ITMI971754A1 - PROCEDURE FOR ISOLATING ANTIFREEZE PROTEINS FROM CONFECTIONERY PRODUCTS AND FROZEN CONFECTIONERY PRODUCT CONTAINING PROTEIN FOR - Google Patents
PROCEDURE FOR ISOLATING ANTIFREEZE PROTEINS FROM CONFECTIONERY PRODUCTS AND FROZEN CONFECTIONERY PRODUCT CONTAINING PROTEIN FOR Download PDFInfo
- Publication number
- ITMI971754A1 ITMI971754A1 IT97MI001754A ITMI971754A ITMI971754A1 IT MI971754 A1 ITMI971754 A1 IT MI971754A1 IT 97MI001754 A IT97MI001754 A IT 97MI001754A IT MI971754 A ITMI971754 A IT MI971754A IT MI971754 A1 ITMI971754 A1 IT MI971754A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- afp
- ice
- product
- frozen
- afps
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 24
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 title claims description 14
- 108010053481 Antifreeze Proteins Proteins 0.000 title description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title description 6
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 61
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 28
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 claims description 27
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 20
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 16
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 12
- 235000013611 frozen food Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 10
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 8
- 240000006766 Cornus mas Species 0.000 claims description 7
- 235000003363 Cornus mas Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 67
- 239000000047 product Substances 0.000 description 45
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 14
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 11
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 11
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 10
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 4
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 4
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 4
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 4
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 4
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008886 Ceratonia siliqua Species 0.000 description 2
- 235000013912 Ceratonia siliqua Nutrition 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 235000021185 dessert Nutrition 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 2
- 230000007914 freezing tolerance Effects 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N vanillin Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC=C1O MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N vanillin Natural products COC1=CC(O)=CC(C=O)=C1 FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012141 vanillin Nutrition 0.000 description 2
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 1
- 229910001369 Brass Inorganic materials 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 241000544808 Bromus sterilis Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 description 1
- 240000003857 Holcus lanatus Species 0.000 description 1
- 240000004296 Lolium perenne Species 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 240000006597 Poa trivialis Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000010951 brass Substances 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000002826 coolant Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012906 dessert mixes Nutrition 0.000 description 1
- 235000011850 desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000013572 fruit purees Nutrition 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 description 1
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 description 1
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 description 1
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 230000006910 ice nucleation Effects 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 238000013001 point bending Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000015504 ready meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 238000004467 single crystal X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 235000021012 strawberries Nutrition 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G9/00—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor
- A23G9/32—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
- A23G9/38—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G9/00—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor
- A23G9/44—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by shape, structure or physical form
- A23G9/48—Composite products, e.g. layered, laminated, coated, filled
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
- A23L3/36—Freezing; Subsequent thawing; Cooling
- A23L3/37—Freezing; Subsequent thawing; Cooling with addition of or treatment with chemicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8273—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for drought, cold, salt resistance
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Confectionery (AREA)
- Freezing, Cooling And Drying Of Foods (AREA)
Description
DESCRIZIONE DESCRIPTION
L'invenzione riguarda un procedimento per la preparazione di un prodotto alimentare contenente AFP e prodotti alimentari contenenti AFP. Peptidi anticongelamento (AFP) sono stati suggeriti per migliorare la tolleranza al congelamento dei prodotti alimentari. The invention relates to a process for the preparation of a food product containing AFP and food products containing AFP. Anti-freezing peptides (AFPs) have been suggested to improve the freezing tolerance of food products.
Proteine anticongelamento sono state descritte nella letteratura, si veda ad esempio Marilyn Griffith e K. Vanya Ewart in Biotechnology Advances, Voi 13, No 3, pp 375-402, 1995. Proprietà anticongelamento possiedono in generale una o più delle seguenti proprietà: isteresi termica, inibizione della ricristallizzazione del ghiaccio, controllo della forma dei cristalli di ghiaccio ed interazione con nucleatori del ghiaccio. Anti-freezing proteins have been described in the literature, see for example Marilyn Griffith and K. Vanya Ewart in Biotechnology Advances, Vol 13, No 3, pp 375-402, 1995. Anti-freezing properties generally possess one or more of the following properties: thermal hysteresis , inhibition of ice recrystallization, control of ice crystal shape and interaction with ice nucleators.
L'isteresi termica è la proprietà meglio nota degli AFP e la proprietà viene normalmente utilizzata per analizzare la presenza degli AFP. L'isteresi termica deriva come risultato dall'abbassamento della temperatura di congelamento apparente di una soluzione che contiene AFP attivo per isteresi termica senza influenzare la temperatura di fusione. L'identificazione delle fonti di AFP mediante analisi dell'isteresi termica viene ampiamente descritta nella letteratura, si veda ad esempio John G Duman in Cryobiology 30, 322-328 (1993). Thermal hysteresis is the best known property of AFPs and the property is normally used to analyze the presence of AFPs. Thermal hysteresis results from lowering the apparent freezing temperature of a solution that contains active AFP by thermal hysteresis without affecting the melting temperature. The identification of AFP sources by thermal hysteresis analysis is extensively described in the literature, see for example John G Duman in Cryobiology 30, 322-328 (1993).
L'inibizione della ricristallizzazione del ghiaccio è un'altra proprietà degli AFP. Questa attività è pure indicata come soppressione della crescita dei cristalli di ghiaccio. Questa proprietà può essere esaminata confrontando ad un certo punto nel tempo le dimensioni dei cristalli di ghiaccio dei cristalli in presenza di AFP e in assenza di AFP. L'applicazione di questo procedimento nell'analisi degli AFP di pesce è descritta nel brevetto statunitense 5.118.792 (DNA Plant Technology Corporation). Inhibition of ice recrystallization is another property of AFPs. This activity is also referred to as suppression of ice crystal growth. This property can be examined by comparing at some point in time the ice crystal sizes of the crystals in the presence of AFP and in the absence of AFP. The application of this procedure in the analysis of fish AFPs is described in US patent 5,118,792 (DNA Plant Technology Corporation).
Una terza proprietà degli AFP è la loro capacità di influenzare la forma dei cristalli di ghiaccio. Questa proprietà ha origine dal legame selettivo degli AFP ad alcune facce del cristallo di ghiaccio limitando in questo modo la crescita del cristallo in alcune direzioni. La presenza di cristalli di ghiaccio con una forma a bipiramide esagonale è quindi considerata indicativa della presenza di AFP. Questo procedimento è descritto ad esempio per analizzare l'attività degli AFP di segale invernale extracellulare in WO 92/22581 (Università di Waterloo). A third property of AFPs is their ability to influence the shape of ice crystals. This property originates from the selective binding of AFPs to some faces of the ice crystal thus limiting the growth of the crystal in some directions. The presence of ice crystals with a hexagonal bipyramid shape is therefore considered indicative of the presence of AFP. This procedure is described for example for analyzing the AFP activity of extracellular winter rye in WO 92/22581 (University of Waterloo).
Una quarta proprietà degli AFP è la loro capacità di inibire 1'attività delle sostanze di nucleazione del ghiaccio. Questa interazione fra un AFP e un nucleatore del ghiaccio può avere come risultato ad esempio una isteresi termica aumentata. Questa proprietà viene ad esempio verificata in WO 96/40973 (Università di Notre dame du Lac). A fourth property of AFPs is their ability to inhibit the activity of ice nucleation substances. This interaction between an AFP and an ice nucleator can result in, for example, an increased thermal hysteresis. This property is verified for example in WO 96/40973 (University of Notre Dame du Lac).
Gli AFP sono stati suggeriti per migliorare la tolleranza al congelamento dei prodotti. Molte applicazioni sono state suggerite in questo contesto. AFPs have been suggested to improve the freezing tolerance of products. Many applications have been suggested in this context.
Ad esempio, gli AFP sono stati suggeriti per migliorare la crioconservazione di materiali biologici (WO 91/12718, Agouron Pharmaceuticals , WO 91/10361, The Reagents of thè University of California). Inoltre, gli AFP sono stati suggeriti per impedire perdite da liposomi, ad esempio in sostanze cosmetiche o farmaceutiche (si veda WO 96/20695). Un'ulteriore possibile applicazione è di aumentare la tolleranza al congelamento di piante includono al loro interno (oppure producendo al loro interno transgeneticamente) un AFP (si veda J. Celi. Biochem. Suppl. voi. 14e, 1990, pag 303 XP002030248, Lee ed al., abstract R228). Inoltre si è suggerito 1 'impiego di AFP di pesce in prodotti alimentari ad esempio per yogurt congelati oppure gelato (US 5.620.732 a nome Pillsbury e WO 96/11586, HSC Research and development limited partnership). For example, AFPs have been suggested to improve the cryopreservation of biological materials (WO 91/12718, Agouron Pharmaceuticals, WO 91/10361, The Reagents of the University of California). Furthermore, AFPs have been suggested to prevent loss from liposomes, for example in cosmetic or pharmaceutical substances (see WO 96/20695). A further possible application is to increase the tolerance to freezing of plants including within them (or by producing within them transgenetically) an AFP (see J. Celi. Biochem. Suppl. Vol. 14e, 1990, pag 303 XP002030248, Lee et al., abstract R228). Furthermore, the use of fish AFP in food products has been suggested, for example for frozen yogurt or ice cream (US 5,620,732 in the name of Pillsbury and WO 96/11586, HSC Research and development limited partnership).
Finora tuttavia l'impiego degli AFP non è stato applicato su scala commerciale. I richiedenti ritengono che una delle ragioni per la mancanza di implementazione commerciale sia che sebbene siano stati descritti molti AFP, in pratica la realizzazione in prodotti commerciali effettivi incontra seri problemi. However, the use of AFPs has not so far been applied on a commercial scale. The applicants believe that one of the reasons for the lack of commercial implementation is that although many AFPs have been described, in practice implementation in actual commercial products encounters serious problems.
I Richiedenti hanno trovato che una delle ragioni chiave per questi problemi è che fra il grande numero di AFP che sono stati descritti nella letteratura solamente un gruppo limitato di AFP può essere opportunamente applicato per ciascuna applicazione; i Richiedenti hanno inoltre trovato che questa scelta di AFP adatta dipende dall'applicazione desiderata e/o dagli attributi di prodotto da ottenere. Applicants have found that one of the key reasons for these problems is that among the large number of AFPs that have been described in the literature only a limited group of AFPs can be suitably applied for each application; Applicants have also found that this choice of suitable AFP depends on the desired application and / or on the product attributes to be obtained.
WO 90/13571 descrive peptidi anticongelamento prodotti per via chimica o mediante tecniche del DNA ricombinante. Gli AFP possono opportunamente essere utilizzati in prodotti alimentari come ad esempio gelato. L'Esempio 3B mostra forme di cristalli di ghiaccio modificati se una miscela per sorbetto viene congelata in una pellicola in combinazione con lo 0,01% in peso di AFP. WO 90/13571 describes anti-freezing peptides produced chemically or by recombinant DNA techniques. AFPs can suitably be used in food products such as ice cream. Example 3B shows modified ice crystal forms if a sherbet blend is frozen in a film in combination with 0.01 wt% AFP.
WO 92/22581 descrive AFP derivanti da piante. Questo documento descrive inoltre un procedimento per estrarre una composizione polipeptidica dagli spazi extracellulari di piante infiltrando le foglie con un mezzo di estrazione senza rompere le cellule delle piante. WO 92/22581 discloses AFPs derived from plants. This paper further describes a procedure for extracting a polypeptide composition from the extracellular spaces of plants by infiltrating the leaves with an extraction medium without breaking the plant cells.
WO 94/03617 descrive la produzione di AFP da lievito e il loro possibile impiego in gelato. WO 96/11586 descrive AFP derivanti da pesce prodotti da microbi. WO 94/03617 describes the production of AFP from yeast and their possible use in ice cream. WO 96/11586 discloses AFPs derived from fish produced by microbes.
La presente invenzione è volta a fornire soluzioni ai problemi indicati sopra. In particolare l'invenzione è volta a fornire prodotti alimentari congelati con una consistenza relativamente morbida sebbene fragile, detta consistenza essendo conservata anche in seguito a prolungata conservazione a basse temperature. The present invention is aimed at providing solutions to the problems indicated above. In particular, the invention is aimed at providing frozen food products with a relatively soft although fragile consistency, said consistency being preserved even after prolonged storage at low temperatures.
Si è trovato sorprendentemente che gli AFP possono essere incorporati in modo conveniente in prodotti alimentari congelati per dare come risultato le proprietà di prodotto desiderate posto che il prodotto e le condizioni di trattamento siano variate in modo che la forma dei cristalli di ghiaccio soddisfi gli specifici requisiti. It has surprisingly been found that AFPs can be conveniently incorporated into frozen food products to result in the desired product properties as long as the product and processing conditions are varied so that the shape of the ice crystals meets the specific requirements. .
Di conseguenza, in un primo aspetto, l'invenzione riguarda un procedimento per la produzione di un prodotto alimentare congelato comprendente AFP, in cui le condizioni vengono scelte in modo tale che i cristalli di ghiaccio nel prodotto hanno un rapporto di forma compreso fra 1,1 e 1,9. Consequently, in a first aspect, the invention relates to a process for the production of a frozen food product comprising AFP, in which the conditions are chosen in such a way that the ice crystals in the product have an aspect ratio comprised between 1, 1 and 1.9.
Se i prodotti alimentari vengono congelati, cristalli di ghiaccio si formano in tutto il prodotto. Se gli AFP vengono inclusi nei prodotti alimentari da congelare, ciò può portare ad un cambiamento nelle proprietà di ricristallizzazione del ghiaccio. L'aggregamento dei cristalli di ghiaccio di prodotti contenenti AFP può provocare fragilità del prodotto. If food is frozen, ice crystals form throughout the product. If AFPs are included in food products to be frozen, this can lead to a change in the recrystallization properties of the ice. Ice crystal aggregation of AFP-containing products can cause product brittleness.
Molti consumatori sono favorevoli a prodotti alimentari relativamente morbidi e fragili o loro ingredienti come ad esempio gelato o sorbetto. Per esempio un sorbetto croccante o ghiacciolo croccante può essere utilizzato come ingrediente attraente in prodotti dolciari congelati, pure gelato relativamente duro è apprezzato da un grande gruppo di consumatori. Many consumers are in favor of relatively soft and fragile food products or their ingredients such as ice cream or sorbet. For example a crunchy sherbet or crunchy popsicle can be used as an attractive ingredient in frozen confectionery products, although relatively hard ice cream is enjoyed by a large group of consumers.
Sorprendentemente abbiamo trovato gli AFP offrono l'opportunità di formulare prodotti alimentari congelati che da una parte siano relativamente morbidi e fragili e dall'altra mantengono proprietà migliorate della ricristallizzazione del ghiaccio. I Richiedenti hanno trovato sorprendentemente che questa combinazione vantaggiosa delle proprietà può essere ottenuta se il prodotto contiene AFP e ha un rapporto di forma dei cristalli di ghiaccio nel prodotto compreso fra 1,1 e 1,9. Surprisingly we found AFPs offer the opportunity to formulate frozen food products that are relatively soft and brittle on the one hand and retain improved ice recrystallization properties on the other. Applicants have surprisingly found that this advantageous combination of properties can be achieved if the product contains AFP and has a form ratio of the ice crystals in the product between 1.1 and 1.9.
11 rapporto di forma di cristalli di ghiaccio è definito come il rapporto fra la lunghezza e la larghezza dei cristalli di ghiaccio. Un rapporto di forma conpreso fra 1,1 e 1,9 corrisponde a cristalli di ghiaccio arrotondati, che non sono allungati di forma. Il rapporto di forma di cristalli può essere stabilito mediante un qualsiasi procedimento adatto. Un procedimento preferito è illustrato negli esempi. Preferibilmente il rapporto è conpreso fra 1,2 e 1,8, in modo altamente preferito fra 1,3 e 1,7. The aspect ratio of ice crystals is defined as the ratio of the length to the width of the ice crystals. A shape ratio between 1.1 and 1.9 corresponds to rounded ice crystals, which are not elongated in shape. The crystal aspect ratio can be established by any suitable process. A preferred method is illustrated in the examples. Preferably the ratio is between 1.2 and 1.8, most preferably between 1.3 and 1.7.
Preferibilmente, il prodotto congelato dell'invenzione è fragile. Preferibilmente lo spessore minimo di strato al quale si può osservare il comportamento di frattura è minore di 10 mm, maggiormente preferito 1-5 mm. Il comportamento da frattura può essere misurato o preparando strati con vario spessore determinando a quale spessore minimo si verifica comportamento da frattura oppure lo si può calcolare dal modulo di Young come descritto negli esempi. Preferably, the frozen product of the invention is brittle. Preferably the minimum layer thickness at which the fracture behavior can be observed is less than 10 mm, more preferably 1-5 mm. Fracture behavior can be measured by either preparing layers of varying thickness by determining at what minimum thickness fracture behavior occurs or it can be calculated from Young's modulus as described in the examples.
Durante la formulazione e il successivo congelamento di prodotti alimentari diversi parametri possono influenzare il rapporto di forma dei cristalli di ghiaccio da formare. Esempi di fattori che influenzano il rapporto di forma sono elencati nel seguito. I Richiedenti ritengono che rientri nella capacità dell'esperto del ramo scegliere quelle condizioni per cui il rapporto di forma di cristalli di ghiaccio rientra nell'intervallo desiderato. During the formulation and subsequent freezing of food products, various parameters can influence the aspect ratio of the ice crystals to be formed. Examples of factors affecting the aspect ratio are listed below. Applicants believe that it is within the skill of one skilled in the art to choose those conditions for which the ice crystal aspect ratio is within the desired range.
Un fattore che influenza il rapporto di forma dei cristalli di ghiaccio è la velocità di congelamento del prodotto. In termini generali, aumentando la velocità di congelamento si diminuisce il rapporto di forma dei cristalli di ghiaccio. In questo contesto, la temperatura di congelamento può influenzare la velocità di congelamento e quindi il rapporto di forma dei cristalli di ghiaccio. In questo procedimento, si preferiscono talvolta procedimenti di congelamento che comprendono una fase di indurimento ad esempio ad una temperatura inferiore a -30°F. La temperatura di immagazzinamento e il tempo di immagazzinamento possono pure influenzare il rapporto di forma, per cui temperature di conservazione più elevate e/o tempi di conservazione più lunghi tendono a favorire la formazione di rapporti di forma elevati. One factor affecting the aspect ratio of ice crystals is the freezing rate of the product. In general terms, increasing the freezing rate decreases the aspect ratio of the ice crystals. In this context, the freezing temperature can influence the freezing rate and thus the aspect ratio of the ice crystals. In this process, freezing processes are sometimes preferred which include a hardening step for example at a temperature below -30 ° F. The storage temperature and storage time can also affect the aspect ratio, whereby higher storage temperatures and / or longer storage times tend to favor the formation of high aspect ratios.
Un altro fattore che influenza il rapporto di forma dei cristalli di ghiaccio è la mobilità del prodotto durante il congelamento. Ad esempio se si deve congelare una miscela per sorbetto o gelato liquida, il congelamento coescente porta ad un rapporto di forma piuttosto alto per i cristalli di ghiaccio, mentre l'agitazione porta ad un rapporto di forma minore. Miscelazione con alto taglio porta a rapporti di aspetto anche minori. Another factor affecting the aspect ratio of ice crystals is the mobility of the product during freezing. For example, if a liquid sorbet or ice cream mix is to be frozen, coescent freezing leads to a rather high aspect ratio for ice crystals, while stirring leads to a lower aspect ratio. Blending with high shear leads to even lower aspect ratios.
Un altro fattore che influenza il rapporto di forma dei cristalli di ghiaccio è la presenza e la quantità degli ingredienti. Ad esempio, la presenza di ingredienti che tendono a formare una struttura reticolare nel prodotto (ad esempio le gomme o i grassi) possono portare ad un rapporto di forma minore dei prodotti senza questi ingredienti. Inoltre altri ingredienti possono condurre ad rapporti di forma minori, come ad esempio livelli di solidi elevati, ad esempio alti livelli di zuccheri possono portare a bassi rapporti di forma. Another factor affecting the aspect ratio of ice crystals is the presence and quantity of the ingredients. For example, the presence of ingredients that tend to form a lattice structure in the product (e.g. gums or fats) can lead to a lower aspect ratio of products without these ingredients. Also other ingredients can lead to lower aspect ratios, such as high solids levels, for example high sugar levels can lead to low aspect ratios.
Infine, la natura e la quantità degli AFP presenti può portare variazioni nei rapporti di forma. Alcuni AFP sembrano favorire la formazione di bassi rapporti di aspetto mentre altri AFP sembrano indurre a rapporti di forma maggiori. Un testo adatto per scegliere questi AFP è descritto negli esempi. La variazione di quantità di AFP può pure portare a variazione dei rapporti di forma. Finally, the nature and quantity of the AFPs present can lead to variations in the aspect ratios. Some AFPs seem to favor the formation of low aspect ratios while other AFPs seem to induce higher aspect ratios. Suitable text for choosing these AFPs is described in the examples. The variation in the amount of AFP can also lead to a variation in the aspect ratios.
In conformità con una seconda forma di realizzazione, l'invenzione riguarda un procedimento per la produzione di un prodotto alimentare congelato comprendente AFP, in cui la formulazione, le condizioni di congelamento ed immagazzinamento vengono scelte in mòdo tale che i cristalli di ghiaccio nel prodotto abbiano un rapporto di aspetto compreso fra 1,1 e 1,9. In accordance with a second embodiment, the invention relates to a process for the production of a frozen food product comprising AFP, in which the formulation, freezing and storage conditions are selected in such a way that the ice crystals in the product have an aspect ratio between 1.1 and 1.9.
Il procedimento dell'invenzione può essere applicato a qualsiasi prodotto alimentare congelato che contenga AFP. Esempi di prodotti adatti sono le salse, pasti pronti, ecc. Prodotti alimentari preferiti sono prodotti dolciari congelati come ad esempio gelato e sorbetto. The process of the invention can be applied to any frozen food product that contains AFP. Examples of suitable products are sauces, ready meals, etc. Preferred food items are frozen confectionery products such as ice cream and sorbet.
I Richiedenti hanno trovato che gli AFP da utilizzare nel procedimento secondo l'invenzione possono derivare da una pluralità di fonti come ad esempio piante, pesci, insetti e microorganismi. Si possono utilizzare sia specie presenti in natura che specie ottenute mediante modifica genetica. Ad esempio, microorganismi o piante possono essere modificati geneticamente per esprimere AFP e gli AFP possono essere quindi utilizzati secondo la presente invenzione. The Applicants have found that the AFPs to be used in the process according to the invention can derive from a plurality of sources such as for example plants, fish, insects and microorganisms. Both naturally occurring species and species obtained by genetic modification can be used. For example, microorganisms or plants can be genetically modified to express AFP and the AFPs can then be used according to the present invention.
Tecniche di manipolazione genetica possono essere utilizzate per produrre AFP come segue. Una cellula o organismo ospite appropriato viene trasformato mediante un "costruttore di geni" che contiene il polipeptide desiderato. La sequenza di nucleotidi che codifica il polipeptide può essere inserita in un vettore di espressione adatto che codifica gli elementi necessari per la trascrizione e la traduzione in modo tale che verranno espressi nelle condizioni appropriate (ad esempio nell'orientamento corretto e nello schema di lettura corretto e con le sequenze desiderate e di espressione appropriate). I procedimenti richiesti per costruire questi vettori di espressione sono ben noti agli esperti del ramo. Genetic manipulation techniques can be used to produce AFP as follows. An appropriate host cell or organism is transformed by a "gene builder" that contains the desired polypeptide. The nucleotide sequence encoding the polypeptide can be inserted into a suitable expression vector which encodes the elements necessary for transcription and translation in such a way that they will be expressed under the appropriate conditions (e.g. in the correct orientation and in the correct reading pattern. and with the desired and appropriate expression sequences). The processes required to construct these expression vectors are well known to those skilled in the art.
Una pluralità di sistemi di espressione può essere utilizzata per esprimere la sequenza di codifica dei polipeptidi termostabili. Questi comprendono, ma non limitatamente, batteri, lievito, sistemi di cellule di insetti, sistemi di colture di cellule di piante e piante, il tutto trasformato con i vettori di espressione appropriati. A plurality of expression systems can be used to express the coding sequence of the thermostable polypeptides. These include, but are not limited to, bacteria, yeast, insect cell systems, plant cell culture systems and plants, all transformed with the appropriate expression vectors.
Un'ampia varietà di piante e di sistemi di cellule di piante possono essere trasformati con i costrutti di acidi nucleici dei polipeptidi desiderati. Forme di realizzazione preferite comprendono ma non limitatamente mais, pomodoro, tabacco, carote, fragole, semi di colza e bietola da zucchero. A wide variety of plants and plant cell systems can be transformed with the nucleic acid constructs of the desired polypeptides. Preferred embodiments include but not limited to corn, tomato, tobacco, carrots, strawberries, rapeseed and sugar beet.
Allo scopo dell'invenzione gli AFP preferiti vengono derivati da pesce. Particolarmente preferito è l'impiego di proteine derivanti da piante (cioè proteine ottenute direttamente da piante oppure queste proteine prodotte transgeneticamente da altri organismi), derivate in particolare da segale invernale o erbe perenni. For the purpose of the invention the preferred AFPs are derived from fish. Particularly preferred is the use of proteins deriving from plants (ie proteins obtained directly from plants or these proteins produced transgenetically by other organisms), derived in particular from winter rye or perennial herbs.
Per alcune fonti naturali gli AFP possono consistere di una miscela di due o più AFP differenti. For some natural sources, AFPs may consist of a mixture of two or more different AFPs.
Preferibilmente si scelgono quegli AFP che hanno proprietà di inibizione della ricristallizzazione del ghiaccio significative. Un test adatto per determinare le proprietà di ricristallizzazione è indicato negli esempi. Preferibilmente, gli AFP secondo l'invenzione forniscono dimensioni delle particelle di ghiaccio dopo la ricristallizzazione - preferibilmente misurate secondo gli esempi - minori di 20 pm, maggiormente preferito è l'intervallo di 5-15 ym. Si ritiene che piccole dimensioni dei cristalli di ghiaccio in combinazione con il rapporto di forma specifico sia particolarmente vantaggioso per ottenere le caratteristiche strutturali desiderabili. Preferably those AFPs are chosen which have significant ice recrystallization inhibition properties. A suitable test for determining the recrystallization properties is indicated in the examples. Preferably, the AFPs according to the invention provide dimensions of the ice particles after recrystallization - preferably measured according to the examples - less than 20 µm, the range of 5-15 µm more preferred. It is believed that the small size of the ice crystals in combination with the specific aspect ratio is particularly advantageous for obtaining the desirable structural characteristics.
Una forma di realizzazione molto vantaggiosa dell'invenzione riguarda formulazioni di prodotto che vengono scelte in modo tale che nella preparazione del prodotto si possono utilizzare condizioni di congelato coescente, pur ottenendo ancora il rapporto di forma come descritto sopra. A very advantageous embodiment of the invention relates to product formulations which are selected in such a way that coescent frozen conditions can be used in the preparation of the product, while still obtaining the aspect ratio as described above.
Esempi di tali prodotti alimentari congelati sono: miscele per dolci congelati come ad esempio miscele per gelato e miscele per sorbetto che sono destinate ad essere conservate a temperatura ambiente o di frigorifero. Forme di prodotto adatte sono ad esempio: una miscela in polvere che viene confezionata ad esempio in un sacchetto o in buste. Detta miscela essendo in grado di costituire la base del prodotto alimentare congelato, ad esempio dopo l’aggiunta di acqua e opzionalmente altri ingredienti e - opzionale - aerazione. Examples of such frozen food products are: frozen dessert mixes such as ice cream mixes and sorbet mixes which are intended to be stored at room or refrigerator temperatures. Suitable product forms are for example: a powder mixture which is packaged for example in a bag or envelopes. Said mixture being able to form the basis of the frozen food product, for example after the addition of water and optionally other ingredients and - optionally - aeration.
Un altro esempio di una miscela adatta potrebbe essere una miscela liquida (opzionalmente aerata) che se necessario dopo l'aggiunta di ulteriori componenti e ulteriore aerazione opzionale può essere congelata. Another example of a suitable blend could be a liquid blend (optionally aerated) which can be frozen if necessary after adding additional components and optional further aeration.
Il chiaro vantaggio delle miscele menzionate sopra è che la presenza degli ingredienti AFP consente di congelare le miscele in condizioni coescenti ad esempio in un congelatore da negozio o domestico. The clear advantage of the blends mentioned above is that the presence of the AFP ingredients allows the blends to be frozen under coescent conditions such as in a shop or home freezer.
In modo estremamente conveniente queste miscele vengono confezionate in contenitori chiusi (ad esempio cartoni, sacchetti, scatole, contenitori di plastica, ecc). Per porzioni singole il formato della confezione sari in generale da 10 a 1000 g. Per porzioni multiple formati di confezioni di fino a 500 kg possono essere opportuni. In generale il formato della confezionato sarà compreso fra 10 g e 5000 g. In an extremely convenient way, these mixtures are packaged in closed containers (e.g. cartons, bags, boxes, plastic containers, etc.). For single portions the package size will generally range from 10 to 1000 g. For multiple portions pack sizes of up to 500 kg may be appropriate. In general the format of the packaged will be between 10 g and 5000 g.
Come indicato sopra, i prodotti preferiti in cui si utilizzano gli AFP sono prodotti dolciari congelati come ad esempio gelato o sorbetto. Preferibilmente il livello di AFP è compreso fra 0,0001 e 0,5% in peso rispetto al prodotto finale. Se si utilizzano miscele secche o concentrati, la concentrazione può essere maggiore al fine di garantire che il livello del prodotto congelato finale rientri negli intervalli indicati sopra. As indicated above, the preferred products in which AFPs are used are frozen confectionery products such as ice cream or sorbet. Preferably the AFP level is comprised between 0.0001 and 0.5% by weight with respect to the final product. If using dry or concentrated mixes, the concentration may be higher to ensure that the level of the final frozen product falls within the ranges indicated above.
Sorprendentemente si è trovato che combinazioni dell'invenzione possono contenere quantità molto basse di AFP pur presentando ancora buona qualità. Surprisingly it has been found that combinations of the invention can contain very low amounts of AFP while still having good quality.
Finora, si riteneva in generale che livelli piuttosto elevati di AFP fossero necessari per ottenere un miglioramento ragionevole delle proprietà di ricristallizzazione. Una ragione di ciò è che si riteneva comunemente che gli AFP agiscono su parti significative della superficie dei cristalli di ghiaccio e che quindi dovessero essere presenti a livelli piuttosto elevati, ad esempio 0,01% o più per ottenere un effetto ragionevole. Until now, it was generally believed that rather high levels of AFP were necessary to achieve a reasonable improvement in the recrystallization properties. One reason for this is that it was commonly believed that AFPs act on significant portions of the surface of ice crystals and therefore must be present at quite high levels, such as 0.01% or more to achieve a reasonable effect.
Sorprendentemente si è trovato anche che per prodotti congelati si possono già ottenere proprietà migliorate di ricristallizzazione e tolleranza maggiore alla temperatura se si utilizzano livelli bassi di AFP. Surprisingly it has also been found that for frozen products improved recrystallization properties and higher temperature tolerance can already be achieved if low AFP levels are used.
Si è trovato sorprendentemente che i livelli di AFP possono essere persino di 0,1-50 ppm e tuttavia fornire ancora proprietà di ricristallizzazione adeguate e tolleranza alla temperatura adeguata in prodotti dolciari congelati. Sebbene i Richiedenti non desiderino essere limitati in qualsiasi modo da una teoria, la ragione può consistere nel fatto che l'interazione fra i solidi del dolce congelato e gli AFP fornisce un meccanismo eccellente per inibire la crescita dei cristalli. In modo altamente conveniente, il livello degli AFP è compreso fra 1 e 40 ppm, si preferisce in particolare 2-10 ppm. It has surprisingly been found that AFP levels can be as low as 0.1-50 ppm and yet still provide adequate recrystallization properties and adequate temperature tolerance in frozen confectionery products. Although Applicants do not wish to be limited in any way by a theory, the reason may be that the interaction between the frozen cake solids and the AFPs provides an excellent mechanism for inhibiting crystal growth. In a highly convenient way, the AFP level is between 1 and 40 ppm, in particular 2-10 ppm is preferred.
Per gli scopi dell'invenzione, il termine prodotti dolciari congelati conprende dolci congelati contenenti latte come ad esempio gelato, yogurt congelato, sorbetto, latte congelato (ice milk) e creme congelate, ghiaccioli, granite e purè di frutta congelati. Per alcune applicazioni, si preferisce meno 1'impiego di AFP in prodotti alimentari fermentati congelati For the purposes of the invention, the term frozen confectionery products includes frozen desserts containing milk such as ice cream, frozen yogurt, sorbet, ice milk and frozen creams, popsicles, slushes and frozen fruit purees. For some applications, the use of AFP in frozen fermented food products is less preferred
Preferibilmente, il livello di solidi nel dolce congelato (ad esempio zucchero, grasso, aromatizzante, ecc.) è maggiore del 30% in peso, maggiormente preferito il 40-70% in peso. Preferably, the level of solids in the frozen dessert (for example sugar, fat, flavoring, etc.) is greater than 30% by weight, more preferably 40-70% by weight.
In una forma di realizzazione particolarmente preferita dell'invenzione, si utilizzano formulazioni per dolci congelati duri e croccanti per creare un contrasto di consistenza nel gelato. Preferibilmente, tali gelati contengono come elementi discreti nella loro struttura la composizione contenente AFP secondo l'invenzione. Ad esempio, un nucleo di gelato relativamente duro può essere rivestito con un sottile strato della composizione dell'invenzione così da fornire uno strato esterno relativamente morbido ma fragile che circonda il nucleo di gelato. Un'altra forma di realizzazione potrebbe essere l'incorporazione della formulazione dell'invenzione come inclusioni nei gelati. Una terza forma di realizzazione è di alternare gli strati di gelato con la formulazione dell'invenzione per creare sottili strati morbidi ma fragili alternati con strati di gelato. Esempio Z In a particularly preferred embodiment of the invention, hard and crunchy frozen dessert formulations are used to create a texture contrast in the ice cream. Preferably, such ice creams contain as discrete elements in their structure the composition containing AFP according to the invention. For example, a relatively hard ice cream core can be coated with a thin layer of the composition of the invention to provide a relatively soft but brittle outer layer surrounding the ice cream core. Another embodiment could be the incorporation of the formulation of the invention as inclusions in ice cream. A third embodiment is to alternate the layers of ice cream with the formulation of the invention to create thin soft but fragile layers alternating with layers of ice cream. Example Z
L'isolamento degli AFP da segnale invernale. The isolation of AFPs from winter signal.
La segale invernale (varietà Halo) è stata tagliata in gennaio (la temperatura media in quel mese era 3,5°C che garantiva 1'acclimatamento al freddo appropriato delle piante). Il tessuto è stato rapidamente trasportato in laboratorio per ulteriore manipolazione e lavato accuratamente con acqua per rimuovere sporcizia. The winter rye (Halo variety) was cut in January (the average temperature in that month was 3.5 ° C which ensured acclimatization to the appropriate cold of the plants). The fabric was quickly transported to the laboratory for further handling and thoroughly washed with water to remove dirt.
400 g di pezzettini sono stati omogeneizzati a temperatura ambiente in un miscelatore Waring con 800 g di acqua finché il tessuto fogliare era stato completamente distrutto. Il succo ricco di AFP è stato raccolto mediante filtraggio attraverso quattro strati di mussolina. 400 g of small pieces were homogenized at room temperature in a Waring mixer with 800 g of water until the leaf tissue was completely destroyed. The AFP-rich juice was collected by filtering through four layers of muslin.
Il succo ricco di AFP è stato quindi sottoposto a trattamento in temperatura facendo bollire il succo per 10 minuti. Ciò ha provocato la precipitazione della proteina mentre la AFP da utilizzare secondo l'invenzione restava in soluzione. Il supernatante è stato separato dal precipitato mediante centrifugazione a 15.000 g per 20 minuti o ulteriore filtraggio attraverso mussolina. The AFP-rich juice was then subjected to temperature treatment by boiling the juice for 10 minutes. This resulted in the precipitation of the protein while the AFP to be used according to the invention remained in solution. The supernatant was separated from the precipitate by centrifugation at 15,000 g for 20 minutes or further filtering through muslin.
Le AFP possono essere isolate dal supernatante mediante liofilizzazione. AFPs can be isolated from the supernatant by lyophilization.
Esempio ZI Example ZI
Isolamento delle AFP da erba. Grass AFP isolation.
Tessuto da erba mista (Poa Trivialis, Lolium Perenne, Holcus Lanatus, Bromus Sterilis), è stato tagliato in Gennaio (temperatura media in tale mese 3,5 "C che garantiva 1'acclimatamento al freddo appropriato delle piante). Il tessuto dell'erba è stato rapidamente trasportato in laboratorio per ulteriore manipolazione ed è stato lavato accuratamente con acqua per rimuovere la sporcizia. Mixed grass fabric (Poa Trivialis, Lolium Perenne, Holcus Lanatus, Bromus Sterilis), was cut in January (average temperature in this month 3.5 "C which ensured acclimatization to the appropriate cold of the plants). grass was quickly transported to the laboratory for further handling and was thoroughly washed with water to remove dirt.
500 g di pezzetti di erba sono stati riposti in un forno a microonde da 650 Watt e riscaldati a piena potenza per 5 minuti, per cui la temperatura è stata portata a 85-100°C. I pezzettini di erba sono quindi stati raffreddati a temperatura ambiente. 500 g of grass pieces were placed in a 650 Watt microwave oven and heated at full power for 5 minutes, whereby the temperature was raised to 85-100 ° C. The bits of grass were then cooled to room temperature.
Dopo la fase di riscaldamento, il succo ricco di AFP è stato separato dai pezzettini mediante filtraggio. La massa è stata agitata continuamente per 5 minuti in presenza di uguale volume di acqua e quindi schiacciata attraverso tre strati di mussolina. After the heating phase, the AFP-rich juice was separated from the small pieces by filtering. The mass was stirred continuously for 5 minutes in the presence of an equal volume of water and then squeezed through three layers of muslin.
Il supernatante può essere liofilizzato per isolare la AFP. The supernatant can be lyophilized to isolate AFP.
Esempio III Example III
Una premiscela per preparare gelato è stata realizzata mischiando: A premix to prepare ice cream was made by mixing:
Ingrediente % in peso Ingredient% by weight
Polvere di latte scremato 11,39 Skimmed milk powder 11.39
Saccarosio 3,14 Sucrose 3.14
Maltodestrina (MD40) 4.00 Maltodextrin (MD40) 4.00
Sciroppo di mais 63DE 20,71 Corn syrup 63DE 20.71
Olio di burro 9.00 Butter oil 9.00
Monogliceride (palmitato) 0,45 Monoglyceride (palmitate) 0.45
Vanillina 0,01 Vanillin 0.01
Gomma di semi di carruba 0,07 Carob seed gum 0.07
Gomma guar 0,05 Guar gum 0.05
Carragenano 0,02 Carrageenan 0.02
Cellulosa microcristallina 0,24 Microcrystalline cellulose 0.24
Gelatina 0,14 Gelatin 0.14
AFP (dell'esempio I*) 0,01 o niente (controllo) Acqua il resto AFP (of Example I *) 0.01 or nothing (control) Water the rest
*Nota: AFP viene aggiunto come soluzione concentrata; la percentuale si * Note: AFP is added as a concentrated solution; the percentage yes
riferisce alla quantità di AFP. refers to the amount of AFP.
Questa miscela può essere convenientemente conservata a temperatura This mixture can be conveniently stored at temperature
ambiente ad esempio in un contenitore di plastica. environment for example in a plastic container.
La miscela può essere montata con un convenzionale frullino domestico The mixture can be whipped with a conventional household whisk
fino ad overrun di circa 100%, seguito da congelamento quiescente in un up to about 100% overrun, followed by quiescent freezing in a
freezer domestico. domestic freezer.
Dopo un immagazzinamento di due mesi la composizione secondo l'inven- After two months of storage, the composition according to the invention
zione aveva una consistenza nettamente migliore rispetto al campione di tion had a much better consistency than the sample of
controllo. check.
Esempio IV Example IV
Una premiscela liquida per la preparazione di gelato è stata preparata miscelando A liquid premix for the preparation of ice cream was prepared by mixing
Ingrediente % in peso Ingredient% by weight
Polvere di latte scremato 10,00 Skimmed milk powder 10.00
Saccarosio 13,00 Sucrose 13.00
Maltodestrina (MD40) 4.00 Maltodextrin (MD40) 4.00
Gomma di semi di carruba 0,14 Carob seed gum 0.14
Olio di burro 6.00 Butter oil 6.00
Monogliceride (palmitato) 0,30 Monoglyceride (palmitate) 0.30
Vanillina 0,01 Vanillin 0.01
AFP (dell’esempio II*) 0,01 o niente (controllo) AFP (of example II *) 0.01 or nothing (control)
Acqua il resto Water the rest
‘Nota: AFP viene aggiunto come soluzione concentrata; la percentuale si riferisce alla quantità di AFP. 'Note: AFP is added as a concentrated solution; the percentage refers to the amount of AFP.
Esempio V Example V
Gelati sono stati preparati congelando e aerando fino ad un overrun Ice creams were prepared by freezing and aerating until an overrun
del 70% la formulazione secondo l'Esempio IV: 70% the formulation according to Example IV:
Campioni di entrambi i prodotti sono stati posti all'equilibrio a Samples of both products were placed at equilibrium a
-18°C in un armadietto ambientale Prolan per approssimativamente 12 ore. -18 ° C in a Prolan environmental cabinet for approximately 12 hours.
Vetrini da microscopio sono stati preparati strisciando un sottile strato Microscope slides were prepared by smearing a thin layer
di gelato dal centro dei sottili vetrini di vetro. of ice cream from the center of the thin glass slides.
Ciascun vetrino è stato trasferito ad uno stadio di microscopio con¬ Each slide was transferred to a microscope stage with ¬
trollato in temperatura (a -18°C) ove sono state raccolte immagini di cri¬ checked in temperature (at -18 ° C) where images of cri¬ were collected
stalli di ghiaccio (circa 400 cristalli di ghiaccio singoli) che sono sta¬ ice stalls (about 400 individual ice crystals) which are ¬
ti inviati attraverso una telecamera ad un sistema di memorizzazione e di you are sent through a camera to a storage system and to
analisi delle immagini. image analysis.
Le immagini memorizzate dei cristalli di ghiaccio sono state eviden¬ The stored images of the ice crystals were highlighted
ziate a mano tracciando il perimetro che quindi evidenzia l’intero cri¬ hand-drawn tracing the perimeter which then highlights the entire crì¬
stallo. Le immagini dei cristalli evidenziati sono state quindi misurate utilizzando software di analisi dell'immagine che conta il numero di pixel richiesti per completare la linea retta più lunga (lunghezza), la linea retta più breve (larghezza), il rapporto di forma (lunghezza/larghezza). stall. The images of the highlighted crystals were then measured using image analysis software which counts the number of pixels required to complete the longest straight line (length), shortest straight line (width), aspect ratio (length / length).
Si è controllato il rapporto di forma medio per i cristalli. The average aspect ratio for the crystals was checked.
Per il campione di controllo il rapporto di forma era 1,45. For the control sample the aspect ratio was 1.45.
Per il campione contenente AFP il rapporto di forma era 1,7. For the sample containing AFP the aspect ratio was 1.7.
Esempio VI Example VI
La fragilità del gelato dell'Esempio 2 è stata determinata mediante calcoli sul comportamento da frattura del gelato. Il modulo di Young è stato misurato mediante un test di piega a 3 punti. The fragility of the ice cream of Example 2 was determined by calculations on the fracture behavior of the ice cream. Young's modulus was measured using a 3-point bend test.
Il modulo di Young è stato misurato preparando strisce di gelato, ponendole in equilibrio per 18 ore in un armadio congelatore e trasferendole ad un armadietto in temperatura. Le strisce sono state poste su una maschera di piegatura a 3 punti come descritto nel Handbook of Plastics Test Methods (2a Edizione), ed. R.P. Brown, George Godwin Ltd, 1981. L'analisi dei campioni è stata svolta immediatamente ad una velocità di deformazione di 50 mm/min. Dalla curva forza-deformazione, si è misurata l'inclinazione ovvero il coefficiente angolare iniziale e lo si è utilizzato per calcolare il modulo di Young secondo l'equazione seguente: Young's modulus was measured by preparing strips of ice cream, balancing them for 18 hours in a freezer cabinet and transferring them to a temperature cabinet. The strips were placed on a 3-point bending jig as described in the Handbook of Plastics Test Methods (2nd Edition), ed. R.P. Brown, George Godwin Ltd, 1981. The analysis of the samples was carried out immediately at a strain rate of 50 mm / min. From the force-deformation curve, the inclination or the initial angular coefficient was measured and used to calculate Young's modulus according to the following equation:
- ove L = estensione della trave (110 mm), B = larghezza del campione, w = altezza del campione. Solitamente si sono analizzati otto campioni per fornire un valore medio del modulo di Young. - where L = extension of the beam (110 mm), B = width of the sample, w = height of the sample. Usually eight samples were analyzed to give an average value of Young's modulus.
Utilizzando i calcoli descritti da Williams 6 Cawood in Polymer Testing 915-26 (1990) si può calcolare la durezza alla frattura. Using the calculations described by Williams 6 Cawood in Polymer Testing 915-26 (1990) the fracture hardness can be calculated.
I risultati erano i seguenti: Per il campione di controllo si è calcolato uno spessore di 966 metri come necessario per ottenere uno strato fragile. Per il campione contenente AFP si è già trovata fragilità (comportamento da frattura) ad uno spessore di 3 mi. Ciò mostra chiaramente la migliore fragilità dei prodotti dell'invenzione. I prodotti con AFP erano relativamente duri. The results were as follows: For the control sample a thickness of 966 meters was calculated as necessary to obtain a brittle layer. For the sample containing AFP, brittleness (fracture behavior) was already found at a thickness of 3 ml. This clearly shows the better brittleness of the products of the invention. Products with AFP were relatively tough.
Esempio VII Example VII
Questo esempio descrive una metodologia per scegliere quegli AFP che favoriscono la formazione di forme di cristalli di ghiaccio come preferito nell'invenzione. This example describes a methodology for selecting those AFPs which favor the formation of ice crystal forms as preferred in the invention.
La crescita dei cristalli di ghiaccio in circostanze normali avviene lungo l'asse a del cristallo. Se sono presenti AFP, la crescita cambia. Questa influenza selettiva della forma dei cristalli può essere spiegata dal fatto che gli AFP tendono a legarsi ad alcune parti di cristalli dei ghiaccio e cosi facendo inibiscono la crescita del cristallo di ghiaccio in alcune direzioni. Il legame può avvenire ad esempio in corrispondenza dei piani del prisma (perpendicolare all'asse a) oppure in corrispondenza di piani piramidali (che sporgono da questi piani). The growth of ice crystals under normal circumstances occurs along the a-axis of the crystal. If AFPs are present, growth changes. This selective influence of crystal shape can be explained by the fact that AFPs tend to bind to some parts of the ice crystals and in doing so inhibit the growth of the ice crystal in some directions. The bond can occur, for example, in correspondence with the planes of the prism (perpendicular to axis a) or in correspondence with pyramidal planes (which protrude from these planes).
I richiedenti hanno trovato che gli AFP che favoriscono la formazione di rapporti di forma secondo la presente invenzione possono essere trovati scegliendo ad esempio quegli AFP che tendono a legarsi sul piano del prisma. La metodologia per scegliere questi AFP a legame specifico può essere una qualsiasi metodologia adatta. Un test adatto impiega il cosiddetto esperimento di crescita "dell'emisfera di cristallo di ghiaccio singolo che si basa sulla tecnica descritta in Knight C.A., C.C. Cheng e A.L. DeVries, Biophys. J. 59 (1991) 409-418, Adsorption of a-helical antifreeze peptide s on speci fic ice crystal surface planes. Applicants have found that AFPs which favor the formation of shape ratios according to the present invention can be found by selecting for example those AFPs which tend to bond in the plane of the prism. The methodology for selecting these specific binding AFPs can be any suitable methodology. A suitable test employs the so-called single ice crystal hemisphere growth experiment which is based on the technique described in Knight C.A., C.C. Cheng and A.L. DeVries, Biophys. J. 59 (1991) 409-418, Adsorption of a- helical antifreeze peptide s on speci fic ice crystal surface planes.
Un beaker di plastica ben isolato da 5 litri è stato riempito con acqua deionizzata e lo si è posto in un armadio a temperatura controllata a -1°C. Lo si è quindi lasciato congelare lentamente alla sommità. Dopo due giorni un singolo cristallo di ghiaccio di approssimativamente 4 cm di spessore copriva il beaker. L'orientamento cristallografico di questo cristallo è stato determinato utilizzato procedimenti di diffrazione dei raggi X per cristallo singolo. Cubetti di ghiaccio di approssimativamente 2 cm di dimensione sono stati tagliati dal cristallo singolo grande, in modo tale che una superficie fosse parallela al piano del prisma e un'altra parallela al piano basale. Si sono prodotti singoli cristalli di ghiaccio così orientati. A well insulated 5 liter plastic beaker was filled with deionized water and placed in a temperature controlled cabinet at -1 ° C. It was then left to freeze slowly at the top. After two days a single ice crystal approximately 4 cm thick covered the beaker. The crystallographic orientation of this crystal was determined using single crystal X-ray diffraction procedures. Ice cubes approximately 2 cm in size were cut from the large single crystal such that one surface was parallel to the prism plane and another parallel to the basal plane. Thus oriented single ice crystals were produced.
Si è utilizzata un'apparecchiatura che consiste di un dito freddo di ottone (diametro di approssimativamente 1 cm) su cui si è congelato un cristallo a semenza orientato. La semenza è stata dapprima cavata in modo tale che il cristallo di semenza si adattasse attorno ad essa. Refrigerante è stato quindi fatto circolare attraverso il dito e la semenza si è congelata rapidamente ad esso. An apparatus consisting of a cold brass finger (diameter of approximately 1 cm) was used on which an oriented seed crystal was frozen. The seed was first quarried in such a way that the seed crystal would fit around it. Coolant was then circulated through the finger and the seed froze quickly to it.
Il dito con il cristallo di semenza è stato quindi immerso in un beaker da 100 mi isolato contenente una soluzione di materiale che veniva investigato. La temperatura iniziale della soluzione era la temperatura ambiente (circa 18°C), e l'unico raffreddamento è stato fornito dal dito freddo. Inizialmente il cristallo di semenza si è sciolto parzialmente ma quindi è cresciuto in un singolo cristallo emisferico. Dopo diverse ore (6-8) si era formata un'emisfera con diametro di 5-7 cm. The finger with the seed crystal was then immersed in an isolated 100 ml beaker containing a solution of the material being investigated. The initial solution temperature was room temperature (about 18 ° C), and the only cooling was provided by the cold finger. Initially the seed crystal partially melted but then grew into a single hemispherical crystal. After several hours (6-8) a hemisphere with a diameter of 5-7 cm had formed.
L'esperimento è stato svolto con varie soluzioni di AFP. Le soluzioni di AFP utilizzate avevano una concentrazione di AFP di 10-3 mg/ml. The experiment was carried out with various AFP solutions. The AFP solutions used had an AFP concentration of 10-3 mg / ml.
L'emisfera è stata quindi rimossa dal dito freddo e portata ad un armadietto a temperatura controllata a -15°C. La superficie è stata rigata ed è stato lasciato nell'armadietto almeno durante la notte (16 ore o più). Aria è stata fatta circolare attraverso 1'armadietto mediante una ventola integrale. Durante questo tempo si è verificata evaporazione degli strati superficiali del ghiaccio. La superficie dell'emisiera di ghiaccio quindi giungeva ad avere una superficie liscia come uno specchio. Tuttavia, per un'emisfera contenente A5P si osservano sulla superficie chiazze grossolane. Queste corrispondono alle chiazze in cui l'AFP si era legato sulla superficie dell'emisfera. Grandi molecole di AFP impediscono che le molecole di ghiaccio evaporino e quindi un grossolano intreccio di molecole di AFP si accumula sulla superficie in corrispondenza delle superfici ove si verifica il legame preferenziale al ghiaccio. Poiché l'orientamento dell'emisfera è noto, e si può misurare la distanza angolare fra tali chiazze grossolane e le direzioni basale e del prisma mediante un goniometro ottico, si può facilmente determinare la natura del piano di legame. The hemisphere was then removed from the cold finger and taken to a temperature-controlled cabinet at -15 ° C. The surface was scratched and was left in the locker at least overnight (16 hours or more). Air was circulated through the cabinet by an integral fan. During this time there was evaporation of the surface layers of the ice. The surface of the hemisiera of ice then came to have a smooth surface like a mirror. However, for a hemisphere containing A5P, coarse patches are observed on the surface. These correspond to the patches where AFP had bonded on the surface of the hemisphere. Large AFP molecules prevent the ice molecules from evaporating and therefore a coarse intertwining of AFP molecules accumulates on the surface at the surfaces where the preferential bond to ice occurs. Since the orientation of the hemisphere is known, and the angular distance between such coarse patches and the basal and prism directions can be measured by an optical goniometer, the nature of the bond plane can be easily determined.
Questo test può essere utilizzato per scegliere quegli AFP che tendono a legarsi ai piani piramidali. Ad esempio, gli AFP dall'Esempio le II tendono a legarsi ai piani piramidali. Inoltre un grande numero di altri estratti da piante tendono a dare origine a legami piramidali. This test can be used to choose those AFPs that tend to bind to the pyramid planes. For example, AFPs from Example 1 and II tend to tie into pyramid planes. Furthermore, a large number of other plant extracts tend to give rise to pyramidal bonds.
Rientra nella capacità dell'esperto del ramo utilizzare l'analisi di cui sopra per determinare questi AFP che tendono a favorire la formazione di elevati rapporti di forma dei cristalli di ghiaccio. Per verificare se sono adatti in prodotti congelati dell'invenzione, si può realizzare l'effettivo prodotto e si può determinare il rapporto di forma dei cristalli nel prodotto. It is within the skill of the skilled person to use the above analysis to determine these AFPs which tend to favor the formation of high ice crystal aspect ratios. To check whether they are suitable in frozen products of the invention, the actual product can be made and the aspect ratio of the crystals in the product can be determined.
Esempio Vili Example VIII
Test per determinare la dimensione di cristalli di ghiaccio dopo ricristallizzazione. Test to determine the size of ice crystals after recrystallization.
Un campione di soluzione contenente AFP in acqua è stato regolato con un livello di saccarosio del 30% in peso (se il livello di partenza del campione è maggiore del 30% questo può essere effettuato mediante diluizione, se il livello di partenza è inferiore si aggiunge saccarosio fino al livello del 30%). A sample of solution containing AFP in water has been adjusted with a sucrose level of 30% by weight (if the starting level of the sample is greater than 30% this can be done by dilution, if the starting level is lower it is added sucrose up to the 30% level).
In generale, la prova può essere applicata a qualsiasi composizione adatta comprendente AFP e acqua. In generale, il livello di AFP in una tale composizione di prova non è particolarmente critico e può essere compresa ad esempio fra 0,0001 e lo 0,5% in peso, maggiormente preferito fra lo 0,0005 e lo 0,1% in peso, altamente preferito è fra lo 0,001 e lo 0,05% in peso, ad esempio 0,01% in peso. In general, the test can be applied to any suitable composition including AFP and water. In general, the level of AFP in such a test composition is not particularly critical and can be for example between 0.0001 and 0.5% by weight, more preferably between 0.0005 and 0.1% by weight. weight, highly preferred is between 0.001 and 0.05% by weight, for example 0.01% by weight.
Una goccia da 3 pL del campione è stata posta su un vetrino coprioggetto da 22 mm. Un vetrino coprioggetto di diametro da 16 mm è stato quindi posto in cima e si è posto un peso da 200 g sul campione per garantire uno spessore uniforme del vetrino. I bordi del vetrino coprioggetto sono stati sigillati con smalta per le unghie trasparente. A 3 pL drop of the sample was placed on a 22 mm coverslip. A 16mm diameter coverslip was then placed on top and a 200g weight placed on the specimen to ensure uniform slide thickness. The edges of the coverslip were sealed with clear nail polish.
Il vetrino è stato posto su uno stadio di microscopio a temperatura controllata Linkham THM 600. Lo stadio è stato raffreddato rapidamente (50°C al minuto) fino a -40“C per produrre una grande popolazione di piccoli cristalli. La temperatura dello stadio è stata quindi aumentata rapidamente (50°C al minuto) fino a -6°C e tenuta a tale temperatura. The slide was placed on a Linkham THM 600 temperature controlled microscope stage. The stage was cooled rapidly (50 ° C per minute) down to -40 ° C to produce a large population of small crystals. The stage temperature was then rapidly increased (50 ° C per minute) down to -6 ° C and held at that temperature.
La fase di ghiaccio è stata osservata a -6°C utilizzando un microscopio Leica Aristoplan. Condizioni di luce polarizzata in congiunzione con una piastra lambda sono state utilizzate per aumentare il contrasto dei cristalli di ghiaccio. Lo stato della fase di ghiaccio {dimensione dei cristalli di ghiaccio) è stata registrata mediante fotomicrografia a 35 mm a T=0 e T=1 ora. Una dimensione di particelle medie (determinazione visiva, media numerica) minore di 20 pm, maggiormente preferito fra 5 e 15 pm indica gli AFP preferiti da utilizzare in prodotti secondo l'invenzione. The ice phase was observed at -6 ° C using a Leica Aristoplan microscope. Polarized light conditions in conjunction with a lambda plate were used to increase the contrast of the ice crystals. The state of the ice phase (size of the ice crystals) was recorded by photomicrography at 35 mm at T = 0 and T = 1 hour. An average particle size (visual determination, numerical average) of less than 20 µm, more preferred between 5 and 15 µm indicates the preferred AFPs to be used in products according to the invention.
Claims (9)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP96305499 | 1996-07-26 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ITMI971754A1 true ITMI971754A1 (en) | 1999-01-23 |
IT1293769B1 IT1293769B1 (en) | 1999-03-10 |
Family
ID=8225026
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
IT97MI001754A IT1293769B1 (en) | 1996-07-26 | 1997-07-23 | PROCEDURE FOR ISOLATING ANTIFREEZE PROTEINS FROM CONFECTIONERY PRODUCTS AND FROZEN CONFECTIONERY PRODUCT CONTAINING PROTEIN FOR |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
AR (1) | AR013313A1 (en) |
DE (1) | DE19732132A1 (en) |
FR (1) | FR2751514B1 (en) |
GB (1) | GB2315662A (en) |
IT (1) | IT1293769B1 (en) |
PA (1) | PA8434501A1 (en) |
UY (1) | UY24643A1 (en) |
ZA (1) | ZA976472B (en) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB2315661B (en) * | 1996-07-26 | 2000-05-03 | Unilever Plc | Frozen food product |
GB9801410D0 (en) | 1998-01-22 | 1998-03-18 | Unilever Plc | Frozen food product |
DE60034970T2 (en) * | 1999-03-10 | 2008-02-21 | Unilever N.V. | Ice cream containing antifreeze protein |
WO2015047200A1 (en) * | 2013-09-25 | 2015-04-02 | Abu-Ali Jareer Mansour | Method to produce moldable and customizable ice creams |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3897571A (en) * | 1972-12-04 | 1975-07-29 | Gen Foods Corp | Process for producing slush beverage concentrate and product |
US4297379A (en) * | 1980-03-27 | 1981-10-27 | General Foods Corporation | Frozen aerated ready-to-eat gelatin composition |
JPS5849145B2 (en) * | 1980-05-07 | 1983-11-02 | 森永製菓株式会社 | Manufacturing method of granular frozen confectionery |
US4500553A (en) * | 1983-08-01 | 1985-02-19 | General Foods Corporation | Method of producing a frozen dual-textured confection |
JPS60226588A (en) * | 1984-04-24 | 1985-11-11 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | Enzyme-modified protein-based antifreezing agent |
ATE165208T1 (en) * | 1990-01-17 | 1998-05-15 | Univ California | COMPOSITION FOR IMPROVING THE LIFE SUPPORT OF BIOLOGICAL MATERIALS |
DK0589928T3 (en) * | 1991-06-13 | 2004-10-25 | Microstar Biotech Inc | Cold tolerance in plants |
JPH06189686A (en) * | 1992-12-26 | 1994-07-12 | Taiyo Kagaku Co Ltd | Preparation of ice cream |
ZA95746B (en) * | 1994-02-04 | 1996-07-31 | Unilever Plc | Ice confections |
US5676985A (en) * | 1994-10-12 | 1997-10-14 | Hsc Research And Development Limited Partnership | Antifreeze polypeptide-expressing microorganisms useful in fermentation and freezing of foods |
TR199501501A2 (en) * | 1994-11-30 | 1996-07-21 | Unilever Nv | Preparation of the sugars. |
US5620732A (en) * | 1995-06-07 | 1997-04-15 | The Pillsbury Company | Method of making ice cream |
PL324437A1 (en) * | 1995-07-05 | 1998-05-25 | Unilever Nv | Expression of a peptide preventing freezee of oceanic fishes in an organism suitable for use in food industry and application thereof in articles of food |
-
1997
- 1997-07-08 GB GB9714413A patent/GB2315662A/en not_active Withdrawn
- 1997-07-21 PA PA19978434501A patent/PA8434501A1/en unknown
- 1997-07-22 ZA ZA976472A patent/ZA976472B/en unknown
- 1997-07-23 IT IT97MI001754A patent/IT1293769B1/en active IP Right Grant
- 1997-07-24 FR FR9709414A patent/FR2751514B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-25 DE DE19732132A patent/DE19732132A1/en not_active Ceased
- 1997-07-25 AR ARP970103373A patent/AR013313A1/en unknown
- 1997-07-25 UY UY24643A patent/UY24643A1/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
PA8434501A1 (en) | 2000-05-24 |
GB2315662A (en) | 1998-02-11 |
FR2751514A1 (en) | 1998-01-30 |
AR013313A1 (en) | 2000-12-27 |
GB9714413D0 (en) | 1997-09-10 |
FR2751514B1 (en) | 1999-01-29 |
DE19732132A1 (en) | 1998-01-29 |
UY24643A1 (en) | 1997-09-16 |
IT1293769B1 (en) | 1999-03-10 |
ZA976472B (en) | 1999-01-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ITMI971753A1 (en) | PROCEDURE FOR ISOLATING ANTIFREEZE PROTEINS FROM FOOD PRODUCTS AND FROZEN FOOD PRODUCT CONTAINING PROTEIN FOR | |
JP2000515751A (en) | Frozen food containing thermostable antifreeze protein | |
EP0966206B1 (en) | Frozen food product containing antifreeze peptides | |
JP4338055B2 (en) | Frozen food containing antifreeze peptides | |
ITMI971754A1 (en) | PROCEDURE FOR ISOLATING ANTIFREEZE PROTEINS FROM CONFECTIONERY PRODUCTS AND FROZEN CONFECTIONERY PRODUCT CONTAINING PROTEIN FOR | |
AU720354B2 (en) | Frozen food with antifreeze peptides | |
CZ324999A3 (en) | Process for preparing frozen foodstuff product | |
MXPA01009071A (en) | Ice confection | |
AU2521200A (en) | Frozen food product | |
MXPA01009072A (en) | Ice confection |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
0001 | Granted |