JP2000004875A - 増殖因子の産生誘導方法 - Google Patents
増殖因子の産生誘導方法Info
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- JP2000004875A JP2000004875A JP10175741A JP17574198A JP2000004875A JP 2000004875 A JP2000004875 A JP 2000004875A JP 10175741 A JP10175741 A JP 10175741A JP 17574198 A JP17574198 A JP 17574198A JP 2000004875 A JP2000004875 A JP 2000004875A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/49—Platelet-derived growth factor [PDGF]
Abstract
(57)【要約】
【課題】 共存培養系における増殖因子の産生誘導方法
を提供することである。 【解決手段】 共存培養系において、下記（１）〜
（３）のいずれか一つを行うことを特徴とする増殖因子
の産生誘導方法。 （１）培養液に活性型ビタミンＤ類を添加すること、
（２）超音波を照射すること、（３）培養液に活性型ビ
タミンＤ類を添加し、かつ、超音波を照射すること
を提供することである。 【解決手段】 共存培養系において、下記（１）〜
（３）のいずれか一つを行うことを特徴とする増殖因子
の産生誘導方法。 （１）培養液に活性型ビタミンＤ類を添加すること、
（２）超音波を照射すること、（３）培養液に活性型ビ
タミンＤ類を添加し、かつ、超音波を照射すること
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、増殖因子の産生誘
導方法に関するものであり、詳しくは共存培養系におけ
る増殖因子の産生誘導方法に関するものであり、更に詳
しくは共存培養系における血小板由来増殖因子（以下、
「ＰＤＧＦ」という）の産生誘導方法に関するものであ
る。
導方法に関するものであり、詳しくは共存培養系におけ
る増殖因子の産生誘導方法に関するものであり、更に詳
しくは共存培養系における血小板由来増殖因子（以下、
「ＰＤＧＦ」という）の産生誘導方法に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】 従来、増殖因子の産生誘導方法として
は、例えば、ヒト表皮角化細胞の培養系に活性型ビタミ
ンＤ類を加えることによってＰＤＧＦの産生を誘導する
方法[Zang et al. J Dermatol 22, 305-309, (1995)]等
が知られていた。しかしながら、この方法は、一種の細
胞を培養する系においてのＰＤＧＦ産生誘導方法であっ
て、二種以上の細胞を培養する共存培養系における増殖
因子の産生誘導方法に関しては何ら知られていなかっ
た。また、産生誘導方法としても増殖因子をより効率的
に産生する方法が求められていた。
は、例えば、ヒト表皮角化細胞の培養系に活性型ビタミ
ンＤ類を加えることによってＰＤＧＦの産生を誘導する
方法[Zang et al. J Dermatol 22, 305-309, (1995)]等
が知られていた。しかしながら、この方法は、一種の細
胞を培養する系においてのＰＤＧＦ産生誘導方法であっ
て、二種以上の細胞を培養する共存培養系における増殖
因子の産生誘導方法に関しては何ら知られていなかっ
た。また、産生誘導方法としても増殖因子をより効率的
に産生する方法が求められていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明者ら
は、二種以上の細胞を培養する共存培養系における増殖
因子の産生誘導方法、特により効率的な増殖因子の産生
誘導方法提供することを目的として鋭意研究を行った。
は、二種以上の細胞を培養する共存培養系における増殖
因子の産生誘導方法、特により効率的な増殖因子の産生
誘導方法提供することを目的として鋭意研究を行った。
【０００４】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、共
存培養系において、下記（１）〜（３） （１）培養液に活性型ビタミンＤ類を添加すること、
（２）超音波を照射すること、（３）培養液に活性型ビ
タミンＤ類を添加し、かつ、超音波を照射することのい
ずれか一つを行うことを特徴とする増殖因子の産生誘導
方法である。
存培養系において、下記（１）〜（３） （１）培養液に活性型ビタミンＤ類を添加すること、
（２）超音波を照射すること、（３）培養液に活性型ビ
タミンＤ類を添加し、かつ、超音波を照射することのい
ずれか一つを行うことを特徴とする増殖因子の産生誘導
方法である。
【０００５】以下、本発明について詳細に説明する。本
発明において産生誘導を行う増殖因子としては、例え
ば、塩基性繊維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、形質転換
増殖因子−β（ＴＧＦ−β）、ＰＤＧＦ等が挙げられ
る。なかでもＰＤＧＦを対象とすることが好ましい。
発明において産生誘導を行う増殖因子としては、例え
ば、塩基性繊維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、形質転換
増殖因子−β（ＴＧＦ−β）、ＰＤＧＦ等が挙げられ
る。なかでもＰＤＧＦを対象とすることが好ましい。
【０００６】これら増殖因子は、骨折等の組織修復過程
において重要な役割を担っている[Joyce et al. Prog.
Clin. Biol. Res. 365,391-416,(1991)]。特に、ＰＤＧ
Ｆは生体内において発生、細胞分化、細胞増殖等の非常
に重要な生命現象に関与しており、殆どの中胚葉系由来
細胞に対して増殖刺激作用を有することが明らかになっ
ている。このような作用を有するＰＤＧＦは、血管新生
促進剤や創傷治癒剤等の治療薬としての応用が期待され
ている。また、実際に創傷治癒過程においても重要な役
割を担っていることが明らかとなっている[H. Hosgood,
Vet Surg 22,490-495, (1993)、米国特許No.5,457,093
号]。更に、ヒトの骨折治療において局所的に投与する
ことで骨の修復が促進され、骨折治療剤として用いるこ
とが可能である。
において重要な役割を担っている[Joyce et al. Prog.
Clin. Biol. Res. 365,391-416,(1991)]。特に、ＰＤＧ
Ｆは生体内において発生、細胞分化、細胞増殖等の非常
に重要な生命現象に関与しており、殆どの中胚葉系由来
細胞に対して増殖刺激作用を有することが明らかになっ
ている。このような作用を有するＰＤＧＦは、血管新生
促進剤や創傷治癒剤等の治療薬としての応用が期待され
ている。また、実際に創傷治癒過程においても重要な役
割を担っていることが明らかとなっている[H. Hosgood,
Vet Surg 22,490-495, (1993)、米国特許No.5,457,093
号]。更に、ヒトの骨折治療において局所的に投与する
ことで骨の修復が促進され、骨折治療剤として用いるこ
とが可能である。
【０００７】本発明における共存培養系とは、任意の二
種類以上の細胞を同じ培地内で培養する方法をいう。用
いられる細胞としては増殖因子を産生する細胞を二種類
以上用いれば特に限定はないが、骨芽細胞と血管内皮細
胞とを組み合わせることが好ましい。本発明で用いられ
る骨芽細胞としては、ヒト骨芽細胞様細胞（ＳａＯＳ−
２）、ＨＯＳ、ＭＧ６３等が挙げられる。該骨芽細胞の
入手方法としては、アメリカンタイプカルチャーコレク
ションより入手可能であり、以下に詳述する培地にて培
養、継代して実験に供することができる。
種類以上の細胞を同じ培地内で培養する方法をいう。用
いられる細胞としては増殖因子を産生する細胞を二種類
以上用いれば特に限定はないが、骨芽細胞と血管内皮細
胞とを組み合わせることが好ましい。本発明で用いられ
る骨芽細胞としては、ヒト骨芽細胞様細胞（ＳａＯＳ−
２）、ＨＯＳ、ＭＧ６３等が挙げられる。該骨芽細胞の
入手方法としては、アメリカンタイプカルチャーコレク
ションより入手可能であり、以下に詳述する培地にて培
養、継代して実験に供することができる。
【０００８】本発明で用いられる血管内皮細胞として
は、ヒトさい帯静脈血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、皮膚
毛細血管内皮細胞、肺毛細血管内皮細胞等が挙げられ
る。該血管内皮細胞は、三光純薬（株）、タカラ酒造
（株）、岩城硝子（株）等より入手可能であり、血管内
皮細胞培養用の培地を用いて培養、継代して実験に供す
ることができる。上記骨芽細胞と血管内皮細胞との共存
培養系は、以下に記載する培地等に骨芽細胞を播き込
み、その翌日以降に、トリプシンＥＤＴＡ溶液を用いて
剥がし培地に懸濁した血管内皮細胞を、骨芽細胞上に上
乗せし、共存培養系とすることができる。
は、ヒトさい帯静脈血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、皮膚
毛細血管内皮細胞、肺毛細血管内皮細胞等が挙げられ
る。該血管内皮細胞は、三光純薬（株）、タカラ酒造
（株）、岩城硝子（株）等より入手可能であり、血管内
皮細胞培養用の培地を用いて培養、継代して実験に供す
ることができる。上記骨芽細胞と血管内皮細胞との共存
培養系は、以下に記載する培地等に骨芽細胞を播き込
み、その翌日以降に、トリプシンＥＤＴＡ溶液を用いて
剥がし培地に懸濁した血管内皮細胞を、骨芽細胞上に上
乗せし、共存培養系とすることができる。
【０００９】ここで用いられる培養液としては、５％〜
１５％ウシ胎児血清を添加したマッコイ５Ａ改変培地、
アルファＭＥＭ培地等が挙げられる。なかでも１０％ウ
シ胎児血清を添加したマッコイ５Ａ改変培地を用いるこ
とが好ましい。
１５％ウシ胎児血清を添加したマッコイ５Ａ改変培地、
アルファＭＥＭ培地等が挙げられる。なかでも１０％ウ
シ胎児血清を添加したマッコイ５Ａ改変培地を用いるこ
とが好ましい。
【００１０】該培養液に添加される活性型ビタミンＤ類
とは、それ自体には生理作用の無いビタミンＤ類とは異
なり、カルシウム・骨代謝調節作用等の生理作用を有す
るビタミンＤ類をいう。これは、活性型ビタミンＤ2、
活性型ビタミンＤ3およびそれらの誘導体を含むもので
ある。その具体例としては、例えば1−ヒドロキシビタ
ミンＤ、1,２４−ジヒドロキシビタミンＤ、1,２５−ジ
ヒドロキシビタミンＤ、1,２４,２５−トリヒドロキシ
ビタミンＤ、２４,２４−ジフルオロ−1,２５−ジヒド
ロキシビタミンＤ、２６,２６,２６,２７,２７,２７−
ヘキサフルオロ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ等
が挙げられる。なかでも１−ヒドロキシビタミンＤ3、
1,２４（Ｒ）−ジヒドロキシビタミンＤ3、1,２５−ジ
ヒドロキシビタミンＤ3であることが好ましい。これら
活性型ビタミンＤ類を培地に添加する時期としては、骨
芽細胞を培養し、血管内皮細胞を上乗せした翌日以降培
地回収時まで添加する。培地に添加する濃度としては、
１×10-10Ｍ〜１×10-7Ｍの範囲であり、好ましくは１
×10-8Ｍ〜３×10-8Ｍ の範囲である。
とは、それ自体には生理作用の無いビタミンＤ類とは異
なり、カルシウム・骨代謝調節作用等の生理作用を有す
るビタミンＤ類をいう。これは、活性型ビタミンＤ2、
活性型ビタミンＤ3およびそれらの誘導体を含むもので
ある。その具体例としては、例えば1−ヒドロキシビタ
ミンＤ、1,２４−ジヒドロキシビタミンＤ、1,２５−ジ
ヒドロキシビタミンＤ、1,２４,２５−トリヒドロキシ
ビタミンＤ、２４,２４−ジフルオロ−1,２５−ジヒド
ロキシビタミンＤ、２６,２６,２６,２７,２７,２７−
ヘキサフルオロ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ等
が挙げられる。なかでも１−ヒドロキシビタミンＤ3、
1,２４（Ｒ）−ジヒドロキシビタミンＤ3、1,２５−ジ
ヒドロキシビタミンＤ3であることが好ましい。これら
活性型ビタミンＤ類を培地に添加する時期としては、骨
芽細胞を培養し、血管内皮細胞を上乗せした翌日以降培
地回収時まで添加する。培地に添加する濃度としては、
１×10-10Ｍ〜１×10-7Ｍの範囲であり、好ましくは１
×10-8Ｍ〜３×10-8Ｍ の範囲である。
【００１１】本発明で照射される超音波とは、熱を発生
しないような低出力の超音波をいう。具体的には周波数
１．３〜２ＭＨｚ、繰り返し周期１００〜１，０００ｋ
Ｈｚ、バースト幅１０〜２０００μｓ、出力１００ｍＷ
／ｃｍ2以下の低出力超音波である。
しないような低出力の超音波をいう。具体的には周波数
１．３〜２ＭＨｚ、繰り返し周期１００〜１，０００ｋ
Ｈｚ、バースト幅１０〜２０００μｓ、出力１００ｍＷ
／ｃｍ2以下の低出力超音波である。
【００１２】照射方法としては、例えば、１日２０分間
低出力超音波パルスをＥｘｏｇｅｎ社の超音波出力ユニ
ットを用いて、培養ウェルの底面に伝わるようにし、連
続４日間照射することが好ましい。
低出力超音波パルスをＥｘｏｇｅｎ社の超音波出力ユニ
ットを用いて、培養ウェルの底面に伝わるようにし、連
続４日間照射することが好ましい。
【００１３】照射条件としては、例えば、超音波出力の
特性としてバースト幅200μｓ、周波数１．５ＭＨｚ、
１ｋＨｚの繰り返し周期、出力３０ｍＷ／ｃｍ2で行う
ことが好ましい。
特性としてバースト幅200μｓ、周波数１．５ＭＨｚ、
１ｋＨｚの繰り返し周期、出力３０ｍＷ／ｃｍ2で行う
ことが好ましい。
【００１４】超音波発生装置については、Duarteの米国
特許（No.4,530,360）に記載されている装置を用いるこ
とができ、具体的には、患部に近接した体外より経皮的
に超音波のパルスを適用するための基礎的な非侵襲的治
療装置である。その装置から発生される超音波は、周波
数１．３〜２ＭＨｚ、繰り返し周期１００〜１，０００
Ｈｚ、バースト幅１０〜２０００μｓ、出力１００ｍＷ
／ｃｍ2以下の低出力超音波である。またその照射時間
は１日２０分以内とすることが好ましい。更に、Talish
他の米国特許（No. 5,003,965）に記載された超音波体
治療システムを用いることができ、これは被覆された光
学的な線によって遠隔制御ユニットに接続されたボディ
・アプリケータ・ユニットを有する超音波体治療システ
ムである。この場合の超音波は、周波数１．３〜２ＭＨ
ｚ、出力１〜５０ｍＷ／ｃｍ2の低出力超音波である。
特許（No.4,530,360）に記載されている装置を用いるこ
とができ、具体的には、患部に近接した体外より経皮的
に超音波のパルスを適用するための基礎的な非侵襲的治
療装置である。その装置から発生される超音波は、周波
数１．３〜２ＭＨｚ、繰り返し周期１００〜１，０００
Ｈｚ、バースト幅１０〜２０００μｓ、出力１００ｍＷ
／ｃｍ2以下の低出力超音波である。またその照射時間
は１日２０分以内とすることが好ましい。更に、Talish
他の米国特許（No. 5,003,965）に記載された超音波体
治療システムを用いることができ、これは被覆された光
学的な線によって遠隔制御ユニットに接続されたボディ
・アプリケータ・ユニットを有する超音波体治療システ
ムである。この場合の超音波は、周波数１．３〜２ＭＨ
ｚ、出力１〜５０ｍＷ／ｃｍ2の低出力超音波である。
【００１５】また、本発明の共存培養系の増殖因子の産
生誘導方法においては、これらの方法を組み合わせて、
培養液に活性型ビタミンＤ類を添加し、かつ、超音波を
照射することが特に好ましい。
生誘導方法においては、これらの方法を組み合わせて、
培養液に活性型ビタミンＤ類を添加し、かつ、超音波を
照射することが特に好ましい。
【００１６】
【発明の実施の形態】以下、実施例を挙げて本発明を説
明する。
明する。
【００１７】
【実施例】［実施例１〜３および比較例］ヒト骨芽細胞
様細胞（ＳａＯＳ−２）を２×１０5個／ｗｅｌｌの密
度でヒトI型コラーゲンでコートした６穴ウェルに２ｍ
ｌの量で播いた。この、ＳａＯＳ−２は、１９７５年コ
ーカシア人女性の骨肉腫より樹立された骨芽細胞様細胞
であり、アメリカンタイプカルチャーコレクションより
入手した。培地には１０％のウシ胎児血清を添加したマ
ッコイ５Ａ改変培地（１０％ＦＣＳ−マッコイ５Ａ改変
培地）を用いた。翌日、ヒトさい帯静脈血管内皮細胞
（ＨＵＶＥＣ）を3×105個／ｗｅｌｌの密度で各ウェル
に０．５ｍｌ添加した。ここで、ＨＵＶＥＣは三光純薬
（株）より入手したものを用いた。
様細胞（ＳａＯＳ−２）を２×１０5個／ｗｅｌｌの密
度でヒトI型コラーゲンでコートした６穴ウェルに２ｍ
ｌの量で播いた。この、ＳａＯＳ−２は、１９７５年コ
ーカシア人女性の骨肉腫より樹立された骨芽細胞様細胞
であり、アメリカンタイプカルチャーコレクションより
入手した。培地には１０％のウシ胎児血清を添加したマ
ッコイ５Ａ改変培地（１０％ＦＣＳ−マッコイ５Ａ改変
培地）を用いた。翌日、ヒトさい帯静脈血管内皮細胞
（ＨＵＶＥＣ）を3×105個／ｗｅｌｌの密度で各ウェル
に０．５ｍｌ添加した。ここで、ＨＵＶＥＣは三光純薬
（株）より入手したものを用いた。
【００１８】実験は以下の４群を設定した。 比較例；対照群（コントロール） 実施例１；超音波照射群 超音波を１日２０分間、連続４日間ウェルの底面より照
射した。 実施例２；活性型ビタミンＤ処理群 10-8Ｍの1,２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を添加し
た。 実施例３；超音波照射＋活性型ビタミンＤ処理群 培地に10-8Ｍの1,２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を添
加し、超音波を照射した。
射した。 実施例２；活性型ビタミンＤ処理群 10-8Ｍの1,２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を添加し
た。 実施例３；超音波照射＋活性型ビタミンＤ処理群 培地に10-8Ｍの1,２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を添
加し、超音波を照射した。
【００１９】活性型ビタミンＤの添加に関しては、比較
例および実施例１では活性型ビタミンＤのビークルであ
るエタノールを０．１％含んだ１０％ＦＣＳ−マッコイ
５Ａ改変培地に交換し、２日目に培地を新鮮な同一の組
成の培地に交換した。
例および実施例１では活性型ビタミンＤのビークルであ
るエタノールを０．１％含んだ１０％ＦＣＳ−マッコイ
５Ａ改変培地に交換し、２日目に培地を新鮮な同一の組
成の培地に交換した。
【００２０】実施例２および実施例３では、１×10-8Ｍ
の1,２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を含んだ１０％Ｆ
ＣＳ−マッコイ５Ａ改変培地に交換し、２日目に培地を
新鮮な同一の組成の培地に交換した。
の1,２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を含んだ１０％Ｆ
ＣＳ−マッコイ５Ａ改変培地に交換し、２日目に培地を
新鮮な同一の組成の培地に交換した。
【００２１】超音波の照射に関しては、比較例および実
施例２では、超音波は照射せず、実施例１および実施例
３では１日２０分間低出力超音波パルスをＥｘｏｇｅｎ
社の超音波出力ユニットを用いてウェルの底面より連続
４日間照射した。ここで、超音波出力の特性は、バース
ト幅200μｓ、周波数１．５ＭＨｚ、１ｋＨｚの繰り返
し周期、出力３０ｍＷ／ｃｍ2で行った。
施例２では、超音波は照射せず、実施例１および実施例
３では１日２０分間低出力超音波パルスをＥｘｏｇｅｎ
社の超音波出力ユニットを用いてウェルの底面より連続
４日間照射した。ここで、超音波出力の特性は、バース
ト幅200μｓ、周波数１．５ＭＨｚ、１ｋＨｚの繰り返
し周期、出力３０ｍＷ／ｃｍ2で行った。
【００２２】４日間の活性型ビタミンＤ添加および超音
波照射を行った後の翌日、培地を回収し、アマシャム社
製のＰＤＧＦ−ＡＢ量を特異的に測定するＥＬＩＳＡキ
ットにより培地中のＰＤＧＦ−ＡＢ濃度を測定し、結果
を図１に記載した。
波照射を行った後の翌日、培地を回収し、アマシャム社
製のＰＤＧＦ−ＡＢ量を特異的に測定するＥＬＩＳＡキ
ットにより培地中のＰＤＧＦ−ＡＢ濃度を測定し、結果
を図１に記載した。
【００２３】図１から明らかな通り、実施例１〜３にお
けるＰＤＧＦ−ＡＢの産生量は比較例に比べて増加して
いる。また、実施例１〜３のなかでも特に実施例３にお
いては、ＰＤＧＦ−ＡＢの産生量は大幅に増加してい
る。
けるＰＤＧＦ−ＡＢの産生量は比較例に比べて増加して
いる。また、実施例１〜３のなかでも特に実施例３にお
いては、ＰＤＧＦ−ＡＢの産生量は大幅に増加してい
る。
【００２４】
【発明の効果】本発明の共存培養系における増殖因子の
産生誘導方法によれば、増殖因子、特にＰＤＧＦを大量
に産生することが可能となる。そして、本発明によって
大量に産生された増殖因子を用いることにより骨折や創
傷の治療剤として応用することが可能となる。
産生誘導方法によれば、増殖因子、特にＰＤＧＦを大量
に産生することが可能となる。そして、本発明によって
大量に産生された増殖因子を用いることにより骨折や創
傷の治療剤として応用することが可能となる。
【図１】図１は培地中のＰＤＧＦ−ＡＢ量を示したもの
である。
である。
＊、＊＊はDunnetの多重比較検定の結果、対照群に対し
て、それぞれＰ＜０．０５、Ｐ＜０．０１であることを
表す。
て、それぞれＰ＜０．０５、Ｐ＜０．０１であることを
表す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 太田 知裕 東京都日野市旭が丘４丁目３番２号 帝人 株式会社東京研究センター内 Ｆターム(参考） 4B033 NG10 NH03 NJ05 4B064 AG13 CA10 CC03 CC04 CD05 DA03 4B065 AA93X BB20 BC50 CA24 CA44
Claims (5)
- 【請求項１】 共存培養系において、培養液に活性型ビ
タミンＤ類を添加することを特徴とする増殖因子の産生
誘導方法。 - 【請求項２】 共存培養系において、超音波を照射する
ことを特徴とする増殖因子の産生誘導方法。 - 【請求項３】 共存培養系において、培養液に活性型ビ
タミンＤ類を添加し、かつ、超音波を照射することを特
徴とする増殖因子の産生誘導方法。 - 【請求項４】 該増殖因子が、血小板由来増殖因子であ
る請求項１〜３いずれか１項記載の増殖因子の産生誘導
方法。 - 【請求項５】 共存培養系に用いる細胞が、骨芽細胞と
血管内皮細胞である請求項１〜４いずれか１項記載の増
殖因子の産生誘導方法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10175741A JP2000004875A (ja) | 1998-06-23 | 1998-06-23 | 増殖因子の産生誘導方法 |
| DE69920015T DE69920015T2 (de) | 1998-06-23 | 1999-06-23 | Verfahren zur induktion der herstellung von wachstumsfaktoren |
| AU48199/99A AU754874B2 (en) | 1998-06-23 | 1999-06-23 | A method for inducing production of growth factors |
| CA002332935A CA2332935A1 (en) | 1998-06-23 | 1999-06-23 | A method for inducing production of growth factors |
| PCT/US1999/012815 WO1999067289A1 (en) | 1998-06-23 | 1999-06-23 | A method for inducing production of growth factors |
| EP99931766A EP1087995B1 (en) | 1998-06-23 | 1999-06-23 | A method for inducing production of growth factors |
| ES99931766T ES2229729T3 (es) | 1998-06-23 | 1999-06-23 | Un metodo para inducir la produccion de factores de crecimiento. |
| AT99931766T ATE275580T1 (de) | 1998-06-23 | 1999-06-23 | Verfahren zur induktion der herstellung von wachstumsfaktoren |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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