ITRM950314A1 - La sequenza del dna completo dell'inserto carlubo codificante per una proteina heat shch di forda (cansp 70) di candida albicans ceppo atcc - Google Patents
La sequenza del dna completo dell'inserto carlubo codificante per una proteina heat shch di forda (cansp 70) di candida albicans ceppo atcc Download PDFInfo
- Publication number
- ITRM950314A1 ITRM950314A1 IT95RM000314A ITRM950314A ITRM950314A1 IT RM950314 A1 ITRM950314 A1 IT RM950314A1 IT 95RM000314 A IT95RM000314 A IT 95RM000314A IT RM950314 A ITRM950314 A IT RM950314A IT RM950314 A1 ITRM950314 A1 IT RM950314A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- sequence
- carlv130
- dna sequence
- cahsp70
- species
- Prior art date
Links
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 title claims abstract description 22
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 title claims abstract description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 24
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 title claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 18
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 12
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims abstract description 11
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 241000894007 species Species 0.000 claims abstract description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 5
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 101710178376 Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 claims description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 claims description 6
- 101710163595 Chaperone protein DnaK Proteins 0.000 claims description 5
- 101710152018 Heat shock cognate 70 kDa protein Proteins 0.000 claims description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 2
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 2
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 244000045947 parasite Species 0.000 abstract description 4
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 abstract description 3
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 abstract description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 3
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 abstract 1
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 16
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 14
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 241001596967 Escherichia coli M15 Species 0.000 description 9
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 6
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102100024023 Histone PARylation factor 1 Human genes 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 3
- 125000000487 histidyl group Chemical class [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101001047783 Homo sapiens Histone PARylation factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010039224 Amidophosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108050001186 Chaperonin Cpn60 Proteins 0.000 description 1
- 102000052603 Chaperonins Human genes 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100023431 E3 ubiquitin-protein ligase TRIM21 Human genes 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000018932 HSP70 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010027992 HSP70 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000685877 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase TRIM21 Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000036827 Infectious disease carrier Diseases 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 241000160608 Mimus gilvus Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000235645 Pichia kudriavzevii Species 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000029578 entry into host Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 108010005335 mannoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000001853 pulsed-field electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 101150018813 ssa1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
- C07K14/39—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts
- C07K14/40—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts from Candida
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
L'invenzione ha per oggetto: 1) l'uso della sequenza di DNA di caRLV130 per ricavarne oligonucleotidi da utilizzare nella reazione di amplificazione a catena o PCR (polymerase chain reaction); 2) l'uso della sequenza di DNA di CARLV130 per ricavarne sonde oligonueleotidiche da usare per la tipizzazione/diagnosi di Candida e Candidiasi; 3) l'uso della sequenza di DNA di caRLVI30 e di quella polipeptidica dedotta come possibili bersagli di RNA antisenso o antibiotici o chemoterapici attivi sulle specie di Candida che posseggono questa sequenza; 4) l'uso della sequenza di aminoacidi della CAHSP70 o parti di essa per ottenere antisieri e/o anticorpi monoclonali al fine di sviluppare metodiche immunologiche che svelino la presenza di C. albicans e specie affini, e/o di CAHSP70 rilasciata dal parassita stesso; 5) l'uso di polipeptidi (sintetici o espressi in vivo) derivati dalla sequenza della CAHSP70. come componenti di sistemi diagnostici in grado di svelare la presenza della CAHSP70 prodotta dal parassita; 6) L'uso della sequenza aminoacidica di CASPH70 o parti di essa per ottenere antisieri e/o anticorpi monoclonali al fine di ottenere preparazioni vaccinali o di sviluppare trattamenti a scopo profilattico e/o terapeutico; 7) l'uso di polipeptidi (sintetici o espressi in vivo), derivati dalla sequenza della CASPH70 come componenti di preparazioni vaccinali o preparazioni destinate a scopo profilattico e/o terapeutico.
Description
Descrizione
di una domanda di brevetto per invenzione industriale dal titolo:
"La sequenza del cDNA completo dell'inserto carivi 30 codificante per una proteina heat shock di 70 kda (cahsp70) di Candida albicans ceppo atcc20955, e derivati utilizzabili sia a scopo diagnostico che profilattico-terapeutico nell'infezione da C. albicans".
a nome: Istituto Superiore di Sanità, Laboratorio di Batteriologia e Micologia Medica;
2 Università degli Studi di Roma "La Sapienza", Istituto di Parassitologia.
Inventori: Antonio Cassone, Roberto La Valle, Carla Bromuro, Andrea Crisanti, Michel H. Muller
Ritrovato: Sequenza di DNA di 2325 paia di nucleotidi presente nell'inserto del clone caRLV130 isolato da una libreria di espressione di cDNA di Candida albicans ceppo ATCC20955 in Xgt11. Tale sequenza codifica per una "Heat Shock Protein" di C. albicans del peso molecolare dedotto di 70.318 Daiton da noi denominata CAHSP70.
Applicazione: Diagnosi e trattamento profilattico terapeutico dell'infezione da C. albicans, da altre specie del genere Candida, e da microrganismi lievitifomni affini contenenti il relativo gene, in pazienti e/o animali, ed analisi della contaminazione ambientale da parte di C. albicans e specie diverse come sopra.
L'invenzione ha per oggetto: 1 ) l'uso della sequenza di DNA di caRLV130 per ricavarne oligonucleotidi da utilizzare nella reazione di amplificazione a catena o PCR (polymerase Chain reaction); 2) l'uso della sequenza di DNA di CARLV130 per ricavarne sonde oligonucleotidiche da usare per la tipizzazione/diagnosi di Candida e Candidiasi; 3) l'uso della sequenza di DNA di caRLV130 e di quella polipeptidica dedotta come possibili bersagli di RNA antisenso o antibiotici o chemioterapici attivi sulle specie di Candida che possiedono questa sequenza; 4) l'uso della sequenza di aminoacidi della CAHSP70 o parti di essa per ottenere antisieri e/o anticorpi monoclonali al fine di sviluppare metodiche immunologiche che svelino la presenza di C. albicane e specie affini, e/o di CAHSP70 rilasciata dal parassita stesso; 5) l'uso di polipeptidi (sintetici o espressi in vivo) derivati dalla sequenza della CAHSP70, come componenti di sistemi diagnostici in grado di svelare la presenza della CAHSP70 prodotta dal parassita; 6) L'uso della sequenza aminoacidica di CASPH70 o parti di essa per ottenere antisieri e/o anticorpi monoclonali al fine di ottenere preparazioni vaccinali o di sviluppare trattamenti a scopo profilattico e/o terapeutico; 7) l'uso di polipeptidi (sintetici o espressi in vivo), derivati dalla sequenza della CASPH70 come componenti di preparazioni vaccinali o preparazioni destinate a scopo profilattico e/o terapeutico.
L’invenzione concerne l'uso della sequenza di cDNA dell'inserto caRLV130 e della corrispondente proteina di 656 aminoacidi per sviluppare metodiche che permettano l'identificazione della C. albicane in campioni biologici e/o ambientali, e/o per preparazioni sia a scopo profilattico-terapeutico che vaccinale.
I funghi patogeni sono gli agenti maggiori delle infezioni opportunistiche in pazienti immuno-compromessi, in particolare pazienti che hanno sviluppato AIDS, tumori, neutropenia o subito trapianto di midollo osseo (1). La suscettibilità di pazienti HIV+ alle infezioni di Candida albicane è una conseguenza della caduta della immunità cellulo-mediata dovuta alla diminuzione numerica e funzionale dei linfociti T CD4+ "helper/inducer" (2). Le mannoproteine della parete cellulare di Candida e le proteine heat-shock di vari microorganismi sono antigeni maggiori ed immunomodulatori, ed hanno un ruolo rilevante durante l’invasione e l'infezione dellOspite (3, 4). Utilizzando un siero immune di coniglio sviluppato contro cellule di C. albicans ceppo ATCC 20955 inattivate al calore, abbiamo isolato il clone caRLV130 in una libreria di espressione sviluppata nel fago Xgt11 con cDNA della forma di crescita lievito di C. albicans. Tale clone contiene un inserto di DNA delle dimensioni di 2325 paia di basi che è stato interamente sequenziato e che codifica 5'-3' da 105 a 2072 per una proteina di 656 aminoacidi (in figura 1 è mostrata solo la regione codificante di 1971 bp). La sequenza caRLV130 è stata depositata presso la banca dati EMBL (N° accesso segreto Z30210). Non ci sono introni all'interno della sequenza genomica, come mostrato dall'analisi dei prodotti della PCR ed in "Southem-Blot" Confrontando la sequenza dell'inserto caRLV130 con le sequenze finora descritte e presenti nella versione 6.7 della banca dati "GEN BANK" sono emerse omologie con la famiglia dei geni codificanti per le proteine "Heat Shock" di 70 kDa. L'inserto mostra l'omologia più elevata con il gene SSA1 di S.
cerevisiae (uno dei nove geni della famiglia HSP70 di lievito). L'omologia globale a livello nucleotidico con SSA1 è del 78,8% nella regione codificante (figg. 2 e 3).
Le HSPs sono proteine indotte da vari tipi di stress, siano essi chimici o fisici, classicamente il calore. Molte HSPs sono presenti e attive anche nelle cellule non stressate ove svolgono funzioni importanti per la fisiologia della cellula stessa ("chaperonine"). Esse sono raggruppate in famiglie di differenti pesi molecolari all'interno delle quali sono molto conservate tra organismi anche lontani filogeneticamente (5). Non stupisce perciò che le HSPs siano coinvolte nella risposta immunitaria, o costituiscano antigeni maggiori di vari organismi patogeni, o possano dare fenomeni autoimmunitari, considerando anche che l'infezione stessa è una forma estrema di stress sia per l'agente infettante che per l'ospite (4).
Il gene corrispondente alla sequenza caRLV130 è stato mappato sul cromosoma di C. albicane che in elettroforesi mostra il più alto peso molecolare (3.5 Mpb) utilizzando come sonda il DNA dell'inserto marcato caRLV130 in ibridazioni su filtri di nitrocellulosa sui quali erano stati trasferiti i cromosomi di C. albicans, separati in elettroforesi in campo pulsato (transverso-alternato: TAFE) (fig. 4 A e B). La trascrizione di questo gene è attivata dall'esposizione delle cellule fungine ad una temperatura più elevata di quella ambientale ("shift" termico da 22° a 37° C). Questo fenomeno è stato dimostrato in esperimenti di "ibridizzazione" utilizzando RNA totale di C. albicans (estratto da cellule cresciute a 22°C o 37°C, frazionato in base al peso molecolare su gel di agarosio/fomnaldeide e trasferito per capillarità su filtri di nitrocellulosa) e il ONA dell'inserto caRLV130 come sonda radioattiva. All'induzione della trascrizione si accoppia anche l'aumento dell'espressione della proteina a 2, 6 e 24 ore dallo "shift" di temperatura da 22°C a 37° (vedi fig. 5).
Varie porzioni della sequenza dell'inserto caRLV130 sono state clonate nel plasmide di espressione pDS56/RBSIi-E<'>-6his (6) ed i polipeptidi codificati sono stati espressi in E. coli fusi alle loro estremità aminoterminali ad una sequenza di sei istidine. La sequenza di istidine ha permesso una rapida ed efficiente purificazione su colonne di nickel dei polipeptidi derivati dalla sequenza dell'inserto caRLV130 (vedi fig. 6 e tabella I per la definizione e la grandezza dei frammenti polipeptidici). Dopo purificazione questi polipeptidi ricombinanti sono stati utilizzati come immunogeni in topi per produrre antisieri e quindi sono adatti anche per lo sviluppo di anticorpi monoclonali. Pertanto, i polipeptidi, nonché l'intera proteina purificata, inducono anticorpi specifici dopo immunizzazione nel topo Balb/c di 18-22 g di peso, seguendo una scheda di immunizzazione come riportato in tabella II. Il titolo dei rispettivi sieri per ogni antigene è risultato > 12,800 utilizzando un saggio immunoenzimatico (ELISA indiretto), con l’antigene assorbito a 200 ng/pozzetto, in un volume finale di 100 μΙ. I risultati del saggio immunoenzimatico sono stati confermati per la specificità in esperimenti di immunotrasferimento su filtri di nitrocellulosa come osservato in fig. 7.
Gli stessi polipeptidi sono stati utilizzati quali immunogeni in saggi di proliferazione su linfociti del sangue umano periferico valutando l'incorporazione di <3>H-timidina dopo sette giorni di coltura secondo metodiche già descritte (7). I risultati ottenuti con vari donatori (due esempi sono riportati nella tabella III) dimostrano che la CAHSP70 è in grado di indurre una apprezzabile incorporazione della timidina nonché proliferazione dei linfociti "naive" del sangue del cordone ombelicale (tabella IV), suggerendo che la proteina stessa o parti di essa abbiano attività mitogenica. Inoltre, esperimenti di immunotrasferimento hanno rivelato in sieri umani di soggetti adulti sani normali la presenza di anticorpi reattivi contro la proteina CAHSP70, soprattutto contro il frammento CAHSP70/4 (fig. 8), suggerendo l'immunodominanza degli epitopi contenuti in questo frammento. Nel complesso, i dati di linfoproliferazione e gli immunotrasferimenti con sieri umani dimostrano inequivocabilmente che CAHSP70 è riconosciuta dal sistema immunitario durante la normale colonizzazione con Candida dell'individuo sano.
Inoltre, i sieri murini anti-CAHSP70 riconoscono, in immunotrasferimento su filtro di nitrocellulosa, tra le proteine presenti negli estratti di C. albicane indotti al calore più componenti d'una famiglia di HSP70 (fig. 5) dimostrando che il prodotto di espressione dell'inserto caRLV130 è una delle proteine di C. albicane espresse dal fungo dopo "shock" termico. Sulla base di queste osservazioni abbiamo denominato CAHSP70 (C. albicane heat shock protein 70 kDa) la proteina di C. albicans che: I) contiene la sequenza di amino acidi codificata dall'inserto caRLN/130; II) il cui gene mappa sul cromosoma 1 (di più alto peso molecolare) di C. albicane; III) la cui espressione è indotta dalla temperatura; IV) induce formazione di anticorpi specifici che riconoscono frammenti (subunità) clonati e purificati; V) induce linfoproliferazione nelle colture linfomonocitarie del sangue umano periferico. Conseguentemente anche il gene relativo è stato denominato cahsp70.
Il clonaggio insieme alla caratterizzazione biochimica e molecolare di varie parti della CAHSP70 permette, oltre alla realizzazione di studi immunologici sulla espressione della heat shock protein di 70 kDa di C. albicane, lo sviluppo di un metodo di diagnosi molecolare basato sulla amplificazione di segmenti di DNA corrispondenti all'inserto caRLV130. Sulla base della sequenza dell'inserto caRLV130 abbiamo sintetizzato oligonucleotidi che sono stati utilizzati in esperimenti di reazione di amplificazione a catena (PCR) per analizzare la loro capacità di amplificare segmenti di DNA omologhi a caRLV130 da DNA di C. albicane. Due oligonucleotidi (CA2-CA4) sono stati scelti nelle regioni di minore omologia tra la sequenza del cDNA caRLV130 e le sequenze note dei geni codificanti per le HSP70 (vedi fig. 2 per l'allineamento tra la sequenza caRLV130 e YSCSSA1, tabella V per la definizione delle regioni di minore omologia e tabella VI per la sequenza degli oligonucleotidi utilizzati nel saggio).
La combinazione di oligonucleotidi CA2(GAAATGAAAGATA AGATTGGTGCA)-CA3(CCACAGTAAATTACCTATTTCTTCCTC) è in grado di amplificare segmenti di DNA delle dimensioni e sequenze attese solo da DNA di C. albicane (fig. 9 A) mentre la sensibilità del saggio è mostrata in figura 9 B utilizzando la coppia CA1 (ATGTCTAAAGCTGTTGGTATTG)-C A4 (CTG C AC C AATCTTAT CTTT C ATTT C ACC AT C ATT.
Figure
Figura 1: Sequenza di DNA (in minuscolo) di 1971 paia di basi corrispondente alla cornice di lettura aperta presente nell'inserto del clone λςΗ 1-{θ3ΡΙ.νΐ30) e sequenza aminoacidica dedotta (in maiuscolo con il codice a una lettera).
Figura 2: Sequenza nucleotidica codificante dell'inserto caRLV130 (minuscolo) e confronto con quella del gene YSCSSA1 di S. cerevisiae (maiuscolo).
Figura 3: Sequenza di 656 amino acidi dedotta dalla sequenza di DNA dell'inserto caRLV130 (in minuscolo) e confronto con la sequenza amminoacidica dedotta del gene YSCSSA1 di S. cerevisiae (in maiuscolo). Il codice amminoacido utilizzato è quello ad una sola lettera.
Figura 4: A. Southern blot di cromosomi di C. albicane, ceppo ATCC 20955 ottenuti per separazione in campo elettroforetico pulsato (TAFE). La marcatura con una sonda caRLV130 (cahsp70) fa riferimento al cromosoma a più alto peso molecolare (3,5 Mbp). B. Separazione elettroforetica dei cromosomi di C. albicans ceppo ATCC20955 (TAFE).
Figura 5: A sinistra Northern biots eseguiti ibridizzando RNA totale estratto da cellule di C. albicane cresciute a 22° e trasferite a 37°C per il tempo indicato in figura con le sonde caRLV130 (cahsp7Q) e actina marcate radioattivamente. L'ibridazione con la sonda actina è stata eseguita per il controllo della quantità di RNA presente sui filtri (vedi ref. 8). A destra reattività in immunotrasferimento del siero di topo anti-CAHSP70 con estratti di C. albicans, a varie ore di induzione della risposta "heat-shock" come descritta sopra.
Figura 6: A. Analisi in SDS PAGE di: a) prodotti di espressione in E. coli M15 contenente il plasmide pDS56/RBSII-E<'>-6his con il frammento caRLV130/1; b) prodotti di espressione in E. coli ceppo M15 contenente il plasmide pDS56/RBSII-E<'>-6his caRLV130/2; c) prodotti di espressione in E. coli M15 trasformati con pDS56/RBSII-E-6his caRLV130/3; d) prodotti di espressione in E. coli M15 trasformati con pDS56/RBSII-E<'>-6his caRLV130/4; N.I.: Estratti delle colture di E. coli non indotte; I: Estratti delle colture di E. coli indotte con 1 mM IPTG; P: Frazione purificata su colonna di nickel per affinità alle istidine dagli estratti delle colture di E. coli indotte con IPTG 1 mM.
B. Rappresentazione schematica delle porzioni di sequenza codificante di caRLV130 clonate nei plasmidi ricombinanti utilizzati nel pannello A. A destra il peso molecolare in kDa e a sinistra la denominazione del prodotto di espressione del plasmide ricombinante. Per maggiori dettagli vedi anche tabella I.
Figura 7: Reattività in immunotrasferimento su filtro di nitrocellulosa dei sieri di topo indicati in figura contro i frammenti di CAHSP70; a) prodotto di espressione in E. coli indotto con 1 mM IPTG del plasmide pDS56/RBSII-E<'>-6his caRLV130/1 purificato su colonna di nickel; b) prodotto di espressione in E. coli M15 indotto con IPTG 1 mM del plasmide pDS56/RBSII-E<~>-6his caRLV130/2 purificato su colonna di nickel; c) prodotto di espressione in E. coli M15 indotto con 1 mM IPTG del plasmide pDS56/RBSII-E<'>-6his caRLV130/3 purificato su colonna di nickel; d) prodotto di espressione in E. coli Mt5 indotto con IPIG 1 mM del plasmide pDS56/RBSII-E4his caRLV130/4 purificato su colonna di nickel (vedi anche fig. 6 e tabella I per la definizione dei frammenti polipeptidici utilizzati). A sinistra il peso molecolare dei frammenti purificati.
Figura 8: Reattività in immunotrasferimento su filtro di nitrocellulosa di sieri umani di soggetti adulti sani contro CAHSP70 e suoi frammenti: a) prodotto di espressione in E. coli M15 indotto con 1 mM IPTG del plasmide pDS56/RBSII-E-6his caRLV130/1 purificato su colonna di nickel; b) prodotto di espressione in E. coli Mi 5 indotto con IPTG 1 mM del plasmide pDS56/RBSII-E<'>-6his caRLV130/2 purificato su colonna di nickel; c) prodotto di espressione in E. coli M15 indotto con 1 mM IPTG del plasmide pDS56/RBSII-E<'>-6his caRLV130/3 purificato su colonna di nickel; d) prodotto di espressione in E. coli M15 indotto con 1 mM IPTG del plasmide pDS56/RBSII-E<'>-6his caRLV130/4 purificato su colonna di nickel. A sinistra il peso molecolare e a destra la denominazione dei frammenti proteici purificati. Per maggiori dettagli vedi anche tab. I Figura 9: A. Esperimento di PCR effettuato utilizzando la combinazione di oligonucleotidi CA2-CA3 in presenza di DNA di C. albicane (1), C.
parapsilosis (2), C. giabrata (3), C. guillermondii(4), C. krusei (5), C. tropicali (6), Mus muris (7), E coli (8), S. cerevisiae (9). Il controllo senza DNA è evidenziato in (10). A lato è indicato il peso molecolare del frammento di DNA amplificato nella reazione. B. Esperimento di PCR effettuato utilizzando la combinazione di oligonucleotidi CA1-CA4 in presenza di DNA estratto da C. albicane: DNA amplificato da 10 ng (2), 1ng (3), 100 pg (4), 10 pg (5),1 pg (6), di DNA di C. albicans. Come controllo è stato effettuato una reazione di PCR in assenza di DNA (1). A lato è indicato il peso molecolare del frammento di DNA amplificato nella reazione. Le condizioni delle PCR mostrate sono le seguenti: denaturazione 90 secondi a 94°C; appaiamento 90 secondi a 60°C; estensione 120 secondi a 72°C: 25 cicli.
Tabella I
Definizione dei polipeptidi CAHSP70 purificati su colonna di nickel. I peptidi sono codificati da plasmidi ricombinanti pDS56/RBSII-E'-6his nei quali sono stati clonati i segmenti di caRLN/130 definiti in tabella. La posizione si riferisce a nucleotidi ed aminoacidi della sequenza mostrata in fig. 1. La grandezza del peptide si riferisce invece al prodotto di fusione codificato dal plasmide ricombinante.
DNA codificante
Tabella II
Scheda di immunizzazione di topi BALB/c di 18-22 g di peso con peptidi CAHSP70 purificati come descritto nel testo ed in figura 6.
La quantità di immunogeno indicata è stata inoculata intraperitoneo in un volume di 200 μΙ.
Il titolo è stato determinato come ELISA indiretta con l'antigene usato come "coating" a 200 ng/pozzetto, in un volume finale di 100 μΙ, e viene
inteso come la più alta diluizione del siero che dà una reazione positiva in ELISA (densità ottica a 405 nm > 2 volte il controllo senza antigene).
Tabella III
Attività di induzione delia proliferazione di linfociti del sangue periferico da parte di CAHSP70 e suoi frammenti
Linfoproliferazione in colture linfomonocitarie del sangue periferico di donatori normali in risposta ai frammenti clonati di CAHSP70. Controlli positivi: antigene mannoproteico (MP-F2) di C. albicans ed lnterleukina-2 (IL-2).
Controllo negativo: nessun materiale.! valori mostrati sono la media SD di 7 esperimenti con cinque diversi donatori. L'incorporazione di <3>H-timidina è stata determinata a 7 giorni di coltura. Per dettagli tecnici, vedi ref. 7.
Tabella IV
Attività di induzione della proliferazione del sangue del cordone ombelicale da parte di CAHSP70 e suoi frammenti.
Proliferazione di colture del sangue del cordone ombelicale di due distinti soggetti in risposta ai frammenti clonati di CAHSP70. Controlli positivi: antigene mannoproteico (MP-F2) di C. albicane ed lnterleukina-2 (IL-2). Controllo negativo: nessun materiale. I valori mostrati sono la media SD di 3 pozzetti. Per dettagli tecnici vedi legenda tabella III e ref. 7.
Tabella V
Definizione delle regioni di minore omologia nucleotidica tra caRLVI 30 e YSCSSA1 (fig. 2).
Tabella VI
Sequenza e posizione sui cDNA caRLV130 (fig. 1) degli oligonucieotidi utilizzati negli esperimenti di PCR.
La sequenza dell'oligonucieotide CA3 è posta nella regione 3' non tradotta a valle del codone di stop e quindi non è mostrata in figura 1. Gli oligonucleotidi CA2 e CA4 sono stati scelti in una delle regioni di minore omologia tra caRLV130 e YSCSSA1 noti (vedi tabella V).
Referenze bibliografiche
1. F.C. Odds. In "Candida and Candidosis", Bailliere-Tindall, London, (1988).
2. I. Quinti et al. Clin. Expt. Immunol. 85, 485, (1991 ).
3. A. Torosantucci et al. J. Infect. Dis. 168, 427, (1993).
4. S.H.E. Kaufmann et al., in The biology of heat shock and molecular chaperones" R.l. Morimoto et al. eds, CSHL press, (1994).
5. R.l. Morimoto et al., in 'The biology of heat shock and molecular chaperones" R.l. Morimoto et al. eds, CSHL press, (1994).
6. D. Stuber et al., Eur. J. Immunol. 220, 819, (1990).
7. Ausiello et al., Infect. Immun. 61 , 4105, (1993).
8. Lasker B. A. et al, Expt. Micol. 16, 155, (1992).
Claims (7)
- Rivendicazioni 1. L'uso di oligonucleotidi, la cui sequenza sia identica o presenti omologie superiore ai 65% con le regioni della sequenza di DNA dell’inserto caRLV130 mostrate in tabella V, nella PCR (polymerase chain reaction o reazione di amplificazione a catena) al fine di evidenziare la presenza di C. albicane ed altre specie di Candida e microrganismi lievitiformi affini contenenti il relativo gene in campioni biologici e/o ambientali.
- 2. L'uso di oligonucleotidi marcati (radioisotopi, biotina, enzimi, etc) la cui sequenza sia identica o presenti omologie superiori al 65% con le regioni della sequenza di DNA dell'inserto caRLV130 mostrate in tabella V per evidenziare la presenza di C. albicans e specie affini come al punto 1 , in campioni biologici e/o ambientali.
- 3. L'uso di oligonucleotidi, la cui sequenza sia identica o presenti omologie superiori al 65% con le regioni della sequenza di DNA dell'inserto caRLV130 mostrate in tabella V, da usare per la tipizzazione e/o diagnosi di Candida albicans e specie affini come al punto 1 , e delle malattie da esse provocate.
- 4. L'uso di polipeptidi (sintetici o espressi in vivo) la cui sequenza sia identica o presenti omologie superiori al 50% con parti della sequenza di aminoacidi dedotta dalla sequenza di DNA dell'inserto caRLV130, mostrata in fig. 1, al fine di sviluppare antisieri e/o anticorpi monoclonali diretti contro HSP70 di C. albicans o specie affini come al punto 1. Ciò tenendo presente che sequenze peptidiche costituite da segmenti di aminoacidi costanti e segmenti variabili possono dare strutture terziarie diversamente riconoscibili come determinanti antigenici (epitopi).
- 5. L'uso di polipeptidi secondo la rivendicazione 4, la cui sequenza sia identica o presenti omologie superiori al 50% con regioni della sequenza di aminoacidi dedotta dalla sequenza di DNA dell'inserto caRLV130 mostrata in fig. 1, come componenti di kits o sistemi diagnostici che evidenziano la presenza della HSP70 di C. albicans e specie affini come al punto 1 in qualsiasi campione biologico di origine umana, animale o ambientale.
- 6. L'uso di polipeptidi (sintetici o espressi in vivo) come da rivendicazione 4, la cui sequenza sia identica o presenti omologie superiori al 50% con regioni della sequenza di aminoacidi dedotta dalla sequenza di DNA dell'inserto caRLV130 mostrata in fig. 1, ai fini di profilassi e/o terapia nelle malattie da Candida o altri microrganismi affini (lieviti patogeni).
- 7. L'uso delle regioni della sequenza di DNA indicate in tabella V e di parti della sequenza polipeptidica (secondo le rivendicazioni 1 e 4) come possibili bersagli di antibiotici e/o chemioterapici, o RNA antisenso attivi sulle specie di Candida e/o microrganismi lievitiformi affini codificanti per una sequenza omologa.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT95RM000314A IT1282287B1 (it) | 1995-05-16 | 1995-05-16 | La sequenza del dna completo dell'inserto carlubo codificante per una proteina heat shch di forda (cansp 70) di candida albicans ceppo atcc |
| EP96914385A EP0826040A1 (en) | 1995-05-16 | 1996-05-15 | CANDIDA HEAT SHOCK PROTEIN, cDNA AND USES THEREOF |
| AU57776/96A AU5777696A (en) | 1995-05-16 | 1996-05-15 | Candida heat shock protein, cdna and uses thereof |
| PCT/IT1996/000097 WO1996036707A1 (en) | 1995-05-16 | 1996-05-15 | CANDIDA HEAT SHOCK PROTEIN, cDNA AND USES THEREOF |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT95RM000314A IT1282287B1 (it) | 1995-05-16 | 1995-05-16 | La sequenza del dna completo dell'inserto carlubo codificante per una proteina heat shch di forda (cansp 70) di candida albicans ceppo atcc |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ITRM950314A0 ITRM950314A0 (it) | 1995-05-16 |
| ITRM950314A1 true ITRM950314A1 (it) | 1996-11-16 |
| IT1282287B1 IT1282287B1 (it) | 1998-03-16 |
Family
ID=11403371
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT95RM000314A IT1282287B1 (it) | 1995-05-16 | 1995-05-16 | La sequenza del dna completo dell'inserto carlubo codificante per una proteina heat shch di forda (cansp 70) di candida albicans ceppo atcc |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0826040A1 (it) |
| AU (1) | AU5777696A (it) |
| IT (1) | IT1282287B1 (it) |
| WO (1) | WO1996036707A1 (it) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH11103862A (ja) * | 1997-10-01 | 1999-04-20 | Takara Shuzo Co Ltd | 抗原タンパク質及び該タンパク質をコードする核酸 |
| GB9817796D0 (en) * | 1998-08-14 | 1998-10-14 | Janssen Pharmaceutica Nv | Drug targets in candida albicans |
| WO2000034481A2 (en) * | 1998-12-04 | 2000-06-15 | Janssen Pharmaceutica N.V. | DRUG TARGETS IN $i(CANDIDA ALBICANS) |
| US6497880B1 (en) * | 1998-12-08 | 2002-12-24 | Stressgen Biotechnologies Corporation | Heat shock genes and proteins from Neisseria meningitidis, Candida glabrata and Aspergillus fumigatus |
| US7015309B1 (en) | 1999-06-23 | 2006-03-21 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Pyrrhocoricin-derived peptides, and methods of use thereof |
| AU2795801A (en) * | 2000-01-21 | 2001-07-31 | Creighton University | Biocidal molecules, macromolecular targets and methods of production and use |
| EP1209242A3 (en) * | 2000-11-21 | 2004-01-14 | Tosoh Corporation | Oligonucleotides and method for characterizing and detecting genogroup II type small round structured virus (SRSV) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8915019D0 (en) * | 1989-06-30 | 1989-08-23 | Matthews Ruth C | Medicaments |
-
1995
- 1995-05-16 IT IT95RM000314A patent/IT1282287B1/it active IP Right Grant
-
1996
- 1996-05-15 EP EP96914385A patent/EP0826040A1/en not_active Withdrawn
- 1996-05-15 AU AU57776/96A patent/AU5777696A/en not_active Abandoned
- 1996-05-15 WO PCT/IT1996/000097 patent/WO1996036707A1/en not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0826040A1 (en) | 1998-03-04 |
| WO1996036707A1 (en) | 1996-11-21 |
| IT1282287B1 (it) | 1998-03-16 |
| AU5777696A (en) | 1996-11-29 |
| ITRM950314A0 (it) | 1995-05-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pandey et al. | Long-term antibody memory induced by synthetic peptide vaccination is protective against Streptococcus pyogenes infection and is independent of memory T cell help | |
| US20030186275A1 (en) | Antigenic polypeptides | |
| West Batanghari et al. | Histoplasma acquisition of calcium and expression of CBP1 during intracellular parasitism | |
| AU718047B2 (en) | Cloned porphyromonas gingivalis genes and probes for the detection of periodontal disease | |
| Ramos et al. | cDNA cloning and expression of Blo t 11, the Blomia tropicalis allergen homologous to paramyosin | |
| JPS61289888A (ja) | ワクシニアｄｎａ | |
| Ren et al. | Design and evaluation of a multi-epitope assembly peptide vaccine against Acinetobacter baumannii infection in mice | |
| EP1412379A2 (en) | Antigenic polypeptides | |
| Prabhakar et al. | Identification of an immunogenic histone-like protein (HLPMt) ofMycobacterium tuberculosis | |
| AU2002309514A1 (en) | Replikin peptides and uses thereof | |
| Margutti et al. | Cloning and expression of a cDNA encoding an elongation factor 1β/δ protein from Echinococcus granulosus with immunogenic activity | |
| Bumann et al. | Helicobacter pylori vaccine development based on combined subproteome analysis | |
| Marshall et al. | Allelic variants of the Plasmodium falciparum merozoite surface antigen 2 (MSA-2) in a geographically restricted area of Irian Jaya | |
| ITRM950314A1 (it) | La sequenza del dna completo dell'inserto carlubo codificante per una proteina heat shch di forda (cansp 70) di candida albicans ceppo atcc | |
| Young et al. | A proteomic‐based approach for the identification of immunodominant Cryptococcus neoformans proteins | |
| Smulian et al. | A 55 kDa antigen of Pneumocystis carinii: analysis of the cellular immune response and characterization of the gene | |
| EP0871734B1 (en) | Polypeptide fragments capable of competition with streptococcus mutans antigen i/ii | |
| KR20030088476A (ko) | 레플리킨 펩타이드 및 그의 이용 | |
| Thomas et al. | The hsp60 gene of the human pathogenic fungus Coccidioides immitis encodes a T-cell reactive protein | |
| Daly et al. | Geographical variation in serological responses to recombinant Pneumocystis jirovecii major surface glycoprotein antigens | |
| Demuth et al. | Identification and analysis of fipA, a Fusobacterium nucleatum immunosuppressive factor gene | |
| CN116726155A (zh) | 一种结核亚单位疫苗的构建，表达，纯化和应用 | |
| Ortner et al. | Humoral immune response against a 70-kilodalton heat shock protein of Entamoeba histolytica in a group of patients with invasive amoebiasis | |
| CN116763911A (zh) | 含结核分枝杆菌潜伏期分泌抗原HspX的亚单位疫苗 | |
| US6479253B1 (en) | Serine protease inhibitor nucleic acid molecules and uses thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 0001 | Granted |