HUT71209A - Vaccine containing a serine protease - Google Patents
Vaccine containing a serine protease Download PDFInfo
- Publication number
- HUT71209A HUT71209A HU9403591A HU9403591A HUT71209A HU T71209 A HUT71209 A HU T71209A HU 9403591 A HU9403591 A HU 9403591A HU 9403591 A HU9403591 A HU 9403591A HU T71209 A HUT71209 A HU T71209A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- vaccine
- dipeptidyl peptidase
- amc
- activity
- antigenic
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 22
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 title claims description 7
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 title claims description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 33
- 108090000194 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Proteins 0.000 claims description 27
- 102000003779 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Human genes 0.000 claims description 27
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 17
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 17
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 16
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 14
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 12
- 241000242711 Fasciola hepatica Species 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 241000577452 Dicrocoelium Species 0.000 claims description 4
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 claims description 4
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 claims description 4
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 claims description 4
- 241000242541 Trematoda Species 0.000 claims description 4
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 3
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 2
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims 2
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 claims 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims 1
- 229940083575 sodium dodecyl sulfate Drugs 0.000 claims 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 26
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 18
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 10
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 108010067722 Dipeptidyl Peptidase 4 Proteins 0.000 description 6
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 6
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 5
- 102100020751 Dipeptidyl peptidase 2 Human genes 0.000 description 5
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 5
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 5
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 244000000053 intestinal parasite Species 0.000 description 5
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 5
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 5
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- JNTASUHAFOHMQK-ZDUSSCGKSA-N (2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-5-(diaminomethylideneamino)-n-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)pentanamide Chemical compound C1=C(NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)CN)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C JNTASUHAFOHMQK-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 4
- 101710087084 Dipeptidyl peptidase 2 Proteins 0.000 description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N benzamidine Chemical compound NC(=N)C1=CC=CC=C1 PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- UTDVHCQTKWTQEA-UHFFFAOYSA-N 1-(2-aminoacetyl)-n-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)pyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=2C(C)=CC(=O)OC=2C=C1NC(=O)C1CCCN1C(=O)CN UTDVHCQTKWTQEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N glyclproline Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 3
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 3
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 208000003014 Bites and Stings Diseases 0.000 description 2
- 241001147669 Dictyocaulus viviparus Species 0.000 description 2
- 102100029921 Dipeptidyl peptidase 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710087078 Dipeptidyl peptidase 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100020750 Dipeptidyl peptidase 3 Human genes 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000204939 Fasciola gigantica Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 208000006275 fascioliasis Diseases 0.000 description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 2
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 2
- 229950000964 pepstatin Drugs 0.000 description 2
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- -1 tolyl glycerol Chemical compound 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 241001147657 Ancylostoma Species 0.000 description 1
- 241001465677 Ancylostomatoidea Species 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 241000244186 Ascaris Species 0.000 description 1
- 102000004580 Aspartic Acid Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010017640 Aspartic Acid Proteases Proteins 0.000 description 1
- 241000931178 Bunostomum Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108090000267 Cathepsin C Proteins 0.000 description 1
- 102000003902 Cathepsin C Human genes 0.000 description 1
- 241000242722 Cestoda Species 0.000 description 1
- 241001126268 Cooperia Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241001147667 Dictyocaulus Species 0.000 description 1
- 108050001925 Dipeptidyl-peptidase 3 Proteins 0.000 description 1
- 241000243990 Dirofilaria Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 241000243976 Haemonchus Species 0.000 description 1
- 101000931862 Homo sapiens Dipeptidyl peptidase 3 Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 1
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 108010046117 N-palmitoyl-5,6-dipalmitoyl-S-glycerylcysteinyl-seryl-serine Proteins 0.000 description 1
- 241000498271 Necator Species 0.000 description 1
- 241001137882 Nematodirus Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000243795 Ostertagia Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 241000531596 Paramphistomum Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150037787 Sting gene Proteins 0.000 description 1
- 101150060741 Sting1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000122932 Strongylus Species 0.000 description 1
- 241000869417 Trematodes Species 0.000 description 1
- 241000243797 Trichostrongylus Species 0.000 description 1
- 241001489151 Trichuris Species 0.000 description 1
- 241000571986 Uncinaria Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000921 anthelmintic agent Substances 0.000 description 1
- 229940124339 anthelmintic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003602 anti-herpes Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940019748 antifibrinolytic proteinase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 108090000212 dipeptidyl peptidase II Proteins 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 238000005553 drilling Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003789 metatarsus Anatomy 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 230000036281 parasite infection Effects 0.000 description 1
- 208000014837 parasitic helminthiasis infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 150000003354 serine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- XZKQVQKUZMAADP-UHFFFAOYSA-N serinyl-serine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZVCDLGYNFYZZOK-UHFFFAOYSA-M sodium cyanate Chemical compound [Na]OC#N ZVCDLGYNFYZZOK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- XVQKZSLOGHBCET-INVHGPFASA-N tripalmitoyl-S-glyceryl-cysteinyl-seryl-serine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CSCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC XVQKZSLOGHBCET-INVHGPFASA-N 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
A találmány a szerin-proteázok egyik osztályának bélféreg paraziták ellen védő antigénként! alkalmazására vonatkozik .
A háziállatok minden fajtájában előfordulhatnak parazitaként különböző fajta bélférgek, ami rendszerint betegséget okoz. így például ismert, hogy a Fasciola hepatica nevű parazita trematoda kérődzőkben, például szarvasmarhában vagy juhban a gazdaságilag fontos fascioliasis nevű betegséget okozza. A parazita a bélfalon keresztül hatolva jut az emlős gazdába, és mintegy hét hetet tölt a májból táplálkozva, és azon magát keresztülfúrva, mielőtt az epevezetékbe vándorolna. A fertőzést követően a gazdában az immunitás kifejlődése gyenge, és az újrafertőződéssel szembeni ellenállás a már fertőzött gazdában csak részleges, vagy nem is lép fel. Az egyéb parazita mételyek közé tartozik a Fasciola gigantica és a Dicrocoelium spp., és a Paramphistomum spp. is.
Problémát okoznak az orsóférgek is, például a horogférgek (mint például a Necator, Ancylostoma, Uncinaria és Bunostomum spp.).
A vérből táplálkozó orsóférgek közül a Haemonchus nemzetség vérszegénységet és tömegcsökkenést okoz, és ha nem kezelik, gyakran halálos kimenetelű. A hasonló, nem vérrel táplálkozó Ostertagia orsóféreggel fertőzött állatok hasonlóképpen rosszul fejlődnek, és kezelés hiányában elpusztulhatnak.
Gazdaságilag fontos egyéb paraziták közé tartoznak az alábbi bélféreg nemzetségbe tartozó kölönféle fajok:
···· ···· ····
Trichostrongylus, Nematodirus, Dictyocaulus, Cooperia, Ascaris, Dirofilaria, Trichuris és Strongylus. A haszonállatokon kívül az egyéb háziállatok és az ember is fertőződhet, nem ritkán halálos kimenetellel, ezért a bélféreg fertőzések és élősdi-fertőzések világszerte jelentős problémát jelentenek.
A legeltetett haszonállatok bélféreg parazitáinak kézben tartása jelenleg elsősorban bélféreg elleni szerek alkalmazásán alapul, a pásztorok által elvégzett kezeléssel kombinálva. Az ilyen módszerek gyakran nem kielégítőek, elsősorban azért, mert a bélféreg elleni szereket gyakran kell beadni, másodszor azért, mert a bélféreg elleni szerekkel szembeni rezisztencia egyre jobban terjed, és harmadszor azért, mert egyes gazdaságokban gyakran nincs mód a pásztorok által végzett kezelésre, és még ahol van is, ez korlátozhatja a rendelkezésre álló legelők legjobb hasznosítását .
Már számos kísérlet történt a háziállatok bélféreg parazitáinak kézben tartására immunológiai eszközökkel. Nagyon kevés kivétellel (mint például a szarvasmarha tüdőféreg, a Dictyocaulus viviparus) ez nem bizonyult lehetségesnek.
A WO 90/08819 számon publikált szabadalmi leírásban ismertettek egy vakcinát, amely antigén anyagként F. hepatica-ból származó glutation-S-transzferázt tartalmaz.
Bennett (UK 2169606B számú szabadalmi leírás) különféle antigéneket extrahált Fasciola-ból olyan eljárással, amely alkalmas a fiatalkori specifikus antigének elválasztására a fiatalkori és felnőtt korban jelenlévő antigének ···· ···· · · · · tői.
Ezenkívül nyers in vitro exkréciós/szekréciós (E/S) termékek bizonyos körülmények között immunitást biztosíthatnak patkányokban [Rajasekariah és munkatársai, Párásítói. 7£, 393-400 (1979)].
Most felismertük, hogy a F. hepatica exkréciós/szekréciós termékei egy új proteint tartalmaznak, amely dipeptidil-peptidáz (DPP) típusú aktivitással rendelkezik, amelyet az alábbiakban részletesen ismertetünk. Ezzel a felismeréssel lehetőség nyílik F. hepatica és egyéb bélférgek elleni vakcinák előállítására, amelyek antigénként az új enzim, és/vagy más bélféreg paraziták által termelt megfelelő enzimek alkalmazásán alapulnak.
A találmány egyik megközelítésben vakcinára vonatkozik bélférgek okozta parazita fertőzések leküzdésére emlősökben, amelyben az antigén anyag dipeptidil-peptidáz-szerű aktivitással rendelkező szerin-proteázt tartalmaz, legalábbis részlegesen tisztított formában, vagy annak egy antigén fragmentumát vagy epitópját, hordozóanyaggal és/vagy adjuvánssal együtt.
A találmány továbbá eljárásra vonatkozik bélférgek okozta parazita fertázések leküzdésére emlősökben, oly módon, hogy az emlősnek egy fent definiált, találmány szerinti vakcinát adagolunk a fertőzés leküzdésére hatásos mennyiségben.
Az emlős előnyösen valamely kérődző, például szarvasmarha vagy juh, de a találmány szerinti vakcina és eljárás ember esetén is alkalmazást nyerhet.
A dipeptidil-peptidáz-szerű proteáz előnyösen mételyekből, például Fasciola-ból vagy Dicrocoelium-ból származik, különösen a Fasciola hepatica májmételyből. Alternatív módon a dipeptidil-peptádáznak előnyösen képesnek kell lennie olyan immunválasz kiváltására, amely Fasciola vagy Dicrocoelium, különösen F. hepatica és F. gigantica ellen hatásos, az ilyen egyéb fajokból származó dipeptidil-peptidázprotcőzc.k képest kereszt-védő immunválasz* kivá.1 tására, ezáltal a találmány egy különösen előnyös megvalósítását képezik.
A F. hepatica dipeptidi1-peptidáz-szerű proteáz - amelynek molekulatömege az alábbiakban ismertetettek szerint közelítőleg 200 kDa nátrium-dodecil-szül fát/poliakrilamid gél-elektroforézissel redukáló és nem redukáló körülmények között, és qélszü’réses kromatográfiával meghatározva - különösen előnyösen alkalmazható a találmány szerinti vakcinában és eljárásban, és mint új protein, maga is a találmány tárgyát képezi.
A találmány szerinti vakcinába beépített dipeptidil—peptidáz legalább részlegesen tisztított formában van. A dipeptidil—peptidáz a vakcinában lévő exkréciós/szekréciós proteinnek előnyösen legalább 75 %-át képviseli, még e-lőnyö sebben a dipeptidil—peptidáz tisztasága legalább 95 %. Magá tói értetődő, hogy miután a legalább 95 % tisztaságú dipeptidil—peptidázt előállítottuk, azt egy vagy több tisztított antigén proteinnel, például egy vagy több további exkréciós/szekréciós proteinnel elegyíthetjük többértékű vakcina előállítása céljából.
A találmány szerinti többértékű vakcina egyik előnyös formája egy fent említett dipeptidil—peptidázt tartalmaz egy katepszin L-típusú antigénnel kombinálva, amelyet részletesen a WO 94/09142 számon publikált szabadalmi leírásban ismertetnek. Az ilyen többértékű vakcina azáltal, hogy a gazda fajban a fertőző bélféreg paraziták ellen két eltérő megközelítés szerint indukál immunitást, jelentősen növeli a oéiféiey elleni vedelem valósé . Ás jelentősen csökkenti a fertőzés fellépésének esélyeit.
A dipeptidi1-peptidázokat emlős forrásból izolálták [J. Bioi. Chem. 2 63, 6613-6618 (1988)], és dipeptid szubszt.rátokat hasító képességük alapján jellemezték. Négy különböző specificitást észleltek, amelyekre az alábbiakban részletesen utalunk. A találmány szerinti dipeptidi1—peptidázokra hasonló módon jellemző a fluorogénhez kötött dipeptid szubsztrátot hasító képesség, míg a fluorogénhez kötött mc>noaminosav szubsztrátokkal szemben nem mutatnak aktivitást, bizonyítva, hogy az enzimek a szubsztrát N-terminálisától párosával hasítják az aminosavakat.
A találmány szerinti vakcinákat szokásosan alkalmazott hordozóanyagokkal és/vagy adjuvánsokkal formálhatjuk, és a találmány tárgyát képezi a vakcinák előállítására szol gáló eljárás is, amelynek értelmében a tisztított dipeptidil—peptidázt vagy annak valamely antigén fragmentumát vagy epitópját egy vagy több adjuvánssal vagy hordozóanyaggal összekeverjük. Megfelelő adjuvánsok például az alumínium—hidroxid, a szaponin (ISCOMs), a quil A és annak tisztább formái, a muramil-dipeptid, az ásványi vagy növényi olajok, a DEAE dextrán, a nemionos blokk-kopolimerek, vagy a liposzomák, például a NovasomesR (Micro Vesicular Systems Inc.), egy vagy több gyógyászatilag elfogadható hordozóanyag vagy hígítóanyag jelenlétében. A találmány szerinti dipeptidil-peptídázok epitópjainak megfelelő peptid-szekvenciák hordozóanyagai proteinek lehetnek, például a Hepatitis B mag antigén többszörös antigén peptid vagy a lipopeptidek, például α L x ipa Imi toil glicer? 1 ---3 cztpim'b szeril-szerin (P3CSS) .
Megfelelő hígítószerek például a cseppfolyós közegek, például a vehikuluntként alkalmazható sóoldat. A vakcina tartalmazhat további komponenseket, például konzerválőszereket is.
A vakcinát a gazda fajnak bármely ismert módon beadhatjuk, például orálisan vagy parenterálisan, például intramuszkuláris injekcióban, adott esetben meghatározott időközökben, például két injekciót adunk 7-35 napos intervallumban. injekcióként adagolva megfelelő a dózis pél dán! akkor, ha a dipeptidil—peptidáz proteint 10-500 gg mennyiségben adj uk.
Noha a találmány szerinti vakcinában alkalmazható dipeptidil-peptidázt felnőtt és/vagy fiatal bélférgek exkréciós/szekréciós termékeiből izolálva előállíthatjuk, célszerűen rekombináns DNS - technikákkal is előállíthatjuk azt, amely módszerek ismert előnyei a méretnagyításban és a reprodukálhatóságban nyilvánulnak meg. A találmány tárgyát képezi ennek megfelelően a rekombináns DNS-technikákkal előállított dipeptidil—peptidáz, vagy annak proenzimje, vagy antigén fragmentuma vagy epitópja.
A fenti vonatkozásban a találmány vonatkozik a dipeptidil—peptidázt, vagy annak proenzimjét, vagy antigén fragmentumát vagy epitópjat kódoló DNS-molekulákra; az egy vagy több ilyen DNS-szekvenciát tartalmazó vektorokra; gazdasejtekre, például baktériumokra, mint például az E. coli, vagy még előnyösebben eukariota sejtekre, amelyek a fenti vektorokkal vannak transzformálva, például egy baculovírus vektorral; és eljárásokra rekombináns dipeptidil pept’Háv w3gy ént- ígéri fraurnentumai vagy epitópjai e lőálláfására, oly módon, hogy a fenti transzformált gazda sejteket tenyésztjük, és a d ipept. idi l-pept; idázt vagy annak fragmentumát vagy epitópját a tenyésztett sejtekből izolál j uk.
Egy alternatív élő vagy inaktivált vakcina készítmény egy gyengített vagy virulens vírust vagy egy olyan gaz őssejtet, például egy mikroorganizmust, így például egy bak tóriumot tartalmazhat, amelybe egy találmány szerinti mik leinsav molekula (azaz egy DNS molekula) van inszertálva, az inszertált nukleinsav-molekula által kódolt polipeptidek ellen irányuló immunválasz kiváltása céljából. Különösen előnyösek az olyan bakteriális vektorok, különösen az invazív fajok, például a Salmonella fajok, amelyek métely antigénnel szemben helyileg, a bél nyálkahártyában váltanak, ki immunitást, ami azután blokkolja a fiatal mételyek vándorlását .
A vakcinában további antigén anyagok is jelen lehetnek, így fokozott védőhatást kapunk a kérdéses bélféreg paraziták ellen, vagy kombinált védáhatást egy vagy több további parazita fertőzéssel szemben.
A találmány további tárgyát képezik monoklonális vagy poliklonális antitestek is, amelyek egy emlősnek beadva képesek dipeptidil—peptidázzal szemben immunitást indukálni az emlősben, amely antitest egy vagy több további antitest variábilis régiójával szemben affinitást mutat, és a további antitestek a dipeptidil-peptidázzal szembeni affinitással rendelkeznek.
Σζ u magházéiít, swlvpr anti.....idiotípus megközelítésnek neveznek, olyan vakcina előállítását teszi lehetővé, amely az eredeti antigént teljesen nélkülözni tudja, és még nagyobb előnyökkel rendelkezik a biztonságosság, a mellékhatások elkerülése és a gyártás kényelme szempontjából.
A találmányt közelebbről - a korlátozás szándéka nélkül - az alábbi példákkal kívánjuk ismertetni.
1) Tn vitro felszabaduló termékek előállítása
Egy írországi közvágóhídon beszerzett marhamájak epevezetékéből eltávolítottuk a felnőtt Fasciola hepatica mételyeket. A mételyeket hatszor mostuk foszfáttal pufférőit sóoldattal (PBS) (pH 7,3), majd 2 % glükózt, 30 mmol/1 Hepes-t és 25 mg/1 gentamicint tartalmazó Roswell Park Memória! Institute (RPMI) 1640 tápközegbenben (pH 7,3) egy éjszakán keresztül 37 °C-on tartottuk. A közeget (exkréciős/szekréciós vagy E/S termékek) ezután eltávolítottuk, megfagyasztottuk, és -20 °C-on tároltuk.
2) Dipeptídí1—peptidáz—szerű proteáz tisztítása
500 ml felnőtt métely E/S terméket 10 ml-re koncentráltunk Amicon 8400 ultraszűrő egységben, UM 3 membránt alkalmazva. A mintát eltávolítottuk, és 15000 g-vel 45 percen keresztül centrifugáltuk. A felülúszót ezután 0,1 mol/1 koncentrációjú Tris pufferrel (pH 7,0) ekvilibrált 300 ml Sephacryl S200 oszlopra vittük fel. 100 ml haszontalan térfogat átfolyása után 5 ml-es frakciókat szedtünk. Az eluátum protein-tartalmát 280 nm-en határoztuk meg, és a frakciókat dipeptidil-peptidáz aktivitásra vizsgáltuk Gly-Pro-AMC szubsztrátot alkalmazva 0,25 mol/1 koncentrációjú HEPES pufferben (pw η íi ábra) ( AMC jelentése 7-amino 4-meti1 -kumarin) A DPP aktivitással rendelkező frakciókat összegyűjtöttük (pool, kb. 40 ml), és Amicon ultraszűrő egységben, UM3 membránt alkalmazva 8 ml re koncentráltuk. A koncentrátumot nyolc 1 ml-es frakcióra osztottuk, és -20 °C-on, fagyasztva tároltuk.
ml koncentrátumot felolvasztottunk, és 0,025 mol/1. koncentrációjú HEPES-szel (pH 6,8) szemben dializáltuk, és ugyanezzel a pufferrel ekvilibrált 12 ml dieti1 -amino-eti1 .....-Sepharose oszlopra (1,5 x 8 cm) vittük fel. Az oszlopot sógrádienssel eluáltuk (0 - 400 mmol/1 NaCl az ekvi1ibrációs pufferben), és 2,5 ml-es frakciókat szedtünk. Az eluátumot 280 nm-en vizsgáltuk, és két csúcsot kaptunk. A frakciókat DPP aktivitásra vizsgáltuk, Gly-Pro-AMC szubsztrátot alkalmazva. A DPP aktivitás az első csúcsban volt jelen, és kb. 100 mmol/1 NaCl koncentrációnál eluálódott (2. ábra) . Ezeket, a frakciókat összegyűjtöttük (pool), Amicon ultraszűrő egységben koncentráltuk, ionmentes vízzel szemben dializáltuk, fagyasztva szárítottuk, és -20 °C-on tároltuk.
3) Dipeptidil-peptidáz molekulaméretének meghatározása
A Sephacryl 8200-on a fentiek szerint végzett gélszüréses kromatográfia [standardként immunglobulin (150 kDa), albumin (68 kDa), ovalbumin (45 kDa) és β-laktoglobulin (18,4 kDa) alkalmazásával] azt mutatta, hogy a DPP—szerű aktivitással rendelkező csúcsban a molekula mérete mintegy 200 kDa. A tisztított proteáz mintákat is analizáltuk 0,1. % SDS/10 % nol ί akr ilamid gél-elektroforézissel , nem redukáló körülmények között. A molekula méretét 200 kDa-nak találtuk (lásd 3. ábra, 1. sáv: E/S termékek, 2. sáv: tisztított proteáz). 0,1 % SDS/10 % poliakrilamid gél-elektroforézissel, redukáló körülmények között hasonló molekulámé retet kaptunk, jelezvén, hogy a proteáz egyetlen polipeptidláncból áll.
4) A dipeptidil peptidáz-szerű aktivitás pH-optimumá- nak jellemzése
A proteáz aktivitását mind gly-pro-AMC, mind lys-ala-AMC szubsztráttal meghatároztuk 4,5 és 8,2 közötti pH tartományban. Az optimális aktivitáshoz szükséges pH érték 6,8 volt. Azt is kimutattuk, hogy a proteáz aktivitása HEPES pufferben optimális,· mind a Tris, mind a foszfát puffer hátrányosan befolyásolta az aktivitást, (lásd 1. táblázat) . Ezért a HEPES puffer (50 mmol/1, pH 6,8) volt az a puffer, amelyet az összes kísérletben és tisztítási eljárásban rutinszerűen alkalmaztunk.
2
1. táblázat: DPP-szerű aktivitás különféle pufferek és pH rendszerek alkalmazása esetén
Puffer (pH)
Lys-Ala-ACM
Gly-Pro-ACM aktivitás (%) aktivitás (%)
| Hepes | 50 mmol/1 | (6,8) | 100 | 100 |
| Hepes | 50 mmol/1 | (7,6) | 61 | 20 |
| T τ „ . | r η ,.-, , ,·, Ί /1 | f Q ú | 2 2 | ] |
| ' ...... ' | ||||
| nátrium-ci trát | 0 , 1 mmol/1 (4,5) | 11 | 8 | |
| Tr is | HC1 0,1 mo | 1/1 (6,8) | 10 | 1 5 |
PBS 0,1 iTiol/1 (7,2) 14 35
5) Proteáz szubsztrát specificitása
A peptid-kötés specificitást különféle fluorogén peptid szubsztrátokat alkalmazva vizsgáltuk, amelyeket korábban az emlás dipeptidil-peptidáz I, II, III és Intravénás kategorizálására használtak [J. Bioi. Chem. 263, 66136618 (1989)] . Ezen szubsztrátok közá tartozik a gly-ala-AMC (DPP-I) és a lys-ala-AMC (DPP-II), arg-arg-AMC (DPP-III) és glv-pro-AMC (DPP-IV) .
A viizsgálati eg 200 μ! 20 pmol/l koncentrációjú szubsztrátot, 100 μΐ enzim-oldatot és 900 μΐ 50 mmol/1 koncentrációjú Hepes-t (pH 6,8) tartalmazott. A reakciót 37 °Con hagytuk lejátszódni, és 200 μΐ 1,7 mol/1 koncentrációjú ecetsav hozzáadásával állítottuk le. A felszabadult AMC-t fluorométerrel mértük, 370 nm gerjesztési és 440 nm emissziós hűllámhosszokon.
A májmétely proteáz szelektíven hasította a lys-alaAMC-t és a gyl-pro-AMC-1, a fenti szubsztrátokra a Michaelis-Menton állandó (Km) 58, hasította a gly-arg-AMC és az adatok azt bizonyítják, illetve 25 /zmol/1. A proteáz nem arg-arg-AMC szubsztrátokat. Ezek hogy a proteáz új; korábban nem ismertek olyan DPP-szerü enziomet, amely erre a két szubszt rátra ehhez hasonló affinitásokat (Km) mutatott volna. A mételyből származó on?ám VnH dpp-TT. mind DPP-IV típusú aktivitást mutat, ha az emlős DPP-k esetén használt osztályo zást alkalmazzuk. Az enzim nem mutatott aktivitást különféle amino-peptidáz szubsztrátokkal szemben, beleértve a lys-, ala-, leu- és pro-AMC-t. Ezek az adatok bizonyítják az enzim specificitását dipeptid szubsztrátokra.
6) DPP-szeru aktivitás közvetlen vizualizálása poliak- rilamid gélekben
Annak igazolására, hogy a májmétely E/S termékekben jelen vagy egy proteáz, amely mind DPP-II, mind DPP-IV aktivitással rendelkezik, az E/S mintákat 10 %-os natív poliakrilamid gélekben (amelyeket a fentiek szerint állítottunk elő, azzal az eltéréssel, hogy SDS-t nem adtunk a mintákhoz vagy a gélekhez) elektroforetikusan szétválasztottuk, majd az ciettroforézιst követően a géleket a kiilönféje fluoiogé nekhez kötött szubsztrátok oldataiba (50 pmol/l 50 mmol/1 HEPES-ben) merítettük. Inkubálás után a géleket UV átvilágítóra helyeztük, és polaroid filmet alkalmazva lefényképeztük. Csak egyetlen sáv vált láthatóvá, azonos mobilitással, a gly-pro-AMC és lys-ala-AMC szubsztrátok alkalmazásával. A gly-arg-AMC, arg-arg-AMC, ala-AMC és pro-AMC szubsztrátok alkalmazása esetén nem vált láthatóvá egy sáv sem (4. ábra és 2. táblázat). A tisztított DPP-szerű proteáz láthatóan hasonló módon vándorolt ezekben a gélekben, és hasonló szubsztrát-specificitást mutatott. G-R, K-A, R-R, G-P, A és P jelentése Gly-Arg-AMC, Lys-Ala-AMC, Arg-Arg-AMC, Gly-ProAMC, Ala-AMC illetve Pro-AMC. A Km értékek az előző fejezetben megadottak voltak.
2. tábládat. F. hcpatica E/9 <-örmékekből származó DPP-szerű proteáz szubsztrát-specificitása
Szubsztrát Aktivitás (tetszőleges egységek)
Gly-Arg-AMC (DPP-I)
Tys-Ala AMC (DPP-I1)
Arg-Arg-AMC (DPP-1II)
Gly-Pro-AMC (DPP-IV)
Ala-AMC
Pro-AMC
7) Inhibitor vizsgálatok
Különféle fémionok hatását az enzim hidrolitikus aktivitására mind gly-pro-AMC, mind lys-ala-AMC szubsztrát alkalmazásával megvizsgáltuk a fentiekben ismertetett vizsgálati eljárásokkal. Az eredmények azt mutatták, hogy egyes fémionok, például a kalcium, magnézium és mangán kis mértékben befolyásolták az enzim aktivitását, míg a cink 1 mmol/1 koncentrációban >85 %-kal gátolta az aktivitást. A nehézfém vas, higany, kadmium és kobalt mindegyike >90 %-kal gátolta az enzimaktivitást 5 mmol/1 koncentrációban, míg az ólom <20 % gátlást mutatott ebben a koncentrációban. Az enzimet nem gátolták az EDTA, pepsztatin és aprotinin proteináz-inhibitorok, ami arra utal, hogy az enzim nem egy metallovagy aszpartil-proteáz. Az enzimet a szerin- és ciszteinil-nrntρϊná7nk pgy inhibitora, a benzil-szulfoni1-f1uorid (PMSF) gátolta; mivel azonban az enzimet nem aktiválták a tiol aktiváló szerek, például a cisztein, a ditio-treit és a merkapto etanol, nem valószínű, hogy az enzim egy ciszteinil-proteináz. A szerin-proteinázok egyik inhibitora, a benzamidin gátolta a DPP aktivitását. Ebből az következik, hogy a méjmétely enzim egy szerin-proteáz. Ezen inhibitorvizsgálatok azon következtetésünket is alátámasztják, hogy egyetlen enzim hasítja mind a glypro-AMC, mind a lys-ala—AMC szubsztrátot, mivel hasonló inhibitor profilt kaptunk, ha a szubsztrátok bármelyikét alkalmaztuk (3. táblázat).
3. táblázat: Nehézfémek és inhibitorok hatása a DPP aktivitására
Anyag Koncentráció Maradék aktivitás (%) (mmol/1) Lys-Ala Gly-Pro
| - | 100 | 100 | |
| Mn | 1 | 66 | 66 |
| Mn | 0,5 | 104 | 102 |
| Mg | 1 | 76 | 78 |
| - 16 - | • · · · | , ···· ·' ··· ··» ··· ·· , | |
| 3 . táblázat folytatása | |||
| Mg | 0,5 | 105 | 116 |
| Ca | 1 | 62 | 57 |
| Ca | 0,5 | 96 | 133 |
| Zn | 1 | 14 | 3 |
| Zn | 0,5 | 37 | 80 |
| Pb | 1 | 103 | 109 |
| Eü | K | 82 | 70 |
| Cd | 1 | 19 | 26 |
| Cd | 5 | 5 | 6 |
| Co | 1 | 28 | 20 |
| Co | 5 | 6 | 4 |
| Fe | 1 | 5 | 6 |
| Fe | 5 | 2 | 2 |
| Hq | 1 | 4 | '' |
| Hg | 5 | 2 | 5 |
| 2-merkapto etanol | 1 | 7 5 | 8 7 |
| EDTA | 2 | 121 | 108 |
| pepsztatin | 5 pg/ml | 92 | 108 |
| aprotin | 5 pg/ml | 116 | 109 |
| PMSF | 2 | 3 | 2 |
| DTT | 1 | 6 2 | 90 |
| DTT | 0,5 | 61 | 7 7 |
| cisztein | 1 | 105 | 104 |
| cisztein | 0,5 | 112 | 104 |
| benzamidin | 1 | n. a. | 77 |
| benzamidin | 5 | n, a. | 35 |
| benzamidin | 10 | n. a. | 23 |
.. ,. .... ···« ··«· *»» ·····.
• · »
3. táblázat folytatása
| puromicin | 0, 1 | 100 | 100 |
| puromicin | 0,02 | 100 | 100 |
| bacitracin | 0,1 | 100 | 100 |
| bacitracin | 0,02 | 100 | 100 |
Λ) cát-TÁqi v-i 7&gá 1 atok puromicinnel és bacitracinnal
Az emlős DPP-II-t és DPP-IV-et. a puromicin és bacitracin inhibitorok alkalmazásával lehet egymástól megkülönböztetni; a puromicin csak a DPP-II-t. gátolja, míg a bacit racin csak a DPP-IV-et gátolja [J. Bioi. Chem. 263, 66136618 (1988)] . Ha a mindkét fenti szubsztrátot megvizsgáltuk a métely enzimmel végzett inhibitor vizsgálatban, egyikük sem mutatott inhibitor hatást, ami egy újabb különbséget jelent. az emlős DPP-k és a mételyből származó enzim között (3. táblázat) • · ·
Szabadalmi igénypontok
Claims (3)
1. ábra
3/1
1. Vakcina, bélférgek okozta parazita fertőzések leküzdésére emlősökben, amelyben az antigén anyag dipeptidil-peptidáz-szerű aktivitással rendelkező szerin-proteázt tar talmaz, legalábbis részlegesen tisztított formában, vagy annak f-gy Antigén fragmentumát vagy epitópját, hordozóanyaggal és/vagy adjuvánssal együtt.
2 Az 1 . igénypont szerinti vakcina, amelyben az antigén anyag Fasciola vagy Dicrocoelium fajokból származik.
3. A 2. igénypont szerinti vakcina, amelyben az antigén anyag Fasciola hepatica-ból származik.
4. A 3. igénypont szerinti vakcina, amelyben az antigén anyag dipeptidi1-peptádáz, amelynek molekulatömege 200 kDa nátrium dodecil-szülfát/poliakrilamid gél elektroforézis szerint, redukáló és nem redukáló körülmények között .
5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, amelyben az antigén anyag a jelenlévő összes bélféreg-eredetű exkréciós/szekréciós proteinnek 75-100 %-át teszi ki.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, amely egy katepszin L-típusú antigént is tartalmaz.
7. Dipeptidil—peptidáz, amelynek molekulatömege 200 kDa nátrium-dodecil-szül fát/poliakrilamid gél-elektroforézis szerint, redukáló és nem redukáló körülmények között.
8. Eljárás az 1. igénypont szerinti vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy az antigén anyagot egy vagy tőbob adjuvánssal és/vagy hordozóanyaggal összekeverjük.
9. Szerin-proteáz, amely dipeptidil—peptidáz enzimaktzivitással rendelkezik, vagy annak egy proenzimje, vagy egy/ antigén fragmentuma vagy epitópja, amelyet rekombináns DNS-- technikával állítunk elő.
10. DNS-molekula, amely a 11. igénypont szerinti prcoteázt, proenzimet, fragmentumot vagy epiptópot kódolja.
Ά meghatalmazott:
dr. Kiss Ildikó szabadalmi ügyvivő
807-82-215-SI
DIPEPTIDIL-PEPTIDÁZ TISZTÍTÁSA (A) SEPHACRYL S200
Abszorpció 280 nm-en (o) pmol/l AMC/perc/ml (·)
3/2
DIPEPTiDIL-PEPTIDÁZ TISZTÍTÁSA (B) DEAE SEPHAROSE
Abszorpció 280 nm-en (o)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB939312324A GB9312324D0 (en) | 1993-06-15 | 1993-06-15 | Vaccine |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9403591D0 HU9403591D0 (en) | 1995-03-28 |
| HUT71209A true HUT71209A (en) | 1995-11-28 |
Family
ID=10737190
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9403591A HUT71209A (en) | 1993-06-15 | 1994-06-14 | Vaccine containing a serine protease |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5885814A (hu) |
| EP (1) | EP0703789B1 (hu) |
| JP (1) | JPH08511262A (hu) |
| AT (1) | ATE176402T1 (hu) |
| AU (1) | AU694121B2 (hu) |
| DE (1) | DE69416405T2 (hu) |
| DK (1) | DK0703789T3 (hu) |
| ES (1) | ES2130426T3 (hu) |
| GB (1) | GB9312324D0 (hu) |
| GR (1) | GR3030116T3 (hu) |
| HU (1) | HUT71209A (hu) |
| NZ (1) | NZ267139A (hu) |
| WO (1) | WO1994028925A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA944241B (hu) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9612214D0 (en) | 1996-06-11 | 1996-08-14 | Mallinckrodt Veterinary Inc | Vaccine |
| AUPO767497A0 (en) * | 1997-07-04 | 1997-07-24 | Australian Wool Research & Promotion Organisation | Parasite vaccine |
| US20030065382A1 (en) * | 2001-10-02 | 2003-04-03 | Fischell Robert E. | Means and method for the treatment of coronary artery obstructions |
| PL201419B1 (pl) * | 2002-12-04 | 2009-04-30 | Inst Biotechnologii I Antybiot | Białko chimeryczne, sekwencja, konstrukt, komórka roślinna, sposób otrzymywania białka chimerycznego, transgenicznej rośliny, transgeniczna roślina |
| EP1745292A2 (en) | 2004-04-28 | 2007-01-24 | Bayer HealthCare AG | Diagnostics and therapeutics for diseases associated with dipeptidyl-peptidase 1 (dpp1) |
| WO2011043962A2 (en) | 2009-10-07 | 2011-04-14 | Wyeth Llc | Compositions comprising adjuvant, macrolide and proteinaceous antigen and methods of use thereof |
| BR112018071583A2 (pt) * | 2016-04-21 | 2019-02-12 | Sphingotec Therapeutics Gmbh | métodos para determinar dpp3 e métodos terapêuticos |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1988001277A1 (en) * | 1986-08-18 | 1988-02-25 | The Australian National University | Helminth parasite vaccine |
| US4879213A (en) * | 1986-12-05 | 1989-11-07 | Scripps Clinic And Research Foundation | Synthetic polypeptides and antibodies related to Epstein-Barr virus early antigen-diffuse |
| NZ230773A (en) * | 1988-09-26 | 1993-04-28 | Biotech Australia Pty Ltd | Nematode antigenic peptides and vaccines |
| CA2147378A1 (en) * | 1992-10-21 | 1994-04-28 | John P. Dalton | Vaccine containing a thiol protease |
-
1993
- 1993-06-15 GB GB939312324A patent/GB9312324D0/en active Pending
-
1994
- 1994-06-14 DK DK94917738T patent/DK0703789T3/da active
- 1994-06-14 WO PCT/GB1994/001274 patent/WO1994028925A1/en active IP Right Grant
- 1994-06-14 EP EP94917738A patent/EP0703789B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-14 AT AT94917738T patent/ATE176402T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-06-14 DE DE69416405T patent/DE69416405T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-06-14 NZ NZ267139A patent/NZ267139A/en unknown
- 1994-06-14 US US08/564,091 patent/US5885814A/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-06-14 AU AU69333/94A patent/AU694121B2/en not_active Ceased
- 1994-06-14 JP JP7501508A patent/JPH08511262A/ja active Pending
- 1994-06-14 ES ES94917738T patent/ES2130426T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-06-14 HU HU9403591A patent/HUT71209A/hu unknown
- 1994-06-15 ZA ZA944241A patent/ZA944241B/xx unknown
-
1999
- 1999-04-30 GR GR990401198T patent/GR3030116T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB9312324D0 (en) | 1993-07-28 |
| NZ267139A (en) | 1998-01-26 |
| DK0703789T3 (da) | 1999-09-20 |
| EP0703789A1 (en) | 1996-04-03 |
| DE69416405D1 (de) | 1999-03-18 |
| ZA944241B (en) | 1995-05-26 |
| ATE176402T1 (de) | 1999-02-15 |
| AU694121B2 (en) | 1998-07-16 |
| US5885814A (en) | 1999-03-23 |
| HU9403591D0 (en) | 1995-03-28 |
| GR3030116T3 (en) | 1999-07-30 |
| ES2130426T3 (es) | 1999-07-01 |
| DE69416405T2 (de) | 1999-09-09 |
| JPH08511262A (ja) | 1996-11-26 |
| AU6933394A (en) | 1995-01-03 |
| EP0703789B1 (en) | 1999-02-03 |
| WO1994028925A1 (en) | 1994-12-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Brindley et al. | Proteolysis of human hemoglobin by schistosome cathepsin D | |
| RU2270865C2 (ru) | Иммуногенный полипептид, вызывающий защитный иммунный ответ против bacillus anthracis (варианты), способ его получения, нуклеиновая кислота, кодирующая его, вектор для экспрессии (варианты), способ и вакцина для предупреждения инфекции, вызванной bacillus anthracis | |
| RU2194713C2 (ru) | Модифицированный c3 белок человека, фрагмент днк, конъюгат, фармацевтическая композиция, способ уменьшения количества белка | |
| Miyoshi et al. | Exocellulr toxic factors prowced by Vibrio vulnificus | |
| JP2000507245A (ja) | Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓペプチドを含む免疫原性組成物および方法 | |
| JP2000507943A (ja) | 腫瘍壊死因子αコンバーターゼ | |
| CN117280026A (zh) | 免疫球蛋白切割酶 | |
| Hellberg et al. | Recombinant expression and purification of an enzymatically active cysteine proteinase of the protozoan parasite Entamoeba histolytica | |
| HUT71209A (en) | Vaccine containing a serine protease | |
| Wilson et al. | Molecular and biochemical characterization of a protective 40-kilodalton antigen from Corynebacterium pseudotuberculosis | |
| EP0666919B1 (en) | Vaccine containing a thiol protease | |
| JPH07170995A (ja) | ポリペプチドの調製方法 | |
| JPH0689032B2 (ja) | ワクチン | |
| JPH09510102A (ja) | 犬糸状虫Ｇｐ２９タンパク質、核酸分子、およびそれらの用途 | |
| KR20110114600A (ko) | 재조합 닭 전염성 코라이자 백신 및 그 제조방법 | |
| US5691186A (en) | Filariid cysteine protease genes | |
| Muñoz‐Maines et al. | Production of Polyclonal Antisera to Choline Acetyltransferase Using a Fusion Protein Produced by a cDNA Clone Victor | |
| Federici et al. | Purification and identification of two putative autolytic sites in human calpain 3 (p94) expressed in heterologous systems | |
| AU731026B2 (en) | Vaccine containing a thiol protease | |
| FR2863499A1 (fr) | Nouveaux vaccins destines au traitement ou a la prevention des infections par parasites de la famille echinococcus | |
| AU696260B2 (en) | Helminth parasite antigen with aminopeptidase-like activity | |
| WO1995012679A1 (en) | Anti-helminth vaccines | |
| Sironmani | Biochemical characterization of the microsporidian Nosema bombycis spore proteins | |
| Pillay | Identification and characterisation of novel pathogenic factors of Trypanosoma congolense. | |
| Kamisoyama et al. | Production of recombinant chicken glucagon using E. Coli |