HUT51328A - Process for producing proteins - Google Patents

Process for producing proteins Download PDF

Info

Publication number
HUT51328A
HUT51328A HU893251A HU325189A HUT51328A HU T51328 A HUT51328 A HU T51328A HU 893251 A HU893251 A HU 893251A HU 325189 A HU325189 A HU 325189A HU T51328 A HUT51328 A HU T51328A
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
proline
protein
precursor
gac
ctg
Prior art date
Application number
HU893251A
Other languages
English (en)
Inventor
Paul Habermann
Original Assignee
Hoechst Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Ag filed Critical Hoechst Ag
Publication of HUT51328A publication Critical patent/HUT51328A/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/55—IL-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
    • C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás proteinek előállítására.
Ha proteineket bakteriális rendszerekben exprimálnak, rendszerint olyan proteint kapnak, amely N-terminálisan metioninnal hosszabbítva van. Fiziológiailag hatásos proteinek esetén ez a járulékos metionin immunogenitást idézhet elő. Az N-terminális meghosszabbodás elkerülése végett fúziós proteinek előállítása céljából olyan géneket szerkesztenek, amelyek nemkívánatos részét kémiai utón vagy enzimesen le lehet hasítani a kívánt proteinról. A kívánt protein és a melléktermék(ek) szétválasztása azonban igen bonyolult lehet, és a hozamot is csökkenti.
Egyes esetekben sikerül ugyan , hogy baktériumokban zajló közvetlen expresszió esetén az N-terminális metioninos meghosszabbodást alkalmas fermentációs körülményekalkalmazásával többé-kevésbé háttérbe szorítsák, a dezmet forma hozama azonban sohasem kvantitatív.
Még ha a metionizált formáról teljesen lemondanak, azaz eleve kisebb hozammal beérik, akkor is rendkívül nehéz a kívánt protein és a metionin-szármezék szétválasztása, és tetemes további hozasmcsökkenéssel jár.
N-terminálisan prolinnal kezdődő proteinek előállítására ismert olyen eljárás, amelynek során géntechnikailag nyert, rövid N-terminális meghosszabbodást, előnyösen metionincsoportot hordozó előterméket aminopeptidáz-P enzimmel hasítanak (P 38 11 921.8 sz. NSZK-beli szabadalmi bejelentés). Az eljárás kiindulási anyaga protein-elegy is lehet, ahol a proteinek csak··· · · · · · · · ·
-3beli szabadalmi bejelentés). Az eljárás kiindulási anyaga protein-elegy is lehet, ahol a proteinek csakrészben hordanak N-terminális metionincsopcrtot.
Ezt. a gondolatot továbbfejlesztettük és azt találtuk, hogy genetikailag kódolt aminosavakból tetszőleges proteineket állíthatunk elő, ha géntechnikai utón N-terminálisan legalább prolinnal hosszabbított proteint állítunk elő, és ebből a proteinből prolin-iminopeptidáz alkalmazásával a kívánt proteint felszabadítjuk, adott esetben egyéb aminosavak aminopeptidáz enzimmel végzett előzetes lehasitása után.
A csatolt ábrán a pB32 expressziós vektor szerkesztését tüntettük fel; ez a vektor egy bifunkcionál'is proteint kódol, amely interleukin-2-ből és a granulociták-makro- . fág-serkentő faktorból (GM-CSF) származik. Ez a protein Met-Pro-val kezdődik, és a találmány szerinti eljárás egyik előnyös kiindulási anyagát képezi.
Az alábbiakban a találmány néhány előnyös kiviteli alakját ismertetjük.
A találmány szerinti eljárás kiindulási'anyagaként bármely, N-terminálisan prolinnal kezdődő, technikailag előállított proteint alkalmazhatunk, igy például proteolitikus lebontással előkezelt proteineket is,amelyek a 0 219 781, 0 227 938 és 0 228 018 sz. alatt publikált európai szabadalmi bejelentések szerint állíthatók elő. Előnyösen közvetlenül exprimált proteint alkalmazunk, ···· • · ·· • · · · ········ • ·· • · · · · ·· • · • · · ····.
-4különösen a P 38 11 921.8 sz. NSZK-beli szabadalmi leírás szerint előállított, illetve felhasznált proteineket. Amennyiben az egy vagy több prolincsoport előtt még egyéb aminocsoportot, főleg metionint tartalmazó proteint alkalmazunk, az említett csoportokat aminopeptidáz-P enzimmel.előzetesen eltávolítjuk. Kiindulási anyagként azonban alkalmas géntechnikai eszközekkel előállított olyan protein-elegy is, amelyben a proteinek csak egy része tartalmaz metionincsoportot a prolincsoport előtt. Elvileg bármelyik olyan protein alkalmazható, amely az N-terminális végén meghosszabbodott, ugyanis az aminopeptidáz-P enzim nem-specifikuséi módon minden ami nos avat lehasit, amely N-terminálisan a prolincsoport előtt helyezkedik el.
helyezA prolin-iminopeptidázt önmagában ismert módon állíthatjuk elő (Sárid et al., J. Bioi. Chem. 234, 1959, 1740. oldal; 237, 1962, 2207. oldal). Előnyös azonban, ha a szokásos elektroforetikus tisztítás helyett második kromatográfiás tisztítást alkalmazunk.
A prolin enzimes lehasitást ismert módon végezzük; az enzimet szabad vagy hordozóhoz kötött alakban alkalmazhatjuk. Az enzim immobilizálását például a 0 141 223, valamint 0 141 224 sz. európai szabadalmi leírás szerint, vagy az ott megadott irodalom szerint végezhetjük.
-5Amennyiben előzetesen további anincsavakat hasítunk le P-aminopeptidázzal, ezt az enzimet is vagy szabad, vagy hordozóhoz kötött állapotban használhatjuk. Különösen hordozóhoz kötött enzimek esetén a két enzimes reakciót kombinálhatjuk is; az immobilizált enzimeket úgy helyezzükel a reaktorban, hogy a reakcióoldat először a kötött P-aminopeptidázzal, utána a kötött prolin-iminopeptidázzal érintkezik.
A találmány tehát lehetővé teszi definiált N-terminálissal rendelkező polipeptidek és proteinek, főleg közvetlen exprimálással kapott termékek kinyerését kímélő enzimes körülmények között. A találmány szerinti eljárás tsnát mentes azoktól a hátrányoktól és korlátoktól, amelyek a kémia hasítási eljárásokra jellemzők.
Az alábbi példákkal a találmányt közelebbről ismertetjük. A részek és százalékok (ha mást nem kötünk ki) tömegrészek és tömegszázalékok.
1.példa
A prolin-iminopeptidáz elkülönítése és tisztítása K12-W-1361:pro~met~ tipusu E. coli törzsből indulunk ki, az elkülönítést és tisztítást Sárid et al. fent megadott publikációja alapján végezzük. Az enzim ott leirt elektroforetikus feldusitása helyett azonban kromatográfiás eljárást alkalmazunk DEAE-cellulóz felhasználásával (a Pharmacia cég nagynyomású folyadékkromatográfiás rendszere, mono Q HR55 jelű oszlop). Az enzim tartalmú frakció• ···· ···· ···· • ·· · · · • · ······· • · · · · «· ··· · ··» ··· ····
-6kat reakciópuf f.er-rel szemben (0,1 mólos 5,5-dietilbarbitursav és nátriumsója - pH 8,6 - oldatának 1 ml-jére 50 ul 0,1 mólos MnC^-oldat) dializáljuk.
A P-aminopeptidázt a P 38 11 921.8 sz. NSZK-beli sza badalmi bejelentésben leirtak szerint tisztítjuk az alábbiak szerint: E. coli sejteket 50 mM-os nátrium-foszfát-pufferben feltárunk, az elegyet centrifugáljuk, és a nyers sejtkivonatot 50 °C-on 15 percen át inkubáljuk.
utána az elegyet újból centrifugáljuk- és ammónium-szulfát tal' kicsapást végzünk 45 % telítettség mellett. Centrifugálás után az enzim a felül.úszó részben van. A további tisztítás az ismert eljárás szerint történik.
2, példa
Expresszióhoz használható plazmid szerkesztése
A 0 288 8o9 sz.
európai szabadalmi bejelentésben (illetve a 14661-88 sz .
osztrák szabadalmi bejelentésben) a pB30 jelű expressziós plazmidot ismertetik. Ez a plazmid olyan bifunkcionál is proteint kódol, amelyben az interleukin-2 (IL
2) aminosavsorát 15 aminosavból álló összekötő hid, ezt pedig a
GM-CSF aminosavsora követi. A szerkezeti gén IL része a 0 163 249 sz.
európai szabadalmi bejelentésben (illetve
070-85 sz .
osztrák szabadalmi bejelentésben) leírt mesterséges génen alapul (lásd mellék let). Ez a gén restrikciós enzimek által megtámadható szinguláris vágóhelyek egész sorát tartalmazza; a PstI, Xbal,
5acl enzimek vágóhelyeit génfragmensek szubklónozására használták. A Pstl-vágőhely az 21., 22. aminosav tartományában, az Xbal-vágőhely az 58-60. aminosav tartományában van. Az (1) képletű pB30 plazmidot PstI enzimmel részlegesen, Xbal enzimmel teljesen emésztjük, és az IL-2-részfragmenst kódoló kis, (2) képletű fragmenst izoláljuk.
A 0 163 249 sz. európai szabadalmi bejelentés szerint a (3) képletű oligonukleotidot szintetizáljuk (ez az ott leirt Ila képletű ONS-szekvenciának, azaz az Ia-If építőelemnek felel meg azzal a különbséggel, hogy az ATG-startkodon után a prolint kódoló CCG triplet.t következik toldalékként).
A kereskedelmi forgalomban kapható pUC19 jelű vektort EcoRI és Xbal enzimmel nyitjuk, és a (4) képletű nagy fragmenst a (2) és (3) képletű IL 2-részfragmenssel ligáljuk. E célból a 79/02 sz. E. coli törzs kompetens sejtjeit a ligációs eleggyel transzformáljuk, majd literenként 20 mg ampicillint tartalmazó IPIG/Xgal-lemezeken szélesztjük. A fehér telepeket izoláljuk, és a plazmid-DNS-t restrikciós és szekvencia-elemzéssel azonosítjuk. Az IL 2 első 59 aminosavat kódoló kívánt plazmidot pB31-nek nevezzük el (5.képlet ) .
Az (5) képletű, pB31 jelű plazmidból a (6) képletű IL 2 fragmenst EcoRI és Xbal enzimmel kivágjuk, és a megfelelő fragmnens helyére a pB30 jelű plazmidba építjük oly módon, hogy az (1) képletű pB30 plazmidot EcoRI és Xbal enzimmel emésztjük és a kapott nagy (7) képletű fragmenst a (6) ···· · ···· ···· ···· • ·· · · · • · · · ·· · · · • · · · · ·· ··· · ··· ···
- 8 (képletét nem tüntetjük fel, tekintettel arra, hogy eltérés csak az IL 2 gén ámugy sem rajzolt 5 ’-szakaszában van).
A pB32 jelű plazmidot az MM294 sz. E. coli törzsbe transzformáljuk, ott sokszorosítjuk, újból kinyerjük és a W3110 sz. E. coli törzsben exprimáljuk a 288 809 sz. európai szabadalmi leírásban foglaltak szerint.
3. példa
A bifunkcionális protein elkülönítése és tisztítása
Az expresszió befejeztével a sejteket centrifugáljuk és
6,5 pH-jű pufferben feltárjuk.· A feltárás elegyét centrifugáljuk; a bifunkcion él is protein az üledékben van. Az üledéket vízzel mossuk, majd 1 %-os dezoxikolát-oldatban szuszpendáljuk. Centrifugélás után az üledéket újból vízzel mossuk, majd 0,4 %-os N-laurozilsarkozin-nátriumsó oldatban szuszpendáljuk és a szuszpenziót egy órán át rázzuk. 10 mmólos réz-szulfát-koncentrációt állítunk be, majd 4 °C-on az elegyet egy éjszakán keresztül tovább rázzuk. Centrifugál'ás után a felülúszó részhez 6-szoros térfogatú a cetont adunk és a kicsapódó proteint centrifugálással elválasztjuk. Az üledéket megszárítjuk és annyi 6 mólos guanidinium-hidroklorid-oldattal hígítjuk, hogy 50-100 mg/1 proteint tartalmazó oldat keletkezzék, amelyet glicinpufferrel szemben (0,01 M glicin, 10 mM Tris-HCl, pH 7,5) dializálunk. Dialízis után újból centrifugáljuk az elegyet, és a felül úszó részt affinitás-kromatográfiás oszlopon engedjük keresztül, amely Affi-Gél 10 tölteten kötve IL 2 antitesteket tartalmaz. Az oszlopot először • ···· ···· *··· • · · · • · ··· ··· Λ · · · · ·· ··· · ··« ··· ····
- 9 1 mólos NaCl, 5 mM Tris-HCl oldattal, majd 10 M Tris-HCl oldattal pH-7,5) mossuk, utána a bifunkcionális proteint 0,2 n ecetsavval eluáljuk és Mn^+-pufferrel szemben (Varon et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 32 /1968/ 658).
4. példa
Az N-terminális Met-Pro-szekvencia lehasítása
A 3. példa szerint kapott bifunkcionális protein koncentrációját 5.10'6 és 10'5 közötti értékre állítjuk, majd az oldathoz 0,1-1 ug/ml P-aminopeptidázt adunk és a reakcióele-, gyet 37-40 °C-on egy órán át reagálni hagyjuk. A reakciót 10 mM Tris-HCl oldattal (pH 7,5) szembeni dialízissel félbeszakítjuk. A reakcióelegyet a 3. példa szerinti affinitáskromatográfia segítségével szétbontjuk. A bifunkcionális proteint tartalmazó frakciókat egyesítjük és azl. példában leírt prolin-iminopeptidáz-reakciópufferrel szemben dializáljuk. Utána annyi prolin-iminopeptidáz enzimet adunk az elegyhez, hogy az enzim : szubsztrátum tömegaránya mintegy 1 : 5 legyen. Az elegyet 40 °C-on 8-16 órán át inkubáljuk. A prolin Troli módszerével (Troli et al., J. Bioi. Chem. 215 /1955/ 655) követjük. A reakciót 10 mólos cink-klorid-oldat adagolásával megszakítjuk. A reakcióterméket fordított fázisú nagynyomású folyadék króm atográfiával tisztítjuk, majd sómentesítés után az aktivitást megmérjük és a proteinszekvenciát elemezzük. Az utóbbi gyakorlatilag homogén N-terminálist mutat.
··· · ···· ···· ···· • · · • · ······· • · · · ·· ··· · ··· ···
- 10 A biológiai aktivitás (a csór, tv elő proliferiációs teszttel mérve) a 288 809 sz. eurcoai szabadalmi leírásban ismertetett proteinéval azonos.
···· · ···· ···· ···· • ·· · · · • · · · ·* · 4· • · · · · ·· ··· · «*· ·♦·
A 0 153 249 sz. alatt publikált szerinti DNS-szekvencia T riplet t száma európai sza iba dalmi 0 Met ATG TAC bejelentés
1 ' AA TTC G 1 Alá 10 GCG CGC 2 Pro CCG GGC
aminosav 5 3
nukleztid sz áma zál
kódoló nem k ó szál dől ó s
3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gin Leu
20 30 40
ACC TCT TCT TCT ACC AAA AAG ACT CAA CTG
TGG AGA AGA AGA’ TGG TTT TTC TGA GTT GAC
13 14 15 16 17 18 19 20 21 22
Gin Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gin
50 60 70
CAA CTG GAA CAC CTG CTG CTG GAC CTG CAG
GTT GAC CTT GTG GAC GAC GAC CTG GAC GTC '
23 24 25 26 27 28 29 30 31 32
Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
80 90 100
ATG ATC CTG AAC GGT ATC AAC AAC TAC AAA
TAC TAG GAC TTG CCA TAG TTG TTG ATG TTT
33 34 35 36 37 38 39 40 41 42
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe
110 120 130
AAC CCG AAA CTG ACG CGT ATG CTG ACC TTC
TTG GGC TTT GAC TGC GCA TAC GAC TGG AAG
43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Alá Thr Glu
140 150 160
AAA TTC TAC ATG CCG AAA AAA GCT ACC GAA
TTT AAG ATG TAC GGC TTT TTT CGA TGG CTT
53 54 55 56 57 58 59 60 61 62
Leu Lys Hls Leu Gin Cys Leu Glu Glu Glu
170 180 190
CTG AAA CAC CTC CAG TGT CTA GAA GAA GAG
GAC TTT GTG GAG GTC ACA GAT CTT CTT CTC
63 64 65 66 67 68 69 70 71 · 72
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu
200 210 220
CTG AAA CCG CTG GAG GAA GTT CTG AAC. CTG
GAC TTT GGC GAC CTC CTT CAA GAC TTG GAC
73 74 75 76 77 78 79 80 .81 82
Alá Gin Ser Lys Asn Phe Hls ' Leu Arg Pro
• 230 240 250
GCT CAG TCT AAA AAT TTC CAC CTG CGT CCG
CGA GTC AGA TTT TTA AAG GTG GAC GCA GGC
83 84 85 86 87 88 89 90 91 92
Arg Asp Leu He Ser Asn He Asn Val He
260 270 280
CGT GAC CTG ATC TCT AAC ATC AAC GTT ATC
GCA CTG GAC TAG AGA TTG TAG TTG CAA TAG
93 94 95 96 97 98 99 100 101 102
Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr
290 300 310
GTT CTG GAG CTC AAA GGT TCT GAA ACC ACG
CAA GAC • CTC GAG TTT CCA AGA CTT TGG TGC
···· ··♦· ···« • 9 · • ♦·· ··* • 9 »*·
103 104 105 106 107 108 109 110 111 112
Phe Met Cys Glu Tyr Alá Asp Glu Thr Alá
320 330 340
TTC ATG TGC GAA TAC GCG GAC GAA ACT GCG
AAG TAC ACG CTT ATG CGC CTG CTT TG A CGC
113 114 115 116 117 118 119 120 121 122
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile
350 360 370
ACG ATC GTT GAA TTT CTG ' AAC CGT TGG ATC
TGC TAG CAA CTT AAA GAC TTG GCA ACC TAG
123 124 125 126 127 128 129 130 131 132
Thr Phe Cys Gin Ser Ile Ile Ser Thr Leu
380 390 400
ACC TTC TGC CAG TCG ATC ATC TCT ACC . CTG
TGG AAG ACG GTC AGC TAG TAG AGA TGG GAC
133 134 135
Thr
410
ACC TG A TAG 3
TGG ACT ATC AGC T 5

Claims (5)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. Eljárás protein előállítására, azzal jellemezve, hogy géntechnikai úton N-terminálisan legalább prolinnal meghosszabbodott előterméket állítunk elő és ebből
    - kívánt esetben egyéb aminosavak lehasítása után - prolin-iminopeptidázzal végzett reagáltatás útján a kívánt proteint felszabadítjuk.
  2. 2. Az 1. igénypont szerint eljárás, azzal j e 1 -
    1 e m e z v e , hogy a kívánt protein előtt N-terminálisan a Met-Pro szekvenciát tartalmazó előterméket készítünk.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, a z z al jellemezve, hogy a géntechnikailag előállítandó előterméket közvetlen expresszióval állítjuk elő.
  4. 4· A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az előterméket baktériumokban végzett közvetlen expresszió útján nyerjük.
  5. 5. A 3. vagy 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy előtermékként olyan elegyet alkalmazunk, amelyben a proteineknek csak egy része tartalmaz a prolincsoport előtt metionincsportót
HU893251A 1988-06-30 1989-06-28 Process for producing proteins HUT51328A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3822045A DE3822045A1 (de) 1988-06-30 1988-06-30 Verfahren zur herstellung von proteinen

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HUT51328A true HUT51328A (en) 1990-04-28

Family

ID=6357596

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU893251A HUT51328A (en) 1988-06-30 1989-06-28 Process for producing proteins

Country Status (13)

Country Link
EP (1) EP0348780A2 (hu)
JP (1) JPH0284196A (hu)
KR (1) KR910001052A (hu)
AU (1) AU610736B2 (hu)
DE (1) DE3822045A1 (hu)
DK (1) DK324589A (hu)
FI (1) FI893168A (hu)
HU (1) HUT51328A (hu)
IL (1) IL90773A0 (hu)
NO (1) NO892716L (hu)
NZ (1) NZ229748A (hu)
PT (1) PT91016A (hu)
ZA (1) ZA894941B (hu)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3811921A1 (de) * 1988-04-09 1989-10-19 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von proteinen, die n-terminal mit prolin beginnen
JPH04503610A (ja) * 1990-01-19 1992-07-02 ベーリンガー　マンハイム　ゲゼルシャフト　ミット　ベシュレンクテル　ハフツング 基質を酵素学的に処理する方法
US6071718A (en) * 1996-11-27 2000-06-06 Abbott Laboratories Methods of producing a recombinant protein
US6287866B1 (en) 1996-11-27 2001-09-11 Abbott Laboratories β-casein expressing constructs

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01181796A (ja) * 1988-01-14 1989-07-19 Ajinomoto Co Inc 組換えｄｎａ法を用いたポリペプチドの製造法
DE3811921A1 (de) * 1988-04-09 1989-10-19 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von proteinen, die n-terminal mit prolin beginnen

Also Published As

Publication number Publication date
DK324589D0 (da) 1989-06-29
DE3822045A1 (de) 1990-01-11
FI893168A (fi) 1989-12-31
KR910001052A (ko) 1991-01-30
IL90773A0 (en) 1990-01-18
DK324589A (da) 1989-12-31
EP0348780A2 (de) 1990-01-03
AU610736B2 (en) 1991-05-23
JPH0284196A (ja) 1990-03-26
NZ229748A (en) 1991-03-26
ZA894941B (en) 1990-04-25
FI893168A0 (fi) 1989-06-28
AU3717089A (en) 1990-01-04
NO892716L (no) 1990-01-02
PT91016A (pt) 1989-12-29
NO892716D0 (no) 1989-06-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2686090B2 (ja) 新規融合蛋白質およびその精製方法
KR0150565B1 (ko) 유전자 조환에 의한 사람 인슐린 전구체의 제조 및 이를 이용한 인슐린의 제조방법
AU618612B2 (en) Insulin precursors
KR920006879B1 (ko) 고정제 단백질의 제조방법
US5019500A (en) IGF-I fusion proteins; protection of IGF-I from degradation by host cell proteases; and processes for the production thereof
CA1341390C (en) Human protein disulfide isomerase polypeptide and dna encoding the same
GB2147902A (en) Microbially produced bgh and its use
KR920003787B1 (ko) 신규 플라스미드 제조 및 그를 함유한 균주를 배양하여 아이 지 에프-1(igf-1)을 생산하는 방법
PT871718E (pt) Produção de carboxipeptidase b recombinante, activa sob o ponto de vista enzimático.
US5028531A (en) IGF-I fusion proteins; protection of IGF-I from degradation by host cell; and processes for the production thereof
CA2076320C (en) Process for producing peptide
US6403336B1 (en) Process for the production of α-human atrial natriuretic polypeptide
US4828988A (en) Hybrid polypeptides comprising somatocrinine and alpha1 -antitrypsin, method for their production from bacterial clones and use thereof for the production of somatocrinine
IE57664B1 (en) The preparation of polypeptides having an amide carboxyl terminal end
EP0259891B1 (en) [Leu 13] motilin, DNAs coding for same and methods for producing same
HUT51328A (en) Process for producing proteins
EP0095351B1 (en) A precursor of a c-terminal amidated peptide and production thereof
EP0194006B1 (en) Analogous interferon polypeptides, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US4935351A (en) Process for preparing oligopeptide
US4711847A (en) Preparation of secretin
HU197939B (en) Process for producing deoxyribonucleic acid, or its precursor, determining human growth hormone releasing factor
WO1990008194A1 (en) PROCESS FOR PRODUCTION OF C-TERMINAL α-AMIDATED PEPTIDE
US5252482A (en) Precursor of a C-terminal amidated calcitonin
HUT51676A (en) Process for producing proteins n-terminally beginning with proline
US5721353A (en) DNAs coding for LCU13 ! motilin

Legal Events

Date Code Title Description
DFA9 Temporary protection cancelled due to abandonment