HUT72753A - Pharmaceutical compositions containing mycophenolic acid derivatives for inhibiting stenosis - Google Patents

Description

A találmány tárgya eljárás sebészeti beavatkozást követő stenosis (szűkület), különösen érplasztika után fellépő restenosis megelőzésére mikofenolsav vagy rokon vegyület, elsősorban mikofenolát-mofetil alkalmazásával.

A mikofenolsav gyengén-aktív antibiotikum, mely a

Pennicillium brevicompactum fermentációs táptalajában található. A mikofenolsavval rokon vegyületeket és alkalmazásukat gyulladásos betegségek, autoimmun betegségek, vírusos betegségek és/vagy allograft kilökődések megelőzésére a következő számú US szabadalmi leírások ismertetik: 4 686 234, 4 725 622, 4 727 069,

748 173, 4 753 935, 4 786 637, 4 808 592, 4 861 776,

868 153, 4 948 793, 4 952 579, 4 959 387 és 4 922 467, mindezt tájékoztatásul foglaltuk össze.

A mikofenolsav, mikofenolát-mofetil vagy ezek gyógyászati szempontból elfogadható sói vagy származékai az alábbi általános szerkezeteknek felelnek meg:

(I) általános képletü vegyület és gyógyászati szempontból elfogadható sói, a képletben:

R¹ jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomszámú alkilcsoport;

jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomszámú alkilcsoport vagy - fenil-4-CO₂R³ csoport, melyben R³ jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomszámú alkilcsoport vagy gyógyászati szempontból elfogadható kation;

10903 ·· ··

R⁴ és r5 jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomszámú alkilcsoport;

X és Y jelentése egymástól függetlenül oxigén- vagy kénatom és q jelentése 1-6 egész szám;

vagy (II) általános képletű vegyület és gyógyászati szempontból elfogadható sói, a képletben:

A jelentése oxigén- vagy kénatom;

R¹ a következő csoportból választott helyettesitők valamelyike:

„^Al 0 Q H // H l I

-CR , -C(CH2)qCC^Rj es -C=C-Qj csoport, melyben Aj jelentése oxigén- vagy kénatom;

q jelentése 0-6 egész szám;

R² jelentése alkil-, halogén-alkil vagy -NR⁴R⁵ csoport, ahol:

⁴ . 5

R es R° jelentese egymástól függetlenül hidrogénatom, alkil-, halogén-alkil-, cikloalkilcsoport, adott esetben halogénatommal, hidroxi-, karboxi-, klór-karbonil-, szulfonil-amino-, nitro-, ciano-, fenil-, alkil-, acil-, alkoxikarbonil-, acil-amino-, dialkil-amino- vagy dialkilamino-etoxi-karbonilcsoporttal monos zubs ztituált fenilcsoport, adott esetben hidroxi-, karboxi-, * · · · · • · · « ··· ···· ··· nitro- vagy alkilcsoporttal diszubsztituált fenilcsoport vagy adott esetben dialkil-aminocsoporttal szubsztituált benzilcsoport;

R³ jelentése hidrogénatom, alkilcsoport vagy gyógyszerészeti szempontból elfogadható kation;

Q és Q¹ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy

-CO₂R³ csoport; és

Z¹ a következő csoportból választott helyettesítők valamelyike:

ΙΗ-tetrazolil-, CH₂OH, -CHO, -CN, -C(O)A²R⁶ és -C(O)NR³R⁸ csoport, ahol:

A² jelentése oxigén- vagy kénatom;

R⁶ jelentése hidrogénatom, alkil-, alkenil-, cikloalkilcsoport, adott esetben helyettesített fenilcsoport, adott esetben helyettesített benzilcsoport vagy gyógyszerészeti szempontból elfogadható kation; és

R³ és R⁸ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, alkil- vagy cikloalkilcsoport, vagy R³ és R⁸ együttesen - (CH2) 20 (CH2) 2~' ^_(CH2>4 vagy (CH₂)5-csoportot képeznek;

azzal a feltétellel, hogy R¹ ésR⁶ nem lehet hidrogénatom, ha A és A₂ jelentése oxigénatom,'

Vűöjij (III) általános képletű vegyület és gyógyszerészeti szempontból elfogadható sói, a képletben:

• · · ·

Z jelentése hidrogénatom vagy -C(O)R, és

R jelentése 1-6 szénatomszámú alkilcsoport vagy arilcsoport'

- (IV) általános képletű vegyüiet, a képletben: m jelentése 2-4 egész szám;

Z jelentése az (a), (v), (c) vagy (d) csoportok valamelyike, a következők szerint:

(a) = 0 csoport, melyben

II

CR¹

R¹ jelentése hidrogénatom, alkilcsoport hét vagy több szénatommal, mely cikloalkil-, mint például adamantilcsoportot is magában foglal, vagy -NR^r3 csoport, melyben R^ jelentése hidrogénatom vagy kis szénatomszámú alkilcsoport, r3 jelentése hidrogénatom, kis szénatomszámú alkilcsoport, -fenil4-CO₂R2 csoport vagy valamely gyógyszerészeti szempontból elfogadható kation;

(b) = S csoport, melyben

II

-CR⁴

R⁴ jelentése hidrogénatom, alkil-, arii- vagy -Nr2r3 csoport;

• · · · ·· • · (c)= ο

II

C - (CH₂)_n-CO₂R⁵ csoport, melyben n jelentése 0-6 egész szám, és

R⁵ jelentése hidrogénatom, kis szénatomszámú alkilcsoport, vagy gyógyszerészeti szempontból elfogadható kation;

(d) = R⁶

-£ CH R csoport, melyben

R^ és R^ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy -CO₂r5 csoport; és

Y jelentése négy-hat szénatomos alkilcsoport, vagy három-öt szénatomos alkiléncsoport és egy szerkezeti elem, mely -0-, -S- vagy j2^N-R8 csoport, melyben r8 jelentése hidrogénatom, vagy egy-öt szénatomszámú alkilcsoport;

vagy

- (V) általános képletű vegyület és gyógyszerészeti szempontból elfogadható sói, a képletben m jelentése 2-4 egész szám;

Z¹ jelentése hidrogénatom vagy -C(O)R^, • · •« · · « ♦ · ··· · ·· ····* · · ·· ·

- 7 melynél R⁹ jelentése kis szénatomszámú alkil- vagy arilcsoport, Y¹ jelentése négy-hat szénatomszámú alkiléncsoport, vagy három-öt szénatomos alkiléncsoport és egy szerkezeti elem, mely -0-, -S-, vagy ^jN-R⁸ csoport, melyben

R⁸ jelentése hidrogénatom vagy egy-öt szénatomszámú alkilcsoport;

azzal a feltétellel, hogy ha m értéke kettő, nem foglalhat magában - (CH₂)2^-0-(^CH2)2 csoportot.

A mikofenolát-mofetilt, a mikofenolsav morfolino-etilészterét az US 4 753 935 sz. szabadalmi leírás ismerteti (az előbbi referátumban is szerepel), kémiai neve: morfolino-etil-E6-(1,3-dihidro-4-hidroxi-6-metoxi-7-metil-3-oxo-5-izobenzofuranil)-4-metil-4-hexenoát. A vegyület hatásosnak mutatkozott allograft (idegen szövet), beleértve krónikus allograft kilökődések megelőzéséhez.

A stenosis az ér belsejének szűkülete,amit az érfal vastagodása idéz elő, magában foglalva az érfal sejtjei (kötőszövet sejtek, különösen simáizom-sejtek) közötti komplex kölcsönhatást és a keringő vér-alkotórészeket, a vérfolyam konzekvens korlátozásával. A stenosishoz társulhat az endotheliális burkolat vagy az érfal alsó rétegei elleni roham, jellemzően sebészeti beavatkozás során (pl. varratokat képezve az érfalon keresztül, érplasztika mint a bypass-sebészetben és érplasztika esetén, akár levegővel telítés, lézer vagy más egyéb alkalmazásakor). Az érplasztika az elzáródás (pl- vérlemezkék) • ·

- 8 eltávolítását jelenti, ami az összeszűkült erek kiszélesedését eredményezi, vagyis a stenosis kezelését;az eljárás gyakran vált ki rohamot az endotheliális réteg vagy az alsó rétegek ellen, ami korai érsejt-, különösen simaizomsejt- és egyéb kötőszövetsejt-burjánzást (a sejttípusok egyike felelős a rohamért) idéz elő; a folyamat az érfal vastagodását okozza a belső rész megfelelő szűkülésével, amit restenosisnak neveznek.

Fentiekből következően olyan megoldást kívántunk kidolgozni, melyet a sebészeti eljárásokat követő stenosis vagy restenosis megelőzésére lehet alkalmazni. Felismertük, hogy hatásos mennyiségű mikofenolsav vagy valamely rokon vegyület, különösen mikofenolát-mofetil alkalmazásával ezt a célt el tudjuk érni.

Találmányunk tárgya tehát gyógyászati szempontból hatásos mennyiségű mikofenolsav vagy mikofenolát-mofetil vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sójának vagy származékának alkalmazása stenosis kezeléséhez.

Találmányunk másik szempontja a mikofenolsav vagy mikofenolát-mofetil vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóinak vagy származékainak gyógyászatilag hatásos mennyiségben való használata érplasztika vagy bypass műtét véghezvitelénél, illetve az említett termékek megelőzés céljából való alkalmazása.

További szempontja találmányunknak az érfal elleni roham következtében kialakuló intimális érsejt-, különösen simaizomsejt-burjánzás meggátlása oly módon, hogy a burjánzást gátló mennyiségben mikofenolsavat vagy mikofenolát-mofetilt vagy ·· · · ·« ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóit vagy származékait alkalmazzuk.

Találmányunk további tárgya gyógyszerészeti kompozíció stenosis kezeléséhez, mely gyógyszerészeti szempontból elfogadható nem-toxikus kötőanyagot és gyógyászati szempontból hatásos mennyiségű mikofenolsavat, mikofenolát-mofetilt vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóit vagy származékait tartalmazza.

Találmányunk előnyös változata értelmében a mikofenolátmofetilt vagy gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóját orálisan alkalmazzuk érplasztika vagy sziv-bypass műtét következtében fellépő stenosis vagy restenosis meggátlására.

Meghatározások és általános paraméterek

A következő definíciók illusztrálják és meghatározzák a találmány leírásánál használt különféle kifejezések jelentését és körét.

Az alkil kifejezés csak szén- és hidrogénatomot tartalmazó egy vegyértékű ciklikus, elágazó vagy egyenes láncú gyököt jelent. Példaként említjük a metil-, etil-, t-butil-, pentil-, heptil-, pivalil-, ciklopentil- és ciklohexil-gyököket.

A kis szénatomszámú alkil kifejezés 1-6 szénatomszámú egy vegyértékű alkilgyököt jelent. Példaként említjük a metil-, etil-, η-propil-, izopropil-, η-butil-, t-butil-, i-butil-, (vagy 2-metil-propil), izoamil-, pentil- és izopentil-gyököket.

• · · · · · ····

- 10 Az alkilén’' kifejezés telített, kétvegyértékű gyököt jelent, mely csak szenet és hidrogént tartalmaz és mely elágazó vagy egyenesláncú lehet. A kifejezéshez példaként említjük a metilén-, etilén-, η-propilén-, t-butilén-, i-pentilén- és nheptilén-gyököket.

Az alkoxi kifejezés -OR csoportra vonatkozik, melyben az R jelentése az előbbiekben meghatározott kis szénatomszámú alkilesöpört.

Az aril kifejezés egyetlen gyűrűt (pl. fenil-) vagy két kondenzált gyűrűt (pl. naftil-) tartalmazó helyettesített vagy helyettesítetlen egy vegyértékű telítetlen aromás karbociklikus gyököt jelent.

Az acil kifejezés valamely szerves savon alapuló gyökre - pl. -C(O)Rl - vonatkozik, melyben R-*· jelentése alkil- vagy arilcsoport.

A haló kifejezés fluor-, bróm-, klór- vagy jódatomra vonatkozik.

A leírt vegyületek és intermedierek elkülönítéséhez és tisztításához - kívánt esetben - bármilyen megfelelő elválasztási vagy tisztítási eljárás alkalmazható, ilyenek például: szűrés, extrahálás, kristályosítás, oszlopkromatográfia, vékonyréteg-kromatográfia vagy vastagrétegkromatográfia, vagy ezen eljárások kombinációja.

Valamely gyógyszerészeti szempontból elfogadható só bármilyen szervetlen vagy szerves sav sója lehet. A gyógyszerészeti szempontból elfogadható anion meghatározás ilyen sók anionjára utal. A sót vagy az aniont úgy kell szukcininsav, maleinsav, benzoesav, cinnaminsav, megválasztani, hogy biológiai vagy más egyéb szempontból megfelelő legyen. Ezeket a sókat szervetlen savakkal képezzük, ilyenek a hidrogén-klorid, hidrogén-bromid, kénsav, (szulfát- és biszulfátsókat adva) salétromsav, foszforsav és hasonlók, de szerves savakkal is állíthatunk elő sókat, ilyenek az ecetsav, propionsav, glikolsav, piruvinsav, oxálsav, malonsav, fumársav, borkősav, citromsav, mandulasav, metánszulfonsav, etánszulfonsav, p-toluol-szulfonsav, szalicilsav és hasonlók.

A kezelés kifejezés bármilyen kezelést jelent emlősnél mutatkozó betegségre vonatkozólag, beleértve:

(i) a betegség megelőzését, vagyis a betegség klinikai tünetei kialakulásának meggátlását;

(ii) a betegség megakadályozását, azaz a klinikai tünetek fejlődésének megszüntetését; és/vagy (iii) a betegség enyhítését, vagyis a klinikai tünetek visszafejlődésének előidézését.

A hatásos mennyiség vagy gyógyászati szempontból hatásos mennyiség kifejezések azt az elegendő adagolást jelentik, mely biztosítja a betegség megfelelő kezelését. Az adag mértéke a betegtől, a betegségtől és a kívánt kezeléstől függően változtatható.

A stenosis kifejezés úgy olvasandó, hogy magában foglalja a restenosis-t is, kivéve, ha a szöveg vagy specifikus leírás az ellenkezőjét indikálja.

A származék kifejezés a mikofenolsav-szerkezeten alapuló vegyüietet jelent, mely szubsztituenst hordoz a biciklikus gyűrű • ···« ···« a • · · · » ··· · a

4-helyzetében lévő -OH csoporton és/vagy az oldalláncon lévő karbox_vj.lsavon, ahogy ez a következő US szabadalmi leírásokban szerepel: 4 686 234; 4 725 622; 4 727 069; 4 748 173;4 753 935;

786 637; 4 808 592; 4 861 776;4 868 153;4 948 793; 4 952 579; 4 959 387 és 4 922 467, mindegyikre az előbbiekben már hivatkoztunk (pl. a Z-csoport és a - (CH₂)_n~NY-csoport a

748 173 sz. US szabadalmi leírásban).

A találmány szerinti megoldásokhoz alkalmazott vegyületeket az alábbi forrásokból lehet megkapni, illetve megismerni.

A mikofenolsavat például a Sigma Chemical Company (St.

Louis, Missuri) cégtől lehet beszerezni.

A mikofenolát-mofetilt, azaz a morfolino-etil-E-6-(l,3dihidro-4-hidroxi-6-metoxi-7-metil-3-oxo-5-izo(benzo-furanil)-4metil-4-hexenoátot a már említett US 4 753 935 sz. szabadalmi leírás alapján lehet előállítani, formálni és alkalmazni.

A mikofenolsav és a mikofenolát-mofetil gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóit vagy származékait a következő számú, az előbbiekben már említett US szabadalmi leírások alapján lehet előállítani, formálni és alkalmazni:

686 234; 4 725 622; 4 727 069; 4 748 173,-4 753 935; 4 786 637;

808 592; 4 861 776; 4 868 153; 4 948 793; 4 952 579; 4 959 387 és 4 922 467.

A találmányunk szerinti módszereknél alkalmazott vegyületek gátolják a sejtburjánzását, így a simaizom sejtekét is, úgy működve, hogy gátolják az inozin-monofoszfátdehidrogenázt és a következményként fellépő desoxi-quanozin13 trifoszfát csökkenését, ami a DNS-szintézishez és sejtburjánzáshoz szükséges. A vegyületeket vaszkuláris károsodásra fellépő proliferativ feleletek megelőzésére lehet felhasználni, pl. egy érfal elleni rohamot követő stenosis esetén.

Nevezetesen, a mikofenolsavat, vagy gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóit vagy származékait profilaktikusan és/vagy az endothelium vagy az érfal alsó rétegeinek károsodásával társuló sebészeti eljárást követően lehet alkalmazni (pl. az endotheliális sejtek eltávolításával vagy veszélyeztetésével járó folyamat). A találmányunk szerinti módszereknél alkalmazott vegyületek nem igénylik más egyéb aktív szer együttes alkalmazását a hatásosság fokozására, bár használhatók ilyen kiegészítő aktív szerek is.

Tesztelés

A stenosis kezelését bemutató in vitro aktivitást simaizom-sejtek burjánzásának meggátlásával demonstráltuk. Ezt humán artériás simaizom burjánzás vizsgálattal állapítottuk meg.

Humán simaizom-sejteket növesztettünk kultúrában. Egy tesztcsoportot a teszt-vegyülettel kezeltünk, melyet kiválasztott koncentrációkban adagoltunk friss közegbe. Mindegyik csoport 2pCi triciummal aktivált timidint (³HTdR), azaz radioizotóp nyomjelzőt kapott. 24 óra után a sejteket összegyűjtöttük és a DNS-be beépült nyomjelző tömegét szcintilláció útján számláltuk;

az eredményt összehasonlítottuk a teszt- és kontrollcsoporttal, ·· ♦ · · • · · · · * · · ··· ···· ··· • · « « ·· • · · · • · ··

- 14 a tömeg arányban állt a sejtburjánzással. A simaizomsejtburjánzás gátlását akkor állapítottuk meg, amikor a tesztcsoportnál kisebb radioizotóp-szám mutatkozott, mint a kontrollcsoportnál. Meghatároztuk a teszt-vegyület koncentrációit, melyektől a burjánzás gátlása várható 50%-nál (az ICjq) , és több, mint 95%-nál.

A stenosis kezelését bemutató in vivő aktivitást patkány modellen, artériás stenosis esetére demonstráltuk. Egy tesztcsoportot kezeltünk a teszt vegyülettel, 6 nappal a bal nyaki verőér sérülése előtt és folytatva 14 napig a sérülés után; a teszt csoportot kontroli-csoporttal hasonlítottuk össze, mely vivőanyagot kapott teszt-vegyület nélkül. A sérülést úgy idéztük elő, hogy a bal artéria 10 m/m hosszú szakaszán gyengén levegőt áramoltattunk át. A jobb artéria ép maradt. Valamennyi alanynál mind a bal, mind a jobb artériákból metszetet készítettünk és mértük az érfal térségét (endothelium, érbelhártya, érfal középső rétege). A vaszkuláris burjánzás mértékét úgy számítottuk ki, hogy az ép jobboldali nyaki verőér átlagos területét kivontuk a sérült baloldali nyaki verőér átlagos területéből. A vaszkuláris burjánzás csökkenését az jelezte, hogy a teszt csoport kisebb burjánzást mutatott, mint a kontroll-csoport.

Alkalmazás mikofenolsavat, mikofenolát-mofetilt és ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóit és származékait ··«« ···· • · • ·· · • · · ··· ··

bármilyen elfogadott módszer és forma - melyeket hasonló hasznossági! szereknél alkalmaznak - útján lehet felhasználni, pl. a már korábban említett US 4753 935 és 4 922 467 sz.

szabadalmi leírásokban leírtak szerint.

Az alkalmazás például orális, nazális, parenterális vagy helyi használatú lehet, szilárd, fél-szilárd, liofilizált por vagy folyadék formájában, mint például tabletták, kúpok, pirulák, kapszulák, porok, oldatok, szuszpenziók, emulziók, krémek, lotionok, aeroszolok, kenőcsök, gélek vagy hasonlók alakjában, előnyösen egységnyi adagként, ami a pontos adagolás egyszerű alkalmazásához szükséges. A kompozíciók a szokásos gyógyszerészeti hordozót vagy kötőanyagot és egy aktív vegyületet (mikofenolsav, mikofenolát-mofetil, vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sója vagy származéka) és kiegészítőleg egyéb gyógyhatású szert, gyógyszerészeti hordozót, segédanyagokat stb.-t tartalmaznak.

A vegyületeket általában gyógyászati szempontból hatásos mennyiségben kell alkalmazni, vagyis a hatásos kezeléshez szükséges adagban, ami az egyéntől és a kezelendő állapottól függ. Találmányunk szempontjából megfelelő, gyógyászatilag hatásos mennyiség meggátolja a vaszkuláris károsodásra fellépő sejtburjánzást. Előnyösen, gyógyászati szempontból hatásos a 0, 3μΜ - ΙΟμΜ, még előnyösebben a kb. Ι,ΟμΜ plazma-koncentráció; ez sejtburjánzást gátló mennyiségnek számít.

A fentiekben részletezett körülményeket figyelembevéve előnyben részesül az orális alkalmazás megfelelő napi adagolási módban, ami a betegség mértékétől függően változtatható. Orális *· ··«· • ·» · .· ···.

«··· -J*« *· »« • * »

alkalmazáshoz valamely gyógyszerészeti szempontból elfogadható, nem-toxikus kompozíciót bármilyen szokásosan használt kötőanyaggal lehet formálni, ilyenek például a gyógyszerészeti tisztaságú mannitol, laktóz, keményítő, magnézium-sztearát, nátrium-szacharát, talkum, cellulóz, glükóz, zselatin, szacharóz, magnézium-karbonát és hasonlók. Ezek a kompozíciók oldatok, szuszpenziók, tabletták, pirulák, kapszulák, porok, lassan felszabaduló formák és hasonlók lehetnek.

A kompozíciók előnyösen pirulák vagy tabletták lehetnek, melyek az aktív alkotórész mellett a következőket tartalmazhatják: hígítót, mint laktózt, szacharózt, dikalciumfoszfátot és hasonlókat; dezintegránst, mint keményítőt vagy ennek származékát; csúsztatóanyagot, mint magnézium-sztearátot vagy hasonlót és kötőanyagot, mint keményítőt, gumiarábikumot, polivinil-pirrolidont, zselatint, cellulózt és ezek származékait és hasonlókat.

Folyékony kompozíciókat például úgy lehet előállítani, hogy valamely, a fentiekben említett aktív vegyületet (kb. 0,5%tól kb. 20%-ig) és megfelelő gyógyszerészeti segédanyagot hordozóban, mint például vízben, sóoldatban, vizes dextrózban, glicerinben, etanolban és hasonlókban oldunk, diszpergálunk stb., ily módon oldatot vagy szuszpenziót kapunk.

Kívánt esetben az alkalmazásra kerülő gyógyszerészeti kompozíciók kisebb mennyiségben nem-toxikus segédanyagokat is .· ··· » • .·.> ·..* *.,* tartalmazhatnak, mint nedvesítő vagy emulgeáló szereket, pHstabilizálókat (puffer) és hasonlókat, mint például nátriumacetátot, szorbitán-monolaurátot,trietanol-amin-oleátot stb.-t.

Szakemberek számára az ilyen adagolási formák aktuális módszerei ismertek vagy kézenfekvőek; például 1. Remington's Pharmaceutical Sciences, 16. kiadás, (Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1980). Az alkalmazandó kompozíció mindenesetre olyan hatásos mennyiségben tartalmazza az aktív vegyület(ek)et, ami enyhíti a beteg állapotát, feltéve, hogy a kezelést találmányunk tanításával összhangban folytatják le.

Gyógyászati szempontból hatásos napi orális adag

0,02 mg/kg-tól kb. 100 mg/kg testsúly, előnyösen kb. 25 mg/kg kb. 60 mg/kg testsúlyig. Az intravénás adagok hasonlóak. A mikofenolát-mofetilt allograft kilökődés meggátlására alkalmazzuk 2,0, 3,0, 3,5 és 4,0 g/nap orális adagolásban, ami kb. 25 mg/kg - 60 mg/kg napi dózisnak felel meg, és függ a kezelendő betegtől és az allograft reakciótól. Hasonló adagolási rendszerek hatásosak a találmány szerinti kezelési módszereknél.

Példák

A következő készítmények és példák lehetővé teszik szakemberek számára, hogy még világosabban megértsék és alkalmazhassák találmányunkat. Mindez nem jelentheti a találmány terjedelmének korlátozását, hanem annak megvilágítását és ábrázolását.

• · *

1. példa

Ez a példa orális alkalmazásra szolgáló reprezentatív gyógyszerészeti formát mutat be, melynél az aktív vegyüiet például a következő: mikofenolsav, mikofenolát-mofetil, vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sói vagy származékai, pl. morfolino-etil-E-6-(1,3-dihidro-4-hidroxi-6metoxi-7-metil-3-oxo-5-izo(benzo-furanil))-4-metil-4-hexenoáthidro-klorid.

Komponensek Mennyiség/kapszula, mg

Aktív vegyüiet 200

Laktóz, porlasztva szárított 148

Magnézium-sztearát 2

A fenti komponenseket összekeverjük és kemény zselatin kapszulába visszük be.

. példa

Ez a példa egy másik reprezentatív gyógyszerészeti formát mutat be orális alkalmazásra, melynél az aktív vegyüiet például a következő: mikofenolsav, mikofenolát-mofetil, vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sói vagy származékai,pl.

mórfolino-etil-E-6-(1,3-dihidro-4-hidroxi-6-metoxi-7-metil-3oxo-5-izo(benzo-furanil))-4-metil-4-hexenoát-hidro-klorid.

Komponensek

Mennyiség/tabletta, mg

Aktív vegyület 400

Kukorica-keményítő 50

Laktóz 145

Magnézium-sztearát 5

A rovátkás fenti komponenseket bensó'leg tablettákká sajtoljuk.

elkeverjük és egyszerű,

3. példa

Ez a példa reprezentatív gyógyszerészeti formát mutat be, melynél az aktív vegyület például a következő: mikofenolsav, mikofenolát-mofetil, vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sói vagy származékai, pl. morfolino-etil-E-6-(1, 3dihidro-4-hidroxi-6-metoxi-7-metil-3-oxo-5-izo(benzo-furanil))4-metil-4-hexenoát-hidro-klorid.

Komponensek
Aktív vegyület	1,0	g
Fumársav	0, 5	g
Nátrium-klórid	2,0	g
Metil-parabén	0,1	g
Granulált cukor	25,	5 g

Szóróitól (70%-os oldat)

12,85 g • · · ·

Veegum K (Vanderbilt Co.

Ízesítő

Színező anyag

Desztillált víz

1,0 g

0,035 ml

0, 5 mg

q.s. 100 ml-re

4. példa

In vitro aktivitás meghatározása humán artériás simaizom-burjánzás vizsgálat felhasználásával

Humán simaizom-sejteket, AG11545 (beszerezve a Coriell sejtbanktól) kis koncentrációban (2,5x10^ sejt/m) 24 Petricsészébe helyeztünk (modifikált Eagle közeg (Dulbecco), mely 10% borjúmagzat-szérumot tartalmaz). A sejteket 48 óra hosszat növekedni hagytuk, utána mikofenolsavat (Ο,ΟΙμΜ, Ο,ΙμΜ, Ι,ΟμΜ és 10μΜ) tartalmazó friss közeget adtunk hozzá (kivéve a kontroll mintákat), valamint 2μϋί ³HTdR/csoport nyomjelzőt. A sejteket további 24 óra hosszat növesztettük, utána triklór-ecetsavval kicsapva összegyűjtöttük. A DNS-be beépült nyomjelző tömegét szcintilláció útján számláltuk és az eredményt összehasonlítottuk a teszt- és a kontrollcsoportokkal. Az eredményekből meghatároztuk a mikofenolsav hatásos in vitro koncentrációját a simaizomsejt-burjánzás gátlására 50%-nál (IC₅q) és több mint 95%-nál.

Ezzel a módszerrel tesztelve, a mikofenolsav IC^q értéke 0,3μΜ körül van. Ι,ΟμΜ koncentrációk a simaizomsejt-burjánzást több mint 95%-nál gátolták. Ebből az következtethető, hogy a • · · · · ···· ····

:.. .· · • ·· · *. · mikofenolsav alkalmazható stenosis vagy restenosis meggátlásához, sebészeti beavatkozásnak alávetett humán pácienseknél.

Ugyanezt az eljárást követve és a mikofenolsav gyógyszerészeti szempontból elfogadható sójával vagy nem-észter származékával helyettesítve a mikofenolsavat, a simaizomsejtburjánzás csökkentésében hasonló aktivitást tapasztaltunk. Ebből az következtethető, hogy a mikofenolsav gyógyszerészeti szempontból elfogadható sói vagy nem-észter származékai alkalmazhatók stenosis vagy restenosis meggátlásához sebészeti beavatkozásnak alávetett humán pácienseknél.

5. példa

In vivő aktivitás hasznosíthatóságának meghatározása

Artériás stenosis modell patkányon

Teszt anyagok

Mikofenolát-mofetilt SSV-ben - kötőanyagban - szuszpendálunk,mely 0,5% nátrium-karboxi-metilcellulózt, 0,9% NaCl-t,

0,4% Tweent és 0,9% benzil-alkoholt tartalmaz vízben.

Állatok

3-4 hónapos és 350125 gram súlyú hím Sprague-Dawley patkányokat (Crl, CD® (SD), BR) , használtunk. Az állatokat egyénenként helyeztük el és standard rágcsáló-eledellel etettük.

• · · · • ·

- 22 Kezelési módszer patkányból álló kísérleti csoportot 30 mg/kg napi adaggal orálisan mikofenolát-mofetillel kezeltünk, 2 egyenlő dózisra szétosztva, 6 órás időközben. A kezelést 6 nappal a nyaki verőér sérülése előtt kezdtük és a sérülés után 14 napig folytattuk, hogy neointimális sejtburjánzást idézzünk elő. A 30 patkányból álló kontroli-csoportot hasonlóan kezeltük, de csak az SSV vivőanyaggal.

Artériás sérülés modell

Valamennyi patkány bal nyaki verőerén sérülést idéztünk elő, amihez a következő ismertetésben leírt technikát alkalmaztuk: Fishman, JA, és tsa., Endothelial regeneration in the rat carotid artery and the significance of endothelian denudation in the pathogenesis of myointimal thickening, Láb.

Invest., 1975, 32:339-351.

Valamennyi állatot elaltattuk 58% ketamin (Fort Dodge Laboratories, Iowa) 60 mg/kg, és 42% xilazin (Lloyd Laboratories, Iowa) 10 mg/kg keverékének alkalmazásával. Ezután feltártuk a disztális bal oldali közös nyaki verőér 10 mm hosszú szekcióját. A feltárt artéria mindkét végénél selyem szálakat helyeztünk el és lazán megkötöttük. Mindkét kötéshez közeli helyeket Tyrode's oldatot (Sigma) tartalmazó fecskendőhöz rögzített 30-as tűvel megszúrtunk, majd a nyílásokon Tyrode's oldatot áramoltattunk át, hogy az izolált érből a vért kiöblítsük. Ezt követően ugyanezeken a nyílásokon óvatosan levegőt áramoltattunk át 25 ml/perc értéknél 3 percig, az artéria károsítása céljából, végül a szúrások helyét hagytuk összeállni, a kötéseket eltávolítottuk és a seb bezárult. Ez az eljárás endotheliális hámleválást, valamint az érfal belső hártyáján felszakadást idézett elő.

Tizennégy nappal a sérülés után véget vetettünk az állatok életének. Mind a bal, mind a jobb oldali nyaki verőereket eltávolítottuk és 10%-os formaiinba, majd 30%-os szacharózba tettük neointimális sejtburjánzás előidézésére, három nappal a metszet készítés és tárgylemezre helyezés előtt.

Neointimális sejtburjánzás analízise

A kapott artériákat negyedekbe vágtuk és együtt a négy részt az Optimum Cutting Temperature (Ο.T.C.) vegyület (Miles, Indiana) tömbjébe ágyaztuk. A tömbből 15 db, 10 pm vastag artériás keresztmetszetet vágtunk mikrotom/kriosztát (Miles,

Indiana) alkalmazásával -20°C-on, utána a metszeteket hematoxilin-eozinnel színeztük. A színezett, artériás keresztmetszeteket mikroszkópon át Sigma Scan-nel (Jandel Scientific, Corte Madera, CA) programozott komputerhez kapcsolt digitalizáló kártyára vetítettük. Elektronikus tollat használva körülrajzoltuk a kivetített bal oldali és jobb oldali belső és külső érfalakat, a bal (sérült) és jobb (kontroll) oldali artériák átlagos keresztmetszeti területét a 15 artériás metszet

..........: .·· ·’ ”·.. · ··’ ___· · · · a közül az 1, 4, 7, 10 és 13 metszetekből elektronikusan kiértékeltük. A simaizomsejt-burjánzás végső területét mindegyik patkányra átszámítottuk úgy, hogy a kontroll artéria átlagos területét kivontuk a sérült artériás területből. Mindegyik metszet vakon készült, így a vizsgálatot tanulmányozónak nem volt tudomása arról, hogy a metszet teszt- vagy kontrolipatkányból, vagy sérült illetve érintetlen artériából származik.

Statisztikai analízis

Paramít)g<rikus páratlan t-tesztet és nem-parametrikus MannWhitney U-tesztet egyaránt használtunk a mikofenolát-mofetillel kezelt csoport és az SSV-vívőanyaggal kezelt kontroll csoport összehasonlításához, hogy meghatározzuk, volt-e szignifikáns csökkenés az átlagos sérülés mértékében.

Eredmények

A mikofenolát-mofetil 30 mg/kg testsúlynál határozottan csökkenti a vaszkuláris proliferativ reakciót a levegőátfúvással indukált sérülésre, 14 nappal a sérülés után, a következő átlagos keresztmetszeti területeket eredményezve:

Sérült artéria Ép artéria

Mikofenolát-mof etil 17721295 mm² 11761103 mm²

SSV vivőanyag-kontroll 22891532 mm² 11861 69 mm² • · • ··· • « ·«·· ···

Végül a vaszkuláris sejtburjánzás átlagos területe (kivonva a sérült artéria területét az ép artéria területéből):

Vaszkuláris sejtburjánzás Mikofenolát-mofetil 546+280 mm²

SSV vivőanyag-kontroll 11031533 mm²

Megfelelve 51% csökkenésnek neointimális sejtburjánzásnál (p < 0,05).

Fentiekből következően a mikofenolát-mofetil 51%-ban gátol neointimális sejtburjánzást in vivő vaszkuláris sérülést követően. Várható tehát, hogy a mikofenolát-mofetil jól alkalmazható sebészeti beavatkozásnak alávetett humán betegeknél stenosis vagy restenosis meggátlására.

A folyamatot megismételve és a mikofenolát-mofetilt mikofenolsavval vagy annak gyógyszerészeti szempontból elfogadható sójával vagy származékával, vagy a mikofenolátmofetil gyógyszerészeti szempontból elfogadható sójával vagy származékával helyettesítve a neointimális sejtburjánzás hasonló gátlását figyeltük meg. A mikofenolsav és ennek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sói és származékai, valamint a mikofenolát-mofetil gyógyszerészeti szempontból elfogadható sói és származékai jól alkalmazhatók sebészeti beavatkozásnak alávetett humán betegeknél stenosis vagy restenosis meggátlására.

- 26 A leírásban tájékoztatást adtunk találmányunk sajátosan jellemző megvalósítási lehetőségeiről, de szakember számára nyilvánvalónak kell lennie, hogy különböző változtatásokra és ekvivalensek helyettesítésére is sor kerülhet a találmány valódi szellemétől és körétől való eltérés nélkül. Azonkívül számos módosítás tehető valamely speciális helyzet, anyag, anyagkompozíció, eljárás, eljárási lépés vagy lépések alkalmazása érdekében, találmányunk objektív szellemének és körének megfelelően. Minden ilyen módosítást a csatolt igénypontok körén belül történtnek kell tekinteni.

Claims (15)

1. Szabadalmi igénypontok

   1. Gyógyászati szempontból hatásos mennyiségű mikofenolsav, mikofenolát-mofetil vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sójának vagy származékának alkalmazása stenosis meggátlására emlősöknél szükség esetén.
2. 2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, mely mikofenolsav, mikofenolát-mofetil vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sójának illetve származékának felhasználását foglalja magában érplasztikához vagy szív-bypass műtéthez.
3. 3. A 2. igénypont szerinti alkalmazás, mely mikofenolsav, mikofenolát-mofetil vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sójának vagy származékának profilaktikus felhasználását foglalja magában érplasztikához vagy szív-bypass műtéthez.
4. 4. A 3. igénypont szerinti alkalmazás, mely mikofenolátmofetil vagy gyógyszerészeti szempontból elfogadható sójának felhasználását foglalja magában.
5. 5. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, mely mikofenolsav, mikofenolát-mofetil vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sójának vagy származékának felhasználásából áll.

   . * t

   V
6. 6. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, mely mikofenolsav, mikofenolát-mofetil vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sójának felhasználásából áll.
7. 7. Sejtburjánzást meggátló mennyiségű mikofenolsav, mikofenolát-mofetil vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sóinak vagy származékainak alkalmazása emlős-érfal elleni rohamot követő érsejtburjánzás meggátlására szükség esetén.
8. 8. A 7. igénypont szerinti alkalmazás, mely simaizomsejtburjánzás meggátlását foglalja magában.
9. 9. A 7. igénypont szerinti alkalmazás, melynél az említett sejtburjánzást gátló mennyiség kb. 0,3μΜ-10,ΟμΜ plazmakoncentráció .
10. 10. A 9. igénypont szerinti alkalmazás, mely mikofenolátmofetil gyógyászati szempontból hatásos mennyiségének orális adagolását foglalja magában, ami a mikofenolsav sejtburjánzást meggátló mennyiségét jelenti.
11. 11. A 10.igénypont szerinti alkalmazás, mely kb. 25 mg/kgkb. 60 mg/kg mikofenolát-mofetil orális adagolását foglalja magában.
12. 12. Gyógyászati szempontból hatásos mennyiségű mikofenolát-mofetil vagy gyógyszerészeti szempontból elfogadható sójának alkalmazása stenosis meggátlására szolgáló kezeléshez emlősnél.
13. 13. A 12. igénypont szerinti alkalmazás, melynél az említett, gyógyászati szempontból hatásos mennyiség kb. 25 mg/kg/nap - kb. 60 mg/kg/nap.
14. 14. A 13. igénypont szerinti alkalmazás, melynél a mikofenolát-mofetil vagy gyógyszerészeti szempontból elfogadható sója orálisan kerül felhasználásra.
15. 15. Gyógyászati kompozíció stenosis kezeléséhez, mely gyógyszerészeti szempontból elfogadható nem-toxikus kötőanyagból és gyógyászatilag hatásos mennyiségű mikofenolsavból, mikofenolát-mofetilből vagy ezek gyógyszerészeti szempontból elfogadható sójából vagy származékából áll.