IT202100029738A1 - Peptide ad attività antimicotica e antibatterica - Google Patents
Peptide ad attività antimicotica e antibatterica Download PDFInfo
- Publication number
- IT202100029738A1 IT202100029738A1 IT102021000029738A IT202100029738A IT202100029738A1 IT 202100029738 A1 IT202100029738 A1 IT 202100029738A1 IT 102021000029738 A IT102021000029738 A IT 102021000029738A IT 202100029738 A IT202100029738 A IT 202100029738A IT 202100029738 A1 IT202100029738 A1 IT 202100029738A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- phe
- seq
- leu
- ile
- dleu
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 75
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 title description 20
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 title description 16
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 41
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims description 33
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 25
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 10
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 claims description 9
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 9
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 7
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims description 7
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 6
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 claims description 6
- 125000003301 D-leucyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CC(C)C 0.000 claims description 5
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine group Chemical group N[C@H](CCCCN)C(=O)O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 5
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 claims description 5
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000002038 D-arginyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CCCNC(=N)N 0.000 claims description 3
- 125000000249 D-isoleucyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)[C@@H](CC)C 0.000 claims description 3
- 125000000180 D-prolyl group Chemical group N1[C@@H](C(=O)*)CCC1 0.000 claims description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 3
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 claims 1
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 9
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 9
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 8
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 7
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 230000003214 anti-biofilm Effects 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000032770 biofilm formation Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000002371 mycocidal effect Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000012449 sabouraud dextrose agar Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- -1 DNle Chemical compound 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 2
- 241000270940 Rana temporaria Species 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000001032 anti-candidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000000039 congener Substances 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- IDSXLJLXYMLSJM-UHFFFAOYSA-N morpholine;propane-1-sulfonic acid Chemical compound C1COCCN1.CCCS(O)(=O)=O IDSXLJLXYMLSJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 2-[(2r)-butan-2-yl]-4-[4-[4-[4-[[(2r,4s)-2-(2,4-dichlorophenyl)-2-(1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy]phenyl]piperazin-1-yl]phenyl]-1,2,4-triazol-3-one Chemical compound O=C1N([C@H](C)CC)N=CN1C1=CC=C(N2CCN(CC2)C=2C=CC(OC[C@@H]3O[C@](CN4N=CN=C4)(OC3)C=3C(=CC(Cl)=CC=3)Cl)=CC=2)C=C1 VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 0.000 description 1
- 125000003345 AMP group Chemical group 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- KLSJWNVTNUYHDU-UHFFFAOYSA-N Amitrole Chemical group NC1=NC=NN1 KLSJWNVTNUYHDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- BYBLEWFAAKGYCD-UHFFFAOYSA-N Miconazole Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1COC(C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)CN1C=NC=C1 BYBLEWFAAKGYCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029803 Nosocomial infection Diseases 0.000 description 1
- 208000007027 Oral Candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 206010066901 Treatment failure Diseases 0.000 description 1
- 241000287411 Turdidae Species 0.000 description 1
- 201000007096 Vulvovaginal Candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 230000002927 anti-mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 150000007980 azole derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000003851 azoles Chemical class 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002815 broth microdilution Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960004022 clotrimazole Drugs 0.000 description 1
- VNFPBHJOKIVQEB-UHFFFAOYSA-N clotrimazole Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(N1C=NC=C1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VNFPBHJOKIVQEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 229920006227 ethylene-grafted-maleic anhydride Polymers 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 229960004130 itraconazole Drugs 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000006680 metabolic alteration Effects 0.000 description 1
- 229960002509 miconazole Drugs 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 238000007797 non-conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000008261 resistance mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/463—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from amphibians
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
PEPTIDE AD ATTIVIT? ANTIMICOTICA E ANTIBATTERICA
DESCRIZIONE
CAMPO DELL?INVENZIONE
L?invenzione concerne peptidi aventi una lunghezza di 14 amminoacidi e la sequenza di SEQ ID NO:1, loro sali, e composizioni che li comprendono.
Vengono descritti gli impieghi dei peptidi e delle composizioni che li comprendono, in particolare composizioni e peptidi per l?uso come medicamento, per l?uso nel trattamento delle infezioni fungine, e per l?uso come agente antibatterico.
Vengono altres? descritti gli usi dei peptidi della presente invenzione e composizioni che li comprendono per prevenire il deterioramento di un prodotto alimentare da parte di un microorganismo.
STATO DELLA TECNICA
Molti funghi vivono sul corpo umano, incluso il genere di lieviti noto come Candida, che si trova tipicamente in piccole quantit? nella bocca, nell'intestino e sulla pelle. A livelli normali, il fungo non ? problematico, tuttavia, quando la Candida inizia a crescere in modo incontrollato, pu? causare un'infezione nota come candidosi. Queste infezioni, causate nella gran parte dei casi dalla specie Candida albicans, determinano lesioni con prurito e irritazione a livello delle mucose. In genere le candidosi nella maggior parte dei casi sono causate da un?alterazione del microambiente dovuta come, ad esempio, da una terapia antibiotica o cortisonica prolungata, da un uso inadeguato di detergenti intimi, e da situazioni di stress o alterazioni metaboliche. In tali condizioni, la candida pu? crescere in maniera incontrollata, formando striature biancastre, pruriginose a livello della bocca (il cosiddetto mughetto), della vagina (candidosi vaginale), del glande (molto raramente) o dell?apparato intestinale.
Ad oggi, la Candida albicans rappresenta il quarto agente di infezione nosocomiale ed ? associato ad una mortalit? del 30-50%. La candidosi pi? frequente ? quella che interessa l?apparato sessuale esterno delle donne; infatti, pi? del 75% delle donne sperimenta un'infezione da candida almeno una volta nella propria vita, e il 40-50% di esse va incontro a una recidiva.
Il trattamento delle infezioni da Candida prevede la somministrazione di farmaci ad azione antifungina. Generalmente, si utilizzano antimicotici di tipo azolico.
Purtroppo, l?uso continuo dei farmaci convenzionali, attualmente presenti in commercio, (e.g. miconazolo, clotrimazolo, itraconazolo, ecc.) ha portato ad una perdita di efficacia per l?insorgenza del fenomeno della farmaco-resistenza da parte del fungo e dei suoi congeneri.
L?unica speranza nel superare la farmaco-resistenza sta nella ricerca di nuovi farmaci, ma anche nel sensibilizzare la popolazione verso un uso pi? accurato degli antibiotici e antimicotici, spesso presenti nelle nostre case e assunti senza una comune visita medica. Per questo motivo, negli ultimi anni, si ? presentata sempre pi? l?esigenza di trovare nuove e pi? efficaci strategie terapeutiche. In particolare, la ricerca di nuovi farmaci ad attivit? antifungina si prefigge come obiettivo l?individuazione di molecole con una maggiore selettivit?, minore citotossicit? e minore possibilit? di sviluppare fenomeni di resistenza.
Scopo della presente invenzione ? pertanto quello di fornire nuove entit? molecolari ad attivit? antifungina, utili ad offrire il trattamento antimicotico contro la Candida albicans, che non presentino gli svantaggi sopra rilevati per i composti di tipo azolico noti per la medesima applicazione.
SOMMARIO DELL?INVENZIONE
L?identificazione di nuovi agenti terapeutici in grado di ostacolare la sempre pi? emergente resistenza batterica ed antifungina ? considerata una priorit? assoluta per far fronte a potenziali pandemie batteriche e fungine.
L?oggetto della presente invenzione si basa sullo sviluppo di peptidi, che hanno mostrato una forte attivit? antifungina, ed in particolare candidacida, con concomitante attivit? antibatterica. L?idea di promuovere lo sviluppo di nuovi agenti antifungini ? partita da un?accurata indagine sia in ambito farmaceutico sia clinico volta a creare un?alternativa per la cura delle varie forme di candidosi.
L?invenzione pertanto concerne peptidi o loro sali, aventi la sequenza amminoacidica rappresentata dalla SEQ ID NO:1:
A-Waa-Phe-Val-Xaa-Trp- Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-Yaa-Zaa-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO:1)
in cui:
A ? scelto dal gruppo consistente in: H, acetile e propile
Waa ? scelto dal gruppo consistente in: Nle, DNle, Leu, DLeu, Ile, DIle;
Xaa ? scelto dal gruppo consistente in: Pro, DPro, Hyp (idrossiprolina) e DHyp; Yaa ? scelto dal gruppo consistente in: Lys, DLys e Gly;
Zaa ? scelto dal gruppo consistente in: Arg e DArg.
I peptidi secondo la presente invenzione hanno mostrato possedere un?attivit? antimitotica e antibatterica. Tali peptidi sono in grado di modulare le infezioni locali dovute a ceppi fungini di Candida albicans e congeneri su cui il peptide ? risultato particolarmente attivo.
Sotto un secondo aspetto, viene descritta una composizione farmaceutica comprendente uno o pi? peptidi della seguente invenzione, uguali o diversi tra loro, ed eccipienti farmacologicamente accettabili.
Sotto un terzo aspetto, viene descritta la composizione o i peptidi secondo la presente invenzione, per l?uso come medicamento.
Sotto un quarto aspetto, viene descritta la composizione o i peptidi secondo la presente invenzione, per l?uso nel trattamento delle infezioni fungine.
Sotto un quinto aspetto, viene descritto l?uso della composizione o dei peptidi secondo la presente invenzione, per prevenire il deterioramento di un prodotto alimentare da parte di un microorganismo, detta composizione comprendente un veicolo accettabile in campo alimentare.
Sotto un sesto aspetto, viene descritta la composizione o i peptidi secondo la presente invenzione, per l?uso come agente antibatterico.
Le rivendicazioni dipendenti descrivono forme di realizzazione particolari dell?invenzione.
DESCRIZIONE DELLE FIGURE
L?invenzione verr? ora descritta in dettaglio e facendo riferimento alle Figure allegate in cui:
la Figura 1 riporta il grafico dei risultati del test in vitro della resistenza acquisita di RB55 (SEQ ID NO:2) alla concentrazione di sub MIC (7?M) su cellule di Candida albicans ATCC 90028;
la Figura 2 riporta il grafico dei risultati del test di inibizione e attivit? anti-biofilm del peptide RB55 (SEQ ID NO:2) alla concentrazione di 5 ?M su cellule di Candida albicans ATCC 90028 e Candida albicans ATCC 10231; e
la Figura 3. riporta il grafico dei risultati delle prove di stabilit? in siero umano in cui si vede la percentuale di peptide RB55 (SEQ ID NO:2) intatto dopo il trattamento con il 90% di siero umano a tempi prestabiliti di 0, 15, 45, 75 e 120 minuti.
DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL?INVENZIONE
L?invenzione pertanto concerne peptidi o loro sali, aventi la sequenza amminoacidica rappresentata dalla SEQ ID NO:1:
A-Waa-Phe-Val-Xaa-Trp- Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-Yaa-Zaa-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO:1)
in cui:
A ? scelto dal gruppo consistente in: H, acetile e propile
Waa ? scelto dal gruppo consistente in: Nle, DNle, Leu, DLeu, Ile, DIle;
Xaa ? scelto dal gruppo consistente in: Pro, DPro, Hyp (idrossiprolina) e DHyp; Yaa ? scelto dal gruppo consistente in: Lys, DLys e Gly;
Zaa ? scelto dal gruppo consistente in: Arg e DArg.
Nell?ambito della nostra ricerca scientifica mirata ad individuare nuove entit? molecolari ad attivit? antifungina ed antibatterica, sono stati individuati nuovi peptidi, derivanti da un peptide di origine naturale isolato dalle ghiandole dermali della Rana Temporaria.
I peptidi di SEQ ID NO:1-8 riportano gli amminoacidi con il codice a tre lettere, ed in particolare, come esempio, ?Phe? corrisponde all?amminoacido fenilalanina mentre ?Val? corrisponde all?amminoacido valina. Nella presente invenzione l'amminoacido "DLys" corrisponde al D stereoisomero dell'amminoacido lisina e "DLeu" corrisponde alla forma D steroisomero dell'amminoacido leucina. I peptidi di SEQ ID NO: 1 possono essere modificati in modo che il "DLys" possa essere sostituito da "Lys" e il "DLeu" possa essere sostituito da "Leu" e analoghi corrispondenti. ?Nle? corrisponde alla norleucina e "DNle" corrisponde alla forma D steroisomero dell'amminoacido norleucina, mentre ?Hyp? corrisponde alla idrossiprolina e ?DHyp? alla forma D steroisomero dell'amminoacido idrossiprolina.
Varie forme di realizzazione e aspetti della presente invenzione come qui delineato e come rivendicato nella sezione seguente trovano supporto sperimentale nei seguenti esempi.
Le temporine, isolate per la prima volta dalle secrezioni cutanee della rana rossa Rana Temporaria, sono una famiglia abbastanza ampia di peptidi antimicrobici (Antimicrobial Peptides, AMPs) in grado di perturbare e distruggere la membrana di procarioti e quella fungina senza arrecare tossicit? verso le cellule eucariote umane. Dal punto di vista strutturale, i peptidi sono di dimensioni contenute (caratterizzati da 10-14 amminoacidi) e sono caratterizzati da un C-terminale amidato, una bassa carica positiva dovuta alla presenza di solo 1 o 2 residui basici in tutta la loro sequenza e adottano una conformazione preferenziale anfipatica ad ?-elica in ambiente idrofobo.
Preferibilmente il peptide secondo la presente invenzione ? scelto dal gruppo consistente in:
H-Nle-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 2) indicato con la sigla RB55;
Ac-Nle-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 3);
H-Leu-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 4);
Ac-Leu-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 5);
H-Ile-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 6);
Ac-Ile-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 7); e
H-Nle-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-Gly-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 8);
In una forma ancora pi? preferita, detto peptide ? scelto dal gruppo consistente in: H-Nle-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 2); e
H-Nle-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-Gly-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 8).
Questi nuovi peptidi si sono dimostrati fortemente efficaci nell?inibire la crescita della Candida albicans ed in particolare il peptide di SEQ ID NO: 2 (RB55) ? attivo ad una concentrazione minima inibente di 12 ?M. A tale concentrazione, il rapporto rischio/beneficio ? molto alto poich? non ? risultata citotossica su cellule di cheratinociti umani.
Sotto un secondo aspetto, viene descritta una composizione farmaceutica comprendente uno o pi? peptidi descritti nella presente invenzione, uguali o diversi tra loro, ed eccipienti farmacologicamente accettabili.
I peptidi di SEQ ID NO: 1-8 sorprendentemente presentano un?attivit? prettamente antifungina con una componente antibatterica in grado di fronteggiare le infezioni fungine.
Sotto un terzo aspetto, viene descritta la composizione o i peptidi secondo la presente invenzione, per l?uso come medicamento.
Sotto un quarto aspetto, viene descritta la composizione o i peptidi secondo la presente invenzione, per l?uso nel trattamento delle infezioni fungine.
In una forma di realizzazione preferita, la presente invenzione descrive l?uso dei peptidi di SEQ ID NO:1-8 e della composizione che li contiene nel trattamento delle infezioni fungine, in particolare per trattare funghi che appartengono al genere Candida, pi? preferibilmente per funghi che appartengono alla specie Candida albicans.
In particolare, i peptidi di SEQ ID NO:1-8 ad attivit? anticandida, ed in particolare il peptide di SEQ ID NO:2 (RB55), sono innovativi non soltanto perch? sono efficaci ad eradicare la Candida albicans, ma anche perch? sono dotati di una potente attivit? nei confronti di diversi ceppi batterici, come Escherichia coli. Inoltre, l?assenza di tossicit? nel range terapeutico considerato, ? considerata una condizione necessaria per un uso a scopo terapeutico, in particolare, per un?applicazione ad uso topico.
Sorprendentemente i peptidi della presente invenzione, a differenza dei farmaci antifungini convenzionali attualmente in commercio, non provocano l?insorgenza di meccanismi di resistenza da parte del fungo, aspetto sempre pi? presente nei derivati azolici. Infatti, donne che soffrono di candidosi, dopo un uso prolungato dei farmaci convenzionali (per esempio, azolici) non hanno pi? mostrato benefici nell?eradicazione dell?infezione.
? interessante sottolineare che da studi effettuati nei nostri laboratori, dopo 30 giorni di trattamento, il peptide di SEQ ID NO:2 (RB55), utilizzato a concentrazioni sub-MIC,non ha mai mostrato di indurre resistenza verso il ceppo di Candida. Queste caratteristiche rendono unica la molecola sia sotto il profilo farmacologico che quello tossicologico-clinico. Inoltre, considerate le dimensioni ridotte del peptide di SEQ ID NO:2 (RB55) il costo di produzione per la preparazione in modalit? GMP da utilizzare nelle varie formulazioni ? estremamente contenuto.
Sotto un quinto aspetto, viene descritto l?uso della composizione o dei peptidi secondo la presente invenzione, per prevenire il deterioramento di un prodotto alimentare da parte di un microorganismo, detta composizione comprendente un veicolo accettabile in campo alimentare.
Ad oggi per il trasporto dei prodotti agroalimentari vengono adoperati sistemi non efficienti che non garantiscono la decomposizione durante il trasporto con ripercussioni economiche per il settore anche di notevole entit? soprattutto in periodi estivi. Inoltre, per specifici prodotti agroalimentari come ad esempio la frutta, si adoperano metodi non proprio convenzionali, come ad esempio, quello di trattare la buccia con cera naturale o paraffina per garantirne lucentezza e visibilit? del prodotto. L?oggetto del presente brevetto risiede nell?utilizzo di peptidi antimicrobici di piccole dimensioni e con ampio spettro di attivit? non limitato ai batteri ma anche verso lieviti e funghi, come agenti preservanti e conservanti di prodotti agroalimentari sia freschi che essiccati.
Vantaggiosamente, in una forma di realizzazione la composizione dell?invenzione comprende un peptide antimicrobico per prevenire il deterioramento di un prodotto alimentare da parte di un microorganismo, in cui detto microorganismo ? un batterio o un fungo.
I presenti peptidi antimicrobici possono essere utilizzati sotto forma di crema oppure gel per applicazioni locali. Alternativamente, in forma di nebulizzato alla concentrazione battericida o batteriostatica e rimossi preventivamente primo dell?utilizzo dal prodotto agroalimentare mediante semplice lavaggio con acqua essendo molto solubili in tale mezzo liquido.
Sotto un ulteriore aspetto, viene descritta la composizione dei peptidi secondo la presente invenzione, per l?uso come agente antibatterico, preferibilmente l?uso ? nei confronti di batteri della specie Escherichia coli.
Si riportano di seguito Esempi di realizzazione della presente invenzione forniti a titolo illustrativo.
ESEMPI
Esempio 1: Sintesi dei peptidi di sequenza SEQ ID NO:1-6
La sintesi dei peptidi [come, per esempio, per il peptide di SEQ ID NO:2: H-Nle-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (MW=1793.27)] ? stata effettuata in modo graduale tramite la strategia peptidica convenzionale in fase solida (Solid-phase Peptide Synthesis, SPPS).
In breve, ogni peptide ? stato costruito sulla resina ammidica di tipo Rink (0,1 mmol da 0,64 mmol /g di sostituzione) come supporto solido, utilizzando la strategia ortogonale Fmoc/tBu. Infine, i peptidi sono stati purificati e caratterizzati mediante RP-HPLC utilizzando gradienti lineari di MeCN (0,1% TFA) in acqua (0,1% TFA), da 10 a 90% in 20 minuti, e caratterizzati mediante spettrometria di massa Maldi-TOF.
Esempio 2: Determinazione della concentrazione minima inibente (MIC) e concentrazione minima fungicida (MFC).
L'attivit? antimicotica del peptide RB55 (SEQ ID NO:2) ? stata determinata utilizzando un metodo standardizzato di microdiluizione in brodo di coltura (documento M27-A2) del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) [(Wayne, P. National committee for clinical laboratory standards. (2002). Performance standards for antimicrobial disc susceptibility testing M27-A2)]. In breve, le sospensioni cellulari di C. albicans ATCC 90028 e C. albicans ATCC 10231 sono state preparate a 3 ? 10<3 >CFU/ml utilizzando un mezzo RPMI 1640 tamponato con acido morfolin-propansolfonico (MOPS) (R6504 - Sigma) integrato con 0,2% (p/v) glucosio. Aliquote di 100 ?L di queste sospensioni cellulari sono state dispensate in piastre di microtitolazione da 96 pozzetti. La soluzione contenente il peptide RB55 (SEQ ID NO:2) ? stata diluita in serie utilizzando lo stesso terreno RPMI 1640 ed aggiunto ai pozzetti a una concentrazione finale compresa tra 3 ?M e 100 ?M. Successivamente, la piastra ? stata incubata per 48 ore a 37? C. ? stata misurata l?assorbanza a 595 nm utilizzando un lettore di micropiastre (Biorad mod 680). L'amfotericina B a 1 ?g/mL ? stata scelta come controllo positivo [(Wayne, P. National committee for clinical laboratory standards. (2002). Performance standards for antimicrobial disc susceptibility testing M27-A2)]. La MIC ? stata definita come la concentrazione pi? bassa del composto che ha determinato almeno il 90% di inibizione della crescita dopo 48 ore di incubazione. Il test ? stato condotto almeno tre volte utilizzando sospensioni cellulari indipendenti.
La concentrazione micocida minima (MMC) ? stata determinata trasferendo aliquote da 10 ?L di ciascun campione, precedentemente trattato con concentrazioni uguali o superiori alla MIC, su Sabouraud dextrose agar plate (SDA) e incubando le piastre a 37?C per 24 h.
La concentrazione di peptidi pi? bassa che non ha prodotto crescita fungina su piastre di agar ? stata definita come MFC.
Esempio 3: Induzione di resistenza antimicotica
Una singola colonia selezionata casualmente dal ceppo di C. albicans (ATCC 9028) ? stata incubata in 2 mL di brodo Sabouraud durante la notte in agitazione a 150 rpm, 35?C. Un'aliquota di questa coltura, contenente 10<3 >cellule, ? stata trasferita in una nuova provetta contenente 2 mL di terreno di coltura con o senza il peptide RB55 (SEQ ID NO:2) a concentrazione sub MIC (7 ?M) e incubata per un?altra notte come descritto sopra. Il giorno successivo, aliquote della coltura contenente 10<3 >cellule sono state nuovamente trasferite in terreno fresco contenente lo stesso antimicotico e re-incubate come descritto. Questa procedura ? stata ripetuta per 30 giorni consecutivi. Il saggio ? stato ripetuto quattro volte, separatamente.
Esempio 4: Saggio di formazione di biofilm in vitro.
Biofilm di Candida spp. sono stati formati in 96 pozzetti a fondo piatto in un sistema a micropiastre come descritto da Stepanovic con alcune modifiche [(Stepanovi?, S. et al. Quantification of biofilm in microtiter plates: overview of testing conditions and practical recommendations for assessment of biofilm production by staphylococci. Apmis 115, 891?899 (2007)]. Per ogni ceppo, una sospensione cellulare in terreno RPMI 1640 con 2% (p/v) di glucosio ? stata aggiustata a 1 ? 10<6 >- 5 ? 10<6 >CFU/mL.
I pozzetti della piastra sono stati inoculati con 100 ?L di sospensione di lievito in triplicato e 100 ?L di RB55 alla concentrazione sub-MIC (5 ?M), incubato a 37?C per 24h in condizioni statiche. A questa concentrazione la molecola non ha alcuno effetto sulla crescita cellulare (dato non mostrato).
Per valutare la formazione di biofilm, il brodo di coltura ? stato aspirato delicatamente e ciascun pozzetto ? stato lavato due volte con PBS ed essiccato a 60?C per 30 minuti. Il biofilm ? stato colorato mediante incubazione per 30 min con 50 ?L di una soluzione di cristal violetto all'1% (p/v). L'eventuale eccesso di cristal violetto ? stato rimosso mediante lavaggio con PBS prima di aggiungere 200 ?L di etanolo assoluto, al fine di valutare la quantit? di colorante trattenuta dal biofilm. L'assorbanza ? stata misurata a 595 nm utilizzando un lettore di micropiastre (Biorad mod 680) ed ? stata correlata alla quantit? di biofilm prodotto.
Esempio 5: Suscettibilit? antimicrobica di C. albicans
Per valutare la propriet? anticandida del peptide RB55 (SEQ ID NO:2), ? stato eseguito il test MIC su C. albicans ATCC 90028 e C. albicans ATCC 10231. Il peptide RB55 (SEQ ID NO:2) ha ridotto fortemente la crescita di entrambi i ceppi di C. albicans a un valore MIC di 12 ?M (Tabella 1). Questa concentrazione ? risultata micostatica, poich? subcoltivando 10 ?l di campione precedentemente trattato con 12 ?M RB55 su piastre SDA, abbiamo osservato la crescita del lievito 24 h dopo. Al contrario, il composto ? risultato micocida a 14 ?M. Tuttavia, di grande interesse ? il risultato riportato su C. albicans ATCC 10231 poich? si tratta di un ceppo resistente ai farmaci azolici, farmaci convenzionali e comunemente utilizzati oggi nelle terapie antifungine.
Tabella 1. Concentrazione minima inibitoria (MIC90), concentrazione minima micocida (MMC) di RB55 su C. albicans ATCC 90028 e C. albicans ATCC 10231. Ciascun esperimento ? il risultato di quattro esperimenti indipendenti eseguiti in triplicato.
Esempio 6: Prove di acquisizione della resistenza del peptide RB55
? ben noto che la somministrazione antimicotica di routine pu? indurre resistenza acquisita, portando al fallimento del trattamento. Per valutare se il lievito ha acquisito resistenza dopo un breve periodo di applicazione di sub MIC RB55 (due settimane), C. albicans ATCC 90028 ? stato subcoltivato attraverso passaggi seriali in presenza di una concentrazione sub letale di RB55 (SEQ ID NO:2) (7 ?M) per 30 giorni. Dopo la sottocoltura di 1 generazione, l'RB55 ha ridotto la crescita cellulare del 55%, influenzando solo in parte la vitalit? delle cellule di lievito (Figura 2). Il composto ? stato in grado di ridurre la vitalit? del lievito in una percentuale che varia intorno al 50% nella prima settimana di trattamento. Tuttavia, ? stata osservata un'acquisizione minima di resistenza nella seconda settimana di trattamento, dove ? stata osservata una percentuale ridotta di inibizione della crescita (40%). Trascorsi i 30 giorni di trattamento la percentuale di riduzione risulta ancora pari al 40%. I punti di prova a 12 e 14 ?M non sono stati verificati nel tempo poich? le cellule di lievito sono morte 24 ore dopo il trattamento con RB55 (SEQ ID NO:2).
Il risultato ottenuto ? in linea su quanto riportato in letteratura, poich? ? stato riportato che concentrazioni sub-inibitorie di peptidi antimicrobici possono indurre l'acquisizione di resistenza nei batteri, come risposta protettiva anche se in misura molto limitata rispetto ai farmaci convenzionali (Bruno Casciaro, Floriana Cappiello, Walter Verrusio, Mauro Cacciafesta, Maria Luisa Mangoni. Antimicrobial Peptides and their Multiple Effects at Sub-Inhibitory Concentrations Current Topics in Medicinal Chemistry, 2020, Vol. 20, No. 14). L?uso del peptide RB55 ? prevalentemente per uso topico e verr? utilizzato a concentrazioni per le quali non si induce resistenza al prodotto, in considerazione anche del fatto che I lieviti muoiono subito per effetto del peptide alle concentrazioni utilizzate.
Esempio 7: Propriet? Antibiofilm.
Per valutare le propriet? antibiofilm del RB55 (SEQ ID NO:2) su C. albicans ATCC 90028 e C. albicans ATCC 10231, i lieviti sono stati incubati in presenza del peptide RB55 alla concentrazione sub MIC di 5 ?M. L?eventuale formazione di biofilm ? stato osservato dopo 24 ore di incubazione. La concentrazione utilizzata in questo studio non ha influenzato la crescita cellulare come confermato anche dai dati della suscettibilit? antimicrobica (dati non mostrati); al contrario il composto ? stato in grado di ridurre la formazione di biofilm in entrambi i ceppi di lievito. Interessante ? il risultato riportato sul biofilm di C. albicans ATCC 10231, per le considerazioni sopra fatte, ovvero ? un ceppo resistente ai farmaci convenzionali di natura azolica.
Esempio 8: Prove di Stabilit? in Siero Umano.
La stabilit? in siero ? stata studiata incubando il peptide RB55 con siero umano acquistato dall?azienda Sigma-Aldrich-Merk. Il peptide RB55 ? stato solubilizzato in acqua sterile preparando una stock solution di 2 mM, e poi incubato con il 90% di siero umano al fine di avere una concentrazione finale di peptide di 0.2 mM. Il risultante mix peptide-siero ? stato incubato a 37?C. A tempi prestabiliti (0, 15, 45, 75, 90, 120 minuti), aliquote della reazione sono state prelevate e trattate con acetonitrile (ACN) per consentire la precipitazione delle proteine del siero. Ciascuno aliquota trattata con ACN ? stata raffreddata a 4?C, e centrifugata per 15 minuti a 13000 rpm per rimuovere le proteine del siero. Il surnatante contente il peptide RB55 ? stato poi analizzato tramite RP-UHPLC usando un gradiente lineare da 10 a 90% di ACN (0.1% TFA) in acqua (0.1% TFA) in 20 minuti. La percentuale di peptide intatto a tempi prestabiliti ? stata valutata calcolando l?area del picco dal cromatogramma RP-UHPLC (Figura 3).
Il peptide RB55 ha un?emivita di 2 ore dopo il trattamento di siero umano nelle condizioni sopra descritte.
Materiale e Metodi
I ceppi utilizzati in questo studio derivano da una raccolta certificata di microrganismi (ATCC).
I ceppi sono stati coltivati in brodo di destrosio Sabouraud (SDB) a 30?C. C. albicans ATCC 90028 ? un ceppo per il controllo della qualit? utilizzato nel ceppo di riferimento per i test di sensibilit? agli antifungini sviluppati dal Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (https://www.atcc.org/products/90028).
C. albicans ATCC 10231 ? un ceppo resistente ai principali farmaci a struttura azolica, come riportato da ATCC (https://www.atcc.org/products/10231).
Dalla descrizione dettagliata e dagli Esempi sopra riportati, risultano evidenti i vantaggi conseguiti dai peptidi della presente invenzione. In particolare, tali peptidi si sono mostrati sorprendentemente e vantaggiosamente adatti all?uso come antifungini e antimicrobici sia come medicinali, in particolare contro le candidiosi, che in campo alimentare, per prevenire il deterioramento dei prodotti vegetali.
Claims (10)
1. Peptidi o loro sali, aventi la sequenza amminoacidica rappresentata dalla SEQ ID NO:1
A-Waa-Phe-Val-Xaa-Trp- Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-Yaa-Zaa-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO:1)
in cui:
A ? scelto dal gruppo consistente in: H, acetile e propile
Waa ? scelto dal gruppo consistente in: Nle, DNle, Leu, DLeu, Ile, DIle;
Xaa ? scelto dal gruppo consistente in: Pro, DPro, Hyp (idrossiprolina) e DHyp; Yaa ? scelto dal gruppo consistente in: Lys, DLys e Gly;
Zaa ? scelto dal gruppo consistente in: Arg e DArg.
2. Il peptide secondo la rivendicazione 1 in cui detto peptide ? scelto dal gruppo consistente in:
H-Nle-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 2);
Ac-Nle-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 3);
H-Leu-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 4);
Ac-Leu-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 5);
H-Ile-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 6);
Ac-Ile-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 7); e
H-Nle-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-Gly-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 8);
3. Il peptide secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 o 2, in cui detto peptide ? scelto dal gruppo consistente in:
H-Nle-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-DLys-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 2); e
H-Nle-Phe-Val-Pro-Trp-Phe-Ser-Lys-Phe-DLeu-Gly-Arg-Ile-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 8).
4. Una composizione farmaceutica comprendente uno o pi? peptidi, uguali o diversi tra loro, secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 3, ed eccipienti farmacologicamente accettabili.
5. Composizione secondo la rivendicazione 4 e peptidi secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 3, per l?uso come medicamento.
6. Composizione secondo la rivendicazione 4 e peptidi secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 3, per l?uso nel trattamento delle infezioni fungine.
7. Composizione e peptidi per l?uso secondo la rivendicazione 6, in cui detto uso nel trattamento delle infezioni fungine ? per trattare funghi che appartengono al genere Candida.
8. Uso secondo la rivendicazione 7, in cui detti funghi appartengono alla specie Candida albicans.
9. Uso di una composizione comprendente uno o pi? peptidi, uguali o diversi tra loro, secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 3, per prevenire il deterioramento di un prodotto alimentare da parte di un microorganismo, detta composizione comprendente un veicolo accettabile in campo alimentare.
10. Composizione secondo la rivendicazione 4 e peptidi secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 3, per l?uso come agente antibatterico.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT102021000029738A IT202100029738A1 (it) | 2021-11-24 | 2021-11-24 | Peptide ad attività antimicotica e antibatterica |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT102021000029738A IT202100029738A1 (it) | 2021-11-24 | 2021-11-24 | Peptide ad attività antimicotica e antibatterica |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| IT202100029738A1 true IT202100029738A1 (it) | 2023-05-24 |
Family
ID=80448417
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT102021000029738A IT202100029738A1 (it) | 2021-11-24 | 2021-11-24 | Peptide ad attività antimicotica e antibatterica |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| IT (1) | IT202100029738A1 (it) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT201900009489A1 (it) * | 2019-06-19 | 2020-12-19 | Usp Union Of Pharmaceutical Sciences S R L | Analoghi della temporina l con attivita' antiinfiammatoria e antimicrobica |
-
2021
- 2021-11-24 IT IT102021000029738A patent/IT202100029738A1/it unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT201900009489A1 (it) * | 2019-06-19 | 2020-12-19 | Usp Union Of Pharmaceutical Sciences S R L | Analoghi della temporina l con attivita' antiinfiammatoria e antimicrobica |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| BELLAVITA ROSA ET AL: "Novel temporin L antimicrobial peptides: promoting self-assembling by lipidic tags to tackle superbugs", JOURNAL OF ENZYME INHIBITION AND MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 35, no. 1, 22 September 2020 (2020-09-22), GB, pages 1751 - 1764, XP055933306, ISSN: 1475-6366, DOI: 10.1080/14756366.2020.1819258 * |
| FRANCESCO MERLINO ET AL: "Glycine-replaced derivatives of [Pro 3 ,DLeu 9 ]TL, a temporin L analogue: Evaluation of antimicrobial, cytotoxic and hemolytic activities", EUROPEAN JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 139, 21 August 2017 (2017-08-21), AMSTERDAM, NL, pages 750 - 761, XP055663567, ISSN: 0223-5234, DOI: 10.1016/j.ejmech.2017.08.040 * |
| PAOLO GRIECO ET AL: "The effect of d-amino acid substitution on the selectivity of temporin L towards target cells: Identification of a potent anti-Candida peptide", BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA, vol. 1828, no. 2, 10 September 2012 (2012-09-10), AMSTERDAM, NL, pages 652 - 660, XP055663583, ISSN: 0005-2736, DOI: 10.1016/j.bbamem.2012.08.027 * |
| STEPANOVIC, S. ET AL.: "Quantification of biofilm in microtiter plates: overview of testing conditions and practical recommendations for assessment of biofilm production by staphylococci", APMIS, vol. 115, 2007, pages 891 - 899, XP055614399, DOI: 10.1111/j.1600-0463.2007.apm_630.x |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69835279T2 (de) | Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von infektionen unter verwendung von kationischen peptiden allein oder in kombination mit antibiotika | |
| AU711526B2 (en) | Anti-fungal D-amino acid histatin-based peptides | |
| AU759026B2 (en) | Antimicrobial peptides | |
| US20050282755A1 (en) | Compositions having antimicrobial activity and uses thereof | |
| ES2389285T3 (es) | Péptidos bioactivos cortos y procedimientos para su uso | |
| AU665030B2 (en) | Biologically active amphiphilic peptide compositions and uses therefor | |
| KR20180056226A (ko) | 전복에서 유래한 항균 펩타이드 유사체 및 이를 포함하는 항균용 약학 조성물 | |
| KR20070050941A (ko) | Ｃａｐ18 유래의 항균 펩티드 | |
| KR20140136494A (ko) | 짧은 항균 지질펩티드 | |
| US5424290A (en) | Biologically active peptides and uses therefor | |
| US20100166708A1 (en) | Antimicrobial and anti-inflammatory therapies and compositions | |
| Zhang et al. | Pleurocidin congeners demonstrate activity against Streptococcus and low toxicity on gingival fibroblasts | |
| US5885965A (en) | Anti-fungal D-amino acid histatin-based peptides | |
| US5225399A (en) | Antimicrobial amphiphilic peptides | |
| EP2750689B1 (de) | Modifizierte apidaecinderivate als antibiotische peptide | |
| TWI403330B (zh) | 低血球溶解性之抗微生物胜肽、醫藥組成物及其用途 | |
| US7271239B2 (en) | D-isomers of antimicrobial peptide | |
| US5654274A (en) | Biologically active peptides having N-terminal substitutions | |
| US5459237A (en) | Peptide compositions and uses therefor | |
| IT202100029738A1 (it) | Peptide ad attività antimicotica e antibatterica | |
| DE60125809T2 (de) | Diastereomere peptide und diese umfassende arzneimittel | |
| FR2841902A1 (fr) | Peptides lineaires cationiques ayant des proprietes antibacteriennes et/ou antifongiques | |
| WO2009005798A2 (en) | Antifungal formulation and method of preparation | |
| EP4282400A1 (en) | Antimicrobial peptide liquid composition and formulation thereof | |
| US10633420B2 (en) | Antimicrobial peptides with wound healing activity |