ITRM20130340A1 - Metodo per il trattamento di nanoidrogel - Google Patents

Metodo per il trattamento di nanoidrogel

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ITRM20130340A1
ITRM20130340A1 IT000340A ITRM20130340A ITRM20130340A1 IT RM20130340 A1 ITRM20130340 A1 IT RM20130340A1 IT 000340 A IT000340 A IT 000340A IT RM20130340 A ITRM20130340 A IT RM20130340A IT RM20130340 A1 ITRM20130340 A1 IT RM20130340A1
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nanohydrogel
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nanohydrogels
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Claudia Cencetti
Arrigo Giorgia D
Meo Chiara Di
Pietro Matricardi
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Pietro Matricardi
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Description

DESCRIZIONE
“METODO PER IL TRATTAMENTO DI NANOIDROGELâ€
di MATRICARDI PIETRO
La presente invenzione à ̈ relativa ad un metodo per il trattamento di nanoidrogel.
Con il termine nanoidrogel si intende un particolare tipo di nanoparticelle con dimensioni comprese tra 10-1000 nm in grado di combinare i vantaggi degli idrogel con quelli della nanotecnologia, quali ad esempio alta flessibilità, versatilità, assorbimento di acqua, elevata biocompatibilità e lunghi tempi di permanenza all’interno dell’organismo.
In generale, à ̈ noto che un polisaccaride (a carattere idrofilico) opportunamente funzionalizzato con molecole a carattere idrofobico può realizzare un sistema assemblante con caratteristiche di nanoidrogel se esposto in particolari condizioni ad ambiente acquoso.
Attualmente sono conosciuti diversi metodi per la preparazione dei nanoidrogel a partire da polisaccaridi funzionalizzati.
Un primo di questi metodi consiste nel sottoporre il polisaccaride funzionalizzato a sonicazione. Le vibrazioni ultrasoniche sono in grado di indurre la formazione di nanoidrogel di piccole dimensioni. Gli ultrasuoni generano nella dispersione polimerica microbolle che implodendo danno luogo al fenomeno della cavitazione che promuove la separazione delle catene polimeriche favorendo la formazione di una dispersione nanoparticellare.
Un altro metodo consiste nel solubilizzare il polisaccaride funzionalizzato in un opportuno solvente e aggiungere goccia a goccia la soluzione ottenuta in acqua. In queste condizioni il sistema precipita inducendo la formazione di nanoparticelle.
Ancora un altro metodo consiste nel sottoporre a dialisi contro acqua o soluzione acquosa il polisaccaride funzionalizzato una volta che questo à ̈ stato solubilizzato in un solvente organico. Il lento ingresso di acqua attraverso i tubi di dialisi provoca la formazione dei nanoidrogel di piccole dimensioni per spontaneo autoassemblaggio.
I nanoidrogel stanno acquisendo una sempre maggiore importanza in ambito farmaceutico grazie al fatto che, se resi sterili e apirogeni, possono essere utilizzati come composti veicolanti farmaci ed essere somministrati sia nell’uomo sia nell’animale per via inalatoria, parenterale (i.v, i.m, s.c) oppure per via topica supportati da un opportuno device.
Il nanoidrogel, infatti, può inglobare o adsorbire un principio farmacologicamente attivo e funzionare da vettore per la sua somministrazione.
Come sopra accennato, perché possa funzionare da vettore di farmaci il nanoidrogel deve essere necessariamente sottoposto ad un trattamento di sterilizzazione. I metodi di sterilizzazione utilizzati dalle industrie farmaceutiche non sono però totalmente soddisfacenti.
Uno dei principali metodi di sterilizzazione utilizzati à ̈ quello della filtrazione mediante filtri con porosità uguale o inferiore a 0,22 µm seguendo le raccomandazioni delle farmacopee. La filtrazione, se pure possibile in linea di massima con sistemi di adatte dimensioni, risulta comunque spesso difficoltosa per l’intasamento dei filtri stessi dovuti alle interazioni che possono instaurarsi tra le nanoparticelle ed i materiali costituenti i filtri. Inoltre, à ̈ stato verificato che la filtrazione provoca per effetto meccanico, la destrutturazione delle nanoparticelle, quali ad esempio le vescicole come i liposomi, causando la perdita dal medicamento delle molecole bioattive che rimangono intrappolate sul filtro e/o la loro perdita nei liquidi di trasporto.
Un altro metodo di sterilizzazione consiste nell’irradiazione con raggi gamma o con un flusso di elettroni. Questa procedura ha lo svantaggio di poter alterare la struttura delle molecole bioattive fragili, provocare una degradazione dei polimeri che costituiscono la forma farmaceutica ed alterare l’integrità del sistema stesso.
Un’altra metodica utilizzata per la sterilizzazione prevede l’utilizzo di gas quali l’ossido di etilene; tale tecnica, però, à ̈ non facilmente attuabile in presenza di sostanze che possono reagire con il gas stesso. Inoltre, anche l’intimo contatto con le forme farmaceutiche, necessario per avere la sterilità, può essere difficoltoso, come pure l’allontanamento del gas prima del confezionamento della forma farmaceutica stessa.
Inoltre, un’altra necessità che si ha per un corretto utilizzo del nanoidrogel come veicolatore di farmaci, à ̈ quella di garantire un efficace inglobamento o adsorbimento del composto farmacologicamente attivo al nanoidrogel stesso.
Infine, à ̈ richiesta la possibilità di poter liofilizzare il nanoidrogel da solo o con il composto farmacologicamente attivo per poterlo più facilmente trasportare, conservare e manipolare. Al momento dell’uso il nanoidrogel sarà poi ripristinato mediante semplice aggiunta di acqua o di una soluzione fisiologica. Come può risultare immediato ad un tecnico del settore, per poter garantire la stabilità dei nanoidrogel a seguito del trattamento di liofilizzazione à ̈ necessario che gli stessi vengano anche efficacemente protetti da adatti crioprotettori mediante una loro opportuna addizione ai nanoidrogel stessi.
Era quindi sentita l’esigenza di disporre di una metodologia che fosse in grado di realizzare in maniera semplice ed economica una efficace sterilizzazione dei nanoidrogel e al tempo stesso fosse in grado di “caricare†gli stessi con un composto farmacologicamente attivo e/o con un composto crioprotettore.
Gli inventori della presente domanda di brevetto hanno inaspettatamente trovato un metodo per la sterilizzazione e il caricamento dei nanoidrogel e che, al tempo stesso, riesce a realizzare una maggiore omogeneizzazione dimensionale rispetto al nanoidrogel di partenza.
Oggetto della presente invenzione à ̈ un metodo di trattamento di nanoidrogel caratterizzato dal fatto di comprendere una fase di dispersione in cui un nanoidrogel realizzato da un polisaccaride funzionalizzato con molecole idrofobiche viene disperso in una soluzione acquosa per l’ottenimento di una dispersione acquosa del nanoidrogel e una fase di sterilizzazione in cui la dispersione acquosa di nanoidrogel viene sottoposta ad una temperatura compresa tra 70 e 150 °C e ad una pressione compresa tra 1 e 5 bar; in detta fase di sterilizzazione le condizioni di temperatura e pressione devono essere tali che non si verifichi l’ebollizione della dispersione acquosa di nanoidrogel.
Preferibilmente, la fase di sterilizzazione prevede una temperatura compresa tra 90 e 130 °C ed una pressione compresa tra 1,5 e 3,5 bar.
Preferibilmente, la fase di sterilizzazione ha una durata compresa tra 5 minuti e 3 ore.
Un ulteriore oggetto della presente invenzione à ̈ un metodo di trattamento di nanoidrogel caratterizzato dal fatto di comprendere una fase di dispersione in cui un nanoidrogel realizzato da un polisaccaride funzionalizzato con molecole idrofobiche viene disperso in una soluzione acquosa per l’ottenimento di una dispersione acquosa di nanoidrogel e una fase di sterilizzazione e caricamento in cui la dispersione acquosa di nanoidrogel viene addizionata di un composto atto ad essere caricato nelle particelle nanoidrogel mediante inglobamento o adsorbimento e sottoposta ad una temperatura compresa tra 70 e 150 °C e ad una pressione compresa tra 1 e 5 bar; in detta fase di sterilizzazione e caricamento le condizioni di temperatura e pressione devono essere tali che non si verifichi l’ebollizione della dispersione acquosa di nanoidrogel.
Preferibilmente, la fase di sterilizzazione e caricamento prevede una temperatura compresa tra 90 e 130 °C ed una pressione compresa tra 1,5 e 3,5 bar.
Preferibilmente, la fase di sterilizzazione e caricamento ha una durata compresa tra 5 minuti e 3 ore.
Preferibilmente, il suddetto composto atto ad essere inglobato e/o adsorbito nelle particelle di nanoidrogel à ̈ un composto crioprotettore e/o un composto farmacologicamente attivo.
Preferibilmente, il detto composto crioprotettore à ̈ aggiunto alla dispersione acquosa del polisaccaride in una concentrazione compresa tra 0,10÷20,0% p/v.
Preferibilmente, il detto crioprotettore à ̈ compreso nel gruppo composto da destrosio, maltosio, trealosio, lattosio, saccarosio.
Preferibilmente, il detto composto farmacologicamente attivo à ̈ aggiunto alla dispersione acquosa del polisaccaride in una concentrazione compresa tra 0,05 mg/ml- 10,0 mg/ml.
Preferibilmente, il detto composto farmacologicamente attivo à ̈ compreso nel gruppo composto da antibiotici, antitumorali, analgesici, antinfiammatori, anestetici, analettici, agenti adrenergici, agenti bloccanti adrenergici, anticolinergici, anticolinesterasici, anticonvulsivanti, adrenocorticotropi, adrenolitici, adrenomimetici, agenti alchilanti, alcaloidi, inibitori allosterici, steroidi anabolizzanti, anoressizzanti, antiacidi, antidoti, antidiarroici, antifolici, antipiretici, antireumatici, agenti psicoterapeutici, agenti bloccanti neuronali, antiemetici, antielmintici, antiaritmici, antitubercolari, anticoagulanti, antidepressivi, antidiabetici, antiepilettici, antifungini, antistaminici, antiipertensivi, antimuscarinici, antimicobatterici, antimalarici, antisettici, antiprotozoari, immunosoppressori, immunostimolanti, antitiroidei, antivirali, ansiolitici, sedativi, astringenti, beta bloccanti, mezzi di contrasto, corticosteroidi, antitussivi, agenti diagnostici, agenti diagnostici di immagine, diuretici, dopaminergici, emostatici, agenti ematologici, modificatori dell’emoglobina, ormoni, ipnotici, ipolipidemizzanti, agenti regolanti i lipidi, muscarinici, parasimpatico mimetici, miorilassanti, prostaglandine, sedativi, ormoni sessuali, antiallergeni, stimolanti, simpatico mimetici, agenti tiroidei, vasodilatatori, vaccini, vitamine, xantine, antineoplastici, proteine, polipeptidi, carboidrati, polinucleotidi, acidi nucleici, anticorpi policlonali o monoclonali.
Un ulteriore oggetto della presente invenzione sono delle particelle di nanoidrogel sterili con una elevata omogeneità dimensionale e realizzate con il metodo oggetto della presente invenzione.
Ancora un ulteriore oggetto della presente invenzione sono delle particelle di nanoidrogel sterili e caricate con un composto crioprotettore e/o un composto farmacologicamente attivo e realizzate con il metodo oggetto della presente invenzione.
ESEMPI
Per una migliore comprensione dell’invenzione sono riportati di seguito degli esempi di realizzazione a scopo esplicativo e non limitativo.
Negli esempi che seguono le dimensioni delle particelle di nanoidrogel sono state misurate con la tecnica Dynamic Light Scattering (Submicron Particle Sizer Autodilute Model 370, Nicomp).
ESEMPIO 1: STERILIZZAZIONE DI NANOIDROGEL DI GELLANO-COLESTEROLO (Ge-CH)
È stata realizzata una dispersione in acqua di nanoidrogel di Ge-CH a concentrazione di 1 mg/ml. 3 ml di questa dispersione sono stati inseriti in un contenitore di vetro, il quale à ̈ stato chiuso e disposto in autoclave per sterilizzazione. In autoclave la dispersione à ̈ stata sottoposta per 20 minuti ad una temperatura di 121°C e una pressione di 2 bar. Tale trattamento ha reso i nanoidrogel sterili e apirogeni secondo i requisiti di farmacopea europea. Inoltre, il trattamento in autoclave ha realizzato una omogeneizzazione del campione e indotto una riduzione della dimensione delle particelle, le quali, da un diametro iniziale di 170±10 nm prima del trattamento, raggiungono dopo il trattamento un diametro medio di 120±8 nm e una riduzione dell’indice di polidispersione che da un valore pari a 0,350±0,050, passa a 0,200±0,030 dopo il trattamento.
La stabilità dimensionale dei nanoidrogel di Ge-CH à ̈ stata studiata a 37°C per 15 giorni in modo da mimare le condizioni fisiologiche, e a 4°C per 15 giorni in modo da mimare le condizioni di conservazione del prodotto in frigorifero. I nanoidrogel di Ge-CH trattati con il metodo secondo la presente invenzione si sono rivelati stabili ad alta e bassa temperatura di conservazione.
Inoltre, à ̈ stato misurato il Potenziale ζ dei nanoidrogel di Ge-CH usando il Dynamic Light Scattering e il valore ottenuto à ̈ stato pari a -20±5,0 mV e stabile oltre 48 ore.
ESEMPIO 2: STERILIZZAZIONE DI NANOIDROGEL DI ACIDO IALURONICO-COLESTEROLO (HA-CH)
È stata realizzata una dispersione in acqua di nanoidrogel di HA-CH a concentrazione di 1,5 mg/ml. 3 ml di questa dispersione sono stati inseriti in un contenitore di vetro, il quale una volta chiuso à ̈ stato disposto in autoclave. In autoclave la dispersione à ̈ stata sottoposta per 45 minuti ad una temperatura di 105°C e una pressione di 1,5 bar.
Tale procedimento ha reso i nanoidrogel sterili e apirogeni secondo i requisiti di farmacopea europea. Inoltre, sono state misurate le dimensioni delle particelle constatando che il trattamento ha realizzato una omogeneizzazione del campione. In particolare, si à ̈ verificata una riduzione della dimensione delle particelle, le quali, da un diametro iniziale di 200±10 nm prima del trattamento, hanno raggiunto un diametro medio, dopo il trattamento, di 150±10 nm e una riduzione dell’indice di polidispersione che da un valore pari a 0,40±0,05 passa a 0,30±0,05 dopo il trattamento. È stato verificato che nanoidrogel sterili di HA-CH hanno dimostrato una stabilità dimensionale nel tempo per oltre 30 giorni a 4°C e per oltre sette giorni a 37°C.
ESEMPIO 3: STERILIZZAZIONE E CARICAMENTO CON CRIOPROTETTORE DI NANOIDROGEL DI ACIDO IALURONICO-COLESTEROLO (HA-CH)
È stata realizzata una dispersione in acqua di nanoidrogel di HA-CH a concentrazione di 1,5 mg/ml. 3 ml di questa dispersione sono stati addizionati con destrosio come crioprotettore fino ad ottenerne una concentrazione di 1% p/v e inseriti in un contenitore di vetro. Il contenitore à ̈ stato chiuso e disposto in autoclave. In autoclave la dispersione à ̈ stata sottoposta per 60 minuti ad una temperatura di 100°C e una pressione di 1,5 bar.
Al termine del trattamento sono stati ottenuti nanoidrogel di HA-CH caricati con il crioprotettore destrosio ed aventi dimensioni di 380±20 nm misurate con il metodo riportato per gli esempi precedenti.
I nanoidrogel così ottenuti sono stati sottoposti direttamente a liofilizzazione secondo le tecniche note in modo da ottenere un liofilo facile da trasportare e manipolare e stabile per lunghi periodi di tempo. Successivamente, il liofilo ottenuto à ̈ stato ridisperso con acqua sterile ed à ̈ stato possibile riottenere i nanoidrogel di HA-CH con dimensioni di 400,0±10,0.
ESEMPIO 4: STERILIZZAZIONE E CARICAMENTO CON LEVOFLOXACINA DI NANOIDROGEL DI GELLANO-COLESTEROLO (Ge-CH) Una soluzione acquosa del farmaco (levofloxacina, 0,33 mg/ml) à ̈ stata aggiunta ad una dispersione di nanoidrogel di Ge-CH (1,0 mg/ml) (1:3 w/w farmaco/polimero). 3 ml della dispersione così realizzata sono stati inseriti all’interno di un contenitore in vetro, il quale una volta chiuso à ̈ stato inserito in autoclave. In autoclave la disperisone à ̈ stata sottoposta per 20 minuti ad una temperatura di 130°C e ad una pressione di 2,5 bar. Al termine del processo, la dispersione à ̈ stata sottoposta a dialisi (Visking tubing, cut-off: 12000-14000) per 3 ore contro acqua distillata in modo da purificare i nanoidrogel dal farmaco non incapsulato al loro interno. Prima del trattamento in autoclave, i nanoidrogel di Ge-CH avevano dimensioni di 266±3 nm con un indice di polidispersione pari a 0,30±0,03, mentre dopo il trattamento sono stati ottenuti nanoidrogel di Ge-CH caricati di levofloxacina con dimensioni di 240±5 nm con un indice di polidispersione pari a 0,30±0,01.
Per valutare l’efficacia d’intrappolamento del farmaco nei nanoidrogel di Ge-CH, questi ultimi sono stati liofilizzati e solubilizzati in N-metil-pirrolidone in modo da rompere i nanoidrogel e liberare la levofloxacina intrappolata al loro interno. L’efficacia d’intrappolamento (% d’incapsulazione) à ̈ stata determinata dal rapporto della quantità di levofloxacina incapsulata nei nanoidrogel rispetto alla quantità totale di nanoidrogel prodotti. La concentrazione di levofloxacina in soluzione à ̈ stata misurata usando uno spettrofotometro UV-VIS alla lunghezza d’onda d’assorbanza della levofloxacina (302 nm), usando una retta di taratura ottenuta in un range di concentrazioni comprese tra 0,75-12,0 µg/ml. L’efficacia d’intrappolamento della levofloxacina nei nanoidrogel di Ge-CH, caricati ad alta P e alta T, à ̈ stata del 3% rispetto al peso del polimero.
La dispersione di nanoidrogel carichi à ̈ stata in seguito liofilizzata secondo la metodologia classica aggiungendovi una soluzione di crioprotettore (destrosio) ad una concentrazione finale di 1% p/v. Il liofilo à ̈ stato poi risospeso in modo da ricostituire i nanoidrogel con il farmaco intrappolato al loro interno.
ESEMPIO 5: STERILIZZAZIONE E CARICAMENTO CON LEVOFLOXACINA E CRIPROTETTORE DI NANOIDROGEL DI ACIDO IALURONICO-COLESTEROLO (HA-CH)
9 mg di particelle nanoidrogel di HA-CH sono state disperse in 3 ml di una soluzione acquosa comprendente destrosio come crioprotettore alla concentrazione di 1% p/v. Alla dispersione formatasi à ̈ stato aggiunto 1 ml di una soluzione di un antibiotico fluorochinolonico (levofloxacina) ottenendo una concentrazione finale di antibiotico pari a 1 mg/ml. La miscela così ottenuta à ̈ stata inserita all’interno di un opportuno contenitore di vetro il quale una volta chiuso à ̈ stato disposto all’interno di una autoclave. In autoclave la dispersione à ̈ stata sottoposta per 30 minuti ad una temperatura di 110°C e una pressione di 2 bar.
Al termine del processo, la dispersione à ̈ stata sottoposta a diafiltrazione sterile in modo da purificare i nanoidrogel dal farmaco non incapsulato al loro interno. Dopo la filtrazione, si sono ottenuti nanoidrogel di HA-CH, caricati con levofloxacina e sterili, aventi dimensioni di 380±20 nm, e con un indice di polidispersione pari a 0,325±0,07.
I nanoidrogel prodotti sono stati liofilizzati secondo le tecniche note ed in seguito il liofilo à ̈ stato ridisperso in un quantitativo di acqua sterile tale da ottenere una concentrazione di nanoidrogel carichi pari ad 1 mg/ml. La dispersione à ̈ stata dimensionata al DLS e dai risultati à ̈ emerso che, in queste condizioni, i nanoidrogel mantengono all’incirca le stesse dimensioni di partenza (384±7 nm).
Per valutare l’efficacia d’intrappolamento del farmaco nei nanoidrogel di HA-CH, questi sono stati liofilizzati e solubilizzati in N-metil-pirrolidone in modo da rompere i nanoidrogel e liberare la levofloxacina intrappolata al loro interno. L’efficacia di intrappolamento (% di incapsulazione) à ̈ stata determinata dal rapporto della quantità di levofloxacina incapsulata nei nanoidrogel rispetto alla quantità di nanoidrogel. La concentrazione di levofloxacina nella dispersione à ̈ stata misurata usando uno spettrofotometro UV-VIS alla lunghezza d’onda di assorbanza della levofloxacina di 302 nm ed usando una retta di taratura ottenuta in un range di concentrazioni comprese tra 0,75-12,0 µg/ml.
L’efficacia d’intrappolamento della levofloxacina nei nanoidrogel di HA-CH à ̈ stata del 5% rispetto al peso del polimero.
Dalla descrizione degli esempi di cui sopra risulta evidente come il metodo di trattamento della presente invenzione abbia il grande vantaggio sia di sterilizzare nanoidrogel in modo estremamente semplice ed economico, sia di realizzare nanoidrogel carichi con composti in grado di conferire ai nanoidrogel stessi importanti sviluppi applicativi.
Inoltre, il trattamento oggetto della presente invenzione aumenta l’omogeneità dimensionale dei nanoidrogel.
Con il trattamento oggetto della presente invenzione i nanoidrogel possono incapsulare o adsorbire un grande numero di principi attivi, i quali sono protetti dal sistema polimerico durante il processo di sterilizzazione.
Va evidenziato come il metodo di trattamento oggetto della presente invenzione consente la preparazione di nanoidrogel sterili e apirogeni caricati di un principio farmacologicamente attivo senza causare degradazione dello stesso né degradazione del polimero.
Il trattamento oggetto della presente invenzione ha il grande vantaggio di rendere i nanoidrogel sterili e apirogeni e di caricarli sia con un farmaco sia con un composto crioprotettore. Questo comporta che i nanoidrogel sterili e apirogeni veicolanti il farmaco possono essere sottoposti ad un processo di liofilizzazione in modo da essere preservati sotto forma di liofilo stabile per lunghi periodi e facile da manipolare e trasportare. I nanoidrogel liofilizzati sono ricostituibili in acqua o in soluzioni adeguate, quali ad esempio la fisiologica, mantenendo le stesse caratteristiche iniziali.
Infine, va sottolineato come il metodo di trattamento della presente invenzione non à ̈ diretto esclusivamente ad applicazioni di carattere biomedico e/o farmaceutico, ma può essere applicato efficacemente a tutte quelle applicazioni che richiedono l’utilizzo di nanoidrogel polisaccaridici.

Claims (11)

  1. RIVENDICAZIONI 1. Metodo di trattamento di nanoidrogel caratterizzato dal fatto di comprendere una fase di dispersione in cui un nanoidrogel realizzato da un polisaccaride funzionalizzato con molecole idrofobiche viene disperso in una soluzione acquosa per ottenere una dispersione acquosa di nanoidrogel e una fase di sterilizzazione in cui tale dispersione acquosa di nanoidrogel viene sottoposta ad una temperatura compresa tra 70 e 150 °C e ad una pressione compresa tra 1 e 5 bar; in detta fase di sterilizzazione le condizioni di temperatura e pressione devono essere tali che non si verifichi l’ebollizione della dispersione acquosa di nanoidrogel.
  2. 2. Metodo di trattamento di nanoidrogel secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che la fase di sterilizzazione prevede una temperatura compresa tra 90 e 130 °C ed una pressione compresa tra 1,5 e 3,5 bar.
  3. 3. Metodo di trattamento di nanoidrogel secondo la rivendicazione 1 o 2, caratterizzato dal fatto che la fase di sterilizzazione ha una durata compresa tra 5 minuti e 3 ore.
  4. 4. Particelle di nanoidrogel sterili con una elevata omogeneità dimensionale e realizzate con il metodo di trattamento secondo una delle rivendicazioni precedenti.
  5. 5. Metodo di trattamento di nanoidrogel caratterizzato dal fatto di comprendere una fase di dispersione in cui un nanoidrogel realizzato da un polisaccaride funzionalizzato con molecole idrofobiche viene disperso in una soluzione acquosa per l’ottenimento di una dispersione acquosa di nanoidrogel e una fase di sterilizzazione e caricamento in cui la dispersione acquosa di nanoidrogel viene addizionata di uno o più composti atti ad essere caricati nelle particelle nanoidrogel mediante inglobamento o adsorbimento e sottoposta ad una temperatura compresa tra 70 e 150 °C e ad una pressione compresa tra 1 e 5 bar; in detta fase di sterilizzazione e caricamento le condizioni di temperatura e pressione devono essere tali che non si verifichi l’ebollizione della dispersione acquosa di nanoidrogel.
  6. 6. Metodo di trattamento di nanoidrogel secondo la rivendicazione 5, caratterizzato dal fatto che la fase di sterilizzazione e caricamento prevede una temperatura compresa tra 90 e 130 °C ed una pressione compresa tra 1,5 e 3,5 bar.
  7. 7. Metodo di trattamento di nanoidrogel secondo la rivendicazione 5 o 6, caratterizzato dal fatto che la fase di sterilizzazione e caricamento ha una durata compresa tra 5 minuti e 3 ore.
  8. 8. Metodo di trattamento di nanoidrogel secondo una delle rivendicazioni da 5 a 7, caratterizzato dal fatto che il suddetto composto atto ad essere inglobato e/o adsorbito nelle particelle di nanoidrogel à ̈ un composto crioprotettore e/o un composto farmacologicamente attivo.
  9. 9. Metodo di trattamento di nanoidrogel secondo la rivendicazione 8, caratterizzato dal fatto che il detto composto crioprotettore à ̈ aggiunto alla dispersione acquosa del polisaccaride in una concentrazione compresa tra 0,10÷20,0% p/v.
  10. 10. Metodo di trattamento di nanoidrogel secondo la rivendicazione 8, caratterizzato dal fatto che il detto composto farmacologicamente attivo à ̈ aggiunto alla dispersione acquosa del polisaccaride in una concentrazione compresa tra 0,05 mg/ml ÷ 10,0 mg/ml.
  11. 11. Particelle di nanoidrogel sterili e caricate con un composto crioprotettore e/o un composto farmacologicamente attivo e realizzate con il metodo secondo una delle rivendicazioni da 5 a 10.
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