HUT77005A

HUT77005A - Simaizom sejtburjánzást gátló polianionos benzil-glikozidok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények

Info

Publication number: HUT77005A
Application number: HU9702077A
Authority: HU
Inventors: John Watson Ellingboe; Thomas The Nguyen; Sarah Tobin Allen Novak; Richard Michael Soll
Original assignee: American Home Products Corporation
Priority date: 1994-11-07
Filing date: 1995-11-03
Publication date: 1998-03-02
Also published as: ES2136888T3; BR9509608A; AU4108196A; ATE185143T1; AU699670B2; EP0791005A1; US5565432A; IL115747A; DK0791005T3; HUT77756A; KR970707140A; FI971936A; GR3031682T3; MX9703286A; IL115747A0; JPH10508607A; EP0791005B1; NZ296459A; WO1996014324A1; DE69512528T2

Description

A találmány polianionos benzil-glikozidokra és simaizom sejtburjánzást gátlóként történő alkalmazásukra valamint a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítményekre vonatkozik, mely készítmények simaizom burjánzás túltengéssel, pl. resztenózissal jellemezhető betegségek és állapotok kezelésére alkalmasak.

Az érplasztikák valamennyi formája, mint pl. az angioplasztika és a vénás bypass eljárások, reakciót váltanak ki a sérülésre, amely végül is a simaizomsejt burjánzáshoz vezet (SMC), majd ezt követően nagy mennyiségű extracelluláris mátrix lerakódását idézi elő (Clowes, A. W.; Reidy, M. Á. J. Vasc. Surg 1991, 13, 885). Ezek az események az atheroszklerózis patogenézisének is központi folyamatai (Raines E. W.; Ross R. Br. Heart J. 1993, 69 (Supplement), S 30), valamint a transzplantációs arterioszklerózisnek is (Isik, F. F.; McDonald, T.O.; Ferguson, M.; Yamanaka, E.; Gordon Am. J. Pathol. 1992, 141, 1139). Az angioplasztikát követő resztenózis esetén a klinikailag megfelelő megoldások az SMC burjánzás szabályozására farmakoiógiai úton, mind a mai napig bizonytalanok maradtak (Herrman, J. P. R.; Hermans, W. R. M; Vos, J.; Serruys P. W. Aktaszám: 85574-1212A KY/hzs

-2Drugs 1993, 4, 18 és 249). A szelektív SMC burjánzásgátlás sikeres megközelítésének nem szabad befolyásolnia az endoteliális (belhám) sejtállapotot vagy más sejtek normális burjánzását és működését (Weissberg, P. L.; Grainger, D. J.; Shanahan C. M.; Metcalfe, J. C. Cardiovascular Rés. 1993, 27, 1191).

Valóban, fontos gyógyászati szempont, hogy elősegítsük a sérült terület újra endotelializálódását, egyidejűleg az SMC burjánzásgátlással (Casscells, W. Circulation 1992, 86, 722; Reidy, M. A.; Lidner, V. in Endothelial Cell Dysfunctions, Simionescu, N. és Simionescu M., Ed. Plenum Press, NY, NY, (1992), 31).

A glikóz-amino-glikán heparin- és heparán-szulfát az SMC burjánzás endogén inhibitorai, mégis képesek előidézni az endoteliális sejtnövekedést (Castellot, J. J. Jr.; Wright, T. C.; Karnovsky, M. J. Seminars in Thrombosis and Hemostasis 1987, 13, 489; Wight, T. N. Arteriosclerosis 1989, 9, 1).

A heparin, heparin-fragmensek, kémiailag módosított heparin, alacsony molekulatömegű heparinok és más heparin utánzó anionos poliszacharidok teljes klinikai előnyei más farmakológiái tulajdonságok következményei lehetnek (különösen túlzott vérzés antikoagulációs hatásból eredően), összekapcsolva különböző készítmények különbözőségével (Borman, S. Chemical and Engineering News, 1993, június 28, 27; Schmid, K. M.; Preisack, M.; Voelker, W.; Sujatta M.; Karsch, K. R. Seminars in Thrombosis and Hemostasis 1993, 19 (Suppl. 1), 155; Amann, F. W.; Neuenschwander, C.; Meyer, B.Seminars in Thrombosis and Hemostasis 1993, 19 (Suppl. 1), 160;

-3Radhakrishnamurthy, B.; Sharma, C.; Bhandaru, R. R.; Berenson, G. S.; Stanzani, L.; Mastacchi, R. Atherosclerosis, 1986 60, 141; Maffrand, J. P.; Hervert, Μ. M.; Bernat, A.; Defreyn, G.; Delevassee, D.; Savi, P.; Pinot, J. J.; Sampol, J. Seminars in Thrombosis and Hemostasis, 1991, 17 (Suppl. 2), 186).

Minthogy ezen szerek közül sok antikoaguláns hatást mutat és ezek függnek az SMC burjánzásgátló hatásától, az lett volna várható, hogy a homogénebb készítmények, melyeknek jobban definiált molekuláris szerkezete van, egy kívánatosabb profilt mutatnak kevesebb mellékhatással, amelyek a fent említett anionos poliszacharidokkal kapcsolatosak.

A WO 92/18546 számú szabadalmi bejelentés heparin speciális szekvenciáit írja le, amelyeket tiszta formában lehet előállítani szintézissel vagy heparin fragmens izolálással és ezek SMC burjánzásgátló hatást mutatnak. A béta-ciklodextrintetradeka-szulfátot leírták mint simaizomsejt burjánzást gátlót és hatékony resztenózis inhibitort (Weisz, Ρ. B.; Hermann, H. C.; Joullie, Μ. M.; Kumor, K.; Levine, E. M.; Macarak, E. J.; Winer, D. B. Angiogenesis: Key Principle - Science Technology - Medicine - Steiner R., Weisz, Ρ. B.; Langer, R. Eds. Birkhauser Verlag, Basel Switzerland, 1992, 107 old.; Hermann, H. C.; Okada, S. S.; Hozakowska, E.; LeVeen, R. F.; Golden, M. A.; Tomaszewski J. E.; Weisz, Ρ. B.; Barnathan E.

S. Arteriosclerosis and Thrombosis 1993, 13, 924; Reilly, C. F.; Fujita, T.; McFall, R. C.; Stabilito, I. I.; Wai-si E.; Johnson, R. G. Drug Development Research 1993, 29, 137). Az 501 9562 számú USA szabadalmi bejelentés ciklodextrinek anionos szár-4mazékait írja le a nem-kívánatos sejt- vagy szövetnövekedéssel kapcsolatos patológiás állapotok kezelésére. A WO 93/09790 szénhidrát-csoportonként legalább két anionos csoportot tartalmazó antiproliferatív polianionos ciklodextrin-származékot ír le. Meinetsberger a 312087 A2 és 312086 A2 számú európai szabadalmi leírásokban szulfátéit bisz-aldonsav-amidok antikoaguláns és antitrombotikus hatását írja le.

A 4,431,636, 4,431,637, 4,431,638 és 4,435,387 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírások poliszulfatált tio- és oxi-aril-glikozid-származékokat írnak le mint a komplement rendszer modulátorait.

A találmány szerinti vegyületek annyiban különböznek az irodalomban szereplőktől, hogy a) benzil-glikozidok, melyek szerkezetileg nem hasonlítanak a heparinra, szulfátéit ciklodextrinekre vagy szulfatált laktobionsav-dimerekre, b) nem tartalmaznak 3-nál több szomszédos cukormaradékot (triszacharidot) és c) meghatározott összetételűek.

A találmány tárgya (I) általános képletű szulfatált benzilglikozidok és alkalmazásuk.

Az (I) általános képletben az összes R¹, R², R³ és R⁴egymástól függetlenül hidrogénatom, SO₃M vagy a) képletű cukorcsoport, és az összes oligoszacharid-csoport b) képletű és 1-3 cukorcsoportot tartalmaz,

M jelentése lítium, nátrium, kálium vagy ammónium, n értéke 1 vagy 2,

X jelentése hidrogén- vagy halogénatom, 1-6 szénatomos alkil- vagy alkoxicsoport,

Y jelentése karbonil- vagy szulfonilcsoport,

Z jelentése -(CH₂)p-, ahol p 1-12 közötti egész szám, vagy c), d), e) vagy f) képletű csoport és X jelentése a fenti, vagy gyógyászatilag elfogadható sója.

Ha R¹ többször fordul elő egy (I) általános képletű molekulában, akkor ezek azonosak vagy különbözőek lehetnek. Hasonlóképpen, ha R², R³ vagy R⁴ többször fordul elő, akkor ezek is azonosak vagy különbözőek lehetnek a másik R², R³ vagy R⁴től. Hasonlóképpen, ha Y fordul elő egy adott molekulában, akkor jelentésük azonos vagy különböző lehet, ugyanez a helyzet n esetében.

A rövidszénláncú alkilcsoport lehet egyenes vagy elágazó láncú és jelenthet metil-, etil-, propil-, izopropil- vagy butilcsoportot. Hasonlóképpen az alkoxicsoport egyenes vagy elágazó láncú lehet és lehet pl. metoxi-, etoxi-, propoxi-, izopropoxi- vagy butoxicsoport.

Előnyös (I) általános képletű vegyületek azok, ahol R¹, R², R³ és R⁴ az összes előfordulásában egymástól függetlenül hidrogénatom, SO₃M vagy a) képletű csoport lehet vagy az összes oligoszacharid b) képletű csoport, amely 1 vagy 2 cukorcsoportot tartalmaz,

M jelentése lítium, nátrium, kálium vagy ammónium, n értéke 1 vagy 2,

X jelentése hidrogén- vagy halogénatom, rövidszénláncú 1-6 szénatomos alkil- vagy alkoxicsoport,

Y jelentése karbonil- vagy szulfonilcsoport,

Z 1-12 szénatomos alkilcsoport vagy

vagy gyógyászatilag elfogadható sója.

A legelőnyösebb találmány szerinti vegyületek a kővetkezők:

Dodekándisav-bisz-{[2-metil-5-(hepta-O-szulfáto-p-Dcellobiozil-oximetil)-fenil]-amid}-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

N,N^,-Bisz-[5-(hepta-O-szulfáto-p-D-cellobiozil-oximetil)-2metil-fenil]-tereftálamid-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[5-hepta-O-szulfáto-p-Dcellobiozil-oximetil)-2-metil-fenil]-amid}-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

N,N'-Bisz-[5-(hepta-O-szulfáto-p-D-cellobiozil-oximetíl)-2metil-fenil]-izoftálamid-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Dekándisav-bisz-{[3,5-bisz-(hepta-O-szulfáto-P-Dcellobiozil-oximetil)-fenil]-amid}-oktakóza-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5-bisz-(hepta-O-szulfáto-pD-cellobiozil-oximetil)-fenil]-amid}-oktakóza-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

• · *

-7Bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5-bisz-(hepta-O-szulfáto-pD-laktozil-oximetil)-fenil]-amid}-oktakóza-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5-(bisz-(hepta-O-szulfátop-D-maltozil-oximetil)-fenil]-amid}-oktakóza-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5-bisz-(tetra-O-szulfáto-pD-glükozil-oximetil)-fenil]-amid}-hexadeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[2-klór-5-(hepta-O-szulfáto-pD-cellobiozil-oximetil)-fenil]-amid}-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[4-klór-2-(hepta-O-szulfáto-pD-cellobiozil-oximetil)-fenil]-amid}-tetradeka-nátriiimsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

N,N'-Bisz-[3,5-bisz-(hepta-0-szulfáto-p-D-cellobioziloximetil)-fenil]-szukcinamid-oktakóza-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

N.N'-Bisz-tS.S-bisz-íhepta-O-szulfáto-p-D-cellobioziloximetil)-fenil]-tereftálamid-oktakóza-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Bifenil-4,4'-disziilfonsav-bisz-{[2-metil-5-(hepta-O-szulfátop-D-cellobiozil-oximetil)-fenil]-amid}-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

N,N'-Bisz-[2-metil-5-(2₁3,4,6-tetra-O-szulfáto-p-Dglükopiranozil-oximetil)-fenil]-szukcinamid-okta-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

• ·

-83,3'-[N,N'-Ureido]-bisz-{B-[2-metil-5-(hepta-O-szulfáto-p-Dmaltozil-oximetil)-fenil]}-benzamicl-tetracleka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

3,3'-(N,N'-Ureido)-bisz-({N-[2-klór-5-(hepta-O-szulfáto-p-Dcellobiozil-oximetil)-fenil]}-benzamid)-tetradeka-nátriumső vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

N,N'-Bisz-{3-[2-metil-5-(hepta-O-szulfáto-p-D-maltoziloxi meti l)-fen il-karbamoil]-fenil}-izofta lám id-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója.

A találmány az 1. reakcióvázlat szerint állítható elő, ahol R, η, X, Y és Z jelentése a fenti.

Az 1. általános képletű glikozil-bromidot 2. képletű benzilalkohollal kondenzáljuk katalizátor, pl. higany-bromid, higanycíanid, ezüst-trifIát vagy ezüst-perklorát jelenlétében aprotikus oldószerben, pl. diklór-metánban, éterben, toluolban vagy nitrometánban -40°C-tól szobahőmérsékletig, és így 3. képletű glikozidot kapunk. A 3. képletű vegyület nitrocsoportjának redukcióját redukálószerrel, pl. ónkloriddal végezhetjük poláros aprotikus oldószerben, pl. etil-acetátban szobahőmérséklettől refluxig, vagy katalitikus hidrogénezéssel katalizátor, pl. palládium/csontszén jelenlétében, és így 4. képletű anilinovegyületei kapunk. A 4. képletű vegyületet bisz-savkloriddal vagy szulfonil-kloriddal (CIY-Z-YCI) aminbázis, pl. trietil-amin vagy diizopropil-etil-amin jelenlétében kondenzálhatjuk aprotikus oldószerben, pl. diklór-metánban vagy tetrahidrofuránban, és a cukrokon jelenlévő bármelyik acetátcsoportot bázissal, pl. nátrium-metoxiddal hidrolizáljuk metanolban vagy vizes nátrium-hidroxiddal metanolban szobahőmér-

-9séklettöl refluxig, és néhány vagy valamennyi szabad hidroxilcsoportot a cukrokon szulfatálhatjuk egy reagenssel, pl. kéntrioxid-trimetil-amin komplexszel vagy kén-trioxid-piridin komplexszel poláros aprotikus oldószerben, pl. dimetil-formamidban vagy dimetil-szulfoxidban 0 - 100°C-ig terjedő hőmérsékleten, és így kapjuk az (I) általános képletű célvegyületeket.

Másik módszer szerint a szulfátcsoportot a 3. képletű vegyületbe vihetjük az acetátcsoportok hidrolízise után és a 3. képletű szulfátéit vegyületet ezután 4. képletű szulfátéit vegyületté redukálhatjuk és CIY-Z-YCI képletű vegyülettel kondenzálva kaphatjuk az (I) általános képletű vegyületet.

A találmány gyógyszerkészítményekre is vonatkozik, amelyek önmagukban vagy segédanyagokkal, pl. gyógyászatilag elfogadható farmakológiai hatás nélküli segédanyagokkal együtt szulfátéit benzil-glikozidokat tartalmaznak. Az ilyen készítmények alkalmasak arra, hogy olyan betegségeket vagy állapotokat kezeljünk velük, amelyeket a túlzott simaizom sejtburjánzás, pl. resztenózis jellemez és amely gyakran az érplasztikai sebészeti vagy átültetési beavatkozások következménye, mint amilyenek pl. a felfújással végzett angioplasztika, az érátültetési sebészet, a koronária artéria bypass sebészet és a szívátültetések. Más betegségek, amelyeknek során nem kívánatos az érburjánzás, pl. a magas vérnyomás, az asztma és a vértolulásos szívelégtelenség. A találmány szerinti vegyületek az ilyen betegségek és állapotok kezelésére is használhatók.

A találmány szerinti vegyületeket szisztematikusan adagolhatjuk pl. intravénás injekcióval, rendszerint 0,1 - 10 mg /kg/óra dózisban 5-30 napig, vagy szubkután injekcióval alacsonyabb ·:.·♦. :·Γ

·.:·X^^: ·^: ’tj

-10dózisban vagy orális adagolással az intravénás injekciónál nagyobb dózisban. A találmány szerinti vegyületek lokalizált szállítását el lehet érni transzmembránnal, transzdermálisan vagy más topikális adagolási móddal, megfelelő folyamatos hatóanyag felszabadulást biztosító eszköz, pl. hordozó mátrix segítségével, ahol az ilyet lehet alkalmazni. A találmány szerinti vegyületeket a szokásos segédanyagokkal szerelhetjük ki, pl. használhatunk töltőanyagot, szétesést elősegítő szert, kötőanyagot, kenőanyagot, ízesítőszert, stb. Ezeket ismert módon készíthetjük el. A találmány szerinti vegyületeket bármilyen módon és koncentrációban adagolhatjuk, amely a páciens számára hatékony. A szállítás módját és a gyógyszerdózis koncentrációját valamint a készítmény fajtáját egyénileg határozza meg az orvos vagy más gyógyászati szakember, aki a beteget kezeli.

Sejtburjánzásra gyakorolt hatások

A. Seitforrások

A találmány szerinti vegyületek simaizom burjánzást gátló és endoteliális sejtnövekedés moduláló hatását kereskedelmi forrásból vagy bizonyos házilag előállított fajtából kapott izolált aortasejtek alkalmazásával állapítjuk meg. A tanulmány során használt sejtvonalak humán- és sertésaorta simaizom sejtek és humán aorta endoteliális sejtek. A humán aorta sejtvonalakat a Clonetics Corporationtől (San Diego) szereztük be.

Egy helyi vágóhídról kapott sertésaortákat a szállítás alatt jegelünk. Az aortát alaposan megtisztítjuk a zsírszövettől és steril foszfát-pufferezett fiziológiás sóoldatban 2 % antibiotikumot tartalmazó antimikotikumban öblítjük (Gibco katalógusszám: 600 - 5240 AG). A szövetet ezután 10 - 15 ml enzimelegyben

-11 digeráljuk, amely elegy 165 U/ml I. típusú kollagenázt, 15 ml III. típusú elasztázt, 2 mg/ml BSA-t, 0,375 mg/ml szójabab tripszin inhibitort tartalmaz. Ezután 37°C-on inkubáljuk 10 - 15 percig 5 %-os széndioxid alatt. Ezután a kezelés után a járulékos szervek külső felületét könnyen eltávolítjuk úgy, hogy csipesszel lehántjuk. Az aortát ezután hosszirányban elvágjuk és feltárjuk, az endoteliális réteget pedig kaparással eltávolítjuk.

A sejtek középső rétegét enzimoldattal öblítjük és egy 10 ml enzimoldatot tartalmazó új 100 mm-es edénybe helyezzük. Az aortát finom ollóval felaprítjuk és 2 - 3 óra hosszat 37°C-on 30 ml friss enzimoldattal digeráljuk. A digerálás után a szövetet tűzzel fényesített hegyű steril pásztor pipettával vagy egy 200 1000 μΙ steril pipettavégű eppendorf pipettával homogenizáljuk. A szuszpenziót ezután 10 percig 8000 rpm mellett centrifugáljuk és a pelletet 4 - 6 ml friss táptalajban szuszpendáljuk és szellőztetett kupakkal rendelkező 4 - 6 100 mm-es lombikra lemeztenyésztjük. A sejteket hagyjuk összefolyásig növekedni, majd 0,25 %-os tripszinnel hasítjuk. A sejteket kiértékeljük tisztaságra és az összminőségre SMC aktin antitest alkalmazásával.

B. A vegvületek sejtburjánzásra gyakorolt hatásának vizsgálata ³H timidin elegyítéssel

A sejteket korai átoltásban, általában 3-7 átoltásban vizsgáljuk összefolyó körülmények között. A tenyészeteket többüregű 16 mm-es, 24 üregű tenyészedényben növesztjük 199-es táptalajban, amelyet 10 % marha magzati szérummal és 2 % antibiotikummal ill. antimikotikummal egészítünk ki. összefolyásnál a sejteket meghatározott szérummentes táptalajba helyez-

-12zük (AIM-V; Gibco) 24 - 48 órára, mielőtt a kísérleti jegyzőkönyvet felvennénk.

Bár a vegyületeket hatékonyabbnak találtuk hosszabb preinkubációval, általában a kísérleteket úgy indítottuk, hogy hozzáadtuk a vegyületet, a ³H timidint és a szérum növekedési faktort a szérummentes szinkronizált sejtekhez és az eredményeket ennek megfelelően jegyeztük fel. A növekedési faktort és a szérum stimulálásokat minden sejttípusra optimalizáltuk.

A vegyületeket minden üregbe 50-szeres hígításban adagoltuk (20 μΙ/üreg) és a lemezeket 24 - 36 óra hosszat inkubáltuk 37°C-on 5 %-os széndioxidban. A vegyületeket kezdetben 50 %os etanolban oldottuk és sorhígításnak vetettük alá a táptalajba. A vegyületeket rutinszerűen vizsgáltuk 1-100 pmol koncentrációban. Kontrollként egy II. fokozatú sertésbél nyálkahártya heparin nátriumsót használtunk (Sigma H-7005) és ezt rutinszerűen vizsgáltuk valamennyi sejtkészítményben 0,1 - 100 pg/ml koncentrációban.

A kísérlet befejezése után a lemezeket jégre helyeztük, háromszor mostuk jéghideg foszfát-pufferezett fiziológiás sőoldattal (PBS) és jéghideg 10 %-os triklór-ecetsavban inkubáltuk 30 percig, hogy a savoldékony proteineket eltávolítsuk. Az oldatot szcintillációs fiolákba helyeztük, amelyek 0,4 N-sósavat tartalmaztak (500 μΙ/fiola a nátrium-hidroxid semlegesítésére) és minden üreget kétszer öblítettünk át 500 μΙ vízzel 2 ml/fiola össztérfogatra.

Háromszoros ismétlésben kaptuk az adatokat, mind a kontrollra, mind a kísérleti mintákra. A 100 %-os kontroll adatokat a maximálisan ingerelt sejtekből kaptuk, a növekedési faktor vagy • ·

-13a szérum ingerlés eredményeképpen. A kísérleti adatokat a növekedési faktorral vagy szérummal maximálisan ingerelt és a vegyülettel kezelt sejtekből kaptuk. Az adatokat a kontroll százalékában fejeztük ki, amelyből meg lehetett határozni a gátlási százalékot vagy az ICso értéket. A találmány szerinti vegyületek hatékony simaizom burjánzás inhibitorok, ennek összegzése a I. táblázatban található. Továbbá, a találmány szerinti vegyületek humán simaizom sejt burjánzásgátló hatást fejtenek ki (HAOSMC) olyan esetben, amikor a burjánzás 10 %-os magzati marhaszérum (FBS) vagy trombocitamentes növekedési faktor (PDGF, humán rekombináns PDGF-AB, Upstate Biotechnology Inc., Laké Piacid,NY) következményeként jön létre. Például a 18. példa szerinti szulfatált vegyület az FBS (IC_So2OOnM) által előidézett HAOSMC burjánzást gátolja, továbbá gátolja az 5 ng/ml PDGF által előidézett burjánzást is (IC₅o38OnM).

C. Az endoteliális sejtnövekedés hatása a simaizom sejtburjánzásra

A simaizom sejtburjánzással egyidejű endoteliális sejtburjánzás elősegítése fontos szempont az érátalakításból eredő sérülésre adott túlzott reakció gátlásánál. A találmány szerinti vegyületek fokozzák a humán belhám sejtnövekedést, amelyet a 2 %-os FBS idéz elő, olyan dózisokban, amelyek gátolják a humán simaizom sejtburjánzást, amelyet a 10 %-os FBS idéz elő. Ezt a 18. példa szerinti szulfatált vegyület mutatja be, Isd. az 1. ábrát.

D. Citotoxicitás

Vizuálisan valamennyi sejtről azt találtuk, hogy valamennyi vegyületet nagymértékben tolerálják, azonban annak érdekében,

-14hogy a toxicitást teljesen kizárjuk, megvizsgáltuk a vegyületek citotoxicitását az MTT (3-[4,5-dimeti l-tiazol-2-i l]-2,5-dif en i Itetrazolium-bromid) kereskedelmi módosításával. Röviden, a sejteket ismét növesztettük 24-üregű lemezeken 70 - 80 %-os összefolyásig és mint fent, szérummentesítettük a kísérleti jegyzőkönyv felvétele előtt 24 - 48 óra hosszat. Annak érdekében, hogy az MTT kísérlettel a toxicitást vizsgáljuk és ne a burjánzást, a sejteket 100 gg/ml gyógyszerrel inkubáltuk friss táptalajban 24 óra hosszat, szérum nélkül, 37°C-on nedvesített széndioxid-inkubátorban. A vegyülettel történő kezelés után MRR (3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difenil-tetrazólium-bromid) indikátor festéket adtunk hozzá 4 óra hosszat 37°C-on. Ezután a sejteket lizáltuk és minden üregből alikvotokat helyeztünk egy 96 üregű lemezbe analízis céljából. Az 570 nm hullámhossznál mutatott abszorbanciát 630 nm referencia hullámhossz mellett ELISA lemezolvasóval regisztráltuk. Az eredményeket az életképesség %-ában határoztuk meg, miközben nem használtunk gyógyszert (100 %-os életképesség) és előszolubilizációs standardot használva (0 %-os életképesség). A 10 - .25. és 26. példa 5. lépése szerinti szulfátéit vegyületek esetében 250 μΐηig nem figyeltünk meg toxicitást.

Antikoaguláns hatás

A találmány szerinti vegyületek alvadásgátló hatását egy parciális tromboplasztin időkísérlettel értékeltük ki (APTT) normális humán plazmát alkalmazva, amelyet Fenichel és tsai szerint gyűjtöttünk 5 donorból (Clin. Chem. 1964, 10, 69). Egy BBL fibrométer automatikus precíziós koagulációmérő órát használtunk 0,3 ml mintánál. Egy ellagsavval aktivált parciális

9·-15tromboplasztint használtunk ezekhez a kísérletekhez és ezt a reagenst hozzáadtuk a humán citrált plazmához, melyet 37°C-on egyensúlyoztunk egy vérrögmérő órával egy műanyag üregben. 37°C-on kalciumot adtunk hozzá, a vérrögmérő órát beindítottuk és feljegyeztük a fibrin vérrőgképződési időt másodpercekben. A plazmához adott vegyületek hatását 12,5 - 200 pg/ml koncentrációtartományban meghatároztuk. Bármelyik plazmához, amelyik nem alvadt meg 240 mp után, 240 mp-es alvadási időt jegyeztünk fel. Az 1,25 - 10 pg/ml koncentrációtartományban egy nem frakcionált heparin komparátort (összehasonlító műszert) használtunk. Valamennyi koncentrációra az alvadási teszteket háromszoros ismétlésben végeztük el és randomizált (véletlenszerű) blokkszerkezetre a variancia analízisét használtuk az alvadási időkben észlelt különbségek szignifikanciájának meghatározására. A hatást a heparinhez viszonyítottuk, az 1nél nagyobb arány azt mutatja, hogy pg/ml szinten összevetve a hatás gyengébb a heparinhoz viszonyítva.

I. Táblázat

Példa szerinti szulfátéit vegyület	Sertés simaizomsejt antiburjánzó hatás IC₅₀ vagy (gátlás % x koncentrációnál	Antikoaguláns hatás (ΑΡΤΤ) heparinhoz viszonyítva
26. példa, 5. lépés	118 pm	nem vizsgáltuk
25. példa	8 % gátlás 50 pg/ml-nél	nem vizsgáltuk
10. példa	161 μιτι	nem vizsgáltuk
24. példa	58 μπι	nem vizsgáltuk
11. példa	117 μπι	nem vizsgáltuk
12. példa	72 μΓϊΐ	nem vizsgáltuk
13. példa	40,5 - 80 μηη	nem vizsgáltuk

···· ·· ί··· ·· fi·· ./Hfcp .üti

-16I. Táblázat - folytatás

Példa szerinti szulfátéit vegyület	Sertés simaizomsejt antiburjánzó hatás IC₅o vagy (gátlás % x koncentrációnál	Antikoaguláns hatás (APTT) heparinhoz viszonyítva
14. példa	3 pm	6,7
15. példa	4,7 pm	2,0 - 2,3
20. példa	45 pm	nem vizsgáltuk
21. példa	43 pm	nem vizsgáltuk
22. példa	5,2 - 22 pm	2,0
16. példa	3,6 pm	2,2
17. példa	23 - 50,8 pm	lényegtelen hatás 50 pg/ml-nél
18. példa	0,85 pm	2,1
19. példa	(10-50 % gátlás 20 pm-nél	nem vizsgáltuk
23. példa	9,5 - 40 pm	2,0
heparin (H7005)	(45-83 % gátlás 50 pg/ml-nél	1

A találmány további részleteit a következő példákkal illusztráljuk.

1. Példa

1. Lépés

5-(Hepta-O-acetil-B-D-maltozil-oximetil)-2-metil-1 -nitrobenzol

4,0 g, 24 mmól 4-metil-3-nitrobenzil-alkohol és 20,0 g, 29 mmól acetobróm-a-maltóz 60 ml nitro-metánnal készített elegyéhez 6,15 g, 24 mmól higany-cianidot és 6,91 g, 19 mmól higany-bromidot adunk. Az elegyet egész éjjel szobahőmérsékleten keverjük, majd befagyasztjuk telített nátrium-kloriddal és 20 percig keverjük. A reakcióelegyet diklór-metánban extraháljuk.

·· Λ·· • Κ ·

-17A szerves fázist telített nátrium-kloriddal mossuk, magnéziumszulfáttal szárítjuk, gyorskromatografáljuk. Etil-acetát és petroléter 1:2 és 1:1 arányú elegyével eluáljuk. Éter és petrol-éter 3:1, majd 4:1, végül 100:0 arányú elegyével újra kromatografálva 7.97 g címszerinti vegyületet kapunk színtelen szilárd anyag formájában.

¹H-NMR (CDCI₃, 300 MHz) 6 7,92 (s, 1H), 7,41 (d, 1H), 7,32 (d, 1H), 5,42 (d, 1H), 5,36 (t, 1H), 5,25 (t, 1H), 5,06 (t, 1H), 4,8 - 5,0 (m, 3H), 4,65 (d, 1H), 4,62 (d, 1H), 4,54 (dd, 1H), 4,2 - 4,3 (m, 2H), 3,9 - 4,1 ( m, 3H), 3,65 - 3,71 (m, 1H), 2,60 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,03 (s, 6H), 2,01 (s, 3H) és 2,00 ppm (s, 3H).

2. Lépés

5-(Hepta-O-acetil-B-D-maltozil-oximetil)-2-metil-fenil-amin

A Eljárás: 4,0 g, 5,09 mmól 1. példa szerint előállított 5(hepta-O-acetil-3-D-maltozil-oximetil)-2-metil-1 -nitrobenzol és 8,00 g, 35 mmól ón-diklorid-hidrát 100 ml etil-acetáttal készített elegyét visszafolyató hűtő alatt 2 óra hosszat melegítjük. A reakcióelegyet lehűtjük szobahőmérsékletre és telített nátriumhidrogén-karbonáttal befagyasztjuk. 15 percig keverjük az elegyet, 200 ml diklór-metánnal hígítjuk és szolka pelyhen keresztül leszűrjük (diklór-metán). A szerves fázist magnézium-szulfát felett szárítjuk, bepároljuk, gyorskromatografáljuk. Etil-acetát és diklór-metán 1:5, majd 1:4, majd 1:2, végül 1:1 arányú elegyével eluálva 3,42 g, 89 % címszerinti vegyületet kapunk színtelen hab formájában.

’H-NMR (CDCI₃, 300 MHz) δ 7,01 (d, 1H), 6,63 (s, 1H), 6,62 (d, 1H), 5,41 (d, 1H), 5,39 (t, 1H), 5,20 (t, 1H), 5,05 (t,

-181Η), 4,82 - 4,90 (m, 2H), 4,75 (d, 1H), 4,54 (d, 1H), 4,51 (d, 1H), 4,26 (dd, 2H), 3,95 - 4,01 (m, 3H), 3,63 - 3,67 (m, 1H), 2,17 (s, 6H), 2,11 (s, 3H), 2,03 (s, 6H), 2,00 (s, 3H) és 1,99 ppm (s, 6).

B Eljárás: 31,1 g, 39,6 mmól 1. példa 1. lépése szerint előállított 5-(hepta-O-acetil-p-D-maltozil-oximetil)-2-metil-1nitrobenzol oldatot 50 psi nyomáson 10,0 g 10 %-os palládium/csontszén felett 1 óra hosszat hidrogénezzük. A katalizátort leszűrjük, a szűrletet bepároljuk, a kapott fehér habot vízzel eldörzsöljük. 28,0 g, 94 % címszerinti vegyületet kapunk fehér szilárd anyag formájában, amely 154-156°C-on olvad.

2. Példa

1. Lépés

5-(Hepta-Q-acetil-B-D-cellobiozil-oximetil)-2-metil-1 -nitrobenzol

A címszerinti vegyületet az 1. példa 1. lépése szerint 47 %-os termeléssel állítjuk elő 4-metil-3-nitrobenzil-alkohol és acetobróm-cellobióz alkalmazásával. A tisztítást gyorskromatográfiásan végezzük, etil-acetát és petrol-éter 1:2-1:1 - 2:1 arányú elegyével eluáljuk.

¹H-NMR (CDCI₃, 300 MHz) 6 7,91 (s, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,32 (d, 1H), 4,80 - 5,20 (m, 6H), 4,40 - 4,80 (m, 4H), 4,36 (dd, 1H), 4,02 - 4,13 (m, 2H), 3,81 (t, 1H), 3,60 - 3,68 (m, 2H), 2,60 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,01 (s, 3H) és 1,98 ppm (s, 3H).

2. Lépés

5-(Hepta-O-acetil-B-D-cellobiozil-oximetil)-2-met il-f eni I-amin f

f··

-19A címszerinti vegyületet, amely 180-182°C-on olvad, 62 %os termeléssel állítjuk elő az 1. példa 2. lépése A eljárása szerint 5-(hepta-O-acetil-p-D-cellobiozil-oximetil)-2-metil-1 nitrobenzolból. A tisztítást gyorskromatográfiásan végezzük, etil-acetát és petrol-éter 1:1 - 2:1 arányú elegyével eluáljuk.

¹H-NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 6,86 (d, 1H), 6,48 (d, 1H),

6,36 (dd, 1H), 5,24 (t, 1H), 5,10 (m, 1H), 4,80 - 4,90 (m, 3H), 4,61 - 4,72 (m, 2H), 4,56 (d, 1H), 4,30 - 4,31 (m, 2H), 4,22 (dd, 1H), 4,08 (dd, 1H), 3,99 - 4,03 (m, 1H), 3,94 (dd, 1H), 3,73 3,81 (m, 2H), 2,10 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,94 (s, 3H) és 1,91 ppm (s, 1H); tömegspektrum (+FAB) m/z 778.

Analízis a C34H46NO18 képlet alapján: számított: C, 53,97; H, 6,13; N, 1,85;

talált: C, 53,67; H, 5,92; N, 1,62.

3. Példa

1. Lépés

5-(Hepta-O-acetil-B-D-cellobiozil-oximetil)-2-klór-1-nitrobenzol

A címszerinti vegyületet az 1. példa 1. lépése szerinti eljárással 45 %-os termeléssel állítjuk elő 4-klór-3-nitrobenzilalkoholból és acetobróm-celiobiózból.

¹H-NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 7,82 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,42 (dd, 1H), 4,80 - 5,20 (m, 5H), 4,73 (d, 1H), 4,51 - 4,66 (m, 4H),

4,30 - 4,40 (m, 1H), 4,03 - 4,11 (m, 2H), 3,81 (t, 1H), 3,60 - 3,68 (m, 2H), 2,13 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,99 (s, 3H) és 1,57 ppm (s, 3H).

2. Lépés

5-(Hepta-O-acetil-B-D-cellobiozil-oximetil)-2-klór-fenil-amin

A címszerinti vegyületet 61 %-os termeléssel szilárd anyagként állítjuk elő 5-(hepta-acetil-p-D-cellobiozil-oximetil)-2klór-1-nitrobenzolból éterrel történő eldörzsőléssel az 1. példa 1. lépése A eljárása szerint.

¹H-NMR (CDCI₃, 300 MHz) δ 7,20 (d, 1H), 6,75 (s, 1H), 6,60 (d, 1H), 4,89 - 5,19 (m, 5H), 4,73 (d, 1H), 4,47 - 4,60 (m, 4H),

4,36 (dd, 1H), 4,02 - 4,13 (m, 2H), 3,80 (t, 1H), 3,55 - 3,67 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 2,02 (s, 6H), 2,01 (s, 3H) és 2,00 ppm (s, 3H).

4. Példa

1. Lépés

2-(Hepta-O-acetil-B-D-cellobiozil-oximetil)-4-klór-1 -nitrobenzol

A címszerinti vegyületet az 1. példa 1. lépése szerint 47 %os termeléssel állítjuk elő 5-klór-2-nitrobenzil-alkoholból és acetobróm-cellobiózból. Gyorskromatográfiásan részben tisztítjuk, diklór-metán és etil-acetát 6:1 arányú elegyével eluáljuk és a terméket felhasználjuk a következő reakcióban.

’H-NMR (CDCI₃, 300 MHz) δ 8,09 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,43 (dd, 1H), 4,90 - 5,25 (m, 8H), 4,63 (d, 1H), 4,52 (d, 1H), 4,49 (d, 1H), 4,38 (dd, 1H), 4,03 - 4,16 (m, 3H), 3,79 (t, 1H), 3,60 - 3,68 (m, 2H), 2,13 (s, 3H), 2,10 (s, 6H), 2,04 (s, 6H), 2,01 (s, 3H) és 1,98 ppm (s, 3H).

2. Lépés

2-(Hepta-Q-acetil-B-D-ceHobiozil-oximetil)-4-klór-fenil-amin

A címszerinti vegyületet 55 %-os termeléssel állítjuk elő az 1. példa 2. lépése A eljárása szerint 2-(hepta-O-acetil-p-D« · ·

-21 céllobiozil-oximetil)-5-klór-1 -nitrobenzolból. A tisztítást éterrel eldörzsölve végezzük.

¹H-NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 7,11 (dd, 1H), 7,04 (d, 1H), 6,65 (d, 1H), 5,03 - 5,18 (m, 3H), 4,88 - 4,97 (m, 2H), 4,45 4,80 (m, 5H), 4,36 (dd, 1H), 4,02 - 4,13 (m, 2H), 3,60 - 3,81 (m, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,01 (s, 6H), 2,00 (s, 3H) és 1,98 ppm (s, 3H).

Példa

1. Lépés

5-(Tetra-O-acetil-B-D-glükopiranozil-oximetil)-2-metil-1 -nitrobenzol

A címszerinti vegyületet 54 %-os termeléssel állítjuk elő az 1. példa 1. lépése szerinti eljárással a-D-glükopiranozil-bromidtetraacetátból és 4-metil-3-nitrobenzil-alkoholból.

¹H-NMR (CDCb, 300 MHz) δ 7,92 (d, 1H), 7,43 (dd, 1H), 7,33 (d, 1H), 5,06 - 5,24 (m, 3H), 4,92 (d, 1H), 4,66 (d, 1H),

4.59 (d, 1H), 4,28 (dd, 1H), 4,18 (dd, 1H), 3,68 - 3,72 (m, 1H),

2.60 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,03 (s, 3H) és 2,01 ppm (s, 3H).

Lépés

5-(Tetra-O-acetil-B-D-glükopiranozil-oximetiB-2-metil-fenil-amin

A címszerinti vegyületet 63 %-os termeléssel állítjuk elő az 1. példa 2. lépése A eljárása szerint 5-(tetra-O-acetil-p-Dglükopiranozil-oximetil)-2-metil-nitrobenzolból és a nyers reakcióelegyet éterrel eldörzsölve tisztítjuk.

¹H-NMR (CDCb, 300 MHz) δ 7,02 (d, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,63 (d, 1H), 5,02 - 5,17 (m, 3H), 4,79 (d, 1H), 4,50 - 4,55 (m, 2H),

-224,29 (dd, 1H), 4,17 (dd, 1H), 3,64 - 3,68 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,01 (s, 3H) és 2,00 ppm (s, 3H).

6. Példa

1. Lépés

3.5- Bisz-(hepta-O-acetil-B-D-cellobiozil-oximetil)-1-nitrobenzol

A címszerinti vegyületet 42 %-os termeléssel állítjuk elő az 1. példa 1. lépése szerinti eljárással 1 ekvivalens 5-nitro-mxilol-a,a'-diol, 2 ekvivalens acetobróm-cellobióz és 2 ekvivalens valamennyi egyéb reagens alkalmazásával. Gyorskromatográfiásan tisztítjuk, etil-acetát és diklór-metán 3:1 arányú elegyével eluáljuk és éterrel eldörzsöljük.

¹H-NMR (CDCI₃, 300 MHz) δ 8,10 (s, 2H), 7,48 (s, 1H), 4,88 - 5,30 (m, 12H), 4,68 (d, 2H), 4,52 - 4,59 (m, 6H), 4,38 (dd, 2H), 4,00 - 4,13 (m, 4H), 3,82 (t, 2H), 3,58 - 3,68 (m, 4H), 2,13 (s, 6H), 2,08 (s, 6H), 2,07 (s, 6H), 2,03 (s, 12H), 2,01 (s, 6H) és 1,98 ppm (s, 6H).

2. Lépés

3.5- Bisz-(hepta-O-acetil-B-D-cellobiozil-oximetil)-fenil-amin

A címszerinti vegyületet az 1. példa 2. lépésének A eljárásával 54 %-os termeléssel állítjuk elő 3,5-bisz-(hepta-O-acetilB-D-cellobiozil-oximetil)-1-nitrobenzolból. A tisztítást gyorskromatográfiásan végezzük, etil-acetát és petrol-éter 1:1 arányú elegyét használjuk eluálószerként.

¹H-NMR (CDCI₃, 300 MHz) δ 6,73 (bs, 2H), 6,67 (bs, 1H), 5,03 - 5,30 (m, 6H), 4,97 (d, 2H), 4,91 (d, 2H), 4,75 (d, 2H),

4,49 - 4,61 (m, 6H), 4,37 (dd, 2H), 4,02 - 4,13 (m, 6H), 3,81 (t,

2Η), 3,57 - 3,69 ( m, 4H), 2,15 (s, 6H), 2,08 8s, 6H), 2,03 (s, 6H), 2,01 (s, 18 H) és 1,98 ppm (s, 6H).

7. Példa

1. Lépés

3.5- Bisz-(hepta-O-acetil-B-D-laktozi l-oximetil)-1-nitrobenzol

A címszerinti vegyületet az 1. példa 1. lépése szerinti eljárással állítjuk elő 1 ekvivalens 5-nitro-m-xilol-a,a'-diolból, 2 ekvivalens acetobróm-laktózból és 2 ekvivalens egyéb reagensekből. A tisztítást először gyorskromatográfiásan végezzük etil-acetát és diklór-metán 3:1 arányú elegyével eluálva, majd újra kromatografáljuk először toluol és etil-acetát 1:1, majd etilacetát és diklór-metán 1:1 - 1:2 arányú elegyével eluálva, és így részben tiszta terméket kapunk, amelyet közvetlenül felhasználunk a következő reakcióban.

2. Lépés

3.5- Bisz-(hepta-O-acetil-B-D-laktozil-oximetil)-fenil-amin

A címszerinti vegyületet az 1. példa 2. lépésének A eljárásával állítjuk elő 3,5-bisz-(hepta-O-acetil-p-D-laktozil-oximetil)1-nitrobenzolból. A részleges tisztítást gyorskromatográfiásan végezzük diklór-metán és etil-acetát 2:1 - 1:2 arányú eluálva, majd újra kromatografáljuk és diklór-metán és etil-acetát 3:1 1:1 arányú elegyével eluálva kapjuk a címszerinti vegyületet.

8. Példa

1. Lépés

3.5- Bisz-(tetra-O-acetil-B-D-glükozil-oximetil)-1 -nitrobenzol

A címszerinti vegyületet az 1. példa 1. lépése szerinti eljárással 1 ekvivalens 5-nitro-m-xilol-a,a'-diolbó,, 2 ekvivalens acetobróm-glükózból és 2 ekvivalens valamennyi egyéb reá-24gensből állítjuk elő. Gyorskromatográfiásan tisztítjuk, etil-acetát és diklór-metán 1:4 - 1: 2 arányú elegyével eluálva 29 %-os termeléssel kapjuk a majdnem tiszta címszerinti vegyületet, amelyet további tisztítás nélkül használunk fel.

2. Lépés

3.5- Bisz-(tetra-Q-acetil-B-D-glükozil-oximetil)-fenil-amin

A címszerinti vegyületet az 1. példa 2. lépésének A eljárása szerint állítjuk elő 6,27 g 3,5-bisz-(tetra-O-acetil-p-D-glükoziloximetil)-1-nitrobenzolból. Gyorskromatográfiásan tisztítjuk, diklór-metán és etil-acetát 3:2 arányú elegyével eluálva 2,00 g 39 % címszerinti vegyületet kapunk sárga olaj formájában.

Parciális ¹H-NMR (CDCI₃, 300 MHz) δ 6,56 (s, 3H), 5,0 - 5,2 (m, 6H), 4,8 (d, 2H), 4,4 - 4,6 (m, 4H), 3,7 ppm (széles d, 2H).

9. Példa

1. Lépés

3.5- Bisz-(hepta-O-acetil-B-D-maltozil-oximetil)-1 -nitrobenzol

A címszerinti vegyületet az 1. példa 1. lépése szerint állítjuk elő 2,57 g, 14,02 mmól 1 ekvivalens 5-nitro-m-xilol-a,a'diolból, 2 ekvivalens acetobróm-maltózból és 2 ekvivalens valamennyi egyéb reagensből, az összesét 200 ml nitro-metánban alkalmazzuk. Gyorskromatográfiásan tisztítjuk, etil-acetát és diklór-metán 1:2 - 1:1 arányú elegyével eluáljuk. Dietil-éterrel újra kromatografáljuk, 11,4 g, 57 % címszerinti vegyületet kapunk, melyet a következő reakcióban felhasználunk.

Parciális ¹H-NMR (CDCI₃, 300 MHz) δ 8,11 (s, 2H), 7,49 (s, 1H), 5,42 (d, 2H), 5,36 (t, 2H), 5,26 (t, 2H), 5,06 ( t,2H), 4,21 4,29 (m, 4H) és 3,69 - 3,72 ppm (m, 2H).

..·^;οΙρκ

-252. Lépés

3.5-Bisz-(hepta-O-acetil-B-D-maltozi 1-oxi met il)-fenil-amin

A címszerinti vegyületet az 1. példa 2. lépésének A eljárása szerint állítjuk elő 3,5-(bisz-hepta-O-acetil-p-D-maltoziloximetil)-1-nitrobenzolból. A tisztítást gyorskromatográfiásan végezzük, diklór-metán és etil-acetát 1:1 arányú elegyével eluáljuk. 4,43 g, 40 % címszerinti vegyületet kapunk.

Parciális ¹H-NMR (CDCI₃, 300 MHz) δ 6,57 (s, 3H), 5,41 (d, 2H), 5,36 (t, 2H), 5,23 (t, 2H), 5,50 (t, 2H), 4,75 (d, 2H), 4,26 (m, 4H) és 3,65 - 3,69 ppm (m, 2H).

10. Példa

1. Lépés

Dodekándisav-bisz-fí5-(B-D-cellobiozÍI-oximetil)-2-metil-fenill-amid)

1,03 g, 1,36 mmól 5-(hepta-O-acetil-p-D-cellobioziloximetil)-2-metil-fenil-amin és 189 μΙ, 1,36 mmól trietil-amin 15 ml tetrahidrofurános oldatához hozzáadunk 170 μΙ, 0,681 mmól dodekán-dioil-dikloridot. Szobahőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük, majd az elegyet metanollal befagyasztjuk, diklórmetánnal hígítjuk, vízzel mossuk. A szerves fázist magnéziumszulfáttal szárítjuk, szűrjük, bepároljuk. 1,157 g színtelen szilárd anyagot kapunk, melyet 25 ml metanolban feloldjunk és 11,9 ml, 11,9 mmól 1 N-nátrium-hidroxiddal kezelünk. 5 óra hosszat 50°C-on keverjük, majd a reakcióelegyet lehűtjük szobahőmérsékletre és 9,5 ml, 9,5 mmól 1N-sósavval kezeljük. A színtelen szilárd anyagot izolálva kapjuk a címszerinti vegyületet 566 mg mennyiségben, 75 %-os termeléssel, op. 200°C felett.

*«*· ♦ » ·> A · •η·.·

-26Parciális ¹H-NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 9,25 (s, 2H), 7,32 (s, 2H), 7,16 (d, 2H), 7,10 (d, 1H), 4,77 (d, 2H), 4,50 (d, 2H), 4,24 - 4,30 (2 dublett, 2H), 3,78 (d, 2H), 3,69 (d, 2H), 3,63 (széles d, 2H), 2,99 (t, 2H), 2,30 (t, 4H), 1,58 (széles t, 4H) és

1,29 ppm (széles s, 12H); ¹³C-NMR (DMSO-d₆, 100 MHz) δ 171,1, 136,2, 135,5, 131,1, 130,0, 124,8, 103,2, 101,7, 80,6,

76.8, 76,4, 75,0, 74,9, 73,3, 73,1, 70,0, 69,5, 61,0, 60,4, 35,7,

28.9, 28,8, 28,7, 25,3 és 17,6 ppm; tömegspektrum (-FAB) m/z 1115 (M-H); IR (KBr) 3430 és 1660 cm'¹.

Analízis a Cs2H₈oN₂0₂4-4H₂0 képlet alapján: számított: C, 52,51; H, 7,46; N, 2,36;

talált: C, 52,53; H, 7,28; N, 2,27.

2. Lépés

Dodekándisav-bisz-U2-metil-5-(hepta-O-szulfáto-B-D-cellobiozil-oximetil)-fenin-amid)-tetradeka-nátriumsó

391 mg, 0,350 mmól bisz-{[5-(p-D-cellobiozil-oximetil)-2metil-fenilj-amid) és 3,66 g, 26,3 mmól kén-trioxid-trimetil-amin komplex 40 ml dimetil-formamidos oldatát 70°C-on 3 napig melegítjük. A reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, Sephadex G10 oszlopon kétszer engedjük keresztül. Kationcserét végzünk Dowex 50 X 8 erősen savas nátrium formájú oszloppal, 433 mg címszerinti vegyületet kapunk.

Parciális ¹H-NMR (D2O, 400 MHz) δ 7,39 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 7,29 (s, 2H), 4,94 (d, 2H), 4,80 - 4,90 (m, 4H), 4,59 (dd, 2H), 2,49 (t, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,30 - 2,40 (m, 4H) és 1,30 1,50 ppm (m, 12H); ¹³C-NMR (D2O, 100 MHz) δ 176,8, 134,9,

134,4, 130,9, 127,8, 127,1, 100,0, 99,1, 77,7, 77,4, 77,1, 74,4, 73,7, 73,5, 73,1, 70,7, 67,7, 66,6, 35,8, 28,5, 28,3, 25,5 és 16,9 • ·

-27ppm; tömegspektrum (negatív elektrospray) (m-zNa)/z 825,6 (M3Na)³', 613,5 (M-4Na)⁴' és 486,2 (M-5Na)⁵'.

Analízis a CszHeel^OeeS^Na^-l4H₂O képlet alapján: számított: C, 17,83; H, 2,70; N, 0,80; S, 17,40; talált: C, 17,96; H, 2,57; N, 0,72; S, 17,11.

11. Péida

1. Lépés

N.N^,-Bisz-f5-(B-cellobiozil-oximetin-2-metil-fenin-tereftalamid

813 mg, 1,08 mmól 5-(hepta-O-acetil-3-D-cellobioziloximetil)-2-metil-fenil-amÍn 20 ml tetrahidrofurános oldatához, amely 148 μ|, 1,08 mmól trietil-amint tartalmaz, hozzáadunk109 mg, 0,538 mmól tereftaloil-kloridot. Szobahőmérsékleten 2 órát keverjük, majd az elegyet metanollal befagyasztjuk, diklórmetánnal hígítjuk és vízzel mossuk. Magnézium-szulfát felett szárítjuk és bepárolva nyers terméket kapunk, melyet 25 ml metanollal feloldunk és 8,7 ml, 8,7 mmól 1 N-nátrium-hidroxiddal kezelünk. 50°C-on 3 óra hosszat keverjük, a szuszpenziót leszűrjük. 512 mg, 89 % címszerinti, vegyületet színtelen szilárd anyag formájában, amely 210°C felett olvad.

’H-NMR (DMSO-d₆; 400 MHz) δ 10,07 (s, 2H), 8,10 (s, 4H), 7,35 (s, 2H), 7,26 (d, 2H), 7,22 (d, 2H), 5,22 - 5,24 (m, 4H), 5,01 (d, 2H), 4,99 (d, 2H), 4,82 (d, 2H), 4,68 (d, 2H), 4,54 - 4,64 (m, 6H), 4,32 (d, 2H), 4,25 (d, 2H), 3,75 - 3,80 (d, 2H), 3,63 3,77 (m, 4H), 3,37 - 3,41 (m, 2H), 2,97 - 3,19 (m, 10H) és 2,23 ppm (s, 6H); ¹³C-NMR (DMSO-d₆, 100 MHz) δ 164,6, 137,0, 136,0, 135,9, 133,0, 130,1, 127,7, 126,0, 125,6, 103,2, 101,8, ···* »· ·* · · «· É**¹

-2880,6, 76,8, 76,4, 75,1, 74,9, 73,3, 73,2, 70,0, 69,3, 61,0, 60,4 és 17,7 ppm; tömegspektrum m/z 1052, 889 és 725.

Analízis a C48H₆4N₂O₂4 képlet alapján:

számított: C, 54,75; H, 6,13; N, 2,66;

talált: C, 55,54; H, 6,33; N, 2,57.

2. Lépés

N.N’-Bisz-f5-fhepta-O-szulfáto-3-D-cellobiozil-oximetil)-2-metil-fenill-tereftálamid-tetradeka-nátriumsó

321 mg, 0,305 mmól N,N'-bisz-[5-(3-cellobiozil-oximetil)-2metil-fenilj-tereftálamid és 3,06 g, 22,0 mmól kén-trioxidtrimetil-amin komplex 25 ml dimetil-formamiddal készített elegyét 70°C-on 4 napig keverjük. A reakcióelegyet bepároljuk, Sephadex G-10 oszlopon keresztülengedjük és az 1 H-NMR analízis nem teljes szulfatálást mutat. A terméket újra szulfatáljuk 3,06 g, 22,0 mmól kén-trioxid-trimetil-amin komplex 25 ml dimetil-formamidos elegyével 70°C-on 5 napig. A reakcióelegyet szobahőmérsékletre lehűtjük, vákuumban bepároljuk, Sephadex G-10 oszlopon engedjük keresztül. Kationcserét végzünk 50x8 erősen savas nátrium formájú Dowex oszlop alkalmazásával és 469 mg 62 % címszerinti vegyületet kapunk, amely bomlás közben 178°C-on olvad.

Parciális ¹H-NMR (D2O; 400 MHz) δ 8,11 (s, 4H), 7,40 7,50 (m, 6H), 4,98 (d, 2H), 4,95 (d, 2H) és 2,32 ppm (s, 6H); ¹³C-NMR (D2O; 100 MHz) δ 169,5, 136,9, 135,4, 135,2, 134,3, 131,0, 128,1, 128,0, 127,0, 100,0, 99,1, 77,7, 77,4, 77,3, 77,1,

74,4, 73,7, 73,4, 73,1, 70,7, 67,7, 66,7 és 16,8 ppm.

Analízis a C4eH₅oN₂066Si4Na₁4-10H₂0 képlet alapján: számított: C, 20,58; H, 2,51; N, 1,00; S, 17,17;

-29talált: C, 20,21; H, 2,84; N, 0,96; S, 17,34.

12. Példa

B ifeni l-4.4'-di karbonsa v-bisz-(í5-(B-D-ce II obi ozil-oximetil)-2-metil-feniH-amid)

887 mg, 1,18 mmól 5-(hepta-0-acetil-3-D-cellobiozi!oximetil)-2-metil-fenil-amin és 162 μΙ, 1,1 mmól trietil-amin 20 ml tetrahidrofurános oldatához 164 mg, 0,588 mól bifenil-4,4'dikarbonsav-kloridot adunk. Szobahőmérsékleten 4 órát keverjük, majd az elegyet metanollal befagyasztjuk, diklór-metánnal hígítjuk és vízzel mossuk. A szerves fázist magnézium-szulfáttal szárítjuk, leszűrjük, bepároljuk. 1,01 g színtelen szilárd anyagot kapunk. 985 mg, 0,574 mmól nyersanyag 25 ml metanolos oldatát, amely 9,18 ml, 9,18 mmól 1 N-nátrium-hidroxidot tartalmaz, 3 óra hosszat 50°C-on keverjük. A reakcióelegyet lehűtjük, a címszerinti vegyületet fehér porként izoláljuk, 444 mg, 69 % terméket kapunk.

Parciális ¹H-NMR (DMSO-d₆; 300 MHz) δ 10,01 (s, 2H), 8,13 (d, 4H), 7,94 (d, 4H), 7,37 (s, 2H), 7,28 (d, 2H), 7,23 (d, 2H), 5,24 (d, 2H), 5,00 (q, 2H), 4,84 (d, 2H), 4,56 - 4,69 (m, 4H), 4,33 (d, 2H), 4, 27 (d, 2H) és 2,25 ppm (s, 3H).

2. Lépés

Bifenil-4.4^,-dikarbonsav-bisz-íí5-(hepta-O-szulfáto-B-D-cellobiozil-oximetil)-2-metil-fenin-amid)-tetradeka-nátriumsó

437 mg, 0,387 mmól bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[5-p-Dcellobiozil-oximetil)-2-metil-fenil]-amid} és 3,85 g, 27,7 mmól kén-trioxid-trimetil-amin komplex 25 ml dimetil-formamidos oldatát 5 napig keverjük 70°C-on. A reakcióelegyet vízzel befa• * ·« «·

-30gyasztjuk, vákuumban bepároljuk, a maradékot kis mennyiségű vízben oldjuk, Sephadex G-10 oszlopon engedjük keresztül. A kationcserét Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú gyantaoszloppal végezzük, miután toluollal azeotrop-desztilláltuk. 742 mg, 75 % címszerinti vegyületet kapunk, amely bomlás közben 170°C-on olvad.

Parciális ¹H-NMR (D2O; 400 MHz) δ 8,09 (d, 4H), 7,97 (d, 4H), 7,40 (m, 6H), 4,98 (d, 2H), 4,94 (d, 2H), 4,63 - 4,68 (m, 4H), 4,56 (dd, 2H), 4,41 (dd, 2H), 4,30 - 4,37 (m, 6H), 4,17 4,23 (m, 4H), 3,99 - 4,05 (m, 4H) és 2,31 ppm (s, 6H); ¹³C-NMR (D2O; 100 MHz) δ 169,7, 143,2, 135,3, 135,2, 134,4, 132,8,

130,9, 128,1, 128,0, 127,4, 127,0, 99,9, 98,9, 77,6, 77,3, 77,2, 77,0, 74,2, 73,6, 73,3, 73,0, 70,6, 67,6, 66,6 és 16,7 ppm.

Analízis a C59H54N₂O₆6Si4Na₁₄-14H₂O képlet alapján: számított: C, 21,97; H, 2,80; N, 0,95; S, 16,29; talált: C, 21,77; H, 2,90; N, 0,95; S, 13,66.

13. Példa

1. Lépés

N.N^,-Bisz-f5-(B-cellobiozil-oximetil)-2-metil-fenin-izoftálamid

887 mg, 1,18 mmól 5-(hepta-O-acetil-0-D-cellobioziloximetil)-2-metil-fenil-amin 162 μΙ, 1,18 mmól trietil-amint tartalmazó 20 ml tetrahidrofurános oldatához 119 mg, 0,587 mmól izoftáloil-dikloridot adunk. Szobahőmérsékleten 2 órát keverjük, majd a reakcióelegyet metanollal befagyasztjuk, diklór-metánnal hígítjuk, vízzel mossuk. A szerves fázist magnézium-szulfát felett szárítjuk, bepároljuk. 1,00 g színtelen szilárd anyagot kapunk. A nyers termék 9,76 ml, 9,76 mmól 1 N-nátrium-hidroxidot ·«»·

-31 tartalmazó 25 ml metanolos oldatát 50°C-on 3 óra hosszat keverjük, a kapott szilárd anyagot izoláljuk, toluollal azeotropdesztilláljuk. 335 mg 55 % címszerinti vegyületet kapunk színtelen por formájában, amely 200-203°C-on olvad.

Parciális ¹H-NMR (DMSO-d₆; 400 MHz) δ 10,09 (s, 2H), 8,54 (s, 1H), 8,15 (d, 2H), 7,68 (t, 1H), 7,34 (s, 2H), 7,26 (d, 2H), 7,21 (d, 2H), 5,24 (t, 4H), 5,01 (dd, 2H), 4,82 (d, 2H), 4,69 (s, 2H), 4,54 - 4,69 (m, 4H), 4,32 (d, 2H), 4,25 (d, 2H), 3,76 3,80 (m, 2H), 3,63 - 3,69 (m, 4H) és 2,24 ppm (s, 6H); ¹³C-NMR (DMSO-de; 100 MHz) δ 164,9, 136,1, 135,9, 134,8, 133,0, 130,5,

130,1, 128,6, 127,1, 125,9, 125,6, 103,2, 101,8, 80,6, 76,8,

76,4, 75,1, 74,9, 73,3, 73,2, 70,0, 69,4, 61,0, 60,4 és 17,7 ppm; tömegspektrum (-FAB) m/z 1051, 727 és 889.

Analízis a 04βΗ₆4Ν₂θ23·3Η₂Ο képlet alapján: számított: C, 52,08; H, 6,37; N, 2,53;

talált: C, 51,89; H, 6,31; N, 2,26.

2. Lépés

N.N^,-Bisz-f5-(hepta-O-szulfáto-B-D-cellobiozil-oximetil)-2-metil-fenin-izoftálamid-tetradeka-nátriumsó

180 mg, 0,171 mmól N,N'-bisz-[5-(p-D-cellobiozil-oximetil)2-metil-fenil]-izoftálamid és 1,79 g, 11,98 mmól kén-trioxidtrimetil-amin komplex 25 ml dimetil-formamidos oldatát 7Q°C-on 4 napig keverjük, majd a reakcióelegyet bepároljuk. Sephadex Q-10 oszlopon tisztítjuk, vízzel eluáljuk. A kationcserét Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú gyantaoszlopon végezzük, vízzel eluáljuk. A vizet vákuumban eltávolítjuk, toluollal azeotrop-szárítjuk, 358 mg, 84 % címszerinti vegyületet kapunk ··»·

-32színtelen szilárd anyag formájában, amely bomlás közben 171°C-on olvad.

Parciális ¹H-NMR (D2O; 400 MHz) δ 8,43 (s, 2H), 8,21 (dd, 2H), 7,78 (t, 1H), 7,40 - 7,50 (m, 6H), 4,97 (d, 2H), 4,94 (d, 2H), 4,56 (dd, 2H) és 2,30 ppm (s, 6H); ¹³C-NMR (D2O; 100 MHz) δ

169,2, 135,3, 135,1, 134,3, 134,0, 131,0, 130,9, 129,3, 128,0,

126,9, 126,5, 99,9, 99,0, 135,5, 77,3, 77,2, 77,0, 74,3, 73,6, 73,3, 73,0, 70,6, 67,6, 66,6 és 16,7 ppm.

Analízis a C4sH₅oN₂0₆eSi4Nai4Na₂S04 képlet alapján: számított: C, 19,12; H, 2,61; N, 0,93; S, 17,01;

talált: C, 18,97; H, 2,45; N, 0,94; S, 15,68.

14. Példa

Lépés

Dekándisav-bisz-ff3.5-bisz-(B-D-cellobiozil-oximetil)-fenin-amidl·

817 mg, 0,588 mmól 3,5-bisz-(hepta-O-acetil-B-Dcellobiozil-oximetil)-fenil-amin és 82 μΙ, 0,59 mmól trietil-amin 25 ml tetrahidrofurános oldatához 74 μΙ, 0,295 mmól dodekándioil-dikloridot adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 90 percig keverjük, metanollal befagyasztjuk, diklórmetánnal hígítjuk, vízzel mossuk. A szerves fázist magnéziumszulfát felett szárítjuk, bepároljuk. 834 mg 95 % színtelen szilárd anyagot kapunk. A nyers terméket feloldjuk 25 ml metanolban és 8,4 ml, 8,4 mmól 1 N-nátrium-hidroxiddal kezeljük. 50°Con 2 óra hosszat keverjük, majd az elegyet szobahőmérsékleten 7,84 ml 1N-sősavval befagyasztjuk, bepároljuk, reverz fázisú oszlopkromatográfiásan tisztítjuk (RP szilícium-dioxid 60), metanol és víz 1:1 arányú elegyével eluáljuk. Metanol és víz 2:3

-33arányú elegye alkalmazásával újra kromatografáljuk, így 438 mg, 87 % címszerinti vegyületet kapunk színtelen szilárd anyag formájában.

Részleges ¹H-NMR (D₂0; 100 MHz) δ 7,45 (s, 4H), 7,26 (s, 2H), 4,64 (d, 4H), 4,47 (t, 8H), 3,80 (dd, 4H), 3,71 (dd, 4H),

2,30 (széles t, 4H), 1,55 (t, 4H) és 1,17 ppm (széles m, 12H); ¹³C-NMR (D₂O; 100 MHz) δ 175,1, 138,1, 137,7, 124,4, 120,3, 102,5, 101,3, 78,7, 75,9, 75,5, 74,7, 74,3, 73,1, 72,8, 70,8,

69,4, 60,5, 60,0, 36,6, 28,7, 28,6, 28,5 és 25,3 ppm.

Analízis a C ₇6Η₁₂₀Ν₂θ4β·10Η₂Ο képlet alapján: számított: C, 46,15; H, 7,13; N, 1,42;

talált: C, 45,91; H, 6,82; N, 1,41.

2. Lépés

Dekándisav-bisz-(í3.5-bisz-(heota-O-szulfáto-B-D-cellobiozil-oximetiD-fenill-amidl-oktakóza-nátriumsó

177 mg, 98,4 mmól dekándisav-bisz-{[3,5-bisz-(0cellobipzil-oximetil)-fenil]-amid} és 1,97 g, 14,2 mmól kéntrioxid-trimetil-amin komplex 25 ml dimetil-formamidos oldatát 70°C-on 25 óra hosszat keverjük. A reakcióelegyet bepároljuk, Sephadex G-10-zel kromatografálva tisztítjuk, vízzel eluáljuk. Kationcserét végzünk Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú gyantaoszlopon, 292 mg, 64 % címszerinti vegyületet kapunk toluolos azeotrop-szárítás után.

Parciális ¹H-NMR (D2O; 400 MHz) δ 7,55 (s, 4H), 7,35 (s, 2H), 4,96 - 4,98 (m, 8H), 2,45 (széles t, 4H), 1,40 - 1,60 (széles t, 4H) és 1,36 - 1,41 ppm (széles m, 12H); ¹³C-NMR (D2O; 100 MHz) δ 176,1, 138,0 137,1, 124,5, 121,0, 99,9, 99,6, 77,6, ···· ·· ··· ·· *f *

-3477,43, 77,39, 77,0, 74,3,73,4, 72,9, 70,9, 67,6, 66,3, 36,5, 28,7, 28,5 és 25,3 ppm.

Analízis a C76H9₂N₂O30-3Na₂SO₄-28H₂O képlet alapján: számított: C, 16,34; H, 2,67; N, 0,50; S, 17,8;

talált: C, 16,25; H, 2,63; N, 0,59; S, 17,07.

15. Példa

1. Lépés

Bifenil-4.4^l-dikarbonsav-bisz-fí3.5-bisz-(B-D-cellobiozil-oximetil)-feni Π-amid)

817 mg, 0,588 mmól 3,5-bisz-(hepta-O-acetil-p-Dcellobiozil-oximetil)-fenil-amin és 86 pl, 0,62 mmól trietil-amin 25 ml tetrahidrofurános oldatához 86 mg, 0,309 mmól 4,4bifenil-dikarbonsav-dikloridot adunk. Szobahőmérsékleten 2 órát keverjük, majd a reakcióelegyet metanollal befagyasztjuk, diklór-metánnal hígítjuk és vízzel mossuk. A reakcióelegyet magnézium-szulfáttal szárítjuk, bepároljuk. 921 mg nyers terméket kapunk, melyet 20 ml metanolban feloldunk és 9,3 ml 1Nnátrium-hidroxiddal kezelünk. 50°C-on 4 óra hosszat keverjük, majd hozzáadunk a hűtött reakcióelegyhez 8,6 ml, 8,6 mmól 1N-sósavat. A szilárd anyagot izoláljuk és 482 mg, 86 % címszerinti vegyületet kapunk.

¹H-NMR (DMSO-de! 400 MHz) δ 10,40 (s, 2H), 8,11 (d, 4H), 7,93 (d, 4H), 7,74 (s, 4H), 7,18 (s, 2H), 4,86 (d, 4H), 4,56 (d, 4H), 4,35 (d, 4H), 4,27 (d, 4H), 3,80 (d, 4H) és 2,97 - 3,07 ppm (m, 4H); ¹³C-NMR (DMSO-d_e; 100 MHz) δ 165,0, 142,0, 138,9,

138,2, 134,1, 128,5, 126,9, 122,8, 119,3, 103,2, 102,0, 80,5, 76,8, 76,5, 75,1, 75,0, 73,3, 73,2, 70,02, 69,96, 61,0 és 60,4 ppm; IR (KBr) 1650 cm'¹.

• · · ·

-35Analízis a C78H108N2O46· 10H₂O képlet alapján: számított: C, 47,08; H, 6,48; N, 1,41;

talált: C, 46,64; H, 6,22; N, 1,62.

2. Lépés

Bifenil-4.4^l-dikarbonsav-bisz-{f3.5-bisz-(hepta-O-szulfáto-B-D-cellobiozil-oximetiD-fenill-amidl-oktakóza-nátriumsó

338 mg, 0,187 mmól bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5bisz-(3-D-cellobiozil-oximetil)-fenil]-amid} és 3,64 g, 26,1 mmól kén-trioxid-trimetil-amin komplex 25 ml dimetil-formamidos oldatát 70°C-on 2 napig keverjük. A reakcióelegyet lehűtjük szobahőmérsékletre, vízzel befagyasztjuk, bepároljuk. Sephadex G-10 oszlopon tisztítjuk, vízzel eluáljuk. Kationcserét végzünk úgy, hogy a termék vizes oldatát egy Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú gyantaoszlopon engedjük keresztül. Az oldószert eltávolítjuk, toluollal azeotrop-szárítjuk, 765 mg, 88 % címszerinti vegyületet kapunk fehéres színű szilárd anyag formájában, amely 180°C-on bomlás közben olvad.

Parciális ¹H-NMR (D2O; 400 MHz) δ 8,08 (d, 4H), 7,97 (d, 4H), 7,70 (s, 4H), 7,39 (s, 2H), 5,02 (d, 4H), 4,98 (d, 4H), 4,15 - 4,23 (m, 8H) és 4,00 ppm (m, 8H); ¹³C-NMR (D2O, 100 MHz) δ

169,2, 143,3, 138,2, 137,3, 133,5, 128,3, 127,5, 125,0, 121,8, 100,0, 99,7, 77,7, 77,54, 77,51, 77,1, 74,4, 73,5, 73,0, 71,0, 67,7 és 66,4 ppm; tömegspektrum (elektrospray) (m-zNa)/z

401.3 (m - 11 Na)¹¹', 443,7 (m - 10Na)¹⁰', 495,6 (m - 9Na)⁹·,

560.4 (m - 8Na)⁸‘ és 643,7 (m - 7Na)⁷*.

Analízis a C78H8oN20i3oS28Na28'2Na2S04'28H20 képlet alapján:

számított: C, 17,17; H, 2,51; N, 0,51; S, 16,46;

-36talált: C, 17,06; H, 2,11; N, 0,55; S, 12,04.

16. Példa

1. Lépés

Bifenil-4.4^,-dikarbonsav-bisz-ff3.5-bisz-(hepta-O-acetil-B-D-laktozil-oximetil)-feni Π-amid)

1,05 g, 0,757 mmól 3,5-bisz-(hepta-O-acetil-B-D-laktozil· oximetil)-fenil-amin és 105 μΙ, 0,757 mmól trietil-amin 20 ml tetrahidrofurános oldatához 106 mg, 0,378 mmól 4,4-bifenildikarbonsav-dikloridot adunk. Szobahőmérsékleten 2 óra hoszszat keverjük, majd a reakcióelegyet metanollal befagyasztjuk, diklór-metánnal hígítjuk és vízzel mossuk. A reakcióelegyet magnézium-szulfáttal szárítjuk, bepároljuk. Diklór-metán és etanol elegyével eldörzsölve tisztítjuk. 984 mg, 87 % címszerinti vegyületet kapunk színtelen szilárd anyag formájában, amely 163-167°C-on olvad.

¹H-NMR (CDCI₃; 400 MHz) δ 8,62 (s, 2H), 8,05 (d, 4H), 7,74 (d, 4H), 7,66 (s, 4H), 6,93 (s, 2H), 5,33 (d, 2H), 5,17 (t, 2H), 5,07 - 5,12 (m, 2H), 4,91 - 4,97 (m, 4H), 4,79 (d, 2H), 4,62 4,66 (m, 4H), 4,57 (d, 2H), 4,51 (d, 2H), 4,03 - 4,15 (m, 6H),

3,80 - 3,88 (m, 4H), 3,62 (dq, 2H), 2,13 (s, 12H), 2,10 (s, 12H), 2,03 (s, 24H), 2,02 (12H) és 1,95 ppm (s, 12H); tömegspektrum (elektrospray, Ca²* addukt) m/z 1513,2 (m + Ca)²*.

Analíz is a C1₃4H164N2O74· 1 H₂O képlet alapján: számított: C, 53,56; H, 5,57; N, 0,93;

talált; C, 53,25; H, 5,55; N, 1,06.

2. Lépés

Bifenil-4,4^l-dikarbonsav-bisz-(f3.5-bisz-(hepta-O-szulfáto-B-D-laktozil-oximetil)-fenil1-amid)-oktakóza-nátriumsó

-37871 mg, 0,292 mmól bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5bisz-(hepta-O-acetil-p-D-laktozil-oximetil)-fenil]-amid} 15 ml metanolos oldatát, amely 8,75 ml, 8,75 1 N-nátrium-hidroxidot tartalmaz, 50°C-on 3 óra hosszat keverjük. A reakcióelegyet szobahőmérsékletre hűtjük és 8,16 ml, 8,16 mmól 1N-sósavval befagyasztjuk. A kapott szilárd anyagot izoláljuk, toluollal azeotrop-szárítjuk.

¹³C-NMR (DMSO-de; 100 MHz) δ 164,9, 141,9, 138,9, 138,2, 134,1, 128,4, 126,8, 119,2, 103,8, 101,9, 80,7, 75,5, 74,99, 74,96, 73,3, 73,2, 70,6, 69,9, 68,0, 60,5 és 60,3 ppm.

396 mg, 0,219 mmól bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5bisz-(p-D-laktozil-oximetil)-fenil]-amid} és 4,26 g, 30,6 mmól kén-trioxid-trimetil-amin komplex 20 ml dimetil-formamidos oldatát 3 napig keverjük 70°C-on. A reakcióelegyet szobahőmérsékletre hűtjük, desztillált vízzel befagyasztjuk, bepároljuk. A maradékot Sephadex G-10 oszlopon keresztülengedve tisztítjuk, vízzel eluáljuk. Kationcserét végzünk úgy, hogy a termék vizes oldatát Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú gyantaoszlopon engedjük keresztül. Az oldószert eltávolítjuk, toluollal azeotrop-szárítjuk. 664 mg, 65 % fényes fehér szilárd anyagot kapunk, amely bomlás közben 149°C-on olvad.

¹³C-NMR (D₂O;100 MHz) δ 169,1, 143,1, 138,1, 137,3,

133,4, 128,2, 127,4, 124,9, 121,7, 100,9, 99,4, 77,6, 77,0, 75,8, 75,3, 75,05, 75,00, 73,0, 71,1 és 66,34 ppm; tömegspektrum (elektrospray) (m-zNa)/z 643,7 (m - 7 Na)⁷, 754,8 (m - 6 Na)⁶' és 910,4 (m - 5 Na)⁵'.

Analízis a C7₈H₈oN₂Oi3oS₂8Na₂8-28H₂0 képlet alapján: számított: C, 18,12; H, 2,65; N, 0,54; S, 17,36;

• · ·

-38talált: C, 18,06; H, 2,67; N, 0,50; S, 14,75.

Az NMR és kapilláris elektroforézis szerint az elegy egy fő komponenst és több kisebb komponenst tartalmaz, a tömegspektrum analízis 20-28 szulfáttól mutat termékeket.

17= Példa

1= Lépés

Bifenil-4.4^,-dikarbonsav-bisz-(f3,5-bisz-(tetra-O-acetil-8-D-glükozil-oximetil)-feni Π-amid)

996 mg, 1,22 mmól 3,5-bisz-(tetra-O-acetil-3-D-glükoziloximetil)-fenil-amin és 160 μΙ, 1,22 mmól trietil-amin 15 ml tetrahidrofurános oldatához 171 mg, 0,612 mmól 4,4'-bifenildikarbonsav-dikloridot adunk. Szobahőmérsékleten 3 óra hoszszat keverjük, majd az elegyet metanollal befagyasztjuk, diklórmetánnal hígítjuk, vízzel mossuk. A reakcióelegyet magnéziumszulfáttal szárítjuk, bepároljuk, diklór-metán és etanol elegyével eldörzsölve tisztítjuk. 984 mg, 87 % színtelen szilárd címszerinti vegyületet kapunk, amely 125-130°C-on olvad.

¹H (CDCb; 400 MHz) δ 8,42 (s,12H), 8,04 (d, 4H), 7,75 (d, 4H), 7,66 (s, 4H), 6,98 (s, 2H), 5,03 - 5,22 (m, 12H), 4,85 (d,

4H), 4,67 (d, 4H), 4,61 (d, 4H), 4,22 - 4,32 (m, 8H), 3,72 (dq,

4H), 2,06 (s, 12H), 2,024 (s, 12H), 2,019 (s, 12H) és 1,99 ppm (s, 12H); tömegspektrum ((-)-FAB), m/z 1159 (M-H).

Analízis a C54H68N2O266H2O képlet alapján: számított: C, 51,10; H, 6,35; N, 2,21;

talált: C. 51,01; H, 6,09; N, 2,25.

2, Lépés

Bifenil-4.4^,-dikarbonsav-bisz-(f3.5-bisz-(B-D-olükozil-oximetiD-feni Π-amid)

-39575 mg, 0,495 mmól bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5bisz-(tetra-O-acetil-3-D-glükozil-oximetil)-fenil]-amid} és 8,91 ml, 8,9 mmól 1 N-nátrium-hidroxid 15 ml metanollal készített oldatát 50°C-on 4 óra hosszat keverjük. Az elegyet 1N-sósavval (7,9 ml) befagyasztjuk és Sephadex G-10 oszlopon tisztítjuk, vízzel eluáljuk. A vizet eltávolítva 144 mg 25 % címszerinti vegyületet kapunk, amely bomlás közben 160°C-on olvad.

¹H (D2O; 400 MHz) δ 7,38 (d, 4H), 7,20 (s, 4H), 7,16 (d, 4H), 7,07 (s, 2H), 4,72 (d, 4H), 4,47 (d, 4H), 4,38 (d, 4H), 3,88 (d, 4H), 3,69 (dd, 4H) és 3,27 - 3,44 ppm (m, 16H); ¹³C-NMR (D2O; 100 MHz) δ 166,3, 141,6, 137,6, 137,2, 131,7, 127,5,

126,3, 124,0, 120,1, 101,5, 75,7, 75,6, 73,0,70,7, 69,5 és 60,6 ppm; tömegspektrum ((-)-FAB) m/z 1159,4 (M-H), 997,3, 981,3 és 699,2.

Analízis a C54H ββΝ₂Ο₂6·6Η₂Ο képlet alapján: számított: C, 51,10; H, 6,35; N, 2,21;

talált: C, C, 51,01; H, 6,09; N, 2,25.

3. Lépés

Bifenil-4.4^,-dikarbonsav-bisz-(í3.5-bisz-(tetra-O-szulfáto-B-D-glűkozil-oximetil)-feniH-amid)-hexadeka-nátriumsó mg, 0,079 mmól bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5-bisz(P-D-glükozil-oximetil)-fenil]-amid} és 450 mg, 6,83 mmól kéntrioxid-trimetil-amin komplex 15 ml dimetil-formamidos oldatát 3 napig keverjük 70°C-on. A reakcióelegyet lehűtjük szobahőmérsékletre, desztillált vízzel befagyasztjuk, bepároljuk, a maradékot Sephadex G-10 oszlopon keresztülengedve tisztítjuk, vízzel eluáljuk. Kationcserét végzünk úgy, hogy a termék vizes oldatát Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú gyantaoszlopon en-40gedjük keresztül. Az oldószert eltávolítjuk, toluollal azeotróp szárítjuk, 161 mg, 73 % fényes fehér szilárd terméket kapunk, amely bomlás közben 172°C-on olvad.

’H-NMR (D₂O; 400 MHz) δ 8,10 (dd, 4H), 7,97 (dd, 4H), 7,71 (s, 4H), 7,40 (s, 2H), 5,05 (d, 4H), 5,01 (dd, 4H), 4,89 (d, 4H), 4,47 - 4,60 (m, 12H), 4,28 (dt, 4H), 4,19 - 4,22 ppm (m, 4H); ¹³C-NMR (D₂O; 100 MHz) δ 169,1, 143,1, 138,0, 137,3, 133,4, 128,2, 127,3, 125,0, 121,8, 99,3, 76,0, 75,7, 73,4, 72,5, 70,8 és 67,7 ppm.

Analízis a C₅4H₅2N₂O74SieNie-16H₂O képlet alapján: számított: C, 21,01; H, 2,75; N, 0,91; S, 16,65; talált: C, 20,93; H, 2,78; N, 0,77; S, 16,86.

A kapilláris elektroforézis szerint a tisztaság 91 %-os felesleg.

18. Példa

Bifenil-4,4^,-dikarbonsav-bisz-(f3.5-bisz-(hepta-O-acetil-B-D-maltozil-oximetih-fenin-amidl·

1,07 g, 0,769 mmól 3,5-bisz-(hepta-O-acetil-B-D-maltoziloximetil)-fenilamin és 101 μΙ , 0,769 mmól trietil-amin 20 ml tetrahidrofurános oldatához 107 mg, 0,385 mmól 4,4'-bifenildikarbonsav-dikloridot adunk. Szobahőmérsékleten 3 órát keverjük, majd az elegyet metanollal befagyasztjuk, diklór-metánnal hígítjuk, vízzel mossuk. Magnézium-szulfáttal szárítjuk, bepároljuk. 1,10 g, 96 % címszerinti vegyületet kapunk színtelen szilárd anyag formájában, amely 139-144°C-on olvad.

’H-NMR (CDCI_3i 400MHz) δ 8,66 (bs, 2H), 8,03 (d, 4H), 7,72 (d, 4H), 7,67 (s, 4H), 6,93 (s, 2H), 5,39 (d, 4H), 5,32 (t, 4H),

5,20 (t, 4H), 5,02 (t, 4H), 4,76 - 4,86 (m, 12H), 4,57 - 4,66 (m, 12H), 4,20 - 4,25 (m, 8H), 3,93 - 4,04 (m, 12H), 3,6 - 3,7 (m, 4H), 2,09 (s, 12H), 2,06 (s, 12H), 1,99 (s, 12H), 1,98 (s, 12H), 1,97 (s, 12H), 1,96 (s, 12H) és 1,95 ppm (s, 12H); IR (KBr)1745 cm'¹.

Analízis a Ci₃4H₁₆4N₂O74 képlet alapján: számított: C, 53,89; H, 5,53; N, 0,94;

talált: C, 53,49; H, 5,55; N, 0,94.

2. Lépés

Bifenil-4.4^,-dikarbonsav-bisz-(f3.5-bisz-(B-D-maltozil-oximetil)-fenil1-amid)

973 mg, 0,326 mmól bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5bisz-(hepta-O-acetil-p-D-maltozil-oximetil)-fenil]-amid} és 9,77 ml, 9,77 mmól 1 N-nátrium-hidroxid 15 ml metanolos oldatát 50°C-on 4 óra hosszat keverjük. A reakcióelegyet szobahőmérsékletre hűtjük és 9,12 ml 1N-sósavval befagyasztjuk, bepároljuk. Sephadex G-10 oszlopon tisztítjuk, vízzel eluáljuk. A vizet vákuumban eltávolítjuk, 494 mg, 75 % címszerinti vegyületet kapunk, amely 200°C felett olvad.

¹H-NMR (D₂O, 400 MHz) δ 7,54 (s, 4H), 7,33 (s, 4H), 7,23 7,27 (br, 4H), 7,15 (s, 2H), 5,32 (s, 4H), 4,51 - 4,20 (széles d, 4H), 4,39 (d, 4H), 3,50 - 3,90 (m, 36H) és 3,30 - 3,45 ppm (m, 12); 13C-NMR (D2O; 100 MHz) δ 166,3, 141,7, 137,8, 137,3, 132,0, 127,7, 126,5, 124,1, 120,1, 101,3, 99,9, 77,4, 75,9, 74,4, 72,8, 72,6, 71,6, 70,6, 69,1, 60,6 és 60,3 ppm.

Analízis a C 78ΗιοβΝ₂Θ4β·8Η₂0 képlet alapján; számított: C, 48,84; H, 6,31; N, 1,46;

talált: C, 48,48; H, 6,28; N, 1,58.

-423. Lépés

Bifenil-4.4^l-dikarbonsav-bisz-{í3,5-bisz-(hepta-0-szulfáto-B-D-maltozil-oxímetiD-feniH-amidi-oktakóza-nátriumsó

315 mg, 0,174 mmól bifenill-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5bisz-(3-D-maltozil-oximetil)-fenil]-amid} és 3,58 g, 25,7 mmól kén-trioxid-trimetil-amin komplex 15 ml dimetil-formamidos oldatát 50°C-on 3 napig keverjük, majd az elegyet lehűtjük szobahőmérsékletre, desztillált vízzel befagyasztjuk, bepároljuk. A maradékot Sephadex G-10 oszlopon keresztülengedve tisztítjuk, vízzel eluáljuk. Kationcserét végzünk, a termék vizes oldatát Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú gyantaoszlopon engedjük keresztül, az oldószert eltávolítjuk, toluollal azeotropszárítjuk. 609 mg, 75 % fehéres színű szilárd anyagot kapunk, amely bomlás közben 178°C-on olvad.

¹H-NMR (D2O; 400 MHz) δ 8,06 (d, 4H), 7,94 (d, 4H), 7,69 (s, 4H), 7,36 (s, 2H), 5,58 (d, 4H),5,06 (d, 4H), 5,02 (d, 4H), 4,7 - 4,9 (m, 12H), 4,58 - 4,61 (m, 8H), 4,49 (dd, 4H), 4,12 - 4,46 ppm (m, 28H); ¹³C-NMR (D2O; 100 MHz) δ 169,1, 143,1, 138,0,

137,3, 133,4, 128,2, 127,4, 124,9, 121,7, 99,3, 94,1, 77,1, 76,0, 74,8, 73,2, 73,1, 72,3, 71,8, 70,5, 69,9, 67,5 és 66,0 ppm; tömegspektrum (elektrospray) (M-zNa)/z 1143,7 (m-4 Na)⁴', 910,4 (m-5 Na)⁵', 754,8 (m-6 Na⁶'), 643,7 (m-7 Na⁷'), 560,4 (m-8 Na)⁸'·

Analízis a C7₈H₈oN₂0₁3oS₂₈Na₂₈-28H₂0 képlet alapján: számított: C, 18,12; H, 2,65; N, 0,54; S, 17,36;

talált: C, 18,33; H, 2,73; N, 0,46; S, 17,72.

19. Példa

1. Lépés

-43S.S'-fN.N'-Ureidoj-bisz-ÍN-fS-fhepta-O-acetil-B-Dcellobiozil-oximetil)-2-klór-fenil1-benzamidl·

1,10 g, 1,42 mmól 5-(hepta-O-acetil-p-D-cellobioziloximetil)-2-klór-fenil-amin 20 ml tetrahidrofurános oldatához, amely 198 μΙ, 1,42 mmól trietil-amint tartalmaz, 316 mg, 1,70 mmól 3-nitrobenzoil-kloridot adunk. 3 óra múlva a reakcióelegyet metanollal befagyasztjuk, diklór-metánnal hígítjuk. A reakcióelegyet vízzel mossuk, magnézium-szulfáttal szárítjuk, leszűrjük, bepároljuk. 1,31 g, 1,42 mmól nyers terméket kapunk, melyet a következő reakcióban közvetlenül használunk fel. A nyersanyagot etil-acetátban oldjuk és 2,32 g, 10,28 mmól óndiklorid-hidráttal kezeljük. Visszafolyató hűtő alatt 5 óra hoszszat keverjük, majd lehűtjük szobahőmérsékletre és 300 ml telített nátrium-hidrogén-karbonáttal befagyasztjuk. A reakcióelegyet etil-acetáttal hígítjuk, leszűrjük. A szerves fázist elválasztjuk, a vizes fázist diklór-metánnal extraháljuk. A szerves fázisokat egyesítjük, magnézium-szulfáttal szárítjuk, bepároljuk. 1,18 g, 93 % nyers terméket kapunk, melyet a következő reakcióban közvetlenül használunk fel. 108 μΙ, 7,98 mmól piridint tartalmazó termék 20 ml tetrahidrofurános oldatához 66 mg, 0,22 mmól trifoszgént adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten egész éjjel keverjük, majd vízzel befagyasztjuk és még 30 percig keverjük. A reakcióelegyet leszűrjük, a szilárd anyagot elkülönítjük, diklór-metánban feloldjuk, magnézium-szulfáttal szárítjuk, bepároljuk, majd dietil-éterrel eldörzsölve 995 mg, 82 % címszerinti vegyületet kapunk, amely 173-178°C-on olvad.

¹H-NMR (CDCI_3i 400 MHz) δ 8,47 (s, 2H), 8,41 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,38 (t, 2H), 7,33 (d, 2H), 6,96 (dd, 2H), 5,10 - 5,16 (m, ··· ·· |·4>· ♦ · >·»

-444Η). 5,03 (t, 2Η), 4,90 - 4,96 (m, 4Η), 4,79 (d, 2H), 4,59 (t, 2H), 4,51 - 4,56 (m, 4H), 4,30 (dd, 1H), 4,14 (dd, 1H), 3,99 (dd, 2H), 3,92 (t, 2H), 3,65 - 3,70 (dq, 2H), 2,09 (s, 6H), 2,04 (s, 6H), 2,02 (s, 12H), 1,987 (s, 6H), 1,985 (s, 6H) és 1,96 ppm (s, 6H); ¹³C-NMR (CDCb; 100 MHz) δ 170,6, 170,46, 169,83, 169,17, 169,14, 165,22, 152,47, 139,75, 136,78, 134,85, 134,43,

129,68, 129,13, 124,35, 123,08, 122,95, 121,18, 120,57,

117,99, 100,70, 98,92, 73,22, 72,64, 71,89, 71,74, 71,55, 71,49, 69,97, 67,90, 62,04, 61,53, 20,86, 20,72, 20,64, 20,58, 20,53 és

20,45 ppm; tömegspektrum ((+)-FAB) m/z 1837,5 (M + Na).

Analízis a C81H92N4O39CI2H2O képlet alapján: számított: C, 53,03; H, 5,16; N, 3,05;

talált: C, 52,74; N, 5,09; N, 3,15.

2. Lépés

3.3^,-(N.N^,-Ureido)-bisz-(N-f5-(B-D-cellobiozil-oximetil)-2-klór-fenill-benzamid)

908 mg, 0,50 mmól S.S'-ÍN.N'-ureidoj-bisz-ÍN-fS-íhepta-Oacetil-3-cellobiozil-oximetil)-2-klór-fenil]-benzamid} 20 ml metanolos oldatát, amely 7,5 ml, 7,5 mmól 1 N-nátrium-hidroxidot tartalmaz, 50°C-on nitrogénáramban 4 óra hosszat keverjük. A reakcióelegyet lehűtjük szobahőmérsékletre és 7,0 ml, 7,5 mmól 1N-sósavval befagyasztjuk. Az elegyet 15 percig keverjük, leszűrjük, a szilárd anyagot elkülönítjük, toluollal azeotropszárítjuk. 566 mg, 92 % címszerinti vegyületet kapunk fehéres színű szilárd anyag formájában, amely 183°C-on olvad.

¹H-NMR (DMSO-de; 400 MHz) δ 10,06 (s, 2H), 9,28 (s, 2H), (s, 1H, 2H), 7,75 (d, 1H), 7,60 (d, 2H), 7,59 )s, 2H), 7,50 - 7,55 (q, 4H), 7,44 (d, 2H), 7,33 (dd, 2H), 5,30 (s, 2H), 5,25 (d,2H), ·« ·· ifi»·· £ · · V

-454,86 (d, 2H), 4,70 (s, 2H), 4,33 (d, 2H), 4,25 (d, 2H), 3,75 - 3,80 (dd, 2H), 3,60 - 3,71 (m, 4H) és 3,0 - 3,2 ppm (m, 8H); ¹³C-NMR (DMSO-de; 100 MHz) δ 165,54, 152,70, 140,05, 137,74, 134,90, 134,78, 129,27, 128,95, 128,48, 127,36, 126,53, 121,58,

120,91, 117,80, 103,21, 101,99, 80,49, 76,79, 76,46, 75,01, 73,29, 73,19, 70,04, 68,82, 61,02 és 60,43 ppm; tömegspektrum ((+)-FAB) m/z 1249,2 (M + Na).

Analízis a 053Η₆4Ν₄0₂50Ι2·4Η20 képlet alapján: számított: C, 48,97; H, 5,58; N, 4,31;

talált. C, 49,25; H, 5,58; N, 4,28.

3. Lépés

3.3^,-(N.N'-Ureido)-bisz-((N-f2-klór-5-(hepta-O-szulfáto-B-D-cellobiozil·oximetil)-feniΠl·-benzamid)-tetradeka-nátriumsó

475 mg, 0,387 mmól S.S'-íN.N'-ureidoJ-bisz-fN-ÍS-ípcellobiozil-oximetil)-2-klór-fenil]-benzamid} 25 ml dimetilformamidos oldatát, amely 3,77 g, 27,08 mmól kén-trioxidtrimetil-amin komplexet tartalmaz, 3 napig keverjük 70°C-on. A reakcióelegyet lehűtjük szobahőmérsékletre, desztillált vízzel befagyasztjuk és bepároljuk. A maradékot Sephadex. G-10 oszlopon keresztülengedve tisztítjuk, vízzel eluáljuk. Kationcserét hajtunk végre úgy, hogy a termék vizes oldatát Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú gyantaoszlopon engedjük keresztül. Az oldószert eltávolítjuk, toluollal azeotrop-szárítjuk, 926 mg, 0,349 mmól címszerinti vegyületet kapunk fehéres színű szilárd anyag formájában, amely bomlás közben 168°C-on olvad ¹³C-NMR (D₂O; 100 MHz) δ 169,46, 155,29, 138,29, 136,85, 133,89, 133,06, 129,90, 129,63, 129,56, 128,43, 127,62,

-46124,74, 122,79, 119,59, 99,91, 99,14, 77,61, 77,32, 77,03, 74,28, 73,63, 73,34, 70,0, 67,60 és 66,60 ppm.

Analízis a C53H5oN₄067Si4Nai4-3Na₂S04-18H₂O képlat alapján:

számított: C, 19,08; H, 2,60; N, 1,68; S, 16,34; talált: C, 19,01; H, 2,21; N, 1,74; S, 16,82.

A kapilláriszóna elektroforézis 90 %-nál nagyobb tisztaságot mutat.

20. Példa

1. Lépés

Bifenil-4.4^,-dikarbonsav-bisz-(f2-klór-5-(B-D-cellobiozil-oximetil)-feni Π-amid)

995 mg, 1,28 mmól 5-(hepta-O-acetil-3-D-cellobioziloximetil)-2-klór-fenil-amin és 148 μΙ, 1,28 mmól trietil-amin 25 ml tetrahidrofurános oldatához 179 mg, 0,642 mmól 4,4'-bifenildikarbonsav-dikloridot adunk. Szobahőmérsékleten 2 óra hoszszat keverjük, majd az elegyet metanollal befagyasztjuk, diklórmetánnal hígítjuk, vízzel mossuk. A reakcióelegyet magnéziumszulfáttal szárítjuk, bepároljuk, a kapott olajat éterrel eldörzsölve 1,09 g nyers terméket 99 %-os termeléssel. Az anyagot 20 ml metanolban feloldjuk, 9,5 ml, 1 N-nátrium-hidroxiddal kezeljük. 50°C-on keverjük 4 óra hosszat, majd lehűtjük szobahőmérsékletre és 8,9 ml, 8,9 mmól 1N-sósavval kezeljük. A szilárd anyagot elkülönítve 670 mg, 91 % címszerinti vegyületet kapunk, amely 200°C felett bomlik toluollal történő azeotrop-szárítás után.

¹H-NMR (DMSO-de; 400 MHz) δ 10,21 (s, 2H), 8,13 (d, 4H), 7,95 (d, 4H), 7,61 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,35 (dd, 2H), 5,29 (d,

-472Η), 5,25 - 5,26 (széles, 2H), 4,87 (d, 2H), 4,71 (s, 2H), 4,34 (d, 2H), 4,26 (d, 2H), 3,78 (dd, 2H), 3,15 (széles d, 2H) és 3,05 ppm (széles t, 2H); parciális ¹³C-NMR (DMSO-d_e; 100 MHz) δ 165,0, 128,5, 127,0, 103,2, 102,0, 80,5, 76,8, 76,4, 75,0, 73,3,

73,2, 70,0, 68,8, 61,0 és 60,4 ppm; tömegspektrum (-FAB) m/z 1166,9, 1004,9 és 842,9.

Analízis a C52H62N2O245H2O képlet alapján: számított: C, 49,57; H, 5,76; N, 2,22;

talált: C, 49,81; H, 5,36; N, 2,14.

2. Lépés

Bifenil-4.4^l-dikarbonsav-bisz-íí2-klór-5-(hepta-O-szulfáto-B-D-cellobiozil-oximetil)-fenil1-amid)-tetradeka-nátriumső

531 mg, 0,454 mmól bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[2-klór-5(P-D-cellobiozil-oximetil)-fenilj-amid} és 4,42 g, 31,8 mmól kéntrioxid-trimetil-amin komplex 25 ml dimetil-formamidos oldatát 2 napig keverjük 70°C-on. A reakcióelegyet bepároljuk, Sephadex G-10 oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk, vízzel eluáljuk. Kationcserét végzünk Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú oszlopon, vízzel eluáljuk. A vizet vákuumban eltávolítjuk, toluollal azeotrop-szárítjuk. 705 mg, 60 % címszerinti vegyületet kapunk fehér szilárd anyag formájában, amely bomlás közben 165°C-on olvad.

¹H-NMR (DMSO-de; 400 MHz) δ 8,10 (d, 4H), 7,97 (d, 4H), 7,66 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 7,52 (dd, 2H), 4,99 (d, 2H), 4,98 (d, 2H), 4,58 (d, 2H) és 4,00 - 4,06 ppm (m, 4H); ¹³C-NMR (D₂O; 100 MHz) δ 169,8, 143,5, 137,0, 133,2, 132,6, 130,04, 130,01, 128,7, 128,3, 128,0, 127,5, 99,9, 99,2, 77,7, 77,4, 77,1, 74,3, 73,6, 73,4, 73,2, 67,7 és 66,6 ppm; tömegspektrum

-48(elektrospray) (m-zNa)/z 496,7 (m - 5Na)⁵', 626,6 (m-4Na)⁴' és 843,2 (m-3Na)³'.

Analíz is a C52H48C12N2Na 14066S14· 16H₂O képlet alapján: számított: C, 21,63; H, 2,79; N, 0,97; S, 15,5;

talált: C, 21,24; H, 2,31; N, 0,93; 8,12,25.

21. Példa

1. Lépés

Bifenil-4.4^,-dikarbonsav-bisz-(í2-(B-D-cellobiozil-oximetil)-4-klór-fenill-amid)

861 mg, 1,11 mmól 2-(hepta-O-acetil-p-D-cellobioziloximetil)-4-klór-fenil-amin és 155 μΙ, 1,11 mmól trietil-amin 20 ml tetrahidrofurános oldatához 155 mg, 0,5555 mmól 4,4'bifenil-dikarbonsav-dikloridot adunk. Szobahőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük, majd a reakcióelegyet metanollal befagyasztjuk, diklór-metánnal hígítjuk, vízzel mossuk. A szerves fázist magnézium-szulfát felett szárítjuk, leszűrjük, bepároljuk. 975 mg nyers terméket kapunk, melyet feloldunk 15 ml metanolban és 8,3 ml, 8,3 mmól 1 N-nátrium-hidroxiddal kezelünk. 4 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten, majd az elegyet 7,8 ml 1N-sósavval befagyasztjuk és a szilárd anyagot elkülönítve 590 mg, 91 % fehéres szilárd címszerinti vegyületet kapunk, amely 200°C felett olvad.

Parciális¹H-NMR (DMSO-d₆; 400 MHz) δ 9,95 (s, 2H), 8,11 (d, 4H), 7,93 (d, 4H), 7,67 (d, 2H), 7,62 (d, 2H), 7,42 (dd, 2H),

5,45 (d, 2H), 4,91 (d, 2H), 4,34 (d, 2H) és 4,25 ppm (d, 2H); parciális ¹³C-NMR (DMSO-d₆; 100 MHz) δ 164,9, 142,2, 134,6, 134,5, 133,4, 128,5, 127,0, 103,2, 101,7, 80,4, 80,2, 76,8, 76,4,

-4975,0, 74,9, 73,3, 70,0, 66,3, 61,0 és 60,3 ppm; IR (KBr) 1650 cm'¹; tömegspektrum (-FAB) m/z 1167,3, 843,3 és 704,2.

Analízis a C52H62CI2N2O244H2O képlet alapján:

számított: C, 50,29; H, 5,68; N, 2,26;

talál: C, 50,37; H, 5,38; N, 2,32.

2. Lépés

Bifenil-4.4^,-dikarbonsav-bisz-(f4-klór-2-(hepta-O-szulfáto-BD-cellobiozil-oximetiD-fenin-amidl-tetradeka-nátriumsó

447 mg, 0,382 mmól bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[2-(B-Dcellobiozil-oximetil)-4-klór-fenil]-amid} és 3,85 g, 27,7 mmól kén-trioxid-trimetil-amin komplex 25 ml dimetil-formamidos oldatát 6 napig keverjük 70°C-on. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten vízzel befagyasztjuk, bepároljuk, Sephadex G-10 oszlopon keresztülengedjük, vízzel eluáljuk. Kationcserét végzünk, úgy hogy a termék vizes oldatát Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú kationcserélő oszlopon engedjük keresztül, vízzel eluáljuk. Az oldószert eltávolítjuk, toluollal azeotrop-szárítjuk, 666 mg, 67 % címszerinti vegyületet kapunk fehéres szilárd anyag formájában, amely 172°C-on olvad, és amely kapilláris elektroforézisen meghatározva 70 %-os tisztaságú.

¹H-NMR (D2O; 400 MHz) δ 8,10 (d, 4H), 7,99 (d, 4H), 7,74 (s, 2H), 7,46 - 7,53 (széles, 4H), 4,95 (d, 2H) és 4,90 ppm (d, 2H); ¹³C-NMR (D2O; 100 MHz) δ 169,9, 143,3, 134,5, 133,4, 132,4, 129,7, 129,0, 128,7, 128,3, 127,6, 99,9, 98,8, 77,6, 77,4, 77,0, 74,3, 73,5, 73,4, 73,0, 67,6, 669 és 66,3 ppm.

Analízis a C₅2H4₈Cl2N₂Na₁₄Oe6S₁₄-14H₂O képlet alapján: számított: C, 21,92; N, 2,69; N, 0,98; 8,15,75;

talált: C, 21,98; H, 2,63; N, 1,08; S, 16,05.

-5022. Példa

1. Lépés

N .N'-Bisz-f3.5-bisz-(B-D-cel lob iozil-oxi meti l)-f eni Π-szukcinamid

840 mg, 0,604 mmól 3,5-bisz-(hepta-O-acetil-3-Dcellobiozil-oximetil)-fenil-amin és 86,4 μΙ, 0,31 mmól trietil-amin 20 ml tetrahidrofurános oldatához 34,2 μΙ, 0,31 mmól szukcinilkloridot adunk. Szobahőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük, a reakció nem teljes. További 10 μΙ, 0,09 mmól szukcinil-kloridot adunk hozzá, majd még 15 percig keverjük, metanollal befagyasztjuk, diklór-metánnal hígítjuk, vízzel mossuk. Magnéziumszulfáttal szárítjuk, leszűrjük és bepároljuk. Dietil-éterrel eldörzsőlve zöld szilárd anyagot kapunk, amelyet gyorskromatográfiásan félig tisztítunk, etil-acetáttal eluálva 633 mg, 75 % sárga szilárd anyagot kapunk. A vegyületet metanolban feloldjuk és 6,6 ml, 6,6 mmól 1 N-nátrium-hidroxiddal kezeljük. 4 óra hosszat keverjük 50°C-on, majd az elegyet lehűtjük szobahőmérsékletre és erősen savas Amberlite gyantát adunk hozzá, ameddig semleges pH-t nem észlelünk. 5 percig keverjük, majd a reakcióelegyet leszűrjük, bepároljuk. A kapott sárga szilárd anyagot reverz fázisú kromatográfiásan tisztítjuk (RP-60 szilika gél). Metanol és víz 3:7 arányú elegyét használjuk, majd Sephadex G-10 kromatográfiásan tisztítjuk, vízzel eluáljuk. 278 mg, 94 % címszerinti vegyületet kapunk sárga szilárd anyag formájában:

¹H-NMR (D2O; 400 MHz) δ 7,48 (s, 4H), 7,31 (s, 2H), 4,91 (d, 4H), 4,71 (d, 4H), 4,52 (t, 8H), 3,82 (dd, 4H), 3,74 (dd, 4H), 3,43 (d, 4H) és 2,81 ppm (s, 4H); ¹³C-NMR (D2O; 100 MHz) δ

173.3, 137,9, 137,3, 124,9, 120,9, 102,4, 101,0, 78,5, 75,8,

75.3, 74,6, 74,1, 73,0, 72,7, 70,7, 69,3, 60,4, 59,9 és 31,4 ppm.

2. Lépés

N.N-Bisz-í3.5-bisz-(hepta-O-szulfáto-B-D-celíobiozil-oximetiD-fenill-szukcinamid-oktakóza-nátriumsó

278 mg, 0,208 mmól N,N'-bisz-[3,5-bisz-(p-D-cellobioziloximetil)-fenil]-szukcinamid és 4,23 g, 29,0 mmól kén-trioxidtrimetil-amin komplex 20 ml dimetil-formamidos oldatát 70°C-on 3 napig keverjük. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten vízzel befagyasztjuk és bepároljuk. Sephadex G-10 oszlopon tisztítjuk, vízzel eluáljuk, majd kationcserét hajtunk végre Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú gyantaoszlopon. 606 mg, 64 % címszerinti vegyületet kapunk cserszínű szilárd anyag formájában, amely bomlás közben 168°C-on olvad.

Parciális ¹H-NMR (D2O; 400 MHz) δ 7,58 (s, 4H), 7,36 (s, 2H), 4,00 - 5,00 (m, 64H) és 2,87 ppm (s, 4H); ¹³C-NMR (D2O; 100 MHz) δ 173,3, 138,0, 137,1, 124,4, 99,9, 99,7, 77,6, 77,4, 77,0, 74,3, 73,4, 72,9, 70,9, 67,6, 66,2 és 37,1 ppm; tömegspektrum (elektrospray) (m-zNa)/z 734,1 (m - 6Na)⁶‘, 885,5 (m 5Na)⁵' és 1112,7 (m - 4Na)⁴*.

Analízis a C₆8H76N₂Oi3oS₂₈Na₂8-38H₂0 képlet alapján: számított: C, 15,62; H, 2,93; N, 0,54; S, 17,18;

talált: C, 15,24; H, 2,43; N, 0,75; S, 17,67.

23. Példa

1. Lépés

N.N'-Bisz-ÍS.S-bisz-fB-D-cellobiozil-oximetiD-fenin-iereftáiamid

-52823 mg, 0,592 mmól 3,5-bisz-(hepta-O-acetil-p-Dcellobiozil-oximetil)-fenil-amint és 82,5 μΙ, 0,592 mmól trietilamin 15 ml tetrahidrofurános oldatához 60,1 mg, 0,296 mmól tereftáloil-kloridot adunk. Szobahőmérsékleten 2 óra hosszat keverjük, majd a reakcióelegyet metanollal befagyasztjuk, diklór-metánnal hígítjuk, vízzel mossuk. A szerves fázist magnézium-szulfát felett szárítjuk, leszűrjük, bepároljuk. Dietiléterrel eldörzsölve 845 mg, 98 % nyers terméket kapunk, melyet 20 ml metanolban oldunk, 8,7 ml, 8,7 mmól 1N-nátriumhidroxiddal kezelünk. 50°C-on 3 óra hosszat keverjük, majd lehűtjük szobahőmérsékletre és hozzáadunk 8,1 ml, 8,1 mmól 1Nsósavat. A szilárd anyagot izoláljuk, vákuumban szárítjuk, 295 mg, 59 % címszerinti vegyületet kapunk fehér szilárd anyag formájában, amely bomlás közben 185°C-on olvad.

Parciális ¹H-NMR (DMS0-de 5 csepp D2O-val; 400 MHz) δ 8,01 (s, 4H), 7,64 (s, 4H), 7,18 (s, 2H), 4,81 (d, 2H), 4,56 (d, 2H), 4,33 (d, 2H), 4,26 (d, 2H) és 3,77 ppm (d, 2H); ¹³C-NMR (DMSO-de; 100 MHz) δ 164,7, 138,7, 138,2, 137,3, 127,7, 122,9,

119,3, 103,2, 101,9, 80,5, 76,8, 76,4, 75,1, 75,0, 73,3, 73,2, 70,0, 69,9, 61,0 és 60,4 ppm; IR (KBr) 1650 cm'¹.

Analízis a 0₇2Ηιο4Ν_βθ4β·12Η₂0 képlet alapján: számított: C, 44,35; H, 6,62; N, 1,44;

talált: C, 44,05; H, 6,30; N, 1,41.

2. Lépés

N.N'-Bisz-ÍS.S-bisz-fhepta-O-szulfáto-B-D-cellobiozil-oximetiD-fenin-tereftálamid-oktakóza-nátriumsó

178 m, 0,103 mmól N,N'-bisz-[3,5-bisz-(P-D-cellobioziloximetil)-fenil]-tereftálamid és 2,0 g, 14,4 mmól kén-trioxid-

-53trimetil-amin komplex 20 ml dimetil-formamidos oldatát 70°C-on 3 napig keverjük. A reakcióelegyet lehűtjük, vízzel befagyasztjuk, bepároljuk. A maradékot Sephadex G-10 oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk, vízzel eluáljuk. Kationcserét végzünk Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú gyantaoszlopon. 402 mg, 85 % címszerinti vegyületet kapunk fehéres szilárd anyag formájában, amely bomlás közben 163°C-on olvad.

Parciális ¹H-NMR (D₂O; 400 MHz) δ 8,09 (s, 4H), 7,71 (s, 4H), 7,43 (s, 2H), 5,03 (d, 2H) és 5,00 ppm (d, 2H); ¹³C-NMR (DMSO-de; 100 MHz) δ 168,7, 138,1, 137,2, 137,1, 127,8, 125,0,

121,7, 99,9, 99,7, 77,6, 77,4, 77,0, 74,3, 73,4, 72,9, 70,9, 67,6 és 66,3 ppm; tömegspektrum (elektrospray) (m-zNa)/z 632,8 (m - 7Na)⁷', 742,1 (m - 6Na)^e‘ és 895,2 (m - 5Na)^s' és 1124,7 (m 4)⁴’.

Analízis a C₇2H76N₂Na₂₈Oi3oS₂8-28H₂0 képlet alapján: számított: C, 16,97; H, 2,61; N, 0,55; S, 17,62;

talált: C, 16,77; H, 2,41; N, 0,59; S, 17,42.

24. Példa

1. Lépés

Bifenil-4.4'-diszulfonsav-bisz-fí5-(B-D-cellobiozil-oximetil)-2-metii-feni Π-amid)

970 mg, 1,28 mmól 5-(hepta-O-acetil-p-D-celIobioziloximetil)-2-metil-fenil-amin 20 ml diklór-metános oldatához, amely 1,0 ml, 12,4 mmól piridint tartalmaz, hozzáadunk 225 mg, 0,641 mmól bifenil-4,4'-diszulfonil-kloridot. Szobahőmérsékleten 90 percig keverjük, majd az elegyet nátrium-hidrogénkarbonáttal befagyasztjuk és etil-acetátban extraháljuk. A világossárga szerves fázist ρΗ-7-es pufferral mossuk, magnézium-54szulfát felett szárítjuk és gyorskromatografáljuk, etil-acetát és dietil-éter valamint diklór-metán 1:1:1 arányú elegyével eluálva 504 mg, 58 % narancsszínű port kapunk. A két különálló párlatból kapott 675 mg, 0,378 mmól összanyagot feloldjuk 10 ml metanolban és 10 ml tetrahidrofuránban és 6 ml 1N-nátriumhidroxiddal kezeljük. Szobahőmérsékleten 12 óra hosszat keverjük, majd az elegyet 6 ml 1N-sósavval befagyasztjuk, kb. 6-8 mire bepároljuk. A kapott csapadékot izoláljuk, 15 ml vízzel, majd dietil-éterrel mossuk. Toluollal azeotrop-szárítjuk, 335 mg, 74 % halványsárga port kapunk, amely bomlás közben 230°C-on olvad.

¹H-NMR (DMSO, 400 MHz) δ 9,69 (s, 2H), 7,91 (d, 4H), 7,75 (d, 4H), 7,16 (d, 2H), 7,11 (s, 2H), 7,10 (d, 2H), 4,71 (d, 2H),

4,46 (d, 2H), 4,24 - 4,28, 3,77 (d, 2H), 3,70 (d, 2H), 3,58 - 3,64 (m, 2H), 2,97 - 3,43 (m, 18H) és 1,91 ppm (s, 6H); ¹³C-NMR (DMSO, 100 MHz) δ 142,2, 140,5, 136,1, 134,4, 132,9, 130,5,

127,8, 127,2, 126,0, 103,2, 101,6, 80,5, 76,7, 76,4, 75,1, 74,9, 73,2, 73,1, 70,0, 69,1, 61,0, 60,4 és 17,2 ppm; tömegspektrum ((-)-FAB) m/z 1199,3, 750,2, 514,2..

Analízis a C52H68N2O26S2H2O képlet alapján: számított: C, 51,23; H, 5,79; N, 2,30;

talált: C, 51,04; H, 5,64; N, 2,29.

2. Lépés

Bifenil-4,4^,-diszulfonsav-bisz-ff2-metil-5-fhepta-O-szulfátoB-D-cellobiozil-oximetih-feni Π-amid)

214 mg, 0,178 mmól bifenil-4,4'-diszulfonsav-bisz-{[5-(3-Dcellobiozil-oximetil)-2-metil-fenil]-amid} 10 ml dimetilformamidos elegyéhez 1,8 g, 12,9 mmól kén-trioxid-trimetil-amin

-55komplexet adunk. 70°C-on 3 napig keverjük, majd az elegyet szobahőmérsékletre hűtjük, 10 ml vízzel befagyasztjuk és 20 percig keverjük. Vákuumban bepároljuk, gélszűréssel (Sephadex G-10) tisztítjuk, 419 mg halvány cserszínű pelyheket kapunk. A vegyületet minimális mennyiségű vízben oldjuk és Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú ioncserélő oszlopon engedjük keresztül. 350 mg, halvány cserszínű pelyheket kapunk toluolos azeotrop-szárítás után.

'H-NMR (D₂O, 400 MHz) δ 7,89 (d, 4H), 7,81 (d, 4H), 7,39 (d, 2H), 7,32 (s, 2H), 7,25 (d, 2H), 4,94 (d, 2H), 4,65 - 4,87 (m, 8H), 4,57 (dd, 2H), 4,18 - 4,51 (m, 16H), 3,98 - 4,05 (m, 4H) és 1,90 ppm (s, 6H); ¹³C-NMR (D₂O, 100 MHz) δ 143,8, 138,0,

135,4, 134,9, 131,1, 128,1, 128,0, 127,8, 127,3, 99,9, 98,7, 77,6, 77,3, 77,2, 76,9, 74,3, 73,7, 73,3, 72,93, 70,3, 67,6, 66,6 és 16,4 ppm.

Analízis a C52H54N₂Na₁₄O_e8Si6-18H₂O képlet alapján: számított: C, 21,14; H, 3,05; N, 0,95;

talált: C, 21,17; H, 2,71; N, 0,96.

25. Példa

1. Lépés

N.N^,-Bisz-í2-metil-5-(6-D-glükopiranozil-oximetil)-feninszukcinamid

879 mg, 1,88 mmól 5-(tetra-O-acetil-p-D-glükopiranoziloximetil)-2-metil-fenil-amin és 262 μΙ, 1,88 mmól trietil-amin 10 ml tetrahidrofurános oldatához 104 μΙ, 0,94 mmól szukcinilkloridot adunk. Szobahőmérsékleten 3 óra hosszat keverjük, majd az elegyet 20 ml metanollal befagyasztjuk, diklór-metánnal hígítjuk és vízzel mossuk. Magnézium-szulfát felett szárítjuk,

-56bepároljuk. Dietil-éterből kristályosítva 741 mg, 78 % zöld szilád anyagot kapunk, melyet a következő reakcióban közvetlenül alkalmazunk. 360 mg, 0,354 mmól nyers termék 7,5 ml metanolos oldatához 3,54 ml, 3,54 mmól 1 N-nátrium-hidroxidot adunk. 90 percig keverjük 50°C-on, majd az elegyet szobahőmérsékleten 2,85 ml, 2,50 mmól 1N-sósavval befagyasztjuk, majd egy órát keverjük szobahőmérsékleten. A szilárd anyagot elkülönítjük és 229 mg címszerinti vegyületet kapunk.

¹H-NMR (DMSO-de, 300 MHz) δ 9,41 (s, 2H), 7,36 (s, 2H), 7,17 (d, 2H), 7,12 (d, 2H), 4,78 (d, 2H), 4,50 (d, 2H), 4,22 (d, 2H), 3,69 (d, 2H), 2,67 (s, 4H) és 2,18 ppm (s, 6H).

2. Lépés

N.N'-Bisz-f2-metil-5-(2.3.4.6-tetra-O-szulfáto-B-D-glűkooiranozil-oximetiD-fenill-szukcinamid-okta-nátriumsó

229 mg, 0,337 mmól N,N'-bisz-[2-metil-5(p-Dglükopiranozil-oximetil)-fenil]-szukcinamid és 2,11 g, 15,2 mmól kén-trioxid-trimetil-amin komplex 30 ml dimetil-formamidos oldatát egész éjjel keverjük 50°C-on, majd az elegyet 10 ml vízzel befagyasztjuk és bepárolva olajos szilárd anyagot kapunk. Ezt eltávolítjuk, kis mennyiségű vízzel öblítjük, az egyesített szűrleteket bepároljuk és részben ismételt Sephadex G-10 kromatografálással tisztítjuk. Vízzel eluáljuk, majd egy 500 MW elzáró zacskó alkalmazásával dialízissel tisztítjuk. Kis mennyiségű trimetil-ammónium-szulfát még mindig látható NMR analízissel. Kationcserét hajtunk végre Dowex 50x8 erősen savas nátrium formájú gyantaoszlopon, vízzel eluálva 249 mg, 49 % címszerinti fehéres színű szilárd anyagot kapunk, amely 200°C felett olvad.

Parciális ¹H-NMR (D20, 400 MHz) δ 7,39 (d, 2H), 7,37 (d,2H) és 4,55 ppm (t, 2H); ¹³C-NMR (D2O, 100 MHz) δ 173,9, 134,82, 134,80, 134,3, 130,8, 127,6, 126,7, 98,8, 75,9, 75,5,

73,4, 72,4, 70,5, 67,8, 31,0 és 16,7 ppm; tömegspektrum ((-)FAB) mz 1472,6 (M-Na)‘, 1370,7 (m-Na-NaSO₃+H)', 765,9 és

564,8.

Analízis a C3₂H₃₆N₂O₃8S8-6H₂O képlet alapján: számított: C, 20,34; H, 2,54; N, 1,48;

talált: C, 20,19; H, 2,22; N, 1,39.

26. Példa

1. Lépés

N-f5-(Hepta-O-acetil-B-D-maltozil-oximetil)-2-metil-feniH-3-nitrobenzamid

1,90 g, 2,52 mmól 5-(hepta-O-acetil-p-maltozil-oximetil)-2metil-fenil-amin és 0,22 g, 2,77 mmól piridin 10 ml diklórmetános kevert elegyéhez 0,51 g, 2,77 mmól 3-nitrobenzoilkloridot adunk. 18 óra múlva az elegyet etil-acetáttal hígítjuk, telített nátrium-hidrogén-karbonáttal, vízzel és telített konyhasó oldattal mossuk, magnézium-szulfáttal szárítjuk, majd bepároljuk. Gyorskromatográfiásan tisztítjuk, etil-acetát és hexán 1:1 arányú elegyével eluálva 2,0 g, 88 % címszerinti vegyületet kapunk fehér hab formájában.

¹H-NMR (DMSO-de, 400 MHz) δ 10,28 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 8,45 (dd, 1H), 8,42 (d, 1H), 7,84 (m, 1H), 7,28 (d, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,10 (d, 1H), 5,30 (m, 2H), 5,20 (t, 1H), 5,05 (t, 1H), 4,85 (d, 1H), 4,80 (m, 1H), 4,75 (m, 2H), 4,56 (d, 1H), 4,40 (dd, 1H), 4,19 (m, 2H), 4,0 (m, 4H), 2,20 (s, 3H) és 2,00 ppm (m, 21H).

Analízis a C4iH₄sN₂O₂i képlet alapján:

-58számított: C, 54,42; H, 5,35; N, 3,10;

talált: C, 54,30; H, 5,27; N, 3,10.

2. Lépés

N-f5-(B-Maltozil-oximetil)-2-metil-feniH-3-nitrobenzamid

2,00 g, 2,21 mmól N-[5-(hepta-O-acetil-B-D-maltozil-oxi)-2metil-fenil]-3-nitrobenzamid 20 ml metanolos kevert oldatához 5,10 ml, 22,10 mmól 25 tömeg %-os nátrium-metilát metanolos oldatát adjuk. 3 óra múlva 10 g Amberlite IR-120 (H+) ioncserélő gyantát adunk hozzá, az elegyet leszűrjük, a szűrletet bepároljuk. 1,30 g, 96 % címszerinti vegyületet kapunk fehér szilárd anyag formájában, amely 166-168°C-on olvad.

¹H-NMR (DMSO-d_e, 400 MHz) δ 10,37 (s, 1H), 8,80 (t,1 H),

8,43 (m, 2H), 7,85 (m, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,25 (m, 2H), 5,00 (d, 1H), 4,85 (d, 1H), 4,57 (d, 1H),4,30 (d, 1H), 3,75 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 3,40 (m, 6H), 3,10 (m, 2H) és 2,21 ppm (s, 3H); tömegspektrum m/e 609 (M-H).

3. Lépés

N-r5-(HeDta-O-szulfáto-B-D-maltoziloxi)-2-metil-fenin-3-nitrobenzamid-hepta-nátriumsó

1,27 mg, 2,08 mmól N-[5-(P-D-maltozil-oximetil)-2-metilfenil]-3-nitrobenzamid és 10,13 g, 72,79 mmól kén-trioxidtrimetil-amin komplex 10 ml dimetil-formamidos elegyét 4 napig melegítjük 70-75°C-on. Az elegyet lehűtjük, hozzáadunk metanolt, az elegyet leszűrjük, a szűrletet bepároljuk, metanolban felvesszük és Sephadex LH-20-100 oszlopon engedjük keresztül (metanol és triklór-metán 1:1 arányú elegyével és 0,1 % trietilaminnal eluáljuk). A frakciókat koncentráljuk, Sephadex G-10 gélszűrő oszlopon engedjük keresztül, vízzel eluáljuk. Barna

-59olajat kapunk, majd tovább tisztítjuk reverz fázisú kromatográfiásan (C-18; H₂O), gyorskromatográfiásan, metil-cianid, víz és trietil-amin 5:01:0,5 arányú elegyével eluáljuk, és Sephadex SP C-25 (Na⁺) oszlopon ion-cseréljük. 1,10 g, 40 % címszerinti vegyületet kapunk fehér szilárd anyag formájában, amely 168170°C-on olvad.

¹H-NMR (D₂O, 400 MHz) δ 8,82 (t, 1H), 8,52 (m, 1H), 8,38 (m, 1H), 7,86 (m, 1H), 7,45 (s, 2H), 5,57 (d, 1H), 4,99 (d, 1H), 4,95 (d, 1H), 4,80 (m, 2H), 4,62 (t, 1H), 4,55 (s, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,30 (m, 4H), 4,18 (m, 1H), 4,05 (m, 1H) és 2,31 ppm (s, 3H); tömegspektrum m/z 1323.

Analízis a C27H₂7N₂Na7O35S7-3H₂O képlet alapján: számított: C, 23,52; H.2,41; N, 2,03;

talált: C, 22,70; H, 2,69; N, 1,72.

4. Lépés

3-rN-F(Hepta-O-szulfáto-B-D-maltoziloxi)-2-metil-fenil1-fenil-amin-hepta-nátriumsó

0,60 g, 0,45 mmól N-[5-(hepta-O-szulfáto-p-D-maltoziloxi)2-metil-fenil]-3-nitrobenzamid-hepta-nátriumsó metanollal, vízzel és piridinnel készített oldatát atmoszférikus nyomáson 6 óra hosszat hidrogénezzük 10 %-os palládium/csontszén katalizátoron. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk, a szűrletet bepároljuk, Sephadex SP-C25 (Na*) ioncserélő oszlopon engedjük keresztül és 0,40 g, 68 % címszerinti vegyületet kapunk fehér szilárd anyag formájában, amely 232-234°C-on bomlás közben olvad.

’H-NMR (D₂O, 300 MHz) δ 7,20 (m, 6H), 6,93 (m, 1H), 5,42 (d, 1H), 4,75 (d, 1H), 4,60 (m, 3H), 4,48 (m, 2H), 4,40 (dd, 2H),

-604,30 (t, 1H), 4,15 (m, 2H), 4,05 (m, 3H), 3,95 (m, 2H) és 2,15 ppm (s, 3H).

5. Lépés

3.3^,-íN.N^,-UreidoT-bisz-r(N-f2-metil-5-(hepta-O-szulfáto-B-Dmaltozil-oximetiD-fenilB-benzamid-tetradeka-nátriumsó

440 mg, 0,34 mmól 3-[N-[5-(hepta-O-szulfáto-p-Dmaltoziloxi)-2-metil-fenil]]-fenil-amin-hepta-nátriumsó és 5 ml piridin kevert elegyéhez 20 mg, 0,057 mmól trifoszgént adunk. Szobahőmérsékleten még 18 óra hosszat keverjük, majd az elegyet bepároljuk, Sephadex G-10 gélszűrési oszlopon engedjük keresztül, utána Sephadex SP-C25 (Na⁺) ioncserélő oszlopra visszük. A frakciókat bepároljuk, metanollal eldörzsöljük, 350 mg 79 % címszerinti vegyületet kapunk fehéres szilárd anyag formájában, amely 220°C-on bomlás közben olvad.

¹H-NMR-(D₂O, 400 MHz) δ 7,61 (d, 2H), 7,59 (s, 2H), 7,50 (m, 2H), 7,43 (m, 8H), 7,29 (d, 2H), 5,54 (d, 2H), 4,95 (t, 4H),

4,80 (m, 2H), 4,61 (t, 2H), 4,52 (dd, 2H), 4,44 (t, 4H), 4,30 (m, 12H), 4,20 (m, 2H), 3,98 (t, 2H) és 2,28 ppm (s, 6H); ¹³C-NMR (D₂O, 100 MHz) 5 169,8, 135,3, 135,1, 134,8, 134,4, 131,1, 130,0, 128,1, 126,9, 122,3, 121,7, 117,6, 94,7, 77,6, 76,6, 75,0, 73,7, 73,3, 73,1, 72,5, 69,8, 67,8, 66,0 és 16,8 ppm; tömegspektrum m/z 1797.

Analízis a CssHse^NanOezSi^l8H₂O képlet alapján: számított: C, 22,47; H, 3,15; N, 1,91;

talált: C, 22,11; H, 2,81; N, 1,59.

27. Példa

1. Lépés

-61 N.N^,-Bisz-(3-í2-metil-5-(hepta-O-acetil-B-D-maltozil-oxi met il)-fenil-karbamoi Π-fen ill-izoftalamid

1,0 g, 1,143 mmól 3-amino-[5-(hepta-O-acetil-p-D-maltoziloximetil)-2-metil-fenil]-benzamid és 0,12 g, 1,143 mmól trietilamin kevert elegyéhez 0,12 g, 0,572 mmól izoftáloil-dikloridot adunk. 18 óra múlva vizet adunk hozzá, a fázisokat elválasztjuk, a szerves fázist telített vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal és telített konyhasó oldattal mossuk. Magnézium-szulfát felett szárítjuk, bepároljuk. Gyorskromatográfiásan tisztítva 0,57 g, 53 % fehér szilárd terméket kapunk, amely 178-180°C-on olvad.

¹H-NMR (DMSO-d_e, 300 MHz) δ 10,60 (s, 2H), 9,90 (s, 2H), 8,60 (s, 1H), 8,37 (s, 2H), 8,21 (dd, J = 1,5, 7,7 Hz, 2H), 8,05 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,75 (m, 3H), 7,52 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 7,25 (m, 4H), 7,10 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 5,30 (m, 5H), 5,03 (m, 3H),

4,80 (m, 4H), 4,70 (m, 4H), 4,50 (d, J = 12,5 Hz, 2H), 4,40 (d, J = 12,5 Hz, 2H), 4,20 (m, 4H), 3,95 (m, 8H), 2,20 (s, 6H) és 1,90 - 2,00 ppm (m, 42H).

2« Lépés

N. N^l-Bisz-f3-f2-metil-5-(B-D-maltozil-oximetil)-fenil-karbamoill-feniD-izoftalamid

O, 572 g, 0,304 mmól N,N'-bisz-{3-[2-metil-5-(hepta-O-acetilB-D-maltozil-oximetil)-fenil-karbamoil]-fenil}-izoftalamid 10 ml metanolos melegített oldatához 0,5 ml, 2,13 mmól 25 tömeg %os nátrium-metilát metanolos oldatát adjuk. 2 óra múlva hozzáadunk Amberlite IR-120 (H*) gyantát. Az elegyet leszűrjük, bepároljuk, 0,300 g, 77 % fehér szilárd terméket kapunk, amely 232-234°C-on olvad.

-62¹H-NMR (DMSO-de, 300 MHz) δ 10,65 (s, 2H), 9,90 (s, 2H), 8,60 (s, 1H), 8,35 (s, 2H), 8,21 (dd, J = 1,5, 7,7 Hz, 2H), 7,20 (m, 5H), 5,01 (d, J = 3,9 Hz, 2H), 4,80 (d, J = 12,5 Hz, 2H), 4,50 (d, J = 12,5 Hz, 2H), 4,30 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 3,20 - 3,75 (m, 26H), 3,10 (m, 4H), 2,20 (s, 6H).

3. Lépés

N. N-Bisz-(3-í2-metil-5-(Hepta-O-szulfáto-B-D-maltozil-oxi meti D-fenil-karbamoi Π-fen ill-izoftál amid-tetradeka-nátriumsó

O, 30 g, 0,232 mmól N,N'-bisz-{3-[2-metil-5-(3-D-maltoziloximetil)-fenil-karbamoil]-fenil}-izoftálamid és 2,60 g, 16,267 mmól kén-trioxid-piridin komplex 10 ml dimetil-formamidos elegyét szobahőmérsékleten 2 napig keverjük. Az elegyet bepároljuk, Sephadex LH-20-100 oszlopon tisztítjuk, 0,5 % trietil-amint tartalmazó dimetil-formamiddal eluáljuk és Sephadex SP-C25 ioncserélő gyantán nátriumsóvá alakítjuk. 0,200 g, 31 % fehéres színű szilárd anyagot kapunk, amely bomlás közben 22°C-on olvad.

¹H-NMR (D2O, 400 MHz) δ 8,45.(s, 1H), 8,35 (széles s, 2H), 8,10 (széles s, 2H), 7,95 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,85 (d, 7,9 Hz, 2H), 7,75 (széles s, 2H), 7,57 (széles s, 2H), 7,35 (széles s, 5H), 4,75 (m, 4H), 4,45 (m, 4H), 4,30 (m, 4H), 4,10 (m, 4H), 3,80 (m, 4H), 3,57 (m, 4H), 3,28 (m, 8H) és 2,20 ppm (s, 6H); ¹³CNMR (D2O, 100 MHz) δ 160, 137, 134, 130, 128, 120, 102, 96, 75, 74, 72, 62, 56, 49, 18 ppm.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. (I) Általános képletű vegyület, ahol az összes R¹, R², R³ és R⁴ egymástól függetlenül hidrogénatom, SO3M, vagy a) képletű cukorcsoport és az összes b) képletű oligoszacharid-csoport 1-3 cukorcsoportot tartalmaz,

M jelentése lítium, nátrium, kálium vagy ammónium, n értéke 1 vagy 2,

Y jelentése karbonil- vagy szulfonilcsoport,

Z jelentése 1-12 szénatomos alkilcsoport, vagy c), d), e) vagy f) általános képletű csoport, ahol X jelentése a fenti, vagy gyógyászatilag elfogadható sója.

2-N,N'-bisz-[5-(hepta-O-sziilfáto-p-D-cellobiozil-oximetil)-2metil-fenil]-tereftálamid-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-[{[-(hepta-0-szulfáto-p-Dcellobiozil-oximetil)-2-metil-fenil]-amid}-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

N,N'-bisz-[5-(hepta-O-szulfáto-P-D-cellobiozil-oximetil)-2metil-fenil]-izoftálamid-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Dekándisav-bisz-{[3,5-(bisz-(hepta-O-szulfáto-P-Dcellobiozil-oximetil)-fenil]-amid-oktakóza-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

·♦

-65Bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5-bisz-(hepta-O-szulfáto-3D-laktozil-oximetil)-fenil]-amid}-oktakóza-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[3,5-(bisz-(hepta-O-szulfáto3-D-maltozil-oximetil)-fenil]-amíd}-oktakóza-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Bifenil-4,4'-dikarbonsav-bisz-{[4-klór-2-(hepta-O-szulfáto-pD-cellobiozil-oximetil)-fenil]-amid}-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

N,N'-bisz-[3,5-bisz-(hepta-O-szulfáto-3-D-cellobioziloximetil)-fenil]-szukcinamid-oktakóza-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

N,N’-bisz-í3,5-bisz-(hepta-O-sztilfáto-3-D-cellobioziloxímetil)-fenil]-tereftálamid-oktakóza-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

Bifenil-4,4^,-diszulfonsav-bisz-{[2-metil-5-(hepta-O-szulfáto3-D-cellobiozil-oximetil)-fenil]-amid}-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

N,N'-bisz-[2-metil-5-(2,3,4_I6-tetra-O-szulfáto-p-Dglükopiranozil-oximetil)-fenil]-szukcinamid-okta-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

-663,3^,-[1,3-ureido]-bisz-{N-[2-metil-5-(hepta-O-szulfáto-p-Dmaltozil-oximetil)-fenil]}-benzamid-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

2. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol az összes R¹, R², R³ és R⁴ egymástól függetlenül H, SO3M vagy a) képletű csoport, és az összes oligoszacharid b) képletű csoport 1 vagy 2 cukorcsoportot tartalmaz,

M jelentése lítium, nátrium, kálium vagy ammónium, n értéke 1 vagy 2,

Y jelentése karbonil- vagy szulfonilcsoport,

Z jelentése 1-12 szénatomos alkilcsoport vagy vagy gyógyászatilag elfogadható sója.

3,3'-(N,N'-ureido)-bisz-({N-[2-klór-5-(hepta-O-szulfáto-P-Dcellobiozil-oximetil)-fenil]}-benzamid)-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

N,N'-bisz-{3-[2-metil-5-(hepta-O-szulfáto-3-D-maltoziloximetil)-fenil-karbamoil]-fenil}-izoftálamid-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója.

3. A 2. igénypont szerinti vegyület, amely

Dodekándisav-bisz-{[2-metil-5-(hepta-0-szulfáto-P-Dcellobiozil-oximetil)-fenil]-amid}-tetradeka-nátriumsó vagy gyógyászatilag elfogadható sója;

4. Gyógyszerkészítmény, amely hatékony mennyiségű (I) általonos képletű vegyületet vagy gyógyászatilag elfogadható sóját tartalmazza, ahol R¹, R², R³ és R⁴ egymástól függetlenül hidrogénatom, SO₃M, vagy a) képletű cukorcsoport és az összes b) képletű oligoszacharid-csoport 1-3 cukorcsoportot tartalmaz, M jelentése lítium, nátrium, kálium vagy ammónium, n értéke 1 vagy 2,

Y jelentése karbonil- vagy szulfonilcsoport,

5. (I) Általános képletű vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sójának hatékony mennyiségének - ahol R¹, R², R³ és R⁴ egymástól függetlenül hidrogénatom, SO₃M, vagy a) képletű cukorcsoport és az összes b) képletű oligoszacharid-csoport 13 cukorcsoportot tartalmaz,

M jelentése lítium, nátrium, kálium vagy ammónium, n értéke 1 vagy 2,

Y jelentése karbonil- vagy szulfonilcsoport,

Z jelentése 1-12 szénatomos alkilcsoport, vagy c), d), e) vagy f) általános képletű csoport, ahol X jelentése a fenti alkalmazása gyógyszer előállítására, túlzott simaizom burjánzástól szenvedő páciensek kezelésére.