出されるものはＡＡ型と決定し、
１９８、１７５、２３ｂｐの３本のバンドが検出される
ものはＡＶ型と決定し、１７５、２３ｂｐの２本のバン
ドが検出されるものはＶＶ型と決定する。
て増幅した、長さ１９８ｂｐのＤＮＡ断片を制限酵素Ｈ
ｉｎｆＩで処理し、電気泳動した場合、切断されずに、
１９８ｂｐのバンドが検出されるのがＡ型であり、１７
５ｂｐと２３ｂｐに切断されるのがＶ型である。１９８
ｂｐのバンドのみが検出されるものはＡＡ型と決定し、
１９８、１７５、２３ｂｐの３本のバンドが検出される
ものはＡＶ型と決定し、１７５、２３ｂｐの２本のバン
ドが検出されるものはＶＶ型と決定する。
【００２１】本発明では、遺伝子多型ＶＶを低骨密度と
予測する。また、遺伝子多型ＡＶおよびＡＡは骨密度が
正常または高いと予測する。
予測する。また、遺伝子多型ＡＶおよびＡＡは骨密度が
正常または高いと予測する。
【００２２】本発明において比較対照とする骨密度の測
定方法は、二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＸＡ法）
を用い、全身骨と骨粗鬆症の症状の一番現れやすい腰椎
（Ｌ２ー４）について測定する。ＤＥＸＡに用いる装置
としては、例えばＤＰＸ−Ｌ（Lunar Rad. Co., USA)を
用いて行うことができる。
定方法は、二重エネルギーＸ線吸収測定法（ＤＸＡ法）
を用い、全身骨と骨粗鬆症の症状の一番現れやすい腰椎
（Ｌ２ー４）について測定する。ＤＥＸＡに用いる装置
としては、例えばＤＰＸ−Ｌ（Lunar Rad. Co., USA)を
用いて行うことができる。
【００２３】本発明における骨密度の予測方法とは、Ｍ
ＴＨＦＲ遺伝子多型を検出した結果から、遺伝子多型が
ＶＶである検体を低密度であると予測し、他の多型であ
る検体を低密度ではないと予測することである。
ＴＨＦＲ遺伝子多型を検出した結果から、遺伝子多型が
ＶＶである検体を低密度であると予測し、他の多型であ
る検体を低密度ではないと予測することである。
【００２４】本発明の骨疾患の予測方法は、上記骨密度
の予測結果から、骨疾患、例えば骨粗鬆症を予測する方
法である。
の予測結果から、骨疾患、例えば骨粗鬆症を予測する方
法である。
【００２５】本発明の骨密度予測用遺伝子多型検出試薬
キットは、メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素をコード
するＤＮＡの塩基配列から選択された少なくとも１５塩
基配列を有するオリゴヌクレオチドであって、該酵素を
コードするＤＮＡの第６７７番目の遺伝子を含む領域を
挟む塩基配列を有する少なくとも２種以上のプライマ
ー、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ、ｄＮＴＰおよび反応緩
衝液、および制限酵素ＨＩｎｆＩ溶液を含む。
キットは、メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素をコード
するＤＮＡの塩基配列から選択された少なくとも１５塩
基配列を有するオリゴヌクレオチドであって、該酵素を
コードするＤＮＡの第６７７番目の遺伝子を含む領域を
挟む塩基配列を有する少なくとも２種以上のプライマ
ー、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ、ｄＮＴＰおよび反応緩
衝液、および制限酵素ＨＩｎｆＩ溶液を含む。
【００２６】以下、実施例を用いて、本発明を詳細に説
明する。実施例１ 無作為に選んだ閉経後の３０７人の日本人女性に対し
て、下記操作を行った。 （１）骨塩量（ＢＭＤ）の測定：全身骨および腰椎骨の
骨塩量（ＢＭＤ）を高速スキャンモードを使用する二重
エネルギーＸ線吸光光度分析法によって測定した。
明する。実施例１ 無作為に選んだ閉経後の３０７人の日本人女性に対し
て、下記操作を行った。 （１）骨塩量（ＢＭＤ）の測定：全身骨および腰椎骨の
骨塩量（ＢＭＤ）を高速スキャンモードを使用する二重
エネルギーＸ線吸光光度分析法によって測定した。
【００２７】（２）ＭＴＨＦＲ遺伝子の増幅；ヒト全血
を常法に従い精製し、ＧｅｎｅＡｍｐＰＣＲキット（Pe
rkin Elmer Cetus）を用いて、ＰＣＲを行った。使用し
たプライマーは、下記の通りである。 5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3' 5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3'
を常法に従い精製し、ＧｅｎｅＡｍｐＰＣＲキット（Pe
rkin Elmer Cetus）を用いて、ＰＣＲを行った。使用し
たプライマーは、下記の通りである。 5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3' 5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3'
【００２８】ＰＣＲ反応液は、下記組成を有する。 耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ ５Ｕ／１００μｌ ２種のプライマー 各６０ｍＭ ｄＮＴＰ ２００μＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３） １０ｍＭ
【００２９】ＰＣＲの条件は、９５℃−６０秒、６２℃
−９０秒、７２℃−６０秒を３５回繰り返す。１９８ｂ
ｐのＭＴＨＦＲ変異箇所を含んだ遺伝子断片が増幅され
る。
−９０秒、７２℃−６０秒を３５回繰り返す。１９８ｂ
ｐのＭＴＨＦＲ変異箇所を含んだ遺伝子断片が増幅され
る。
【００３０】（３）ＭＴＨＦＲ遺伝子多型の検出；増幅
した遺伝子断片を制限酵素ＨｉｎｆＩによる制限酵素処
理を行った。具体的には、８ｍｌの増幅したＤＮＡ断片
溶液に、１ｍｌの反応液（500mM Tris-HClpH7.5, 100mM
MgCl2, 10mM ジチオスレイトール、100mM NaCl) およ
び１ｍｌの制限酵素溶液（10U/ml Hinf I 溶液）を加え
て、３７℃で一晩反応させた。
した遺伝子断片を制限酵素ＨｉｎｆＩによる制限酵素処
理を行った。具体的には、８ｍｌの増幅したＤＮＡ断片
溶液に、１ｍｌの反応液（500mM Tris-HClpH7.5, 100mM
MgCl2, 10mM ジチオスレイトール、100mM NaCl) およ
び１ｍｌの制限酵素溶液（10U/ml Hinf I 溶液）を加え
て、３７℃で一晩反応させた。
【００３１】次いで、９．６％ポリアクリルアミドゲル
電気泳動にかけ、エチジウム・ブロマイドによる染色を
行った。
電気泳動にかけ、エチジウム・ブロマイドによる染色を
行った。
【００３２】切断されずに、１９８ｂｐのバンドが検出
されるのがＡ型であり、１７５ｂｐと２３ｂｐに切断さ
れるのがＶ型である。１９８ｂｐのバンドのみが検出さ
れるものはＡＡ型と決定し、１９８、１７５、２３ｂｐ
の３本のバンドが検出されるものはＡＶ型と決定し、１
７５、２３ｂｐの２本のバンドが検出されるものはＶＶ
型と決定した。
されるのがＡ型であり、１７５ｂｐと２３ｂｐに切断さ
れるのがＶ型である。１９８ｂｐのバンドのみが検出さ
れるものはＡＡ型と決定し、１９８、１７５、２３ｂｐ
の３本のバンドが検出されるものはＡＶ型と決定し、１
７５、２３ｂｐの２本のバンドが検出されるものはＶＶ
型と決定した。
【００３３】（４）統計分析；各遺伝子多型における骨
塩量（ＢＭＤ）における相違は、分散分析（ＡＮＯＶ
Ａ）を用いて、テストした。各遺伝子型とその骨密度間
の相違関係を評価するためにフィッシャーの保護最小有
意差（ＰＬＳＤ）を使用した。０．０５より小さいＰ値
は統計学的に有意義であると考えられる。上記操作に従
って検出したＭＴＨＦＲ遺伝子多型別の全身骨および腰
椎のＢＭＤの測定結果を表１に示す。数値は平均値±標
準偏差によって示されている。
塩量（ＢＭＤ）における相違は、分散分析（ＡＮＯＶ
Ａ）を用いて、テストした。各遺伝子型とその骨密度間
の相違関係を評価するためにフィッシャーの保護最小有
意差（ＰＬＳＤ）を使用した。０．０５より小さいＰ値
は統計学的に有意義であると考えられる。上記操作に従
って検出したＭＴＨＦＲ遺伝子多型別の全身骨および腰
椎のＢＭＤの測定結果を表１に示す。数値は平均値±標
準偏差によって示されている。
【００３４】（５）他の測定項目；上記操作に従い検出
したＭＴＨＦＲ遺伝子多型別の測定対象者の年齢、閉経
後の年数、初潮時の年齢、および血清または尿中の骨代
謝マーカーの測定結果を表２に示す。数値は平均値±標
準偏差によって示されている。
したＭＴＨＦＲ遺伝子多型別の測定対象者の年齢、閉経
後の年数、初潮時の年齢、および血清または尿中の骨代
謝マーカーの測定結果を表２に示す。数値は平均値±標
準偏差によって示されている。
【００３５】
【表１】
【００３６】
【表２】
【００３７】表１に示されるように、ＶＶ遺伝子型（ｎ
＝５７）はＡＡ遺伝子型（ｎ＝９５）に対して、腰椎Ｂ
ＭＤは、ｐ＝０．０１６、全身骨ＢＭＤは、ｐ＝０．０
２２と明らかに低値を示し、遺伝子多型ＶＶが低骨密度
であると予測される。
＝５７）はＡＡ遺伝子型（ｎ＝９５）に対して、腰椎Ｂ
ＭＤは、ｐ＝０．０１６、全身骨ＢＭＤは、ｐ＝０．０
２２と明らかに低値を示し、遺伝子多型ＶＶが低骨密度
であると予測される。
【００３８】
【発明の効果】本発明では、ＭＴＨＦＲの遺伝子多型と
骨密度が直接に関係していることから、ヒト検体中のＭ
ＴＨＦＲ遺伝子の多型を検出し、その結果から骨密度を
予測することが可能である。また、骨密度に基づく骨疾
患、例えば骨粗鬆症の罹患リスクを予測も可能となる。
骨密度が直接に関係していることから、ヒト検体中のＭ
ＴＨＦＲ遺伝子の多型を検出し、その結果から骨密度を
予測することが可能である。また、骨密度に基づく骨疾
患、例えば骨粗鬆症の罹患リスクを予測も可能となる。
【００３９】
配列番号：１ 配列の長さ：２３ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列 TGAAGGAGAA GGTGTCTGCG GGA 23
【００４０】配列番号：２ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列 AGGACGGTGC GGTGAGAGTG ２
０
０
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 井上 聡 10010 ノース トレイ パイン ロード、 ラ ホーヤ、カリフォルニア州 92037 アメリカ合衆国 (72)発明者 森田 啓行 東京都文京区湯島１−10−５ (72)発明者 栗原 裕基 東京都中野区江原町１−16−２ (72)発明者 矢崎 義雄 東京都文京区小日向３−12−４ Ｆターム(参考） 4B024 AA11 AA20 CA01 CA20 HA09 HA11 4B063 QQ02 QQ08 QQ42 QQ44 QQ89 QR08 QR14 QR32 QR40 QR62 QS16 QS25 QX01 QX07
Claims (8)
- 【請求項１】 メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素の遺
伝子多型を検出し、該遺伝子多型と骨密度とを結びつけ
ることを特徴とする骨密度の予測方法。 - 【請求項２】 メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素の遺
伝子多型が、該酵素をコードするゲノムＤＮＡの変異部
において、制限酵素ＨｉｎｆＩで切断される遺伝子Ｖお
よび同部において切断されない遺伝子Ａとの組み合わせ
で決定される遺伝子多型ＡＡ、ＡＶまたはＶＶである請
求項１記載の骨密度の予測方法。 - 【請求項３】 遺伝子多型ＶＶを低骨密度と判定する請
求項１記載の骨密度の予測方法。 - 【請求項４】 測定対象が日本人である請求項１〜３の
いずれか１項記載の骨密度の予測方法。 - 【請求項５】 請求項１〜４記載の方法により予測され
た骨密度から、骨疾患の罹患リスクを予測することを特
徴とする骨疾患の予測方法。 - 【請求項６】 骨疾患が骨粗鬆症である請求項５記載の
骨疾患の予測方法。 - 【請求項７】 メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素をコ
ードするＤＮＡの塩基配列から選択された少なくとも１
５塩基配列を有するオリゴヌクレオチドであって、該酵
素をコードするＤＮＡの第６７７番目の遺伝子を含む領
域を挟む塩基配列を有する少なくとも２種以上のプライ
マー、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ、ｄＮＴＰおよび反応
緩衝液、および制限酵素ＨｉｎｆＩ溶液を含む骨密度予
測用遺伝子多型検出試薬キット。 - 【請求項８】 プライマーが、下記塩基配列を有するオ
リゴヌクレオチドである請求項７記載の骨密度予測用遺
伝子多型検出試薬キット。 5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3' ５’−ＡＧＧＡＣＧＧＴＧＣＧＧＴＧＡＧＡＧＴＧ−
３’
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10216741A JP2000041679A (ja) | 1998-07-31 | 1998-07-31 | 骨密度の予測方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10216741A JP2000041679A (ja) | 1998-07-31 | 1998-07-31 | 骨密度の予測方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000041679A true JP2000041679A (ja) | 2000-02-15 |
Family
ID=16693214
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10216741A Pending JP2000041679A (ja) | 1998-07-31 | 1998-07-31 | 骨密度の予測方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000041679A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002022863A1 (fr) * | 2000-09-14 | 2002-03-21 | Applied Cell Biotechnologies, Inc. | Procede permettant de diagnostiquer l'osteoporose et/ou d'estimer le risque d'une fracture due a l'osteoporose |
| EP1286667A2 (en) * | 2000-06-02 | 2003-03-05 | MERCK PATENT GmbH | Composition for the treatment and/or the prevention of osteoporosis and/or inflammatory joint diseases |
-
1998
- 1998-07-31 JP JP10216741A patent/JP2000041679A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1286667A2 (en) * | 2000-06-02 | 2003-03-05 | MERCK PATENT GmbH | Composition for the treatment and/or the prevention of osteoporosis and/or inflammatory joint diseases |
| EP1286667B1 (en) * | 2000-06-02 | 2006-06-14 | MERCK PATENT GmbH | Composition for the treatment and/or the prevention of osteoporosis and/or inflammatory joint diseases |
| WO2002022863A1 (fr) * | 2000-09-14 | 2002-03-21 | Applied Cell Biotechnologies, Inc. | Procede permettant de diagnostiquer l'osteoporose et/ou d'estimer le risque d'une fracture due a l'osteoporose |
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