ITTO20090515A1 - Composizione per il trattamento di infertilita' maschile - Google Patents

Description

“Composizione per il trattamento di infertilità maschileâ€

DESCRIZIONE

La presente invenzione si riferisce al trattamento terapeutico di infertilità maschile, eventualmente secondaria a patologie testicolari implicanti ipossia e/o ischemia tissutale, quali il varicocele e la torsione del testicolo.

Il varicocele à ̈ una patologia caratterizzata da stasi venosa cronica con ipossia tissutale che crea un’elevata pressione idrostatica sul plesso pampiniforme. L’incidenza del varicocele si aggira intorno al 35-40% tra gli uomini infertili e questa patologia à ̈ la principale causa di infertilità trattata chirurgicamente.

La torsione del testicolo à ̈ un’emergenza medica che richiede una diagnosi ed un trattamento immediati, onde evitare il successivo danno testicolare e l’eventuale infertilità. Il principale processo fisiopatologico della torsione testicolare à ̈ il danno da ischemia e riperfusione dovuto alla rotazione del cordone spermatico ed al suo rilasciamento.

Diversi meccanismi sono coinvolti nello sviluppo del danno testicolare che consegue al processo di torsione e detorsione. Il testicolo produce diverse citochine infiammatorie, quali il fattore di necrosi tumorale alfa (TNF-alfa) e l’interleuchina 1 beta (IL-1b). Inoltre, l’ischemia e riperfusione del testicolo determina un’eccessiva produzione di specie reattive dell’ossigeno, attiva la famiglia delle protein chinasi stimolate dai mitogeni (MAPK) ed innesca il processo apoptotico. In particolare, le MAPK attive sono responsabili della fosforilazione di una varietà di proteine effettrici, inclusi diversi fattori di trascrizione, quale il fattore nucleare kappaB (NF-kB), che successivamente si legano agli elementi regolatori di geni inducibili. Questa cascata patologica à ̈ responsabile dell’atrofia testicolare, della riduzione del flusso sanguigno e dell’alterata spermatogenesi che si osserva nelle fasi più avanzate del danno.

Ad oggi non esiste una terapia medica codificata per il trattamento delle sequele derivanti da tali patologie. L’ipossia attiva sia il fattore HIF-1 che il fattore di crescita vascolare endoteliale (VEGF) e quest’ultimo, oltre a stimolare l’angiogenesi e la formazione di nuovi capillari e vasi sanguigni nei normali processi fisiologici, gioca un ruolo protettivo nella regolazione della funzione testicolare e spermatogenetica. Il VEGF esercita la sua funzione biologica tramite il legame a due recettori accoppiati a tirosina chinasi denominati VEGFR-1 (o flt-1) e VEGFR-2 (o flk/KDR), che sono anche presenti sulla superficie delle cellule di Sertoli e di Leydig. Il VEGF à ̈ presente nell’epitelio prostatico, nell’epitelio delle ghiandole seminali del tratto genitale maschile e nello sperma. Dati sperimentali hanno suggerito che il trattamento con il VEGF esplica effetti protettivi in un modello sperimentale di torsione del testicolo. La terapia con tale proteina ricombinante incontra tuttavia numerose difficoltà, a causa della scarsa biodisponibilità di questa proteina, della sua ridotta emivita plasmatica e della potenziale induzione di gravi effetti collaterali.

Gli inventori hanno ora sorprendentemente trovato che la somministrazione di una composizione a base di polinucleotidi, nucleotidi e/o nucleosidi ad un paziente affetto da una delle patologie sopra indicate, Ã ̈ in grado di esercitare un effetto terapeutico nei confronti del danno tissutale che si verifica in tali patologie, stimolando la produzione fisiologica di VEGF in condizioni patologiche di bassa perfusione tissutale e/o ipossia.

Un primo oggetto della presente invenzione à ̈ quindi una composizione farmaceutica comprendente un principio attivo scelto dal gruppo che consiste di polinucleotidi estratti da fonti naturali o di sintesi, nucleotidi, nucleosidi e qualsiasi loro combinazione, per l’impiego come medicamento nel trattamento terapeutico dell’infertilità maschile, eventualmente secondaria ad una patologia testicolare implicante ipossia e/o ischemia tissutale, quale il varicocele o la torsione del testicolo.

Esempi di infertilità maschile sono ipospermia, astenospermia o azospermia.

Un secondo oggetto dell’invenzione à ̈ l’impiego di una composizione come sopra definita per la preparazione di un medicamento per il trattamento terapeutico dell’infertilità maschile, eventualmente secondaria ad una patologia testicolare implicante ipossia e/o ischemia tissutale, quale il varicocele o la torsione del testicolo.

Nell’ambito della presente descrizione, il termine polinucleotidi (PN) include sia i poliribonucleotidi sia i polidesossiribonucleotidi (PDRN). Come sarà illustrato in maggiore dettaglio nel seguito, la lunghezza delle catene polinucleotidiche e quindi il loro peso molecolare sono variabili in funzione di vari parametri, fra i quali la via di somministrazione selezionata. In alcune forme di realizzazione dell’invenzione i polinucleotidi sono particolarmente polidesossiribonucleotidi (PDRN). A titolo esemplificativo ma non limitativo, i polidosossiribonucletidi (PDRN) hanno un peso molecolare preferibilmente compreso fra 50 e 1500 kDalton.

Una composizione di polinucleotidi idonea all’impiego secondo l'invenzione comprende una frazione di catene poliribonucleotidiche e/o polidesossiribonucleotidiche di diverso peso molecolare, ottenute per sintesi oppure ottenute da fonti naturali, che possono essere di origine animale o vegetale quali sperma di pesce o piante, lo sperma di pesce destinato all'alimentazione umana essendo la fonte preferita.

Composizioni a base di polinucleotidi sono note e disponibili in commercio.

FR 2676926 descrive composizioni farmaceutiche contenenti polideossiribonucleotidi altamente polimerizzati, ottenuti da sperma di pesce ed utilizzate per il trattamento o la prevenzione di deficit immunitari; sono descritte composizioni contenenti polideossiribonucleotidi in un solvente non ionico, utilizzabili per via parenterale, particolarmente per via intramuscolare e/o intravenosa.

Procedimenti per la preparazione di polideossiribonucleotidi ottenuti dalla placenta di mammiferi sono descritti in EP 0226 254.

I polinucleotidi utilizzati nell’abito dell’invenzione sono altamente purificati, ossia si tratta di una frazione di polinucleotidi che à ̈ sostanzialmente esente da proteine o peptidi farmacologicamente attivi. In una forma di realizzazione preferita, la frazione di polinucleotidi ha preferibilmente una purezza uguale o superiore al 95% e più preferibilmente superiore al 98%.

I polinucleotidi utilizzati nell’ambito dell’invenzione hanno preferibilmente un peso molecolare compreso tra 220 Dalton (0,22 kDalton) e 2500 kDalton.

Oltre ai polinucleotidi che hanno una loro particolare cinetica in funzione del peso molecolare, l’effetto à ̈ ugualmente ottenibile anche con l’impiego di nucleosidi, nucleotidi o brevi catene polinucleotidiche. Gli inventori hanno infatti verificato che gli effetti citati possono anche essere ottenuti in vitro con l’impiego di miscele di singoli nucleotidi, e ciò avvalora precipuamente l’impiego orale del prodotto. E’ infatti noto che l’apporto esogeno per via orale prevede, per gli acidi nucleici ingeriti, una prima digestione nello stomaco ad opera di proteasi che scindono le nucleoproteine, dopodiché una parziale idrolisi nello stomaco e successivamente la liberazione di polinucleotidi, nucleotidi e nucleosidi ad opera delle nucleasi e fosfodiesterasi.

La maggior parte delle catene polinucleotidiche à ̈ completamente idrolizzata a nucleotidi nell’intestino, dove queste molecole vengono assorbite. Infine la fosfatasi alcalina degli enterociti scinde i gruppi fosfato dei nucleotidi (nucleotidi mono, bi e trifosfati) liberando nucleosidi. Le nucleosidasi scindono quindi i nucleosidi liberando basi azotate e zuccheri.

Ciò implica che, particolarmente in riferimento alla somministrazione orale, un’efficacia può essere conseguita somministrando singoli nucleotidi o nucleosidi o catene polinucleotidiche.

Conseguentemente, la presente invenzione include forme di realizzazione in cui la composizione dell’invenzione comprende miscele di singoli nucleotidi e/o nucleosidi e/o catene polinucleotidiche di vario peso molecolare.

In funzione della cinetica desiderata, può essere preferibile la somministrazione di singoli nucleotidi o nucleosidi o di polinucleotidi a catena più o meno lunga (e quindi con peso molecolare più o meno elevato), come pure la somministrazione di una miscela variamente composta dei suddetti componenti.

I polinucleotidi possono essere ottenuti a partire da una fonte animale o vegetale ricca di DNA o RNA, mediante i procedimenti descritti nella letteratura sopra citata.

A titolo di esempio, una frazione di polinucleotidi utilizzabile nell'ambito dell'invenzione à ̈ ottenuta mediante un procedimento che comprende le fasi di:

1) lisi enzimatica della matrice organica;

2) filtrazione chiarificante della soluzione risultante;

3) precipitazione con sali di ammonio quaternario; 4) scomplessamento del precipitato;

5) selezione molecolare per precipitazioni selettive con miscele di acqua e alcool

6) purificazione per ri-precipitazione con alcool Una composizione di polinucleotidi utilizzabile nell’ambito dell’invenzione à ̈ formulata in qualsivoglia forma di dosaggio adatta alla patologia da trattare. Forme di dosaggio preferite sono quelle idonee alla somministrazione per via sistemica, in particolare orale o intramuscolare, come ad esempio sotto forma di formulazione iniettabile per via intramuscolare o sotto forma di compresse.

La scelta e la preparazione della forma di somministrazione ed il relativo dosaggio rientrano comunque nelle capacità del tecnico medio del settore.

In una forma di realizzazione preferita, una composizione di polinucleotidi atta ad essere impiegata nell’invenzione à ̈ idonea alla somministrazione di una dose di polinucleotidi compresa nell’intervallo di circa 0,01-10 mg/kg, più preferibilmente compresa nell’intervallo di circa 0,01-5 mg/kg, ancor più preferibilmente compresa nell’intervallo di circa 0,07 a 1,25 mg/kg, riferito al peso corporeo del paziente. Nel caso di un paziente umano di circa 70 kg, tali dosi corrispondono ad una quantità in peso di polinucleotidi compresa fra 0,7 mg e 700 mg, preferibilmente fra 0,7 mg e 350 mg, più preferibilmente fra 4,9 mg e 87,5 mg.

Nelle somministrazioni orali sono impiegati più preferibilmente pesi molecolari minori (dai 220 dalton ai 1000 kDalton), nelle somministrazioni parenterali sono impiegati più preferibilmente pesi molecolari maggiori (dai 70 Kdalton ai 2500 kDalton).

Si deve comprendere che nell’ambito della presente descrizione il termine “paziente†à ̈ utilizzato per indicare qualsiasi soggetto, umano o non umano, che necessiti di un trattamento terapeutico volto a risolvere l’infertilità maschile, eventualmente secondaria a una patologia implicante ipossia e/o ischemia tissutale a livello del testicolo, quale il varicocele o la torsione testicolare. Preferibilmente, il paziente à ̈ un essere umano.

Gli esempi che seguono, in cui sono descritti i modelli animali di varicocele e di torsione del testicolo impiegati dagli inventori ed i trattamenti terapeutici sperimentati su tali modelli, sono forniti a puro titolo illustrativo, senza alcun intento limitativo della portata dell’invenzione come definita nelle annesse rivendicazioni.

Negli esempi che seguono à ̈ fatto specifico riferimento alle annesse figure, in cui:

la figura 1 à ̈ una fotografia al microscopio che mostra l’istologia del testicolo in un animale falsamente operato (sham);

la figura 2 à ̈ una fotografia al microscopio che mostra l’istologia del testicolo in un animale con varicocele;

la figura 3 à ̈ una fotografia al microscopio che mostra l’istologia del testicolo in un animale con varicocele e sottoposto a varicocelectomia (valutazione dopo 7 giorni);

la figura 4 à ̈ una fotografia al microscopio che mostra l’istologia del testicolo in un animale con varicocele e sottoposto a varicocelectomia (valutazione dopo 14 giorni);

la figura 5 à ̈ una fotografia al microscopio che mostra l’istologia del testicolo in un animale con varicocele e trattato con polinucleotidi (PDRN) (valutazione dopo 7 giorni);

la figura 6 à ̈ una fotografia al microscopio che mostra l’istologia del testicolo in un animale con varicocele e trattato con polinucleotidi (PDRN)(valutazione dopo 14 giorni);

la figura 7 à ̈ una fotografia al microscopio che mostra l’istologia del testicolo in un animale con varicocele e trattato con la combinazione di polinucleotidi (PDRN) e chirurgia (valutazione dopo 7 giorni);

la figura 8 à ̈ una fotografia al microscopio che mostra l’istologia del testicolo in un animale con varicocele e trattato con la combinazione di polinucleotidi (PDRN) e chirurgia (valutazione dopo 14 giorni);

la figura 9 à ̈ un grafico ad istogrammi che mostra l’espressione dell’mRNA del VEGF nel testicolo sottoposto a ischemia e riperfusione (9A) e nel testicolo controlaterale (9B) dopo 1, 7 e 30 giorni dai trattamenti indicati in legenda;

la figura 10 à ̈ un grafico ad istogrammi che mostra l’espressione della proteina matura VEGF nel testicolo sottoposto a ischemia e riperfusione (10A) e nel testicolo controlaterale (10B) dopo 1, 7 e 30 giorni dai trattamenti indicati in legenda;

la figura 11 à ̈ una serie di fotografie al microscopio di preparati istologici che mostrano l’evoluzione dei fenomeni di edema, estasia venulare e necrosi coagulativa globulare dopo ischemia e riperfusione del testicolo e trattamento con veicolo da solo (11A, 11C, 11E), DMPX PDRN (11G), PDRN da solo (11B, 11D e 11F) o DMPX da solo (11H);

la figura 12 à ̈ una serie di fotografie al microscopio di preparati istologici che mostrano l’espressione del VEGF nelle cellule germinali del testicolo omolaterale dopo ischemia e riperfusione e trattamento con veicolo dal solo (12A, 12C, 12E), DMPX PDRN (12G), PDRN da solo (12B, 12D e 12F) o DMPX da solo (12H);

la figura 13 à ̈ una serie di fotografie al microscopio di preparati istologici che mostrano l’espressione del recettore per il VEGF nelle cellule di Leydig del testicolo omolaterale dopo ischemia e riperfusione e trattamento con veicolo dal solo (13A, 13C, 13E), DMPX PDRN (13G), PDRN da solo (13B, 13D e 13F) o DMPX da solo (13H).

Esempio 1: modello animale di varicocele

Ratti maschi Sprague-Daley (di peso corporeo tra 250 e 300 g) sono stati sottoposti a parziale legatura della vena renale sinistra per la creazione di un reflusso nella vena spermatica di sinistra, determinando così una profonda alterazione della spermatogenesi da varicocele nel plesso pampiniforme (gruppo varicocele) dopo anestesia generale con pentobarbitale sodico (50 mg/kg/i.p.). Il varicocele à ̈ stato protratto per 28 giorni. Nel gruppo sham i ratti sono stati sottoposti alla stessa procedura chirurgica eseguita per i ratti con varicocele ad eccezione della parziale occlusione della vena renale. Gli animali sono stati randomizzati per ricevere, dopo 28 giorni, i seguenti trattamenti: 1) semplice varicocelectomia mediante legatura della vena spermatica sinistra e sacrificio degli animali dopo 7 o 14 giorni; 2) mantenimento del varicocele e somministrazione di polidesossiribonucleotidi (PDRN) (8 mg/kg/i.p.) per 7 o 14 giorni; 3) varicocelectomia e PDRN (8 mg/kg/i.p.) dopo 7 o 14 giorni. Gli animali di ogni gruppo sono stati sacrificati dopo 7 o 14 giorni, rispettivamente, dalla randomizzazione.

I risultati istologici riportati nelle figure 1-8 dimostrano che il varicocele, paragonato agli animali sham, induce una drammatica alterazione della normale architettura del testicolo caratterizzata da edema, ectasia dei vasi venosi e linfatici e cambiamenti significativi nella cellule del Sertoli e del Leydig (figure 1 e 2). La varicocelectomia riduce significativamente tali alterazioni istologiche valutate a 7 e 14 giorni dalle procedure chirurgiche (figure 3 e 4). Sorprendentemente, la somministrazione di PDRN à ̈ in grado di proteggere, in maniera del tutto sovrapponibile all’intervento chirurgico, il testicolo dal danno prodotto dal varicocele sia a 7 sia a 14 giorni (figure 5 e 6). Il trattamento medico combinato con PDRN e varicocelectomia non sembra produrre un’ulteriore protezione dal danno indotto dal varicocele (figure 7 e 8). Inoltre, il varicocele ha causato un’alterazione nella spermatogenesi come si vede dalla tabella 1 che riporta la valutazione della spermatogenesi, espressa in termini di Punteggio di Johnsen. (P<0,05).

La somministrazione di PDRN ha migliorato l’attività spermatogenetica (tabella 1).

Nel complesso, tali risultati dimostrano che la somministrazione di PDRN svolge una sorprendente ed inaspettata azione terapeutica nel varicocele.

Esempio 2: modello animale di torsione testicolare Ratti maschi Sprague-Daley (del peso di 250-300 g) sono stati sottoposti, dopo anestesia generale con pentobarbitale sodico (50 mg/kg/i.p.), ad ischemia e riperfusione del testicolo (TI/R) o sham-ischemia (sham TI/R). TI/R à ̈ stata indotta tramite torsione di 720° del testicolo e del cordone spermatico sinistro, in modo tale da produrre una occlusione totale del flusso della durata di 1 ora. Lo stesso testicolo à ̈ stato quindi detorto. Gli animali sham sono stati sottoposti alla stessa procedura chirurgica degli animali TI/R, ad eccezione dell’occlusione testicolare. Gli animali sono stati quindi randomizzati per ricevere, immediatamente dopo la detorsione, i seguenti trattamenti: 1) PDRN (8 mg/kg/i.p.); 2) DMPX (3,7-dimetil-1-propargilxantina) (0,1/mg/kg/i.p.); 3) PDRN (8 mg/kg/i.p.) e contemporaneamente DMPX (0,1/mg/kg/i.p.); 4) veicolo (1 ml/kg 0,9% NaCl). DMPX à ̈ un antagonista selettivo dei recettori dell’adenosina A2A. PDRN, DMPX e veicolo sono stati iniettati intraperitonealmente rispettivamente per 30 giorni. Gli animali di ciascun gruppo sono stati sacrificati dopo 1, 7 o 30 giorni dall’ischemia e riperfusione.

Sono stati studiati sia l’mRNA sia l’espressione della proteina del VEGF-A dopo 7 e 30 giorni dal danno in entrambi i testicoli. Il danno istologico à ̈ stato anche analizzato a 1, 7 e 30 giorni. Infine, l’analisi immunoistochimica per il VEGF-A ed il suo recettore VEGFR2, nonché l’analisi dell’attività spermatogenetica, sono state eseguite a 1, 7 e 30 giorni.

L’ischemia e riperfusione del testicolo ha prodotto un incremento sia dell’RNA messaggero sia della proteina del VEGF in entrambi i testicoli. Il trattamento con PDRN ha aumentato in maniera significativa sia l’RNA messaggero per il VEGF (figure 9A e 9B) sia la sua proteina matura (figure 10A e 10B). Al contrario, la somministrazione combinata con DMPX ha annullato l’effetto protettivo del PDRN (figure 9A e 9B; 10A e 10B).

Nessun cambiamento significativo à ̈ stato evidenziato sui parametri valutati negli animali sham TI/R trattati sia con veicolo che con le diverse sostanze.

L’ischemia e riperfusione del testicolo ha provocato edema, estasia venulare e necrosi coagulativa globulare dopo 1, 7 e 30 giorni dalla riperfusione (figure 11A, 11C, 11E e tabella 1). La tabella 2 mostra i punteggi istologici dei testicoli sottoposti a ischemia e riperfusione (TI/R) di ratti trattati con PDRN (8 mg/Kg i.p.) o con DMPX (0,1 mg/Kg/i.p.) o con DMPX+PDRN o con veicolo (1 ml/Kg/ i.p.). Ciascun gruppo include 7 animali. L’assegnazione del punteggio istologico à ̈ stata effettuata in base ai seguenti criteri: 0 (assente), 1 (lieve), 2 (moderato), 3 (grave).

Il trattamento con PDRN ha ridotto le alterazioni istologiche nel testicolo omolaterale (figure 11B, 11D, 11F e tabella 2).

Al contrario, la somministrazione combinata con DMPX ha abolito gli effetti protettivi del PDRN (figure 11G e H, tabella 2). Risultati sovrapponibili sono stati evidenziati nel testicolo controlaterale di animali sottoposti ad ischemia e riperfusione trattati sia con veicolo che con le diverse sostanze.

Inoltre, l’ischemia e riperfusione del testicolo ha causato un’alterazione nella spermatogenesi soprattutto dopo 30 giorni dalla riperfusione, come si vede dalla tabella 3 che riporta la valutazione della spermatogenesi, espressa in termini di Punteggio di Johnsen. (P<0,05).

La somministrazione di PDRN ha migliorato l’attività spermatogenetica (tabella 3).

L’analisi immunoistochimica ha inoltre rivelato una modesta espressione del VEGF nelle cellule germinali del testicolo omolaterale in animali sottoposti ad ischemia e riperfusione e trattati con veicolo (figure 12 A, 12C, 12E). Il trattamento con PDRN ha evidenziato una forte reattività del VEGF dopo 1 ,7 e 30 giorni dalla riperfusione (figure 12B, 12D, 12F). La somministrazione combinata con DMPX non ha causato alcun cambiamento significativo nell’espressione del VEGF (figure 12G e 12H). Risultati sovrapponibili sono stati evidenziati nel testicolo controlaterale di animali sottoposti ad ischemia e riperfusione trattati sia con veicolo che con le diverse sostanze.

Infine, l’analisi immunoistochimica ha evidenziato una moderata espressione del recettore per il VEGF nelle cellule di Leydig nel testicolo omolaterale dopo 1 giorno dalla riperfusione (figura 13A). Il trattamento con PDRN ha incrementato la reattività del recettore per il VEGF (figura 13B). Invece, una forte immunoreattività per il VEFG recettore à ̈ stata evidenziata dopo 7 giorni dalla riperfusione sia negli animali trattati con veicolo che con PDRN (figure 13C e 13D), mentre una moderata espressione à ̈ stata rivelata dopo 30 giorni (figure 13E e 13F).

La somministrazione combinata con DMPX non ha prodotto alcuna modificazione significativa nell’espressione del VEGF recettore (figure 13G e 13H). Risultati sovrapponibili sono stati evidenziati nel testicolo controlaterale di animali sottoposti ad ischemia e riperfusione trattati sia con veicolo che con le diverse sostanze.

Esempio 3: valutazione del range terapeutico nell’uomo

Per valutare il range terapeutico del PDRN nell’uomo sono stati condotti degli esperimenti nel ratto utilizzando come end-point il danno istologico a 24 ore dalla riperfusione e saggiando quantità crescenti di PDRN espresse come dosi umani equivalenti (HED; tabella 3 e figura 14). La tabella 4, in particolare, riguarda lo studio doserange effettuato con il PDRN per identificare la dose terapeutica negli esseri umani. Il punto finale oggetto dello studio era il danno istologico a 24 ore. Il punteggio istologico à ̈ stato valutato nei testicoli di ratti sottoposti a ischemia e riperfusione (TI/R). Il punteggio istologico à ̈ stato assegnato in base ai seguenti criteri: 0 (assente), 1 (lieve), 2 (moderato), 3 (grave).

Per convertire tali dosi à ̈ stata utilizzata la seguente formula: HED = dose nell’animale in mg/kg x (peso animale in kg/ peso dell’uomo in kg). I risultati riportati nella tabella 4 e nella figura 14 dimostrano che il PDRN esercita un effetto protettivo ottimale in un range di dosi che in un uomo di 70 kg varia fra circa 5,4 mg e circa 87,3 mg.

In conclusione, i risultati ottenuti indicano che i polinucleotidi (PDRN) 1) proteggono il testicolo dal danno da ipossia/ischemia attraverso la produzione di VEGF e può rappresentare un nuovo ed innovativo approccio per la terapia dell’infertilità nei pazienti affetti torsione del testicolo o varicocele.

Tabella 1: Valutazione della spermatogenesi nel

modello di varicocele sperimentale

Gruppi sperimentali<Punteggio di>JohnsenSham varicocele 9,33±0,22 Varicocele 2,63±0,46 Varicocele chirurgia

(7 giorni)8,22±0,54 Varicocele chirurgia

(14 giorni)<8,66 ± 0,33>Varicocele PDRN (7 giorni) 8,42±0,37 Varicocele PDRN (14 giorni) 8,78±0,41 Varicocele PDRN chirurgia

(7 giorni)8,48±0,40 Varicocele PDRN chirurgia

(14 giorni)<8,83±0,48>

Tabella 2: Punteggio istologico nel modello di

ischemia e riperfusione del testicolo (TI/R).

Edema Necrosi Gruppi Ectasia

extra- lobulare Atrofia sperimentali venulare

tubulare coagulativa sham 0 0 0 0 TI/R veicolo

(1 giorno)<3 3 3 0>TI/R PDRN

(1 giorno)<0 1 1 0>TI/R veicolo

(7 giorni)<3 3 3 0>TI/R PDRN

(7 giorni)<1 0 0 0>TI/R veicolo

(30 giorni)<2 2 2 3>TI/R PDRN

(30 giorni)<1 0 0 0>TI/R DMPX

PDRN (30 giorni)<3 3 2 3>TI/R DMPX

(30 giorni)<3 3 2 1>Tabella 3: Valutazione della spermatogenesi nella ischemia e riperfusione del testicolo (TI/R) Gruppi sperimentali Punteggio di Johnsen sham 9,81±0,15

TI/R veicolo (1 giorno) 5,47±1,21

TI/R PDRN (1 giorno) 8,83±0,20

TI/R veicolo (7 giorni) 1,21±0,04

TI/R PDRN (7 giorni) 9,00±0,40

TI/R veicolo (30 giorni) 1,73±0,08

TI/R PDRN (30 giorni) 8,92±0,30

TI/R DMPX PDRN 1,75±0,06

(30 giorni)

TI/R DMPX (30 giorni) 2,36±1,0

Tabella 4: Identificazione della dose terapeutica ottimale negli esseri umani (6 animali per esperimento)

HED di Dose Edema Edema Estasia Gruppo PDRN PDRN extra- intravenulare (mg/giorno) (mg) tubulare tubulare Sham 97,3 8 0 0 0 TI/R

veicolo<- - 3 3 3>TI/R

PDRN5,4 0,5 2 2 2 TI/R

PDRN10,9 1 1 1 1 TI/R

PDRN21,8 2 0 0 1 TI/R

PDRN43,6 4 0 0 1 TI/R

PDRN87,3 8 0 0 1

Claims (13)

1. RIVENDICAZIONI 1. Composizione farmaceutica comprendente un principio attivo scelto dal gruppo che consiste di polinucleotidi estratti da fonti naturali o di sintesi, nucleotidi, nucleosidi e qualsiasi loro combinazione, per l'impiego come medicamento nel trattamento terapeutico dell’infertilità maschile eventualmente secondaria ad una patologia testicolare implicante ipossia e/o ischemia tissutale.
2. 2. Composizione secondo la rivendicazione 1, in cui l’infertilità maschile à ̈ ipospermia, astenospermia o azospermia.
3. 3. Composizione secondo la rivendicazione 1 o 2, in cui la patologia testicolare à ̈ varicocele o torsione del testicolo.
4. 4. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 3, comprendente polinucleotidi aventi un peso molecolare compreso tra 220 Dalton e 2500 kDalton.
5. 5. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 4, in cui detti polinucleotidi sono polinucleotidi naturali estratti da sperma di pesce o da vegetali o sono polinucleotidi di sintesi.
6. 6. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 5, in una forma di dosaggio idonea alla somministrazione orale.
7. 7. Composizione secondo la rivendicazione 6, comprendente polinucleotidi aventi un peso molecolare compreso fra 220 Dalton e 1000 kDalton.
8. 8. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 5, in una forma di dosaggio idonea alla somministrazione parenterale.
9. 9. Composizione secondo la rivendicazione 8, comprendente polinucleotidi aventi un peso molecolare compreso fra 70 Kdalton e 2500 kDalton.
10. 10. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 9, in cui i polinucleotidi sono polidesossiribonucleotidi (PDRN).
11. 11. Impiego di una composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 10, per la preparazione di un medicamento per il trattamento terapeutico dell’infertilità maschile eventualmente secondaria ad una patologia testicolare implicante ipossia e/o ischemia tissutale.
12. 12. Impiego secondo la rivendicazione 11, in cui la patologia testicolare à ̈ varicocele o torsione del testicolo.
13. 13. Impiego secondo la rivendicazione 11 o 12, in cui il trattamento terapeutico à ̈ effettuato mediante somministrazione di una dose giornaliera di principio attivo compresa nell’intervallo di 0,01 a 10 mg/kg riferito al peso corporeo del paziente, preferibilmente nell’intervallo di 0,01 a 5 mg/kg, ancor più preferibilmente nell’intervallo di 0,07 a 1,25 mg/kg.