HUT72663A - Pharmaceutical compositions containing polyamine derivatives as anticytomegaloviral agents - Google Patents

Description

A humán cytomegalovírus (CMV) fertőzések igen különböző komolyságúak lehetnek: a passzív tünet nélküli alvó fertőzéstől a lázban, hepatitiszben, tüdőgyulladásban manifesztálódott betegségekig sokféle fokozatuk van, és a veleszületett vagy neonatális fertőzések komoly agysérülést, halvaszületést vagy perinatális halált okozhatnak.

A cytomegalovírus fertőzések gyakoriak az élet vége felé, az idősebb korban leggyakoribb szeropozitivitás kapcsán. A CMV-vel való intrauterin fertőzés igen gyakori fertőzés, a congenitális vírus fertőzés vezető oka, az összes születés körülbelül 0,42,2%-ban fordul elő. A CMV fertőzések az immun-veszélyeztetett páciensek betegségeire komoly hatással lehetnek, nagy halálozási gyakorisággal, ez a fő oka az AIDS páciensek nyilvánvalóan fenyegető fertőzéseinek.

A CMV minden populációban, mindenütt megtalálhatóan fertőz. Mégis, a fertőzések kockázata jelentősen változik a különféle földrajzi területek szerint. A fertőzött egyedek átadhatják a vírust a vizeletben, nyálban, méhnyaki váladékokban, ondóban, ürülékben, tejben vagy fertőzött vér és szervek útján.

A CMV izolátumok DNS-ének molekuláris analízise kevés olyan törzs-specifikus különbséget mutat, ami az eopidemiológiai vizsgálat markeréül szolgálna. A CMV erőteljesen gazda-specifikus és laboratóriumi állatokban vagy a legtöbb nem-humán sejtkultúrában nem szaporítható. Ezért a CMV aktivitás meghatározására szolgáló kísérletek általában olyan humán sejtvonalakra korlátozódnak, amelyek tartalmazzák a CMV vírust vagy CMV-vel fertőzöttek lettek.

Jól ismert, hogy alifás poliaminok, így a spermin és spermidin szerepet játszanak a sejtszaporodásban és sejtburjánzásban. Ezek a természetben előforduló poliaminok megtalálhatók állati sejtekben és bioszintézisükben mint prekurzor, részt vesz a putreszcin. A putreszcin az ornitinnek ornitin dekarboxiláz (ODC) által való dekarboxilezése • · · ·····« • ·· · · * · · · • ···· ·· · · •·· « ·« *· *«· útján keletkezik, ez a spermidin és spermin bioszintézisének egy nagymértékben szabályozott lépése.

Az első jelzést arról, hogy polaminok szerepet játszhatnak bizonyos vírusfertőzésekben, akkor fedezték fel, amikor a putreszcint és a spermidint megtalálták a T2 bakteriofágban. Később a poliaminokat, putreszcint és spermidint megtalálták más vírusokban is, így a humán cytomegalovírusban, poxvírusban, vakcina vírusban és az 5. típusú humán adenovírusban is, hogy csak néhányat említsünk. Ennek ellenére, az a tény, hogy poliaminok vannak jelen bizonyos állati vírusokban, nem jelzi közvetlenül azt, hogy a poliaminok szerepet játszanak vírus replikációban. Nem szokásos módon, a sejtek CMV fertőzését in vitro antagonizálja az ODC-nek specifikus enzim inhibitorokkal való inhibíciója (Tyms és társai, J. Antimicrobial Chemotherapy, 22, 403-427 (1988).

A humán cytomegalovírusok a herpeszvírus csoporton belül egy alcsoportot képeznek, ezek mindegyike hajlamos arra, hogy látens maradjon emberben. A CMV fertőzések leküzdéséhez semmiféle általános terápia nem áll rendelkezésre. Bár a ganciclovir és foscovir alkalmazásáról van adat immun-sérült egyedek bizonyos fertőzéseinek kezelése esetében, mindkét vegyület komoly mellékhatásokat okozhat. A találmány célkitűzése olyan CMV szerek, amelyek az egyéb, alkalmazott szerekkel összehasonlítva kisebb sejt és/vagy szöveti toxicitást mutatnak.

A CMV összehasonlítva más herpeszvírusokkal - az I típusú herpes simplex, a II típusú herpes simplex és a varicella-zoster vírusokkal - viszonylag ellenálló az acyclovir hatásával szemben. A kutatások ezen a területen elsődlegesen olyan szerek felismerését célozzák, amelyek emberben hatékonyak. A találmány másik célkitűzése ennek megfelelően a találmány szerinti vegyületek alkalmazása szelektív CMV elleni szerként.

I

Kutatásaink során azt találtuk, hogy bizonyos poliamin-származékok CMV-sal fertőzött sejtkultúrák esetében hatásos terápiás szernek bizonyultak. A találmány tárgya, a találmány szerinti poliamin-származékok CMV elleni terápiás szerként való alkalmazása.

A találmány szerinti vegyületek közül a daganatellenes szerként alkalmazott vegyületek szintézisét a 07/602,530 számú USA-beli szabadalmi leírás ismerteti. A találmány szerinti vegyületek közül a protozoalellenes szerként alkalmazott vegyületek szintézisét a 07/840,575 számú szabadalmi leírás ismerteti. A találmány szerinti vegyületek közül a sejt-mediált immunitás potenciálására szolgáló vegyületek szintézisét a 07/856,818 számú szabadalmi leírás ismerteti.

A találmány tárgya eljárás bizonyos poliamin-származékoknak CMV fertőzött páciensek kezelésében való alkalmazása, valamint eljárás a poliamin-származékokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására.

Közelebbről, a találmány tárgya eljárás CMV fertőzött betegek kezelésére oly módon, hogy valamely (I) általános képletű vegyületet - ahol Z jelentése 2-6 szénatomos telített vagy elágazó láncú alkilcsoport; m jelentése egész szám, melynek értéke 7 vagy 8; az R csoportok jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomos telített vagy telítetlen szénhidrogéncsoport vagy -(CH₂)_x-(Ar)-X általános képletű csoport, ahol Árjelentése fenil- vagy naftilcsoport, Xjelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkoxi-, halogénezett-(1-4 szénatomos alkil)-csoport, x jelentése egész szám, melynek értéke 0, 1 vagy 2; azzal a feltétellel, hogy az R csoportok egyidejűleg nem jelenthetnek hidrogénatomot - vagy gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós sóját terápiásán hatásos mennyiségben beadjuk.

·· · · ·· ·· ··· · ·· ·· · • · · *«· · · · • ···« ·· · · • · · * · · ·· *««

Felismerésünk szerint az (I) általános képletű vegyületek anti-CMV hatást mutatnak. Jó terápiás hatásukat az ismert szerekkel összehasonlítva kevesebb toxikus mellékhatással fejtik ki.

A találmány tárgya tehát az új, (I) általános képletű vegyületek alkalmazása CMV fertőzések esetén.

A találmány oltalmi körébe tartoznak az (la) és (Ib) általános képletű új vegyületek és gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós sóik is.

Az (la) általános képletű új vegyületekben Z_d jelentése 2-6 szénatomos egyenes láncú alkilcsoport; m jelentése egész szám, melynek értéke 7 vagy 8; az R csoportok jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomos telített vagy telítetlen szénhidrogén gyök, vagy -(CH₂)_x-(Ar)-X általános képletű csoport, ahol Árjelentése fenil- vagy naftilcsoport, X jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkoxi-, halogénezett-(1-4 szénatomos alkil)-csoport, x jelentése egész szám, melynek értéke 0, 1 vagy 2; azzal a feltétellel, hogy egyidejűleg mindkét R csoport jelentése nem lehet hidrogénatom.

Az (Ib) általános képletű új vegyületekben Z₂ jelentése 2-6 szénatomos egyenes láncú alkilcsoport; m jelentése egész szám, melynek értéke 7 vagy 8; az R csoportok jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomos telített vagy telítetlen szénhidrogén gyök vagy -(CH₂)_x-(Ar)-X általános képletű csoport, ahol Árjelentése fenilvagy naftilcsoport, X jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkoxi-, halogénezett-(1-4 szénatomos alkil)-csoport, x jelentése egész szám, melynek értéke 0, 1 vagy 2; azzal a feltétellel, hogy egyidejűleg mindkét R csoport jelentése nem lehet hidrogénatom.

Az (I) általános képletben a központi alkiléncsoportok 7 vagy 8 szénatomot tartalmazó telített, egyenes láncú szénhidrogén csoportok, így (CH₂)₇ vagy (CH₂)₈ képletű

csoportok. A „Z” jelölés 2-6 szénatomot tartalmazó telített egyenes láncú alkilén csoportot (Z₂) vagy elágazó láncú alkilén csoportot (Ζ_ή) jelent, ezek például a következők lehetnek: -CH₂CH₂-, -CH₂CH₂CH₂-, -CH₂(CH₂)₂CH₂-, -CH₂(CH₂)₃CH₂-, -CH₂(CH₂)₄CH₂-, -CH(CH₃)CH₂-, -CH(CH₃)CH₂CH₂-, -CH₂CH(CH₃)CH₂-, stb. Ha R jelentése telítetlen szénhidrogén csoport, ezek a vegyületek egyenes-, elágazó láncú vagy ciklikus szénhidrogén csoportok lehetnek, így például -CH₂CH=CH₂, -CH₂CH₂CH=CH₂, -CH₂CH=CH vagy -CH₂CH=C=CH₂ csoportok.

Az (I) általános képletű vegyületek gyógyászatilag alkal-mazható savaddíciós sók formájában is alkalmazhatók. A „gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós só” kifejezés szerves és szervetlen savakkal képzett sókat jelent, alkalmazható savak például a sósav, hidrogén-fluorid, kénsav, szulfonsav, borkősav, fumársav, hidrogén-bromid, glikolsav, citromsav, maleinsav, foszforsav, borostyánkősav, ecetsav, salétromsav, benzoesav, aszkorbinsav, p-toluol-szulfonsav, benzol-szulfonsav, naftalin-szulfonsav, propionsav, stb. Előnyösek a sósavas sók. A gyógyászatilag alkalmazható sók kiválasztása és előállítása ismert módszerekkel, a szakember feladata.

Az (I) általános képletű vegyületeket ismert eljárásokkal állíthatjuk elő. Az előállítás speciális útjának kiválasztása olyan faktoroktól függ, mint például a kiindulási anyagok hozzáférhetősége, ára, az általános reakciók alkalmazhatósága a speciális vegyületekre, stb.

Az (I) általános képletű, Z helyén -CH₂CH₂CH₂- csoportot tartalmazó vegyületek előnyös szintézisútja az alább következő A reakcióvázlatban látható. Ez a szintézisút alkalmazható olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására is, ahol Z jelentése valamilyen alkil-szubsztituált propil-csoport [-CH(CH₃)CH₂CH₂-j.

A reakcióvázlat

H₂N(CH₂)_mNH₂ + EtOH NC(CH₂)₂NH(CH₂)_mNH(CH₂)₂CH

H₂C=CHCN (2)

PtO₂ H₂N(CH₂)₃NH(CH₂)_mNH(CH₂)₃NH₂ · 4HCI (2) + H₂ ___________.

HCI/AcOH		(3)
0 0 II II	NaOH/H2O	NH(CH2)3N-(CH2)mN-(CH2)3NH
(2) + O-C-O-C-O	THF	Boc Boc Boc Boc
1 1 Y Y		(4)
	Kt-BuO	RN(CH2)3N((CH2)mN(CH2)3NR
(4) + R-halogenid	--------->	Ilii
	DMF	Boc Boc Boc Boc

(5)

Et₂O (5) +HCI ------> RNH(CH₂)₃NH(CH₂)_mNH(CH₂)₃NHR -4HCI

EtOH (6) a képletekben m = 7 vagy 8; R jelentése az (I) általános képletü vegyületnél megadott, azzal a feltétellel, hogy ha R jelentése X-(Ar)-(CH)_x csoport, x jelentése O-tól eltérő. Az A reakcióvázlatban Boc jelentése t-butoxi-karbonil védöcsoport és Y jelentése terc-butil

-csoport.

‘ r

Az eljárás első lépésében egy megfelelő diamin N-alkilezését hajtjuk végre 2 ekv. akrilo-nitrillel, a reakciópartnerek melegítése közben, adott esetben valamilyen oldószer jelenlétében. A reakciót az irodalomban ismert módon hajtjuk végre. A kapott (2) képletű ciano-származékokat kémiai úton redukáljuk, hidrogénnel reagáltatva, valamilyen katalizátor (PtO₂) jelenlétében, valamilyen megfelelő oldószerben, így 8 ekv. hidrogén-kloridot vagy hidrogén-bromidot tartalmazó ecetsav jelenlétében, a hidrogén halogenid sók keletkezése közben. Természetesen más redukálórendszerek, például lítium-aluminium-hidrid is alkalmazható a (3) általános képletű vegyületek előállításához. A vegyületek előállítása után a hidrogén halogenid sókat semlegesítjük valamilyen bázissal és a nitrogén atomokat védőcsoporttal látjuk el, előnyösen di-t-butil-dikarbonáttal, szintén ismert módon eljárva. A (4) általános képletű tetra-N-védett aminokat alkilezzük oly módon, hogy a (4) általános képletű vegyületeket a megfelelő alkil-halogenidekkel (klórvagy bróm-halogenidekkel) reagáltatjuk kálium-butoxid jelenlétében, szintén standard alkilezési eljárások szerint végrehajtva a reakciót. Ha olyan (I) általános képletű vegyületeket akarunk előállítani, ahol mindkét R csoport ugyanaz, kb. 3 ekv. alkil-halogeniddel hajtjuk végre a reakciót. Ha olyan (I) általános képletű vegyületeket kívánunk előállítani, ahol az R csoportok jelentése egymástól eltérő, a (4) általános képletű vegyületek mono-szubsztitúcióját hajtjuk végre kb. 1-1,5 ekv. alkil-halogeniddel végrehajtva a reakciót, ami után a monoszubsztituált vegyületet ismert módon izoláljuk és adott esetben tovább reagáltatjuk a monoszubsztituált vegyületet a kívánt másik alkil-halogeniddel. Az alkilezést követően az (5) általános képletű vegyület N-védett csoportjait ismert módon eltávolítjuk. Eljárhatunk például úgy, hogy a vegyületet savval, előnyösen sósavval, valamilyen megfelelő oldószer vagy oldószerrendszer jelenlétében kezeljük.

·♦· · • « * · «

Ilyen oldószerrendszer például az etanolos dietil-oxid lehet. A védőcsoportok eltávolítása után megkapjuk a (6) általános képletű kívánt vegyületeket.

Alternatív módon eljárva a (3) általános képletű vegyületeket és homológjaikat reduktív alkilezésnek vethetjük alá valamilyen megfelelő aldehiddel reagáltatva. A redukciót hidrogénezéssel hajtjuk végre PtO₂ vagy nátrium-ciano-bórhidrid jelenlétében, ismert módon. Ez az eljárás általában nem kívánja meg az intermedierek nitrogén atomjainak védőcsoporttal való ellátását.

A Z helyén -HC₂(CH₂)₂CH₂- csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületek előnyös reakcióútját mutatja be az alább következő B reakcióvázlat. A reakcióút alkalmazható minden olyan (I) általános képletű vegyület előállításánál, ahol Z valamilyen egyenes láncú csoport.

B reakcióvázlat

H2N(CH2)nOH (Ό	RrCHO PtO2/H2	RHN(CH2)nOH
(8)	N-védés --------->
RN(CH2)nOH	MsCI -	RN-(CH2)nOMs
Boc	piridin	Boc	NH(CH2)mNH >
(9)		(10)	I · Boc Boc
R-N-(CH2)n-N-(CH2)	im-N-(CH2)n-	N-R I
Boc Boc	Boc í	3oc	(11)

• · *

• ♦ · · ··· * «· ·· · • · · ···· · · • ···· · · · · ··· · ·· ·« ··« a képletekben m = 7 vagy 8, n = 2-6, Boc jelentése t-butoxi-karbonil védőcsoport, R jelentése az (I) általános képletnél megadott, Ms jelentése mezilcsoport és R₁ jelentése hidrogénatom, metil- vagy etilcsoport.

Ez a szintézisút egy ismert módon végrehajtott reduktív alkilezéssel indul, ahol egy (7) általános képletü amino-alkoholt és valamilyen megfelelő aldehidet reagáltatunk a (8) általános képletü R-szubsztituált amino-alkoholok keletkezése közben. A nitrogén atomot előnyösen di-t-butil-dikarbonát csoporttal védjük, ismert módon eljárva, a (9) általános képletü N-védett amino-alkoholok keletkezése közben, amelyeket (10) általános képletü mezilátjaikká alakítunk át ismert reakciókörülmények között. Eljárhatunk például úgy, hogy mezil-kloriddal reagáltatunk piridin jelenlétében előnyösen, valamilyen oldószerben, így diklór-metánban.

A mezilátot egy N-védett diaminnal [például BocNH(CH₂)_rnNHBoc] alkilezzük, kálium-t-butoxid jelenlétében valamilyen oldószerben, így dimetil-formamidban. Az így keletkezett (11) általános képletü N-védett tetraminokról az A reakcióvázlatban ismertetett módon eltávolítjuk a védőcsoportokat. Az előző reduktív alkilezés, N-védés, mezilezés, alkilezés és védőcsoport eltávolítás mind irodalomban ismert módszerekkel és reakciókörülmények között hajtható végre.

Olyan (I) általános képletü vegyületek előállítása esetén, ahol Z jelentése -CH₂-CH₂-csoport, előnyös a C reakcióvázlat alkalmazása a (14) általános képletü intermedierek előállítása céljából, amelyeket az A reakcióvázlatban ismertetett alkilezési reakciókkal alakíthatunk tovább m = 7 vagy 8 jelentése esetén.

• · ·· ·· «« ♦· · «»···· • · · ·«·· · · ···«· « « * « ··· · ·♦ «· ·»·

C reakcióvázlat

H₂NCH₂CH₂NH₂ + Br(CH₂)_mBr —> H₂N(CH₂)NH(CH₂)_niNH(CH₂)₂NH₂ (12) (13) (14)

A C reakcióvázlatban végrehajtott N-alkilezést valamilyen (13) általános képletű megfelelő dihalo-alkánnak feleslegben vett (tízszeres) (12) képletű etilén-diaminnal való reagáltatásával hajtjuk végre, a reakciópartnereket visszafolyató hűtő alatt forralva, valamilyen megfelelő oldószerben, például etanolban. A (14) általános képletű intermedierek terminális nitrogén atomjain a kívánt R szubsztituenseket viselő végtermékek előállítását N-védéssel, a megfelelő alkil-halogeniddel való alkilezéssel és a védöcsoport az A reakcióvázlatban ismertetett módon végrehajtott eltávolításával hajthatjuk végre. Előnyösen az alkilezést végrehajthatjuk az A reakcióvázlatban ismertetett N-védés nélküli reduktív alkilezési eljárásokkal is.

Általánosságban, az (la) általános képletű vegyületeket a D reakcióvázlat szerint állíthatjuk elő.

D reakcióvázlat

H2N-ZrOH	RrCHO	R-Ν-Ζϊ-ΟΗ I
	PtO2/H2 z	H
(15)		(16)
(15) vagy (16)	N-védés ---------7	R-N-ZrOH
	Boc
		(17)

(17) + MsCI	piridin	R-N-Z-pOMs I Boc (18)
(18) + HN-(CH2)	m-NH -	—> R-N-Z^NH-ÍCH^-NH-ZpN-R I I I I
Boc	Boc	Boc Boc Boc Boc

(19)

Et₂O NH-ZrNH-ÍCH^-NH-ZrNH -4HCI

(19) + HCI ------>
EtOH R	R

(20) ahol, m = 7 vagy 8, R és ~L_y jelentése az (la) általános képletnél megadott és Rt jelentése hidrogénatom.

A valamilyen elágazó láncú szénhidrogén csoportot, például Ζ_ή csoportot tartalmazó (15) általános képletü megfelelő primer amino alkoholt ismert módon állíthatjuk elő. Kívánt esetben a primer amint a (16) általános képletű szekunder aminná alakít- ♦ * · «Μ · * · • «··« · · « « • · 9 » ·· ·9 ·»· hatjuk valamilyen megfelelő aldehiddel végzett reduktív alkilezéssel. Az amino alkoholt a A reakcióvázlatban ismertetett módon standard reakciókörülmények között reagáltatjuk a (17) általános képletű valamilyen megfelelő N-védöcsoporttal, így Boc csoporttal ellátott védett aminok előállítása közben. A (18) általános képletű N-védett amino alkoholok mezilátjait ismert módon a B reakcióvázlatban ismertetettek szerint eljárva állítjuk elő és a megfelelő N-védett diaminnal [BocNH(CH₂)_mNHBoc] alkilezzük. Az így előállított (19) általános képletű tetra N-védett tetraminokról az A reakcióvázlatban ismertetettek szerint eltávolítjuk a védőcsoportot az (la) általános képletű vegyületek keletkezése közben. Az előzőekben végrehajtott reduktív alkilezést, N-védést, mezilezést, alkilezést és védőcsoport eltávolítást ismert módon, ismert reakciókörülmények között hajtjuk végre.

Ha olyan (la) általános képletű vegyületeket kívánunk előállítani, ahol az R csoportok jelentése egymástól eltérő, a (18) általános képletű szubsztituált mezilátokat külön állítjuk elő és a megfelelő N-védett diamin [BocNH(CH₂)_mNHBoc] monoalkilezését úgy hajtjuk végre, hogy a diamint kb. 1,0-1,5 ekv. (18) általános képletű meziláttal reagáltatjuk, majd a monoszubsztituált vegyületet izoláljuk és tovább reagáltatjuk a monoszubsztituált vegyületeket a kívánt eltérően szubsztituált (18) általános képletű meziláttal.

Abban az esetben, amikor olyan (la) általános képletű vegyületet kívánunk előállítani, ahol Z₁ jelentése valamilyen alkil-szubsztituált propilén-csoport, így *-CH(Q)CH₂CH₂- csoport, ahol Q jelentése telített 1-3 szénatomos alkilcsoport, amely egyenes vagy elágazó láncú lehet, az E reakcióvázlatot alkalmazhatjuk, ahol a (25) általános képletű intermediereket állítjuk elő, amelyeket a védőcsoportok eltávolítása • ♦ előtt alkilezhetjük az N-terminális csoportjaikon, az A reakcióvázlatban ismertetett módon eljárva.

E reakcióvázlat

H₂N-(CH₂)_m-NH₂ +

O

-C

H

H₂/PtO₂ NH(CH₂)_m-NH

EtOH * CH₂ CH₂ (21)

O

II (21) + H₂C=CH-C i

Q

MeOH

(23) (22)

NH₂OH -HCI (23) -------------->

NaOH

N-OH

C-(CH₂)₂-N-(CH₂)_m

Q CH₂

N-OH

II N-(CH₂)₂-C

I I ch₂ q (24) (24) LAH/AICI3

THF

H₂N-CH-(CH₂)₂-N-(CH₂)_m-N-(CH₂)₂-CH-NH₂

I iii

Q CH₂ CH₂ Q i í (25) ahol m = 7 vagy 8, ² = fenilcsoport és Q = a fenti.

• · · « · · ·«· · · * • · · « ·· ·· 4««

Az Ε reakcióvázlat első lépésében egy reduktív alkilezést hajtunk végre, ahol a megfelelő diamint hidrogén gázzal és 2 ekv. benzaldehiddel reagáltatjuk katalizátor, így PtO₂ jelenlétében a (21) általános képletű N-védett diamin keletkezése közben. A reakciót az irodalomban ismert standard körülmények között hatjuk végre. Ezt követően a (21) általános képletü N-védett diamint 2 ekv. valamilyen megfelelő (22) általános képletü vinil-ketonnal alkilezzük valamilyen megfelelő oldószerben, így metanolban ismert módon eljárva. A kapott (23) általános képletü N-szubsztituált diamint tovább reagáltatjuk standard körülmények között hidroxil-amin hidrokloriddal valamilyen bázis, így nátrium-hidroxid jelenlétében oldószerben, így etanol/víz elegyben. A kapott (24) általános képletü oximokat a (25) általános képletü N-védett di-primer aminokká redukáljuk. A reakciót lítium-aluminium-hidriddel (LAH) hajtjuk végre aluminium-triklorid (AICI₃) jelenlétében valamilyen megfelelő oldószerben, így tetrahidrofuránban ismert módon eljárva. A (25) általános képletü N-védett di-primer aminokat tovább alkilezhetjük valamilyen megfelelő aldehiddel a védőcsoportok eltávolítása előtt az A reakcióvázlatban ismertetettek szerint eljárva.

Az olyan (la) általános képletü vegyületek, ahol Z, jelentése *-CH(CH₃)CH₂CH₂vagy *-CH(C₂H₅)CH₂CH₂- csoport, általában előnyösebbek a vegyületek gyógyászati alkalmazása szempontjából. Szintén előnyösek az olyan (la) általános képletü vegyületek, ahol mindegyik R csoport jelentése azonos. Az olyan (la) általános képletü vegyületek, ahol mindegyik R csoport metil- vagy etil-csoport, különösen előnyösek.

Azon esetekben, amikor az (la) általános képletü vegyületek egy vagy több királis centrumot tartalmaznak, az egyedi sztereoizomerek, valamint a sztereoizomerek keveréke is a találmány oltalmi körébe tartoznak. Például a következő vegyületek tartoznak az (I) és (la) általános képletek körébe:

····

(R, R)-N,N’-bisz-[3-(metil-amino)-butil]-1,7-diamino-heptán (S,S)-N,N’-bisz-[3-(metil-amino)-butil]-1,7-diamino-heptán (R,S)-N,N’-bisz-[3-(metil-amino)-butil]-1,7-diamino-heptán.

Az olyan (I) általános képletü vegyületek előállítása esetén, ahol -(CH)_x-(Ar)-X jelentése fenetil- vagy naftil-etil-csoport és különösen, ahol Z = 3 és n = 8, előnyös módszer egy aroil-klorid reagáltatása az F reakcióvázlatban ismertetettek szerint. A reakcióvázlatban Bn jelentése benzilcsoport, Φ jelentése fenilcsoport és LAH jelentése lítium-aluminium-hidrid.

F reakcióvázlat

H₂N(CH₂)₃N-Bn (CH₂)₈ l

II

OCH₂C-CI

H₂N(CH₂)₃N-Bn (27) (28)

O II

OCH₂C-CNH(CH₂)₃N-Bn

OCH₂CH₂NH(CH₂)₃N-Bn

LAH

II

O (29) (30)

OCH₂CH₂NH(CH₂)₃NH

Pd/C ’

OCH₂CH₂NH(CH₂)₃NH (31)

Az F reakcióvázlatban ismertetett reakcióút előnyös módszer a (27) általános képletű részlegesen védett intermedier N-alkilezésére valamilyen (28) általános képletű aril-acetil-kloriddal trietil-amin jelenlétében valamilyen, inért oldószerben a (29) általános képletű amid keletkezése közben, amelyet kémiai úton előnyösen lítium-aluminium-hidriddel redukálunk és a kapott (30) általános képletű terméket katalitikus úton (H₂Pd/C) debenzilezzük a kívánt (31) általános képletű végtermék keletkezése közben. Az előbbi reakciólépések ismert módszereket takarnak. Természetesen ugyanez a reakcióvázlat alkalmazható más (I) általános képletű vegyületek előállítására is, az adoptáció a szakember feladata.

Azon esetekben, amikor -(CH)_x-(Ar)-X jelentése aromás csoport (X-fenil vagy X-naftil-csoport), amely direkt kapcsolódik a terminális nitrogén atomokhoz (azaz x = 0), a vegyületeket a G reakcióvázlat szerint állíthatjuk elő.

G reakcióvázlat

ONH(CH₂)₂CN

LAH

ONH(CH₂)₃NH

N-védés vagy H₂ (32) (33)

ΦΝ(ΟΗ₂)₃ΝΗ l(CH₂)nl

Boc Boc

NaH

DMF (34)

ON(CH₂)₃N-Boc

Boc (35) ··· · ·· ·· • ·· ···· · · • · · · · · · · · * ♦ * * · · ·« ,

A reakcióvázlat olyan vegyületek előállítását szemlélteti, ahol Árjelentése fenilcsoport. Az első lépésben egy lítium-aluminium-hidrides redukciót hajtunk végre a következő irodalomban ismertetettek szerint eljárva [Bul. Soc. Chim. Fr., Part 2, 165-7 (1979)]. Természetesen ez a reakcióvázlat alkalmazható naftil-csoportok esetében is és X-szubsztituált intermedierek esetében is. Előnyösen az N-védésre t-butoxi-karbonil védőcsoportokat alkalmazunk, amelyeket ismert módon kapcsolunk fel és távolítunk el. Az N-védett vegyületeket valamilyen megfelelő dihalo-alkánnal történő reakcióval alkilezzük ismert módon eljárva.

Azokban az esetekben, ahol olyan (I) általános képletű vegyületeket kívánunk előállítani, amelyek valamilyen telítetlen szénhidrogén csoportot, így acetilén-, allénvagy allil-csoportot tartalmaznak, a H reakcióvázlat szerint előnyös eljárni. A H reakcióvázlatban R₂ jelentése valamilyen megfelelő telítetlen szénhidrogén csoport, Bn jelentése benzilcsoport, MsCI jelentése metánszulfonil-klorid és Boc jelentése t-butoxi-karbonil védőcsoport.

H reakcióvázlat

BnNH(CH₂)_mNHBn

CI-Z-OH nBnOH

(37) (37) (38) (36)

Nal

debenzilezés ----------->

HO-Z-NH(CH₂)_mNH-Z-OH (38)

N-védés ------->

HO-Z-N(CH₂)_mNH-Z-OH i I

Boc Boc (39)

(39)	MsCI X.	MsO-Z-N(CH2)mN-Z-OMs | i
	ch2ci2 z	Boc Boc

piridin (40)

R₂NHBoc (40) --------------->

NaH, Nal

DMF

R₂N-Z-N(CH₂)_mN-Z-NR₂

Boc Boc Boc Boc (41) (41) HCI/EtOH *R₂NH-Z-NH(CH₂)_mNH-Z-NHR₂ (42)

A H reakcióvázlatban egy (36) általános képletű dibenzilezett diamint N-alkilezünk egyszerű helyettesítési reakcióban a (37) általános képletű vegyületek keletkezése • · közben, amelyeket ezt követően benzilezünk (38) és N-védünk. Ezek a reakciólépések ismert módon hajthatók végre. A kapott (39) általános képletű bisz-hidroxi-amino-alkánokat mezilezzük és a (40) általános képletű mezilátokat 2 ekv. valamilyen N-védett aminnal alkilezzük, amely valamilyen megfelelő telítetlen szénhidrogén csoportot, például N-(t-butoxi-karbonil)-2,3-butadienil-amint tartalmaz. Az így kapott (41) általános képletű tetra védett-tetraminról könnyen eltávolítjuk a védőcsoportokat a (42) általános képletű vegyületek keletkezése közben.

Azokban az esetekben, ahol egy alkil-tio-szubsztituenst valamilyen magasabb oxidációs állapotú származékává kívánjuk átalakítani, az alkil-tio-étert egy persavval kezeljük ismert körülmények között. Megfelelő oxidálószerek a H₂O₂ és NaJO₄, de előnyös a meta-klór-peroxi-benzoésav alkalmazása is. Az oxidációt szulfinil-származékig végrehajtva 1 molektivalens persavat használunk alkil-tio-éter csoportonként és 2 molekvivalens persav alkalmazásával kapjuk meg a szulfonil-származékokat. Az oxidációs reakciókat kb. 0°C-tól szobahőmérsékletig terjedő hőmérsékleten hajtjuk végre olyan oldószerekben, amelyek maguk nem vesznek részt az oxidációban. Előnyös oldószerek a diklór-metán, kloroform, ecetsav és etil-acetát.

Az alább következő I reakcióvázlat az (I) általános képletű vegyületek előállítását szemlélteti. Az I reakcióvázlatban a következő rövidítéseket alkalmazzuk: Ts = toluol-szulfonil szubsztituens; DEAD = dietil-azo-dikarboxilát; THF jelentése tetrahidrofurán; TFA jelentése trifluor-ecetsav és Boc jelentése t-butoxi-karbonil védőcsoport. A reakcióvázlat illusztratív és nem korlátozzuk magunkat az alkalmazására. A reakcióvázlatban ismertetett eljárások alkalmazhatók m, Z és R minden variációjára, amelyet az (I) általános képlet esetében ismertettünk.

• · · * ·· · · « • · · · ♦ · · « · • · · · · ·· » ·

...........

Az (a) lépésben a (44) általános képletü vegyületet állítjuk elő N-t-butiloxi-karbonil-p-toluol-szulfonamidnak valamilyen klór-alkil alkohollal történő reagáltatásával trifenil-foszfin (TPP) és DEAD jelenlétében. Az (a) lépés reakciói különösen előnyösek a g lépés esetében, ahol Z = 4.

A (b) reakciólépésben 2 ekv. (44) általános képletü vegyületet valamilyen megfelelő védett diamino-alkánnal például di-tozil védett alkil-diaminnal [TsNH(CH₂)_mNHTs] reagáltatunk a (45) általános képletü intermedier keletkezése közben.

A (g) lépés a (45) általános képletü intermedier előállításának egy alternatív útja, ekkor a (43) általános képletü vegyületet 1 ekv. alkil-diollal reagáltatjuk TPP és DEAD jelenlétében valamilyen megfelelő oldószerben, így tetrahidrofuránban a (49) általános képletü intermedier keletkezése közben. A kapott (49) általános képletü inter-mediert ezután valamilyen védett diamino-alkánnal, például ditozil-védett alkil-diaminnal [TsNH(CH₂)_mNHTs] reagáltatjuk a (45) általános képletü intermedier keletkezése közben. Ez a (g) lépés azon esetekben megfelelő, amikor Z jelentése 4-től eltérő.

A (45) általános képletü vegyület további reakcióját a Boc védőcsoportok eltávolítása jelenti, ezt valamilyen megfelelő savval, például trifluor-ecetsavval hajtjuk végre aprotikus oldószerben a (46) általános képletü intermedier keletkezése közben. Valamilyen erősebb savval, például hidrogén-bromiddal történő további védőcsoport eltávolítás a (48) általános képletü vegyületek előállítását jelentheti, ahol a szubsztituált R csoport jelentése hidrogénatom. Előnyösebb általános út a védőcsoport eltávolítására a (45) általános képletü vegyület direkt kezelése valamilyen erős savval, például hidrogén-bromiddal, amelyből közvetlenül az olyan (48) általános képletü vegyülethez jutunk, ahol R jelentése hidrogénatom.

*«· · «* > · ««··< » « ··♦ * «· · · ·> «

Az R helyén hidrogénatomtól eltérő csoportot viselő (48) általános képletű vegyületek kívánt esetben végrehajtott szubsztitúciója két úton hajtható végre. Először a (45) általános képletű vegyületeket valamilyen R-alkil alkohollal reagáltatjuk TPP és DEAD jelenlétében valamilyen megfelelő oldószerben, az (e) lépés szerint.

Alternatív módon a (46) általános képletű intermediert valamilyen R-alkil-halogeniddel reagáltathatjuk hidrid ion és nátrium-jodid jelenlétében a (47) általános képletű vegyület keletkezése közben. Ezt követően a (47) általános képletű vegyületekről valamilyen savas kezeléssel eltávolíthatjuk a védőcsoportokat az olyan (48) általános képletű vegyületek keletkezése közben, ahol R jelentése hidrogénatomtól eltérő.

• · • · • · · • ·

reakcióvázlat

m

RHN(CH₂) • ·»······ ·«« · * « ·· « • ·· · ·♦ · · · • ···. · · » · • · · Λ ·· «· · « *

A J reakcióvázlat N,N’-bisz[3-(etil-amino)-propil]-1,7-heptán-diamin tetrahidroklorid előállítását mutatja be. Természetesen a reakcióvázlat kiterjeszthető m és R jelentésének különböző variációira is, de Z jelentése általában propilcsoportra korlátozódik, ahol Z = 3. A J reakcióvázlatban szereplő R csoport jelentése etilcsoport, de a reakcióvázlatot nem korlátozzuk csak az etil-származékok előállítására, az alkalmazható az (I) általános képletű vegyületben előforduló R jelentésének mindegyikére.

Az (a) lépésben az (50) általános képletű vegyület nitrogén atomjait védjük vizes formaldehides, ismert módon végrehajtott reagáltatással az (51) általános képletű megfelelő diaza gyűrűrendszerek kialakítása közben.

A (b) lépésben az (51) általános képletű N-védett aminokat alkilezzük oly módon, hogy valamilyen megfelelő savanhidriddel reagáltatjuk a vegyületeket, ismert alkilezési reakciókat végrehajtva. Amikor olyan (I) általános képletű vegyületeket kívánunk előállítani, ahol mindkét R csoport jelentése ugyanaz, kb. 3-6 ekv. savanhidriddel reagáltatunk. Amikor olyan (I) általános képletű vegyületeket kívánunk előállítani, ahol az R csoportok jelentése eltérő, az (52) általános képletű vegyület monoszubsztitúcióját hajtjuk végre kb. 1-1,5 ekv. savanhidriddel történő reagáltatással, majd a monoszubsztituált vegyület ismert módon történő izolálásával. Ezt követően kívánt esetben továbbá reagáltatjuk a monoszubsztituált vegyületet a kívánt eltérő savanhidriddel vagy alkil- illetőleg aril-halogeniddel.

A kapott (52) általános képletű acetilezett származékokat ezután kémiai úton redukáljuk [(c) lépés] lítium-aluminium-hidriddel vízmentes körülmények között ismert módon végrehajtva a reakciót. Természetesen más redukáló rendszerek, például PtO₂/H₂ is alkalmazható megfelelő körülmények között az (53) általános képletű vegyületek előállítására.

A redukció után az (53) általános képletü vegyületek N-védöcsoportjait ismert módon eltávolítjuk, például valamilyen savval, előnyösen sósavval valamilyen megfelelő oldószer vagy oldószerrendszer jelenlétében történő kezeléssel a kívánt (54) általános képletü vegyület keletkezése közben.

Amint az a szakemberek számára nyilvánvaló, a vegyületcsoport bizonyos alcsoportjai különösen hatékonyak a gyógyászati felhasználás szempontjából. Előnyös vegyületek az alábbiak:

1.18- Bisz-[(fenil)-metil]-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán 4HCI;

1,20-B isz-[(fen il)-metil]-1,16,15,20-tetra-aza-cikozán · 4HCI;

N,N’-Bisz-(3-amino-butil)-1,8-oktán-diamin; N,N’-Bisz-[(3-etil-amino(-butil]1,7-diamino-heptán tetrahidorklorid;

1.4.13.16- tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,4,13,16-tetra-aza-hexadekán;

1.18- Bisz-[(2-fenil)-etil]-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán · 4HCI;

1.18- B isz-(fen i I)-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán;

1.18- Bisz-(2,3-butadienil)-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán tetrahidroklorid.

Különösen előnyös vegyületek:

3,7,15,19-tetra-aza-heneikozán tetrahidroklorid;

3,17-dimetil-2,6,14,18-tetra-aza-nonadekán tetrahidroklorid; és

4.16- dimetil-2,6,14,18-tetra-aza-nonadekán tetrahidroklorid.

A találmány szerinti (I) általános képletü vegyületek CMV fertőzött páciensek kezelésében alkalmazhatók.

Természetesen a szakember számára nyilvánvaló, hogy nem minden (I) általános képletü vegyület hatásos minden CMV fertözéses betegségi állapot kezelésére.

»« ··· · · ♦ · · « • · · ··♦ · 9 » * ···« ·· » · ··· · ·· · · »a»

A legmegfelelőbb vegyületek kiválasztása, amely a szakember feladata, nagyon sok faktortól függ.

A leírásban használt „páciens” kifejezés melegvérű állatokat, neoplasztikus betegségi állapotú, így emlősöket jelent. Ilyen emlősök lehetnek a kutyák, macskák, patkányok, egerek, lovak, szarvasmarhák, juhok és ide értjük az embert is.

A „citomegalovírus fertőzés” olyan abnormális állapotra vagy körülményre vonatkozik, amelyet aktív vagy látens CMV fertőzés jellemez, ahol a páciens szervezetében lévő vírus aktív vagy inaktív állapotban a páciens szöveteiben, testnedveiben vagy testüregeiben található.

CMV betegségi állapotban szenvedő páciens kezelése azt jelenti, hogy az ilyen páciensnek valamilyen (I) általános képletű vegyület olyan mennyiségét adjuk be, amely terápiásán hatásos a vírusfertőzött állapot befolyásolására.

A leírásban használt „CMV fertőzés befolyásolása” kifejezés a CMV fertőzés lelassítását, megszakítását vagy megállítását jelenti és nem jelenti szükségszerűen a vírus teljes eliminációját. Elfogadott vélemény, hogy a páciens meghosszabbodott túlélése a szóbanforgó vegyülettel való kezelés után jelzi a CMV fertőzés befolyásolását.

A CMV fertőzésben szenvedő páciensek kezelése vagy a fertőzés megelőzésének céljából történő profilaktikus kezelés esetén az (I) általános képletű vegyületeket parenterálisan adhatjuk be olyan hatásos mennyiségekben, amelyben kifejtik a biológiai hatást. A parenterális úton való beadás lehet például az intraperitoneális (i.p.), szubkután (s.c.) vagy intranvénás (i.v.) injekciós beadás. Előnyös az intravénás injekció formájában történő beadás.

A vegyületek terápiásán hatásos dózisát vagy mennyiségét a szakember határozza meg és olyan faktoroktól függ, mint például az emlős fajtája, mérete, életkora, ' **·*···· •9 · ····«« • · · ··· « · · • ··♦· · · « · ··· · ·· ·♦ »· » 27 általános egészségi állapota, a speciális CMV fertőzés, a CMV fertőzés stádiuma, a kezelésre kiválasztott vegyület és a beadás módja, a beadott készítmény biológiai értékesülési tulajdonságai, a kiválasztott dózistartomány és az esetleg együtt beadott egyéb gyógyszerek. Bármilyen specifikus helyzetben a pontos mennyiséget a szakember határozza meg szokásosan ismert dózistartomány meghatározó módszerekkel. Az (I) általános képletű vegyületek terápiásán hatásos mennyisége kb. 1 mg/testsúly kg/nap (mg/kg/nap) és kb. 500 mg/kg/nap között, előnyösen kb. 5 mg/kg/nap és kb. 50 mg/kg/nap között változhat.

A találmány oltalmi körébe tartoznak az (I) általános képletű vegyületekből készült, parenterális beadásra szolgáló gyógyszerkészítmények is. Ezek a gyógyszerkészítmények egy vagy több (I) általános képletű vegyület terápiásán hatásos mennyiségét egy vagy több gyógyászatilag alkalmazható segédanyag mellett tartalmazzák. A gyógyszerkészítményeket ismert módon állítjuk elő az (I) általános képletű hatóanyagok) mennyisége egy egységdózis formában és a dózistartományban úgy van beállítva, hogy a késleltetett farmakológiai hatást fejtsen ki a kiválasztott dózistartományban.

A gyógyszerkészítményekben használt gyógyászatilag alkalmazható segédanyagok kémiailag inért vegyületek, vagyis olyan vegyületek, amelyek a felhasználás körülményei között a kezelt emlősökben nem okoznak mellékhatásokat vagy toxikus hatásokat. Megfelelő segédanyagok az oldószerek, így víz, alkohol, propilén-glikol, felületaktív anyagok, szuszpendálószerek, rublikánsok, ízesítőszerek, színezöszerek, stb. A gyógyszerkészítményekben alkalmazott hordozó- és segédanyagok ismert vegyületek, például a következő irodalmi helyen találhatók Remington’s Pharmaceutical Manufacturing, (13. kiadás) Mack Publishing Co., Easton, PA (1965).

• * ·· ♦* ·· ··· ······ • · · ·♦· · · · • ···· · · * · ··· a ·· «· *· *

Az (I) általános képletü vegyületeket hatóanyagként alkalmazva injektálható oldatok vagy szuszpenziók is készülhetnek, például valamilyen fizológiásan alkalmazható higítószer felhasználásával, amely lehet egy steril folyadék, így víz, valamint olajok, adott esetben felületaktív anyag és más gyógyászatilag alkalmazható adjuvánsok jelenlétében. Alkalmazható olajok lehetnek az állati, növényi vagy szintetikus eredetű olajok, így például a szójaolaj, földimogyoróolaj és ásványolaj. Általában víz, sóoldat, vizes dextróz és rokon cukor oldatok, etanolok és glikolok, így propilén-glikol vagy polietilén-glikol az előnyösen alkalmazható folyékony hordozóanyagok, különösen az injektálható oldatok esetében.

Természetesen bizonyos alcsoportok vagy bizonyos specifikus vegyületek hatásosabbak a gyógyászati felhasználás szempontjából, mint a vegyületcsoport más tagjai. Ami a találmány szerinti vegyületeket illeti, legelőnyösebbek azok a vegyületek, ahol Z jelentése -CH₂CH₂CH₂- vagy -CH(CH₂)CH₂CH₂- csoport. Minden esetben kimutattuk, hogy a szimetrikus vegyületek az előnyösek. Előnyösek azok a vegyületek, ahol az R csoportok egymástól függetlenül metil- vagy etilcsoportot jelentenek; előnyösek továbbá azok a vegyületek is, ahol mindkét R csoport jelentése metilcsoport vagy mindkét R csoport jelentése etilcsoport. Általában előnyösek azok a vegyületek, ahol mindkét R csoport jelentése azonos. Előnyösek azok az (I) általános képletű vegyületek is, ahol m = 7 vagy 8.

Előnyös vegyületek a következők:

N,N’-bisz-[3-(metil-amino)-butil]-1,7-diamino-heptán; N,N’-bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,7-diamino-heptán (MDL 28,314); N,N'-bisz-[3-(metil-amino)-propil]-1,7-diamino-heptán;

N,N’-bisz-[3-(metil-amino)-2-(metil)-propil]-1,7-diamino-heptán.

• «

Legelőnyösebb vegyületek az alábbiak:

N,N’-bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,7-diamino-oktán és N,N’-bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,7-diamino-heptán.

Az alább következő példák az (la) és (Ib) általános képletű vegyületek előállítását illusztrálják anélkül, hogy igényünket ezekre a példákra korlátoznánk. A példákban alkalmazott jelölések: a hőmérsékletek °C-ban vannak megadva és az alábbi rövidítéseket alkalmazzuk: g = gramm; mól = mól; ml = milliliter; I = liter; Pa = Pascal; TLC = vékonyrétegkromatográfia; THL = tetrahidrofurán; MDF = dimetil-formamid; o.p.= olvadáspont; Hgmm = higanymilliméterben kifejezett nyomás; f.p. = forráspont.

1. példa

N,N-bisz-[(3-metil-amino)-propill-1,8-oktán-diamin tetrahidroklorid

A lépés: N,N’-Bisz-[2-(ciano)-etill-1,8-oktán-diamin

14,4 g (0.,1 mól) 1,8-diamino-oktánt és 14,5 ml (0,22 mól) akrilo-nitrilt 100 ml etanolban feloldunk és visszafolyató hűtő alatt 1 éjszakán át forraljuk. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk. Analízisünk szerint a cím szerinti vegyület >98% tisztaságú.

B lépés: N,N’-Bisz-[3-(amino)-propil]-1,8-oktán-diamin tetrahidroklorid

14,4 g (0,057 mól) A lépés szerinti vegyületet, 200 ml ecetsavat, 30 ml konc, sósavat és 1,2 g PtO₂ katalizátort összekeverünk és a keveréket hidrogéngázzal kezeljük 306225 Pa (45 lbs/in²) nyomáson, amíg hidrogéngáz már nem reagál. Az elegyet leszűrjük és az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk. Ilyen módon tisztítás után

22,5 g cím szerinti vegyületet kapunk (R_f = 0,17, TLC szilikagélen, eluens 40%-os konc, ammónia/metanol).

• · • · · ··« · · · • * · · ·· ·« ··>

C lépés: 1,5,14,18-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,14,18-tetraazaoktadekán

22,5 g (0,052 mól) B lépés szerinti terméket 8,83 g (0,22 mól) nátrium-hidroxiddal, 100 ml vízzel és 500 ml tetrahidrofuránnal összekeverünk és addig keverjük, amíg homogén oldatot nem kapunk. Ehhez az oldathoz 48,13 g (0,22 mól) di-t-butil-dikarbonátot adunk és a kapott elegyet 1 éjszakán át keverjük. Ezt követően 1 liter etil-acetátba öntjük, a szerves fázist elkülönítjük és vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk. A maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél), eluensként 25%-os etil-acetát/hexán elegyet alkalmazva. így 13,5 g cím szerinti vegyületet kapunk (R_f = 0,28, TLC, szilikagél, eluens 25%-os etil-acetát/hexán).

D lépés: 1,18-Bisz-(metil)-1,5,14,18-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,14,18-tetraazaoktadekán

4.3 g (0,0068 mól) C lépés szerinti terméket, 0,94 ml (0,015) ml jód-metánt, 1,69 g (0,015 mól) kálium-t-butoxidot és 15 ml dimetil-formamidot összekeverünk és éjszakán át keverjük. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk és a maradékot 500 ml etil-acetátban és 200 ml vízben feloldjuk. A szerves fázist 2 x 100 ml vízzel mossuk és vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk és a maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél), eluensként 20%-os etil-acetát/hexán elegyet alkalmazva. így 4,4 g cím szerinti vegyületet kapunk (R_f = 0,20, TLC szilikagélen, eluens 205-os etil-acetát/hexán).

E lépés: N,N’-Bisz-[3-(metil-amino)-propil1-1,8-oktán-diamin tetrahidroklorid

4.4 g (0,0065 mól) D lépés szerinti terméket 3 ml etanolban feloldunk és az oldatot 50 ml 2N sósavval kezeljük dietil-éterben 1 éjszakán át keverve. A kapott elegyet *· · • ·· ·· • · ♦ · · • · ··· · · ··«· * · · « ·· · · szűrjük és a maradékot metanol/izopropanol/víz 20/60/20 térfogat arányú elegyéböl kristályosítjuk csökkentett nyomáson. A terméket szűrjük és szárítjuk 79°C-on P₂O₅ fölött 0,1 Hgmm nyomáson. Ilyen módon 2,08 g cím szerinti vegyületet kapunk, melynek olvadáspontja >300°C.

Elemanalízis eredmények: számított: C 44,44; H 9,79; N 12,86; Cl 32,80; talált: C 44,44; H 9,82; N, 12,95.

2. példa

N,N’-Bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,8-oktán-diamin tetrahidroklorid

A lépés: 1,18-Bisz-(etil)-1,5,14,18-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,14,18-tetra-azaoktadekán

9,5 g (0,0144 mól) 1. példa C lépés szerinti terméket, 2,91 g (0,026 mól) kálium-t-butoxidot és 45 ml dimetil-formamidot összemérünk és 0°C-ra hűtjük. Ezt követően

2,1 ml (0,026 mól) jód-etánt adunk hozzá és 0°C hőmérsékleten 4 órán át keverjük. Az elegyet hagyjuk lassan felmelegedni szobahőmérsékletre, és így egy éjszakán át keverjük. Ezt követően az oldószert eltávolítjuk csökkentett nyomáson és a maradékot 1400 ml etil-acetát és 200 ml víz között megosztjuk. A szerves fázist 2 x 100 ml vízben mossuk és vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk és a maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél), eluensként 20%-os etil-acetát/hexán elegyet alkalmazva. így 3,3 mg cím szerinti vegyületet kapunk (R_f = 0,26, TLC szilikagélen, eluens 20%-os etil-acetát/hexán).

·· · · · · · Λ • · · ··· · « • ·* ·· · * 4 ·

..........

Β lépés: N,N’-Bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,8-oktán-diamin-tetrahidroklorid hemihidrát

3,3 g (0,0046 mól) A lépés szerinti terméket 7 ml etanolban feloldjuk és 70 ml 2N sósavval kezeljük dietil-éterben 1 éjszakán át keverve. Az elegyet szűrjük és a maradékot 70°C hőmérsékleten szárítjuk csökkentett nyomáson, így 1,95 g cím szerinti vegyületet kapunk, melynek olvadáspontja >300°C.

Elemanalízis eredmények:

számított: C 46,09; H 10,10; N 11,95; Cl 30,24;

talált: C 46,23; H 9,94; N 12,11; Cl 29,99%.

3. példa

N-(amino-propil)-N'-[3-(etil-amino)-propil]-1,8-oktán-diamin tetrahidroklorid

A lépés: 1 -Etil-1,5,14,18-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán

A 2. példa A lépésében ismertetett eljárást végrehajtva 2,5 g cím szerinti vegyületet kapunk gyors folyadékkromatográfiával való tisztítás után (R_f = 0,17, TLC szilikagélen, eluens 20%-os etil-acetát/hexán).

B lépés: N-(3-amino-propil)-N’-[3-(etil-amino)-propil]-1,8-oktán-diamin tetrahidroklorid

2,5 g (0,0036 mól) A lépés szerinti vegyületet 5 ml etanolban feloldunk és 60 ml

2N sósavval kezeljük dietil-éterben keverve 1 éjszakán át. Az elegyet szűrjük és a maradékot megszárítva 1,35 g cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek olvadáspontja >300°C.

• ·····« • · *·» · ♦ « ···« · · * · • ♦♦ ·· ··«

Elemanalízis eredmények:

számított: C 43,54; H 9,82; N 12,69; Cl 32,13;

talált: C 43,43; H, 9,60, 9,55; N 12,60, 12,62; Cl 32,30%.

4. példa

N,N’-Bisz-[3-(metil-amino)-butil]-1,7-diamino-heptán tetrahidroklorid

A lépés: N,N’-Bisz-[(fenil)-metil]-1,7-heptán-diamin

65,0 g (0,5 mól) 1,7-diamino-heptánt, 106 mg (1 mól) benzaldehidet és 2,0 g platina-oxidot 800 ml etanolban összekeverünk és a keveréket hidrogén gázzal kezeljük 306,225 Pa (45 lb/in²) nyomáson, amíg a gázfelvétel befejeződik. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. A maradékot desztillációval tisztítva 99,4 g cím szerinti vegyületet kapunk, melynek forráspontja 191-195°C (1,0 Hgmm).

B lépés: N,N-Bisz-[(3-oxo)-butiH-N,N’-bisz-[(fenil)-metil]-1,7-diamino-heptán

9,3 g (0,03 mól) N,N’-bisz-[(fenil)-metil]-1,7-heptán-diamint 120 ml metanolban feloldunk, miközben az elegyet keverjük 5,6 ml (0,066 mól) metil-vinil ketont juttatunk bele nitrogén gáz áramban. Az elegyet 18 óráig keverjük, így megkapjuk a cím szerinti vegyületet.

C lépés: N,N'-Bisz-[(3-hidroxi-amino)-butil]-N,N’-bisz-[(fenil)-metill-1,7-diamino-heptán

A B lépésben kapott reakcióelegyet 0°C-ra lehűtjük és ehhez az elegyhez 4,38 g (0,063 mól) hidroxil-amin hidroklorid és 6,51 g (0,066 mól) nátrium-hidrogénkarbonát 40 ml vízben készült oldatát adjuk. Az elegyet 0°C hőmérsékleten 30 percig keverjük, majd környezeti hőmérsékleten 2 órán át folytatjuk a keverést. Ezt követően az oldóλ • · * • · · • ···♦ ··· · • ·· · szert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot 200 ml víz és 200 diklór-metán között megosztjuk. A vizes fázist 3 x 200 ml diklór-metánnal mossuk. A szerves fázisokat egyesítjük és vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert vákuumban eltávolítva 14,4 g cím szerinti vegyületet kapunk. R_f = 0,53, TLC szilikagélen, előhívás etil-acetáttal.

D lépés: N,N’-Bísz-[3-(amino)-butil]-N,N’-bisz-[(fenil)-metil]-1,7-diamino-heptán

14.4 g (0,03 mól) N,N’-bisz-[(3-hidroxi-amino)-butil]-N,N’-bisz-[(fenil)-metil]-1,7-diamin-heptán 70 ml tetrahidrofuránban készült oldatát 5,8 g (0,15 mól) lítium-aluminium-hidrid 250 ml tetrahidrofuránban készült oldatához adjuk és a reakcióelegyet 1 éjszakán át forraljuk visszafolyató hütő alatt. Ezt követően lehűtjük a reakcióelegyet és lassan lefojtjuk 5,8 ml víz, majd 5,8 ml 15%-os nátrium-hidroxid és 17,4 ml víz hozzáadásával. Az elegyet szűrjük és a szürletet háromszor mossuk 100-100 ml tetrahidrofuránnal. A szerves fázisokat egyesítjük és az oldószert vákuumban elpárologtatva

13,4 g szím szerinti vegyületet kapunk tiszta viszkózus olaj formájában. R_f = 0,33, TLC szilikagélen, előhívás 4%-os metanolos koncentrált ammónia oldattal.

E lépés: 2,16-Bisz-(metil)-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekán

13.4 g (0,029 mól) N,N’-bisz-[3-(amino)-butil]-N,N’-bisz-[(fenil)-metil]-1,7-diamino-heptánt, 2,0 g Pearlman katalizátort és 90 ml etanolt összekeverünk és a keveréket 306,225 Pa (45 lb/in²) nyomáson hidrogén gázzal kezeljük, amíg a gázfelvétel be nem fejeződik. Ezt követően a katalizátort szűréssel eltávolítjuk és az oldószert vákuumban bepároljuk, így 7,7 g N,N’-bisz-[3-(amino)-butil]-1,7-diamino-heptánt kapunk (R_f = 0,37, TLC szilikagélen, előhívás 40%-os metanolos koncentrált ammóniával). A maradékot 90 ml diklór-metánban feloldjuk és 26,2 g (0,12 mól) di-t-butil-dikarbonáttal kezeljük • **«····« • · · · ·· · · · • » · ·»· · · · • e ·« · « · « • · · « ·· ·« ··« órán át. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk (szilikagél, eluens 25%-os etil-acetát hexán oldat). így 17,1 g cím szerinti vegyületet kapunk világos olaj formájában. R_f = 0,35, TLC szilikagélen, előhívás 28%-os hexános etil-acetát oldattal.

F lépés: 1,2,16,17-Tetrametil-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekán

8,5 g (0,0126 mól) 2,16-bisz-(metil)-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekánt és 60%-os olajos nátrium-hidrid oldatból 1,21 g-ot (0,03 mól) 75 ml dimetil-formamidban feloldunk és addig keverjük, amíg a hidrogéngáz felszabadulás abba nem marad. Ehhez az elegyhez 1,88 g (0,03 mól) metil-jodidot adunk és 2 órán át keverjük az elegyet. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot 400 ml etil-acetát, valamint 20 ml víz között megosztjuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk szilikagélen, eluensként 22%-os hexános etil-acetát oldatot alkalmazva. így 3,8 g cím szerinti vegyületet kapunk világos olaj formájában. R_f = 0,22, TLC szilikagélen, előhívás 20%-os hexános etil-acetát oldattal.

G lépés: N,N’-Bisz-[3-(metil-amino)-butil]-1,7-diamino-heptán-tetrahidroklorid

1N sósavat adunk 50 ml metanolban 3,8 g (0,0054 mól) 1,2,16,17-tetrametil-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekánhoz és a reakcióelegyet 1 éjszakán át keverjük. Ezt követően az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot kétszer átkristályosítjuk metanol/acetonitril 40/60 térfogatarányú elegyéből. így 0,74 g cím szerinti vegyületet kapunk fehér szilárd anyag formájában, melynek olvadáspontja 238-239°C. R_f = 0,31, TLC szilikagélen, előhívás 40%-os metanolos koncentrált ammónia oldattal.

» ·.

• · ι

5, példa

N,N’-Bisz-[3-(etil-amino)-butil1-1 ,7-diamino-heptán tetrahidroklorid

A lépés: 1,17-Dietil-2,16-dimetil-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekán

8,5 g (0,0126 mól) 2,16-bisz-(metil)-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekánt (előállítva az 5. példa szerint) és 1,21 g (0,03 mól) 60%-os olajos nátrium-hidrid oldatot 75 ml dimetil-formamidban összekeverünk és az elegyet addig keverjük, amíg a hidrogénfejlődés abba nem marad. Ehhez a reakcióelegyhez

4,68 g (0,03 mól) etil-jodidot adunk és 2 órán át keverjük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot etil-acetát (800 ml) és víz (200 ml) között megosztjuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk szilikagélen, eluensként 22%-os hexános etil-acetát oldatot alkalmazva. így 3,9 g cím szerinti vegyületet kapunk tiszta világos olaj formájában. R_f = 0,31, TLC szilikagélen, előhívás 20%-os hexános etil-acetát oldattal.

B lépés: N,N’-Bisz-[3-(etil-amino)-butil]-1,7-diamino-heptán-tetrahidroklorid

1N sósavat 50 ml metanolban 3,9 g (0,0054 mól) 1,17-dietil-2,16-dimetil-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekánhoz adunk és 1 éjszakán át keverjük. Ezt követően az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot kétszer átkristályosítjuk metanol/acetonitril 40/60 térfogatarányú elegyéből, így 0,90 g cím szerinti vegyületet kapunk fehér szilárd anyag formájában, melynek olvadáspontja 249-250°C. R_f = 0,56, TLC szilikagélen, előhívás 40%-os metanolos koncentrált ammónia oldattal.

6. példa

N,N’-Bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,7-heptán-diamin

A és B lépések: 1,5,13,17-tetra-aza-heptadekán tetrahidroklorid

A cím szerinti vegyületet a következő irodalomban ismertetett módszerrel állítjuk elő: Israel és társai, J. Med. Chem. 7, 710 (1964).

C lépés: 1,5,13,17-Tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekán

3,9 g (0,01 mól) 1,5,13,17-tetra-aza-heptadekán tetrahidrokloridot és 1,76 g (0,44 mól) nátrium-hidroxidot 44 ml vízben összekeverünk és addig keverjük, amíg homogén nem lesz. Ehhez a homogén oldathoz 9,6 g (0,044 mól) di-t-butil-dikarbonátot adunk 88 ml tetrahidrofuránban és 3 órán át keverjük. Az elegyet etil-acetáttal hígítjuk és a szerves fázist elkülönítjük. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk viszkózus olajig. A maradékot gyors folyadékkromatográfiával (szilikagél) tisztítjuk, eluensként 25%-os etil-acetát/hexán elegyet alkalmazva. így 3,0 g cím szerinti vegyületet kapunk. R_f = 0,20 szilikagél lemezen, előhívás 25%-os etil-acetát/hexán eleggyel.

D lépés: 3,7,15,19-Tetra-(t-butoxi-karbonil)-3,7,15,19-tetra-aza-heneikozán

3,0 g (0,0046 mól) 1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekánt és 0,45 g (0,011 mól) 50%-os olajos nátrium-hidridet 9 ml dimetil-formamidban összekeverünk és a keveréket addig keverjük, amíg a hidrogéngáz fejlődés be nem fejeződik. Ezután 0,9 ml (0,011 mól) etil-jodidot adunk hozzá és még további 18 órán át keverjük. A dimetil-formamidot vákuumban bepároljuk és a maradékot 600 ml etil-acetát és 200 ml víz között megosztjuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk (szili-kagél) eluensként 20%-os etil-acetát/hexán elegyet alkalmazva. így 1,68 g * ·· ·· ·♦ • ·»·«·* • 4 ··· 4 fl * ···· · « á · « ·« ♦ * «·« cím szerinti vegyületet kapunk. R_f = 0,5 szilikagél lemezen, eluensként 25%-os etilacetát/hexán elegyet alkalmazva.

E lépés: N,N’-Bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,7-heptán-diamin

1,68 g (0,024 mól) 3,7,15,19-tetra-(t-butoxi-karbonil)-3,7,15,19-tetra-aza-heneikozánt sósavval kezelünk 50 ml (1,0N) metanolban és 1 éjszakán át keverjük. Az elegyet szűrjük és a cím szerinti vegyületet metanol/víz 20/80 térfogatarányú elegyéből átkristályosítva 0,5 g cím szerinti vegyületet kapunk. R_f = 0,39 szilikagél lemezen, előhívás 40%-os (koncentrált) metanolos ammónia oldattal. Olvadáspont 322-323°C bomlással.

7. példa

1,18-Bisz-[(fenil)-metill-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán 4HCI

A lépés: N,N’-Bisz-[2,2’-bisz-(ciano)-etill-1,8-diamino-oktán

28,8 g (0,2 mól) 1,8-diamino-oktánt 250 ml etilalkoholban feloldunk. 27 ml (0,41 mól) akrilo-nitrilt adunk hozzá és 1 éjszakán át forraljuk visszafolyató hűtő alatt enyhén. Az oldószert ezt követően csökkentett nyomáson eltávolítjuk. Analízisünk szerint a kívánt vegyület tisztasága >95%.

B lépés: 1,5,14,18-Tetra-aza-oktadekán tetrahidroklorid

50,0 g 1. példa szerinti terméket, 10,0 g platina-oxidot, 133 ml koncentrált sósavat egy rázó lombikban összkeverünk 306,225 Pa (45 Ibs./sq.) nyomáson amíg hidrogéngáz felvétel már nem történik. A kapott elegyet szűrjük, az oldószert eltávolítjuk és a terméket 1 liter etil-alkohollal trituráljuk. A terméket szűrjük és szárítjuk, így

51,6 g cím szerinti vegyületet kapunk. R_f = 0,17 (szilikagél lemezek, 40%-os metanolos ammónia oldattal eluálva).

C lépés: 1,5,14,18-Tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán

28,0 g (0,069 mól) B lépés szerinti terméket 10,99 g (0,274 mól) nátrium-hidroxiddal kezelünk 120 ml vízben. Amikor egy homogén oldatot kapunk, 65,7 g (0,307 mól) di-t-butil-dikarbonátot adunk hozzá 750 ml tetrahidrofuránban és a kapott elegyet 16 órán át keverjük. Ezt követően elkülönítjük a fázisokat és kétszer mossuk a vizes fázist 500 ml diklór-metánnal. A szerves fázisokat egyesítjük és magnézium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és vákuumban elpárologtatjuk az oldószert, majd a maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk szilikagélen, eluensként 25%-os etil-acetát/hexán elegyet alkalmazva. így 30,2 g kívánt terméket kapunk. R_f = 0,33 szilikagél lemezen, eluens 25%-os etil-acetát/hexán elegy.

D lépés: 1,18-Bisz-[(fenil)-metil]-1,5,14,18-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán

20,0 g (0,03 mól) C lépés szerinti terméket 30 ml dimetil-formamidban feloldunk és 5,5 g (0,067 mól) kálium-t-butoxiddal (KtBuO) és 7,96 ml (0,067 mól) BnBr-rel kezeljük 18 órán tartó keverés közben. Az illékony anyagokat elpárologtatjuk (0,5 ml és 45°C) és a kapott maradékot 1400 ml etil-acetátban felvesszük és kétszer 500 ml vízzel mossuk. Ezt követően a szerves fázist magnézium-szulfát felett szárítjuk és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. Gyors folyadékkromatográfiával (szilikagél) való tisztítás után (eluensként 20%-os etil-acetát/hexán elegyet alkalmazva) 12,4 g (50%) kívánt terméket kapunk tiszta viszkózus olaj formájában. R_f = 0,42 (szilikagél lemezek, eluensként 25%-os etil-acetát/hexán elegyet alkalmazunk).

E lépés: 1,18-Bisz-[(fenil)-metil]-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán -HCI

12,4 g (0,0147 mól) D lépés szerinti terméket 14,7 ml vízmentes etilalkoholban feloldunk és 160 ml 2N sósavval kezeljük dietil-éterben 1 éjszakán át tartó keverés köz ben. Szűrjük, a filterpogácsát dietil-éterrel mossuk, majd szárítjuk, így 7,2 g kívánt vegyületet kapunk, amelynek olvadáspontja >300°C. R_f = 0,24 (szilikagélen, eluensként 10%-os koncentrált metanolos ammónia oldatot alkalmazva).

8. példa

1,20-Bisz-[(fenil)-metil]-1,16,15,20-tetra-aza-eikozán -4HCI

A lépés: N,N’-Bisz-(t-butoxi-karbonil)-1,8-oktán-diamin

10,8 g (0,075 mól) diamino-oktánt 200 ml diklór-metánban és 100 ml metanolban feloldunk és 32,5 g (0,156 mól) di-terc-butil-dikarbonátot adunk hozzá és az elegyet 1 éjszakán át keverjük. Ezt követően vákuumban bepároljuk és a maradékot hexánból átkristályosítva 20,2 g cím szerinti kívánt vegyületet kapunk, melynek olvadáspontja 96-97°C.

B lépés: 4-{[(Fenil)-metil]-amino}-bután-1-ol

8,9 g (0,1 mól) 4-amino-bután-1-olt, 10,6 g (0,1 mól) benzaldehidet, 100 ml etilalkoholt és 0,3 g platina-oxidot összekeverünk és a keveréket 306,225 Pa (45 Ibs./sq.in) nyomáson hidrogénezzük, amíg a hidrogénfelvétel abba nem marad. Ezt követően szűrjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, így 17,7 g kívánt vegyületet kapunk. R_f = 0,70 (szilikagélről eluálva 10%-os metanolos koncentrált ammónia oldattal).

C lépés: 4-{N-(t-butoxi-karbonil)-N-[(fenil)-metil1-amino}-bután-1 -ol

17,7 g (0,1 mól) B lépés szerinti butanolt és di-t-butil-dikarbonátot 100 ml diklór-metánban feloldunk és az elegyet 1 éjszakán át keverjük. Ezt követően az oldószereket vákuumban eltávolítjuk és a maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk szilikagélről eluálva 25%-os etil-acetátos hexán oldattal. így megkapjuk a kívánt vegyületet. R_f = 0,27 (szilikagél lemezek, 20%-os etil-acetátos hexánnal eluálva).

D lépés: 4-(N-(t-butoxi-karbonil)-N-[(fenil)-metill-amino}-metán-szulfonil bután

21,8 g (0,078 mól) C lépés szerint kapott vegyület, 250 ml diklórmetán és 9,7 ml (0,2 mól) piridin keverékét jeges fürdőn lehűtjük, cseppenként 20 perc alatt 6,65 ml (0,086 mól) mezil-kloridot adunk hozzá 6,6 ml diklór-metánban és hagyjuk az elegyet felmelegedni szobahőmérsékletre, 2 órán át keverve az elegyet. A kapott elegyet 200 ml diklór-metánba öntjük, 500 ml 0,5N sósavval telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal mossuk, magnézium-szulfát felett szárítjuk, vákuumban bepároljuk és gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk (eluens 25%-os etil-acetát/hexán). így 10,7 g kívánt terméket kapunk. R_f = 0,36 (szilikagél lemezek, eluálva 25%-os etil-acetát/hexán eleggyel).

E lépés: 1,20-Bisz-f(fenil)-metill-1,16,15,20-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,6,15,20-tetra-aza-eikozán

5,16 g (0,015 mól) A lépés szerinti és 10,7 g (0,032 mól) 8. példa B lépés szerinti termékeket, 3,92 g kálium-t-butoxidot, 0,12 g nátrium-jodidot és 60 ml dimetil-formamidot összekeverünk és az egészet 62 órán át keverjük szobahőmérsékleten. Az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, a maradékot 600 ml etil-acetátban felvesszük és kétszer 200 ml vízzel mossuk. A szerves fázisokat magnézium-szulfát felett szárítjuk, az oldószereket elpárologtatjuk és gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk a maradékot szilikagélen eluálva 20%-os etil-acetát/hexán eleggyel. így megkapjuk a kívánt terméket. R_f = 0,22 (szilikagél lemezek 20%-os etil-acetátos hexán eleggyel eluálva).

F lépés: 1,20-Bisz-[(fenil)-metill-1,6,15,20-tetra-eikozán 4HCI

4,7 g (0,0054 mól) E lépés szerinti terméket 5 ml etilalkoholban feloldunk és 54 ml 2N sósavval kezeljük dietil-éterben. Az elegyet 1 éjszakán át keverjük, szűrjük és az így kapott szilárd anyagot izopropanol/viz elegyben átkristályosítjuk. Lehűtjük, szűrjük

.........

és a kívánt terméket szárítás után kapjuk meg, olvadáspontja >300°C. R_f = 0,47 (szakágéiról eluálva 10%-os koncentrált metilalkoholos ammónia oldattal).

9. példa

N,N’-Bisz-(3-amino-butil)-1,8-oktán-diamin

A lépés: N,N’-Bisz-F(fenil)-metill-1,8-oktán-diamin

14,4 g (0,1 mól) 1,8-oktán-diamint, 20,3 ml (0,2 mól) benzaldehidet, 0,3 g platina-oxidot és 150 ml etanolt összekeverünk és a keveréket hidrogéngázzal keverjük 306,225 Pa (45 lb/in¹) nyomáson addig, amíg már gázfelvétel nem történik. Ezt követően a katalizátort szűréssel eltávolítjuk és az oldószert csökkentett nyomáson bepároljuk, így megkapjuk a cím szerinti vegyületet.

B lépés: N,N'-Bisz-F(3-oxo)-butilj-N,N’-bisz-F(fenil)-metil1-1 -1,8-oktán-diamin

Az A lépésben kapott terméket 1400 ml metanolban feloldjuk és 21,6 g metil-vinil-ketont vezetünk be nitrogéngáz árammal. Az elegyet 16 órán át keverjük, így megkapjuk a cím szerinti vegyületet.

C lépés: N,N’-Bisz-[(3-hidroxi-imino)-butil]-N,N’-bisz-[(fenil)-metil1-1,8-oktán-diamin

18,07 g hidroxil-amin hidrokloridot, 10,4 g nátrium-hidroxidot és 40 ml vizet öszszekeverünk és az így kapott keveréket a B lépés szerinti oldathoz adjuk. Az elegyet 3 órán át forraljuk visszafolyató hűtő alatt, ezután lehűtjük és az oldószert elpárologtatjuk. A reakcióelegyet 300 ml etil-acetátba öntjük és 300 ml vízzel mossuk. A vizes fázist kétszer mossuk 300 ml etil-acetáttal. A szerves fázisokat egyesítjük és vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk. A terméket gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk, eluensként etil-acetátot alkalmaz• · va. Ilyen módon 34,8 g cím szerinti vegyületet kapunk. R_f = 0,42, TLC szilikagélen etil-acetáttal eluálva.

D lépés: N,N'-Bisz-[(3-amino)-butil]-N,N’-bisz-[(fenil)-metill-1,8-oktán-diamin

34,8 g C lépés szerinti vegyületet 100 ml tetrahidrofuránban 12,10 g (0,310 mól) lítium-aluminium-hidridhez adunk 540 ml tetrahidrofuránban és a kapott reakcióelegyet keverés közben 1 éjszakán át forraljuk visszafolyató hűtő alatt. Ezt követően lehűtjük és lassan 15 ml vizet, majd 45 ml 1N nátrium-hidroxidot adunk hozzá és a keverést további 6 órán át folytatjuk. Ezután az elegyet leszűrjük egy fehér granulált csapadék eltávolítása céljából és az oldószert csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékból desztilláció után 17,0 g cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek forráspontja 230-235°C (0,1 Hgmm).

E lépés: N,N'-Bisz-[(3-amino)-butill-1,8-oktán-diamin

5,0 g (0,01 mól) D lépés szerinti terméket 0,5 g 20%-os csontszenes palládium-hidroxidot (Pearlman katalizátor) és 50 ml etanolt összekeverünk és a reakcióelegyet hidrogéngázzal kezeljük 306,225 Pa (45 lb/in²) nyomáson, amíg gázfelvétel már nem történik. Ezt követően a katalizátort kiszűrjük és az oldószert csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot ledesztillálva 1,59 g cím szerinti vegyületet kapunk, melynek forráspontja 145-148°C (0,012 Hgmm).

10. példa

N.N’-Bisz-O-ímetil-aminoj-butíll-l ,7-diamíno-heptán-tetrahidroklorid

A lépés: N,N’-Bisz-[(fenil)-metil]-1,7-heptán-diamin

65,0 g (0,5 mól) 1,7-diamino-heptánt, 106 g (1 mól) benzaldehidet és 2,0 g platina-oxidot 800 ml etanolban összekeverünk és a reakcióelegyet hidrogéngázzal * ········ ··· · · · ·· · • · · ···· · · *· ···. · · * · kezeljük 306,225 Pa (45 lb/in²) nyomáson, amíg gázfelvétel már nem történik. Ezt követően a katalizátort szűréssel eltávolítjuk és az oldószert vákuumban bepároljuk.

A maradékot desztillációval tisztítjuk, így 99,4 g cím szerinti vegyületet kapunk, amelynek forráspontja 191-195°C (1,0 Hgmm).

B lépés: N,N’-Bisz-[(3-oxo)-butil]-N,N’-bisz-[(fenil)-metil]-1,7-diamino-heptán

9,3 g (0,03 mól) N,N’-bisz-[(fenil)-metil]-1,7-heptán-diamint 120 ml metanolban feloldunk és keverés közben 5,6 ml (0,066 mól) metil-vinil-ketont vezetünk bele gázáramban. A reakcióelegyet 18 órán át keverjük, így megkapjuk a cím szerinti vegyületet.

C lépés: N,N’-Bisz-[(3-hidroxi-imino)-butil]-N,N’-bisz-[(fenil)-metil]-1,7-diamino-heptán

A B lépésben kapott reakcióelegyet 0°C hőmérsékletre hűtjük és ehhez az elegyhez 4,38 g (0,063 mól) hidroxil-amin hidroklorid és 5,54 g (0,066 mól) nátrium-hidrogénkarbonát 40 ml vízben készített oldatát adjuk. Az elegyet 0°C-on 30 percig keverjük, majd a keverést környezeti hőmérsékleten 2 órán át folytatjuk. Ezt követően az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot 200 ml víz és 200 mi diklór-metán között megosztjuk. A vizes fázist háromszor mossuk 200-200 ml diklór-metánnal. A szerves fázisokat egyesítjük és vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk. Ezután az oldószert vákuumban eltávolítva 14,4 g cím szerinti vegyületet kapunk. R_f = 0,53, TLC szilikagélen etil-acetáttal előhívva.

D lépés: N,N’-Bisz-[3-(amino)-butil]-N,N’-bisz-[(fenil)-metil]-1,7-diamino-heptán

14,4 g (0,03 mól) N,N’-bisz-[(3-hidroxi-imino)-butil]-N,N’-bisz-[(fenil)-metil]-1,7-diamino-heptán 70 ml tetrahidrofuránban készült oldatát 5,8 g (0,15 mól) lítium-aluminium-hidrid 250 ml tetrahidrofuránban készült keverékéhez adjuk és a reakcióelegyet 1 éjszakán át forraljuk visszafolyató hűtő alatt. Ezután lehűtjük és 5,8 ml víz, majd 5,8 ml 15%-os nátrium-hidroxid, végül 17,4 ml víz hozzáadásával lassan lefojtjuk. Az elegyet szűrjük és a szűrletet 3 x 100 ml tetrahidrofuránnal mossuk. Ezt követően a szerves fázisokat egyesítjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, így 13,4 g cím szerinti vegyületet kapunk világos tiszta viszkózus olaj formájában. R_f = 0,33, TLC szilikagélen 4%-os metanolos koncentrált ammónia oldattal eluálva.

E lépés: 2,16-Bisz-(metil)-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekán

13,4g (0,029 mól) N,N’-bisz-[3-(amino)-butil]-N,N’-bisz-[(fenil)-metil]-1,7-diamino-heptánt, 2,0 g Pearlman katalizátort és 94 ml etanolt összekeverünk és a reakcióelegyet 306,225 Pa (45 lb/in²) nyomáson hidrogéngázzal kezeljük, amíg a gázfelvétel be nem fejeződik. Ezután a katalizátort kiszűrjük és az oldószert vákuumban eltávolítva

7,7 g N,N’-bisz-[3-(amino)-butil]-1,7-diamio-heptánt kapunk (R_f = 0,37, TLC szilikagélen előhívás 40%-os metanolos koncentrált ammónia oldattal). A maradékot 90 ml diklór-metánban feloldjuk és az elegyet 26,2 g (0,12 mól) di-t-butil-dikarbonáttal kezeljük 3 órán át. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot szilikagéles gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk 25%-os hexános etil-acetát oldattal eluálva. Ilyen módon

17,1 g cím szerinti vegyületet kapunk tiszta olaj formájában. R_f = 0,35, TLC szilikagélen 25%-os hexános etil-acetát oldattal előhívva.

F lépés: 1,2,16,17-Tetrametil-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekán

8,5 g (0,0126 mól) 2,16-bisz-(metil)-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekánt és 1,21 g (0,03 mól) 60%-os olajos nátrium-hidridet 75 ml dimetil-formamidban összekeverünk és addig keverjük, amíg a hidrogénfejlődés abba nem marad. Ehhez az elegyhez 1,88 g (0,03 mól) metil-jodidot adunk és 2 órán át tovább • · ·· ·· ·· • ♦ * · ·· ·· · • · · ···· · « • ···» · · · · • · · · ·· ·♦ ··· keverjük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot 400 ml etil-acetát és

200 ml víz között megosztjuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot gyors szilikagéles folyadékkromatográfiával tisztítjuk 22%-os hexán-acetát elegyet alkalmazva eluensként. így

3,8 g cím szerinti vegyületet kapunk tiszta világos olaj formájában. R_f = 0,22, TLC szilikagélen, előhívás 205-os hexános etil-acetát oldattal.

G lépés: N,N’-Bisz-[3-(metil-amino)-butin-1,7-diamino-heptán tetrahidroklorid

1N sósavat 50 ml metanolban 3,8 g (0,0054 mól) 1,2,16,17-tetrametil-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekánhoz adunk és 1 éjszakán át keverjük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot kétszer átkristályosítjuk metanol/acetonitril 40:60 térfogatarányú elegyéből. így 0,74 g cím szerinti vegyületet kapunk fehér szilárd anyag formájában, amelynek olvadáspontja 238-239°C. R_f = 0,31, TLC szilikagélen, előhívás 40%-os metanolos koncentrált ammónia oldattal.

11. példa

N,N’-bisz-[3-(etil-amino)-butil]-1,7-diamino-heptán tetrahidroklorid

A lépés: 1,17-Dietil-2,16-dimetil-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekán

8,5 g (0,0126 mól) 2,16-bisz-(metil)-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekánt (5. példa szerint előállítva) és 1,21 g (0,03 mól) 60%.os olajos nátrium-hidridet 75 ml dimetil-formamidban összekeverünk és addig keverjük, amíg a hidrogéngáz fejlődés abba nem marad. Ehhez az elegyhez 4,68 g (0,03 mól) etil-jodidot adunk és 2 órán át keverjük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot 400 ml etil-acetát és 200 ml víz között megosztjuk. A szerves fázist vízmentes magnézium• · • · ♦ · * · ·· · • · · ···· · · • ···· · · · · *«· · ·· ·· ·«·

-szulfát felett szárítjuk és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk szilikagélen, eluensként 22%-os hexános etil-acetát oldatot alkalmazva. így 3,9 g cím szerinti vegyületet kapunk tiszta világos olaj formájában. R_f = 0,31, TLC szilikagélen, előhívás 20%-os etil-acetáttal.

B lépés: N,N'-Bisz-[3-(etil-amino)-butil1-1,7-diamino-heptán-tetrahidroklorid

1N sósavat 50 ml metanolban 3,9 g (0,0054 mól) 1,17-dietil-2,16-dimetil-1,5,13,17-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,13,17-tetra-aza-heptadekánhoz adunk és 1 éjszakán át keverjük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot kétszer átkristályosítjuk metanol/acetonitril 40:60 térfogatarányú elegyéből, így 0,90 g cím szerinti vegyületet kapunk fehér szilárd anyag formájában, melynek olvadáspontja 249-250°C. R_f = 0,56, TLC szilikagélen, előhívás 40%-os metanolos koncentrált ammóniával.

12. példa

1,4,13,16-Tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,4,13,16-tetra-aza-hexadekán

4,75 g (0,017 mól) 1,8-dibróm-oktánt, 20 ml etanolt és 9,32 ml etilén-diamint összekeverünk és 1 éjszakán át forraljuk visszafolyató hütő alatt. Lehűtjük és a reakcióelegyet 1,4 g nátrium-hidroxiddal kezeljük. Az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot 2 x 200 ml diklórmetánnal trituráljuk, majd szűrjük. A szürletet 66,6 g di-t-butil-dikarbonáttal kezeljük és 1 éjszakán át keverjük. Ezután az oldószert eltávolítjuk és a maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk, eluensként 25%-os etil-acetát/ /hexán elegyet alkalmazva, így megkapjuk a kívánt terméket. R_f = 0,64, előhívás szilikagélen 50%-os etil-acetát/hexán eleggyel.

• · · · ·· ·· • · · ···· · · • ···· ·· · · ··· · ·· ·· ··*

Az előzőekben előállított vegyületeket bisz-N-alkilezhetjük és a termékről a védőcsoportot eltávolíthatjuk a 7. példa D. és E. lépésében ismertetettek szerint, így a kívánt

R'NH(CH₂)₂N(CH₂)₈N(CH₂)NHR’ általános képletű vegyületeket, például 1,16-bisz-[(fenil)-metil]-1,4,13,16-tetra-aza-hexadekán 4HCI-t állíthatjuk elő.

13, példa

1,18-Bisz-[(2-fenil)-etil1-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán -HCI

A lépés: 1,18-bisz-{[(fenil)-metil]-karbonil}-5,14-bisz-[(fenil)-metill-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán

2,2 g (5 mmol) 5,14-bisz-[(fenil)-metil]-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán és 2 g (20 mmol) trietil-amin 100 ml kloroformban készült oldatát jeges fürdőn lehűtjük. Ezt követően 2,3 g (25 mmol) fenil-acetil-klorid 10 ml kloroformban készült oldatát adjuk hozzá cseppenként. A jeges fürdőt eltávolítjuk és az elegyet környezeti hőmérsékleten 18 órán át keverjük. A reakcióelegyet vizes nátrium-hidrogénkarbonáttal extraháljuk, a szerves fázist megszárítjuk és bepároljuk. A maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítva (szilikagél oszlop, eluens: etil-acetát), így 3 g kívánt terméket kapunk sűrű olaj formájában.

B lépés:

Az A lépés termékének 150 ml tetrahidrofuránban készült oldatát cseppenként

0,5 g lítium-aluminium-hidrid 500 ml tetrahidrofuránban készült szuszpenziójához adjuk. A reakcióelegyet 48 órán át keverjük környezeti hőmérsékleten. A redukálószer feleslegét 1 ml víz, 1 ml 15%-os nátrium-hidroxid, majd 3 ml víz cseppenkénti hozzáadásával elbontjuk. Ezután az elegyet szűrjük és a szűrletet bepároljuk. A maradékot 100 ml eta • · nolban felvesszük és vízmentes sósavgázt adunk hozzá az 1,18-bisz-[(fenil)-etil]-5,14-bisz-[(fenil)-metil]-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekánnak tetrahidroklorid sójává való átalakítása céljából. Ezt a terméket 150 ml etanolban hidrogénezzük Pearlman katalizátor jelenlétében (0,3 g) 43 Psi nyomáson egy Parr hidrogénező apparátusban 24 órán át. Ezután a katalizátort kiszűrjük és a szürletet bepároljuk. A maradékot 2-propanolból átristályosítva 1,18-bisz-[(fenil)-etil]-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán tetrahidroklorid só hemihidrátot kapunk, olvadáspontja 228-231 °C.

14. példa

1,18-Bisz-(fenil)-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán

A lépés: N-Fenil-N,N’-bisz-(t-butoxi-karbonil)-propán-diamin

200 ml vízmentes dietilétert jeges fürdőn lehűtünk és 8,74 g (0,23 mól) lítium-aluminium-hidridet adunk hozzá. Ezt követően cseppenként 30 perc alatt 14,6 g 3-anilino-propio-nitrilt adunk hozzá 50 ml dietil-éterben, majd eltávolítjuk a jeges fürdőt és a kapott reakcióelegyet 1 éjszakán át forraljuk visszafolyató hűtő alatt. Egymás után 28,7 ml vizet, 1,5 g nátrium-hidroxidot (10 ml vízben) és 25 ml vizet adunk hozzá. A kapott csapadékot kiszűrjük, 200 ml dietil-éterrel mossuk és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A kapott N-(fenil)-propán-diamint 43,6 g di-t-butil-dikarbonáttal kezeljük 600 ml diklór-metánban. 1 éjszakán át tartó keverés után az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk szilikagélen, eluensként 17%-os etil-acetát/hexán elegyet alkalmava, így megkapjuk a kívánt terméket. R_f = 0,50 (szilikagélen eluálva 25%-os etil-acetát/hexán eleggyel).

B lépés: 1,18-Bisz-(fenil)-1,5,14,18-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán

Az A lépésben kapott 13,0 g termék, 3,70 g dijód-oktán és 4,17 g kálium-t-butoxid 200 ml dimetil-formamidban készült keverékét 16 órán át keverjük. Ezután az oldószert 0,5 mm-en 45°C hőmérékleten bepároljuk, a maradékot 800 ml etil-acetátban felveszszük. Kétszer mossuk 300 ml vízzel, magnézium-szulfát felett szárítjuk és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. Az így kapott viszkózus olajat gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk 15%-os etil-acetáttal eluálva. így 5,7 g kívánt terméket kapunk. R_f - 0,36 (szilikagélröl eluálva etil-acetát/hexán eleggyel. Az N-Boc védőcsoportokat a 7. példa E lépésében ismertette! eljárással távolítjuk el, így megkapjuk a cím szerinti vegyületet hidroklorid sója formájában. Olvadáspont 264-267°C.

15. példa

1,18-Bisz-(2,3-butadienil)-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán tetrahidroklorid

A lépés: N-(t-Butoxi-karbonil)-proparqil-amin g propargil-amint 25 ml diklór-metánban cseppenként hozzáadunk 99,18 g di-t-butil-dikarbonát 900 ml diklór-metánban készült elegyéhez keverés közben. 2 óra elteltével az oldószert vákuumban eltávolítjuk, így 70 g kívánt N-védett propargil-amint kapunk.

B lépés: N-(t-Butoxi-karbonil)-2,3-butadienil-amin g N-(t-butoxi-karbonil)-propargil-amint, 93,5 ml 32%-os formaldehidet, 76,4 ml diizopropil-amint, 19,66 g réz-bromidot és 860 ml p-dioxánt tartalmazó keveréket 12 órán át forralunk visszafolyató hűtő alatt. Ezután lehűtjük és a kapott elegyet 3000 ml ··· ···· · · • ··· · · β · ··· · ·· ·· ··« dietil-éterrel meghigítjuk, 500 ml vízzel, 1000 ml ecetsavval, 2 x 500 ml vízzel, majd

200 ml telített nátrium-klorid oldattal mossuk, magnézium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk, szilikagélről eluálva 10%-os dietil-éter/hexán eleggyel. így 40,8 g kívánt terméket kapunk. R_f = 0,31 (szilikagélről eluálva etil-acetát/hexán eleggyel).

C lépés: N,N-Bisz-[(fenil)-metill-1,8-diamino-oktán

14.4 g diamino-oktánt, 20,3 ml benzaldehidet és 0,66 g platina-oxidot 100 ml etanolban összekeverünk. A kapott reakcióelegyet hidrogéngázzal kezeljük 306,225 Pa (45 lbs./in²) nyomáson, amíg hidrogénfelvétel már nem történik. Ezt követően szűrjük, az oldószert vákuumban bepároljuk és a kapott anyagot ledesztillálva 25,5 g kívánt terméket kapunk, melynek forráspontja 185-190°C (0,1 Hgmm).

D lépés: 1,18-Bisz-(hidroxi)-5,14-bisz-[(fenil)-metill-5,14-diaza-oktadekán

25.5 g C lépés szerinti terméket 13,2 ml 3-klór-1 -hidroxi-propánt, 50,4 g nátrium-karbonátot és 1,19 g nátrium-jodidot 40 ml n-butanolban tartalmazó keveréket 18 órán át forralunk visszafolyató hűtő alatt. Ezután lehűtjük és 700 ml etil-acetátba öntjük, vízzel mossuk, magnézium-szulfát felett szárítjuk és az oldószert vákuumban eltávolítva egy maradékot kapunk, amelyből desztilláló után 30,0 g kívánt terméket kapunk, melynek forráspontja 250-252°C (0,1 Hgmm).

E lépés: 1,18-Bisz-(hidroxi)-5,14-diaza-oktadekán

3,0 g D lépés szerinti vegyületet, 30 ml ecetsavat és 0,6 g palládium-oxidot tartalmazó keveréket 306,225 Pa (45 lbs./in²) nyomáson hidrogénezünk, amig már további hidrogén gázfelvétel nem történik. Ezt követően szűrjük és az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, így 1,77 g kívánt terméket kapunk. R_f = 0,37 (szilikagélről eluálva 10%-os metilalkoholos koncentrált ammónia oldattal.) • · · »»t · · • ···· ·· t ·

..........

F lépés: 1,18-Bisz-(hidroxi)-5,14-bisz-(t-butoxi-karbonil)-5,14-diaza-oktadekán

1,77 g E lépés szerinti terméket, 2,97 g (0,0136 mól) di-t-butil-dikarbonátot, 3 ml trietil-amint és 50 ml diklór-metánt tartalmazó keveréket 1 éjszakán át keverünk. Ezután 200 ml diklór-metánnal meghigítjuk, 200 ml 0,5N sósavval, majd 100 ml telített nátrium-klorid oldattal mossuk, magnézium-szulfát felett szárítjuk és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk szilikagélröl eluálva 75%-os etil-acetáttal, így megkapjuk a kívánt terméket. R_f = 0,29 (szilikagélröl eluálva 75%-os etil-acetát/hexán eleggyel).

G lépés: 1 .IS-Bisz-fmetán-szulfoniD-ö.M-bisz-ft-butoxi-karboniD-S^-diaza-oktadekán

3,0 g F lépés szerinti terméket, 3,3 ml trietil-amint és 70 ml diklór-metánt tartalmazó keveréket lehűtünk. Cseppenként 1,22 ml mezil-kloridot adunk hozzá 10 ml diklór-metánban és a kapott elegyet 0°C-on 1,5 órán át keverjük. Ezután 100 ml diklór-metánba öntjük, 200 ml 1N AcOH-val mossuk, majd a mosást 100 ml vízzel, 100 ml telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal folytatjuk és magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk, szilikagélröl eluálva 60% etil-acetát/hexán eleggyel. így 3,5 g kívánt terméket kapunk. R_f - 0,39.

H lépés: 1,18-Bisz-(2,3-butadienil)-1,5,14,18-tetra-(t-butoxi-karbonil)-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán

3,5 g G lépés szerinti terméket, 1,74 g nátrium-jodidot, 0,51 g hexánnal mosott nátrium-hidridet (60%-os olajos szuszpenzió) 12 ml dimetil-formamidban összekeverünk

2,16 g B lépés szerinti N-(t-butoxi-karbonil)-2,3-butándienil-aminnal és a kapott reakcióelegyet 2 órán át állni hagyjuk. Ezt követően az oldószert vákuumban eltávolítjuk, 350 • · ·· ·· ·· • · · · · <» ·· ♦ • · · ··* · · · • ···· « · · * ♦·· ♦ ·· ·· «·« ml etil-acetátot adunk a maradékhoz, 4 x 50 ml vízzel, 100 ml telített nátrium-klorid oldattal mossuk, végül magnézium-szulfát felett szárítjuk. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot gyors folyadékkromatográfiával tisztítjuk szilikagélröl eluálva 30%os etil-acetát/hexán eleggyel. így 0,5 g kívánt terméket kapunk viszkózus olaj formájában. R_f = 0,39 (szilikagélröl eluálva 25%-os etil-acetát/hexán eleggyel).

I lépés: 1,18-Bisz-(2,3-butadienil)-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán-4HCI

0,5 g H lépés szerinti terméket 2 ml etilalkoholban feloldunk és keverés közben ml trietil-éteres 2N sósavval kezeljük. A kapott reakcióelegyet 1 éjszakán át keverjük, majd szűrjük és a kapott szilárd anyagot vákuumban szárítjuk, így 0,22 g kívánt terméket kapunk, melynek olvadáspontja 283-284°C (bomlás).

16. példa

N,N’-Bisz-f3-(etil-amino)-propin-1,7-heptán-diamin tetrahidroklorid (MDL 28314QA)

A lépés: 1,7-Bisz-(hexahidro-pirimidin-1-il)-heptán (MDL 102533)

10,0 g (25,6 mmol) N,N’-bisz-(3-amino-propil)-1,7-heptán-diamin (MDL 26752QA)

103 ml (4 ekv.) 1N nátrium-hidroxidban készült oldatát jeges vizes fürdőn 5°C-ra hütjük és 3,8 ml 37 tömeg%-os (50,8 mmol) vizes formaldehidet adunk hozzá egy részletben. Az oldatot 1 órán át keverjük 0-5°C-on, majd szobahőmésékleten 1 órán át folytatjuk a keverést. A reakcióelegyet 3 x 100 ml diklór-metánnal extraháljuk. Az extraktumokat egyesítjük, kálium-karbonát felett szárítjuk és bepárolva 6,9 g (100%) MDL 102533 jelű vegyületet kapunk világossárga szilárd anyag formájában. Ezt az anyagot további tisztítás nélkül használjuk tovább. Egy mintányi mennyiséget gyors folyadékkromatográfiá«· · val tisztítunk az A eluens segítségével, így analitikailag tiszta MDL 102533 jelű vegyületet kapunk fehér, szilárd anyag formájában, melynek olvadáspontja 52-55°C. TLC (B eluens) R_f = 0,46 ¹H NMR (CDCI₃) δ 1,3 (m, 6), 1,46 (br pentet, 4), 1,61 (pentet, 4, J=5,5 Hz), 1,7 (br s, 2, NH), 2,21 (dd, 4, J=7,6, 8,6 Hz), 2,56 (br t, 4, J=4,8 Hz), 2,81 (t, 4, J=5,5 Hz), 3,37 (s,

4);

¹³C NMR (CDCI3) δ 26,79, 27,05, 27,58, 29,39, 45,07, 53,12, 55,66, 69,84; MS (CI/CH4), m/z (rel. intenzitás) 270(2), 269(100), 97(18), 83(19), 79(14). Elemanalízis eredmények a C₁₅H₃₂N4 (268.45) összegképletre: számított: C, 67,11; H, 12,02; N, 20,87;

talált: C, 66,65; H, 12,85; N, 20,69%.

B lépés: 1,7-Bisz-(3-acetil-hexahidro-pirimidin-1-il)-heptán (MDL 44868)

5,0 g (18,7 mmol) nyers bisz-(hexahidro-pirimidin) MDL 102533 40 ml etil-acetátban készült oldatához keverés közben 7,6 g (75 mmol) trietil-amint és 7,6 g (75 mmol) ecetsavanhidridet adunk és a reakcióelegyet visszafolyató hűtő alatt 8 órán át forraljuk nitrogéngáz atmoszférában. A reakcióelegyet lehűtjük és bepároljuk (50°C/10 mm). A koncentrátumot 75 ml dijód-metán és 40 ml 1N nátrium-hidroxid között megosztjuk, a fázisokat elkülönítjük és a vizes fázist extraháljuk 2 x 75 ml dijód-metánnal. A dijód-metános fázisokat egyesítjük, kálium-karbonát fölött szárítjuk és koncentrálva 7,2 g (110%) nyers MDL 44868-at kapunk narancsszínű olaj formájában. Ezt az anyagot további tisztítás nélkül használjuk tovább. Egy mintányi mennyiséget gyors folyadékkromatográfiával tisztítva C eluens segítségével analitikailag tiszta MDL 44868 jelű vegyületet kapunk színtelen olaj formájában.

TLC (C eluens), R_f = 0,35 • * · « · ·> A • · ·«! « « # · · • *’ ·» ··· ¹H NMR⁵ (CDCI₃) δ 1,3 (m, 6), 1,5 (m, 4), 1,63/1,70 (átlapolás, komplex pentetek, 4, J=5,6/5,6 Hz), 2,09/2,11 (s, 6), 2,4 (m, 4), 2,72/2,73 (két átlapolás t, 4, J=6,3/6,3 Hz), 3,48/3,60 (t, 4, J=5,6/5,6 Hz), 4,04/4,23 (s, 4);

¹³H NMR (CDCI3) δ 20,99, 21,12, 23,00, 23,06, 23,40, 26,99, 27,21,29,16, 41,45,

45,96, 51,71,51,82, 52,21,53,37, 53,46, 62,46, 62,54, 67,78;

MS (CI/CH4) m/z (rel. intenzitás) 381(21), 354(28), 353(100), 351(10). Elemanalízis eredmények a C₁₉H3₆N₄O2 (352,52) összegképletre: számított: C, 64,74; H, 10,29; N, 15,89;

talált: C, 63,13; H, 10,59; N, 15,52%.

C lépés: 1,7-Bisz-(3-etil-hexahidro-pirimidin-1-il)-heptán (MDL 45692)

2,0 g (5,7 mmol) nyers bisz-(acetil-hexahidro-pirimidin) MDL 44868 40 ml vízmentes tetrahidrofuránban készült oldatát 0,85 g (22,7 mmol) lítium-aluminium-hidrid 60 ml vízmentes tetrahidrofuránban készült kevert szuszpenziójához adjuk nitrogén atmoszférában. A reakcióelegyet visszafolytó hűtő alatt 16 órán át forraljuk, majd hagyjuk lehűlni szobahőmérsékletre. A reakcióelegyet erőteljesen keverjük, majd 5 ml telített vizes nátrium-szulfát oldat hozzáadásával szobahőmérsékleten lefojtjuk. 16 órán át keverjük a reakcióelegyet a teljes lefojtás végrehajtása céljából. Ezt követően a reakcióelegyet celiten szűrjük és a szürőpogácsát 3 x 10 ml tetrahidrofuránban mossuk. A szűrletet és a mosó oldatokat egyesítjük és bepároljuk, a maradékot 50 ml metil-cianidban (CH₃CN) feloldjuk és újra bepároljuk, így 1,69 g (87%) nyers MDL 45692 jelű vegyületet kapunk sárga olaj formájában. Ezt az anyagot tisztítás nélkül használjuk tovább. Egy mintányi mennyiséget gyors folyadékkromatográfiával tisztítunk D eluens segítségével, így analitikailag tiszta MDL 45692 vegyületet kapunk világossárga anyag formájában.

• · ·« «· ··· ···«·· 9 9 9 ··» 9 99 • ···· 9 9 99 ··· · ·· 99999

MLC (D eluens); R_f = 0,56 ¹H NMR(CDCI₃) δ 1,07 (t, 6, J=7,2 Hz), 1,3 (m, 6), 1,46 (br pentet, 4, J=6,3 Hz), 1,67 (pentet, 4, J=7,2 Hz), 2,4-2,5 (m, 8), 3,08 (br s, 4);

¹³C NMR (CDCI₃) δ 12,23, 23,67, 27,10, 27,42, 29,39, 49,00, 52,03, 52,44, 55,38,

76,13;

MS (CI/CH₄) m/z (rel. intenzitás) 353(16), 326(22), 325(100), 324(57), 323(94). Elemanalízis eredmények a C₁₉H₄₀N₄ (324.56) összegképletre: számított: C, 70,31; H, 12,42; N, 17,26;

talált: C, 69,50; H ,12,75; N, 16,70%.

D lépés: N,N’-Bisz-[3-(etil-amino)-propin-1,7-heptán-diamin tetrahidroklorid (MDL 28314QA)

0,50 g (1,5 mmol) nyers bisz-(etil-hexahidro-pirimidin) MDL 45692 20 ml metilalkoholban készült kevert oldatához 5 ml koncentrált sósavat adunk egy részletben. A reakcióelegyet visszafolyató hűtő alatt 3 órán át forraljuk nitrogén csapdát alkalmazva a formaldehid/metil-alkohol desztillátum eltávolítása céljából (MDL 28314QA csapódik ki a reakcióelegyböl rövid idővel a melegítés megkezdése után). A reakciótérfogat veszteségét periodikusan az eredeti szintre állítjuk be metilalkohol hozzáadásával. Ezután a reakcióelegyet hagyjuk lehűlni szobahőmérsékletre, majd szűrjük. A szilárd anyagot 2 x 5 ml metilalkohollal mossuk és levegőn szárítjuk, így 0,40 g (58%) MDL 28314QA vegyületet kapunk fehéres szilárd anyag formájában. 0,8 ml vízből és 2,9 ml i-propanolból való átkristályosítással 0,32 g (80%-os kinyerés) nyers MDL 28314QA vegyületet kapunk fehér szilárd anyag formájában, melynek olvadáspontja 313°C bomlással.

_w *···»···· ·····<··· • · · ··· V · · • ···· · · · ··· « <· ·« ···

TLC (E eluens); R_f = 0,39.

¹H NMR (D₂O) δ 1,30 (t, 6, J=7,3 Hz), 1,4 (m, 6), 1,70 (br pentet, 4, J=7,3 Hz), 2,1 (m,

4), 3,1 (m, 4), 3,13 (q, 4, J=7,3 Hz), 3,15 (m, 8);

¹³C NMR (D₂O) δ 13,30, 25,50, 28,21,28,25, 30,48, 45,87, 46,71,47,17, 50,61;

MS (CI/CH₄) m/z (rel. intenzitás) 329(17), 302(21), 301(100), 300(22), 299(30), 197(8), 159(6), 75(10).

Elemanalízis eredmények a C₁₇H4₀N₄-4HCI (446.38) összegképletre:

számított: C, 45,74; H, 9,94; N, 12,55; Cl, 31,77;

talált: C, 45,49; H, 10,48; N, 12,33; Cl, 31,20%.

17. példa

1,6,14,19-Tetra-aza-nonadekán tetrahidrobromid

A lépés: N-t-butiloxi-karbonil-N-4-klór-butil-p-toluol-szulfonamid

17,4 g (0,1 mól) DEAD 20 ml tetrahidrofuránban készült oldatát cseppenként

27,1 g (0,01 mól) 25 jelű vegyület, 26,2 g (0,1 mól) trifenil-foszfin és 10,8 g (0,1 mól)

4-klór-1-butanol (a HCI eltávolítása céljából desztillálva) 600 ml THF-ban készült oldatához adjuk. 4 órán át környezeti hőmérsékleten tartjuk a reakcióelegyet, majd bepároljuk és a maradékot toluollal kromatografálva 29,4 g (81%) terméket kapunk olaj formájában.

IR (film) 2980, 1728, 1456, 1394, 1356, 1292, 1256, 1186, 1156, 1088, 1000, 814, 772, 722, 674, 598, 576 és 546 cm'¹;

NMR (CDCI3) 1,35 (s, 9H), 1,8-2,0 (m, 4H), 2,45 (s, 3H), 3,6 (t, J=7,5 Hz, 2H), 3,86 (t, J=7,5 Hz, 2H), 7,33 (N=7,5 Hz) és 7,78 (d, J=7,5 Hz, 2H);

MS (CI/CH4) 362 (Μ + H).

··· ·····« a ·· ·«·· · · • ···· · · * · .·· · ·· -· <i ·

Elemanalízis eredmények a C₁₆H₂₄CINO₄S 1/8 toluol összegképletre: számított: C, 54,28; H, 6,75; N, 3,75;

talál: C, 54,39; H, 694; N, 3,70%.

B lépés: 1,7-bisz-p-tulol-szulfonamido-heptán

600 ml diklór-metán, 600 ml vizes nátrium-hidrogénkarbonát és 25 g (0,19 mól)

1,7-diamino-heptán keverékéhez keverés közben 109 g (0,57 mól) para-toluol-szulfonil-kloridot adunk részletenként 1 óra alatt. A fázisokat elkülönítjük, a szerves fázist 1N sósavval extraháljuk és bepároljuk. A maradékot toluollal trituráljuk, így 58 g (70%) terméket kapunk fehér szilárd anyag formájában.

IR (KBr) 3256, 2942, 2864, 1430, 1328, 1306, 1160, 1095, 1078, 808, 706, 668, 578, 552 és 522 cm'¹;

NMR (DMSO-d₆) 1,1-1,2 (m, 6H), 1,25-1,3 (m, 4H), 2,4 (s, 6H), 2,6-2,7 (m, 4H), 7,37 (d, J=7,5 Hz, 4H), 7,45 (t, J=7,5 Hz, 2H) és 7,75 (d, J=7,5 Hz, 4H);

MS (CI/CH4) 439 (Μ + H).

Elemanalízis eredmények a C₂₁H₃₀N₂O₄S₂ összegképletre: számított: C, 57,50; H, 6,89; N, 6,39;

talált: C, 57,87; H, 7,13; N, 6,20%.

C lépés: 1,6,14,19-Tetra-aza-1,19-bisz-t-butiloxi-karbonil-1,6,14,19-tetra-p-toluol-szulfonil-nonadekán

0,8 g (16,8 mmol 50%-os ásványolajos szuszpenzió) nátrium-hidridet adunk részletekben 3 g (8,4 mmol) 27 jelű vegyület 300 ml dimetil-formamidban készült oldatához és az elegyet 1 órán át keverjük környezeti hőmérsékleten. Ezt követően 0,1 g nátrium-jodidot és 5,2 g (16,8 mmol) 26 jelű vegyület 50 ml dimetil-formamidban készült oldatát adjuk hozzá és az elegyet 55°C-on 18 órán át leforraljuk. Ezt követően a reakcióelegyet • ·

lehűtjük, 10 ml metanolt adunk hozzá az elreagálatlan nátrium-hidrid elbontása céljából és szárazra pároljuk. Ezt követően 300 ml diklór-metánt, 300 ml vizet adunk hozzá, a szerves fázist elkülönítjük, bepároljuk és szárítjuk. Kromatográfiával (toluol/etil-acetát 6/1) 6,4 g (55%) terméket kapunk sűrű olaj formájában.

IR (film) 2980, 2934, 1726, 1458, 1394, 1348, 1306, 1286, 1258, 1186, 1156, 1090, 1006, 814, 756, 722, 674, 654, 598, 576 és 548 cm'¹;

NMR (CDCI₃) 1,25 (s, 6H), 1,32 (s, 18H), 1,42-1,153 (m, 4H), 1,55-1,65 (m, 4H), 1,7-1,8 (m, 4H), 2,55 és 2,56 (s, 12H-val együtt), 3,02-3,18 (m, 8H), 4,82 (t, J=7,5 Hz, 4H), 7,25-7,35 (m, 8H), 7,68 (d, J=7,5 Hz, 4H) és 7,77 (d, J=7,5 Hz, 4H);

MS (FAB) 1089 (M+).

Elemanalízis eredmények a C₅3H₇₆N4O₁₂S4 összegképletre: számított: C, 58,42; H, 7,03; N, 5,14;

talált: C, 60,50; H, 7,25; N, 5,08%.

D lépés: 1,6,14,19-Tetra-aza-1,6,14,19-tetra-p-toluol-szulfonil-nonadekán g (18 mmol) 28 jelű vegyület, 500 ml diklór-metán és 20 ml TFA elegyében készült oldatát 1 éjszakán át keverjük környezeti hőmérsékleten. Ezt követően az elegyet bepároljuk, 400 ml toluolt adunk hozzá és a reakcióelegyet szárazra pároljuk. A maradékot kromatográfiával tisztítva (toluol/etil-acetát 3/1) 14,3 g (89%) terméket kapunk olaj formájában.

IR (film) 3286, 2936, 2864, 1598, 1454, 1426, 1330, 1306, 1290, 1268, 1158, 1092, 1040, 816, 736, 704, 656, 570 és 550 cm’¹;

NMR (CDCI₃) 1,25 (s, 6H), 1,45-1,6 (m, 12H), 2,42 (s, 12H), 2,86-2,95 (m, 4H), 3,0-3,1 (m, 8H), 4,88 (t, J=7,5 Hz, 2H), 7,15-7,3 (m, 8H), 7,43 (d, J=7,5 Hz, 4H) és 7,72 (d, J=7,5 Hz, 4H);

• ·· ·

MS (CI/CH4) 889 (Μ + Η).

Elemanalízis eredmények a C₄₃H₆₀N₄O₈S₄ 3/4 toluol összegképletre: számított: C, 60,38; H, 7,15; N, 5,70;

talált: C, 60,48; H, 7,17; N, 5,57%.

E lépés: 1,6,14,19-Tetra-aza-nonadekán tetrahidrobromid

12,2 g (13,7 mmol) 29 jelű vegyület 500 ml 48%-os vizes hidrogén-bromidban készült oldatát 100°C-ra melegítjük olajfürdön 24 órán át, majd lehűtjük és szárazra pároljuk. A maradékot etanol/víz elegyböl átkristályosítjuk, így 5,2 g (63%) terméket kapunk fehér szilárd anyag formájában, melynek olvadáspontja 303°C.

IR (KBr) 2952, 2874 és 2810 cm’¹;

NMR (D₂O) 1,4 (s, 6H), 1,6-1,85 (m, 12H) és 3,0-3,1 (m, 12H);

MS (CI/CH4) 273 (Μ + H).

Elemanalízis eredmények a C₁₅H₃₆N₄ · 4HBr összegképletre;

számított C, 30,22; H, 6,76; N, 9,40;

talált: C, 30,60; H, 6,90; N, 9,09%.

Az alább következő farmakológiai példákban szereplő vizsgált vegyületek jelei és kémiai képletei:

MLD 19,190 = NH=C(CH2)-N=C(CH3)-CH=N-NH-C(NH2)=NH

2,2’-( 1 -metil-1,2-etán-diilidén)-bisz-[hidrazin-karboximid-amid], [metil-gIioxál bisz-(guanil-hidrazon)]

MDL 27,393 =CH3CH2-NH-(CH2)3-NH-(CH2)8-NH-(CH2)3-NH-CH2CH3 N,N’-Bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,8-oktán-diamin

MDL 27,616 = ΦΟΗ2-ΝΗ-(ΟΗ2)3-ΝΗ-(ΟΗ2)3-ΝΗ-ΟΗ2Φ

N-(fenil-metil)-N'-[3-[(fenil-metil-amino)-propil]-1,3-propán-diamin

MDL 27,695 = OCH2-NH-(CH2)3-NH-(CH2)7-NH-(CH2)3-NH-CH20>

1,18-B isz-[(fenil)-metilj-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán

MDL 28,314 = CH3CH2-NH-(CH2)3-NH-(CH2)7-NH-(CH2)3-NH-CH2CH3 N,N-Bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,7-heptán-diamin

MDL 28,454 = CH3CH2CH2-NH-(CH2)3-NH-(CH2)7-NH-(CH2)3-NH-CH2CH2CH N,N-bisz-[3-(propil-amino)-propil]-1,7-diamino-heptán gaciclovir = 9-[(2-hidroxi-1-hidroxi-metil-etoxi)-metil]-guanin

18. példa: vírusellenes hatás

A találmány szerinti poliamin analógok vírusellenes hatását Tyms és társai (J.

Antimicrobial Chemotherapy 8, 65-72, (1981) standard plakk redukciós módszerével vizsgáltuk. Humán embrió fibroblaszt monorétegeket (MRC-5 törzs) készítettünk, adott esetben különböző koncentrációjú vizsgálandó vegyület jelenlétében és AD169 vagy Towne CMV törzzsel fertőztük őket (100 pfu/10⁵ sejt), adott esetben a vizsgálni kívánt vegyület jelenlétében, és 10 napon át inkubáltuk 37°C-on, adott esetben a vizsgált vegyület jelenlétében. Fertőzés utáni inkubálás céljára a sejt monorétegeket fenntartó közegre (Eagles MÉM, 2% borjú magzati láb szérum) rétegeztük, amely 0,5% agarózt tartalmazott, majd fixáltuk és a megfelelő időben (7-10 nappal a fertőzés után) metilénkékkel megfestettük. A kezeletlen kontrolokkal összehasonlítva a plakk képzédés %-os csökkenéséből felvettünk egy dózis-válasz görbét és meghatároztuk az 50%-os gátlókoncentrációt (IC₅₀). Az A táblázatban a különböző poliamin analógokra vonatkozó IC₅₀ értékek tartománya látható. Az MDL 27,393 jelű előnyös hatású vegyület egyenletesen • · · · · · · • ······ • · ···· · · ···« ·· * · • · ·· · · ··· körülbelül 10 pmol/liter IC₅₀ értékeket mutat ha a sejteket a fertőzés előtt is kezeljük a vizsgálni kívánt vegyülettel. Ezeket a paramétereket alkalmazva az MDL 27,393 jelű vegyületre vonatkozó IC₅₀ értékek körülbelül 100,000-rel alacsonyabbak, mint a CMV fertőzések esetében használt jelenlegi terápiás szerek, a ganciclovir és foscovir ilyen értékei (B táblázat).

Hasonló paraméterekkel, HSV 1 típusú vírussal (17i törzs) fertőzött MRC-5 sejteket alkalmazva (C táblázat), de három napos fertőzés utáni inkubációs periódussal, az MDL 27,393 jelű vegyület ID₅₀ értékei (C1 táblázat) és az MDL 28,314 jelű vegyület IC₅₀ értékei (C2 táblázat) 1-10 pmol/l között vannak az elő-utó kezelési módszerrel. Ha csak fertőzés utáni kezelést alkalmaztunk, semmi víruselleni aktivitás nem volt megfigyelhető az MRC-5 sejtekben még 100 μΜ-os koncentráció esetén sem. Verő sejteknél (majom eredetű) a fertőzés előtti/utáni vagy csak fertőzés utáni MDL 27,393 jelű vegyülettel való kezelés (< 100 μΜ) nem gátolta a HSV-1 (17i törzs) vírusok szaporodását. Ez azt bizonyítja, hogy a találmány szerinti vegyületek aktivitása a CMV vírussal kapcsolatos sejtes vagy vírus specifikus jelenségekhez kapcsolódik és nem a HSV replikációhoz.

A természetben előforduló poliaminok, így a putrescine, spermidine vagy spermine a fenti körülmények között fertőzött sejteken vizsgálva (10 μΜ mol/liter koncentrációknál nem gátolják a CMV szaporodást.

Hasonló kísérleteket hajtottunk végre ugyanolyan előkezelési módszerrel, mint a fenti, de többszörös fertőzéssel (körülbelül 10⁵/pfu/10⁵ sejt): monorétegeket agaróz nélkül tartottunk a fenntartó közegben. Az utód vírus képződést és a „késői” virális proteinek szintézisét Tyms és társai módszerével [J. Gén. Virol, 68, 1563-1573, (1987)] mértük. A legelőnyösebb vegyület, az MDL 27,393 jelű 1 nmol/l koncentrációnál 90%ban, 10 nmol/l koncentrációnál 95%-ban gátolja a vírus szaporodást. A három fő „késői

virális protein: a fő capsid protein (153KD) tegument protein (69KD) és a DMS-kötő protein (51KD) szintézisének megfelelő csökkenése mellett.

19. példa: citotoxicitás

MRC-5 sejteket leoltottunk kis sűrűségben, adott esetben az MDL 27,393 vagy

MDL 28,314 jelű vegyület jelenlétében és a sejtszámot 5 napos utó-oltáskor határoztuk meg. Az eredmények azt mutatják, hogy ezeknek a sejteknek a szaporodását a vegyületek 0,5 pmol/liter vagy ennél kisebb koncentrációknál nem gátolták, bár a monorétegek egyesülésének ideje hosszabb volt, összehasonlítva a kezeletlen kontroloknál 1 és 5 pmol/liter koncentrációk között kapott eredményekkel (adatok nincsenek).

Az előzőekben bemutatott eredmények alapján az előnyös MDL 27,393 jelű vegyület terápiás képe 10,000-nél nagyobb.

A táblázat

Természetes poliaminok vírusellenes hatása CMV fertőzés esetén

Ref: PA219

Konc. μΜ	Spermine	Átlag % VC	Spermidine	Átlag % VC	DHPG	Átlag % VC
100	45, 52, 0	47%	99,91	93%	0, 0	0%
10	106, 107, 0	100%	99,92	96%	10, 17	12%
1	-As VC -	100%	-As VC -	100%	68, 67	57%
0.1	-As VC -	100%	- As VC -	100%	106, 95	91%
0.01	- As VC -	100%	-As VC -	100%	- As VC-	100%
VC	103, 99, 105	100%	103, 99, 105	100%	106, 129, 99	100%
Plakk redukciós vizsgálal	- Towne törzs szaporodás MRC-5 sej	tekben

Vegyület

B táblázat

Poliamin analógok vírusellenes hatása CMV fertőzés esetén

IC₅₀ értékek

Előtt/után

Csak után

MDL 27,393	(0.1nM	<100nM
MDL 28,314	10nM	100nM
MDL 27,484	<1nM	100nM
MDL 29,587	(100nM	1μΜ
MDL 27,666	1nM	<1μΜ
MDL 27,667	10nM	>1μΜ
MDL 27,394	<10nM	<1μΜ
Ganciclovir	1μΜ	(10μΜ

Plakk redukciós vizsgálat - Towne törzs szaporodás MRC-5 sejtekben

C táblázat

Poliamin analógok hatása HSV II típusú fertőzés esetén

Ref: PA 241

MDL 27,393: C1 táblázat

Konc. μΜ	Előtt/után	Átlag % VC	Után	Átlag % VC
100	0, 0,0	0%	68, 71,71	77%
10	16, 17, 20	19%	91,90,92	100%
1	30, 27, 30	32%	As VC	100%
0,1	49, 50, 61	59%	As VC	100%
1x10'z	75, 71, 60	76%	As VC	100%
1x13^	81, 63, 70	78%	As VC	100%
1x10'4	65, 80, 80	81%	As VC	100%
VC	95,87,91	100%	90, 89, 92	100%

MDL 28,314: C2 táblázat

Konc. μΜ	Előtt/után	Átlag % VC	Után	Átlag % VC
100	0, 0,0	0%	90, 76, 82	81%
10	24, 20, 15*	22%	As VC	100%
1	58, 65, 51	64%	As VC	100%
0,1	63, 65, 59	69%	As VC	100%
1x10’z	78, 71,60	77%	As VC	100%
1x13’J	-As VC -	100%	As VC	100%
1x10'4	-As VC -	100%	As VC	100%
VC	87,97, 89	100%	103, 99, 105	100%

Claims (30)

1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK

   1. Az (I) általános képletű vegyületek - ahol Z-j jelentése 2-6 szénatomos elágazó láncú alkiléncsoport; m jelentése egész szám, melynek értéke 7 vagy 8; az R csoportok jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomos telített vagy telítetlen szénhidrogén gyök vagy -(CH₂)_x-(Ar)-X általános képletü csoport, ahol Árjelentése fenilvagy naftilcsoport, X jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkoxi- vagy halogénezett-(1-4 szénatomos alkil)-csoport, x jelentése egész szám, melynek értéke 0, 1 vagy 2; azzal a feltétellel, hogy az R csoportok jelentése egyidejűleg hidrogénatom nem lehet vagy ha m = 8, R jelentése benzilcsoporttól eltérő - vagy gyógyászatilag alkalmazható sóik alkalmazása citomegalovírus fertőzés gátlására szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
2. 2. Az 1. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, ahol a hatóanyagként alkalmazott vegyület N,N’-bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,8-oktán-diamin.
3. 3. Az 1. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, ahol a hatóanyagként alkalmazott vegyület 1,18-bisz-[(fenil)-metil]-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán.
4. 4. A 6. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, ahol a hatóanyagként alkalmazott vegyület N,N’-bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,7-heptán-diamin.
5. 5. A 6. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, ahol a hatóanyagként alkalmazott vegyület N,N’-bisz-[3-(propil-amino)-propil]-1,7-diamino-heptán.
6. 6. Az (I) általános képletü vegyületek - ahol Z_y jelentése 2-6 szénatomos telített alkiléncsoport; m jelentése egész szám, melynek értéke 7 vagy 8; az R csoportok jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomos telített vagy telítetlen szénhidrogén gyök vagy -(CH₂)_x-(Ar)-X általános képletü csoport, ahol Árjelentése fenil• · ··*··«··· • ·· ·««· · · « ··♦♦ « · · · ··« β *· ·♦ ··· vagy naftilcsoport, X jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkoxi- vagy halogénezett-(1-4 szénatomos alkil)-csoport, x jelentése egész szám, melynek értéke 0, 1 vagy 2; azzal a feltétellel, hogy az R csoportok jelentése egyidejűleg hidrogénatom nem lehet vagy ha m = 8, R jelentése benzilcsoporttól eltérő - vagy gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós sóik alkalmazása CMV fertőzés okozta betegségben szenvedő páciensek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.
7. 7. A 6. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, ahol a hatóanyagként alkalmazott vegyület N,N’-bisz-[3-etil-amino)-propil]-1,8-oktán-diamin.
8. 8. A 6. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, ahol a hatóanyagként alkalmazott vegyület 1,18-bisz-[(fenil)-metil]-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán.
9. 9. A 6. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, ahol a hatóanyagként alkalmazott vegyület N,N’-bisz-(3-etil-amino)-propil)-1,7-heptán-diamin.
10. 10. A 6. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, ahol a hatóanyagként alkalmazott vegyület N,N’-bisz[3-(propil-amino)-propil]-1,7-diamino-heptán.
11. 11. Az (I) általános képletű vegyületek vagy gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós sóik alkalmazása citomegalovírus fertőzés kezelésére, azzal jellemezve, hogy valamely (I) általános képletű vegyületet - ahol Z._y jelentése 2-6 szénatomos elágazó láncú alkiléncsoport; láncú alkiléncsoport; m jelentése egész szám, melynek értéke 7 vagy 8; az R csoportok jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomos telített vagy telítetlen szénhidrogén gyök vagy -(CH₂)_x-(Ar)-X általános képletű csoport, ahol Árjelentése fenil- vagy naftilcsoport, X jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkoxi- vagy halogénezett-(1-4 szénatomos alkil)-csoport, x jelentése egész szám, melynek értéke 0, 1 vagy 2; azzal a feltétellel, hogy az R csoportok jelentése egyidejűleg • 9 * · · * ··· · · « « « 4 · ·· ·· ··« hidrogénatom nem lehet vagy ha m - 8, R jelentése benzilcsoporttól eltérő - vagy gyógyászatilag alkalmazható sóját hatásos mennyiségben beadjuk a páciensnek.
12. 12. A 11. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott vegyület N,N’-bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,8-oktán-diamin.
13. 13. A 11. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott vegyület 1,18-b isz-[(fen i I )-m et i I] -1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán.
14. 14. A 11. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott vegyület N,N’-bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,7-heptán-diamin.
15. 15. A 11. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott vegyület N,N’-bisz-[3-(propil-amino)-propil]-1,7-diamino-heptán.
16. 16. Az (I) általános képletű vegyületek vagy gyógyászatilag alkalmaznató savaddíciós sóik alkalmazása CMV fertőzés okozta betegségi állapot kezelésére, azzal jellemezve, hogy valamely (I) általános képletű vegyületet - ahol Zj jelentése 2-6 szénatomos telített alkiléncsoport; m jelentése egész szám, melynek értéke 7 vagy 8; az R csoportok jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomos telített vagy telítetlen szénhidrogén gyök vagy -(CH₂)_x-(Ar)-X általános képletű csoport, ahol Ar jelentése fenil- vagy naftilcsoport, X jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkoxivagy halogénezett-(1-4 szénatomos alkil)-csoport, x jelentése egész szám, melynek értéke 0, 1 vagy 2; azzal a feltétellel, hogy az R csoportok jelentése egyidejűleg hidrogénatom nem lehet vagy ha m = 8, R jelentése benzilcsoporttól eltérő - vagy gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós sóját hatásos mennyiségben beadjuk a páciensnek.
17. 17. A 16. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott vegyület N,N’-bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,8-oktán-diamin.

    • ···· · · ♦ · ·«« · ·* <*· ·**
18. 18. A 16. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott vegyület 1,18-bisz-[(fenil)-metil]-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán.
19. 19. A 16. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott vegyület N,N’-bisz-[(3-etil-amino)-propil]-1,7-heptán-diamin.
20. 20. A 16. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott vegyület N,N’-bisz-[3-(propil-amino)-propil]-1,7-diamino-heptán.
21. 21. Az (I) általános képletű vegyületek vagy gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós sóik alkalmazása citomegalovírus fertőzés kezelésére, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű vegyületet - ahol Zf jelentése 2-6 szénatomos elágazó láncú alkiléncsoport; m jelentése egész szám, melynek értéke 7 vagy 8; az R csoportok jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomos telített vagy telítetlen szénhidrogén gyök vagy -(CH₂)_x-(Ar)-X általános képletű csoport, ahol Árjelentése fenilvagy naftilcsoport, X jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkoxi- vagy halogénezett-(1-4 szénatomos alkil)-csoport, x jelentése egész szám, melynek értéke 0, 1 vagy 2; azzal a feltétellel, hogy mindként R csoport jelentése egyidejűleg nem lehet hidrogénatom - vagy gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós sóját 0,1 mikromolnál kisebb hatásos koncentrációban adjuk be a páciensnek.
22. 22. A 11. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott vegyület N,N’-bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,8-oktán-diamin.
23. 23. A 11. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott vegyület 1,18-bisz-[(fenil)-metil]-1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán.
24. 24. A 11. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott vegyület Ν,N’-bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,7-heptán-diamin.

    * *

    A
25. 25. A 11. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott vegyület N,N’-bisz-[3-(propil-amino)-propil]-1,7-diamino-heptán.
26. 26. Az (I) általános képletű vegyületek vagy gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós sóik alkalmazása CMV fertőzés okozta betegségi állapot kezelésére, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű vegyületet - ahol 7._Á jelentése 2-6 szénatomos telített alkilén csoport; m jelentése egész szám, melynek értéke 7 vagy 8; az R csoportok jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, 1-6 szénatomos telített vagy telítetlen szénhidrogén gyök vagy -(CH₂)_x-(Ar)-X általános képletű csoport, ahol Árjelentése fenil- vagy naftilcsoport, X jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkoxi- vagy halogénezett-(1-4 szénatomos alkil)-csoport, x jelentése egész szám, melynek értéke 0, 1 vagy 2; azzal a feltétellel, hogy mindkét R csoport jelentése nem lehet hidrogénatom vagy gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós sóját 0,1 mikromolnál kisebb hatásos koncentrációban adjuk be a páciensnek.
27. 27. A 16. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott (I) általános képletű vegyület N,N’-bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,8-oktán-diamin.
28. 28. A 16. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott (I) általános képletű vegyület 1,18-bisz-[(fenil)-metil]1,5,14,18-tetra-aza-oktadekán.
29. 29. A 16. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott (I) általános képletű vegyület N,N’-bisz-[3-(etil-amino)-propil]-1,7-heptán-diamin.
30. 30. A 16. igénypont szerinti kezelési eljárás, azzal jellemezve, hogy a beadott (I) általános képletű vegyület N,N’-bisz-[3-(propil-amino)-propil]-1,7-diamino-heptán.