IT201900018893A1 - Composti per l’uso nel trattamento terapeutico e preventivo di patologie neurodegenerative, in particolare la malattia di Alzheimer - Google Patents

Composti per l’uso nel trattamento terapeutico e preventivo di patologie neurodegenerative, in particolare la malattia di Alzheimer Download PDF

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Grazia Chiellini
Simona Rapposelli
Massimiliano Runfola
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Univ Pisa
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Description

Descrizione dell’invenzione industriale dal titolo: “Composti per l’uso nel trattamento terapeutico e preventivo di patologie neurodegenerative, in particolare la malattia di Alzheimer”
DESCRIZIONE
La presente invenzione riguarda in generale composti efficaci nel trattamento terapeutico e preventivo di patologie neurodegenerative, in particolare la malattia di Alzheimer.
La malattia di Alzheimer (AD), riconosciuta come una malattia neurodegenerativa progressiva e multiforme, è la principale causa di demenza nella popolazione anziana. Questa malattia è patologicamente caratterizzata dalla formazione di agglomerati neurofibrillari intracellulari e da depositi di proteina amiloide extracellulare che contribuiscono alla formazione di placche senili. Negli ultimi vent’anni, i progressi nello studio della patogenesi hanno spinto la ricerca verso lo sviluppo di nuove terapie farmacologiche incentrate più specificamente sugli eventi patofisiologici della malattia stessa.
Tuttavia, i trattamenti farmacologici attualmente disponibili, come gli inibitori dell'acetilcolinesterasi (rivastigmina, galantamina, donepezil) e l'antagonista del recettore NMDA (memantina), non sono ancora sufficientemente efficaci nella terapia di tale patologia, soprattutto nelle prime fasi. Ad oggi, anche se le caratteristiche neuropatologiche dell’AD sono state ampiamente identificate, il complesso processo patogenetico alla base della malattia rimane poco chiaro. Di conseguenza, la ricerca in questo campo è sempre più orientata verso l'identificazione di un trattamento efficace in grado di prevenire l'insorgenza della malattia e rallentarne la progressione.
Onde soddisfare queste e altre necessità, i presenti inventori hanno sintetizzato una serie di composti che, tramite studi in vitro e in vivo, hanno dimostrato di possedere le seguenti proprietà: 1. La capacità di modulare l’espressione genica delle sirtuine, proteine che svolgono un ruolo significativo nel controllo del processo biochimico, epigenetico e cellulare dell'invecchiamento. Questa proprietà è stata studiata tramite un'analisi dell'espressione genica effettuata su adipociti in cui è stato osservato un significativo aumento del metabolismo energetico attraverso l’attivazione dei processi lipolitici (M. Rogowski et al. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20(16), 4054);
2. Un effetto neuroprotettivo su linee cellulari neuronali nelle quali era stato indotto un danno infiammatorio;
3. Un effetto neuroprotettivo in un modello in vivo di malattia di Alzheimer.
Le suddette proprietà sono utili in funzione dell’impiego dei composti studiati come principi attivi in medicinali per il trattamento terapeutico e/o preventivo di malattie neurodegenerative, in particolare la malattia di Alzheimer.
Un primo aspetto della presente invenzione è quindi un composto di Formula (I), per l’impiego nel trattamento terapeutico o preventivo di una malattia neurodegenerativa, in particolare la malattia di Alzheimer.
La formula (I) è qui di seguito illustrata:
Formula (I)
in cui X è scelto fra O (ossigeno) e CH2;
n è un numero intero compreso fra 0 (zero) e 2;
Z è scelto fra NH2, NCS, NO2, OR<3 >e NHCOR<4>;
R<2 >è scelto nel gruppo che consiste di CH2NH2, CH2NR<5>R<6>, COOH, CH2COOH, COOR<7>, COR<8 >e CN;
in cui R e R<1 >sono indipendentemente scelti fra idrogeno, alogeno, alchile inferiore e aloalchile inferiore; e R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7 >ed R<8 >sono scelti indipendentemente l’uno dall’altro fra idrogeno e alchile inferiore.
Nella presente descrizione, il termine “alchile inferiore” indica un gruppo alchilico lineare o ramificato avente da 1 a 4 atomi di carbonio, segnatamente metile, etile, iso-propile, n-propile, iso-butile, n-butile, sec-butile o tert-butile.
Nella presente descrizione, con il termine “alogeno” si intende fluoro, cloro, bromo o iodio. L’alogeno preferito nell’ambito della formula (I) sopra illustrata è il fluoro. L’aloalchile preferito è il trifluorometile.
Nell’ambito della presente invenzione sono altresì inclusi i sali farmaceuticamente accettabili dei composti di formula (I). Sali farmaceuticamente accettabili sono a titolo esemplificativo cloridrati, bromidrati, fosfati, solfati, idrogeno solfati, alchilsolfonati, arilsolfonati, acetati, citrati, ossalati, maleati, fumarati, succinati, lattati e tartrati. Un sale può altresì essere formato tra un catione e un gruppo caricato negativamente. Cationi adatti nell’ambito della presente invenzione includono, ad esempio, ione di potassio, ione di magnesio, ione di calcio e un catione di ammonio eventualmente sostituito come ad esempio lo ione di tetrametilammonio. Ulteriori esempi di alcuni ioni ammonio sostituiti adatti sono quelli derivati da: etilammina, dietilammina, trietilammina, etanolammina, dietanolammina, piperazina, colina, meglummina e trometammina, nonché amminoacidi come lisina e arginina.
In una forma di realizzazione preferita della formula (I), R e R<1 >sono entrambi H.
In un’altra forma di realizzazione preferita della formula (I), R ed R<1 >sono entrambi metile.
In ancora un’altra forma di realizzazione preferita della formula (I), R è metile ed R<1 >è H.
In ancora un’altra forma di realizzazione preferita della formula (I), R è H ed R<1 >è metile. In ancora un’altra forma di realizzazione preferita della formula (I), R è H ed R<1 >è trifluorometile oppure è un atomo di fluoro.
In ancora un’altra forma di realizzazione preferita della formula (I), R è trifluorometile oppure è un atomo di fluoro e R<1 >è H.
In ancora un’altra forma di realizzazione preferita della formula (I), n è zero o 1.
In ancora un’altra forma di realizzazione preferita della formula (I), R<2 >è CH2NH2, CH2NHAc (dove Ac = acetile), COOH o CH2COOH
Composti preferiti che rientrano nella formula (I) sono:
composto SG-1, in cui R = R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NH2; R<2 >= CH2NH2;
composto SG-2, in cui R = CH3; R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NH2; R<2 >= CH2NH2;
composto SG-3, in cui R = R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NO2; R<2 >= COOH;
composto SG-4, in cui R = CH3; R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NO2; R<2 >= COOH;
composto SG-5, in cui R = R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NH2; R<2 >= COOH;
composto SG-6, in cui R = metile; R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NH2; R<2 >= COOH;
composto SG-7, in cui R = R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = OH; R<2 >= CH2NH2;
composto SG-8, in cui R = R<1 >= H; X = CH2; n = 0; Z = NH2; R<2 >= CH2NH2;
composto SG-9, in cui R = R<1 >= H; X = CH2; n = 0; Z = NO2; R<2 >= COOH;
composto SG-10, in cui R = R<1 >= H; X = CH2; n = 0; Z = NH2; R<2 >= COOH;
composto SG-11, in cui R=H; R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= OH; R<2 >= CH2NH2;
composto SG-12, in cui R=H; R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= NH2; R<2 >= CH2NH2;
composto SG-14, in cui R= R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= NH2; R<2 >= CH2NH2;
composto SG-15, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=1; Z= NH2; R<2 >= CH2NH2;
composto SG-19, in cui R= R<1 >=H; X=O; n=1; Z= NHCOCH3; R<2 >= CH2NHAc;
composto SG-20, in cui R= R<1 >=H; X=O; n=1; Z= NHCOCH3; R<2 >= CH2NH2;
composto SG-22, in cui R= H; R<1 >= CH3; X=O; n=1; Z= NHCOCH3; R<2 >= CH2NHCOCH3;
composto SG-23, in cui R= H; R<1 >= CH3; X=O; n=1; Z= NHCOCH3; R<2 >= CH2NH2;
composto SC-19, in cui R= H; R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= NHCOCH3; R<2 >= CH2NH2;
composto EP-40, in cui R= H; R<1 >=CF3; X=O; n=1; Z= NH2; R<2 >= CH2NH2;
composto ME-24, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=0; Z= NH2; R<2 >= CH2COOH;
composto ME-26, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=0; Z= OH; R<2 >= CH2COOH;
composto ME-31, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=1; Z= NH2; R<2 >= CH2NH2;
composto ME-32, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=1; Z= OH; R<2 >= CH2NH2;
composto ME-35, in cui R=H; R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= NH2; R<2 >= COOH;
composto ME-36, in cui R=H; R<1 >=F; X=O; n=0; Z= NH2; R<2 >= CH2COOH.
composto SG-51, in cui R = R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NCS; R<2 >= COOH;
composto SG-61, in cui R = metile; R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NCS; R<2 >= COOH;
composto SG-101, in cui R = R<1 >= H; X = CH2; n = 0; Z = NCS; R<2 >= COOH;
composto ME-241, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=0; Z= NCS; R<2 >= CH2COOH;
composto ME-351, in cui R=H; R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= NCS; R<2 >= COOH;
composto ME-361, in cui R=H; R<1 >=F; X=O; n=0; Z= NCS; R<2 >= CH2COOH.
I composti EP-40, ME24, ME26, ME31, ME32, ME35, ME36, SG51, SG61, SG101, Me241, ME351, Me361. sono di per sé nuovi e rappresentano quindi un secondo aspetto della presente invenzione.
La sintesi dei composti da SG-1 a SG-10 è illustrata negli schemi di reazione 1-4 della domanda di brevetto WO 2015/151068.
La sintesi dei composti EP-40, ME24, ME26, ME31, ME32, ME35, ME36, SG51, SG61, SG101, Me241, ME351, Me361. è illustrata nella parte sperimentale che segue. Nella parte sperimentale sono anche descritti i saggi biologici effettuati con alcuni dei composti che rientrano nella formula (I) per verificare la loro potenziale efficacia nei confronti della malattia di Alzheimer.
Nella parte sperimentale viene fatto riferimento alle annesse figure, in cui:
La Figura 1 è un grafico che mostra i risultati ottenuti negli studi di regolazione espressione genica nelle vie di ossidazione degli acidi grassi indotta da SG2. Cellule 3T3-L1, dopo differenziazione in adipociti maturi, sono state esposte a trattamento con SG-2 (1µM) o con veicolo (controllo). Dopo incubazione per 24h la valutazione delle differenze nei livelli di espressione genica di geni marker della ossidazione dei lipidi tra cellule trattate e controllo, è stata effettuata applicando il metodo 2-ΔΔCt. Elenco delle abbreviazioni geniche: recettore gamma attivato dal proliferatore del perossisoma (PPAR �), acetil-CoA sintetasi (Acs15), carnitina palmitoiltransferasi 1α(CPT1α), Sirtuin 1 (Sirt1), Sirtuin 4 (Sirt4), Sirtuin 5 (Sirt5), Sirtuin 6 (Sirt6), substrato del recettore dell'insulina 1 (IRS), recettore beta (PPAR�) attivato dal proliferatore del perossisoma, proteina di legame dell'elemento di risposta serina (Srebp1c), e perilipina (Plin). Il significato statistico è stato determinato usando one-way ANOVA seguito da un post-test Bonferroni: *P <0,05, n = 6. I geni significativamente sovraregolati comprendono: Sirtuine 1 e 5, Perilipina (Plin) e PPAR�. ;La Figura 2 è un grafico che mostra i risultati ottenuti negli studi relativi all’effetto di SG1, SG2 e SG11 su un modello sperimentale di neuroin fiammazione. Le cellule differenziate dalle staminali neuronali sono state trattate con composti testati (10 μM) per 72 ore. Dopo il lavaggio, le cellule sono state incubate con 50 μg/ml di LPS e 50 ng/ml di TNF-α per altre 16 ore. Alla fine dei trattamenti, la proliferazione cellulare è stata misurata mediante saggio MTS. I dati sono espressi in percentuale rispetto alle cellule non trattate (controllo), impostate al 100%, e rappresentano la media ± SEM di tre esperimenti indipendenti, ciascuno eseguito in triplicato. Il significato statistico è stato determinato usando one-way ANOVA seguito da un post-test Bonferroni: #P <0,05, ## P <0,01, ### P <0,001 vs cellule trattate con LPS e TNF-α (LPS / TNF-α). ;La Figura 3 mostra i risultati dell’applicazione del WT-NTP negli studi sugli effetti di SG-1 e SG-2 su ceppi GMC di vermi (McColl et al., 2012). Analisi degli effetti di SG1 e SG2 (1, 5, 10μM); tutti i diagrammi mostrano il giorno 1 (a sinistra) e il giorno 5 dell'età adulta, con la motilità media normalizzata al gruppo non trattato; gli errori mostrano il SEM. ;La parte sperimentale è fornita unicamente a scopo illustrativo e non limitativo della portata dell’invenzione, come definita nelle annesse rivendicazioni. ;PARTE SPERIMENTALE ;Esempio 1: Sintesi dei composti ME ;Schema 1 ;; ;; Reagenti e condizioni: (a) p-nitrobenzilbromuro ,K2CO3, H2O/acetone, MW, 100°C, 20min; (b) BBr3, DCM, -10°�t.a., 4h; (c) Cs2CO3, bromoacetonitrile, DMF, ;20min, t.a.; (d) etilbromoacetato, Cs2CO3, DMF, 20min, t.a (e) H2, Pd/C , EtOH, 2.5h, ta; (f) H2, Pd/C, MeOH, 12h ta; (g) LiAlH4, AlCl3, THF, 12h riflusso; (h) NaOH 10%, riflusso 1h; (i) H2SO4 conc, NaNO2, H2O, 1h riflusso;(l) HCl 37%; 100°C 4h ;Schema 2 ;; ;; Reagenti e condizioni: (a) KHF2, MeOH/H2O, t.a., 12h; ;(b) p-nitrobenzil bromuro, Cs2CO3, H2O/Diossano, PdCl2 dppf, P<25 bar, 135<° >per 15min-160<° >per successivi 5min; (c) SOCl2, CHCl3, t.a, 1h30min; (d) NaCN, H2O/CH3CN, 100°C, 150 W, 8 bar, 20min.; (e) H2SO497%, H2O, 100<°>, 30min; (f) NH2NH2*H2O, carbone vegetale, FeCl3, CH3OH, 70°, riflusso, 12h.
Per reazione di salificazione dell’acido 4-(idrossimetil)-2-metilfenilboronico commerciale con KHF2, è stato ottenuto il fluoroboronato 13 che è stato sottoposto a reazione di cross-coupling con il p-nitro-benzilbromuro commerciale a dare il derivato 14. La successiva reazione di clorurazione in
presenza di SOCl2 ha fornito il cloroderivato 15 che per sostituzione nucleofila con NaCN ha condotto al cianoderivato 16. L’idrolisi acida a caldo ha condotto all’acido 17 che per riduzione con idrazina monoidrata in presenza di FeCl3 ha fornito il derivato ME35 desiderato.
Schema 3
Reagenti e condizioni: (a) Tiofosgene, NaOH, DCM, t.a.Materiali e Metodi
SCHEMA 1
Sintesi della 4-(4-(2-amminoetossi)-2-(trifluorometil)benzil)anilina EP40
Ad una soluzione di LiAlH4 in THF (2.25 ml, 2.25 mmoli) si addiziona AlCl3 (300 mg, 2.25 mmoli) sotto atmosfera di N2. La soluzione viene lasciata in agitazione a temperatura ambiente (t.a.) per 5 min. Successivamente si aggiunge la soluzione del ciano derivato 10c solubilizzato in THF. La miscela ottenuta viene posta a riflusso per 12 h. Trascorso tale periodo, la miscela di reazione viene raffreddata a 0°C, addizionata con H2O e acidificata con HCl 10%. La soluzione è stata quindi lavata con
Et2O, la fase acquosa è stata alcalinizzata con NaOH 2N ed addizionata con CHCl3. L’emulsione risultante è stata filtrata su setto a celite e la fase organica è stata infine lavata con NaCl saturo, essiccata, filtrata ed evaporata a pressione ridotta ottenendo il grezzo 1 che è stato purificato tramite formazione del cloridrato. Resa: 10%. <1>H NMR (MeOD-d4):δ 3.39(t, J=4.8 Hz, 2H, CH2NH2); 4.19 (s, 2H, CH2); 4.29 (t, J=4.8, 2H, CH2); 7.23 (dd, J= 2.4, 8.4 Hz, 1H, Ar); 7.27-7.35 (m, 6H, Ar) ppm. <13>C NMR (MeOD-d4): δ 158.09, 143.25, 135.05, 132.29, 131.44, 130.89, 130.10, 126.97, 124.13, 119.10, 113.98, 65.78, 40.21, 37.53 ppm.
Sintesi del derivato 2-(4-(4-aminobenzil)-3,5-dimetilfenossi)acido acetico ME24
Ad una soluzione del derivato estereo 11 (0.12 mmoli; 39 mg), solubilizzato in MeOH, è stato addizionato NaOH 10% (0.02 mL). La miscela è stata lasciata a reagire a reflusso per un’ora. Trascorso tale periodo, la miscela è stata evaporata. Il grezzo è stato purificato tramite precipitazione in MeOH/Et2O ottenendo il prodotto desiderato 2. Resa: 42% <1>H NMR (CD3OD-d6): δ 2.17 (s, 6H, CH3); 3.85 (s, 2H, CH2); 4.34 (s, 2H, CH2COOH); 6.61 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar); 6.65 (s, 2H, Ar); 6.72 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar) ppm. <13>C NMR (CD3OD-d6): δ 177.01, 157.94, 146.00, 139.15, 131.39, 131.25, 129.36, 117.00, 115.25, 68.47, 34.27, 20.54 ppm.
Sintesi del derivato 2-(4-(4-idrossibenzil)-3,5-dimetilfenossi)acido acetico ME26
Il derivato anilinico ME24 (0.20 mmoli; 64 mg), solubilizzato in H2O (minima quantità), è stato addizionato di H2SO4 concentrato (0.05 mL) e posto in agitazione a 0°C per 20 minuti. Successivamente alla miscela è stata aggiunta una soluzione di NaNO2 (0.20 mmoli; 14 mg) in H2O. La reazione è stata quindi posta in agitazione a riflusso per un’ora. Trascorso tale periodo la miscela è stata raffreddata e addizionata di AcOEt; la fase organica è stata lavata con una soluzione satura di NaCl. La fase organica è stata essiccata, filtrata ed evaporata. Il grezzo è stato purificato tramite precipitazione in AcOEt/Esano. Resa: 35%. <1>H NMR (CD3OD-d6): δ 2.17 (s, 6H, CH3); 3.87 (s, 2H, CH2); 4.59 (s, 2H, CH2COOH); 6.60-6.67 (m, 4H, Ar); 6.77 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar) ppm. <13>C NMR (CD3OD-d6): δ 173.18, 157.42, 156.32, 139.45, 132.10, 131.86, 129.64, 116.09, 115.12, 65.94, 34.21, 20.53 ppm.
Sintesi del derivato 4-(4-(2-aminoetossi)-2,6-dimetilbenzil)anilina ME31
La reazione è stata effettuata come riportato per EP40 a partire dal cianoderivato 10b (0.45 mmoli; 133 mg) in THF. La reazione è stata mantenuta in agitazione a riflusso per 12 ore. Trascorso tale periodo la miscela è stata portata a 0°C, addizionata di H2O, acidificata con una soluzione di HCl 10% e lavata con Et2O. La fase acquosa è stata alcalinizzata con una soluzione acquosa di NaOH 2N ed addizionata di CHCl3. L’emulsione risultante è stata filtrata su setto a celite. La fase organica è stata infine lavata con una soluzione satura di NaCl, essiccata, filtrata ed evaporata fornendo il derivato 7. Resa: 39%. <1>H NMR (CDCl3): δ 2.20 (s, 6H, CH3); 3.10 (t, J = 5.0 Hz; 2H, CH2NH2); 3.86 (s, 2H, CH2); 4.00 (t, J = 5.0 Hz; 2H, OCH2); 6.53-6.60 (m, 2H, Ar); 6.63 (s, 2H, Ar); 6.78 (d, J = 8.4, 2H, Ar) ppm.
Sintesi del derivato 4-(4-(2-aminoetossi)-2,6-dimetilbenzil)fenolo ME32
Il derivato amminico ME32 (0.17 mmoli; 48 mg), è stato ottenuto seguendo la procedura sintetica per l’ottenimento di ME26. Il grezzo è stato purificato tramite precipitazione in MeOH/Et2O. Resa: 42% <1>H NMR (CD3OD-d6): δ 2.19 (s, 6H, CH3); 3.09 (t, J = 5.0 Hz; 2H, CH2NH2); 3.88 (s, 2H, CH2); 3.99 (t, J = 5.0 Hz; 2H, OCH2); 6.61 (s, 2H, Ar); 6.69 (d, J = 8.6, 2H, Ar); 6.83 (d, J = 8.6, 2H, Ar) ppm. <13>C NMR (CD3OD-d6): δ 158.24, 156.33, 139.34, 132.20, 131.26, 129.62, 116.09, 115.11, 69.76, 41.84, 34.21, 20.54 ppm.
Sintesi dell’acido 2-(4-(4-amminobenzil)-3-fluorofenossi) acetico ME36
Ad una soluzione del composto 12 (28 mg, 0.109 mmoli) in H2O è stato aggiunto HCl 37% fino a pH acido. La miscela è stata lasciata in agitazione a 100° a riflusso per 4h; trascorso tale periodo la soluzione acquosa è stata evaporata ottenendo il prodotto finale ME36 che è stato purificato mediante formazione del corrispondente cloridrato. Resa: 77%.
<1>H NMR (CD3OD-d4): δ 3.98 (s, 2H, CH2); 4.66 (s, 2H, CH2COOH); 6.69-6.74 (m, 2H, Ar); 7.15 (d, 1H, J=8.4 Hz, Ar); 7.31-7.37 (m, 4H, Ar) ppm. <13>C NMR (CD3OD-d4): δ 172.21(COOH); {161.28, 159.50, 143.21, 132.57, 131.21, 129.81, 124.10, 121.30, 111.53, 103.49} Ar; 66.03 (CH2COOH); 34.51 (CH2) ppm.
Sintesi generale degli intermedi 8a-c
In fiala da microonde, in ambiente saturo di azoto, ad una soluzione dell’appropriato acido metossi-fenilboronico (2.11 mmoli) in H2O/acetone in rapporto 2:3 (10 mL) sono stati aggiunti il pnitrobenzilbromuro (2.11mmoli), K2CO3 (5.26 mmol). La reazione è stata posta in agitazione a microonde a 110° per 20 minuti. Trascorso questo tempo, la fase organica è stata separata dalla soluzione acquosa ed evaporata; il grezzo ottenuto è stato purificato tramite cromatografia su gel di silice utilizzando come miscela eluente un gradiente di EP/AcOEt.
Sintesi generale degli intermedi 9a-c
Ad una soluzione del metossiderivato 8a-c (0.531 mmoli) in CH2Cl2 posta in un bagno di ghiaccio a -10 °C è stato aggiunto, goccia a goccia e in ambiente anidro, BBr3 (1.69 mL). La miscela è stata lasciata in agitazione per 4 h e successivamente è stata diluita con H2O ed estratta in CH2Cl2. La fase organica è stata anidrificata, filtrata ed evaporata fornendo il grezzo 10a-c che è stato utilizzato per la reazione successiva senza ulteriori purificazioni.
Sintesi generale degli intermedi 10a-d
Al fenolo 9a-c (0.425 mmoli), disciolto nella minima quantità di DMF, sono stati aggiunti Cs2CO3 (2.16 mmoli) e bromoacetonitrile (0.425 mmol) o etilbromoacetato (0.425 mmol). La miscela è stata lasciata in agitazione per 20 minuti, al termine dei quali è stata aggiunta H2O per bloccare la reazione.
La soluzione è stata quindi estratta in CH2Cl2; la fase organica derivante è stato lavata con H2O e, infine, anidrificata, filtrata ed evaporata fornendo l’intermedio 10a-d che è stato purificato mediante triturazione in Et2O.
Sintesi del derivato etil 2-(4-(4-aminobenzil)-3,5-dimetilfenossi)acetato (11)
Una soluzione del derivato 10a (0.30 mmoli; 104 mg), solubilizzato in EtOH assoluto (minima quantità), è stata sottoposta ad idrogenazione, utilizzando come catalizzatore Pd/C (16.8 mg; 0.30 mmoli) a t.a. per 2.5 h. Trascorso tale periodo, il catalizzatore è stato filtrato su setto a celite e la soluzione è stata evaporata fornendo il derivato 11. Resa: 98%. <1>H NMR (CDCl3): δ 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H, CH3); 2.20 (s, 6H, CH3); 3.86 (s, 2H, CH2); 4.28 (q, J = 7.2 Hz, 2H, CH2); 4.60 (s, 2H, CH2COOEt); 6.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar); 6.61 (s, 2H, Ar); 6.77 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ar) ppm.
Sintesi del 2-(4-(4-amminobenzil)-3-fluorofenossi)acetonitrile (12)
Una soluzione dell’intermedio 10d (57 mg, 0.216 mmoli) in MeOH è stata sottoposta a reazione di idrogenazione utilizzando come catalizzatore Pd/C (11 mg) e lasciata sotto agitazione per tutta la notte a temperatura ambiente. Trascorso tale periodo, la miscela è stata filtrata su celite e la soluzione filtrata è stata evaporata ottenendo il grezzo 12 che è stato ulteriormente purificato mediante triturazione in CHCl3. Resa: 60%. <1>H NMR (CD3OD-d4): δ 3.80 (s, 2H, CH2); 4.95 (s, 2H, CH2CN); 6.64-6.67 (m, 2H, Ar); 6.76-6.81 (m, 1H, Ar); 6.93 (d, 2H, J = 8 Hz, Ar); 7.14 (d, 1H, J = 8 Hz, Ar) ppm.
SCHEMA 2
Sintesi dell’acido 2-(4-(4-amminobenzil)-3-metilfenil) acetico (ME35)
Ad una soluzione del nitroderivato 17 (19 mg, 0.061 mmoli) in CH3OH, in condizioni anidre, è stato aggiunto il carbone (3.2 mg) e il FeCl3 in quantità catalitica. La miscela è stata scaldata a 70° a riflusso per 15 minuti, quindi è stata aggiunta una soluzione di idrazina monoidrata (0.05 mL, 1.037 mmoli). La reazione è stata mantenuta per tutta la notte a 70° a riflusso sotto costante agitazione. Successivamente la soluzione è stata filtrata su celite e il solvente evaporato, fornendo il composto ME35 che è stato purificato mediante triturazione in CHCl3 e successiva formazione del corrispondente cloridrato. Resa: 60%. <1>H NMR (CD3OD-d4): δ 2.18 (s, 3H, CH3); 3.55 (s, 2H, CH2COOH); 4.02 (s, 2H, CH2); 7.07-7.09 (m, 2H, Ar); 7.26-7.29 (m, 5H, Ar) ppm. <13>C NMR (CD3OD-d4): δ 175.79 (COOH); {143.38, 138.07, 137.86, 134.40, 132.40, 131.20, 131.16, 129.73, 128.05, 123.98} Ar; 41.47 (CH2COOH); 39.27 (CH2); 19.63 (CH3) ppm.
Sintesi del (4-(idrossimetil)-2-metilfenil) trifluoroboronato di potassio (13)
Ad una soluzione di acido 4-idrossimetil-2-metilfenil boronico (400 mg, 2.41 mmoli) in MeOH (5 mL) è stato aggiunto, a 0°C, KHF2 (957 mg, 12.2 mmoli) in H2O (4mL) goccia a goccia. La miscela è stata lasciata in agitazione per tutta la notte a temperatura ambiente. Trascorso tale periodo, il solvente è stato evaporato ed il solido bianco ottenuto è stato ripreso a caldo con acetone e filtrato. La soluzione filtrata è stata precipitata a caldo con Et2O, fornendo il derivato 13 desiderato che è stato utilizzato per la reazione successiva senza ulteriori purificazioni. Resa: 99%. <1>H NMR (CD3OD-d4): δ 2.41 (s, 3H, CH3); 4.49 (s, 2H, CH2OH); 6.97 (d, 1H, J=7.8 Hz, Ar); 6.99 (s, 1H, Ar); 7.47 (d, 1H, J=7.8 Hz, Ar) ppm.
Sintesi del (3-metil-4-(4-nitrobenzil)fenil)metanolo (14)
In una fiala da microonde, in ambiente saturo di azoto, sono stati disciolti in H2O (0.18 mL) e diossano (1.67 mL) il p-nitrobenzilbromuro (56 mg, 0.26 mmoli), il Cs2CO3 (251 mg, 0.77 mmoli), il fluoroboronato 13 (59 mg, 0.26 mmoli) e il PdCl2 dppf in quantità catalitica. La miscela così ottenuta è stata posta in agitazione nel reattore a microonde (135<° >per 15 minuti, 160<° >per successivi 5 minuti). Al termine della reazione la fase organica è stata separata ed evaporata fornendo il composto 4 che è stato purificato tramite cromatografia su gel di silice utilizzando come eluente EP/AcOEt in rapporto 7:3. Resa: 38%. <1>H NMR (CDCl3): δ 2.21 (s, 3H, CH3); 4.08 (s, 2H, CH2); 4.67 (s, 2H, CH2OH); 7.10 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar); 7.19 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar); 7.21 (s, 1H, Ar); 7.26 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar); 8.12 (d, 2H, J= 8.8 Hz, Ar) ppm.
Sintesi del 4-(clorometil)-2-metil-1-(4-nitrobenzil)benzene (15)
L’alcool 14 (112 mg, 0.435 mmoli) è stato solubilizzato nella minima quantità di CHCl3. La soluzione ottenuta è stata posta in un bagno di ghiaccio a 0° ed è stato aggiunto SOCl2 (17 mg, 0.01 mL). Tale miscela è stata fatta reagire per 1:30 h. Trascorso questo tempo, il solvente è stato evaporato, e l’olio ottenuto ripreso con H2O ed estratto in CH2Cl2. La fase organica è stata anidrificata, filtrata ed evaporata ottenendo il composto 15 che è stato utilizzato per la reazione successiva senza ulteriori purificazioni. Resa: 82%. <1>H NMR (CDCl3): δ 2.21 (s, 3H, CH3); 4.08 (s, 2H, CH2); 4.57 (s, 2H, CH2Cl); 7.09 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar); 7.21 (d, 1H, J = 7.6 Hz, Ar); 7,23 (s, 1H, Ar); 7.26 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar); 8.13 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar) ppm
Sintesi del 2-(3-metil-4-(4-nitrobenzil)fenil)acetonitrile (16)
In una fiala da microonde, ad una soluzione del derivato 15 (93 mg, 0.335 mmoli) in CH3CN (0.45 mL) è stato aggiunto NaCN (33 mg; 0.67 mmoli) disciolto precedentemente in H2O (0.15 mL). La miscela così ottenuta è stata posta al microonde alla temperatura di 100°C per 20 minuti. Dopo raffreddamento, la fase organica è stata evaporata ottenendo il composto 16 che non è stato ulteriormente purificato. Resa: 99%.
<1>H NMR (CDCl3): δ 2.22 (s, 3H, CH3); 3.72 (s, 2H, CH2CN); 4.08 (s, 2H, CH2); 7.10 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar); 7.14 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Ar); 7.16 (s, 1H, Ar); 7.23-7.26 (m, 2H, Ar); 8.14 (d, 2H, J = 8.4 Hz, Ar) ppm.
Sintesi dell’acido 2-(3-metil-4-(4-nitrobenzil)fenil) acetico (17)
Il derivato 16 (93 mg, 0.350 mmoli) è stato solubilizzato in una soluzione costituita da H2O e H2SO4 (97% v/v) in rapporto 1:2 (0.35 mL di H2O; 0.7mL di H2SO4). La miscela ottenuta è stata posta in agitazione a 100° a riflusso per 30 minuti. Al termine della reazione, la miscela è stata raffreddata fino a 0 °C ed è stata aggiunta H2O, portando alla precipitazione di un solido che è stato filtrato su setto. La soluzione filtrata è stata quindi alcalinizzata con NaOH 1 N e successivamente estratta in CHCl3; la fase acquosa che ne è derivata è stata acidificata con HCl (10% v/v) ed è stata effettuata estratta con CHCl3. Quest’ultima fase organica è stata anidrificata, filtrata ed evaporata ottenendo il composto 17. Resa: 19%. <1>H NMR (CDCl3): δ 2.20 (s, 3H, CH3); 3.62 (s, 2H, CH2COOH); 4.06 (s, 2H, CH2); 7.08-7.10 (m, 2H, Ar); 7.20-7.26 (m, 3H, Ar); 8.13 (d, 2H, J = 8.8 Hz, Ar) ppm.
Sintesi generale degli isotiocianati SG51, SG61, SG101, Me241, ME351, Me361.
Schema 3
Ad una soluzione di derivato anilinico (0,10 mmol) in DCM (1 ml), sotto atmosfera di N2 e raffreddata a 0 ° C, sono stati aggiunti tiofosgene (0,03 ml, 0,32 mmoli) e NaOH (10,9 mg, 0,27 mmoli). La sospensione risultante è stata agitata per 4 ore a t.a. La soluzione è stata evaporata a secchezza, lavata con nuovo DCM e filtrata su Celite. La soluzione è stata essiccata e il prodotto grezzo purificato mediante cromatografia flash.
Esempio 2: saggi biologici
Materiali e metodi
Espressione genica di geni coinvolti nei processi lipolitici in adipociti maturi: le cellule preadipocitarie murine (3T3-L1) sono state differenziate in adipociti (Rogowsky M et al Int J Mol Sci 2019), e successivamente incubate per 24 h con SG-2 a concentrazione 1µM o con il veicolo (controllo). A completamento del trattamento, le cellule sono state raccolte in trizol e l'RNA è stato estratto per la valutazione dell'attivazione genica tramite PCR real-time. L'RNA totale è stato isolato con il kit RNeasy Lipid Tissue Mini (Qiagen, Limburg, NLD) seguendo il protocollo del produttore. La concentrazione e la purezza dell'RNA (rapporti 260/280 e 260/230) sono state analizzate mediante Cytation (Cytation 3, Winooski, VT). L'RNA totale è stato trascritto inverso in 20 µl di cDNA (5 minuti a 25 °C, 20 minuti a 42 °C, 15 minuti a 46 °C, 15 minuti a 50 ° C e 5 minuti a 85 °C) usando iScript cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). La quantificazione relativa delle trascrizioni geniche è stata misurata mediante PCR in real-time su cDNA di campioni usando una miscela SYBRGreen e uno strumento CFX-96 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). L'espressione di geni selezionati come marker del metabolismo lipidico nelle cellule esposte al trattamento con SG-2 viene presentata come variazione rispetto all’espressione genica misurata nelle cellule di controllo utilizzando il metodo di analisi ∆∆CT come descritto da Livak e Schmittgen (Livak, K.J. and Schmittgen, T.D. (2001) Methods, 25, 402-408).
Analisi statistica
Le analisi statistiche sono state eseguite utilizzando GraphPad Prism versione 6.0 per Windows (GraphPad Software, San Diego, California, USA). I dati sono stati sottoposti a one-way analysis della varianza, e la significatività dei risultati è stata calcolata applicando il Bonferroni post-hoc test. I dati riportati si riferiscono alla media ± SEM di almeno 3 esperimenti indipendenti. Sono considerati statisticamente significativi i valori per i quali p < 0,05.
Risultati
Effetto neuroprotettivo su C. Elegans
L’attività neuroprotettiva dei composti esaminati è stata valutata tramite la piattaforma WF-NTP sviluppata dal Prof. Vendruscolo e Dr Perni dell’Università di Cambridge seguendo il protocollo da loro descritto nella seguente pubblicazione “PERNI, Michele, et al. Massively parallel C. elegans tracking provides multi-dimensional fingerprints for phenotypic discovery. Journal of neuroscience methods, 2018, 306: 57-67”. La valutazione dell’attività neuroprotettiva si basa sulla caratterizzazione del comportamento di C. elegans. Con l’impiego di tale piattaforma è stato possibile acquisire numerosi dati e l’analisi comportamentale multiparametrica automatizzata di migliaia di vermi contemporaneamente ha permesso di acquisire dati significativi anche dal punto di vista statistico.
Espressione genica delle sirtuine
Le sirtuine sono proteine conservate in modo evolutivo, che fungono da deacetilasi dipendenti dalla nicotinamide adenina dinucleotide o adenosina difosfato-ribosiltransferasi. La famiglia delle sirtuine (SIRT1-7) dei mammiferi, è coinvolta in molti processi biologici come la sopravvivenza cellulare, la proliferazione, la senescenza, la risposta allo stress, la stabilità del genoma e il metabolismo. I presenti inventori hanno effettuato un’analisi dell’espressione genica delle sirtuine per poter correlare la loro espressione agli effetti neuroprotettivi osservati nei modelli in vitro e in vivo qui discussi.
Come mostrato in figura 1, i geni significativamente sovraregolati nelle cellule 3T3-L1 differenziate in adipociti comprendono: le Sirtuine 1 e 5, Perilipina (Plin) e PPAR�. In particolare, la SIRT1 nel cervello svolge ruoli cruciali nella regolazione dell'omeostasi dell'energia sistemica e del ritmo circadiano. Inoltre, è stato anche mostrato che la SIRT1 media gli effetti benefici nelle malattie neurologiche quali la sindrome di Alzheimer e il morbo di Parkinson.
I dati riportati in figura 1 mostrano anche un incremento dell’espressione delle Sirt4 e 5 a seguito del trattamento degli adipociti con SG2 1�M per 24 h. Tali sirtuine sono espresse nella matrice mitocondriale e sono strettamente associate alla senescenza cellulare attraverso il controllo dei processi metabolici cellulari. I dati mostrati in figura 1 relativi all’espressione delle Sirt4 e 5 indicano che i composti oggetto della presente invenzione possono contribuire a regolare il turnover mitocondriale, influenzando la produzione di ROS e la sintesi di proteine ad attività antiossidante a livello mitocondriale in numerosi tessuti.
Saggi in vitro
Gli inventori hanno studiato due derivati bifenilmetanici sintetizzati in linee cellulari umane per valutare gli effetti indotti nella neuroinfiammazione e in un modello in vivo di C. elegans con malattia di Alzheimer per valutare gli effetti come potenziale trattamento per la patologia ad oggi incurabile.
E’ stato trovato che i composti di formula (I) esercitano un effetto neuroprotettivo in cellule neuronali umane. Le cellule staminali neurali umane derivate da H9 (NSCs) sono state differenziate in cellule neuronali e sono state trattate con lipopolisaccaride (LPS) e TNF-α per stabilire un modello umano in vitro di neuroinfiammazione, (Sestito et al. Sci. Reports 2019). Gli effetti dei composti SG (10 μM) in condizioni fisiologiche e in seguito a stress infiammatorio sono stati valutati misurando la vitalità cellulare.
I risultati ottenuti con i composti SG1, SG2 e SG11 su un modello sperimentale di neuroinfiammazione sono illustrati in figura 2. In questo esperimento, le cellule sono state trattate con i composti esaminati (10 μM) per 72 ore. Dopo il lavaggio, le cellule sono state incubate con 50 μg / ml di LPS e 50 ng / ml di TNF-α per altre 16 ore. Alla fine dei trattamenti, la proliferazione cellulare è stata misurata mediante saggio MTS. I dati sono espressi come percentuali relative a cellule non trattate (controllo), che sono state impostate al 100% e rappresentano la media ± SEM di tre esperimenti indipendenti, ciascuna eseguita in triplicato. Il significato statistico è stato determinato utilizzando il test ANOVA (one way ANOVA) seguito da un post-test di Bonferroni: #P<0.05, ##P<0.01, ###P<0.001 vs cellule trattate con LPS e TNF-α (LPS/TNF-α).
Come previsto, il trattamento con LPS e TNFalfa riduce significativamente la proliferazione cellulare. Il pre-trattamento per 72 ore con i composti SG1, SG2 e SG11 ha contrastato in modo significativo la diminuzione della proliferazione cellulare provocata dall'insulto infiammatorio. Questi risultati suggeriscono che i composti di formula (I) siano in grado di esercitare effetti neuro-protettivi in un modello sperimentale di infiammazione.
Saggi in vivo
La caratteristica principale del morbo di Alzheimer (AD) è l'accumulo abbondante di amiloide-ß (Aß) nel cervello. Per esaminare l'attività dei nostri composti abbiamo valutato alcuni composti SG per il potenziale beneficio terapeutico nelle malattie di misfolding delle proteine (McColl 2012). E’ stato effettuato uno screening di composti SG selezionati in una popolazione di C. elegans, mediante l'uso di un metodo WF-NTP (perni et al 2018 Journal of Neuroscience Methods) che offre un comodo sistema in vivo per l'esame dell'accumulo di Aß e della tossicità in un organismo multicellulare complesso. Poiché questo animale ha un breve ciclo vitale, rappresenta un modello adatto per i composti candidati allo screening rapido, facilitando così l'identificazione delle relazioni strutturaattività.
Nello studio effettuato, i C. elegans che esprimono Aβ42 umano (McColl et al., 2012) sono stati trattati al giorno -1 con concentrazioni di 1, 5 e 10 μM di SG1 e SG2. La motilità è stata determinata utilizzando i protocolli descritti in Perni et al 2018. È stata osservata una relazione dose-dipendente ben definita tra il trattamento e il recupero della motilità per entrambi i composti, anche se l'attività di SG2 risulta essere più pronunciata rispetto a SG1 alla dose più bassa (1uM). I risultati sono rappresentati in figura 3.

Claims (15)

  1. RIVENDICAZIONI 1. Composto di formula (I):
    in cui X è scelto fra O (ossigeno) e CH2; n è un numero intero compreso fra 0 (zero) e 2; Z è scelto fra NH2, NCS, NO2, OR<3 >e NHCOR<4>; R<2 >è scelto nel gruppo che consiste di CH2NH2, CH2NR<5>R<6>, COOH, CH2COOH, COOR<7>, COR<8 >e CN; in cui R e R<1 >sono indipendentemente scelti fra idrogeno, alogeno, alchile inferiore e aloalchile inferiore; e R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7 >e R<8 >sono scelti indipendentemente l’uno dall’altro fra idrogeno e alchile inferiore, o un suo sale farmaceuticamente accettabile, per l’uso nel trattamento terapeutico o preventivo di una patologia neurodegenerativa.
  2. 2. Composto per l’uso secondo la rivendicazione 1, in cui R e R<1 >sono entrambi H.
  3. 3. Composto per l’uso secondo la rivendicazione 1, in cui R e R<1 >sono entrambi metile.
  4. 4. Composto per l’uso secondo la rivendicazione 1, in cui R è metile e R<1 >è H.
  5. 5. Composto per l’uso secondo la rivendicazione 1, in cui R è H e R<1 >è metile.
  6. 6. Composto per l’uso secondo la rivendicazione 1, in cui R è H e R<1 >è trifluorometile oppure è un atomo di fluoro.
  7. 7. Composto per l’uso secondo la rivendicazione 1, in cui R è trifluorometile oppure è un atomo di fluoro e R<1 >è H.
  8. 8. Composto per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 7, in cui n è zero o 1.
  9. 9. Composto per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 8, in cui R<2 >è CH2NH2, CH2NHCOCH3, COOH o CH2COOH.
  10. 10. Composto per l’uso secondo la rivendicazione 1, che è scelto dal gruppo che consiste di: composto SG-1, in cui R = R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NH2; R<2 >= CH2NH2; composto SG-2, in cui R = CH3; R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NH2; R<2 >= CH2NH2; composto SG-3, in cui R = R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NO2; R<2 >= COOH; composto SG-4, in cui R = CH3; R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NO2; R<2 >= COOH; composto SG-5, in cui R = R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NH2; R<2 >= COOH; composto SG-6, in cui R = metile; R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NH2; R<2 >= COOH; composto SG-7, in cui R = R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = OH; R<2 >= CH2NH2; composto SG-8, in cui R = R<1 >= H; X = CH2; n = 0; Z = NH2; R<2 >= CH2NH2; composto SG-9, in cui R = R<1 >= H; X = CH2; n = 0; Z = NO2; R<2 >= COOH; composto SG-10, in cui R = R<1 >= H; X = CH2; n = 0; Z = NH2; R<2 >= COOH; composto SG-11, in cui R=H; R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= OH; R<2 >= CH2NH2; composto SG-12, in cui R=H; R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= NH2; R<2 >= CH2NH2; composto SG-14, in cui R= R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= NH2; R<2 >= CH2NH2; composto SG-15, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=1; Z= NH2; R<2 >= CH2NH2; composto SG-19, in cui R= R<1 >=H; X=O; n=1; Z= NHCOCH3; R<2 >= CH2NHAc; composto SG-20, in cui R= R<1 >=H; X=O; n=1; Z= NHCOCH3; R<2 >= CH2NH2; composto SG-22, in cui R= H; R<1 >= CH3; X=O; n=1; Z= NHCOCH3; R<2 >= CH2NHCOCH3; composto SG-23, in cui R= H; R<1 >= CH3; X=O; n=1; Z= NHCOCH3; R<2 >= CH2NH2; composto SC-19, in cui R= H; R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= NHCOCH3; R<2 >= CH2NH2; composto EP-40, in cui R= H; R<1 >=CF3; X=O; n=1; Z= NH2; R<2 >= CH2NH2; composto ME-24, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=0; Z= NH2; R<2 >= CH2COOH; composto ME-26, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=0; Z= OH; R<2 >= CH2COOH; composto ME-31, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=1; Z= NH2; R<2 >= CH2NH2; composto ME-32, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=1; Z= OH; R<2 >= CH2NH2; composto ME-35, in cui R=H; R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= NH2; R<2 >= COOH; composto ME-36, in cui R=H; R<1 >=F; X=O; n=0; Z= NH2; R<2 >= CH2COOH; composto SG-51, in cui R = R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NCS; R<2 >= COOH; composto SG-61, in cui R = metile; R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NCS; R<2 >= COOH; composto SG-101, in cui R = R<1 >= H; X = CH2; n = 0; Z = NCS; R<2 >= COOH; composto ME-241, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=0; Z= NCS; R<2 >= CH2COOH; composto ME-351, in cui R=H; R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= NCS; R<2 >= COOH; composto ME-361, in cui R=H; R<1 >=F; X=O; n=0; Z= NCS; R<2 >= CH2COOH. e i loro sali farmaceuticamente accettabili.
  11. 11. Composto per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 10, in cui la malattia neurodegenerativa è la malattia di Alzheimer.
  12. 12. Composto per l’uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1 a 11, in cui il sale farmaceuticamente accettabile è scelto dal gruppo che consiste di cloridrati, bromidrati, fosfati, solfati, idrogeno solfati, alchilsolfonati, arilsolfonati, acetati, citrati, ossalati, maleati, fumarati, succinati, lattati e tartrati.
  13. 13. Composto di formula (I):
    scelto dal gruppo che consiste di: composto EP-40, in cui R= H; R<1 >=CF3; X=O; n=1; Z= NH2; R<2 >= CH2NH2; composto ME-24, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=0; Z= NH2; R<2 >= CH2COOH; composto ME-26, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=0; Z= OH; R<2 >= CH2COOH; composto ME-31, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=1; Z= NH2; R<2 >= CH2NH2; composto ME-32, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=1; Z= OH; R<2 >= CH2NH2; composto ME-35, in cui R=H; R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= NH2; R<2 >= COOH; composto ME-36, in cui R=H; R<1 >=F; X=O; n=0; Z= NH2; R<2 >= CH2COOH. composto SG-51, in cui R = R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NCS; R<2 >= COOH; composto SG-61, in cui R = metile; R<1 >= H; X = O; n = 1; Z = NCS; R<2 >= COOH; composto SG-101, in cui R = R<1 >= H; X = CH2; n = 0; Z = NCS; R<2 >= COOH; composto ME-241, in cui R= R<1 >= CH3; X=O; n=0; Z= NCS; R<2 >= CH2COOH; composto ME-351, in cui R=H; R<1 >= CH3; X= CH2; n=0; Z= NCS; R<2 >= COOH; composto ME-361, in cui R=H; R<1 >=F; X=O; n=0; Z= NCS; R<2 >= CH2COOH, e loro sali farmaceuticamente accettabili.
  14. 14. Composto secondo la rivendicazione 13, in cui il sale farmaceuticamente accettabile è scelto dal gruppo che consiste di cloridrati, bromidrati, fosfati, solfati, idrogeno solfati, alchilsolfonati, arilsolfonati, acetati, citrati, ossalati, maleati, fumarati, succinati, lattati e tartrati.
  15. 15. Composizione farmaceutica comprendente almeno un composto secondo la rivendicazione 13 o 14 ed un veicolo e/o eccipiente farmaceuticamente accettabile.
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