HUT66375A - Pharmaceutical composition comprising purpurogallin useful as an antioxidant and cytoprotective agent - Google Patents
Pharmaceutical composition comprising purpurogallin useful as an antioxidant and cytoprotective agent Download PDFInfo
- Publication number
- HUT66375A HUT66375A HU9303246A HU9303246A HUT66375A HU T66375 A HUT66375 A HU T66375A HU 9303246 A HU9303246 A HU 9303246A HU 9303246 A HU9303246 A HU 9303246A HU T66375 A HUT66375 A HU T66375A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- blood
- purpurogallin
- composition
- effective amount
- concentration
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
A jelen találmány általánosságban olyan antioxidánsokia vonatkozik, amelyek biomedikusan alkalmazhatók. Közelebbről, a jelen találmány a púipogallin molekula és glikozidjaínak az oxigén gyökök mennyiségét szabályozó tulajdonságaira vonatkozik.
A szabad oxigén gyökök mint a szuperoxid gyök (Og) és a hidroxil gyök (OH) a véráramban lévő oxigén 5%-ból keletkeznek. Ezek az oxigén gyökök erősen toxikusak, és visszafordíthatatlan oxidativ károsodást okozhatnak a sejtekben és szövetekben. Amikor egy élő szerv vagy szövet szabályos veiáiamlása valamilyen oknál fogva ideiglenesen megszakad, pl. szervátültetés by-pass műtét és hasonlók miatt (ez az ischemíának, véitelenségnek nevezett sebészeti folyamat), az oxigénnek a szövetben való újra megjelenése a szupeioxid keletkezésének nagymértékű növekedéséhez vezet, amelynek következménye a másodlagos hidioxil gyökök megjelenése és a jellegzetes sejtpusztulás kialakulása. A2 ischemiát követően teimelődő nagy mennyiségű szabad gyek elsődleges fonása a xantin-dehidiogenáz enzim. Ez az enzim egyébként eíektionokat szállít a púim bázisoktól az oxidált nikotimamid-adenin dinukleotidokia. Hipoxia alatt ez az enzim gyorsan és ii reverzibilisen xantin-oxidázza alakul, amely azzal, hogy az elektronokat közvetlenül az oxigénhez szállítja, nagy mennyiségű szupeioxidot állít elő.
A szabad oxigén gyökök biológiai szempontból fontos molekulákat támadhatnak meg és károsíthatnak. A sejtmembiánban az OH gyök lipid peioxidációnak nevezett láncreakciót indíthat be. amelynek során a hosszú szénláncu telítetlen zsíisav molekulákból vízben oldódó termékek keletkeznek ami a membiánt természetszerűleg károsítja. A sejtmembránok peroxidációja a sejt pusztulását okozhatja, mivel lizoszómális hidiolázok szabadulhatnak fel és kerülhetnek a citoplazmába. Az oxigén gyökök mutációkat is okozhatnak a DNS.: :
• · · · · · ······ · · ··· · ···♦ ··· · ·♦
-3 -bon, ezenkívül a hialuronsav és a hasonló makromolekulák depolimeiizációjáéit ís felelősek.
A szervezet több olyan védekező mechanizmussal is rendelkezik, amelyek a minimálisra képesek csökkentem a szabad oxigén gyökök által okozott sérüléseket. Az egyik védekező mechanizmus egy, a szuperoxid dizmutáz enzimet is magába foglaló enzimatikus folyamat. Ez az enzim két szabad oxigén gyök és hídiogén hidrogén peroxiddá történő kapcsolódását katalizálja. A hidrogén peroxidot ezekután a peroxídázok, mint például a kataláz eltávolítják a szei vezetből. Egy másik védekező mechanizmust a teimészetes antioxidánsok biztosítanak, mint például a sejtmembrán hidrofób magjában lévő E vitamin (tocopherol), vagy a sejtben vízben oldott formában jelenlévő glutátion és aszkorbinsav. Ezek az antioxidánsok elégségesek akkor, amikor a sejtben noimális köiüimények között keletkező szuperoxidokat kell eltávolítani, nem tudnak viszont megbh kőzni azzal a (okozott szuperoxid teimeléssel, amely akkor lép fel, amikor ischemia után újia oxigén keiül a szövetekbe.
Ily módon felmei ült az igény olyan terápiásán alkalmazható, hatékony antioxidánsok kifejlesztésére, amelyek megakadályozzák vagy legalábbis csökkentik a bizonyos sebészeti beavatkozások (főként a szív, máj, vese és a hasonló szervek ischemiájával járó műtétek) után keletkező szabad oxigén gyökök okozta károsodást.
A korábbiakban mái javasoltak bizonyos vegyületeket, amelyek alkalmasak atra, hogy a szabad oxigén gyökök eltávolításával csökkentsék az ischemia és az azt kővető reperfüzió okozta károsodást. Ezek a vegyületek az allopuiinol, az aszkorbinsav, a di-tocopherol, az E vitamin és a 6-hidiOxi-2,5,7,8tetrametil-kroman-2-kaiboxil sav (Trolox). A Tioloxnak, mint az étel és zsír tartósításban szerepet játszó antioxidánsnak az eredeti leírása az US 4, 877, :
-4810 számon bejegyzett szabadalomban található (Scott és társai, J.Am.Oil.Chem. Soc. 51:200-203(1974)).
A szabad oxigén gyököknek bizonyos betegségek, így az ai tritisz, gyulladások, és a rák bizonyos típusainak kialakulásában valamint az öregedésben játszott szerepe szintén régóta ismert, (ld. például C-ross és társai. Ann.lnt. Med. 107:526-545.) Az E vitamint általában a legjobban ismert teimészetes antíoxídánsnak tekintik. Mindazonáltal terápiás célokra nem különösebben alkalmas, főként sürgős esetekben nem, mivel igen esősen lipofil és csak nagyon.lassan jut be a sejtekbe.
A purpuiogailin egy régóta ismert vegyület, a Meick Index 11. kiadásában a 7963 szám alatt szerepel. Kémiai szempontból a puipurogailin 2,3,4.6tetrahidroxi-5H-benzociklohepten-5-on, szerkezetét a mellékelt képlettel adjuk meg.
A molekula a piiogallol oxidációjával állítható elő. Általában ehető vagy ehetetlen zsírok vagy olajok, szénhidiogén tüzelő vagy kenőanyagok adalékaként használják, minthogy csökkenti az oxidációt vagy a fémszennyeződést.
Az US 4 181 545 számú szabadalmi leílásban (Andersen) ismertetik, hogy a púi purogallin és más hidroxi-szubsztítuált aromás vegyületek adalékanyagként használhatók fel a gumi alapú szilárd üzemanyagok polimerizált kötőanyagainak vulkanizálásakor. A szabadalom szerint ezek a vegyületek gyorsítják a vulkanizálás folyamatát és komplexet alkotnak azokkal a ···
-5 fémionokkal, amelyek különben mind a polimerizált, mint a polimei izálatlan rendszerek bomlását okoznák.
A jelen találmány tárgya egy az eddigieknél hatékonyabb, biomedikus szempontból elfogadható antioxidáns kidolgozása, amely többek között a reperfúzió során is alkalmazható.
A jelen találmány azon a megfigyelésen alapszik, hogy a púi purogallin és glükozidjai antioxidánsként és citoprotektív ágensként előre nem sejtett módon hasznosnak és hatékonynak bizonyultak a biomedikai felhasználás során. A púi purogallin ezekben az esetekben még az eddig használt antioxidánsoknál, a Troloxnál és az aszkorbinsavnál is hatékonyabbnak bizonyult. A purpurogallin különösen hasznos akkor, amikor a beteg vérét kezeljük ischemia után abból a célból, hogy csökkentsük az ischemia után adott'vér repeifúzió következtében keletkező szabad oxigén gyökök okozta szövet és szerv károsodást. A púipurogallin nem toxikus és nem bomlékony. a véráramban természetes körülmények között több hét múlva is kimutatható.
Jelen találmány a purpuiogallin és glükozidjainak citoprotektív, antioxidáns anyagokként történő felhasználását javasolja elsősorban.
Másodsorban - mivel adott egy, az emlősökben hatékonyan felhasználható antioxidáns és citoprotektív vegyület - a jelen találmány vonatkozik egy olyan gyógyszel készítményre is, amely a púi pur ogallint vagy annak glükozidjait gyógyászatilag hatásos mennyiségben tartalmazza egy fiziológiai szempontból megfelelő adjuváns tál saságában.
A jelen találmány további táigyát képezi egy módszer is, amelynek segítségével az emlősök vérének szabad oxigén gyök koncentrációja csökkenthető. E módszer szerint a fenti hatás akkor érhető el, ha az emlős vélt in vivő megfelelő mennyiségű purpurogallinnal vagy annak glükozidjaival kezeljük.
·» ♦ .··. .: : :
• * · · ♦ · ·*···» Λ · *»* « ··«· ··· « ο·
-6 A mellékelt ábrák szövege:
Az 1. ábra a később ismertetésre kerülő 1. példa eredményeinek grafikus formában történő bemutatása.
A 2. ábra a később ismertetésre kerülő 2. példa eredményeinek grafikus formában történő bemutatása.
A jelen találmány legfontosabb része annak a folyamatnak a leírása, amelynek során a purpuiogallint antioxidánsként alkalmazzuk abból a célból., hogy csökkentsük a szervek ischemia és r eperfúzió okozta károsodását. Ebből a célból a puipurogallin vegyület már hatásos mennyiségét a megfelelő fiziológiai szempontból alkalmas hordozóval együtt folyadék fői májában a beteg véiáiamába juttatjuk közvetlenül az ischémiát szenvedett szerv iepeifiiziója előtt, az illető szerv közelében. Minél közelebb van a gyógyszer injektálási helye az ischemiás szervhez, annál kevesebb puipogallin szükséges. Szintén jó eiedményeket élhetünk el, ha a púipogailint egy kényelmesen megközelíthető helyen juttatjuk a véiáiamba, de ez pazailás, meit ekkor nagy mennyiségű purpogailin injektálása szükséges. Néha azonban, például séiült beteg esetében, kétségtelen, hogy az injektálást nem a séiüit szerv közelében, hanem más, alkalmas helyen kell végrehajtani. Megfelelő hoidozó alkalmazásával még a szájon át tőiténő bevitel is elképzelhető.
A jelen szabadalmi leit ás szerint a purpurogallin bevitelére alkalmas fiziológiai szempontból megfelelő hordozók lehetnek a víz és sóoldatok, előnyösen izotóniás sóoldatok, vagy báimely általánosan használt kaidioplegíkus oldat, amely a vén ei kompatibilis és ezért hozzákevei helő. De a púi púi ogaííin oldat legmegfelelőbb hordozója a beteg saját véie, vagy más vele azonos véicsoportú vér. Ez sebészeti osztályokon, ahol az ischemia pioblémájával
-7 találkozhatunk, általában hozzáfélhető, és ez az, ami a beteg szempontjából a legmegfelelőbb hordozó.
Az alkalmazott purpurogallin mennyisége a beteg testsúlyának és vél kapacitásának függvénye. Általában az a legmegfelelőbb, ha testsúlykilogrammonként 0,3 - 15 mg, előnyösen 0,5 -10 mg puipijiogailint adunk. Noimál testsúlyú és vét kapacitású felnőtt embernek 3-100 mg purpurogallin elegendő. Ha gyermeknek vagy állatnak adjuk a gyógyszert, ezeket a mennyiségeket a páciens testsúlyának megfelelően arányosan kell változtatnunk.
A kezelés során alkalmazott oldat púi purogailin koncentrációja nem kritikus, effelől a felhasználó szabadon dönthet. Általában a híg oldatok a megfelelőbbek, mivel a purpurogallin oldatot előnyős lassan, pl. 10 - 20 perc alatt adagolni, és ilyen körülmények között híg oldatokkal könnyebb dolgozni. Általában a 0.1 - 10 mmol/1, előnyösen a 0.2 - 5 mmol/l koncentráció a megfelelő. A kezelés folyamán figyelemmel keil kísér ni a beteg általános állapotát és életjeieit, és szükség esetén változtatni kell az adagolás ütemén.
A jelen találmányt a továbbiakban példákon keresztül ismertetjük, de ezzel nem akarjuk behatárolni az alkalmazás körét. Hacsak külön nem jelezzük, a felhasznált vegyszeiek reagens tisztaságűak és a Sigma cégtől szál maznak (Sigma Chemical Co., St, Louis, Mo., USA). A purpurogallínt és a Troloxot az Aldiich cégtől vásároltuk (Aldrich Chemical Co.), az AAPH-t (2.2 -azo-bis-(2-amidinö-piopán)-HCÍ) a Polysciences Inc. szállította.
1. példa
Ebben a példában a kíséi leteket humán vörösvél testekkel végeztük, amelyeket purpurogallin és Trolox nélkül, ill. ezek különböző koncentrációjú
-8 oldatainak jelenlétében AAPH-dal történő teimális aktiváció következtében keletkező szabad gyökök hatásának tettünk ki azért, hogy az adott körülmények között meghatározzuk a purpurogallin citoprotektív kapacitását,
A frissen preparált humán vöiösvértesteket (wt) legalább háromszor mostuk sóoldatban 1500 g x 10 min centi ifugálással. Ezt követően foszfát pufferben (pH= 7.4) 20 %-os wt szuszpenziót állítottunk elő (Miki és társai. Aich. Biochem. Biophys. 258:373-380, 1937),
A szabad gyököket azo-iniciátor 2,2 -azo-bis (2-amidino-propáni-HCI (AAPH) teimális aktivációjával állítottuk elő. A 0,5 ml össztérfogatú reakcióelegy 10% wt szuszpenzió volt, végkoncentrációban 100 mmol/l AAPH-t valamint különböző mennyiségű purpurogailint tartalmazott 10 mmol/l koncentrációjú foszfáttal puff ereit sóoldatban, A fenti elegyet gyengén rázva 37 öC-on 180 peicig inkubáltuk. Ezt követően egy 35 ui-es aliquotot kivettünk a leakcióelegyből. feloldottuk 1,5 ml sóoldatban és lecentrifugáltuk (1500 g, 10 perc). A felülúszó abszoipcióját 525 nm-nél PBA vak mintával szemben olvastuk le A reakcióelegy másik aliquotjat hasonlóan 1,5 ml desztillált vízzel kezeltük, majd a teljes hemolízist 2 peices szonikálással éltük el. A hemolízis százalékát az idézett cikkben leírtaknak megfelelően számítottuk ki (Miki és társai).
Mindezeket az eiedményeket grafikusan az 1. ábra mutatja. Az ábiáiól leolvasható, hogy az antioxidánsok (a puipuiogallin és a Tiolox) koncentiációjának növekedésével emelkedett a hemolízis gátlás százaléka. Egy citopiotektív anyag antioxidáns hatékonyságát jellemző legfontosabb index az a koncentiácíóéiték, amely a sejtek 50 %-ának lízisét megakadályozza (IC50). A puipuiogaílin esetében az IC50 0,12 mmol/l, a Tioloxnál 0,74 mmol/l. Ebből látható, hogy a Tioloxnál hatszoi kevesebb puipurogallin megakadályozza a
- 9 sejtek 50 %-ának lízisét, így kijelenthetjük, hogy a purpurogallin hatszor hatékonyabb, mint a Trolox.
2. óéiba
Ebben a példában a kísérleteket patkány hepatocitákkal végeztük úgy, hogy szabad gyökök hatásának tettük ki Őket purpurogallin nélkül valamint különböző koncentrációjú púi purogallin oldatok jelenlétében.
A hepatocitákat hím Sprague-Dawley patkányokból (400 - 450 g) prepái álluk a Princen által megadott módszer szerint (Princen és társai, J.CIin Invest 78:1064-1071, 1986), azzal a módosítással, hogy a máj perfúzióját elősző! 250 ml 0.5 mmol/l EGTA-val és 142 mmol/1 NaCI-ot valamint 6 7 mmol/1 KCI-ot tartalmazó 10 mmol/l-os HEPES pufferrel (pH=7,4) végeztük 20 ml/peic sebességgel csőpögtetve, majd ezt követően a májat 5mmoi/l CaCIg-ot és 0,05% küllagenázt tartalmazó 100 ml magnézium mentes Hank's Balanced Salt Solution pufferrel mostuk át. A továbbiakban az előzőekben ismertetettek szerint jártunk el (Wu éstáisai, Biochem.Cell.Biol. 68: 1189-1194, 1990).
A szabad gyökökkel kapcsolatos kíséi leteket ügy hajtottuk végre, hogy a sejteket a médium eltávolítása után 3 ml 0,05 mol/l nátrium-foszfáttal pufféi élt sóoldatban (PBS) (pH=7.4) vettük fel, amely oxigén gyökök fejlesztéséi e alkalmas 66.7 nemzetközi egység/1 xantimoxidázt (XOD) és 2mmol/l hypoxantint tartalmazott, A különböző koncentrációjú puipurogallin oldatok hatásának összehasonlításához azt az időtartamot vettük alapul, amely alatt 105 azonos generációjú sejt 95%-a elpusztul. Amikor az antioxidáns jelen volt, azt a XOD-zal és a hypoxantinnal együtt adagoltuk, és hatását vakon teszteltük az eluátor által véletlenszerűen kiválasztott tiiplikátumokban, A púipuiogallint különböző koncentrációkban PBS-ben oldottuk, és legalább 30 percig gázmentesítettük.
- 10 ·· · · · * ··♦· ··· 4 «·
Mivel a purpurogallin részben vízoldékony, az oldatok 4 mmol/l koncentrációig rövid szonikálással készültek. A pH-t a sziláid puipuiogallin majdnem teljes feloldása után 7,40 ± 0,05 értékre állítottuk be. A kontrollok vagy csak PBS-ben felvett sejteket tartalmaztak, vagy PBS-t és sejtekkel inkubált XOD-t vagy hypoxantint.
A kísérletek eredményét a 2. ábra mutatja. A grafikon függőleges tengelyén a 100 000 hepatocita nekrózisához szükséges időt tüntettük fel peicekben, vízszintes tengelyén pedig a kísértetek során használt purpurogaílin koncentrációját mmol/1-ben. Az ábra számos kísérlet átlagértékét mutatja, a hasznait statisztikai analízisként a Student t-ριóbát használtuk. Az adatokat átlagolva ± SD (standard deviáció) adtuk meg. A kísérleti eredmények és a kontroll szignifikáns különbségét a p < 0.05 érték jelzi.
A 2. ábra azt mutatja, hogy hogyan függ a purpurogallin koncentrációjától a puipuiogallínnak a patkány hepatocitákra gyakorolt hatása. A nagyobb koncentrációban adagolt purpur ogaliin megnövelte azt az időtartamot (perc), amely alatt 100 000, oxigéngyökök hatásának kitett patkány hepatocita elpusztult. A purpuiogallin citoprotektív hatását a legjobban a 3mmoí/l koncentrációértéknél fejtette ki, amikor a hepatociták élettartamát akár 30 perccel is meghosszabbította. A kontroll kísérteiben (ahol a hepatocitákat minden adalékanyag nélkül tettük ki a hypoxantin és a XOD hatásának) a 100 000 hepatocita kb. 6 perc alatt többségében elpusztult.
További kísérleteink során patkány hepatocitákat tenyésztettünk, és az oxigén gyökök okozta károsodást vizsgáltuk puipurogaílin valamint Trolox jelenlétében. Ezeket a kísérleteket Wu fentebb már idézett cikke és a Clin. Chem. 36:1172-1173 (kivonat) alapján végeztük. A kísérletek eredményét az 1. táblázat foglalja össze.
.: : :
• · • · ··· · ··
I. TÁBLÁZAT
koncentráció (mmol/l) | oxigén gyökök hatásának kitett 105 patkán' hepatocita átlagos túlélési ideje (perc) | |
Púi puiogallin | Tiolox | |
0.5 | 13 | 12 |
1,0 | 20 | 13 |
2,0 | 31 | 16 |
A. kontroll kiséi leiben, amikor semmiféle adalékanyagot nem alkalmaztunk az oxigén gyökök hatásának kitett sejtek kb. 6,5 percig éltek, A táblázatban közölt adatok mutatják, hogy a púipuiogallin egyél telmúen jobb hatékonysággal védi meg a patkány hepatocitákat, mint a Tiolox, amely E vitamin száimazék lévén maga is hatékony antioxidáns,
3. példa
Humán ventiikuláiis myocitákat izoláltunk, és a már leíit és idézett módszei szerint (Wu és táisai) azt vizsgáltuk, hogy mennyiben képes a púi puiogallin ill. a Tiolox kivédeni az oxigén gyökök hatásai a bekövetkező sejtpusztulást Eredményeinket a II. táblázatban foglaltuk össze.
oxigén gyökök hatásának kitett 10^
- 12 II TÁBLÁZAT koncentráció (mmol/l) myocita átlagos túlélési ideje (perc)
Purpurogallin | Trolox | |
0,5 | 14 | 3.5 |
1,0 | >60 | 4,5 |
1.5 | > 60 | 4,8 |
3.0 | >60 | 5,3 |
A kontroll kísérletben, ahol nem használtunk semmilyen adalékanyagot, az oxigén gyökök hatásának kitett sejtek 2 percig éltek.
A II. táblázat adatai 5-7 közel azonos eredménnyel végződő kísértet átlagát mutatják. Az eredményekből kiolvasható, hogy ebben a kísérleti elrendezésben a pmpurogallin legalább egy nagyságrenddel hatékonyabb, mint a Tiolox, különösen 0,5 mmol/l-t meghaladó koncentr ációéi tekéknél.
4. példa
Patkány vese mesangiális sejteket izoláltunk, és a már fentebb leíit és idézett módszer szerint (Wu és társai) azt vizsgáltuk, hogy mennyiben ellensúlyozza az azonos koncentrációban adagolt pur purogallin és Trolox a szabad oxigén gyökök sejtkárosító hatását. Az eredményekből világosan kiolvasható, hogy a purpurogallin minden alkalmazott koncentrációértékben hatékonyabb a Troloxnál. Ezeket az eredményeket a III. táblázatban foglaltuk össze.
- 13 Ili, TÁBLÁZAT
Purpurogallin koncentráció (mmol/l) | XOD (66,7 IU/I) és Hypoxantin (0,5 mmol/1) hatásának kitett sejtek átlagos túlélési ideje (perc) | |
Purpurogallin | Troíox | |
0 (kontroll) | 5,7 | 5.7 |
0,13 | 11.5 | 6,4 |
0,25 | 13,4 | 6,6 |
0,50 | 16,0 | 7,4 |
1,00 | 19,4 | 7,8 |
5. példa
A púi puiogaílin citoprotektivilásának meghálál ozására részleges máj íschernia és repeifúzió után patkány májon in vivő kísérleteket végeztünk.
Kíséreteinkben a Wu által leírt modellt használtuk (Wu és társai. Hepatology. 13:575-580, 1591). Röviden összefoglalva, ebben a modellben a patkány máj bal latéiális, középső és Spigel lebenyeit ellátó véredényeket elzárják, olyan módon, hogy elcsipeszelik a bal portális vénát, a bal máj artériát és a bal epevezetéket. A. jobboldali portális vénát, máj artériát és epevezetéket belső sönt gyanánt épen hagyják. A vér edények mesterséges elzárását 0,3 - 0,4 kg tömegű, előzőleg egy éjszakán át éheztetett Sprague-Dawley patkányokon végeztük. Az ischemia feloldása előtt kb. 45 másodperccel 3 ml sóoldatot (kontroll kísérlet), vagy a sóoldatban a később megadott koncentrációban oldott
- 14 púi púiogallínt vagy Troloxot adagoltunk az állatoknak a pénisz vénán keresztül infúzióban 3 perc időtartam alatt. Mindezt 24 órás repeifúzió követte. A kísér let végén a nekiotizált részek kiterjedését a máj nedves tömegének arányában a jól ismert hisztokémiai módszerrel (Fredericks és táisai, Exptl.Mol.Path. 41:119125,1934) határoztuk meg.
A IV. táblázatban bemutatott eredményekből kiolvasható, hogy a púi pufogailin 4,4-től 18 pmol/testsúlykilograrnmíg növekvő mennyisége jelentős méifékben csökkenti a máj nekrotizált területeinek kiterjedését. Ez jól tükröződik a sz&ív a növekvő purpurogallin dózissal együtt növekvő épen maradt iészének nagyságában. Érdemes megjegyezni egyrészt, hogy a szerv épen maradt részének nagysága minden szinten szignifikánsan különbözik a kontroll éltektől, másieszt. hogy az antioxidánsok már hatékony dózisa testsúly kilóg lammonk ént csak umolokia tehető.
IV. táblázat
A PURPUROGALLIN HATÁSA A RÉSZLEGES ISCHEMIÁN ÉS REPERFÚZIÓN
KERESZTÜLESETT PATKÁNYOKRA
Kontroll Puipurogallin
infúzió dózis | csak sóoldat (antioxidáns nélkül) | 4,4 (μηχ | 6,3 jl/testsúl) | 18 / kg) |
átlag nekrózis (tömeg%) | 30,3 | 17,7 | 7,3 | 4,4 |
± SD | 11,9 | 4.6 | 4,9 | 1,1 |
épen maradt máj (%) | 0 ' | 42 | 76 | 86 |
patkányok száma | 6 | 6 | 6 | 6 |
p érték a kontrollal szemben | --- | 0,05 | 0,005 | 0,001 |
A p érték < 0,05 statisztikai szempontból szignifikáns.
6. példa
Ebben a példában a purpurogallin citoprotektív hatását in vivő körülmények között, nyúl szív ischémia - repeifúzíó után vizsgáltuk.
3,0 - 3,5 kg tömegű, fehér New-Zealarrd nyulakat intiamuszkuláiisan adott Ketamin (35 mg/kg), Atiavet (0,4 mg/kg) valamint intravénásán bejuttatott atropin alkalmazásával (0,1 mg/kg) elaltattunk.
Az állat elülső részének megbotol válása után az anesztéziát trachetómiával tartottuk fel olyan módon, hogy az állatot Harvaid típusú kisállat lélegeztetővel, 2,5% elránt (vagy enfluránt) tartalmazó oxigén alapú gázeleggyel ·· ·
- 16 pozitív nyomású respirációval lélegeztettük. A szegycsont eltávolítása (szternotómia) után a szívburkot felnyitottuk, és a szivet feltártuk. A bal cirkumflex koronaőrnek is nevezett anterior ventrikuláris korona artéria fő ágát, amely nyulak esetében a bal kamra nagy részét és a szívcsúcsot látja el vérrel, ideiglenesen elzártuk oly módon, hogy egy 5-0 selyemszállal 1 órára elkötöítük a csúcs és az atrioventrikulái is árok közötti részen 1/3 - 2/3 távolságban. Az elzáiás feloldása előtt kb. 1 pesccel az 1 mmol/l koncentrációjú tesztfolyadékból egy 30 mí-es mennyiséget injektáltunk a jobb külső juguláris vénába. A kontioíl állatok a tesztfolyadék helyett 30 ml normái sóoldatot kaptak. Az injektálást minden esetben 3 órás reperfúzió követte. Ezt követően a sziveket összegyűjtöttük, az enzimaktivitást kimutató tetiazóliiím festékkel megfestettük, és a nekrotizált területek nagyságát planimetriával meghatároztuk.
A veszélynek leginkább kitett teiületek meghatáiozásáia a szívre eredetileg feltett ligatúiát megszorítottuk, az aortában egy 22 G vastagságú katétert helyeztünk fel, amelyen keresztül 30 ml-nyi Evans-Blue oldatot injektáltunk a szívbe. A szívből ezután 2 mm vastag keresztirányú metszeteket készítettünk és 1.25%-os nitro-tetrazólium vörös festékkel 30 percig festettük. A negatív nitro-tetrazólium vöiös festést minden egyes lemezen tianszparens acetát lapon követtük, és a nekiotizált terület nagyságát komputeiizált planimetriával állapítottuk meg.
Eredményeinket az V. táblázat mutatja.
V táblázat | ||
Infúzió dózis | Kontroll sooldat (adalékanyag nélkül) | Púi ρυι ogaiíin (o.o· íO u.113Ovtestsij-y kq) |
Sz ei vnekrozis a veszélyeztetett területen (%) iSíiöC! á oU)
A néni nekiotizáit szerv (%)
-r r· ! □ (átlag)
Myiiíak szama p éilek a kontrollal szemben < 0 00 I
75% - os nem nekiotizáll szervmennyiség statisztikai és klinikai szempontból egya·árit eiósen sz«gntíikáns. Tudomásunk sz.es int ez a legalacsonyabb lywzat u ia tis nekiozis éltén, amit egyetlen vegyület íeinasznajasavei ene^ el az λ példa
A púipuiogalim egy diglűkozídját (C23H28O13) használtuk a jelen szabadalmi leírásban fentebb ismét teteti módszereknek és folyamatoknak megfelelően etítiociták hepatociták és myocilák. valamint a máj és a szív módéi! (elhasználásával szervek nekiózisának kivédéséle. Ez a vegyület ugyanolyan hatásosnak bizonyult, mint maga a púipurogallin. Ezenkívül nagy nyomású
- 18 folyadékkromatográfiával egy másik (valószínűleg mono-) glükozidot is előállítottunk, és ennek a hatását is megvizsgáltuk. Ez a vegyület úgyszintén a purpurogallinhoz hasonló módon viselkedett. Mindezen eredményeinkre támaszkodva kijelenthetjük hogy a ptupurogallin, valamint mono- és diglűkozidjai egyaránt igen hatékony citoprotektánsok mind sejttenyészetben, mind pedig in vivő körülmények között.
Claims (12)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Gyógyászati készítmény, amely emlősökben antioxidáns és citoprotektiv hatású, azzaf jellemezve, hogy a készítmény hatékony mennyiségű' purpurogallint vagy annak valamely glükozidját tartalmazza egy fiziológiai szempontból elfogadható adjuváns kíséretében.
- 2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény aktív alkotórésze purpurogallin.
- 3. A 2. igénypont szerint készítmény, azzal jellemezve, hogy az adjuváns vizes oldat.
- 4. A 3. igénypont szerint készítmény, azzal jellemezve, hogy az adjuváns víz, fiziológiás sóold’at vágy vér.
- 5. Eljárás az emlősök vérében megjelenő, oxidáló hatású szabad gyökök koncentrációjának csökkentésér e, azzal jellemezve, hogy az emlős vér t in vivő az 1. igénypontban leírt készítmény hatásos mennyiségével kezeljük.
- 6. Eljárás az emlősök vér ében megjelenő, oxidáló hatású szabad gyökök koncentrációjának csökkentésére, azzal jellemezve, hogy az emlős vért a 4. igénypontban leíit készítmény hatásos mennyiségével in vivő kezeljük.
- 7. Eljárás az emlősök különböző szelveiben a nevezett szerv iscnemiáját, majd vérrel történő repei fűz lóját követő szöveti károsodás csökkentésére, azzal jellemezve, hogy a vérhez az 1. igénypontban leírt készítmény hatásos mennyiségét ín vívó adagoljuk. : ’ *’z.·
- 8. Eijáiás az emlősök különböző szerveiben a nevezett szerv ischemiáját, majd vénei történő repeifúzióját követő szöveti károsodás csökkentésére, azzal jellemezve, hogy a veihez a 4. igénypontban leírt készítmény hatásos mennyiségét in vivő adagoljuk.
- 9. Az 5-8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy testsúlykilogrammonként kb. 0,3 - 15 mg purpurogallint alkalmazunk.
- 10. Az 5-8. igénypontok bál melyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy testsúlykilogrammonként 0,5 -10 mg púi purogailint alkalmazunk.
- 11. A purpurogallin vagy valamely glükozidjának az emlős vérben lévő, oxidáló hatású szabad gyökök koncentrációjának csökkentése céljából történő alkalmazása, azzal jellemezve, hogy a vért in vivő körülmények között a purpurogallinból vagy valamely glűkczidjából előállított, fiziológiai szempontból megfelelő készítmény hatásos mennyiségével kezeljük.
- 12. A purpurogallin egy olyan fiziológiai szempontból megfelelő készítményben történő alkalmazása, amely egy az emlősök vérében keletkező, oxidáló hatású szabad gyökök koncentrációjának in vivő csökkentésére alkalmas.hay? néíkuí1994 -06- 2 4 . .
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US70104791A | 1991-05-16 | 1991-05-16 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU9303246D0 HU9303246D0 (en) | 1994-03-28 |
HUT66375A true HUT66375A (en) | 1994-11-28 |
Family
ID=24815854
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9303246A HUT66375A (en) | 1991-05-16 | 1992-05-15 | Pharmaceutical composition comprising purpurogallin useful as an antioxidant and cytoprotective agent |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0584148A1 (hu) |
JP (1) | JPH06507610A (hu) |
AU (1) | AU1745592A (hu) |
CA (1) | CA2103040A1 (hu) |
HU (1) | HUT66375A (hu) |
WO (1) | WO1992020332A1 (hu) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0892157A (ja) * | 1994-05-02 | 1996-04-09 | F Hoffmann La Roche Ag | プルプロガリン誘導体 |
ES2570152T3 (es) * | 2008-06-25 | 2016-05-17 | Basf Se | Uso de derivados benzotropolona como absorbentes de UV y antioxidantes y su uso en filtros solares y/o composiciones cosméticas |
KR101748806B1 (ko) | 2016-02-29 | 2017-06-19 | 대구대학교 산학협력단 | Purpurogallin을 유효성분으로 함유하는 멜라닌 생성 억제 화장료 조성물 및 그 제조방법 |
KR102040230B1 (ko) * | 2017-09-25 | 2019-11-04 | 제주대학교 산학협력단 | 푸르푸로갈린을 포함하는, 활성산소종, 자외선 또는 미세먼지에 대한 피부 보호용 화장료 조성물 |
CN110128290B (zh) * | 2019-05-10 | 2022-04-29 | 江苏耐雀生物工程技术有限公司 | 红倍酚苯甲酰肼衍生物、中间体、制备方法及其应用 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4181545A (en) * | 1977-04-28 | 1980-01-01 | United Technologies Corporation | Hydroxylic aromatic compounds as additives for rubber-based, composite solid propellants |
US4919915A (en) * | 1987-03-03 | 1990-04-24 | Paul Averback | Method for detecting the ability to prevent red-to-green congophilic birefringence |
WO1988003805A1 (en) * | 1986-11-19 | 1988-06-02 | Chemex Pharmaceuticals, Inc. | Pharmacologically active compounds and mixtures thereof, organic compositions and metal salts |
DK36389A (da) * | 1988-02-05 | 1989-08-06 | Eastman Kodak Co | Praeparat og fremgangsmaade til at forebygge vaevskader ved reperfusion |
-
1992
- 1992-05-15 JP JP4509614A patent/JPH06507610A/ja active Pending
- 1992-05-15 CA CA002103040A patent/CA2103040A1/en not_active Abandoned
- 1992-05-15 HU HU9303246A patent/HUT66375A/hu unknown
- 1992-05-15 WO PCT/CA1992/000204 patent/WO1992020332A1/en not_active Application Discontinuation
- 1992-05-15 EP EP92909999A patent/EP0584148A1/en not_active Withdrawn
- 1992-05-15 AU AU17455/92A patent/AU1745592A/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO1992020332A1 (en) | 1992-11-26 |
CA2103040A1 (en) | 1992-11-17 |
AU1745592A (en) | 1992-12-30 |
HU9303246D0 (en) | 1994-03-28 |
JPH06507610A (ja) | 1994-09-01 |
EP0584148A1 (en) | 1994-03-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Singh et al. | Relation between myocardial glutathione content and extent of ischemia-reperfusion injury. | |
Deneke et al. | Transient depletion of lung glutathione by diethylmaleate enhances oxygen toxicity | |
Schoenberg et al. | Studies on the oxygen radical mechanism involved in the small intestinal reperfusion damage | |
Fecondo et al. | Superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase in the human cataractous lens | |
Sanfey et al. | The role of oxygen-derived free radicals in the pathogenesis of acute pancreatitis | |
Mickle et al. | Myocardial salvage with trolox and ascorbic acid for an acute evolving infarction | |
Brezis et al. | Transport activity modifies thick ascending limb damage in the isolated perfused kidney | |
Guice et al. | Superoxide dismutase and catalase: a possible role in established pancreatitis | |
Brass et al. | Enhanced activity of the free radical producing enzyme xanthine oxidase in hypoxic rat liver. Regulation and pathophysiologic significance. | |
Berisha et al. | Vasoactive intestinal peptide prevents lung injury due to xanthine/xanthine oxidase | |
US5373021A (en) | Use of disulfiram for Neuronal Protection | |
Schoenberg et al. | The role of oxygen radicals in experimental acute pancreatitis | |
Suzuki et al. | Significance of reactive oxygen species in distal flap necrosis and its salvage with liposomal SOD | |
US5990153A (en) | Ultrasonicated α-lipoic acid solutions for attenuating microvascular injury | |
Wedgwood et al. | A model of hemorrhagic pancreatitis in cats—Role of 16, 16-dimethyl prostaglandin E2 | |
Ciralik et al. | Effects of N-acetylcysteine on methotrexate-induced small intestinal damage in rats. | |
US5047395A (en) | Reduction of oxyradical damage in biomedical applications | |
Asplund et al. | Partial protection against streptozotocin-induced hyperglycaemia by superoxide dismutase linked to polyethylene glycol | |
HUT66375A (en) | Pharmaceutical composition comprising purpurogallin useful as an antioxidant and cytoprotective agent | |
Klein et al. | Failure of chronic, high-dose, oral vitamin E treatment to protect the ischemic, reperfused porcine heart | |
US5248668A (en) | Use of purpurogallin and glycosides thereof in treating ischemia in mammals | |
US20040176306A1 (en) | Compositions for raising uric acid levels and methods of using the same | |
Hawkes et al. | Ischaemia reperfusion injury in pedicle skin flaps in the pig: lack of protective effect of SOD and allopurinol | |
Tracey et al. | Effect of endothelial injury on the responses of isolated guinea pig pulmonary venules to reduced oxygen tension | |
WO1991015215A1 (en) | Fluid resuscitation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
DFD9 | Temporary prot. cancelled due to non-payment of fee |