ITRM20130339A1 - Metodo per la preparazione di nanoidrogel - Google Patents

Metodo per la preparazione di nanoidrogel

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ITRM20130339A1
ITRM20130339A1 IT000339A ITRM20130339A ITRM20130339A1 IT RM20130339 A1 ITRM20130339 A1 IT RM20130339A1 IT 000339 A IT000339 A IT 000339A IT RM20130339 A ITRM20130339 A IT RM20130339A IT RM20130339 A1 ITRM20130339 A1 IT RM20130339A1
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IT
Italy
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nanohydrogels
preparation
polysaccharide
nanohydrogel
dispersion
Prior art date
Application number
IT000339A
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English (en)
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Rugeriis Maria Cristina De
Meo Chiara Di
Pietro Matricardi
Elita Montanari
Original Assignee
Pietro Matricardi
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Publication date
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Description

DESCRIZIONE
“METODO PER LA PREPARAZIONE DI NANOIDROGELâ€
La presente invenzione à ̈ relativa ad un metodo per la preparazione di nanoidrogel ad elevata sterilità.
Con il termine nanoidrogel si intende un particolare tipo di nanoparticelle con dimensioni comprese tra 10-1000 nm in grado di combinare i vantaggi degli idrogel con quelli della nanotecnologia, quali ad esempio alta flessibilità, versatilità, assorbimento di acqua, elevata biocompatibilità e lunghi tempi di permanenza all’interno dell’organismo.
In generale, à ̈ noto che un polisaccaride (a carattere idrofilico) opportunamente funzionalizzato con molecole a carattere idrofobico può realizzare un sistema assemblante con caratteristiche di nanoidrogel se esposto a particolari condizioni in ambiente acquoso.
I nanoidrogel stanno acquisendo una certa importanza in ambito farmaceutico poiché, se resi sterili e apirogeni, i nanoidrogel possono essere utilizzati come composti veicolanti i farmaci ed essere somministrati sia nell’uomo sia nell’animale per via inalatoria, parenterale (i.v, i.m, s.c) oppure per via topica supportati da un opportuno device.
Attualmente sono conosciuti diversi metodi per la preparazione dei nanoidrogel a partire da polisaccaridi funzionalizzati.
Un primo di questi metodi consiste nel sottoporre il polisaccaride funzionalizzato a sonicazione. Le vibrazioni ultrasoniche sono in grado di indurre la formazione di nanoidrogel di piccole dimensioni. Gli ultrasuoni generano nella sospensione polimerica microbolle che implodendo danno luogo al fenomeno della cavitazione che promuove la separazione delle catene polimeriche favorendo la formazione di una sospensione nanoparticellare. Tale tecnica però presenta numerosi svantaggi a livello industriale quali elevata polidispersione del campione, alti costi e una ingente produzione di calore.
Un altro metodo consiste nel solubilizzare il polisaccaride funzionalizzato in un opportuno solvente e aggiungere goccia a goccia la soluzione ottenuta in acqua. In queste condizioni il sistema precipita inducendo la formazione di nanoparticelle. Questo metodo di preparazione presenta gli svantaggi relativi ai costi particolarmente elevati, ad operazioni manuali complesse e difficilmente riproducibili e a tempi di preparazione molto lunghi.
Inoltre, questa metodologia prevede l’utilizzo di solventi organici con gli ovvi svantaggi in termini di tossicità e di sicurezza che questi rappresentano.
Ancora un altro metodo consiste nel sottoporre a dialisi contro acqua o soluzione acquosa il polisaccaride funzionalizzato una volta che questo à ̈ stato solubilizzato in un solvente organico. Il lento ingresso di acqua attraverso i tubi di dialisi provoca la formazione dei nanoidrogel di piccole dimensioni per spontaneo autoassemblaggio. Gli svantaggi che questo metodo comporta sono relativi alla presenza di aggregati in quantità più o meno rilevante, ad una mancanza di riproducibilità, ai costi particolarmente elevati e ai tempi di preparazione particolarmente lunghi. Inoltre, anche in questo caso la presenza di solventi organici solleva problematiche di sicurezza e di tossicità.
Come sopra accennato, una delle possibili applicazioni dei nanoidrogel à ̈ quella relativa alle preparazioni farmaceutiche somministrate per via parenterale. Il nanoidrogel, infatti, può inglobare un principio farmacologicamente attivo e funzionare da vettore per la sua somministrazione.
In questo contesto diventa imprescindibile un trattamento di sterilizzazione dei nanoidrogel. I metodi di sterilizzazione utilizzati dalle industrie farmaceutiche non sono però totalmente soddisfacenti.
Uno dei principali metodi di sterilizzazione utilizzati à ̈ quello della filtrazione mediante filtri con porosità uguale o inferiore a 0,22 µm seguendo le raccomandazioni delle farmacopee. La filtrazione, se pure possibile in linea di massima con sistemi di adatte dimensioni, risulta comunque spesso difficoltosa per l’intasamento dei filtri stessi dovuti alle interazioni che possono instaurarsi tra le nanoparticelle ed i materiali costituenti i filtri. Inoltre, à ̈ stato verificato che la filtrazione può provocare, per effetto meccanico, la destrutturazione delle nanoparticelle, quali ad esempio le vescicole come i liposomi, causando la perdita dal medicamento delle molecole bioattive che rimangono intrappolate sul filtro e/o la loro perdita nei liquidi di trasporto.
Un altro metodo di sterilizzazione consiste nell’irradiazione con raggi gamma o con un flusso di elettroni. Questa procedura ha lo svantaggio di poter alterare la struttura delle molecole bioattive fragili, provocare una degradazione dei polimeri che costituiscono la forma farmaceutica ed alterare l’integrità dei fosfolipidi costituenti i liposomi.
Un’altra metodica utilizzata per la sterilizzazione prevede, inoltre, l’utilizzo di gas quali l’ossido di etilene; tale tecnica, però, à ̈ non facilmente attuabile in presenza di sostanze che possono reagire con il gas stesso. Inoltre, anche l’intimo contatto con le forme farmaceutiche, necessario per avere la sterilità, può essere difficoltoso, come pure l’allontanamento del gas prima del confezionamento della forma farmaceutica stessa.
Era quindi sentita l’esigenza di disporre di una metodologia che fosse in grado di preparare nanoidrogel e di sterilizzare gli stessi senza incorrere negli inconvenienti dell’arte nota.
Dagli inventori della presente domanda di brevetto à ̈ stato inaspettatamente trovato un metodo estremamente semplice ed economico per la preparazione di nanoidrogel direttamente sterili e con una elevata omogeneità dimensionale.
Oggetto della presente invenzione à ̈ un metodo per la preparazione di nanoidrogel caratterizzato dal fatto di comprendere una fase di dispersione in cui un polisaccaride funzionalizzato con molecole idrofobiche viene disperso in una soluzione acquosa per ottenere una dispersione acquosa di polisaccaride e una fase di riscaldamento in cui la dispersione acquosa del polisaccaride viene sottoposta ad una temperatura compresa tra 70 e 150 °C e ad una pressione compresa tra 1 e 5 bar; in detta fase di riscaldamento le condizioni di temperatura e pressione devono essere tali che non si verifichi l’ebollizione della dispersione acquosa del polisaccaride.
Preferibilmente, la fase di riscaldamento prevede una temperatura compresa tra 90 e 130 °C ed una pressione compresa tra 1,5 e 3,5 bar.
Preferibilmente, la fase di riscaldamento ha una durata compresa tra 5 minuti e 3 ore.
Preferibilmente, nella fase di dispersione il polisaccaride funzionalizzato con molecole idrofobiche viene disperso in una soluzione acquosa ad una concentrazione compresa tra 0,1 e 10,0 mg/ml.
Preferibilmente, la dispersione acquosa del polisaccaride comprende uno o più composti atti ad essere inglobati e/o adsorbiti nelle particelle di nanoidrogel formate nella successiva fase di riscaldamento.
Preferibilmente, il suddetto composto atto ad essere inglobato e/o adsorbito nelle particelle di nanoidrogel à ̈ un composto crioprotettore e/o un composto farmacologicamente attivo.
Preferibilmente, il detto crioprotettore à ̈ aggiunto alla soluzione acquosa del polisaccaride in una concentrazione compresa tra 0,10÷20,0% p/v.
Preferibilmente, il detto crioprotettore à ̈ compreso nel gruppo composto da destrosio, maltosio, trealosio, lattosio, saccarosio.
Preferibilmente, il detto composto farmacologicamente attivo à ̈ aggiunto alla dispersione acquosa del polisaccaride in una concentrazione compresa tra 0,05 mg/ml- 10,0 mg/ml.
Preferibilmente, il detto composto farmacologicamente attivo à ̈ compreso nel gruppo composto da antibiotici, antitumorali, analgesici, antinfiammatori, anestetici, analettici, agenti adrenergici, agenti bloccanti adrenergici, anticolinergici, anticolinesterasici, anticonvulsivanti, adrenocorticotropi, adrenolitici, adrenomimetici, agenti alchilanti, alcaloidi, inibitori allosterici, steroidi anabolizzanti, anoressizzanti, antiacidi, antidoti, antidiarroici, antifolici, antipiretici, antireumatici, agenti psicoterapeutici, agenti bloccanti neuronali, antiemetici, antielmintici, antiaritmici, antitubercolari, anticoagulanti, antidepressivi, antidiabetici, antiepilettici, antifungini, antistaminici, antiipertensivi, antimuscarinici, antimicobatterici, antimalarici, antisettici, antiprotozoari, immunosoppressori, immunostimolanti, antitiroidei, antivirali, ansiolitici, sedativi, astringenti, beta bloccanti, mezzi di contrasto, corticosteroidi, antitussivi, agenti diagnostici, agenti diagnostici di immagine, diuretici, dopaminergici, emostatici, agenti ematologici, modificatori dell’emoglobina, ormoni, ipnotici, ipolipidemizzanti, agenti regolanti i lipidi, muscarinici, parasimpatico mimetici, miorilassanti, prostaglandine, sedativi, ormoni sessuali, antiallergeni, stimolanti, simpatico mimetici, agenti tiroidei, vasodilatatori, vaccini, vitamine, xantine, antineoplastici, proteine, polipeptidi, carboidrati, polinucleotidi, acidi nucleici, anticorpi policlonali o monoclonali.
Un ulteriore oggetto della presente invenzione sono delle particelle di nanoidrogel sterili con una elevata omogeneità dimensionale e realizzate con il metodo oggetto della presente invenzione.
Ancora un ulteriore oggetto della presente invenzione sono delle particelle di nanoidrogel sterili e caricate con un composto crioprotettore e/o un composto farmacologicamente attivo e realizzate con il metodo oggetto della presente invenzione.
ESEMPI
Per una migliore comprensione dell’invenzione sono riportati di seguito degli esempi di realizzazione a scopo esplicativo e non limitativo.
Negli esempi che seguono le dimensioni delle particelle di nanoidrogel sono state misurate con la tecnica Dynamic Light Scattering (Submicron Particle Sizer Autodilute Model 370, Nicomp).
ESEMPIO 1: FORMAZIONE DI NANOIDROGEL DI GELLANO-COLESTEROLO (Ge-CH)
Il gellano à ̈ stato opportunamente funzionalizzato con unità idrofobiche di colesterolo in modo da ottenere un polimero anfifilico (gellano-colesterolo, Ge-CH) sottoforma di un agglomerato macromolecolare. 3 mg del polimero anfifilico (Ge-CH) à ̈ stato disperso in 3 ml di acqua e lasciato sotto agitazione su piastra per 12 ore. La dispersione derivante dalla soluzione acquosa à ̈ stata inserita all’interno di un contenitore di vetro chiuso il quale à ̈ stato inserito in autoclave per sterilizzazione. In autoclave la dispersione à ̈ stata sottoposta per 20 minuti ad una temperatura di 121°C e una pressione di 2 bar. Al termine del trattamento si ottengono nanoidrogel di Ge-CH aventi dimensioni di 200±5 nm, e con un indice di polidispersione pari a 0,200±0,05.
La stabilità dimensionale dei nanoidrogel di Ge-CH à ̈ stata studiata a 37°C per 15 giorni in modo da mimare le condizioni fisiologiche, e a 4°C per 15 giorni in modo da mimare le condizioni di conservazione del prodotto in frigorifero. I nanoidrogel di Ge-CH formati ad alta T e alta P si sono rivelati stabili ad alta e bassa temperatura di conservazione.
Inoltre, à ̈ stato misurato il Potenziale ζ dei nanoidrogel di Ge-CH usando il Dynamic Light Scattering e il valore ottenuto à ̈ stato pari a -20±5,0 mV e stabile oltre 48 ore.
ESEMPIO 2: FORMAZIONE DI NANOIDROGEL DI ACIDO IALURONICO-COLESTEROLO (HA-CH)
L’acido ialuronico à ̈ stato opportunamente funzionalizzato con unità idrofobiche di colesterolo in modo da ottenere un polimero anfifilico (acido ialuronicocolesterolo, HA-CH) sottoforma di un agglomerato macromolecolare. 5 mg del polimero anfifilico (HA-CH) sono stati dispersi in 3 ml di acqua e lasciato sotto agitazione su piastra per 12 ore. La dispersione ottenuta à ̈ stata inserita all’interno di un opportuno contenitore chiuso di vetro il quale à ̈ stato inserito in autoclave. In autoclave la dispersione à ̈ stata sottoposta per 30 minuti ad una temperatura di 90°C e una pressione di 1,5 bar.
Al termine del trattamento si ottengono nanoidrogel di HA-CH aventi dimensioni di 380±20 nm, e con un indice di polidispersione pari a 0,325±0,077.
La stabilità dei nanoidrogel di HA-CH à ̈ stata studiata a 4°C per 7 giorni in modo da mimare le condizioni di conservazione del prodotto in frigorifero. I nanoidrogel di HA-CH formati ad alta T e alta P si sono rivelati stabili a bassa temperatura di conservazione per oltre 7 giorni.
ESEMPIO 3: FORMAZIONE DI NANOIDROGEL DI GELLANO-ACIDO POLILATTICO (Ge-PLA)
Il gellano à ̈ stato opportunamente funzionalizzato con unità idrofobiche di acido polilattico in modo da ottenere un polimero anfifilico (gellano-acido polilattico, Ge-PLA) sottoforma di un agglomerato macromolecolare. 7 mg del polimero anfifilico (Ge-PLA) à ̈ stato disperso in 3 ml di acqua e lasciato sotto agitazione su piastra per 12 ore. La dispersione ottenuta à ̈ stata inserita all’interno di un contenitore di vetro chiuso il quale à ̈ stato inserito in autoclave. In autoclave la dispersione à ̈ stata sottoposta per 15 minuti ad una temperatura di 130°C e una pressione di 2,5 bar.
Al termine del trattamento si ottengono nanoidrogel di Ge-PLA aventi dimensioni di 180±20 nm, e con un indice di polidispersione pari a 0,325±0,095.
ESEMPIO 4: FORMAZIONE E LIOFILIZZAZIONE DI NANOIDROGEL DI ACIDO IALURONICO-COLESTEROLO (HA-CH)
Il polimero anfifilico HA-CH sottoforma di un agglomerato macromolecolare à ̈ stato disperso in una soluzione acquosa (3 mg/ml) comprendente destrosio come crioprotettore alla concentrazione di 1% p/v e lasciato in agitazione su piastra a temperatura ambiente per 12 ore. La dispersione così realizzata à ̈ stata inserita all’interno di un opportuno contenitore di vetro chiuso il quale à ̈ disposto all’interno di una autoclave. In autoclave la dispersione à ̈ stata sottoposta per 20 minuti ad una temperatura di 121°C e una pressione di 2 bar.
Al termine del trattamento si ottengono nanoidrogel di HA-CH aventi dimensioni di 380±20 nm.
I nanoidrogel così ottenuti possono essere sottoposti direttamente a liofilizzazione secondo le tecniche note in modo da ottenere un liofilo, facile da trasportare e manipolare e stabile per lunghi periodi di tempo. Il liofilo ottenuto à ̈ stato risospeso con acqua sterile o con soluzioni fisiologiche anche dopo 6 mesi dalla preparazione ed à ̈ stato sempre possibile riottenere i nanoidrogel di HA-CH con dimensioni di 400±10.
ESEMPIO 5: FORMAZIONE E CARICAMENTO DI NANOIDROGEL DI GELLANO-COLESTEROLO (Ge-CH) CON L’ANTIBIOTICO LEVOFLOXACINA Il polimero anfifilico Ge-CH sottoforma di agglomerato macromolecolare à ̈ stato disperso in soluzione acquosa (1 ml, 2 mg/ml) e lasciato in agitazione su piastra a temperatura ambiente per 12 ore. Alla dispersione à ̈ stato poi aggiunto 1 ml di una soluzione di 0,66 mg/ml di un antibiotico fluorochinolonico (levofloxacina) ottenendo così una concentrazione finale di antibiotico pari a 0,33 mg/ml. La miscela così ottenuta à ̈ stata inserita all’interno di un opportuno contenitore di vetro chiuso il quale à ̈ disposto all’interno di una autoclave. In autoclave la dispersione à ̈ stata sottoposta per 20 minuti ad una temperatura di 121°C e una pressione di 2 bar.
Al termine del processo, la dispersione à ̈ stata sottoposta a dialisi (Visking tubing, cut-off: 12000-14000) per 3 ore contro acqua distillata in modo da purificare i nanoidrogel dal farmaco non incapsulato al loro interno. Dopo la dialisi, si sono ottenuti nanoidrogel di Ge-CH caricati con levofloxacina aventi dimensioni di 230±3,0 nm, e con un indice di polidispersione pari a 0,20±0,03.
Per valutare l’efficacia d’intrappolamento del farmaco nei nanoidrogel di Ge-CH, questi ultimi sono stati liofilizzati e solubilizzati in N-metil-pirrolidone in modo da rompere i nanoidrogel e liberare la levofloxacina intrappolata al loro interno. L’efficacia di intrappolamento (% di incapsulazione) à ̈ stata determinata dal rapporto della quantità di levofloxacina incapsulata nei nanoidrogel rispetto alla quantità totale di nanoidrogel prodotti. La concentrazione di levofloxacina in soluzione à ̈ stata misurata usando uno spettrofotometro UV-VIS alla lunghezza d’onda di assorbanza della levofloxacina di 302 nm, usando una retta di taratura, ottenuta in un intervallo di concentrazioni comprese tra 0,75-12,0 µg/ml.
L’efficacia d’intrappolamento della levofloxacina nei nanoidrogel di Ge-CH à ̈ stata del 5% rispetto al peso del polimero.
Stessi identici risultati sono stati ottenuti utilizzando nanoidrogel di HA-CH.
ESEMPIO 6: FORMAZIONE, CARICAMENTO E LIOFILIZZAZIONE DI NANOIDROGEL DI ACIDO IALURONICO-COLESTEROLO (HA-CH) CON L’ANTIBIOTICO LEVOFLOXACINA
Il polimero anfifilico HA-CH sottoforma di agglomerato macromolecolare à ̈ stato disperso in una soluzione acquosa (3 mg/ml) comprendente destrosio come crioprotettore alla concentrazione di 1% p/v e lasciato in agitazione su piastra a temperatura ambiente per 12 ore. Alla dispersione sono stati aggiunti 1 ml di una soluzione di un antibiotico fluorochinolonico (levofloxacina) ottenendo una concentrazione finale di antibiotico pari a 1 mg/ml. La miscela così ottenuta à ̈ stata inserita all’interno di un opportuno contenitore di vetro chiuso il quale à ̈ disposto all’interno di una autoclave. In autoclave la dispersione à ̈ stata sottoposta per 20 minuti ad una temperatura di 121°C e una pressione di 2 bar.
Al termine del processo, la dispersione à ̈ stata sottoposta a diafiltrazione sterile in modo da purificare i nanoidrogel dal farmaco non incapsulato al loro interno. Dopo la filtrazione, si sono ottenuti nanoidrogel di HA-CH, caricati con levofloxacina e sterili, aventi dimensioni di 380±20 nm, e con un indice di polidispersione pari a 0,325±0,07.
I nanoidrogel prodotti sono stati liofilizzati secondo le tecniche note ed in seguito il liofilo à ̈ stato risospeso in un quantitativo di acqua sterile tale da ottenere una concentrazione di nanoidrogel carichi pari ad 1 mg/ml. La dispersione à ̈ stata dimensionata al DLS e dai risultati à ̈ emerso che, in queste condizioni, i nanoidrogel mantengono all’incirca le stesse dimensioni di partenza (384±7 nm).
Per valutare l’efficacia d’intrappolamento del farmaco nei nanoidrogel di HA-CH, questi sono stati liofilizzati e solubilizzati in N-metil-pirrolidone in modo da rompere i nanoidrogel e liberare la levofloxacina intrappolata al loro interno. L’efficacia di intrappolamento (% di incapsulazione) à ̈ stata determinata dal rapporto della quantità di levofloxacina incapsulata nei nanoidrogel rispetto alla quantità di nanoidrogel. La concentrazione di levofloxacina in soluzione à ̈ stata misurata usando uno spettrofotometro UV-VIS alla lunghezza d’onda di assorbanza della levofloxacina di 302 nm, usando una retta di taratura, ottenuta in un range di concentrazioni comprese tra 0,75-12,0 µg/ml.
L’efficacia d’intrappolamento della levofloxacina nei nanoidrogel di HA-CH à ̈ stata del 5% rispetto il peso del polimero.
Dalla descrizione degli esempi di cui sopra risulta evidente come il metodo della presente invenzione abbia il grande vantaggio di preparare in modo estremamente semplice ed economico nanoidrogel direttamente sterili e con una elevata omogeneità dimensionale.
I nanoidrogel oggetto della presente invenzione derivano da una matrice polisaccaridica anfifilica la quale se sottoposta ad alta pressione ed alta temperatura à ̈ in grado di formare nanoidrogel per auto-assemblaggio. Tali nanoidrogel possono simultaneamente incapsulare o adsorbire un grande numero di principi attivi, i quali vengono protetti dal sistema polimerico durante il processo di sterilizzazione.
Va evidenziato come il metodo oggetto della presente invenzione consente la preparazione di nanoidrogel direttamente sterili e apirogeni e induce l’assemblaggio farmaco/polimero senza causare degradazione del composto farmacologicamente attivo né degradazione del polimero.
Il metodo oggetto della presente invenzione ha il grande vantaggio di preparare nanoidrogel che oltre ad essere sterili e apirogeni possono essere caricati sia con un farmaco sia con un composto crioprotettore. Questo comporta che i nanoidrogel sterili e apirogeni veicolanti il farmaco possono essere sottoposti ad un processo di liofilizzazione in modo da essere preservati sotto forma di liofilo stabile per lunghi periodi e facile da manipolare e trasportare. I nanoidrogel liofilizzati sono ricostituibili in acqua o in soluzioni adeguate, quali ad esempio la fisiologica mantenendo le stesse caratteristiche iniziali.
Il processo di liofilizzazione può essere realizzato nella stessa autoclave utilizzata per la preparazione.
Infine, va sottolineato come il metodo della presente invenzione non à ̈ diretto esclusivamente ad applicazioni di carattere biomedico e/o farmaceutico, ma può essere applicato efficacemente a tutte quelle applicazioni che richiedono l’utilizzo di nanoidrogel polisaccaridici.

Claims (10)

  1. RIVENDICAZIONI 1. Metodo per la preparazione di nanoidrogel caratterizzato dal fatto di comprendere una fase di dispersione in cui un polisaccaride funzionalizzato con molecole idrofobiche viene disperso in una soluzione acquosa per ottenere una dispersione acquosa del polisaccaride e una fase di riscaldamento in cui la dispersione acquosa del polisaccaride viene sottoposta ad una temperatura compresa tra 70 e 150 °C e ad una pressione compresa tra 1 e 5 bar; in detta fase di riscaldamento le condizioni di temperatura e pressione devono essere tali che non si verifichi l’ebollizione della dispersione acquosa del polisaccaride.
  2. 2. Metodo per la preparazione di nanoidrogel secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che la fase di riscaldamento prevede una temperatura compresa tra 90 e 130 °C ed una pressione compresa tra 1,5 e 3,5 bar.
  3. 3. Metodo per la preparazione di nanoidrogel secondo la rivendicazione 1 o 2, caratterizzato dal fatto che la fase di riscaldamento ha una durata compresa tra 5 minuti e 3 ore.
  4. 4. Metodo per la preparazione di nanoidrogel secondo una delle rivendicazioni precedenti, caratterizzato dal fatto che nella fase di dispersione il polisaccaride funzionalizzato con molecole idrofobiche viene disperso in una soluzione acquosa ad una concentrazione compresa tra 0,1 e 10,0 mg/ml.
  5. 5. Metodo per la preparazione di nanoidrogel secondo una delle rivendicazioni precedenti, caratterizzato dal fatto che la dispersione acquosa del polisaccaride comprende un composto atto ad essere inglobato e/o adsorbito nelle particelle di nanoidrogel formate nella successiva fase di riscaldamento.
  6. 6. Metodo per la preparazione di nanoidrogel secondo la rivendicazione 5, caratterizzato dal fatto che il suddetto composto atto ad essere inglobato e/o adsorbito nelle particelle di nanoidrogel à ̈ un composto crioprotettore e/o un composto farmacologicamente attivo.
  7. 7. Metodo per la preparazione di nanoidrogel secondo la rivendicazione 6, caratterizzato dal fatto che il detto crioprotettore à ̈ aggiunto alla dispersione acquosa del polisaccaride in una concentrazione compresa tra 0,10÷20,0% p/v.
  8. 8. Metodo per la preparazione di nanoidrogel secondo la rivendicazione 5, caratterizzato dal fatto che il suddetto composto farmacologicamente attivo à ̈ aggiunto alla dispersione acquosa del polisaccaride in una concentrazione compresa tra 0,05 e 10,0 mg/ml.
  9. 9. Particelle di nanoidrogel sterili con una elevata omogeneità dimensionale e caratterizzate dal fatto di essere realizzate con il metodo della presente invenzione.
  10. 10. Particelle di nanoidrogel sterili e caricate con un composto crioprotettore e/o un composto farmacologicamente attivo, caratterizzate dal fatto di essere realizzate con il metodo secondo una delle precedenti rivendicazioni da 5 a 9.
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