HUT64397A - New antitumor antibiotic - Google Patents
New antitumor antibiotic Download PDFInfo
- Publication number
- HUT64397A HUT64397A HU9203317A HU9203317A HUT64397A HU T64397 A HUT64397 A HU T64397A HU 9203317 A HU9203317 A HU 9203317A HU 9203317 A HU9203317 A HU 9203317A HU T64397 A HUT64397 A HU T64397A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- compound
- fermentation
- bmy
- spectrum
- strain
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07G—COMPOUNDS OF UNKNOWN CONSTITUTION
- C07G99/00—Subject matter not provided for in other groups of this subclass
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/03—Actinomadura
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/825—Actinomadura
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
A találmány az 1990. január 12-én benyújtott 464 046 számú (CT-1970) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés folytatása.
Ismert, hogy az antibiotikus hatású szereket különféle típusú mikroorganizmusok fermentációja segítségével állíthatjuk elő. Ezen az úton előállíthatunk néhány biológiailag aktív kromofort úgy, hogy ezek protein molekulával kapcsoltak és így kromoprotein komplexet képeznek. A tanulmányozott kromoproteineket a [Neocarzinostatin chromophore, Napier, M.A., és munkatársai Biochem Biophys. Rés. Commun. 89., 635-642 (1979)] szakirodalmakban írták le. A daganatellenes C-1027 antibiotikum egy olyan kromofor frakció, amelyek a Streptomyces globisporus C-1027 mikoorganizmusból származtathatók le. Ennek izolálását, jellemzését és biológiai aktivitását T. Otani és munkatársai Nem protein kromofor izolálása és jellemzése, valamint antibiotikum C-1027 anyagból képzett lebomlási terméke, Journal of Antibiotics, 44, 564-568 (1991) közleményükben írták le.
A találmány tárgya új vegyület a BMY-46164, amelyet az Actinomadura törzs fermentációján keresztül állíthatunk elő, továbbá eljárás készítmény előállítására, amely ezt tartalmazza, valamint eljárás hatóanyag felhasználására és izolálására. A feltalálók a vegyület elnevezés alatt beleértik a készítmény valamennyi gyógyszerészetileg elfogadható származékát.
Az új fermentációs termék a nagyfelbontású, gyors atombombázásos tömegspektroszkópiás (FABMS) adatok alapján a c40H43N2°12c^- képletű anyag, amelynek molekulatömege 778. Az anyag színtelen, amorf, szilárd vegyület, amely a később megadott jellemzőkkel rendelkezik.
A találmány szerinti fermentációs termék egy nem protein jellegű, nem kovalens kötéssel kötött kromofor, amely a komplexálás során az Actinomadura törzsekből származó proteinhez kötődik.
A fermentációs termékről kimutattuk, hogy mikroba ellenes aktivitással rendelkezik különféle gram pozitív mikroorganizmusokkal szemben, például Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, és Bacillus subtilis. Ugyancsak aktivitással rendelkezik tumor ellenes modellek kezelésében, amely lehet például P388 leukémia.
Az új antibiotikumot a BMY-46164 termelő törzs vagy ennek mutánsa fermentációjával állíthatjuk elő, amelyeket vizes táptalajban bemerített aerob körülmények között végzünk mindaddig, amíg a fenti mikroorganizmus a fenti táptalajban jelentős mennyiségű BMY-46164 anyagot termel. A fermentációt a BMY-46164 anyag táptalajból történő kinyerése követi, amely termék lényegében melléktermékektől mentes.
Az Actinomadura Q473-8 törzs biológiailag tiszta tenyészetét, amelyből a találmány szerinti vegyület származik, letétbe helyeztük az American Type Culture Collection (AATCC) Rockville, MD központban, és ennek állandó készletében az ATCC-t 53806 kódszámmal látták el.
A fenti törzs tenyészeteit liofinként ugyancsak fenntartjuk a Bristol-Myers Squibb Company Pharmaceutical Research Institute Actinomycetes Culture Collection, Wallingford, Connecticut.
Az ATCC letét a találmány benyújtása előtt történt, és
- 4 megfelel a 35 U.S.C. 112 valamennyi letétbe helyezett mikroorganizmusra vonatkozó előállításának.
Az 1. ábrán a BMY-46164 vegyület UV spektrumát mutatjuk be, amelyet metanol oldószerben mértünk, a 2. ábrán a BMY-46164 IR spektrumát mutatjuk be (KBr), a 3. ábrán a BMY46164 vegyület dg-DMSO oldószerben felvett proton NMR spektrumát mutatjuk be, a 4. ábrán a BMY46164 vegyület dg-DMSO oldószerben felvett szén NMR spektrumát mutatjuk be.
A BMY-46164 találmány szerinti fermentációs termék kísérleti képlete C4QH43N2O12CI és molekulatömege 778.
A BMY-46164 vegyület előnyös előállítási eljárása az alábbi lépéseket tartalmazza:
1) az actinomycet alkalmas törzsének fermentálása,
2) a protein-szerű fermentációs termék extrahálása,
3) a 2) lépésben kapott termék denaturálása és
4) A C4QH43N2O2CI képletű, és 778 molekulatömegű termék izolálása.
A termék színtelen, amorf szilárd anyag, amelynek kémiai szerkezetét eddig nem bizonyítottuk, azonban az alábbi jellemzőkkel rendelkezik:
Tömegspketrum: Kratos MS 50 TC tömegspektrométer.
FABMS: 778,2527.
Jellemző fragmens ionok: 294,1339 és 149,0603.
Ultraibolya spektrum: Hewlett Packard 8452A dióda elrendezésű spektrométer; koncentráció: 1,0 mg/100 ml metanol. A semleges • * · · ·«* ·« · · • · · ····· ·· oldat az alábbi abszorpciós maximummal rendelkezik:
Anaxnm(E1%l cm) : 278 (635) .
| Perkin-Elmer | 1800 | FTIR | spektrométer | , KBr | cm 1: | ||||
| 3424, | 3076, | 2934, | 2838, | 2170, | 1640, | 1578, | 1520, | 1490, | 1462, |
| 1424, | 1376, | 1292, | 1248, | 1184, | 1156, | 1112, | 1072, | 1046, | 952, |
| 880, | 832, 810, 754, 682 | , 666, | 648, | 576, 525. |
900,
500 MHzÍH-NMR-spektrum:
Model AM-500 spektrométer.
Bruker mml. Oldószer dg-DMSO.
Kétszeres szén-proton minta, 5
| Kémiai eltolódások (ppm): 9,18 (sz 5, 1 H), | 8 09 (dd, 1 H) , | |||||
| 7,40 | (d, | 1 H) , | 7,15 | (d, 1 H) , 6,97 (d, 1 | H) | , 6,81 (d, 1 H), |
| 6,58 | (d, | 1 H) , | 6,37 | (t, 1 H), 5,41 (s, 1 | H) | , 5,37 (dd, 1 H), |
| 5,27 | (m, | 1 H) , | 5,13 | (sz s, 1 H), 4,91 (s | , 1 | H) , 4,89 (m, 1 H) , |
| 4,65 | (d, | 1 H) , | 4,22 | (sz d, 1 H), 4,13 (ddd, | 1 H) , 3,94 (m, 1 H) | |
| 3,80 | (dd, | 1 H) | , 3,54 | (s, 3 H), 3,46 (dd, | 1 | H) , 3,21 (d, 1 H) , |
| 3,12 | (s, | 3 H) , | 2,94 | (ddd, 1 H), 2,73 (m, | 1 | H) , 2,71 (dd, 1 H), |
| 2,58 | (dd, | 1 H) | , 2,31 | (dd, 1 H), 2,19 (s, | 3 | H) , 2,10 (s, 3 H) , |
| 1,26 | (s, | 3 H) . |
125 MHz 13C-NMR-spektrum:
spektrométer.
Bruker Model AM-500
Proton lecsatolt spektrum: kétszeres szén-proton minta, mm.
Oldószer: dg-DMSO. Kémiai eltolódások (ppm):
131,3,
133,0
131,4,
168,4,
168,1, t
153,3, 152,8, 139,3, 138,5,
| 131,0 | , 130,8 | ,126,8, 124,7, 124,3, 122,5, | 122,1, | 121,0, | , 109, | |||
| 97,5, | 95,7, | 94,3, | 94,2, 93,3, | 90,1, | 74,0, | 73,2, | 70,9, | 69,8, |
| 69,6, | 66,3, | 62,5, | 55,4, 54,4, | 52,3, | 43,2, | 37,5, | 33,6, | 22,7, |
16,1.
2,
19,5,
A fent leírt valamennyi élj órásban az alábbi paramétereket alkalmaztuk.
« r ·
- 6 Az oldószereket felhasználás előtt újra nem desztilláltuk. A metanol, az etil-acetát, a kloroform, a hexán, a dietil-éter, a diklór-metán és az acetonitril minősége ÁCS reagens fokozatú volt. A HPLC nagynyomású folyadékkromatográfiában alkalmazott víz helyben Barnstead Nanopure II rendszer segítségével ionmentesített víz volt. HPLC nagynyomású folyadékkromatográfiában alkalmazott metanol és acetonitril B&J Brand HPLC minősítésű oldószerek voltak. Az alkalmazott ammónium-acetát Fisher HPLC minőségű volt. A DEAE cellulóz Schleicher & Schuell anioncserélő cellulóz (2932 és 2893 adagok). A Tris puffer (trisz(hidroxi-metil)-amino-metán) enzim tisztaságú, különlegesen tiszta anyag volt (Bethesda Research Laboratories), amelynek töménysége 0,05M, pH értéke 7,4. A Dicalite anyag megnövelt sebességű fokozatnak megfelelő szűrési segédanyag (Grefco Minerals).
A normál fázisú vékonyrétegkromatográfiát (VRK) szilikagél 60, F254 lemezeken végeztük (EM Reagents, katalógusszám 5765, 5x10 cm, 0,25 mm vastag). A reverz fázisú VRK analízist Whatman MKC]_g lemezeken végeztük (katalógusszám 4803-110, 0,2 mm vastagság). A lemezeket Whatman hengeres futtatóedényekben fejlesztettük ki, amelyek fedéllel rendelkeznek, és 10 ml eluenst alkalmaztunk. A kromoforokat UV jelzéssel tettük láthatóvá 254 nm ultaibolya fény alkalmazásával.
A preparatív kromatográfiás vizsgálatokat (VRK) szilikagél 60, F254 lemezeken végeztük EM Reagents, katalógusszám 5766, 20x20 cm, 2 mm vastagság). A lemezeket fedéllel ellátott üvegedényekben fejlesztettük ki, 100 ml eluenst alkalmaztunk.
«· · · « • 4 · · ··· «««« « * · ·*··· ·· • · · · · «
- 7 A vákuum folyadékkromatográfiával alkalmazott berendezés egy Buchner tölcsérből (Kontes, K-954100), valamint egy ebbe beforrasztott_, zsugorított üveglemezből (M porozitás) , egy vákuum bevezetésére szolgáló oldalsóan illesztett bevezetésből, továbbá egy 24/40 csatlakozású befogadó edényből áll, amely utóbbi a berendezés alján helyezkedik el. A tölcséreket úgy hozzuk egyensúlyba, hogy a kezdeti eluenst 5 cm vastag abszorbens ágyra öntjük vákuum alkalmazásával. A mintákat az adszorbensre előre adszorbeáljuk, majd ezt rétegként alkalmazzuk iszapolva a tölcsérre, és az iszapolást a kezdeti eluenssel végezzük. A gradiens eluálás lépéseit előre meghatározott térfogatú, egyre növekvően poláros eluenssel hajtjuk végre. Minden egyes alkalmazott graduális eluens térfogat után a tölcsérben található adszorbens réteget szárazra szívatjuk. A frakciókat rotációs bepárlón töményítjük és az in vitro biológiai próba eredményei alapján a HPLC-UV, valamint a VRK analízisekkel egybevetve, egyesítjük.
A Dicalit kormatográfia kovaföldön végzett adszorpciós kromatográfiát jelent. A mintákat kloroform/metanol (2:1) oldószerelegyben oldjuk, majd Dicalitra adszorbeáljuk. A kapott port hexánban szuszpendáljuk, majd zsugorított üvegszűrő vákuum folyadékkromatográfia tölcsérekre visszük. Az oldószerek megfelelő előre meghatározott térfogatait nyomatjuk keresztül a Dicalin anyagon, és a frakciókat gömblombikban gyűjtjük, majd rotációs bepárlón bepároljuk.
A részecskeméret kizárásos kromatográfiás berendezés az alábbi volt. Glenco oszlop (2,5 belső átmérő x 100 cm), amely • « • ·
- 8 oldószerrel szemben ellenálló teflon véggel és lemezekkel ellátott; folyadékmérő berendezést (Inc. FMI laboratóriumi szivattyú (RP-G1501 modell); Glenco üvegszedő edény (500 ml); Isco 328 modell frakciószedő. Az oszlopokat 150 g Sephadex LH-20 (Pharmacia) előre duzzasztott ioncserélő iszappal töltjük, amely iszapot az eluáló oldószerben képzünk. Az oldószert lefelé haladó módon bocsátjuk keresztül az oszlopon a laboratóriumi szivattyú által meghatározott sebességgel.
A HPLC nagynyomású folyadékkromatográfiás tisztításokat Beckman System Gold egység segítségével végezzük, amely az alábbi alkotóelemeket tartalmazza: 126 modell oldószer szállító egység; 166 P programozható detektor; oldószer befogadó készlet; Altex injektor; Dynamax 60°A fém-preparált oszlopok; normálfázisú szilikagél (25 cm x 10 mm, 8 μ, Si-83-lll-C) vagy (25 cm x 21,5 mm, 8 μ, SÍ-83-121-C) továbbá reverzfázisú szilikagél (25 cm x 10 mm, 8 μ, CXg-83-211-C).
A találmány szerinti daganatellenes antibiotikum szert úgy állíthatjuk elő, hogy a megfelelő BMY-46164 anyagot termelő actinomicet törzset fermentáljuk. Előnyösen alkalmazható mikroorganizmus az Athénben (Görögország) izolált talajmintából nyert törzs, amely a Q473-8 jelet viseli. Biológiailag tiszta Q473-8 törzs tenyésztet helyeztünk letétbe az ATCC-ben, a fentiek szerint.
A Q473-8 törzsön végzett rendszertani vizsgálatokat részletesen leírták a 464 046 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben. A Q473-8 törzs kemo-taxonómiai adatai • · * · •«9 · · · * « · · · « » · · « · «· ♦ ·
- 9 és morfológiai jellemzői azt mutatják, hogy a mikroorganizmus az Actinomadura nemzetség tagja; részletesebben, morfológiájában és szén-felhasználási jellemzőiben az Actinomadura madurae mikroorganizmusra hasonlít. Lásd például Williams és munkatársai, The Prokaryotes, Vol II, 2103 - 2117 (1981), Starr, Stop, Truper, Balows és Schlegel szerk. közleményét.
További jellemzés a menaquinon analízist is beleértve szükséges ahhoz, hogy meghatározzuk, hogy a Q473-8 törzs vajon nem rendelkezik-e olyan jellemzőkkel, amelyek megfelelnek az újabban letétbe helyezett és javasolt uj nemzetség, a Nonomuria jellemzőinek. Lásd például Goodfellow és munkatársai, Biology of Actinomycetes (1988), 223 - 238 (1988), Okami, Beppu és Ogawara, szerk. közleményét.
A leírásba beleértendő, hogy a jelen találmány nem limitált a különösen előnyös, fent leirt törzsre, vagy olyan mikroorganizmusokra, amelyek tökéletesen megfelelnek a leírásnak. Különösen kiemelendő, hogy a fent leirt mikroorganizmusok bármely BMY-46164 anyagot termelő variánsainak vagy mutánsainak körét is beleértjük a találmány tárgykörébe, amelyeket szokásos eljárásokkal, mint például röntgensugárzással, ultraibolya-sugárzással, nitrogén-mustárokkal, fág-kezeléssel vagy hasonlókkal állíthatunk elő.
A BMY-46164 anyagot előállíthatjuk egy bármely Actinomadura faj törzsének (amely BMY-46164 anyag termelő) tenyésztésével, amely előnyösen a Q473-8 törzs vagy ennek mutánsa vagy variánsa, bemeritett, aerob körülmények között, vizes táptalajban.
k *·
- 10 A mikroorganizmust olyan táptalajban növesztjük, amely asszimilálható szénforrással rendelkezik, amely lehet például szacharóz, laktóz, glükóz, ramnóz, fruktóz, mannóz, melibióz, glicerol vagy oldható keményítő. A táptalaj továbbá tartalmaz asszimilálható nitrogénforrást, mint például peptont, hal tápanyagot, szójamag lisztet, földimogyoró tápanyagot, gyapotmag tápanyagot, kukoricaázalék levet, élesztő extraktumot vagy ammónium-sókat. Kívánt esetben adagolhatók szervetlen sók, mint például nátrium-klorid, kálium-klórid, magnézium-szulfát, kalcium-karbonát, foszfátok, stb.
A nyomelemek, mint például a réz, mangán, vas, cink, stb. kívánt esetben adagolhatók a táptalajhoz, vagy más adalékanyagok szennyezéseként vihetők a táptalajba.
A BMY-46164 anyag termelése elvégezhető bármely hőmérsékleten, amely a termelő mikroorganizmus megfelelő növekedését biztosítja, és ez a hőmérséklet lehet például körülbelül 16°C - körülbelül 41°C közötti. A fermentációt előnyösen körülbelül 25°C - körülbelül 35°C, különösen előnyösen körülbelül 27°C - körülbelül 37°C közötti hőmérsékleten végezzük. A közegben előnyösen semleges pH-értéket alkalmazunk. Az antibiotikum termelését általában körülbelül 4 - körülbelül 5 nap időtartam alatt végezzük.
A fermentációt lombikokban vagy laboratóriumi illetve ipari fermentorokban végezhetjük, amelyek eltérő kapacitásúak lehetnek. Amennyiben tank fermentáció alkalmazása szükséges, előnyösen táptalajban vegetatív inokulum képzését végezzük úgy, hogy kis mennyiségű táptalajban oltással vagy liofilizált tenyészet beadagolásával a mikroorganizmus segítségével ezt a vegetatív inokulumot~előállitjuk.
Amennyiben ezt az aktív inokulumot előállítottuk a fenti módon, ez aszeptikus módon átvihető a fermentációs tartályban található táptalajba, amelyben nagy méretben termeljük a BMY-46164 anyagot. A vegetatív inokulum képzésére alkalmazott táptalaj azonos vagy eltérő lehet a tartályban alkalmazott táptalajtól olyan határértéken belül, hogy biztosítsa a mikroorganizmus megfelelő jó növekedését. A fermentáció során a keverést mechanikus propeller segítségével biztosíthatjuk. A fermentáció során szokásos habzásgátló szereket, mint például zsirolajat vagy szilikonolajat alkalmazhatunk, amennyiben ez kívánatos.
A BMY-46164 antibiotikum izolálása a fermentációs közegből, valamint tisztítása nem végezhető semmilyen szokásosan alkalmazható oldószer extrakció vagy kromatográfiás eljárás segítségével. Ehelyett az izolálást az alábbiakban léirt eljárással végezzük.
A teljes térfogatú (90 liter) táptalajt Dicalite szűrési segédanyagon leszűrjük. A szürlethez 1 kg DEAE cellulózt adagolunk keverés közben, és az elegyet 4°C hőmérsékletre hütjük. A DEAE cellulózt szűréssel kinyerjük, és frissen, 4°C hőmérsékletre lehűtött trisz-pufferral átöblitjük.
A DEAE cellulóz szűrt lepényt extraháljuk úgy, hogy 1 órán át
1 metanol-etil-acetát (1 : 1) eleggyel állni hagyjuk.
Az extrakciós elegyet leszűrjük, és a kapott cellulóz szürőlepényt további 3 1 etil-acetáttal átöblitjük. Az egyesitett szerves extraktumhoz 6 1 hütött vizet adunk. Az etil-acetátos fázist elválasztjuk, és vákuumban bepároljuk; igy 1 g nyers„kromofór extraktumot nyerünk.
Más eljárás szerint a kromofór extraktumot úgy nyerjük ki, hogy az etil-acetátot a megosztási lépésben diklór-'' metánnal helyettesítjük. Ebben az esetben 1 térfogat protein-kötött DEAE cellulóz szürőlepényből extrakcióval nyert metanolos oldathoz 2 térfogat hütött, 4°C hőmérsékletű vizet és 1 térfogat diklór-metánt adunk. A szerves fázist rotációs bepárlón bepároljuk, és a nyers kromofór extraktumot kapjuk.
Az 1,0 g kromofór extraktumot 3,5 g Universal szilikagélre (63-200 mikron) adszorbeáljuk, majd 60 ml térfogatú vákuum folyadék-kromatográfiás berendezés tölcsérére visszük, amely 25 g Lichroprep Si 60 szilikagélt tartalmaz (EM Science, 9390, 25-40 mikron). A kloroform-metanol lépésenként! gradiens eluciót 300 ml eluens térfogat alkalmazásával végezzük. A 3-5. frakciók aktivitását in vitro próbákkal határozzuk meg. A fenti frakciókban alkalmazott eluens 3 % metanolt, 5 % metanolt illetve 8 % metanolt tartalmazó kloroform volt. A kombinált frakciókat (202 mg) tovább tisztítjuk preparativ rétegkromatográfiás eljárás segítségével, kloroform-metanol (90 : 10) eluens alkalmazásával.
A fő aktivitást mutató visszanyert sávot (Rf = 0,37, mg) további nagynyomású folyadék-kromatográfiás tisztításnak vetjük alá Dynamax fél-preparált szilikagél oszlopon (Si-83-lll-C). Az eljárásban izokratikus körülményeket (klorofom-metanol 94 : 6) 4 ml/perc áramlási sebességgel alkalmazunk.
A csúcsot 13,3 perc után eluáljuk, amelyet UV detektálással mutatunk ki (254 nm). A csúcsnak megfelelő eluátumot gyűjtjük, és szárazra pároljuk. A 28 mg maradékot második Merek preparativ vékonyréteg-kromatográfiás lapra visszük. A kifejlesztést kloroform-acetonitril (60 : 40) eluens alkalmazásával végezzük. A fő visszanyert sáv (R^ = 0,15) 16,5 mg.
A végső tisztítást reverz fázisú nagynyomású folyadék-kromatográfia (HPLC) segítségével végezzük, amelyben Dynamax fél-preparált oszlopot alkalmazunk (C^g-83-211-C).
A gradiens eluciót 20 % A - 80 % B — 40 % A - 60 % B eluens segítségével végezzük 40 percen át, ahol A = acetonitril, B = 0,1 m ammónium-acetát - metanol (3 : 1) elegy. A kívánt 11 mg kromofór eluciója 30,9 perc értéknél történik, és a termék BMY-46164 anyag.
Más BMY-46164 anyag tisztítására alkalmas eljárást is alkalmazhatunk, amelyet a nyers kromofór extraktumból kiindulva végezhetünk, az alábbiak szerint:
12,9 g nyers extraktumot kloroform - metanol 2 : 1 oldószerelegyben oldunk, majd 300 mg dicalite (kovaföld) adszorpciós anyagra adszorbeálunk. A Dicalite szürőlepényt 1 1 térfogatú, alábbi oldószerekkel mossuk, sorrendben: hexán, dietil-éter, etil-acetát, diklór-metán és metanol.
A BMY-46164 anyag a dietil-éter és az etil-acetát frakciókban található, amelyeket egyesitünk, és igy 0,6 g tömegű anyagot nyerünk.
Ezt a maradékot 5 ml kloroform-metanol (1 : 1) elegyben oldjuk, majd a fenti oldószereleggyel előre duzzasztott
Sephadex LH-20 oszlopra visszük. Az eluálási áramlási sebesség 1,5 ml/perc. öt frakciót gyűjtünk. A BMY-46164 anyagot főképpen a 3. frakcióban nyerjük, 0,7 agytérfogat-értéknél. A frakció bepárlása során 143 mg anyagot nyerünk.
A végső tisztítást normál fázisú, nagynyomású folyadék-kromatográfia (HPLC) alkalmazásával végezzük, amelyben 21,4 mm Dynamax preparativ oszlopot (Si-83-121-0), továbbá 10 ml/perc áramlási sebességet alkalmazunk. A gradiens eluciót kloroform - metanol (95 : 5) - kloroform - metanol (85 : 15) alkalmazásával végezzük 40 perc alatt. A detektálást 300 nm értéknél végezzük. így 27,7 perc értéknél 34 mg BMY-46164 anyagot nyerünk.
A BMY-46164 anyagot és/vagy sav vagy bázis addiciós sóját tartalmazó készítmények tartalmazhatnak bizonyos alkalmas mennyiségben felhasznált más alkotóelemeket is. Általában körülbelül 0,001 - 99,99 % egy vagy több gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyag alkalmazható ezekben a készítményekben, amely lehet például töltőanyag, hordozóanyag, stabilizáló anyag, gélképző anyag, színezőanyag, illatanyag és hasonló. A hatóanyag vagy hatóanyagok tartalma ezekben a készítményekben általában körülbelül 0,01 % - körülbelül 10 %, előnyösen körülbelül 0,17 % - körülbelül 5 %.
A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon részletesen bemutatjuk. A példák nem jelentik a találmány tárgykörének korlátozását.
1. példa
BMY-46164 anyag fermentációja rázóedényekben
A Q473-8 törzset kalcium-karbonáttal kiegészített élesztő-extraktum - maláta-extraktum agar-agar táptalajon tesztvizsgálati csövekben tároljuk, és ezekben visszük át.
A táptalaj 4,0 g dextrózt, 4,0 g élesztő-extraktumot, 10 g maláta-extraktumot, 1,5 g kalcium-karbonátot és: 15 g agar-agart tartalmaz. A fenti anyagok keverékét desztillált vízzel 1 1 térfogatra egészítjük ki. Minden egyes átvitel esetében az agar-agar kenetet 5-7 napon át 28°C hőmérsékleten inkubáljuk.
A termelő fázis számára az inokulumot úgy állítjuk elő, hogy a kenet tenyészet felületi növekedő részét 500 ml-es Erlenmeyer lombikba visszük át, amely 100 ml vegetatív táptalajt tartalmaz. A vegetatív táptalaj 2 % glükózt, % hal tápanyagot és 0,5 % kalcium-karbonátot tartalmaz. Ezt a vegetatív táptalajt 3 napon át 28°C hőmérsékleten inkubál juk forgó rázóedényben, amelynek forgási sebessége 250 fordulat/perc.
ml fenti vegetatív növekedési elegyet viszünk át egy 500 ml-es Erlenmeyer lombikba, amely 100 ml 2 % glükózt, % peptont és 0,5 % kalcium-karbonátot tartalmazó termelő táptalajt tartalmaz. A termelő táptalaj elegyet 4-5 napon át 28°C hőmérsékleten inkubáljuk forgó rázóedényben, amelynek fordulatszáma 250 ford./perc. A tenyészet a fermentációs ciklusban körülbelül 4 napon belül eredményez maximális szintű BMY-46164 anyagot.
• · * * · · · · • ·· »···* ··
2. példa
BMY-46164 fermentációja laboratóriumi fermentorban
1 névleges térfogatú Biolafitte fermentorban végzett fermentáció céljára kétlépéses vegetatív táptalajt alkalmazunk. 16 ml 1. példa szerinti vegetatív tenyészetet viszünk át egy 2 1 térfogatú Erlenmeyer lombikba, amely 400 ml második vegetatív táptalajt tartalmaz. A második vegetatív táptalaj 2 :% glükóz, 2 % pepton és 0,5 % kalcium-karbonát tartalmú. A második vegetatív tenyészetet 3 napon át 28°C hőmérsékleten rotációs rázóedényben inkubáljuk, amelynek fordulatszáma 250 ford./perc.
A fenti vegetatív tenyészet 1200 ml-ét egy 4 1-es Vitro edénybe visszük, majd ezt egy 50 1 névleges térfogatú Biolafitte fermentorba inokuláljuk. A fermentor 30 1 termelési táptalajt tartalmaz, amely 2 % glükóz, 2 % pepton és 0,5 % kalcium-karbonát tartalmú. A mikroorganizmus növekedését az alábbi körülmények között biztosítjuk: keverés: 250 ford./perc; hőmérséklet: 28°C; levegőztetés: 30 1/perc. A habzás szabályozására habzásgátló szert alkalmazunk (polipropilén-glikol 2000, Dow Chemical). A BMY-46164 termelése maximális értéke a 4 - 5. napon érhető el, a fermentációs ciklus indulásától számítva.
« * • ·· · ·« ·· • · · »«··· ··
3. példa
Bakteriális aktivitás tesztvizsgálat
Az alább leirt eljárásnak megfelelően a BMY-46164 hatásosságát vizsgáltuk, összehasonlítva az ampicillin ilyen hatásával, különféle mikroorganizmusokkal szemben. Az eredményeket az I. táblázatban mutatjuk be.
• 4
- 18 I. TÁBLÁZAT
A BMY-46164 baktériumellenes hatása
Elsődleges MIC-értékek (/Ug/ml)
| MIKROORGANIZMUS | BMY-46164 | AMPICILLIN |
| Enterococcus faecalis A2O688 | 8 | 0,25 |
| E. faecalis A257O7 | 4 | 0,25 |
| E. faecalis A257O8 | 8 | 0, 5 |
| Staphylococcus aureus A9537 | 4 | 0,06 |
| S. aureus/NCCLS törzs | 16 | 0,06 |
| S. aureus | 16 | 0,5 |
| Escherichia coli A15119 | > 500 | 1 |
| E. coli/NCCLS törzs | > 500 | 2 |
| E. coli A9751 | >500 | 0,25 |
| Kiebsiella pneumoniae A2O468 | > 500 | 16 |
| K. pneumoniae A2O468 | > 500 | 32 |
| Proteus vulgáris A21559 | > 500 | 32 |
| Pseudomonas aeruginosa A9843 | > 500 | > 128 |
| P. aeruginosa A2O235 | > 500 | 32 |
| P. aeruginosa/NCCLS törzs | > 500 | > 128 |
| Bacillus subtilis A95O6-A | 64 | 1 |
A BMY-46164 anyag baktériumellenes hatásának spektrumát sorozat táptalajhigitási eljárással határoztuk meg, táptalajt alkalmazva (Difco).
. · ···: : :
• · » · · * ·· ····< « ·* ·· ·
4. példa
Daganatellenes hatás tesztvizsgálat
A BMY-46164 anyag P388 leukémia daganatellenes hatását egerekben vizsgáltuk. A 2. ábrán bemutatjuk a
BMY-46164 anyag és az olivomicin A aktivitását.
| cd | ||
| g | cn | o |
| 'd | φ | cn |
| N | N | --- |
| Ul | tn | |
| cn | Λ | |
| Λ4 | :o | cd |
| Φ | £ | |
| P | »o | |
| Φ | i—1 | • |
| tn | 'Φ | in |
| M |
CL cd d kO kO kO
| o !—1 | ||||
| o r—d |
IO
U
EH >>* cAO cm σ>
O O
I
| r-d | σ> | cn | CM | in |
| »s | ·» | *» | K | |
| CM | O | O | o | CM |
BMY-46164 daganatellenes szerként! hatásossága
| ü) | ||
| tn | '<d | |
| 'cd | -P | |
| i—1 | •H | |
| o | Cn | |
| tn | H | |
| cd Ό | Λ | |
| cd | >< tn | |
| ». | cd | |
| tn Ή | > | |
| N | ||
| Ό | cd | |
| Ό | ||
| -— | <d | |
| tn | tn | N |
| ω | ||
| 'Φ | O | |
| tn | ||
| i—1 | g | •H |
Φ
| .x | ||
| 00 | o | |
| 00 | ül | tn |
| cn | ό | cd |
| Pd | >1 | |
| • · | Λί | <d |
| •P | Ο | Ό |
| cd | — | N |
| d | tn | O |
| cd | cd | Ό |
| tn | P | |
| cd | Ö | o |
| Q | d |
o m in r—I r—I in o CM
| o | in | m | o |
| «b | ·«. | ||
| in | CM | ’d’ |
CL H
| kb | r-H | r—1 | ||
| Λί | ||||
| Φ | • b | >*. | ||
| +J | in | in | ||
| •m | X | X | ||
| <D | Q | Q | ||
| ω | rd | i—1 | ||
| o | O | |||
| o | ex | |||
| kO | ||||
| k. | kb | |||
| O | Pd | PH | ||
| T—1 | H | H | ||
| X | 00 | << | in | o |
| *. | CM | rH | ||
| r—d | o | o |
>1 r—1
Φ •d tn 'Φ
P d
Ή
N cn •d ω 'Φ •P Φ !> r—I
Φ PQ cn
Ö Ή
Ο •rl g o > •H r-1 o
CM rCM cn cn
I >1
Sí PQ
| CM | ||
| O O o | ||
| & | kD | |
| r—d kO | ||
| r- | ||
| ί-1 | 1 | |
| tn | σ\ | |
| PQ | cn | Sí |
| PL | O | PQ |
DMSO+PBS 5 15,5 155 * ·»4* I· « · 4· ··« · · ♦ ·· • ·· ··«·· ·· ·· ·· β·
A II. táblázatban leirt adatokat azzal az eljárással nyertük, amelyet leirtak aTransplanted Animál Tumors, Bradner, W. T., Cancer and Chemotherapy Vol. 1, 221 - 227 (1980), S. T. Crooke és A. W. Prestayko, szerk. szakirodalomban .
Az eredmények bemutatják a találmány szerinti vegyület és gyógyszerészetileg elfogadható származékai alkalmazhatóságát baktériumfertőzések és daganatos megbetegedések kezelésében, különféle gazdaegyedekben.
A gazdaegyed elnevezés alatt nemcsak in vitro tesztvizsgálati sejteket és egeret értünk, hanem magasabbrendü szervezeteket, például emlősöket is. Az előnyösen kezelhető gazdaegyedek például a humán betegek.
A találmány szerinti vegyületek és készítmények az alkalmas gazdaegyednek például a baktériumfertőzésektől és/vagy daganatos megbetegedésben szenvedő betegeknek különféle utón adagolhatók. A találmány tárgykörébe beleértjük az orális, parenterális, helyi, nazális, szájbani és szemben alkalmazott készítményeket.
A találmány tárgykörébe továbbá beleértjük a lényeget nem megváltoztató, szakember által elvégezhető változtatásokat is.
Claims (11)
1. BMY-46164 vegyület, amelyet a Q473-8 Actinomadura törzs fermentálásával nyerünk, és amely vegyület a C4OH43N2°12Cl képletü, valamint 778 molekulatömegü, vagy ennek gyógyszerészetileg elfogadható származékai.
2. Az 1. igénypont szerinti vegyület sav vagy bázis addiciós származéka.
3. Az 1. igénypont szerinti vegyület, amely az alábbi spektroszkópiai jellemzőkkel rendelkezik:
a) tömegspektrum: FABMS: 778,2527, jellemző fragmens ionok: 294,1339 és 149,0603;
b) ultraibolya spektrum: semleges, 1,0 mg/100 ml metanolos oldat abszorpciós maximuma:
lambda nm(E?· 15 ) : 278 (635) ; és max 1 cm
c) infravörös spektrum: KBr pasztilla, cm : 3424,
3076, 2934, 2838, 2170, 1640, 1578, 1520, 1490, 1462, 1424, 1376, 1292, 1248, 1184, 1156, 1112, (1072, 1046, 952, 900, 880, 832, 810, 754, 682, 666, 648, 576, 524j
d) 125 MHz l^c-NMR-spektrum: Bruker Model AM-500 spektrométer, proton lecsatolt spektrum, kétszeres szén-proton minta, 5 mm, oldószer: DMSO-dg, » · · • · 9 * «<•<7 · *9 '·» • · · · «·· · · » ·>· ·· · · megfigyelt kémiai eltolódások (ppm): 168.4, 168.1,
e) 500 MHz ^H-NMR spektrum: Bruker Model AM-500 spektrométer, kétszeres szén-proton minta, 5 mm, oldószer: DMSO-dg, megfigyelt kémiai eltolódások (ppm):
9.18 (br. 5, 1H), 8.09 (dd, 1H), Ί.4Ό
4. Gyógyszerészeti készítmény, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti vegyület daganatellenes kezelésben hatásos mennyiségét és egy vagy több gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyagot tartalmaz.
5. Gyógyszerészeti készítmény, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti vegyület baktériumellenesen hatásos mennyiségét és egy vagy több gyógyszerészetileg elfogadható hordozóanyagot tartalmaz.
« «»·· · « «(fi· <·· · · « « · * «· · 4 · * · ·· « * 4 · 4♦
6. Eljárás gyógyszerészetileg aktív hatóanyag előállítására, amely a Q473-8 Actinomadura törzs fermentációjából származik, azzal jellemezve, hogy az eljárás lépései az alábbiak:
a) a megfelelő Actinomycetes törzset fermentáljuk,
b) a proteinszerü fermentációs terméket extraháljuk,
c) ab) lépés termékét denaturáljuk, és
d) a C4qH43N2°2C1 képletű és 778 molekulatömegü vegyületet izoláljuk.
7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a b) és c) lépéseket ioncserélő gyanta jelenlétében hajtjuk végre.
8. Biológiailag tiszta tenyészet, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti vegyületet tartalmazza.
9. Biológiailag tiszta koncentrátum, azzal jellemezve, hogy hordozóanyagot és az 1. igénypont szerinti vegyületet tartalmazza.
10. Eljárás mikrobiológiai fertőzésben szenvedő beteg kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek az 1. igénypont szerinti vegyület antibiotikus hatásban hatásos mennyiségét adagoljuk.
>
11. Eljárás daganatos megbetegedésben szenvedő beteg daganatos megbetegedésének kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek az 1. igénypont szerintivegyület daganatellenes hatásos mennyiségét adagoljuk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/780,516 US5304373A (en) | 1991-10-22 | 1991-10-22 | Antitumor antibiotic |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT64397A true HUT64397A (en) | 1993-12-28 |
Family
ID=25119809
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9203317A HUT64397A (en) | 1991-10-22 | 1992-10-21 | New antitumor antibiotic |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5304373A (hu) |
| EP (1) | EP0538781A3 (hu) |
| JP (1) | JPH07233184A (hu) |
| KR (1) | KR930008150A (hu) |
| CN (1) | CN1071950A (hu) |
| AR (1) | AR247246A1 (hu) |
| AU (1) | AU657004B2 (hu) |
| CA (1) | CA2080873A1 (hu) |
| EG (1) | EG19998A (hu) |
| FI (1) | FI924776A7 (hu) |
| HU (1) | HUT64397A (hu) |
| IL (1) | IL103495A (hu) |
| MX (1) | MX9205996A (hu) |
| MY (1) | MY129978A (hu) |
| NZ (1) | NZ244774A (hu) |
| RU (1) | RU2089614C1 (hu) |
| TW (1) | TW260710B (hu) |
| ZA (1) | ZA927974B (hu) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5304373A (en) * | 1991-10-22 | 1994-04-19 | Bristol-Myers Squibb Co. | Antitumor antibiotic |
| EP1213298A1 (en) * | 2000-12-04 | 2002-06-12 | Biosearch Italia S.p.A. | Antibiotics GE 23077, pharmaceutically acceptable salts and compositions, and use thereof |
| US6551591B1 (en) | 2001-09-07 | 2003-04-22 | Essential Therapeutics, Inc. | Antibiotics from microbispora |
| CN112359048B (zh) * | 2020-08-27 | 2021-12-28 | 浙江大学 | 一种吕宋肽菌素c的制备方法 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3859598A (en) * | 1969-04-09 | 1975-01-07 | Texas Instruments Inc | Aerial drop penetration device |
| JPS5750994A (en) * | 1980-09-12 | 1982-03-25 | Microbial Chem Res Found | Novel antibiotic mf266 substance and its preparation |
| GR78648B (hu) * | 1982-07-26 | 1984-09-27 | Bristol Myers Co | |
| US4615975A (en) * | 1983-07-08 | 1986-10-07 | Warner-Lambert Company | Purified culture of Actinomadura verrucaspora subspecies veractimyces |
| US4578468A (en) * | 1984-03-26 | 1986-03-25 | American Cyanamid Company | Antibiotic LL-D42067β |
| US4551533A (en) * | 1984-03-26 | 1985-11-05 | American Cyanamid Company | Antibiotic LL-D42067α |
| US4774184A (en) * | 1984-03-26 | 1988-09-27 | American Cyanamid Company | Culture and process for producing antibiotic LL-D42067alpha |
| US4859598A (en) * | 1984-03-26 | 1989-08-22 | American Cyanamid Company | Antibiotic LL-D42067β |
| US4921700A (en) * | 1985-08-27 | 1990-05-01 | Bristol-Myers Company | BBM-1675c and d antitumor antibiotics |
| US4845037A (en) * | 1986-07-31 | 1989-07-04 | American Cyanamid Company | Process for producing antibiotic LL-D42067α |
| US4994271A (en) * | 1988-02-16 | 1991-02-19 | Bristol-Myers Company | BMY-40800 antitumor antibiotics |
| US5087567A (en) * | 1990-01-12 | 1992-02-11 | Bristol-Myers Squibb Company | Antitumor antibiotic BMY-42428 |
| US5304373A (en) * | 1991-10-22 | 1994-04-19 | Bristol-Myers Squibb Co. | Antitumor antibiotic |
-
1991
- 1991-10-22 US US07/780,516 patent/US5304373A/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-10-15 JP JP4317674A patent/JPH07233184A/ja active Pending
- 1992-10-15 AR AR92323429A patent/AR247246A1/es active
- 1992-10-15 MY MYPI92001866A patent/MY129978A/en unknown
- 1992-10-15 ZA ZA927974A patent/ZA927974B/xx unknown
- 1992-10-16 NZ NZ244774A patent/NZ244774A/en unknown
- 1992-10-16 TW TW081108231A patent/TW260710B/zh active
- 1992-10-19 AU AU27111/92A patent/AU657004B2/en not_active Ceased
- 1992-10-19 CA CA002080873A patent/CA2080873A1/en not_active Abandoned
- 1992-10-19 MX MX9205996A patent/MX9205996A/es unknown
- 1992-10-20 CN CN92111554A patent/CN1071950A/zh active Pending
- 1992-10-20 EP EP19920117904 patent/EP0538781A3/en not_active Ceased
- 1992-10-21 RU RU9292004349A patent/RU2089614C1/ru active
- 1992-10-21 FI FI924776A patent/FI924776A7/fi not_active Application Discontinuation
- 1992-10-21 KR KR1019920019366A patent/KR930008150A/ko not_active Ceased
- 1992-10-21 HU HU9203317A patent/HUT64397A/hu unknown
- 1992-10-21 IL IL103495A patent/IL103495A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-10-22 EG EG63892A patent/EG19998A/xx active
-
1993
- 1993-02-12 US US08/017,223 patent/US5281417A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-10-25 US US08/142,559 patent/US5378463A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI924776L (fi) | 1993-04-23 |
| FI924776A0 (fi) | 1992-10-21 |
| JPH07233184A (ja) | 1995-09-05 |
| CN1071950A (zh) | 1993-05-12 |
| MY129978A (en) | 2007-05-31 |
| MX9205996A (es) | 1993-05-01 |
| EP0538781A3 (en) | 1994-05-11 |
| AU657004B2 (en) | 1995-02-23 |
| CA2080873A1 (en) | 1993-04-23 |
| EG19998A (en) | 1997-01-30 |
| FI924776A7 (fi) | 1993-04-23 |
| NZ244774A (en) | 1994-10-26 |
| RU2089614C1 (ru) | 1997-09-10 |
| AU2711192A (en) | 1993-04-29 |
| IL103495A0 (en) | 1993-03-15 |
| US5304373A (en) | 1994-04-19 |
| ZA927974B (en) | 1993-06-21 |
| IL103495A (en) | 1997-11-20 |
| US5378463A (en) | 1995-01-03 |
| AR247246A1 (es) | 1994-11-30 |
| TW260710B (hu) | 1995-10-21 |
| US5281417A (en) | 1994-01-25 |
| KR930008150A (ko) | 1993-05-21 |
| EP0538781A2 (en) | 1993-04-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3140228B2 (ja) | 新規な大環状ラクトンおよびその生産菌 | |
| JPH082907B2 (ja) | 新規免疫抑制剤 | |
| IE57825B1 (en) | Bbm-2478 antibiotic complex | |
| HU193973B (en) | Process for preparing 4'-dechloro-rebeccamicin | |
| CA1291054C (en) | Antitumor antibiotics (ll-e33288 complex) | |
| HU188684B (en) | Process for producing a2, and simultaneously produced a1 and a3 components of antibioticum a/16686 | |
| US5468849A (en) | Rebeccamycin analogs by tryptophan analogs feeding | |
| US5378463A (en) | Antitumor antibiotic | |
| KR920001366B1 (ko) | 새로운 항암 항생복합체 bbm-1675의 제조방법 | |
| EP0445736A1 (en) | Rebeccamycin analog and pharmaceutical composition containing it | |
| US4764602A (en) | Antibiotics, and their production | |
| US5158938A (en) | Rebeccamycin | |
| DK143570B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af maytansinol maytanacin og eller maytansinolpropionat | |
| US4495286A (en) | Antibiotic complex producing bacterial culture | |
| JPH0737B2 (ja) | スタウロスポリン発酵法 | |
| EP0702691B1 (en) | New thiodepsipeptide isolated from a marine actinomycete | |
| AU616946B2 (en) | Antibacterial and antitumor agents ll-e33288epsilon-i and ll-e33288-epsilonbr, with processes and intermediates for producing said agents | |
| JP3523290B2 (ja) | 化合物３１６６８ｐおよび３１６６８ｕ、それらの製造方法およびそれらの使用 | |
| CA1228313A (en) | Antibiotic sb 22 484 | |
| KR810001056B1 (ko) | 항생물질 c-15003의 제조법 | |
| US5036010A (en) | BMY-40800 antitumor antibiotics | |
| CA2037783C (en) | Rebeccamycin analogs by tryptophan analogs feeding | |
| JPS5918035B2 (ja) | 抗生物質ａｂ−８５ | |
| JPS6338030B2 (hu) | ||
| JPS6339887A (ja) | 新規抗生物質およびその微生物学的製法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC4 | Cancellation of temporary protection due to refusal |