HUT72993A

HUT72993A - Process to prepare phatmaceutical compns. contg antiangiogenic oligomers

Info

Publication number: HUT72993A
Application number: HU9500493A
Authority: HU
Inventors: Alan J Bitonti; Paul S Wright
Original assignee: Merrell Dow Pharma
Priority date: 1992-08-19
Filing date: 1993-07-20
Publication date: 1996-06-28
Also published as: IL106707A; CA2142110A1; ZA935941B; IL106707A0; NZ254646A; JPH08500590A; US5593664A; WO1994004165A1; HU9500493D0; NO950602L; NO950602D0; EP0655923A1; AU675961B2; AU4684893A; MX9305010A

Description

A találmány tárgya bizonyos anionos oligomer vegyületek, amelyek alkalmasak érképződés inhibiálására. A vegyületeket például atherosclerosis, tumorok és metastasis állapot kezelésére alkalmazhatjuk.

60.170/SM

Az érképzödés vagy új érképződés olyan folyamat, amelynek során hajszálér eredetű új éredények alakulnak ki. Ez a folyamat bizonyos előnyös hatású változások során, mint például sérülés gyógyulása vagy embrió fejlődés, elengedhetetlenül szükséges. Az érképződés ezen túlmenően alapvető előfeltétele bizonyos káros folyamatoknak, mint például tumor növekedés, illetve diabetikus retinopathia. Az érrendszerrel nem rendelkező tumorok kis méretűek maradnak és méretük általában kisebb mint néhány milliméter átmérőjű. Az ilyen tumorok mérete elsődleges szilárd tumorok és metastasis állapotú tumorok esetében is limitált, mivel a tumor számára nem áll rendelkezésre tápanyag, vagyis a tápanyagok nem tudnak a tumorban diffundálni. Amikor a tumorban az érképződés megtörténik, a tumor gyors növekedésnek indul és hamarosan klinikai problémát okoz. Bebizonyították, hogy a tumorok egy anyagot bocsátanak ki, amelyet tumor-érképző faktornak neveznek és amely anyag a közeli belhám sejteket hajszálerek képzésére stimulálja. Ennélfogva, amennyiben a tumorsejtben a tumor érképző faktor kibocsátást inhibiálni vagy csökkenteni tudjuk vagy a már kibocsátott faktor hatóanyagot hatástalanítani sikerül az elsődleges és a metastasis tumor beültetés vagy növekedés megakadályozható, illetve a betegség visszaszorítható.

Az új érképződéssel járó egyéb káros folyamatok például az új érrendszerből származó betegségek a szemben, mint például a lencse mögötti rostszövet képződés, a diabetikus retinopathia és az új érképzésből származó glaucoma. Az ilyen betegségeket a tumorokhoz, illetve a tumor metastasis állapothoz hasonlóan kezelhetjük valamely érképződés ellenes hatóanyag adagolásával. A heparinról, illetve a heparin-szulfátról leírták, hogy ilyen célokra hatásosan alkalmazhatók.

Kísérleteink során kimutattuk, hogy bizonyos szintetikus oligomerek csoportja heparin mimetikus hatású és az ilyen típusú oligomerek érképzödés ellenes aktivi60.170/SM ··♦ • · ♦ · • ♦ · · • · · · • · · · tással inhibiálják a sejtburjánzást. Ennélfogva, ezek az oligomer vegyületek alkalmazhatók érképzödéssel járó különféle betegségek és rendellenességek kezelésére.

A találmány tárgya (1a), (1b) általános képletű anionos poliamid- és polikarbamid oligomer vegyületek alkalmazása, ahol az általános képletben

X és X³ jelentése egymástól függetlenül fenilén-csoport, amely lehet a (2), (3), (4), (5), (6), (7), (8), (9) és (10) általános képletű csoport vagy egy bifenilén-csoport, amely lehet a (11), (12), (13) és (14) általános képletű csoport; azzal a feltétellel, hogy az (1a) általános képletű vegyületben X és X³ csoportok közül legalább egyik jelentése valamely bifenilén-csoport;

X” jelentése (6), (7), (8), (9), (15), (10), (12), (2), (3), (5), (16) és (11) képletű csoport;

m jelentése 0 vagy 1 egész szám, azzal a feltétellel, hogy az (1b) általános képletű vegyületben, amennyiben m jelentése 0, R jelentése hidrogénatom;

X’ jelentése bármely X és X³ csoportra megadott fenil- vagy bifenil-csoport;

n jelentése 3-50 közötti egész szám;

R jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport, fenilcsoport vagy kívánt esetben 1 vagy 2 szubsztituenst tartalmazó fenilcsoport, ahol a szubsztituensek lehetnek -SO₃R² általános képletű csoport, -CO2R² általános képletű csoport, -PO3(R²)₂ általános képletű csoport vagy -OPO₃R² általános képletű csoport, illetve kívánt esetben 1-3 szubsztituenssel szubsztituált fenti csoport, ahol a szubsztituensek lehetnek, klóratom, brómatom, vagy 1-4 szénatomszámú alkilcsoport;

R¹ jelentése -SO₃R² általános képletű csoport, -CO2R² általános képletű csoport, -PO3(R²)₂ általános képletű csoport vagy -OPO₃R² általános képletű csoport;

R² jelentése hidrogénatom vagy gyógyszerészetileg elfogadható kation;

60.170/SM

R³ jelentése -R általános képletű csoport vagy -X”-NH₂ általános képletű csoport, ahol R és X” jelentése a fent megadott;

R⁶ jelentése H₂N-X”-NH- általános képletű csoport, R²O- általános képletű csoport, RNH' általános képletű csoport vagy R-C(=O)-NH-X”-NH- általános képletű csoport és;

R⁷ jelentése hidrogénatom, R²O-C(=O)-X”-C(=O), R-C(=O)- általános képletű csoport vagy RNH-C(=O)-X”-C(=O)- általános képletű csoport.

A találmány szerinti oligomer vegyületek poliamidok és polikarbamidok, amelyek átlagosan <10,000 Mn molekulatömegűek és azzal jellemezhetők, hogy ismétlődő egységeket tartalmaznak, amelyek karbonil-kötéssel kötöttek, továbbá a találmány szerinti oligomer vegyületek anionos-csoportokat tartalmaznak és alapvetően lineáris geometriájúak, olyan módon, hogy az anionos csoportok között vizes közegben szabályos távolság alakul ki. A találmány szerinti oligomer vegyületek előnyösen vázukban lineáris szerkezetűek és lehetnek só formájúak. Különösen előnyös só formák, amelyek gyógyszerészetileg elfogadható sók.

A „gyógyszerészetileg elfogadható kation” elnevezés alatt olyan ionokat értünk, amelyek az adagolt gyógyszerészetileg hatásos dózisban lényegében nem toxikusak és a „gyógyszerészetileg elfogadható kation” nevezéktan körébe tartoznak. Ilyen sók lehetnek például az alkálifém-sók, mint például nátrium- és kálium sók az alkáli földfém-sók, mint például a kálcium- és magnézium sók, az ammóniumsók, a könnyűfém IHA csoportba tartozó sók, mint például alumínium só; illetve a szerves elsőrendű-, másodrendű- és harmadrendű amin sók, mint például trialkilamin só, például trietilamin só, prokain só, dibenzil-amin só, Ν,Ν’-dibenzil-etilén-diamin só, dihidro-abietilamin-só, N-1-4 szénatomszámú alkil-piperidin só vagy bármely más alkalmas aminnal képzett só. Előnyös sók a nátrium és a kálium sók. A „gyógyszerészetileg elfogadható” elnevezés alatt azt értjük, hogy az adott anyag melegvérű

60.170/SM ···· ·* ♦ ·»->

állatoknak és embernek adagolható, továbbá nem toxikus, például alkalmas gyógyszerészeti felhasználásra, melegvérű állat számára nem mérgező. A találmány szerinti oligomerek gyógyszerészetileg elfogadható kation formái a szokásos eljárásokkal állíthatók elő, mint például ioncserélő eljárással vagy az R¹-sav és megfelelő bázis reagáltatásával.

A találmány szerinti oligomer vegyületek alacsony molekulatömegű, merev vázas, vízben oldható polimer vegyületek. Ezen túlmenően az oligomerek szabályos anion-csoport elhelyezkedéssel rendelkeznek. A „szabályos anion elhelyezkedés” vagy „szabályos anion-csoportok közötti távolság” elnevezés alatt azt értjük, hogy a (R¹) anionos-csoportok a polimer vázban meghatározott távolságban vannak jelen, amely távolság az előállítás során alkalmazott kiindulási anyagból következik, ahol az anionos csoportok megfelelő távköze előre meghatározott.

A „túlnyomóan lineáris geometria” elnevezés alatt azt értjük, hogy a vizes közegben az oligomer konfigurácója oldatban ezt az alakzatot követi. A polimer molekulák oldatban felvett konfigurációja szakirodalomban ismert módon meghatározható és ez úgy történik, hogy az alábbi egyenletet alkalmazzuk, amely egyenlet a Marc-Houwink egyenlet [„Introduction to Physical Polymer Science”, ed. L.H. Sperling, John Wiley & Sons (1985), pp. 81-84], [η] = KM“ ahol a képletben η jelentése belső viszkozitás; M jelentése átlagos molekulatömeg; K jelentése a lánckötés méretével kapcsolatos állandó; és a jelentése a polimer konfigurációjára jellemző állandó. A belső viszkozitás (η) értéke véletlenszerűen gomolyag polimer esetében 0,5<a<0,9 közötti és lineáris polimer esetében 0,98<a<1,8 közötti érték. A képletben a ,,η„ oldat viszkozitás érték az „M” molekulatömegre vonatkozik. A találmány szerinti készítményben a lineáris polimerek „a„ értéke nagyobb vagy egyenlő mint 0,9. Egy merev rúdszerű polimer esetében az

60.170/SM

-6értéke nagyobb vagy egyenlő mint 0,9. Egy merev rúdszerű polimer esetében az elméleti felső határérték 1,8. Adott molekulatömeg esetében nagyobb oldatviszkozitás nyerhető lineáris konfigurációjú polimerek esetében a véletlenszerűen gomolyag típusú polimerekkel összehasonlítva. Ezen túlmentően figyelembe kell venni, hogy a „a„ érték az oldószer minőségének függvénye. Az „a„ érték egy adott vízben oldható polimer esetében eltérő lehet különféle só koncentrációk esetében. A találmány szerinti eljárásnak megfelelően a só koncentráció a szérumban körülbelül 80 g/liter NaCI, 4 g/liter KCI.

A leírásban az „oligomer” elnevezés alatt azt értjük, amely esetben az általános képletben n értéke például 3-50 közötti. Az oligomerek esetében ezek előnyösen lineárisak és n értéke 3-50, előnyösebben 3-20, és legelőnyösebben 3-15 közötti. Természetesen az n érték közvetlenül összefügg a kapott oligomer molekulatömegével. Alapvető fontosságú, hogy az oligomerek megfelelően alacsony molekulatömegűek legyenek, mivel csak ebben az esetben képesek a renális kiválasztó membránon áthaladni, és így a simaizom sejt burjánzást inhibiálni. Az átlagos molekulatömeget a reagensek sztöchiometriája segítségével szabályozhatjuk. Az átlagos molekulatömeg (Mn) általában <10,000 érték, előnyösen körülbelül 400 - körülbelül 10,000 és legelőnyösebben körülbelül 1,000 körülbelül 6,000 közötti érték.

A találmány szerinti eljárásban a leírt oligomerek, illetve fiziológiailag elfogadható sóik ekvivalensnek tekinthetők. Fiziológiailag elfogadható sók alatt olyan sókat értünk, amelyekben az R¹ csoportban legalább egy savas csoporttal bázis segítségével sót képezünk és amely só az alábbiak szerint adagolva nem okoz ellentétes hatásokat. Alkalmazható bázisok például az alkálifém- és alkáli földfém-hidroxidok, -karbonátok és -hidrogénkarbonátok, mint például nátrium-hidroxid, kálium-hidroxid, kálcium-hidroxid, kálium-karbonát, nátrium-hidrogénkarbonát, magnézium-karbonát

60.170/SM

-7 és hasonlók, továbbá az ammónia, az elsőrendű-, a másodrendű- és a harmadrendű-aminok, valamint hasonló bázisok.

Mint általában minden vegyületcsoport esetében, bizonyos vegyületek előnyös farmakológiai és terápiás hatással rendelkeznek. A találmány szerinti (1a) és (1b) általános képletű vegyületek közül előnyösek, amelyekben az általános képletben n jelentése 3-18 közötti, különösen előnyösek, amelyekben n jelentése 6-15 közötti és a legelőnyösebbek azok, amelyekben n jelentése 9. További előnyös találmány szerinti (1a) és (1b) általános képletű vegyületek, amelyekben R¹ jelentése -SO₃R² általános képletű csoport és különösen előnyösek azok, amelyekben R²jelentése gyógyszerészetileg elfogadható kation, amely kation legelőnyösebben lehet nátrium-kation.

További előnyös találmány szerinti poliamid-vegyületek az (1a) általános képletű anyagok, ahol az általános képletben

R⁶ jelentése R-C(=O)-NH-X”-NH- általános képletű csoport, különösen előnyösen

R jelentése kívánt esetben szubsztituált fenilcsoport, legelőnyösebben R jelentése fenilcsoport vagy 4-metil-fenil-csoport és X” jelentése (11) általános képletű csoport vagy (12) általános képletű csoport;

X³ jelentése fenilén-csoport, különösen előnyösen (2) általános képletű parafenilén-csoport;

X jelentése bifenilén-csoport, különösen előnyösen (11) vagy (12) általános képletű bifenilén-csoport;

R⁷ jelentése R-C(=O)- általános képletű csoport, különösen előnyösen ebben R jelentése fenilcsoport vagy 4-metil-fenil-csoport;

n jelentése 3-9 közötti egész szám, előnyösen 5-9.

60.170/SM ff

-8További előnyös találmány szerinti polikarbamid-vegyületek az (1b) általános képletű anyagok, ahol az általános képletben

R jelentése kívánt esetben szubsztituált fenilcsoport, különösen előnyösen R jelentése fenilcsoport vagy 4-metil-fenil-csoport;

m jelentése 1 egész szám;

X’ jelentése fenilcsoport vagy bifenil-csoport, amely 1 vagy 2 -SO₃R² általános képletű szubsztituenst tartalmaz, különösen előnyösen R² jelentése ebben nátrium-kation; és

R³ jelentése kívánt esetben szubsztituált fenilcsoport, különösen előnyösen olyan csoport, ahol R jelentése fenilcsoport vagy 4-metil-fenil-csoport.

Különösen előnyös találmány szerinti (1b) általános képletű vegyületek, ahol az általános képletben X’ jelentése (13) általános képletű, (12) általános képletű vagy (6) általános képletű fenilcsoport vagy bifenil-csoport, különösen előnyösen olyan csoport, ahol R¹ jelentése -SO₃R² általános képletű csoport, ahol R² jelentése nátrium-kation.

Legelőnyösebb találmány szerinti vegyületek a (1a) általános képletű anyagok, ahol az általános képletben

R⁶ jelentése RC(=O)NHX”NH- általános képletű csoport, ahol

R jelentése p-metil-fenil-csoport;

R” jelentése (12) általános képletű bifenil-csoport, ahol R¹ jelentése -SO₃R²általános képletű csoport, különösen, ahol R² jelentése nátrium kation;

R⁷ jelentése C(=O)R általános képletű csoport, ahol R jelentése p-metil-fenil-csoport;

X³ jelentése parafenilén-csoport;

X jelentése (12) általános képletű csoport, ahol R¹ jelentése -SO₃R² általános képletű csoport, különösen, ahol R² jelentése nátrium kation; és

60.170/SM

-9n jelentése 5 vagy 9 egész szám.

A találmány szerinti oligomer vegyületeket a 91111315.7 számú 1991. július

8-án benyújtott európai szabadalmi bejelentésben leírt eljárásnak megfelelően állíthatjuk elő, amely bejelentést 1992. január 22-én tettek közzé.

A találmány szerinti szulfátéit oligomerek hatásosságát az érképződés inhibiálásában kimutathatjuk, amennyiben meghatározzuk, milyen mértékben képesek inhibiálni a humán köldök véna belhám sejtek (HUVEC) vonalképzési tendenciáját alap membrán preparátum táptalajban és hajszálér típusú szerkezetek képzési képességét in vitro körülmények között. A HUVEC differenciálódás a hajszálér cső képződés nem burjánzásos válaszfüggvény, mivel a DNS szintézis igen gyorsan megszűnik, amikor a sejtek az alapmembrán komponensekhez kapcsolódnak. Ezek a komponensek lehetnek például laminin, IV típusú kollagén, entactin és heparin-szulfát proteoglikán. Az in vitro hajszálér képződést jelzésként alkalmazhatjuk arra, hogy előre jelezzük a találmány szerinti vegyületek kapacitását az érképződés inhibiálásra vagy ennek elősegítésére. A találmány szerinti vegyületek példái közül néhányat megvizsgáltunk ebben a vizsgálatban és meghatároztuk, milyen mértékben képesek kereskedelemben kapható alapmembrán készítményen (táptalajon) (Matrigel) a HUVEC képzés leállítására (lásd a 2. példát).

Az (1a) vagy (1b) általános képletű szulfátéit oligomer vegyületek adagolt mennyisége széles határértéken belül változhat aszerint, hogy milyen dózisegységet alkalmazunk, milyen hosszú ideig végezzük a kezelést, a beteg milyen korú és milyen nemű, a kezelt betegség milyen típusú és milyen súlyosságú, valamint a kezelésben milyen szulfátéit oligomer vegyületet alkalmazunk. Ezen túlmenően a találmány szerinti szulfátéit oligomer hatóanyagot alkalmazhatjuk egyéb hatóanyagokkal kombinációban, amely anyagok általában simaizom sejt proliferáció inhibiálására használatosak, illetve érkéződés inhibiáló hatásúak, valamint olyan hatóanya

60.170/SM

-10gok, amelyek alkalmasak olyan betegségek kezelésére, amelyek a simaizom sejt proliferációval és az érkézödéssel kapcsolatban alakulnak ki. Az (1) általános képletei szulfátéit oligomer érképződést és simaizom sejt proliferációt inhibiáló hatásos mennyisége, amely adagolásra kerül, általában kb. 15 mg/kg - 500 mg/kg közötti. Az egységdózis forma általában 25-500 mg szulfátéit oligomert tartalmaz és egy vagy több alkalommal adagolható naponta. A szulfátéit oligomert alkalmazhatjuk és adagolhatjuk gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyaggal kombinációban, amely eljárás során szokásos dózisegység formákat állíthatunk elő, amely formák orális, parenterális vagy helyi úton alkalmazhatók.

A „beteg” elnevezés alatt emlősöket, mint például a főemlősöket, az embert is beleértve, birkát, lovat, marhát, sertést, kutyát, macskát, patkányt és egeret értünk.

Az adagolás előnyös útja az orális adagolás. Az orális adagolás céljára az anionos poliamid- és polikarbamid-oligomereket szilárd vagy folyékony készítménnyé alakíthatjuk, amely lehet kapszula, pilula, tabletta, pirula, labdacs, olvadék, por, oldat, szuszpenzió vagy emulzió forma. A szilárd egységdózis forma lehet kapszula, amely szokásos kemény vagy lágy zselatin típusú kapszula. Ez a kapszula például felületaktív anyagokat, kenőanyagokat és inért töltőanyagokat, mint például laktózt, szukrózt, kálcium-foszfátot és kukoricakeményítőt tartalmazhat. Más megvalósítás esetén a találmány szerinti vegyületek tabletta formává alakíthatók szokásosan alkalmazott tabletta alapanyagokkal, mint például laktóz, szukróz, és kukoricakeményítő, amely tablettában alkalmazhatunk kötőanyagokat, mint például akácia, kukoricakeményítő vagy zselatin, dezintegráló szereket, amelyek elősegítik a tabletta adagolás utáni oldódását és szétbomlását, mint például kukoricakeményítő, alginsav, burgonyakeményítő és guar gumi, kenőanyagokat, amely elősegítik a tabletta granulátumok folyósságát és megakadályozzák a tabletta anyagának a tabletta présgép formáihoz történő tapadását, mint például talkum, sztearinsav, vagy mag60.170/SM

- 11 nézium-kálcium vagy cink-sztearát, továbbá festékanyagokat, színezőanyagokat és ízesítőszereket, amelyek elősegítik a tabletta esztétikai megjelenésének javítását és azt a beteg számára elfogadhatóvá teszik. Az orális adagolási! folyékony dózisformák esetében alkalmazható hordozóanyagok lehetnek higítóanyagok, mint például víz és alkoholok, mint például etanol, benzilalkohol és polietilén-alkoholok és ebben a formában gyógyszerészetileg elfogadható felületaktív anyagot szuszpendáló anyagot vagy emulzifikáló szert alkalmazhatunk segédanyagként vagy ezek alkalmazását elhagyhatjuk.

A találmány szerinti szulfátéit oligomer vegyületeket továbbá adagolhatjuk parenterális úton, amely lehet szubkután, intravénás, intramuszkuláris vagy intraperitoneális adagolás. Az injektálható dózis a találmány szerinti vegyület esetében valamely fiziológiailag elfogadható hordozóanyagban készíthető gyógyszerészeti hordozóanyaggal, amely lehet steril folyadék vagy folyadék keverék, mint például víz, fiziológiás sóoldat, vizes dextróz oldat és hasonló cukor oldatok, valamely alkohol, mint például etanol, izopropanol vagy hexadecil-alkohol, glikolok, mint például propilén-glikol vagy polietilén-glikok, glicerol-ketálok, mint például 2,2-dimetil-1,3-dioxolán-4-metanol, éterek, mint például poli(etilén-glikol) 400, valamely olaj, valamely zsírsav, valamely zsírsav-észter vagy -glicerid vagy valamely acetilezett zsírsav-glicerid és a készítményekben kívánt esetben gyógyszerészetileg elfogadható felületaktív anyagokat is alkalmazhatunk, amelyek lehetnek például valamely szappan vagy detergens, szuszpendálószert alkalmazhatunk, amely lehet például pektin karbomer vegyület, metil-cellulóz, hidroxi-propil-metil-cellulóz vagy karboxi-metil-cellulóz vagy alkalmazhatunk emulzifikáló szert és egyéb gyógyszerészeti segédanyagokat. A parenterális készítményben a találmány szerint alkalmazható olajok például a petróleum, az állati, a növényi vagy szintetikus eredetű olajok, mint például mogyoróolaj, szójaolaj, szezámolaj, gyapotmag olaj, kukoricaolaj, olívaolaj,

60.170/SM

- 12 4 ♦ · · ·· ···· · • « · · · · ♦ · · · · • 4 4 4 4 · petrolátum és ásványi olaj. A készítményben alkalmazható zsírsavak lehetnek például olajsav, sztearinsav és izosztearinsav. Alkalmazható zsírsav-észterek például az etil-oleát és az izopropil-mirisztát. Alkalmazható szappanok például a zsírsavalkálifém, -ammónium és -trietanolamin sók és alkalmas detergensek például kationos detergensek, mint például dimetil-dialkil-ammónium-halogenidek, alkil-piridinium-halogenidek és alkil-amin-acetátok; anionos detergensek, mint például alkil-, aril- és olefin-szulfonátok, alkil-olefin éterek és monoglicerid-szulfátok, továbbá szulfoszukcinátok; nem ionos detergensek, mint például zsír-amin-oxidok, zsírsav-alkánok, -amidok és polioxi-etilén-polipropilén-kopolimerek; valamint amfoter detergensek, mint például alkil-B-amino-propionátok és 2-alkil-imidazolin-kvaterner-ammónium sók, továbbá ezek keverékei. A találmány szerinti parenterális készítmény jellemzően körülbelül 0,1 - körülbelül 25 tömeg% mennyiségű (1) általános képletű találmány szerinti anionos poliamid- és polikarbamid-oligomert tartalmaz oldatban. A készítményben előnyösen alkalmazhatunk tartósítóanyagokat és puffereket. Abból a célból, hogy az adagolás helyén az irritálást minimálisra csökkentsük vagy megszüntessük, a készítmények tartalmazhatnak nem ionos felületaktív anyagot, amelynek hidrofil-lipofil egyensúlyi állandója (HLB) körülbelül 12 - körülbelül 17 közötti. A készítményekben a felületaktív anyag mennyisége körülbelül 5 - körülbelül 15 tömeg% közötti. A felületaktív anyag lehet egykomponensű, amely a fenti HLB értékkel rendelkezik vagy két vagy több komponens keveréke, amelyek együttesen a kívánt HLB értéket szolgáltatják. A találmány szerinti parenterális készítményben alkalmazható felületaktív anyagok például a polietilén-szorbitán-zsírsav észterek, mint például szorbitán-monooleát és a nagy molekulatömegű etilén-oxid és valamely hidrofób-bázis adduktok, amelyeket úgy képzünk, hogy propilén-oxidot és propilén-glikolt kondenzálunk.

60.170/SM ·*· *·*♦ ·!

• « « « <

- 13 - ^{: ,:}· állítjuk elő, amely előállítás során előnyösen olyan oldószert alkalmazunk, amely ismerten elősegíti a transzdermális abszorpciót. Ilyen oldószer lehet például etanol vagy dimetil-szulfoxid (DMSO), amelyet egyéb segédanyagokkal együtt vagy ezek nélkül alkalmazunk. Előnyös helyi alkalmazású készítményt állíthatunk elő tapasz formában, amely tapasz lehet tartály vagy porózus membrán típusú vagy szilárd mátrix típusú forma.

Néhány alkalmas transzdermális eszközt írtak le a 3,742,951 számú, a 3,797,494 számú, a 3,996,934 számú és a 4,031,894 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésekben. Ezek az eszközök általában egy hátsó tagot tartalmaznak, amely a felület egyik részét meghatározza, ezt követően aktív anyag áteresztő tapadó réteget tartalmaznak, amely a másik felületet meghatározza és ezek között a felületek között legalább egy tartályt tartalmaznak, amely az aktív hatóanyagot hordozza. Más megvalósítás esetében az aktív hatóanyagot számos mikrokapszula tartalmazza, amelyet a permeábilis tapadó rétegben osztanak szét. Mindkét esetben az aktív hatóanyag folyamatosan áramlik ki a tartályból vagy mikrokapszulákból egy membránon keresztül az aktív hatóanyaggal szemben permeábilis tapadó rétegbe, amely érintkezésben áll a bőrrel vagy a nyálkahártyával, ami a befogadó részt képviseli. Ez a megoldás azt eredményezi, hogy az aktív hatóanyag a bőrön keresztül meghatározott és előre megállapított sebességgel abszorbeálódik és így kerül a fogadó betegbe. A mikrokapszulák alkalmazása esetében a kapszula képző anyag egyben membránként is szolgálhat.

A transzdermális adagolás esetében más megvalósítás szerint a találmány szerinti vegyületeket úgy adagolhatjuk, hogy ezeket egy mátrixban elegyítjük, amelyből azután kívánt fokozatos állandó sebességű szabályozott mértékben kerül kibocsátásra. A mátrix a vegyület számára permeábilis, amely diffúzió vagy mikropórus áram révén kerül ki a mátrixból. A kibocsátás sebessége szabályozott. Ilyen memb60.170/SM

- 14csátásra. A mátrix a vegyület számára permeábilis, amely diffúzió vagy mikropórus áram révén kerül ki a mátrixból. A kibocsátás sebessége szabályozott. Ilyen membránt nem igénylő rendszert írtak le a 3,921,636 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben. Az ilyen rendszerekben legalább két típusú kibocsátási forma lehetséges. Amennyiben a mátrix nem porózus szerkezetű, a kibocsátás diffúzióval történik. A gyógyszerészetileg hatásos vegyület oldódik, majd a mátrixon keresztül diffundál. A mikropórusos árammal történő kibocsátás akkor történik, amennyiben a gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyagot valamely folyékony fázissal a mátrix pórusain keresztül szállítjuk.

Meghatározások

A találmány szerinti leírásban alkalmazott elnevezések jelentése az alábbi: n jelentése az egész készítményen keresztül elosztott átlagos ismétlődésü hossz szám.

Az MDL 101,028 és az MDL 101,508 elnevezések alatt az (1 b) általános képletű fenti vegyületeket értjük, ahol az általános képletben R és R³ jelentése 4-metil-fenil-csoport, R² jelentése nátrium atom, X’jelentése (17) általános képletű csoport, m jelentése 1 és n jelentése 6 vagy 9.

Az MDL 102,869 elnevezés alatt az (1b) általános képletű vegyületet értjük, ahol az általános képletben R és R³ jelentése 4-metil-fenil-csoport, m jelentése 1, X’ jelentése (18) általános képletű csoport, R² jelentése nátrium atom és n jelentése 15.

Az MDL 100,079 és az MDL 100,023 elnevezések alatt az (1b) általános képletű fenti vegyületeket értjük, ahol az általános képletben R és R³ jelentése 4-metil-fenil-csoport, m jelentése 1, X’ jelentése (25) általános képletű csoport, R² jelentése nátrium atom és n jelentése 6, illetve 9 egész szám.

Az MDL 100,758, MDL 101,995, MDL 100,127 és MDL 101,044 elnevezések alatt az (1a) általános képletű fenti vegyületeket értjük, ahol az általános képletben

60.170/SM

tése (17) általános képletü csoport, R² jelentése nátrium atom és n jelentése sorrendben 3, 5, 6 és 9.

A találmány szerinti vegyületet és eljárást az alábbi példákon részletesen bemutatjuk. A példák nem jelentik a találmány tárgykörének korlátozását.

1. példa

Anionos poliamid- és polikarbamid-oliqomerek hatása humán köldök véna belhám sejtek proliferációjára (HUVEC)

A hajszálér/cső képződés in vitro inhibiálása

Humán köldök véna belhám (HUVEC) sejteket tenyésztünk alapmembrán preparátumon, amely gyors felépülést mutat és kapilláris szerű szerkezetet képez in vitro körülmények között. A HUVEC differenciálódás és a kapilláris cső képződés nem proliferatív válaszfüggvény, mivel amikor a sejtek az alapmembrán komponensekhez kötődnek, a DNS szintézis gyorsan megáll. Az alapmembrán komponensek például laminin, IV típusú kollagén, actin, és heparin-szulfát-proteoglükán. Az in vitro kapilláris képződést egyebek mellett annak jelzésére alkalmazzuk, hogy meghatározzuk a találmány szerinti vegy egyéb vegyületek kapacitását, amellyel az érképződést elősegítik vagy inhibiálják. Korábban kimutatták, hogy a heparin fragmensek és a heparin analógok a hexuronil-hexózamino-glükán-szulfát, és a hidrokortizon az érképződés negatív szabályozói. A Merrell Dow által előállított szulfatált-heparin-szerű polimerek sorozatát tesztvizsgálatnak vetették alá és meghatározták, milyen mértékben képesek a HUVEC cső vagy kapilláris képződését inhibiálni kereskedelemben kapható alapmembrán táptalajokon (Matrigel). A polimereket a táptalajhoz adagolták abban az időpontban, amikor a HUVEC Matrigelre történő beoltását végezték, majd együttes inkubálást hajtottak végre. A cső képződést vizuálisan mikroszkóp segítségével mérték, körülbelül a sejtek beültetése után 16 órával. Az egyik leghatásosabb vizsgált polimer az MDL 101,044 teljesen megakadályozta a cső/ka60.170/SM

-16- .......

pilláris képződést, amennyiben 1 μιτιοΙ koncentrációban alkalmaztuk, illetve bizonyos inhibiáló hatást mutatott, amennyiben 0,5 és 0,2 μιτιοΙ mennyiségben alkalmaztuk. Ezzel szemben az MDL 102,869 oligomer 2 μιτιοΙ koncentrációban alkalmazva hatástalannak bizonyult és csak részben volt hatásos, amennyiben 5 μιτιοΙ mennyiségben alkalmaztuk. Az egyéb vizsgált polimerek, mint például az MDL 101,508, 101,028, 100,127, 100,758, 100,023 és 100,079 teljes inhibiálást idéztek elő a cső/kapilláris képződésben 2 és 5 μιτιοΙ koncentrációban történő alkalmazás esetében. Egyik polimer sem akadályozta meg a belhám sejt Matrigel-hez történő kapcsolódását. Ezen kísérleti eredmények alapján nagy a valószínűsége annak, hogy ezek a polimerek hatásos érképződés inhibitor anyagok.

A DNS-be beépült [³H]-timidin mennyiséget mértük (triklór-ecetsavval leválasztható mennyiségben számolva) HUVEC tenyészetekben, amelyeket 5 x 10⁴ sejt/ /üreg mennyiségben inokuláltunk (12-üreges lemezek, Costar). HUVEC és teljes növekedési táptalaj alkalmazásával (EGM) végeztük a kísérletet, amelyeket a Clonetics (San Diego, CA) cégtől szereztünk be. A vegyületeket 24 órán át inkubáltuk a tenyészetekben [³H]-timidin (1 pCi/ml) alkalmazásával, majd a tenyészetet kétszer foszfát-pufferelt fiziológiás sóoldattal mostuk, majd 0,25 ml 10%-os triklór-ecetsavat adagoltunk hozzá és a mintákat 15 percen át 4°C hőmérsékletre hütöttük. A savat eltávolítottuk és a sejtet tartalmazó anyagot 0,25 ml 1n nátrium-hidroxidban (NaOH) oldottuk. Ezután az elegyet sósavval (HCI) semlegesítettük és a CPM értéket szcintillációs számlálással meghatároztuk. Az eredmények kétszeres tenyészet átlag értékei.

60.170/SM r «

I

- 17 ···« · · ·«·· ♦ • « · · · · • · · · ♦ • · · · ♦ · • «« ·· ···

Vegyület MDL szám*	[^JH]-timidin beépülés	Kontroll %
kontrol	32,308	(100)
101508	36,888	114
101028	49,565	153
101044	31,150	96
100127	40,496	125
100758	11,379	35
100023	53,468	165
100079	48,002	149
102869	41,507	128
heparin	31,126	96

A vegyületeket valamennyi esetben a tenyészethez a polimer átlagos molekulatömegére számítva 2 pmol mennyiségben adagoltuk.

2. oélda

A peteburok ideg érrendszer kialakulásának inhibiálása kifejlődött csirke embriókban anionos poliamid és polikarbamid-oliqomerek segítésével

A találmány szerinti vegyületeket 0,5% metil-cellulózban, amely 60 μς hidrokortizont tartalmaz, oldottuk, majd teflon lemezeken szilárd állapotig szárítottuk. A tesztvizsgálatnak alávetett vegyületeket tartalmazó metil-cellulóz lemezeket a fejlődő csirke embrió peteburokra helyeztük a megtermékenyítés utáni 4. napon [egy kéregmentes tenyésztési eljárás alkalmazásával Dunn és munkatársai (1980) Anat. Rec. 199, 33-43 közleményében leírt eljárásnak megfelelően], 48 óra elteltével a metil-cellulóz lemez közelében megfigyelhető új érképződést metszeti képen megvizsgáltuk és a nyert eredményt jelzőszámokkal jellemeztük, a jelzőszámokat két egy60.170/SM * 1 1

- 18 • ·

mástól független vizsgáló személy határozta meg. A jelzőszámokkal azt fejeztük ki, hogy milyen mértékű az új érképződés inhibiálása. Az inhibiálás lehet: inhibiált (az éredények nélküli zónák kifejlődése vagy a hajszálér sűrűség nagymértékű csökkenése) vagy nem inhibiált (a hajszálér sűrűségben nincs csökkenés vagy a csökkenés kis mértékű).

Korábban kísérletekben kimutattuk, hogy a heparin fragmensek és heparin analógok, mint például a hexuronil-hexózamino-glükán-szulfát plusz hidrokortizon a peteburok új érképződési kísérletben az érképződésre negatív szabályozást fejtenek ki.

Vegyület μο peténként	MDL szám
100079	100127	101044	101995	101028
25	3/10#	ND**	11/13	3/4	2/5
10	1/3	ND	5/6	5/7	ND
1	1/3	5/6+	2/5	4/6	ND
0,1	1/4	ND	1/6	2/4	ND
0,01	1/4	ND	1/3	1/3	ND

Controll lemez: 0,5% metil-cellulóz = 0/23; 60 pg hidrokortizon 0,5%-os metil-cellulózban = 1/25; heparin (50 pg) plusz hidrokortizon (60 pg) = 5/10 # Az arányok az olyan peték számát, illetve arányát jelzik, amelyek az adott körülmény esetében az új érképződés inhibiálás/összes szám érték meghatározásában tapasztalható.

** ND = nem meghatározott + 0,5 pg MDL 100127 plusz 60 pg hidrokortizon lemezenként

60.170/SM * ⁴ · >

- 19 ···· ·« ·««· * • « · ♦ · · • * · · · • · » · · · « »· · · « · ·

3, Példa

Kapilláris/cső képződés inhibiálása humán köldökvéna belhám sejteken anionos poliamid- és polikarbamid oliqomerek seqítéséqével

Humán belhám sejteket ültetünk Matrigel alapanyagra 5 x 10⁴ mennyiségben (Grant és munkatársai 1989, Cell 58, 933-943 közleményében leírtak szerint) és a belhám sejtekkel együtt az alábbiak szerint polimer inkubálást végzünk vagy ezt elhagyjuk. A találmány szerinti vegyületek kapacitását az in vitro kapilláris/cső kialakulása alapján a beültetés után 16-18 órán belül határoztuk meg.

MDL szám	O cn o	10 μg/ml# Inhibiálás
pg/ml	μΜ*
101508	MD**	MD	+
101028	5	2	+
101044	5	1	+
100127	4-8	1-2	+
101995	6-4	2	+
100758	ND	ND	+
100023	4-8	1-2	+
100079	3-6	1-2	+
102869	>25	>5	-
101114	>50	>100	-
Heparin	ND	ND	-

60.170/SM ⁴ ’ »

-20♦ ··· ·« ·* ·♦ · • · « · · ♦ • · · · · • · · · · « • « · ·* ««« * A koncentráció értékek a polimerek átlagos molekulatömegére számítottak # + = a kapilláris csőképződés teljes inhibiálása

- = inhibiálás nem mutatható ki ** ND = nem meghatározott

A találmány szerinti eljárás és hatóanyagok egyéb jellemzői a szakember előtt a leírásból, illetve az igénypontokból nyilvánvalóak. A találmány szerinti eljárás és anyagok leírása csak példának tekintendő és a találmány lényegét nem megváltoztató, valamennyi változtatást és módosítást is beleértjük a találmány tárgykörébe.

60.170/SM

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás ilyen kezelést igénylő betegben érképződés inhibiálására, azzal jellemezve, hogy a kezelést igénylő betegnek az (1a) vagy (1b) általános képletü anionos poliamid-oligomert, illetve anionos polikarbamid-oligomert hatásos mennyiségben adagoljuk, ahol az általános képletben

X és X³ jelentése egymástól függetlenül fenilén-csoport, amely lehet a (2), (3), (4), (5), (6), (7), (8), (9) és (10) általános képletü csoport vagy egy bifenilén-csoport, amely lehet a (11), (12), (13) és (14) általános képletü csoport; azzal a feltétellel, hogy az (1a) általános képletü vegyületben X és X³ csoportok közül legalább egyik jelentése valamely bifenilén-csoport;

X” jelentése (6), (7), (8), (9), (15), (10), (12), (2), (3), (5), (16) és (11) képletü csoport;

m jelentése 0 vagy 1 egész szám, azzal a feltétellel, hogy az (1b) általános képletü vegyületben, amennyiben m jelentése 0, R jelentése hidrogénatom;

X' jelentése bármely X és X³ csoportra megadott fenil- vagy bifenil-csoport;

n jelentése 3-50 közötti egész szám;

R jelentése hidrogénatom, 1-4 szénatomszámú alkilcsoport, fenilcsoport vagy kívánt esetben 1 vagy 2 szubsztituenst tartalmazó fenilcsoport, ahol a szubsztituensek lehetnek -SO₃R² általános képletü csoport, -CO2R² általános képletü csoport, -PO3(R²)₂ általános képletü csoport vagy -OPO₃R² általános képletü csoport, illetve kívánt esetben 1-3 szubsztituenssel szubsztituált fenti csoport, ahol a szubsztituensek lehetnek, klóratom, brómatom, vagy 1-4 szénatomszámú alkilcsoport;

R¹ jelentése -SO₃R² általános képletü csoport, -CO2R² általános képletü csoport, -PO3(R²)₂ általános képletü csoport vagy -OPO₃R² általános képletü csoport;

60.170/SM « · · t V • · » · * ·

22 * *· ** ***

R² jelentése hidrogénatom vagy gyógyszerészetileg elfogadható kation;

R³ jelentése -R általános képletű csoport vagy -X”-NH₂ általános képletű csoport, ahol R és X” jelentése a fent megadott;

R⁶ jelentése H₂N-X”-NH- általános képletű csoport, R²O- általános képletű csoport, RNH- általános képletű csoport vagy R-C(=O)-NH-X”-NH- általános képletű csoport és;

R⁷ jelentése hidrogénatom, R²O-C(=O)-X”-C(=O)-általános képletű csoport, R-C(=O)- általános képletű csoport vagy RNH-C(=O)-X”-C(=O)- általános képletű csoport.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben 6-15 közötti egész szám.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben n jelentése 9.
4. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben R¹ jelentése -SO₃R² általános képletű csoport.
5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben R² jelentése nátrium kation.
6. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben R⁶ jelentése R-C(=O)-NH-X”-NH- általános képletű csoport.
7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben R jelentése fenilcsoport vagy 4-metil-fenil-csoport.

60.170/SM *··· ·ν ··»·· ♦ · · · ♦ · · · ·

- 23 - · **·* ’··* ···
8. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletü vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben X jelentése (11) általános képletű csoport vagy (12) általános képletű csoport.
9. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben R⁷ jelentése R-C(=O)- általános képletű csoport.
10. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben R jelentése fenilcsoport vagy 4-metil-fenil-csoport.
11. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben X³ jelentése parafenilén-csoport.
12. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben X jelentése (11) általános képletű csoport vagy (12) általános képletű csoport.
13. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben R⁶ jelentése R-C(=O)-NH-X”-NH- általános képletű csoport, X³ jelentése parafenilén-csoport, X jelentése (11) általános képletű vagy (12) általános képletű bifenilén-csoport,

R⁷ jelentése R-C(=O)- általános képletű csoport és R jelentése 4-metil-fenil-csoport.
14. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben m jelentése 1.
15. A 14. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben R jelentése fenilcsoport vagy 4-metil-fenil-csoport.

60.170/SM
16. A 14. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben X’ jelentése (13) általános képletű csoport, (12) általános képletű csoport vagy (6) általános képletű csoport.
17. A 14. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan általános képletű vegyületet alkalmazunk, ahol az általános képletben X’ jelentése (13) általános képletű csoport, (12) általános képletű csoport vagy (6) általános képletű csoport és R³ jelentése 4-metil-fenil-csoport.
18. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az alkalmazott oligomer az (I) általános képletű polikarbamid, ahol az általános képletben R és R³jelentése 4-metil-fenil-csoport; m jelentése 1; n 3-15 közötti egész szám; X jelentése (18), (19), (20), (21), (22), (23), (24), (17) vagy (25) általános képletű csoport; és

R² jelentése az 1. igénypontban megadott.
19. Eljárás az 1. igénypont szerinti vegyület felhasználására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti vegyületet gyógyszerkészítménnyé feldolgozzuk, amely alkalmas érképződés inhibiálására.