IT1272998B - Metodo per la amplificazione in vitro e l'espressione in cellule di mammifero di sequenze esogene di acidi nucleici - Google Patents

Metodo per la amplificazione in vitro e l'espressione in cellule di mammifero di sequenze esogene di acidi nucleici

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Lucia Monaco
Mathias Uhlen
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Metodo per l'amplificazione in vitro e l'espressione in cellule di mammifero di una sequenza codificante, caratterizzato dal fatto di comprendere i seguenti passaggi:a. clonare detta sequenza codificante in un sito per un primo enzima di restrizione di un primo vettore procariotico, sotto il controllo di un promotore in grado di funzionare in cellule di mammifero, e a monte di un sito di poliadenilazione, in cui detto primo vettore ha, a monte di detto promotore e a valle di detto sito di poliadenilazione, un sito per un secondo enzima di restrizione, rispettivamente in cui detto secondo enzima di restrizione riconosce una sequenza di almeno sei basi nucleotidiche; b. clonare, sostanzialmente con le stesse modalità del passaggio a, una sequenza codificante per un marcatore selezionabile in cellule eucariotiche in un secondo vettore procariotico, sostanzialmente simile a detto primo vettore, comprendente ulteriormente un sito per un terzo enzima di restrizione che riconosce una sequenza di almeno sei nucleotidi, a valle del sito di poliadenilazione e a monte del sito per detto secondo enzima di restrizione; in cui detto secondo enzima di restrizione è diverso da detto primo e da detto
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