HUT72188A

HUT72188A - Inhibitors of farnesyl-protein transferase

Info

Publication number: HUT72188A
Application number: HU9501240A
Authority: HU
Inventors: S Jane Desolms; Samuel L Graham
Original assignee: Merck & Co Inc
Priority date: 1992-10-29
Filing date: 1993-10-27
Publication date: 1996-03-28
Also published as: AU683627B2; SK53995A3; JPH08502971A; FI952010A; US5326773A; FI952010A0; NO951647L; CA2147286A1; NZ257766A; WO1994010137A1; HU9501240D0; PL308553A1; KR950704247A; EP0668856A1; NO951647D0; AU5453994A; CZ107095A3; EP0668856A4

Description

A Ras gént számos emberi rákos megbetegedésben, köztük kolorektális karcinóma, exokrin pankreász karcinóma és mieloid leukémia esetén aktiváltnak találták. A Ras hatás biológiai és biokémiai vizsgálatai azt jelzik, hogy a Ras G-regulátor proteinként működik, mivel a Ras-nak a plazma membránban kell lokalizálódnia és GTP-vel kötődnie kell a sejtek átalakítása céljából [Gibbs, J. és munkatársai, Microbiol. Rév. 53, 171-286 (1989)]. A rákos sejtekben a Ras formái mutációkkal bírnak, amelyek megkülönböztetik a proteint a normális sejtekben lévő Ras-tól.

A Ras membrán lokalizációjával legalább három poszt-transzlációs módosulás kapcsolatos, és mind a három módosulás a Ras C-terminálisánál jelentkezik. A Ras C-terminálisa egy CAAX vagy Cys-Aaa¹-Aaa²-Xaa box jelölésű szekvencia motívumot tartalmaz (Aaa jelentése alifás aminosav, Xaa jelentése bármely aminosav) [Willumsen és munkatársai, Natúré 310, 583-586 (1984)]. További, ezt a motívumot tartalmazó proteinek körébe tartoznak a Ras proteinnel rokon Gtp-kötő proteinek, például az Rho, a gomba párosodási faktorok, a nukleáris lemezkék és a transzducin gamma alegysége.

A Ras proteinnek az izoprenoid farnezil pirofoszfáttal (FPP) való farnezilezése in vivő a Cys egységen történik, így egy tioéter-kötés jön létre [Hancock és munkatársai, Cell 57: 1167 (1989); Casey és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86; 8323 (1989)]. Ezen kívül a Ha-Ras és az N-Ras egy C-terminális Cys farnezil akceptorhoz közeli helyen lévő Cys egységen való tioészter képzés révén palmitoilezettek [Gutierrez és munkatársai, EMBO J. 8: 1093-1098 (1989); Hancock és munkatársai, Cell 57: 1167-1177 (1989)]. A Ki-Ras-ból hiányzik a palmitát akceptor Cys. A Ras C• · • ·

- 3 -terminálisának három utolsó aminosava proteolitikusan eltávolított, és az új C-terminálison metil-észter szerepel (Hancock és munkatársai, u.o.). A gomba párosodási faktor és az emlős nukleáris lemezkék azonos módosulási lépéseken mennek át [Anderegg és munkatársai, J. Bioi. Chem. 263: 18236 (1988); Farnsworth és munkatársai, J. Bioi. Chem. 264, 20422 (1989)].

A Ras farnezilezés in vivo gátlását lovasztatinnal (Merek & Co., Rahway, NJ) és kompaktinnal (Hancock és munkatársai, u.o., Casey és munkatársai, u.o.; Schafer és munkatársai, Science 245: 379 (1989)] mutatták ki. Ezek a hatóanyagok gátolják a HMG-CoA reduktázt, a poliizoprenoidok és a farnezil-pirofoszfát prekurzor termelésének sebességét korlátozó enzimet. Kimutatták, hogy a prekurzorként farnezil-pirofoszfátot felhasználó farnezil-protein-transzferáz felelős a Ras farnezilezéséért [Reiss és munkatársai, Cell. 62: 81-88 (1990); Schaber és munkatársai, J. Bioi. Chem., 265, 14701-14704 (1990); Schafer és munkatársai, Science 249, 1133-1139 (1990); Manne és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 7541-7545 (1990)].

A farnezil-protein transzferáz, és ezáltal a Ras protein farnezilezése blokkolja a Ras normális sejteket rákos sejtekké átalakító képességét. A találmány szerinti vegyületek gátolják Ras farnezilezését, és ezáltal oldható Ras-t hoznak létre, amely - amint azt a leírásunkban jelezzük - a Ras funkció domináns negatív inhibitoraként való működésre képes. Míg az oldható Ras a ráksejtekben domináns negatív inhibitorrá válhat, az oldható Ras a normális sejtekben nem működik inhibitorként.

Egy citoszolban lokalizált (Cys-Aaa¹-Aaa²-Xaa box membrán dómén nélküli) és aktivált (károsodott GTP-áz aktivitású, GTP-hez kötött állapotú) Ras forma a membránhoz kötött Ras funkció domináns negatív Ras inhibitoraként működik [Gibbs és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 6630-6634 (1989)]. A normál GTP-áz aktivitással bíró, citoszolban lokalizált Ras formák nem hatnak inhibitorokként. Gibbs és munkatársai, u.o., ezt a hatást Xenopus oocytes-en és emlős sejteken mutatták ki.

A találmány szerinti vegyületek Ras famezilezés gátlására történő adagolása nem csak a Ras membránban való mennyiségét csökkenti, hanem a Ras-nak a citoszolban való felgyülemlését (citoszol pool) is kiváltja. Aktivált Ras tartalmú tumor sejtekben a citoszol pool mint a membránhoz kötött Ras funkció másik antagonistája hat. Normál Ras tartalmú normál sejtekben a Ras citoszol pool nem hat antagonistaként. A famezilezés tökéletes gátlásának hiányában más farnezilezett proteinek képesek működésük folytatására.

A farnezil-protein-transzferáz aktivitás a vegyületek dózisának beállításával csökkenthető vagy teljesen gátolható. A farnezil-protein-transzferáz enzim aktivitásának a vegyület dózisának beállításával való csökkentése hasznos lenne azon lehetséges nem-kívánt mellékhatások elkerülésére, amelyek az enzimet hasznosító más metabolikus folyamatokkal való interferenciából származnak.

Ezek a vegyületek és analógjaik a farnezil-protein transzferáz inhibitorai. A farnezil-protein-transzferáz farnezil pirofoszfát hasznosításával kovalensen módosítja a Ras CAAX box cisz tiolcsoportját egy farnezilcsoporttal. A farnezil-pirofoszfát bioszintézisének a HMG-CoA reduktáz gátlásával való gátlása blokkolja a Ras membránban in vivő való lokalizálódását, és gátolja a Ras funkciót. A farnezil-protein-transzferáz gátlása fajlagosabb, és ki-

- 5 sebb mellékhatásokkal jár, mint az izoprén bioszintézis általános inhibitora esetén.

Korábban kimutatták, hogy a CAAX szekvenciával bíró, amino terminális egységként ciszteint tartalmazó tetrapeptidek gátolják a Ras farnezilezést [Schaber és munkatársai, u.o.; Reiss és munkatársai, u.o.; Reiss és munkatársai, PNAS, 88. 732-736 (1991)]. Az ilyen inhibitorok gátló hatásukat kifejthetik úgy, hogy eközben a Ras farnezil-transzferáz enzimnek alternatív szubsztrátként szolgálnak, vagy egyszerűen kompetitív inhibitorokként hatnak (lásd az US 5 141 851 számú szabadalmi leírásban, University of Texas).

A találmány szerinti vegyületek peptid analógok, amelyek két redukált peptidkötést tartalmaznak, és általános szerkezetük C-[\vCH₂NH]Xaa¹-[\yCH₂NR]-Xaa²-Xaa³, ahol C jelentése cisztein, és Xaa¹ ³ egy aminosav, és az Xaa¹ és Xaa² egységek között álló nitrogén alkilezett. A találmány szerinti vegyületek a Ras farnezil-transzferáz stabil inhibitorai. A redukált amidkötések jelenléte metabolikus stabilitást nyújt ezeknek az inhibitoroknak, így képesek a Ras farnezilezés in vivő gátlására. Az első és második peptidkötés redukálása a belső enzimgátló aktivitás nemvárt fokozódására is vezethet. Az Xaa¹ és Xaa² csoportok közötti reakcióképes nitrogén alkilezése kémiai stabilitást biztosít ezeknek az analógoknak, így fokozza in vivő aktivitásukat (sejttenyészetben). Különösen hasznos a megfigyelés, hogy ezen inhibitorok lakion- és észter-formái prodrogként viselkednek, hatásosan szállítják az aktív hidroxi-savakat vagy savakat a sejten belüli részekbe, azaz a Ras farnezilezés helyére.

Ennek megfelelően a találmány célja olyan tetrapeptid alapú vegyületek kifejlesztése, amelyek két redukált amidkötéssel bírnak, • ·

- 6 és amelyekben az Xaa¹ és Xaa² csoportok közötti nitrogén alkilezett, ezek a vegyületek a farnezil-protein-transzferázt és az onkogén Ras protein farnezilezését gátolják. A találmány további célja olyan kemoterápiás készítmények kifejlesztése, amelyek a találmány szerinti vegyületeket tartalmazzák, továbbá a találmány tárgyát képezi a találmány szerinti vegyületek előállítása is.

A találmány olyan tetrapeptid analógokra vonatkozik, amelyek két redukált amidkötéssel bírnak, és amelyek a farnezil-protein transzferázt és az onkogén Ras protein farnezilezését gátolják, a találmány körébe tartoznak továbbá a találmány szerinti vegyületeket tartalmazó kemoterápiás készítmények, valamint a találmány szerinti vegyületek előállítására szolgáló eljárások. A találmány szerinti vegyületek az (V) általános képletű vegyületek körébe tartozó (I), (II), (III) és (IV) általános képlettel jellemezhetők. Az (V) általános képletben

R^c jelentése (a) vagy (b) általános képletű csoport;

R¹ jelentése hidrogénatom, alkil-, aralkil-, acil-, aracil-, aroil-, alkil-szulfonil-, aralkil-szulfoniI- vagy aril-szulfonil-csoport, ahol az alkil- és arilcsoportok 1 - 6 szénatomosak, és egyenes vagy elágazó láncúak,

R² és R³ jelentése egymástól függetlenül

a) természetes előfordulású aminosavak oldallánca,

b) természetes előfordulású aminosavak oldalláncának oxidált formája, amely lehet metionin-szulfoxid és metionin-szulfon és

c) adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoportok, például allil-, ciklohexil-, fenil-, piridilvagy imidazolilcsoport, vagy telített, 2 - 8 szénatomos egyenes vagy elágazó szénlánc, amely csoportok mindegyikénél az alifás • · · ·

• · «

- 7 csoportok adott esetben egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesítettek lehetnek;

R⁴ jelentése

a) természetes előfordulású aminosavak oldallánca,

c) adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoportok, például allil-, ciklohexil-, fenil-, piridilvagy imidazolilcsoport, vagy telített, 2-8 szénatomos egyenes vagy elágazó szénlánc, amely csoportok mindegyikénél az alifás csoportok adott esetben egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesítettek lehetnek; és

d) -CH₂CH₂OH vagy -CH₂CH₂CH₂OH;

R⁵ jelentése 1-6 szénatomos, egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely adott esetben egy aromás vagy heteroaromás csoporttal helyettesített lehet;

R⁶ jelentése hidrogénatom, adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoport, például 1 - 8 szénatomos, egyenes vagy elágazó telített szénlánc, ahol az alifás helyettesítők adott esetben egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesítettek lehetnek;

n értéke 0, 1 vagy 2;

valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói és diszulfidjai.

A találmány szerinti vegyületek hasznosak farnezil-protein-transzferáz gátlásában, és az onkogén Ras protein farnezilezésének gátlásában.

• · ·· ·· • · • ·· • · · · · · • · • »** • · · • · · ·

A találmány első megvalósítási módja szerint a farnezil-protein-transzferáz inhibitorok az (I) általános képlettel jellemezhetők. A képletben

R¹ jelentése hidrogénatom, alkilcsoport, aralkilcsoport, acilcsoport, aracilcsoport, aroilcsoport, alkil-szulfonil-csoport, aralkil-szulfonil-csoport, vagy aril-szulfonil-csoport, ahol az alkilés acilcsoportok 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú szénhidrogének;

R², R³ és R⁴ természetes előfordulású aminosavak oldalláncai, beleértve ebbe oxidált formáikat, amelyek lehetnek metionin-szulfoxid vagy metionin-szulfon; vagy lehetnek még helyettesített vagy helyettesítő nélküli alifás, aromás vagy heteroaromás csoportok, például allil, ciklohexil-, fenil-, piridil- vagy imidazolilcsoport, vagy 2-8 szénatomos telített láncok, amelyek egyenesek vagy elágazóak, és az alifás helyettesítők egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesítettek lehetnek;

R⁵ jelentése 1 - 6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely egy aromás vagy heteroaromás helyettesítőt hordozhat;

valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói.

A találmány egy második megvalósítási módja szerint az (I) általános képletű vegyületek (II) általános képlettel jellemezhető prodrogjaira vonatkozik. A képletben

R¹ jelentése hidrogénatom, alkil-, aralkil-, acil-, aracil-, aroil-, alkil-szulfonil-, araikil-szulfonil- vagy aril-szulfonil-csoport, ahol az alkil- és acilcsoportok egyenes vagy elágazó láncúak és 1-6 szénatomosak;

R², R³ és R⁴ jelentése természetes előfordulású aminosavak oldalláncai, beleértve oxidált formáikat, amelyek lehetnek metionin-szulfoxid vagy metionin-szulfon; vagy jelentésük adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoport, például allil-, ciklohexil-, fenil-, piridil- vagy imidazolilcsoport, vagy 2-8 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú telített szénlánc, ahol az alifás helyettesítők egy aromás vagy heteroaromás gyűrűt hordozhatnak helyettesítőként;

R⁵ jelentése 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely adott esetben egy aromás vagy heteroaromás helyettesítőt hordoz;

R⁶ jelentése adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoport, például egy egyenes vagy elágazó láncú 1 - 8 szénatomos telített szénlánc, ahol az alifás helyettesítők egy aromás vagy heteroaromás gyűrűt hordozhatnak helyettesítőként; valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói és diszulfidjai.

Egy harmadik megvalósítási módját tekintve a farnezil-protein-transzferáz inhibitorok a (III) általános képlettel jellemezhetők - a képletben

R¹ jelentése hidrogénatom, alkil-, aralkil-, acil-, aracil-, aroil-, alkil-szulfonil-, aralkil-szulfonil- vagy aril-szulfonil-csoport, ahol az alkil- és acilcsoportok 1 - 6 szénatomosak és egyenes vagy elágazó láncúak;

R² és R³ természetes előfordulású aminosavak oldalláncai, beleértve oxidált formáikat, amelyek lehetnek metionin-szulfoxid vagy metionin-szulfon; vagy jelentésük adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoport, például allil-, ciklohexil-,

fenil-, piridil- vagy imidazolilcsoport, vagy 2-8 szénatomos egyenes vagy elágazó szénlánc, ahol az alifás helyettesítők egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesítettek lehetnek;

R⁵ jelentése 1 - 6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesített lehet;

n értéke 0, 1 vagy 2;

valamint fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói.

A találmány egy negyedik megvalósítási módját tekintve a (III) általános képletú vegyületek (IV) általános képlettel jellemezhető prodrogjaira vonatkozik - a képletben

R² és R³ természetes előfordulású aminosavak oldalláncai, beleértve ezek oxidált formáit, amelyek lehetnek metionin-szulfoxid vagy metionin-szulfon, vagy jelentésük adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoport, például allil-, ciklohexil-, fenil-, piridil- vagy imidazolilcsoport vagy 2 - 8 szénatomos egyenes vagy elágazó telített szénlánc, ahol az alifás helyettesítők egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesítettek lehetnek;

R⁵ jelentése 1 - 6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely adott esetben egy aromás vagy heteroaromás csoporttal helyettesített lehet;

A találmány szerinti előnyös vegyületek a következők:

• ·

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin-lakton,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-fenilalanil-homoszerin,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-píOpil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-fenilalanil-homoszerin-lakton,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3-metil-butil]-N-metil-fenilalanil-homoszerin,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3-metil-butil]-N-metil-fenilalanil-homoszerin-lakton, 3(S)-{N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-amino}-3-metil-tetrahidropiran-2-on, 2(S)-{N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-amino}-2-metil-5-hidroxi-pentánsav, 2(S)-{N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-amino}-5-metil-5-hidroxi-hexánsav, N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-norvalil-homoszerin,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-norvalil-homoszerin-lakton,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-metionin,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-metionin-metil-észter,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-fenilalanil-metionin,

- 12 . · .· ·..· · * · · · .. · ···

........ ..· ·..·

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-fenilalanil-metionin-metil-észter,

3(S)-{N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-amino}-6,6-dimetil-tetrahidropiran-2-on_lN-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-norvalil-metionin,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-norvalil-metionin-metil-észter,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-D-norvalil-homoszerin vagy

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-D-norvalil-homoszerin-lakton, és ezek gyógyászati szempontból elfogadható sói.

A találmány szerinti legelőnyösebb vegyületek körébe tartoznak a következő inhibitorok és a megfelelő észter/lakton prodrog párok:

Az (1) képletű N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin, a (2) képletű N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin-lakton, a (3) képletű N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-metionin, és a (4) képletű N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-metionin-metil-észter, valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói.

• · ·

- 13 A leírásban az aminosavak jelölésére mind a szokásos hárombetűs, mind az egybetűs rövidítéseket alkalmazzuk, amelyeket az alábbiakban ismertetünk:

Alanin	Alá	A
Arginin	Arg	R
Aszparagin	Asn	N
Aszparaginsav	Asp	D
Aszparagin- vagy
Aszparaginsav	Asx	B
Cisztein	Cys	C
Glutamin	Gin	Q
Glutaminsav	Glu	E
Glutamin vagy
Glutaminsav	Glx	Z
Glicin	Gly	G
Hisztidin	His	H
Izoleucin	He	I
Leucin	Leu	L
Lizin	Lys	K
Metionin	Met	M
Fenilalanin	Phe	F
Prolin	Pro	P
Szerin	Ser	S
Treonin	Thr	T
Triptofán	Trp	w
Tirozin	Tyr	Y
Valin	Val	V

- 14 A találmány szerinti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói körébe tartoznak a találmány szerinti vegyület szokásos nem-toxikus sói, például a nem-toxikus szervetlen vagy szerves savakkal alkotott sók. Az ilyen szokásos nem-toxikus sók körébe tartoznak például a szervetlen savakkal, például hidrogén-kloriddal, hidrogén-bromiddal, kénsavval, szulfaminsavval, foszforsavval, salétromsavval és hasonlókkal alkotott sók, a szerves savakkal alkotott alkotott sók körébe tartoznak például az ecetsavval, propionsavval, borostyánkősavvaal, glikolsavval, sztearinsavval, tejsavval, almasavval, borkősavval, citromsavval, aszkorbinsavval, pamoesavval, maleinsavval, hidroxi-maleinsavval, fenil-ecetsavval, glutaminsavval, benzoesavval, szalicilsavval, szulfanilsavval, 2-acetoxi-2-benzoesavval, fumársavval, toluolszulfonsavval, metánszulfonsavval, etándiszulfonsavval, oxálsavval, izetionsavval, trifluor-ecetsavval és hasonló savakkal alkotott sók.

A találmány szerinti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói a bázikus egységet tartalmazó találmány szerinti vegyületekből szokásos kémiai eljárásokkal állíthatók elő. Általában a sókat a szabad bázisnak sztöchiometrikus mennyiségű vagy feleslegben lévő, a kívánt só képzésére alkalmas szerves vagy szervetlen savval, megfelelő oldószerben vagy oldószerek kombinációjában való reagáltatásával állítjuk elő.

A találmány szerinti vegyületeket alkotó aminosavaiból szokásos peptidszintézis eljárásokkal, valamint a további itt leírt eljárásokkal állíthatjuk elő. A peptidszintézis standard módszereit például a következő szakirodalmi helyeken ismertetik: Schroeder és munkatársai, The Peptides, I. kötet, Academic Press 1965, vagy

- 15 Bodanszky és munkatársai, Peptide Synthesis, Interscience Publishers, 1966, vagy McOmie (szerk.) Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, 1973, vagy Bárány és munkatársai, The Peptides; Analysis, Snythesis, Biology, 2. kötet, 1. fejezet, Academic Press, 1980, vagy Stewart és munkatársai, Solid Phase Peptide Synthesis, második kiadás, Pierce Chemical Company, 1984. Az ezen munkákban foglalt kitanításokat leírásunkba referenciaként építjük be.

A találmány szerinti vegyületeket az A-C reakcióvázlatokban bemutatott reakciók alkalmazásával és további más standard műveletekkel, például észter-hidrolízissel, védőcsoport lehasítással, stb. végezzük, amelyek a szakirodalomból ismertek, vagy a kísérleti eljárásoknál példákban szerepelnek. A kulcs-kötésképző reakciók a következők:

A reakció: amidkötés képzése és védőcsoport lehasítás szokásos oldatban vagy szilárdfázisú eljárással végzett módszerekkel.

B reakció: redukált peptid alegység előállítása egy amin aldehiddel való reduktív alkilezésével nátrium-ciano-bór-hidrid vagy más redukálószer alkalmazásával.

C reakció: egy redukált peptid alegységnek alkil- vagy aralkil-halogeniddel való alkilezése vagy - más módon - egy redukált peptid alegységnek egy aldehiddel nátrium-ciano-bór-hidrid vagy más redukálószer alkalmazásával végzett reduktív alkilezése.

Ezeket a reakciókat alkalmazhatjuk egy lineáris szekvenciában a találmány szerinti vegyületek előállítására, vagy fragmentumok szintézisére, amelyeket ezt követően a reakcióvázlatban leírt módon alkilezési reakciókkal kapcsolunk.

···· ♦ · »“*· • ♦ * · ····.:.. ·..· ·.:· ·:>

- 16 Az A reakcióvázlatban amidkötés kialakítását mutatjuk be egységek kapcsolásával.

A B reakcióvázlatban redukált peptid alegységek reduktív alkilezéssel való előállítását mutatjuk be.

A C reakcióvázlatban redukált peptid alegységek alkilezését/reduktív alkilezését mutatjuk be.

A képletekben R^A és R^B az előzőekben R², R³ vagy R* helyettesítőkre megadott jelentésekkel bírnak; X jelentése kilépöcsoport, például Br’’ Γ vagy MsO’; és R⁷ egy olyan csoport, amelyből reduktív alkilezés révén az R⁵ helyettesítők valamelyike képződik.

A találmány szerinti vegyületek gátolják a farnezil-protein transzferázt és az onkogén Ras protein farnezilezését. Ezek a vegyületek gyógyszerként hasznos szerek emlősök, különösen ember számára. A vegyületek a betegeknek rák kezelésére adagolhatok. A találmány szerinti vegyületekkel kezelhető rák-típusok példáiként említjük, a korlátozás szándéka nélkül, a kolorektális karcinómát, az exokrin pankreász karcinómát és a mieloid leukémiákat.

A találmány szerinti vegyületek emlősöknek, előnyösen embernek adagolhatok önmagukban vagy előnyösen gyógyászati szempontból elfogadható hordozó- vagy hígítóanyagokkal, adott esetben ismert segédanyagokkal, például alumínium-oxiddal kombinálva gyógyászati készítmény formájában a szokásos gyógyászati gyakorlatnak megfelelően. A vegyületek adagolhatok orálisan vagy parenterálisan, beleértve az intravénás, intramuszkuláris, intraperitoneális, szubkután, rektális és helyi adagolási módokat.

A találmány szerinti kemoterápiás szerek orális alkalmazása esetén a kiválasztott vegyületet adagolhatjuk például tabletták vagy kapszulák formájában, vizes oldatként vagy szuszpenzióként. Az • >

’·.·.:.. ·..· ·.>

- 17 orális adagolásra szolgáló tabletták esetén szokásosan alkalmazott hordozóanyagok körébe tartoznak a laktóz és a kukoricakeményítő, és szokásosan csúsztatószereket, például magnézium-sztearátot adagolunk. Az orálisan adagolásra szolgáló kapszula formákban hasznos hígítóanyagok körébe tartozik a laktóz és a szárított kukoricakeményítő. Ha orális felhasználásra vizes szuszpenziókat készítünk, a hatóanyagot emulgeáló- és szuszpendálószerekkel kombináljuk. Kívánt esetben alkalmazhatunk bizonyos édesítő- és/vagy ízesítőszereket. Intramuszkuláris, intraperitoneális, szubkután és intravénás alkalmazásra általában a hatóanyagból steril oldatokat készítünk, és az oldatok pH-ját célszerűen beállítjuk és pufferoljuk. Intravénás alkalmazásra az oldott anyagok össz-koncentrációját úgy kell szabályoznunk, hogy a készítmény izotóniás legyen.

A találmány magában foglalja a rák kezelésére alkalmas gyógyászati készítményeket is, amelyek a találmány szerinti vegyületek terápiásán hatékony mennyiségének adagolását jelentik gyógyászati célra alkalmas hordozó- vagy hígítóanyagok alkalmazásával vagy anélkül. A találmány szerinti megfelelő készítmények körébe tartoznak a találmány szerinti vegyületet és gyógyászati célra alkalmas hordozóanyagokat, például sót tartalmazó oldatok, amelyek pH-ja például 7,4. Az oldatok bevihetők a beteg intramuszkuláris véráramába helyi bolus injekciók formájában.

Ha egy találmány szerinti vegyületet embernek adagolunk, a vegyület napi dózisát a kezelő orvos határozza meg, a dózis általában a beteg korától, testtömegétől, egyéni válaszától, valamint tüneteinek súlyosságától függ.

Példaként említünk egy olyan alkalmazást, amelyben egy emlős rákos megbetegedését kezeljük a találmány szerinti vegyület megfe- 18 lelő mennyiségével. Az adagolás mintegy 0,1 - 20 mg/testtömeg kg/nap, előnyösen 0,5 mg/testtömeg kg/nap és mintegy 10 mg/testtömeg kg/nap közötti.

A következőkben a találmányt példákban mutatjuk be. A példákban alkalmazott anyagok, vegyületek és körülmények a bemutatást szolgálják, nem korlátozó jellegűek.

1. Példa N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin-lakton és N-[2(S)· -2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin előállítása

A lépés: N-(terc-Butoxi-karbonil)-izoleucin-aldehid

Ezt a vegyületet Goel, Krolls, Stier és Kesten [Organic Syntheses, 67, 69 (1988)] N-(terc-butoxi-karbonil)-izoleucinra leírt eljárásának alkalmazásával szintetizáljuk. A vegyületet színtelen olaj formájában nyerjük, és további tisztítás nélkül használjuk fel.

B lépés: N-[(2S)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3(S)-metil-pentil)-izoleucin-benzil-észter

8,0 g, 0,037 mól N-(terc-Butoxi-karbonil)-izoleucin-aldehidet és 19,0 g, 0,048 mól izoleucin-benzil-észter-p-toluolszulfonát-sót 50 ml metanolban szobahőmérsékleten, nitrogéngáz atmoszférában oldunk, és 15 g 3A molekulaszitával és 20,4 g, 0,096 mól nátrium-triacetoxi-bór-hidriddel reagáltatjuk keverés mellett. 2 óra keverés után az elegyet szűrjük, besűrítjük és a visszamaradó anyagot 100 ml etil-acetát és 100 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megosztjuk. A bázikus fázist 2 x 50 ml etil-acetáttal mossuk, a szerves fázisokat egyesítjük, sóoldattal mossuk és nátri- 19 um-szulfáton szárítjuk. A szűrletet beszárítjuk és szilícium-dioxidon kromatografáljuk, eluensként hexán és etil-acetát 9:1 arányú elegyét alkalmazzuk. így 41 %-os hozammal 6,4 g cím szerinti vegyületet nyerünk.

¹H-NMR (CD₃OD) δ 7,30-7,45 (m, 5H); 5,18 (Abq, 2H), 3,40-3,45 (m, 1H); 3,12 (d, 1H, J = 6 Hz), 2,70 (dd, 1H, J = 4, 12 Hz), 2,37 (dd, 1H, J = 4, 12 Hz), 2,63-2,76 (m, 1H); 1,45-1,61 (m, 2H); 1,46 (s, 9H); 1,05-1,26 (m, 2H); 0,82-0,95 (m, 12H).

C lépés

N-[(2S)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3(S)-metil-pentil)-N-metil-izoleucin-benzil-észter

0,8 g, 1,9 mmól N-[(2S)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3(S)-metil-pentil)-izoleucin-benzil-észtert 3 ml acetonban oldunk, és 0,52 g,

3,8 mmól kálium-karbonáttal és 1,2 ml, 19 mmól jód-metánnal reagáltatjuk, és 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyhez ezután 10 ml 5 %-os vizes ammónium-hidroxid-oldatot adunk, 0,5 órán át keverjük, besűrítjük, majd 20 ml etil-acetát és 20 ml víz között megosztjuk. A vizes fázist 2 x 20 ml etil-acetáttal mossuk, a szerves fázisokat egyesítjük, egymást követően vízzel, 10 %-os citromsavoldattal, majd sóoldattal mossuk, és nátrium-szulfáton szárítjuk. Szűrés és beszárítás után 98 %-os hozammal 0,814 g cím szerinti vegyületet nyerünk sárga olaj formájában.

¹H-NMR (CDCI₃) δ 7,32-7,41 (m, 5H); 5,11-5,24 (m, 2H); 3,58-3,72 (m, 1H); 2,8-3,0 (m, 1H); 2,20-2,65 (m, 5H); 1,88-2,0 (m, 1H); 1,68-1,80 (m, 1H); 1,56-1,67 (m, 1H); 1,45 (s, 9H); 1,29-1,42 (m, 2H);

1,12-1,28 (m, 1H); 0,98-1,09 (m, 1H); 0,80-0,95 (m, 12H).

- 20 D lépés: N-[(2S)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3(S)-metil-pentil)-N-metil-lzoleucin

0,814 g, 1,87 mmól N-[(2S)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3(S)-metil-pentil)-N-metil-izoleucin-benzil-észtert 25 ml metanol és 25 ml etil-acetát elegyében oldunk, 0,1 g 10 % fémtartalmú szénhordozós palládiumkatalizátort adunk hozzá, és hidrogén ballon alatt 4 órán át hidrogénezzük. Ezután az elegyet szűrjük, és beszárítjuk, így 95 %-os hozammal 0,614 g cím szerinti vegyületet nyerünk fehér, szilárd anyag formájában.

¹H-NMR (CDCh) δ 5,1-5,2 (m, 1H); 3,7-3,8 (m, 1H); 3,27-3,35 (m, 1H); 2,8-2,92 (m, 2H); 2,55 (s, 3H); 1,80-1,93 (m, 1H); 1,55-1,8 (m, 2H); 1,48 (s, 9H); 1,23-1,42 (m, 1H); 1,05-1,2 (m, 1H); 0,82-1,03 (m, 12H).

E lépés: N-[2(S)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin-iakton

1,05 g, 3,05 mmól N-[(2S)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3(S)-metil-pentil)-N-metil-izoleucint 10 ml dimetil-formamidban keverés mellett szobahőmérsékleten oldunk, majd 0,64 g, 3,35 mmól EDC-t, 0,45 g, 3,35 mmól HOBT-t és homoszerin-lakton-hidrogén-kloridot adunk hozzá. Az elegy pH-ját 0,40 ml, 2,9 mmól Et₃N alkalmazásával pH = 6-ra állítjuk be, és a keverést 18 órán át folytatjuk. Az elegyet ezután besűrítjük, 50 ml etil-acetát és 50 ml víz között megosztjuk, a vizes fázist 3 x 20 ml etil-acetáttal mossuk, a szerves fázisokat egyesítjük, telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és sóoldattal mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk. Szűrést és besűrítést követően a terméket szilícium-dioxidon kromatografáljuk, eluensként hexán és etil-acetát 3:1 és 2:1 közötti elegye és etil-acetát közötti gradiens alkalmazásával.

- 21 ¹H-NMR (CD₃OD) δ 4,59 (t, 1 H, J = 10 Hz), 4,47 (td, 1H, J = 2, 10 Hz), 4,28-4,39 (m, 2H); 3,56-3,64 (m, 1H); 2,74 (d, 1H, J = 10 Hz), 2,5-2,7 (m, 2H); 2,3-2,42 (m, 2H); 2,29 (s, 3H); 1,75-1,92 (m, 2H);

1,4-1,6 (m, 2H); 1,46 (s, 9H); 1,07-1,20 (m, 2H); 0,88-0,95 (m, 12H).

F lépés: N-[2(S)-Amino-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil· -homoszerin-lakton

0,21 g, 0,5 mmól N-[2(S)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin-lakton 50 ml etil-acetátban készült oldatán keverés mellett, -20 °C hőmérsékleten 0,5 órán át hidrogén-klorid gázt buborékoltatunk át. Ezután az oldatot 0,5 órán át argongázzal öblítjük át, majd besűrítjük, így 100 %-os hozammal 0,21 g cím szerinti vegyületet nyerünk fehér, szilárd anyag formájában.

¹H-NMR (CD3OD) δ 4,46-5,05 (m, 2H); 4,28-4,38 (m, 1H); 3,54-3,70 (m, 2H); 3,2-3,4 (m, 2H); 2,75-2,97 (m, 3H); 2,45-2,59 (m, 2H); 2,1-2,2 (m, 1H); 1,72-1,92 (m, 2H); 1,50-1,63 (m, 1H); 1,18-1,4 (m, 2H); 0,98-1,12 (m, 12H).

G lépés: N-(terc-Butoxi-karbonil)-S-(trifenil-metil)-cisztein-aldehid előállítása

Ezt a vegyületet Goel, Krolls, Stier és Kesten [Organic Syntheses, 67, 69 (1988)] N-(terc-butoxi-karbonil)-S-tritil-ciszteinre leírt eljárásával szintetizáljuk. A vegyületet fehér szilárd anyag formájában nyerjük, és tisztítás nélkül használjuk fel.

¹H-NMR (CDCh) δ 9,2 (1H, s), 7,5-7,1 (18H, m), 5,1 (1H, széles d),

3,92 (1H, m), 2,85-2,5 (2H, m), 1,4 (9H, s).

• ·

- 22 H lépés: N-[2(S)-(2(R)-(terc-Butoxi-karbonll-amlno)-3-(trifenil-metil)-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin-lakton

0,21 g, 0,6 mmól N-[2(S)-Amino-3(S)-metil-pentil-N-metil-izoleucil-homoszerin-laktont 3 ml metanolban oldunk, 0,1 g, 1,0 mmól KOAc-t, 0,5 g 3A molekulaszitát és 0,25 g, 0,6 mmól N-(terc-butoxi-karbonil-amino)-S-(trifenil-metil)-cisztein-aldehidet, majd 1 ml 1 mól/literes tetrahidrofurános nátrium-ciano-bór-hidridet adunk hozzá, és az elegyet szobahőmérsékleten 18 órán át keverjük. Ezután az elegyet szűrjük, 20 ml etil-acetát és telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között megosztjuk, majd a szerves fázist sóoldattal mossuk, és nátrium-szulfáton szárítjuk. Az elegyet szűrjük, beszárítjuk, a visszamaradó anyagot szilícium-dioxidon kromatografáljuk, eluensként diklór-metán és metanol 99:1 és 97:3 közötti gradiensét alkalmazzuk. így 33 %-os hozammal 0,12 g cím szerinti vegyületet nyerünk.

¹H-NMR (CD₃OD) δ 7,21-7,42 (m, 15H); 4,42-4,56 (m, 2H); 4,25-4,34 (m, 1H); 3,62-3,72 (m, 1H); 2,63-2,80 (m, 3H); 2,30-2,60 (m, 6H); 2,18-2,28 (m, 4H), 1,81-1,93 (m, 1H); 1,54-1,78 (m, 2H); 1,45 (s, 9H); 1,06-1,37 (m, 3H); 0,80-0,98 (m, 12H).

I lépés: N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin-lakton

0,12 g, 0,16 mmól N-[2(S)-(2(R)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3-trifenil-metil-merkapto-propil-aminoJ-SíSJ-metil-pentilj-N-metil-izoleucil-homoszerin-laktont 5 ml diklór-metánban oldunk, 2,5 ml CF₃CO₂H-t (TFA) és 0,10 ml, 0,64 mmól trietil-szilánt adunk hozzá, és az elegyet szobahőmérsékleten 0,5 órán át keverjük. Az oldatot szárazra pároljuk, és 0,1 % TFA tartalmú vízzel eldörzsöljük. A szi• ♦ · · ·· · · ···· ·· • · · · · · · • * · · ···· lárd trifenil-metánt kiszűrjük, majd a szűrletet Iiofilizáljuk. így 59 %-os hozammal 0,07 g cím szerinti vegyületet nyerünk.

¹H-NMR (CD₃0D) δ 4,45-4,55 (m, 2H); 4,28-4,35 (m, 1H); 3,52-3,61 (m, 1H); 3,49 (d, 1H, J = 6 Hz), 3,18-3,25 (m, 1H); 3,02-3,16 (m, 4H), 2,92 (t, 1H, J = 6 Hz); 2,85 (t, 1H, J = 6 Hz); 2,78 (s, 3H); 2,42-2,56 (m, 2H); 2,05-2,15 (m, 1H); 1,83-1,94 (m, 1H); 1,58-1,61 (m, 1H); 1,40-1,52 (m, 1H); 1,22-1,4 (m, 2H); 0,93-1,06 (m, 12H). Elemzési eredmények a C2oH4₀N403S*3CF₃C02H«0,6 H₂O képlet alapján:

Számított: C % = 40,72; H % = 5,77; N % = 7,31;

Talált: C % = 40,72; H % = 5,99; N % = 7,69.

J lépés: N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentilJ-N-metil-izoleucil-homoszerin

0,0025 g, 0,00326 mmól N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin-laktont 0,0506 ml metanolban és 0,0134 ml 1 n nátrium-hidroxidban oldunk, majd 0,262 ml metanolt adunk hozzá. A laktonnak hidroxi-savvá való alakulásáról HPLC elemzéssel és/vagy ¹H-NMR spektroszkópiás vizsgálattal győződünk meg.

2. Példa

N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino-3(S)-metil-pentil]-N-metil-fenilalanii-homoszerin-lakton és N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino-3(S)-metil-pentil]-N-metil-fenilalanil-homoszerin előállítása

A cím szerinti vegyületeket az 1. példában leírt eljárásokkal állítjuk elő, a B lépésben izoleucin-benzil-észter helyett fenilalanin-metil-észtert alkalmazva. A D lépés helyett a metil-észter hidrolízisét végezzük el az alábbiakban leírt módon.

• · • · · ·

- 24 D lépés: N-[(2S)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3(S)-metil-pentil)-N-metil-fenilalanin

1,92 g, 0,0049 mól N-[(2S)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3(S)-metil-pentil)-N-metil-fenilalanin-metil-észtert 20 ml metanolban oldunk, 4 ekvivalens, 19,56 ml, 0,0196 mól 1 n nátrium-hidroxidot adunk hozzá, és szobahőmérsékleten 18 órán át keverjük. Az elegyet ezután a metanol eltávolítására bepároljuk, 19,56 ml, 0,0196 mól 1 n hidrogén-kloriddal semlegesítjük, majd 3 x 30 ml etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázisokat egyesítjük, sóoldattal mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk. Szűrést és szárazra párlást követően 86 %-os hozammal 1,6 g cím szerinti vegyületet nyerünk, amelyet további tisztítás nélkül alkalmazunk.

Az 1. példa E-l. lépéseinek alkalmazásával a cím szerinti vegyületet trifluor-ecetsav-só formájában nyerjük, amelynek olvadáspontja 74 - 80 °C. ¹H-NMR (CD₃OD) δ 7,2-7,4 (m, 5H); 4,41-4,48 (m, 1 H); 4,24 (q, 1H, J = 9 Hz), 4,15 (t, 1H, 11 Hz), 3,97 (dd, 1H, J = 6, 11 Hz), 3,53 (t, 1H, J = 6 Hz); 2,95-3,4 (m, 8H); 2,82-2,92 (m, 1H); 2,81 (s, 3H); 2,12-2,3 (m, 2H); 1,82-1,95 (m, 1H); 1,35-1,52 (m, 1H); 1,15-1,23 (m, 1H); 0,85-1,03 (m, 6H).

Elemzési eredmények a C23H38 N4O3S . 2,85 CF3CO2H képlet alapján:

Számított: C % = 44,44; H% = 5,31; N % = 7,22;

Talált: C %= 44,36; H % = 5,46; N % = 7,50.

A laktont az 1. példa J lépésében leírt eljárással alakítjuk a hidroxisavvá.

• · · · ·· ·· ···· · · • · * · · · · • · ·· · · · · · · ······ • ♦ · ··· ·· · · ··

3. Példa

N-[2(S)-(2(R)-Ami no-3-merkapto-propil-ami no)-3-metil-butilJ-N-metil-fenilalanil-homoszerin-lakton és N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3-metil-butil]-N-metil-fenilalanil-homoszerin előállítása

A cím szerinti vegyúleteket az 1. és 2. példa eljárásai szerint állítjuk elő az A lépésben használt izoleucin helyett N-terc-butoxi-karbonil-valin alkalmazásával. A homoszerin-laktont trifluor-acetát-sója formájában nyerjük, amelynek olvadáspontja 55-60 °C. ¹H-NMR (CD₃OD) δ 7,21-7,39 (m, 5H); 4,43 (td, 1H, J = 4, 10 Hz),

4,22 (q, 1H, J = 9 Hz), 4,12 (t, 1H, J = 10 Hz), 3,50-3,58 (m, 1H); 3,02-3,35 (m, 8H); 2,82-2,90 (m, 2H); 2,82 (s, 3H); 2,04-2,28 (m, 3H); 1,05 (d, 3H, J = 6 Hz), 0,98 (d, 3H, J = 6 Hz).

Elemzési eredmények a C₂₂H3₆N₄O3S»3CF₃CO₂H*H₂O képlet alapján:

Számított: C% = 42,21; H % = 5,19; N % = 7,03;

Talált: C % = 42,17; H % = 5,03; N % = 7,26.

A hidroxisavat in situ állítjuk elő az 1. példa J lépése szerint.

4. Példa

N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-norvalil-homoszerin-lakton és N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-no rvalil-homoszerin

A cím szerinti vegyúleteket az 1. és 2. példa eljárásai szerint állítjuk elő a B lépésben izoleucin-benzil-észter helyett norvalin-metil-észtert alkalmazva. A homoszerin-laktont trifluor-acetát-sója formájában nyerjük, amelynek olvadáspontja 50-55 °C. ¹H-NMR

- 26 (CD₃OD) δ 4,45-4,51 (m, 2H); 4,25-4,38 (m, 1 H); 3,75-3,82 (m, 1H);

3,43 (t, 1H, J = 6 Hz); 2,82-3,15 (m, 7H); 2,88 (s, 3H); 2,4-2,55 (m, 2H); 1,78-1,97 (m, 3H); 1,32-1,48 (m, 3H); 1,15-1,32 (m, 1H); 1,01 (q, 6H, J = 9 Hz), 1,90 (d, 3H, J = 7 Hz).

Elemzési eredmények a Ci_eH_3eN4O₃S . 3CF3CO2H . 0,75 H₂O képlet alapján:

Számított: C % = 39,60; H % = 5,65; N % = 7,39;

Talált: C % = 49,58; H % = 5,65; N % = 7,48.

A hidroxisavat in situ állítjuk elő az 1. példa J lépése szerint.

5. Példa

N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-metionin-metil-észter

A cím szerinti vegyületet az 1. példa A-l lépései szerint állítjuk elő az E lépésben homoszerin-lakton helyett metionin-metil-észtert alkalmazva. A trifluor-acetát-sót liofilizálást követően nyerjük. ¹H-NMR (CD₃OD) δ 4,65-4,73 (m, 1H); 3,75 (s, 3H); 3,42-3,54 (m, 2H); 2,87-3,22 (m, 7H); 2,73 (s, 3H); 2,49-2,58 (m, 2H); 2,12-2,25 (m, 1H); 2,10 (s, 3H); 1,98-2,1 (m, 2H); 1,8-1,92 (m, 1H); 1,62-1,77 (m, 1H); 1,21-1,48 (m, 3H); 0,9-1,05 (m, 12H).

Elemzési eredmények a C₂₂H₄6N4O₃S2*2,25 CF₃CO₂H képlet alapján:

Számított: C % = 43,28; H % = 6,61; N % = 7,62;

C % = 43,23; H % = 6,54; N % = 7,81.

Talált:

• · • * ·· ···· ·« · ·« · ·· · · · ·

6. Példa

N-[2(S)-(2(R)-Amino-merkapto-propll-amlno)-3(S)-metll-pentil]-N-metil-izoleucil-metionin

A lépés: N-[2(S)-(2(R)-(terc-Butoxi-karbonil-amino-3-trifenil-metil-merkapto-propil-aminoj-SíSJ-metil-pentilJ-N-metil-izoleucil-metionin

0,19 g, 0,232 mmól N-[2(S)-(2(R)-(terc-Butoxi-karbonil-amino-3-trifenil-metil-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-metionin-metil-észtert - amelyet az 5. példában köztitermékként állítottunk elő - 4 ml metanolban oldunk, 0,927 ml, 0,927 mmól 1 n nátrium-hidroxid-oldatot adunk hozzá, és az elegyet 3,5 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután az elegyet bepároljuk, a viszszamaradó anyagot 20 ml vízben oldjuk, 0,927 ml, 0,927 mmól 1 n hidrogén-kloriddal semlegesítjük, és 3 x 20 ml etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázisokat egyesítjük, sóoldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, majd beszárítjuk. így 96 %-os hozammal 0,18 g cím szerinti vegyületet nyerünk, amelyet további tisztítás nélkül használunk fel.

B lépés: N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentilJ-N-metil-izoleucil-metionin

0,18 g, 0,223 mmól N-[2(S)-(2(R)-(terc-Butoxi-karbonil-amino-3-trifenil-metil-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-metionint 4 ml diklór-metánban oldunk, 2 ml CF₃CO₂H-t és 0,143 ml, 0,893 mmól triétil-szilánt adunk hozzá, és az elegyet szobahőmérsékleten 1,5 órán át keverjük. Ezután az elegyet bepároljuk, 20 ml hexán és 20 ml 0,1 % trifluor-ecetsavat tartalmazó víz között megosztjuk, és a vizes fázist liofilizáljuk. Az így kapott nyersterméket preparatív HPLC-val tisztítjuk, újra liofilizáljuk, így • · · « 9 • · · · «··· • · · ·· · ·· ·« _β « %-os hozammal 0,075 g cím szerinti vegyületet nyerünk trifluor-acetát-só formájában. ¹H-NMR (CD₃OD) δ 4,59-4,68 (m, 1H); 3,47-3,6 (m, 2H); 3,16 (d, 1H, J = 6 Hz), 3,06 (s, 3H); 2,85-3,03 (m, 3H);

2,77 (s, 3H); 2,5-2,7 (m, 2H); 2,17-2,29 (m, 1H); 2,11 (s, 3H); 1,98-2,1 (m, 2H); 1,8-1,93 (m, 1H); 1,58-1,75 (m, 1H); 1,2-1,5 (m, 3H); 0,85-1,05 (m, 12H).

Elemzési eredmények a C₂iH44N4O₃S2*2,75 CF₃CO₂H képlet alapján:

Számított: C % = 40,89; H % = 6,05; N % = 7,20;

Talált: C% = 41,18; H % = 6,21; N % = 7,25.

7. példa

N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-fenilalanil-metionin-metil-észter

A cím szerinti vegyületet az 5. példában leírt eljárások szerint állítjuk elő, a B lépésben izoleucin-benzil-észter helyett fenilalanin-metil-észtert alkalmazva, és a terméket trifluor-acetát-só formájában izoláljuk. ¹H-NMR (CD₃OD) δ 7,26-7,37 (m, 5H); 4,49-4,55 (m, 1H); 4,16 (t, 1H, J = 8 Hz), 3,70 (s, 3H); 3,53 (t, 1H, J = 6 Hz); 2,9-3,3 (m, 7H); 2,89 (d, 2H, J = 6 Hz); 2,70 (s, 3H); 2,24-2,6 (m, 2H); 2,05 (s, 3H); 1,8-2,17 (m, 3H); 1,33-1,48 (m, 1H); 1,18-1,3 (m, 1H); 0,9-1,0 (m, 6H). MS (M + 1) 513.

8. Példa

N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-ami no)-3(S)-metil-pentil]-N-meti I-fenilalani I-metioni n

A cím szerinti vegyületet a 7. példa szerint kapott köztitermék útján állítjuk elő a 6. példában leírt eljárásokkal, és trifluor-acetát-sója formájában izoláljuk.

• · · · · · « • · · · ···· ·· ···· ·» ·· ··

- 29 ’H-NMR (CDsOD) δ 7,24-7,4 (m, 5H); 4,4-4,5 (m, 1H); 4,12 (t, 1H, J = 8 Hz), 3,45-3,52 (m, 1H); 2,8-3,25 (m, 7H); 2,66 (s, 3H); 2,6-2,7 (m, 1H); 2,23-2,5 (m, 2H); 2,05-2,2 (m, 1H); 2,04 (s, 3H); 1,9-2,04 (m, 2H); 1,76-1,9 (m, 1H); 1,12-1,46 (m, 2H); 0,85-1,0 (m, 6H). Elemzési eredmények a C24H42N4O₃S2*3CF₃CO2H«0,5 CH₃CN képlet alapján:

Számított: C % = 43,22; H % = 5,44; N % = 7,32;

Talált: C % = 43,22; H % = 5,67; N % = 7,68.

9. Példa

N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-norvalil-metionin-metil-észter

A cím szerinti vegyületet az 1. és 2. példa eljárásai szerint állítjuk elő a B lépésben izoleucin-benzil-észter helyett norvalin-metil-észtert és az E lépésben homoszerin-lakton helyett metionin-metil-észtert alkalmazva, valamint a C lépést az alábbi alternatív eljárással helyettesítve.

C lépés: N-[(2S)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3(S)-metil-pentilj-N-metil-norvalin-metil-észter

1,15 g, 3,6 mmól N-[(2S)-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-3(S)-metil-pentil)-norvalin-metil-észtert 15 ml metanolban oldunk, 0,21 ml, 3,6 mmól ecetsavat, 0,61 ml, 7,2 mmól 37 %-os vizes formaldehidet és 0,34 g, 5,4 mmól nátrium-ciano-bór-hidridet adunk hozzá, és az elegyet szobahőmérsékleten argongáz atmoszférában keverjük. 4 óra elteltével az elegyet besűrítjük, 20 ml etil-acetát és 20 ml telített vizes ammónium-hidroxid-oldat között megosztjuk, majd a szerves fázist nátrium-szulfáton szárítjuk, és bepároljuk. így 83 %-os hozammal 1,03 g cím szerinti vegyületet nyerünk színtelen olaj formájában. ¹H-NMR (CD₃OD) δ 3,68 (s, 3H); 3,52-3,6 (m, 1H); 3,27

- 30 (t, 1H, J = 8 Hz), 2,66 (dd, 1H, J = 5, 12 Hz), 2,42 (dd, 1H, J = 5, 12 Hz), 2,28 (s, 3H); 1,57-1,69 (m, 3H); 1,44 (s, 9H); 1,2-1,5 (m, 3H); 1,0-1,2 (m, 1H); 0,86-1,0 (m, 9H).

Az 1. példa D-l. lépéseit követve a cím szerinti vegyületet hidrogén-klorid-sója formájában izoláljuk. ¹H-NMR (CD3OD) δ 4,66-4,72 (m, 1H); 3,89-3,95 (m, 1H), 3,74 (s, 3H); 3,45-3,6 (m, 1H);

3,1-3,4 (m, 4H), 2,94 (s, 3H); 2,89-3,2 (m, 3H); 2,58-2,73 (m, 2H);

2,12 (s, 3H); 1,88-2,25 (m, 4H), 1,2-1,65 (m, 5H); 0,91-1,1 (m, 9H). Elemzési eredmények a C₂iH₄4N4O3S₂«4,5 HCI képlet alapján: Számított: C% = 40,11; H % = 7,77; N % = 8,91;

Talált: C % = 40,03; H % = 7,86; N % = 8,65.

10. Példa

N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil· -pentil]-N-metil-norvalil-metionin

A cím szerinti vegyületet a 9. példa szerinti prekurzorból állítjuk elő a 6. példában leírt hidrolízis és védőcsoport eltávolítás! eljárások szerint, a terméket trifluor-acetát-sója formájában izoláljuk. ¹H-NMR (CD3OD) δ 4,57-4,66 (m, 1H); 3,80 (t, 1H, J = 8 Hz), 3,04-3,5 (m, 7H); 2,8-2,97 (m, 4H), 2,90 (s, 3H); 2,47-2,7 (m, 2H); 2,13-2,3 (m, 1H); 2,09 (s, 3H); 1,8-2,0 (m, 2H); 1,34-1,6 (m, 2H); 1,2-1,32 (m, 1H); 0,88-1,1 (m, 9H).

Elemzési eredmények a C₂₀H42N4O₃S₂*3CF₃CO₂H*H₂O képlet alapján;

Számított: C% = 38,51; H % = 5,84; N% = 6,91;

Talált: C % = 38,51; H% = 5,71; N % = 7,23.

··* · · · ·· ··«· «« * · · · « · · • · · · ···« • · ···· ·· «k » · ·

11. Példa

N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amlno)-3(S)-metll-pentil]-N-metii-D-norvalil-homoszerin-lakton ős N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-D-norvalil-homoszerin

A cím szerinti vegyületeket az 1. példában leírt eljárásokkal állítjuk elő az izoleucil-benzil-észter helyett D-norvalin-metil-észtert alkalmazva, és a terméket trifluor-acetát-sója formájában izoláljuk. ¹H-NMR (CD₃OD) δ 4,49 (t, 1H, J = 9 Hz); 4,28-4,3 (m, 1H); 3,74-3,8 (m, 1H); 3,45-3,5 (m, 1H); 2,8-3,15 (m, 8H); 2,86 (s, 3H); 3,55-2,63 (m, 1H); 2,26-2,73 (m, 1H); 1,75-1,95 (m, 3H); 1,18-1,54 (m, 5H); 0,88-1,02 (m, 9H).

Elemzési eredmények a Ci9H₃₈N4O3S«3CF₃CO₂H*0,75 H₂O képlet alapján:

Számított: C % = 39,60; H % = 5,65; N % = 7,39;

Talált: C % = 39,62; H % = 6,03; N % = 7,23.

A hidroxisavat in situ állítjuk elő az 1. példa J lépése szerint.

12. Példa 3(S)-{N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-meti l-pentil]-N-metil-izoleucil-ami no}-6,6-di metil-tetrahidropiran-2-on és 2(S)-{N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-meti l-pentil]-N-metil-izoleucil-ami no}-5-metil-5-hidroxi-hexánsav

A lépés: 2-N-(terc-Butoxi-karbonil)-amino-5-hidroxi-5-metil-hexánsav

2,52 g, 0,0096 mól N-(terc-Butoxi-karbonil)-glutaminsav-5-metil-észter 32 ml tetrahidrofuránban készült oldatához 30,2 ml, ····

- 32 • · · · ·· · ··β ·« *· »·

0,042 mól 1,4 mól/l-es éteres metil-lítiumot adunk argongáz atmoszférában, keverés mellett, olyan sebességgel, hogy a reakció hőmérsékletét -60 °C alatt tartsuk. Az adagolás befejezése után az elegyet -70 ^eC hőmérsékleten 1 órán át keverjük, majd 30 ml 10 %-os citromsavoldatot adunk hozzá, és 3 x 30 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos fázisokat egyesítjük, sóoldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, majd besűrítjük. A visszamaradó anyagot szilícium-dioxidon kromatografáljuk, eluensként kloroform, metanol és ecetsav 90:9:1 arányú elegyét alkalmazzuk, így 48 %-os hozammal 1,2 g cím szerinti vegyületet nyerünk sárga olaj formájában, amely állás közben megszilárdul.

¹H-NMR (CDCI₃) δ 55,28 (széles s, 1H), 4,35-4,43 (m, 1H); 1,75-2,0 (m, 2H); 1,58 (t, 2H, 9 Hz), 1,46 (s, 9H); 1,24 (s, 6H).

B lépés: SfSHterc-Butoxi-karbonilj-amino-G.G-dimetil-tetrahidropiran-2-on

1,06 g, 4,05 mmól 2-N-(terc-Butoxi-karbonil)-amino-5-hidroxi-5-metil-hexánsavat, 1,01 g, 4,86 mmól diciklohexil-karbodiimidet (DCC) és 0,05 g, 0,4 mmól 4-dimetil-amino-piridint (DMAP) 40 ml diklór-metánban oldunk keverés mellett, szobahőmérsékleten, argongáz atmoszférában. 0,5 óra elteltével az elegyet a diciklohexiI-karbamid eltávolítására szűrjük, a szürletet besűrítjük, és 100 ml etil-acetát és 50 ml 10 %-os citromsavoldat között megosztjuk. A szerves fázist elkülönítjük, 3 x 50 ml vízzel, majd 1 x 50 ml sóoldattal mossuk, és nátrium-szulfáton szárítjuk. Szűrést és besűrítést követően a visszamaradó anyagot szilícium-dioxidon kromatografáljuk, eluensként etil-acetát és hexán 1:2 arányú elegyét alkalmazzuk. így 61 %-os hozammal 0,6 g cím szerinti vegyületet nyerünk fehér, szilárd anyag formájában. ¹H-NMR (CDCI₃) δ 5,33 (széles s, * · · · 9 9 9 • · ·· « »<·« •· ·<·· ·· «· ’,«*

- 33 1Η), 4,04-4,17 (m, 1H); 2,37-2,48 (m, 1H); 1,8-2,0 (m, 3H); 1,45 (s, 9H); 1,41 (s, 6H).

C lépés: 3(S)-Amino-6,6-dimetil-tetrahidropiran-2-on-hidrogén-klorid

0,36 g, 1,48 mmól 3(S)-(terc-Butoxi-karbonil)-amino-6,6-dimetil-tetrahidropiran-2-ont 30 ml etil-acetátban oldunk, és -50 °C hőmérsékleten 20 percen át hidrogén-klorid gázzal reagáltatjuk, és -30 és -50 °C közötti hőmérsékleten 20 percig keverjük. Az oldaton 10 percig argongázt buborékoltatunk át, majd besűrítjük. így 100 %-os hozammal 0,265 g cím szerinti vegyületet nyerünk fehér, szilárd anyag formájában. ¹H-NMR (CD₃0D) δ 4,05-4,15 (m, 1 H); 2,2-2,32 (m, 1H); 2,0-2,15 (m, 3H); 1,48 (s, 3H); 1,43 (s, 3H).

D lépés: 3(S)-{N-[2(S)-(2(R)-Amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-amino}-3-metil-tetrahidropiran-2-on

A cím szerinti vegyületet az 1. példában leírt eljárásokkal állítjuk elő az E lépésben homoszerin-lakton helyett 3(S)-amino-6,6-dimetil-tetrahidropiran-2-on-hidrogén-klorid alkalmazásával. A cím szerinti vegyületet trifluor-acetát-só formájában nyerjük. ¹H-NMR (CD₃OD) δ 4,1-4,2 (m, 1H); 3,55 (d, 2H, J = 6 Hz); 3,0-3,3 (m, 6H); 2,90 (t, 2H, 6 Hz), 2,81 (s, 3H); 2,28-2,39 (m, 1H); 1,82-2,15 (m, 5H); 1,55-1,6 (m, 1H); 1,53 (s, 3H); 1,45 (s, 3H); 1,2-1,4 (m, 2H); 0,92-1,04 (m, 12H).

Elemzési eredmények a C₂₃H46 O₃S*3CF₃CO₂H*1,5 H₂O képlet alapján:

Számított: C % = 42,07; H % = 6,33; N % = 6,77;

Talált: C % = 42,20; H % = 6,10; N % = 7,16.

A hidroxisavat in situ állítjuk elő az 1. példa J lépése szerint.

« ·

13. Példa 3(S)-{N-[2(S)-(2(R)-Amlno-3-merkapto-propil-amlno)-3(S)-meti l-pentil]-N-metil-Izol euci l-amlno}-3-meti l-tetrahldropiran-2-on és 2(S)-{N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-ami no)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-ami no}-2-metil-5-hidroxi-pentánsav

A lépés: Σ-Αηιίηο-Ζ-πιβίΙΙ-δ-ΐΊίάΓΟχΙ-ροηίέηββν

5,0 g, 0,029 mól Finoman őrölt racém a-metil-glutaminsavat 30 ml tetrahidrofuránban szuszpendálunk, és 32,32 ml, 0,032 mól 1 mól/literes tetrahidrofurános trietil-boránnal visszafolyató hűtő alatt 36 órán át forraljuk. Az elegyet 0 °C hőmérsékletre hűtjük, majd az oldathoz cseppenként hozzáadunk 35,26 ml, 0,035 mól 1 mól/l-es tetrahidrofurános boránt, és az elegyet 0 °C hőmérsékleten 3 órán át keverjük. Az elegyhez ezután 30 ml 5 %-os vizes hidrogén-klorid-oldatot adunk, 0,5 órán át keverjük, rotációs bepárlón bepároljuk, és a visszamaradó anyagot 44 ml 5 %-os hidrogén-kloridban oldjuk, majd 0,75 órán át visszafolyató hűtő alatt forraljuk. Az elegyet lehűtjük, besűrítjük, a visszamaradó anyagot 50 ml metanolban veszszük fel, majd besűrítjük. Ezt az eljárást háromszor megismételjük, az így kapott 5,69 g cím szerinti vegyületet nem tisztítjuk.

B lépés: 2-(terc-Butil-oxi-karbonil)-amino-2-metil-5-hidroxi-pentánsav

5,69 g, 0,031 mól 2-Amino-2-metil-5-hidroxi-pentánsavat 60 ml

1,2-dimetoxi-etán (DME) és 30 ml víz elegyében 0 °C hőmérsékleten való keveréssel oldunk. Az oldat pH-ját 1 n nátrium-hidroxid-oldattal 9 és 10 közé állítjuk be, majd cseppenként hozzáadjuk

7,45 g, 0,034 mól di(terc-butil)-dikarbonát 60 ml DME és 30 ml víz elegyében készült oldatát, miközben az elegyet 1 n nátrium• · · 9 · · « • · ·¥ · »«· • · · · · · * « «· ·· «··· ·φ ·· »·

- 35 -hidroxid-oldat adagolásával pH = 9-10 értéken tartjuk. Az elegyet ezután szobahőmérsékleten 48 órán át keverjük, időszakonként 1 n nátrium-hidroxidot adunk hozzá a pH lúgos értéken tartására, majd az elegyet besűrítjük, és éter és víz között megosztjuk. A vizes fázist 10 %-os citromsavoldattal megsavanyítjuk, és 3 x 50 ml etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázisokat egyesítjük, sóoldattal mossuk, és nátrium-szulfáton szárítjuk. Az elegyet szűrjük, beszárítjuk, így 3,0 g cím szerinti vegyületet nyerünk nyers állapotban.

C lépés: 3-(terc-Butoxí-karbonil)-amino-3-metil-tetrahidropiran-2-on

3,0 g, 0,012 mól 2-(terc-Butil-oxi-karbonil)-amino-2-metil-5-hidroxi-pentánsavat és 2,56 g, 0,013 mól EDC-t 20 ml dimetil-formamidban oldunk, és az oldatot szobahőmérsékleten 18 órán át keverjük. A reakcióelegyet szárazra pároljuk, a visszamaradó anyagot 30 ml etil-acetát és 30 ml víz között megosztjuk, a szerves fázist elkülönítjük, sóoldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, majd besűrítjük. A visszamaradó anyagot szilícium-dioxidon kromatografáljuk, etil-acetát és hexán 1:3 arányú elegyének eluensként való alkalmazásával. így 31 %-os hozammal 0,86 g cím szerinti vegyületet nyerünk. ¹H-NMR (CDCI₃) δ 5,1 (széles s, 1H), 4,35-4,55 (m, 2H); 2,49-2,64 (m, 1H); 1,78-2,1 (m, 3H); 1,45 (s, 3H);

1,41 (s, 9H).

D lépés: 3-Amino-3-metil-tetrahidropiran-2-on-hidrogén-klorid

A cím szerinti vegyületet a 12. példa C lépése szerint állítjuk elő, a kapott terméket további tisztítás nélkül használjuk fel.

- 36 E lépés: 3(S)-{N-[2(S)-(2(R)-Amlno-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-amino}-3-metíl· -tetrahidropiran-2-on

A cím szerinti vegyületet az 1. példában leírt eljárásokkal állítjuk elő, az E lépésben a homoszerin-lakton helyett 3-amino-3-metil-tetrahidropiran-2-on-hidrogén-klorid alkalmazásával. A cím szerinti vegyületet trifluor-acetát-só formájában nyerjük. ’H-NMR (CD₃OD) δ 4,42-4,55 (m, 2H); 3,48-3,6 (m, 2H); 3,17-3,28 (m, 1H); 2,88-3,15 (m, 5H); 2,79 (s, 3H); 2,3-2,45 (m, 1H); 1,97-2,18 (m, 2H); 1,82-11,98 (m, 3H); 1,6-1,73 (m, 1H); 1,56 (s, 3H); 1,21-1,5 (m, 4H), 0,86-1,05 (m, 12H).

Elemzési eredmények a C₂2H44N4O3S»3CF3CO₂H képlet alapján:

Számított: C % = 42,75; H % = 6,02; N % = 7,12;

Talált: C % = 42,79; H % = 6,18; N % = 7,19.

A hidroxisavat in situ állítjuk elő az 1. példa J lépése szerinti eljárással.

14. Példa

Ras-farnezil-transzferáz in vitro gátlása

Marha agyból származó farnezil-protein-transzferázt (FT-áz) kromatografálunk DEAE-Sephacel-en (Pharmacia, 0-0,8 mól/l-es nátrium-klorid gradiens elúció), N-oktil-agarózon (Sigma, 0-0,6 mól/l-es nátrium-klorid gradiens elúció), és mono Q HPLC oszlopon (Pharmacia, 0-0,3 mól/l-es nátrium-klorid gradiens elúció). 3,5 pmól/l-es Ras-CVLS-t, 0,25 pmól/l-es [³H]FPP-t és a megjelölt vegyületeket részlegesen tisztított marha enzim készítménnyel, vagy rekombináns humán enzim készítménnyel inkubálunk. Az alábbi 1. táblázatban bemutatott FT-áz adatok a vizsgálandó vegyületeknek a

- 37 Ras farnezilezés in vitro gálására való képességét mutatják, ezt a vizsgálatot Pompliano és munkatársai [Biochemistry 31. 3800 (1992)] eljárásával végeztük.

1. Táblázat

Ras farnezilezés gátlása a találmány szerinti vegyületekkel*

Vegyület ICso (nmól/l)

N-[2(S)-2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)- 72

-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin (marha)

N-[2(S)-2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)- 20

-metil-pentill-N-metil-izoleucil-metionin (rekombináns humán) * (Az IC50 a vizsgálandó vegyületeknek az a koncentrációja, amely a leírt vizsgálati körülmények mellett az FT-áz 50 %-os gátlását eredményezi.)

15. Példa

In vivő Ras farnezilezési vizsgálat

Ebben a vizsgálatban a v-Ras sejtvonalat alkalmaztuk, amely vírus Ha-ras p21-t expresszál. A vizsgálatot lényegében a DeClue, J. E. és munkatársai [Cancer Research, 51, 712-717 (1991)] által leírt módon hajtottuk végre. 10 cm-es csészékben 50 - 75 %-os összenőttségig tenyésztett sejteket kezeltünk a vizsgálandó vegyületekkel (az oldószer, metanol vagy dimetil-szulfoxid végkoncentrációja 0,1 %). 4 órán át 37 °C hőmérsékleten végzett inkubálást követően a sejteket 10 % reguláris DMEM-vel, 2 % magzati borjúszérummal és 400 pCi[³⁵S]metioninnal (1000 Ci/mmól) kiegészített 3 ml metionin-mentes DMEM-ben jelzéssel láttuk el. További 20 óra elteltével a sejteket 1 ml lízis pufferben (1 % NP40/20 mmól/liter • ·

- 38 HEPES, pH 7,5/5 mmól/l MgCI₂/1 mmól/l DTT/10 pg/ml aprotinen/2 pg/ml leupeptin/2 pg/ml antipain/0,5 mmól/l PMSF) lizáltuk, és a lizátumot 100000 x g mellett 45 percig végzett centrifugálással kiülepítettük. A lizátumok azonos savval lecsapható leütésszámot tartalmazó alikvot részeit 1 ml-re egészítettük ki IP pufferrel (DTT nélküli lízis puffer) és Y13-259 Ras-fajlagos monoklonális antitesttel immunprecipitáltuk [Furth, M.E. és munkatársai, J. Virol. 43, 294-304, (1982)]. Az antitest 2 órán át 4 °C hőmérsékleten való inkubálását követően 200 pl nyúl anti-patkány IgG-vel bevont protein A-Sepharose 25 %-os szuszpenziót adagoltunk 45 perc alatt. Az immunprecipitátumokat IP mosópufferrel (20 nmól/l HEPES, pH 7,5/1 mmól/l EDTA/1 % Triton X-100/0,5 % dezoxikolát/O,1 % SDS/0,1 mól/l NaCI) négyszer mostuk, SDS-PAGE minta pufferben forraltuk, és 13 %-os akrilamid gélekre vittük. Amikor a színezék front a gél alját elérte, a géleket rögzítettük, világosító oldatba (Enlightening) áztattuk, szárítottuk és autoradiográfiásan mértük. A farnezilezett és nem-farnezilezett Ras-proteineknek megfelelő frakcióknak megfelelő sávok intenzitását hasonlítottuk össze a fehérjéhez való farnezil transzfer gátlási százalékának meghatározására. A példaként szereplő vizsgálandó vegyületekkel kapott eredményeinket a 2. táblázatban ismertetjük.

2. táblázat

Ras farnezilezés gátlása a találmány szerinti vegyületekkel v-Ras sejtvonalban

Vegyület IC₅o (pmól/l)

N-[2(S)-2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentill-N-metil-izoleucil-homoszerin-lakton 50

- 39 N-[2(S)-2(R)-amino-3-merkaptO'propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-metionin-metil-észter 5

Claims

Szabadalmi igénypontok

1. Egy farnezil-protein-transzferáz gátló vegyület vagy prodrogja, amely az (V) általános képlettel jellemezhető - a képletben

R^c jelentése (a) vagy (b) általános képletú csoport;

R¹ jelentése hidrogénatom, alkil-, aralkil-, acil-, aracil-, aroil-, alkiΙ-szulfonil-, aralkil-szulfonil- vagy aril-szulfonil-csoport, ahol az alkil- és acilcsoportok 1 - 6 szénatomosak, és egyenes vagy elágazó láncúak,

R² és R³ jelentése egymástól függetlenül

a) természetes előfordulású aminosavak oldallánca,

b) természetes előfordulású aminosavak oldalláncának oxidált formája, amely lehet metionin-szulfoxid és metionin-szulfon és

c) adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoportok, például allil-, ciklohexil-, fenil-, piridil- vagy imidazolilcsoport, vagy telített, 2-8 szénatomos egyenes vagy elágazó szénlánc, amely csoportok mindegyikénél az alifás csoportok adott esetben egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesítettek lehetnek;

R⁴ jelentése

a) természetes előfordulású aminosavak oldallánca,

b) természetes előfordulású aminosavak oldalláncának oxidált formája, amely lehet metionin-szulfoxid és metionin-szulfon és

c) adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoportok, például allil-, ciklohexil-, fenil-, piridil- vagy imidazolilcsoport, vagy telített, 2-8 szénatomos egyenes vagy elágazó szénlánc, amely csoportok mindegyikénél az alifás csoportok adott esetben egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesítettek lehetnek; és

d) -CH₂CH₂OH vagy -CH₂CH₂CH₂OH;

R⁵ jelentése 1 - 6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely adott esetben egy aromás vagy heteroaromás csoporttal helyettesített lehet;

R^e jelentése hidrogénatom, adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoport, például 1-8 szénatomos, egyenes vagy elágazó telített szénlánc, ahol az alifás helyettesítők adott esetben egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesítettek lehetnek;

n értéke 0, 1 vagy 2;

valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói és diszulfidjai.
2. Egy az 1. igénypont szerinti (V) általános képletű vegyületek körébe tartozó (I) általános képletű farnezil-protein-transzferáz gátló vegyület - a képletben

R¹ jelentése hidrogénatom, alkilcsoport, aralkilcsoport, acilcsoport, aracilcsoport, aroilcsoport, alkil-szulfonil-csoport, aralkil-szulfonil-csoport, vagy aril-szulfonil-csoport, ahol az alkilés acilcsoportok 1 - 6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú szénhidrogének;

R², R³ és R⁴ természetes előfordulású aminosavak oldalláncai, beleértve ebbe oxidált formáikat, amelyek lehetnek metionin-szulfoxid vagy metionin-szulfon; vagy lehetnek még helyettesített vagy helyettesítő nélküli alifás, aromás vagy heteroaromás csoportok, például allil, ciklohexil-, fenil-, piridil- vagy imidazolilcsoport, vagy 2-8 szénatomos telített láncok, amelyek egyenesek vagy el• · · · • · ·

- 42 ágazóak, és az alifás helyettesítők egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesítettek lehetnek;

R⁵ jelentése 1 - 6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely egy aromás vagy heteroaromás helyettesítőt hordozhat;

valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói.
3. A 2. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek az 1. igénypont szerinti (V) általános képletű vegyületek körébe tartozó (II) általános képletű prodrogja - a képletben

R¹ jelentése hidrogénatom, alkil-, aralkil-, acil-, aracil-, aroil-, alkil-szulfonil-, aralkil-szulfonil- vagy aril-szulfonil-csoport, ahol az alkil- és acilcsoportok egyenes vagy elágazó láncúak és 1-6 szénatomosak;

R², R³ és R⁴ jelentése természetes előfordulású aminosavak oldalláncai, beleértve oxidált formáikat, amelyek lehetnek metionin-szulfoxid vagy metionin-szulfon; vagy jelentésük adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoport, például allil-, ciklohexil-, fenil-, piridil- vagy imidazolilcsoport, vagy 2-8 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú telített szénlánc, ahol az alifás helyettesítők egy aromás vagy heteroaromás gyűrűt hordozhatnak helyettesítőként;

R⁵ jelentése 1 - 6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely adott esetben egy aromás vagy heteroaromás helyettesítőt hordoz;

R⁶ jelentése adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoport, például egy egyenes vagy elágazó láncú 1 - 8 szénatomos telített szénlánc, ahol az alifás helyettesítők egy aromás vagy heteroaromás gyűrűt hordozhatnak helyettesítőként;

valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói és diszulfidjai.
4. Egy az 1. igénypont szerinti (V) általános képletű vegyületek körébe tartozó (III) általános képletű farnezil-protein-transzferáz gátló vegyület - a képletben

R¹ jelentése hidrogénatom, alkil-, aralkil-, acil-, aracil-, aroil-, alkil-szuIfoniI-, aralkil-szulfonil- vagy aril-szulfonil-csoport, ahol az alkil- és acilcsoportok 1-6 szénatomosak és egyenes vagy elágazó láncúak;

R² és R³ természetes előfordulású aminosavak oldalláncai, beleértve oxidált formáikat, amelyek lehetnek metionin-szulfoxid vagy metionin-szulfon; vagy jelentésük adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoport, például allil-, ciklohexil-, fenil-, piridil- vagy imidazolilcsoport, vagy 2-8 szénatomos egyenes vagy elágazó szénlánc, ahol az alifás helyettesítők egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesítettek lehetnek;

R⁵ jelentése 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesített lehet;

n értéke 0, 1 vagy 2;

valamint fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói.
5. A 4. igénypont szerinti (III) általános képletű vegyületeknek az 1. igénypont szerinti (V) általános képletű vegyületek körébe tartozó (IV) általános képletű prodrogja - a képletben

R¹ jelentése hidrogénatom, alkil-, aralkil-, acil-, aracil-, aroil-, alkil-szuIfoniI-, aralkil-szulfonil- vagy aril-szulfonil-csoport, ahol az alkil- és acilcsoportok 1-6 szénatomosak és egyenes vagy elágazó láncúak;

- 44 R² és R³ természetes előfordulású aminosavak oldalláncai, beleértve ezek oxidált formáit, amelyek lehetnek metionin-szulfoxid vagy metionin-szulfon, vagy jelentésük adott esetben helyettesített alifás, aromás vagy heteroaromás csoport, például allil-, ciklohexil-, fenil-, piridil- vagy imidazolilcsoport vagy 2-8 szénatomos egyenes vagy elágazó telített szénlánc, ahol az alifás helyettesítők egy aromás vagy heteroaromás gyűrűvel helyettesítettek lehetnek;

R⁵ jelentése 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, amely adott esetben egy aromás vagy heteroaromás csoporttal helyettesített lehet; és n értéke 0, 1 vagy 2, valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói és diszulfidjai.
6. Egy farnezil-protein-transzferáz gátló vegyület, amely: N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin, N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-fenilalanil-homoszerin,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3-metil-butil]-N-metil-fenilalanil-homoszerin,

2(S)-{N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-amino}-2-metil-5-hidroxi-pentánsav, 2(S)-{N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-amino}-5-metil-5-hidroxi-hexánsav, N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-norvalil-homoszerin,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-metionin,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-fenilalanil-metionin, • · · · . . · ···

........ ..· ·..·

- 45 N-[2(S)-(2(R)-amíno-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-norvalil-metionin,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-D-norvalil-homoszerin, valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói és diszulfidjai.
7. Egy farnezil-protein-transzferáz gátló vegyület prodrogja, amely: N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin-lakton,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-fenilalanil-homoszerin-lakton,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3-metil-butil]-N-metil-fenilalanil-homoszerin-lakton,

3(S)-{N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-amino}-3-metil-tetrahidropiran-2-on, N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-norvalil-homoszerin-lakton,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-metionin-metil-észter,

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-fenilalanil-metionin-metil-észter,

3(S)-{N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-amino}-6,6-dimetil-tetrahidropiran-2-on, N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-norvalil-metionin-metil-észter, vagy

N-[2(S)-(2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-D-norvalil-homoszerin-lakton,

- 46 valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói és diszulfidjai.
8. Egy a 4. igénypont szerinti vegyület, amely az (1) képletű N-[2(S)-2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin.
9. Egy az 5. igénypont szerinti vegyület, amely a (2) képletű N-[2(S)-2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-homoszerin-lakton.
10. Egy a 2. igénypont szerinti vegyület, amely a (3) képletű N-[2(S)-2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-metionin.
11. Egy a 3. igénypont szerinti vegyület, amely a (4) képletű N-[2(S)-2(R)-amino-3-merkapto-propil-amino)-3(S)-metil-pentil]-N-metil-izoleucil-metionin-metil-észter.
12. Egy gyógyászati készítmény, amely gyógyászati célra alkalmas hordozóanyagot és abban diszpergálva egy az 1. igénypont szerinti vegyület hatékony mennyiségét tartalmazza.
13. Egy a 12. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a 3. igénypont szerinti vegyület hatékony mennyiségét tartalmazza.
14. Egy a 12. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az 5. igénypont szerinti vegyület hatékony mennyiségét tartalmazza.