HU230584B1 - Eljárás peptidek előállítására - Google Patents

Eljárás peptidek előállítására Download PDF

Info

Publication number
HU230584B1
HU230584B1 HU1400114A HUP1400114A HU230584B1 HU 230584 B1 HU230584 B1 HU 230584B1 HU 1400114 A HU1400114 A HU 1400114A HU P1400114 A HUP1400114 A HU P1400114A HU 230584 B1 HU230584 B1 HU 230584B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
arg
leu
gly
acid
ser
Prior art date
Application number
HU1400114A
Other languages
English (en)
Inventor
Fülöp Ferenc dr.
Mándity István dr.
Balázs Olasz
Original Assignee
Szegedi Tudományegyetem
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Szegedi Tudományegyetem filed Critical Szegedi Tudományegyetem
Priority to HU1400114A priority Critical patent/HU230584B1/hu
Priority to PCT/HU2015/000022 priority patent/WO2015128687A1/en
Priority to EP15715810.6A priority patent/EP3110828B1/en
Publication of HUP1400114A2 publication Critical patent/HUP1400114A2/hu
Publication of HU230584B1 publication Critical patent/HU230584B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C07K1/042—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers characterised by the nature of the carrier
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C07K1/045—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers using devices to improve synthesis, e.g. reactors, special vessels
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
    • C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/10—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using coupling agents

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

Eljárás peptidek előállítására
Λ találmány tárgyát peptidek és enantiomereik, diasztereomereik, sztereoizomereik, ezek keverékei, és mindezek sói, és/vagy származékai előállításéra szolgáié, szilárd hordozón végzett, áramlásos kémiai eljárás és berendezés a nevezett eljárás megvalósításában történő alkalmazásra képezi.
Az élet alapját adó biopolimerek, mint oiigo- és poliszacharidok, oiigo- és polinukteotidok, és oiigo- és poíípeptidek rendkívüli fontossággal bírnak. A peptidek és proteinek az aminosavak polimerei. Értékes biológiai hatásuknak köszönhetően már a 20. század elején intenzíven vizsgálták ez utóbbi területet. Eleinte izoiátumok hatását tanulmányozták, majd oldat fázisban szintéziseket is végezték (Bernd Groner: Peptídes ás Drugs. Díscovery and Development WISey-VCH 2009).
A peptidek gyakorlati alkalmazását képezik a pepiid gyógyszerek pl vazopréssin, gozereiín, exenaiid, octreotíd, stb (C.M.B. Edwards, MA. Cohen, S.R. Bloom Q. 7. Med. 1999; 92, 1-4; Cynthsa L. Síevenson Current Pharmaceutícaí Bsoteehnoiogy, 2009, 10, 122-13?). Fehérjéket, pl: monoklonális antitesteket, tartalmazó vakcinákat is alkalmaznak a rákbetegség terápiájában. Ilyen vegyüiet pl. a Trastuzumab (Shak, S 8EMINARS IM GNCOLOGY 1999, 26. 71-7?) Továbbá jelentős a módosított, jelölt, pl. redio-pepiidek előállítása és alkalmazása is (Flsoher, G; Schírrmacher, R; Wangler, B: Wangler, C CHEMMEDCHEM 2013, 6, 883-890). Egyes peptidek összefüggésbe hozhatók betegségekkel, pl,: β-amiloid pepiid Aízheímer-kor esetén. Ilyen peptidek szintetikus előállítása (Bacsa, Bernadett: Bősze, Szilvia; Kappe, C. Olivér JOURNAL 0F ÖRGANIC CHEMISTRY 2010, 75, 2103-2106) gyorsította a betegség
A szintézis miatt azonban a gyakorlatban alkalmazott peptideket ko-
alkalmazó biotechnológiai eljárásokkal nyerik, mivel a peptsdszintézis kémiai eljárásáé val még nem sikerüli egy-egy hosszabb szekvencia gazdaságos előállítását megvalósítani. így máig szükség lenne gyors, hatékony pepiid előállítási eljárásra (V.R. Pattabiraman, J. W, Bode: Natúré 480, 471-479, 2011). A modern peptídkutatások során egyre gyakrabban alkalmaznak nem-természetes aminosav származékokat, melyek esetén a pepfidszintézis gyakorta rendkívül drágán valósítható meg, ezért a szín2 tézisek során az alkalmazott aminosav feleslegének csökkentése rendkívüli költség, és környezeti szennyezés csökkentő Sebet.
Míveí, mint a fentiekből látható, a peptidszíntézis megvalósítása alapvető fontosságú a tudomány és a gyakorlat számára (Murray Goodman, Claudio Toniolo, Luls Móröder: Synthesís of Peptídes and Peptidomimefics (Methoös ín Örganic Chemístry) Houben-Weyl, 2ÖG2; Andrew B. Hughes: Amino Acids, Pepfides and Proteiné In Örganic Chemisfry, Voll-5, Wiley-VCH 2011], mind a peptid alapú gyógyszerhatóanyagok fejlesztésénél mind a biológiailag hatásos peptidek előállításánál nagy szükség van szintetikus módszerekre, ezért az amino- és karboxilcsoportot tartalmazó amlnosavak adott sorrendben történő összekapcsolására számos eljárást dolgoztak ki. Megfelelő védő és aktiváló csoportok egymás utáni adott időben történő kialakítása és lehasítása segítségévei először egyszerű és rövid szekvenciák szintézisét végezték. A hosszabb szekvenciák előáliíthatósága területén áttörést jelentett a Bruce Merrífíeld által 1963-ban bevezetett szilárd hordozős peptídszintézis (SzHPSz) (R. B. Merrifieid: a'.
Ant Chem. Soc.
szintézise rendkívül nagy aminosav feleslegek alkalmazása mellett vált lehetővé. Ma szintéfiküs peptidek kémiai úton gyakorlatilag szinte kizárólagosan ennek az eljárásnak az alkalmazásával készülnek (Norbert Sewaid, Hans-Dieter dakubke: Peptídes: Chemístry and Biology, Wiley-VCH Weínheím, 2002).
A szilárd hordozős peptidszíntézis automatizálható, aminek következtében már rutinszerűen alkalmazható. Az első szakaszos automata peptidszintetizátort Bruce Mérnfleld készítette (US 3,631,258 szabadalmi leírás). Ez a készülék még csak Boc védöcsoport technikát, nagy reagens felesleget és hosszú reakcióidőt alkalmazott. Későbbiekben főbb kémiai reaktor vált Ismertté, amelyek alkalmasak szilárd hordozón végrehajtott szintézisekre (US 4,746,490, US 5,288,464, US 5,380,495, US 8,028,172
szer, vagy nyomás alatt tartott gáz mozgatja. Az egyes reakciólépések szakaszos módon valósulnak meg. Az egyes kapcsolási lépések nagy aminosav és reagens felesleg (5-10 ekvivalens) alkalmazása mellett történnek és berendezéstől függő módón 120-240 perc időt vesznek igénybe igen jelentős oldószerfelhasználás mellett.
A reakcióidő rövidítéséhez a mikrohullámú technika alkalmazása jelentett jelentős hozzájárulást. Ezzel az eljárással a reakcióidők csökkenthetők voltak (US 7,550,560 szabadalmi leírás). Mai napig ez az egyetlen technika, amel^ teszi a gyanta és a reakciöelegy fűtését. Továbbá a mikrohullámú fűtés esetén nem csak termáils effektus jelentkezik, hanem a peptid gerinc rotációja is bekövetkezik, ami megkönnyíti az N-terminálís aminoosopod hozzáférhetőségét ezáltal gyorsabb és hatékonyabb kapcsolást tesz lehetővé (STACEY A. PAL.ASEK, 2ACHAPY J. COX and JÖNATHÁN M. COLLINS; J. Pept. Sci. 2007; 13; 143-148). Ama már rutinszerűen alkalmazott mikrohullámú fűtésű eljárással peptidszekvenclák gyorsan és nagy tisztaszintetizálhatok automatizált módon (Murray Goodman, Claudio Toniolo, Lu»s r; Synthesis of Peptldes and Peptidomímefíos (Methods in Organlc Chemistry)
HouhemWeyl, 2002; Andrew 8. Hughes: Amho Ácids, Peptldes and Protelns in Organío Chemistry, Vei 1-5, Wíiey-VCH 2011).
A mikrohullámú technikán alapuló eljárások hátránya azonban az, hogy egy részt a kapcsoltság teljessé tételére igen nagy amínosav feleslegek (3-10 ekv.) alkalmazása szükséges (Norbert Sewald, Hans-Dieter Jakubke; Peptldes: Chemistry and Biology, Wiley-VCH Weinheim, 2002). Másrészt a nehezen kapcsoló amínosavak esetén, amely nehezen kapcsoló aminosavak, konvencionális körülmények között nem
mutatnak teljes kapcsoltságot, például a mikrohullámmal segített OEM Liberty 1 automatizált reaktorban végzett szintetikus eljárásnál, a reaktor használati útmutatója (http://www.cem.de/doouments/pdf/produkte/peptíd/app...note...bio-0ÖÖ6.pdf), továbbá irodalomban közölt metodikai cikkek {http://ww.dddmag.com/articies/2012/12/ mícrowave-assisted-peptíde-synthesis: Semadett Bacsa C Olivér Kappe; Natúré Protocols 2007, 2,2222 - 2227) Is kettős kapcsolást írnak elő. Kettős kapcsolás esetén konvencionálisán alkalmazott 5 vagy esetleg több ekvivalens amínosav és kapcsolószer használata után újabb 5 vagy esetleg több ekvivalens aminosavat és kapcsolószert alkalmaznak a berendezésben. Vagyis a megfelelő kapcsoltság eléréséhez akár
10-20 ekvivalens amínosav alkalmazása is szükséges. Természetes ő-áminosavak esetén az arginin egy tipikus példa erre az esetre (http://www.cem.de/ doou ment s/pdf/p rod u kte/peptí d/app... note... b ío~0008.pdf).
A reakcióidőt fűtés nélkül, nyomás alatt végzett áramlásos eljárással is lehet csökkenteni (US 4,192,798 szabadalmi leírás és WO 82/03077 nemzetközi bejelen* tés). Az eljárások során a nyomás kialakításához nitrogéngázt alkalmaznak, a nyomás értékek tipikusan 80 psi (3,4 bar), 200 psi (13.8 bar) és 1000 psi (68,9 bar) értékek között változnak. Az áramlási sebesség széles értékek között, például 10 mí/min és 20 mi/mín között, mozog, emiatt rendkívül nagy a módszer oldószer felhasználása. Á szintézis további hátránya, hogy a pepiid szintézis során nagy aminosav feleslegeket alkalmaznak, tipikusan 4, 5, 8 vagy 10 ekvivalenst, így egy-egy pepiid szintézise Igen
Manapsag á győgyszerkémiában es anyagtudományban a nemdrága, egzotikus arnínosavak egyre nagyobb terét nyernek jelentős alkalmazásaiknak köszönhetően. Anyagtudományi alkalmazásaik közül kiemelkedik a liotróp folyadékkristályok alkalmazása. A nem-természetes, drága, egzotikus aminesavakból felépülő peptidek farmakológia! hatásai például a kővetkezők: antibakteriáiís (H-p~hPhe~P-hValβ-hPhe-β-hVaj-β-hLys~β-hVal-β-hLys-β-hVál-β-hPhe'OH), rák ellenes (β-hTyr-^-hGiy^-hArg-p-hLys^hLys^hÁrg-p-hArg^-hGIn^-hArg-^-hArg^-hArg-ÖH), koleszterinszintcsökkente hatás (H~(p~hAla-p”hLys-p-hPhe)3-OH), β-amiioid kötő ([1S,2S]-ACHC~ p;'-óArg-([1S,2Sj-ACHC)2“p3-öAsp41S,2Sj-ACHC-Gíy~G!y-Cys-NH2), stb. (C, M. Goodman, S. Choi, S. Shandler and W. F. DeGrado: A/af. Cóem. BtoJ. 2807. 3, 252™ 262). Ezen aminosavak legreprezentatívabb képviselői a β-aminosavak és a belőlük előállított β-peptidek (D. Seebaeh and d, Gardíner Acc. Cöem, Rés, 2086, 41, 13881375). Azonban az erősen szerkezetindukálő β-amínosavak esetén a mikrohullámmal segített szintézis során is kettős kapcsolásra van szükség. Hz különösen igaz a 2-aminocíklohexánkarbonsav (ACHC) kapcsolása esetén (Justin K, Murray, Bílal Faroogi, dack D. Sadowsky, Mark Scalf, Wesley A. Freund, Lloyd M, Smith, diandong Chen, Sámuel H. Gellman: J. AM, SOC. 2Ö85, 127, 13271-13280). Az ilyen tulajdonságú aminosavak az említett feleslegek alkalmazása mellett, a magas áruk miatt, köliséghatékonyan nem építhetők be peptidláncokba (http:/Aww,sígmaald rích .oom/ohem istry/ohem isfryprödüots. bfmí?TablePage™16275558).
Munkánk során a fenti eljárások hátrányainak (nagy aminosav felesleg, környezetre káros oldószerek felesleges mennyiségénék alkalmazása, magas energia és anyag költségek) kiküszöbölésére alkalmas eljárást dolgoztunk ki.
A szilárd hordozás peptidszintézis vizsgálatára irányuló munkánk során arra a meglepő eredményre jutottunk, hogy szilárd hordozón áramíásos eljárás segítségévei, az 1-1,5 ekvivalens közelébe csökkentett aminosav feleslegekkel Is nagy tisztaságú peptideket lehet szintetizálni gyakorlatilag teljes kapcsoltsággal és jó hozammal, ha a szintézist emelt hőmérsékleten és nyomás alatt végezzük, A találmányunk azért is meglepő, mert a technika állása szerint mind a mikrohullámmal melegített, mind a nyomás aiatt végzett eljárásoknál nagy aminosav felesleg alkalmazása volt szükséges és az elért hozamok sem voltak kielégltőek.
Találmányunk szerint kis aminosav feleslegek alkalmazása mellett is közei 100% kapcsoltság érhető el
A találmány szerinti eljárás előnye nemcsak abban áll, hogy a szintézishez az eddigi eljárásokhoz képest rendkívül kis aminosav felesleg szükséges. További előny az alacsony oldószer és gyanta felhasználás mellett végezhető szintézis, így a környezet terhelése jelentősen csökkenthető. Említett előnyök együttesének folyományaként az eljárás megvalósítása rendkívül olcsó. További előnyt jelent az, hogy nemcsak a biológiai mérésekhez szükséges, kis mennyiségben végezhető a szintézis, hanem az eljárás méretnővéiéssel nagy pepiid mennyiségek előállítására is alkalmas. Mindezek mellé az eljárás gyors kivitelezhetősége is társul.
A találmány tárgya peptidek és enantiomereik, disztéféőmérelk, sztereoízomereik, ezek keverékei és mindezek sói, és/vagy származékai előállítására szolgálód szilárd hordozón végzett, áramlásos kémiai eljárás, amely a kővetkező lépéseket tartalmazza:
a) a szilárd hordozó előkészítése a kapcsoláshoz, majd
b) egy, az égyik terminális csoportján szabad, a másik terminális csoportján, és adott esetben egyéb reaktív csoportján, védett aminosav kapcsolása; majd
c) az előző lépésben kapott szilárd hordozóhoz kapcsolt aminosav terminális védőcsoportjának eltávolítása, majd
d) újabb, a megfelelő terminális csoportján szabad, a másik terminális csoportján és adott esetben egyéb reaktív csoportján védett, aminosav kapcsolása a c) lépésben kapott termékhez, majd a c) és d) lépések kívánt számú ismétlése; és ezután kívánt esetben
e) a legutolsó d) lépésben kapott termék terminális védöcsoportjának eltávolítása után annak !!sapkázása<! egy reaktív csoportján szabad vagy aktiváló csoportot tartalmazó, egyéb reaktív csoportján védett vegyülettel; majd
f) az előző d) vagy e) lépésben kapott pepiid íehasítása a szilárd hordozóról, és kívánt az f) lépésben kapott termék sóvá és/vagy származékká alakítása, és/vagy hidrolízise, amely a)-e) lépéseket emelt hőmérsékleten és nyomás alatt hajtunk végre.
A találmány szerinti eljárás egyik megvalósítási módja szerint:
Β az a) lépésben a szilárd hordozó előkészítése a kapcsoláshoz az alábbi lépéseket fogai) a szilárd hordozón elhelyezkedő linker csoportról a védőcsoport eltávolítása és a szabad linker csoportot tartalmazó szilárd hordozó mosása; vagy a2) a szilárd hordozón elhelyezkedő linker csoporton lévő funkciós csoport semlegesítése és a szilárd hordozó mosása; vagy a3) vagy a szabad linker csoportot tartalmazó szilárd hordozó mosása,
A találmány szerinti eljárás a)-e) lépéseit 30 - 150 °C hőmérsékleti tartományban, előnyösen 70 ,;‘C hőmérsékleten és 20 bar - 500 bar nyomás tartományban, előnyösen 80 bar nyomáson valósítjuk meg,
A találmány egyik előnyös megvalőstási módja szerint az eljárást szilárd hordozóként pöíísztíFöt-porietilén-gíiko! kopolimer vagy poiíetiíéh-gíikol gyantán 2:4-dÍmefoxl~ -benzhidrilamín linkerrel, HAJÚ (i-|Bísz(dimetilamíno)metílén]-1H-1,2,3-Ιπ3ζοίο[4,5~ -bjpíridinium-3-oxid-hexafíuor-foszfát) vagy etii~{hidroxiimino)cianoacetát kapcsolószerrel, szerves oldószerekben, ezek elegyesben vagy keverékeiben végezzük.
A találmány szerinti eljárás kiterjed az összes ismert aminosav, például természetes amínosavak és nem-természetes amínosavak, ideértve az ο-, β- és y-aminosavakat, tetszőleges sorrendben és számban, előnyösen 1-100 alkalommal, történő kapcsolására.
A találmány szerinti eljárás kívánt esetben még a gyantához kapcsolt pepiidből “sapkázott származékok kialakítását is magában foglalja az e) lépésben. Az ilyen származékok lehasítás után további biológiai vizsgálatokban nyernek fontos alkalmazást, Előállíthatok például fluoreszcens jelölt peptidek farmákokinetikai vizsgálátokboz vagy biotín jelölt peptidek affinitás-mátrixokhoz.
A találmány szerinti eljárás egy további megvalósítása az alkalmazott línkertöl és az f) lehasltási lépéstől függően további származékok élöálii'fásárá is vonatkozik, amelyek peptichsav, -amid, -hidrazíd, -észter, -alkohol származékok.
A találmány szerinti eljárás kiterjed az összes α-, β- és γ-amínosavból álló pepiid előállítására, ideértve a biológiai hatással bíró, gyógyászatban alkalmazható pepísdekef: például ACTH(1-24), Glucagon, Secretin, LH-RH, Cetrorelix, Leuprolid, Degerelíx, Deslorelin, Triptorelin, Gosereiin, Buserelín, PTH(1-34), Corticoliberin, GH~ RH, GHRH(1“29), Thyrolíbenn, Thymosin-oi, Thymopentin, Exenaíide, Líraglutide; Bivalírudin; Gonadorelín; Icatibant; Sermorelin: Bortezomib; Marimastat; Pexíganan , magainin-2, IB367, Omígard; edesne D; beslatín; apslatin; amastatín; Phebesíin; Probestin; microginin; és az irodalomból ismert nehéz szekvenciák előállítására (Norbert Sewald, Hans-Dieter dakubke: Paptides: Chemistry and Bsology, Wíiey-VCH Weínheím, 2002). Továbbá a találmány szerinti eljárás kiterjed összes amínosavból álló oikiopeptíd prekurzor előállítására, ideértve a biológiai hatással bíró, gyógyászatban alkalmazható pepiideket például óxytoein prekurzor, atosiban prekurzor, vazopressin prekurzor, desmopresin prekurzor, Eptifibatide prekurzor, Pramíintide prekurzor, Cyclosporine A prekurzor; Enfuvírtíde prekurzor, Aetinomyeín D prekurzor; Octreotíde prekurzor, Vapreotsde prekurzor; Öctrosoan prekurzor, Poíymyxin B1 prekurzor; Daptomyoio prekurzor, Gramíoidin S prekurzor.
A találmány további tárgya berendezés a nevezett eljárás megvalósításában történő alkalmazásra.
A leírásban alkalmazott rövidítések:
Az amlnosavak elnevezésére a hárombetűs és az egyhetes jelölést is alkalmazASanin Alá A ősziéin Cvs C
Glutaminsav Glu
Fenílaianín Pbe
Glioin Gly
HSsztidin His ízoieuoin He
Lizin Lys
Leírón Leu
Meiionin Met
Aszparagin Asn
Prolin Pro
Glutamín Gin
Szerín Ser
Thr
E
P
G
H
K
L
Treonin
2Valin
Tlrozin
AGPC
AOHC
Trp
Tyr
Pyr L-Pirogknami'
F'moc FborenHmetoxikarbonii
Fmoe-GAAP 4V(((9HTIueren-9~IO ’acetil-pirrohdin-2~karbon sav (2S,3S)4Ynoc-AHPBA (2B,3S}“PfTiöC^ámíné-2-hídrexM4@mHbutánsav AHPÁ (2S,3R)~AHPÁ: a-hidroxop-ho-mofenilalanin
HATU (1 ~[Bísz(dimetilamíao)metílén]-1 H-1 t2.3-triazoio[4,5-fe]p'ridin'!um~3~oxid-hexafinor-foszfát)
DBU 1 ^-DiazabieikioíS^aiundec-T-én
DMF dimetiHórffiámíd
DfPEA díizoprapiFetilamín
TFA Cirfkíorecetsav β-hAsp p-homo-aszparagiasav
P*hArg p-hemo-arginin β-hPbe β-homo-fenBalaraa β-hVai P-heme-vaiia β-hLys p-hőmo-iUín β-hTyr p-homo-tirozín β-hGiy P«homo-glicín β-hGin p-homo-gfatamin β-hAla p-hömo-ataala
MBHA metíl-benzhidriíamin
TentaGel RRAM gyanta TentaGel Research Rink arnid gyanta,
Wang hidroximetilfenii linker
SASRIN metoxi-hidroxiaietíSfenil Baker
hídroxíaietílbenzamíd Baker metiPbenzhidrilamín Baker
Rink amid 2,4~dimetoxi-benzhidn!amin linker
Baríos klör-tritenilmetll-klorid Sínket
A felhasznált vegyszerek forrása:
A találmány szerinti eljárás kiindulási anyagául szolgáló védett aminösavak, gyanták, Iínkerek, kapcsoló- és hasítószerek ismert vegyületek [Murray Goodman, Cíaudío Toniolo, Luis Moroder; Synthesis of Peptides and Peptidomimetics (Methods in Organíc Chemistry) Houben-Weyl, 2002; Andrew B, Hughes: Amíno Aoids, Peptides and Proteins in Organic Chemistry, Vol1-5, WiíeyA/CH 2011 Norbert Sewald, HaasDieter Jakubke Peptides. Chemístry and Bíoíogy, Wiley-VCH Weinheim, 20021, a kereskedelemből beszerezhetők [Sigma-Álddcb (H-1117 Budapest, Gábor Dénes u.2.Hungary, Chem-lmpex Internationa! Inc. (935 Dilíon Drive, Wood Dalé, IL, 60191 USA), Rapp Polymere (Ernst-Simon-Strasse 9, 72072 Tuebingem Germanylj vagy ismert módszerekkel előállíthatok pl: Fmoc-ACPC (2-amínooíklopentánkarbonsav) szintézise: Forró, E.: Fulop, P. Cbern. Eor. J, 2008, 12, 2587-2592; ^(«SFHIuören-SF il)metoxi)karboní!)aminö)-1-acéíilpirro!idin~2-karbonsáv.· Emoe-GAÁP szintézise' Farrera-Sinfreu J, Zaccaro L, Vidal D, Saívatella X, Giralt E, Pons M, Albérlőié P, Royo M 2004, 123, 8048-8057, TentaGel RRAM gyantához kötött LPE~NH3 kiindulási peptid előállítása az irodalombéi ismert eljárás [Murray Goodman, Claudio Tonlölö, Luis Merődet: Synthesis of Peptides and Peptidomimetics (Methods ín Organic Chemistry) Houben-Weyí, 2002: Andrew S. Hughes: Amino Aoids, Peptides and Proteins in Organic Chemístry, Voi1-5, Wiley-VCH 2011 Norbert Sewald, Hans-Díeter Jakubke Peptides; Chemistry and Bíology, Wiley-VCH Weinheim, 2002], analógiájára történt, Ε8ί-Μ8[Μ+Η]-408,1 m/z; HPLC RW.33 min (oszlop: Phenomenex Luna C18 1Ö0A Spm 250 x 4,8mm; eloens: 5-80% acetonitrii, 25 min)
A leírásban alkalmazott meghatározások;
A találmány szerinti eljárás megvalósítására alkalmasak a peptídszintézisben szokásosan alkalmazható védőcsopoftok pl: az áminocsoport védöcsoportjai fluoren.il· -metoxi-karhönih terc-butoxi~karboní!~ és hasonlók; a karboxicsoport védöcsoportjai; terc-butil·. ciklohexií-, benzil- és hasonlók; továbbá az oldalláncok védöcsoportjai: tere-buti!-, oiklohexíl·, tritii-, benzil-oxí-karbonil·, terc-bufoxi-kárboniS-, trimetil-benzoíszulfoník penfameíil-dihldro-benzofuranszuSfonil·, mezitílénszulfonií-, tözil·, mozik [Murray Goodman, Cíaodio Toníolo. Luis Moroder: Synthésís of Peptides and Peptídomimetícs (Mefhods in örganic Chemistry) Houben-Weyi, 2002; Andrew B. Hughes: Ámino Acids, Peptides and Proteiné ín Organíc Chemistry, Voll-S, Wíley-VCH 2011].
Az eljárás megvalósítására gerinc és oidaíiánc-védőcsoporttechnikák széles köre alkalmas pl.; Murray Goodman, Cíaodio Toníolo, Luis Moroder' Synthesis of Peptides and Pepfídomimetíes (Methods ín örganíc Chemíslry) [Houben-Wey!, 2002: Andrew B. Hughes; Amino Acids, Peptides and Proteiné in örganíc Chemistry, Vol. 15, Wíley-VCH 2011 Norbert Sewald, Hans-Dieíer Jakubke Peptides: Chemistry and Bíology, Wíley-VCH Weinheim, 2002} és az ott megadottak, amelyeket a leírásba beépítettnek tekintünk, például: a gerinc amlnoesopért megvédése kiviteiezhető tercierbutíl-oxi-karboníl··, fluorenil-metil-oxi-karbonil-csoportokkal; a genne karboxilosoport megvédése kivitelezhető tere-huti!-, benziE, tritíicsoportokkal. Előnyösen fluorenii-metil-oxi-karboníí/teroier-botí! védöcsoportteohnlkát alkalmazzuk.
A gerinc védőcsoportok eltávolítása történhet fercier-botií-oxí-karbonii-csoport esetén 50-95% TEA oldattal; floorenil-metil-oxí-karbonil-osoport esetén 20% piperidin DMP-es vagy 2% DBU 2% piperidin DMF-es oldatával.
Az oldalláneokban található aminoesoport megvédése kivitelezhető fercier-butíl-oxí-karboniE, fiuoranikmetíl-oxi-karbonik, benzil-oxl-karbonik tritilcsoportokkal; a karboxilosoport megvédése kivitelezhető terc-butíí-, ciklohexíl-, benzl!·, frííílceoportokkal, hídroxiícsoport megvédése kivitelezhető ferc-butii--, megvédése kivitelezhető tritii-csoporttal, kivitelezhető trlrnetli-benzolszulfonll-.. pentameíildíhídro-benzdfurahszuíföníí-, mezltiíén-szulfoníi-csoportfaí, előnyösen alkalmazzuk az aminoesoport megvédésére a tercier-butíl-oxi-karbonlí-.. fíuorenil-metil-oxí-karboni!·, benzíloxi-karbonii- és ttitiiesoportokat; a karboxiíosoport megvédésére a terc-butlS- és cikíohexilcsoportokak hídroxiícsoport megvédésére a terc-butii-csoportokat;
pentametíi-dihidro-benzofuran-szulfonií-csoportof.
Az öldaíiáncbsn található fereier-boiíl~oxí-kárboníl-s tritíE, terc-bufií-, pentametíE
-dihidro-benzofuranszulfonil védöcsoportok eltávolíthafók 90-95% TEA oldattal. A benzíí-oxi-káfbdníl·, ciklohexíl-, bénzií-, fnmetíl-hénzdlazuifQníl-, mezitiién-szuifoníl11 csoportok eltávoliíhatóak HF-dat A fiuoreníl-metil-oxi-karboniFcsoport 2Ö% piperidin DMF-es vagy 2% DBU 2% piperidin DMF~es oldatával távolítható el.
A találmány szerinti eljárást bármely Ismert linkerrel, például klőrmeiitfenil, Wang (hidroximetiifenil), SASRIN (mstoxi-hidroximetilfenií), RAM (feniiacetamidomettí), HMBA (hidroximetílbenzamíd), MBNA {metíl-benzhidrilamin), Rink amid (2,4-dimetoxibenzhidriiamin), Barlos (klór-trsíemlmetll-kloríd) és hasonló línkerekkel, előnyösen Rink amid llnkorrel valósítjuk meg (Murray Goodman, Claudio Toniolo, Luis Moroden Synthesis of Peptides and Peptidomimetics (Meíhods In Organic Chemistry) HetibenWeyl, 2002; Andrew B. Hughes: Amino Acíds, Peptides and Proteins ín Organic Chemistry, Voit-5, Wiley-VCH 2011]
Az eljárás szilárd hordozok, gyanták széles spektrumának alkalmazásával hajtjuk végre. A találmány szerinti eljárást például polisztírol, polísztiröFpoliétiléh-glíkö! kopolimer, polietilén-giikol, poliamid és hasonló típusu gyantákon, előnyösen Tentagel RRAM polisztlrol-polietiién-glikol kopolimer vagy Chemmatrix polietiién-glikol gyantán végezzük (Murray Goodman, Claudio Toniolo, Luis Moroder; Synthesis of Peptides and Peptidomimetics (Methods in Organic Chemistry) Houben-Weyl, 2002; Andrew 8. Hughes: Amino Aoids, Peptides and Proteins in Organic Chemistry, Vol1-5, Wíley-VCH 2:011].
Az eljárást szerves oldószerekben, ezek elegyeiben vagy keverékeiben, beleértve a többfázisú rendszereket, ionos folyadékokat (Alesia A, Ttetze, Pascal Reimer, Annegret Stark, Diana imhof: Mofeou/es 2012, 77, 4158-4185 és az ott megadottakat, amelyeket a leírásba beépítettnek tekintünk) végezzük.
A szerves oidószer lehet apoiáris vagy poláris vagy ezek elegye vagy többfázisú keveréke. Az eljárás előnyös kiviteli módja szerint megfelelő szerves oldószerként alkalmazzuk a halogénezett szénhidrogéneket, pl.: metilén-diklorid, dikiór-etán, klórbenzol, stb.; keton típusú oldószereket, pl.: aceton, bütán~2~on, acetofenon, stb.; szénhodrogéneket, pl.: toluol, hexán, heptán, stb.; étereket, pl,: diefil-éter, tefrahidrofurán, tero-butíkmetil-éfer, vagy egyéb poláris oldószereket, Hiteleket, pl.: acetonitrii, stb.; amidokat, pl,: N.N-dímetil-formamid, Ν,Ν-dimetii-acetamid, N-metilpirolidin stb,; aminokat Ν,Ν-diizopropil efilamin, stb. Előnyös oldószerek például: N,Ndimetií-formamid, kloroform, N-mefilphrolidon,
A találmány szerinti eljárás az összes ismert aminosav, például természetes aminosavak A, C, D, £, P, G, Η, I, K, L, Μ, N, P, G, R, S, T, V, W, Y, és nem12
-természetes amínosavak, ideértve az α-, β~ és y-aminosavakat, például Dnaftilalanln, D-4~klórfenilaiansn, D~(3'-piridil)-aíanín~D-citrullín-D-alanín, D-Leu, Pírogíuiamim S-lzopropiíarninogllcio, D-4-karb-amídofenílalanin, L- (4-(2:8-dioxohexahídropírimidín-4“karboxarhídoifeniSalanin, Dmaftilalanin, D-Trp, D«Ser(ÖtBu), D-Arg; Hídröxiprclin, tiofení lalanín, (S)-1 ^G.é-tetrahidroísekínoiín-S-karbonsev, (3aS,7aS)-oktahidro-1 kb
-indöl-2~karhonsav; (R}-{1~aminö-3~metílbuíií)boronsav, S-terc-butilglicin, (2S,3E)-AHPA, (CSöRj-o-hidroxi-fThornoleucin, S-amino-z-hidroxelekáesav. MMeTyr, dezamíno-císztein, D-Tyr(Et)j homoargínin, (2S,3R4R6£)éThMröxi-4~metií-2~ ~(metííamino)okP6-énsav, S-etílglicín, /V-metHglicíh, Af-metii-L-íeucin, D-aíanÍn} Mmefik -L-valín, NMeGly, t-ornithsn, 3-antraniíoiS-L-alanín, β-hidroxígíutaminsav, aminoglicin. AGPC, ÁCHC, (2S,3B)-Fmoc“AHPBA, Fmoc-GAAP [Murray Goodman, Claudio Toniolo, Luis Moroder: Synthéssa of Pepfides and Peptidomimetics (Methods in Örganic Chemístry) Houben-Weyl 2002; Andrew B. Hughes: Amino Acids, Pepfides and Proteins in Örganic Chemisfry, Vol1-5, Wiley-VCH 2011] kívánt számban és sorrendben történő kapcsolására alkalmas.
Az eljárást különböző kapcsolószerekkel, vagy ezek keverékeivel hajtjuk végre (Murray Goodman, Claudio Toniolo, Luls Moroder: Synfhesis of Pepfides and Peptidomimetics (Methods in Örganic Chemístry) Houben-Weyl: Voí. £ 22 a-d 2002; Andrew B. Hughes: Amino Acids, Pepfides and Proteins ín örganic Chemístry. VeH-5, Wiley-VCH 2011], Az eljárás előnyös kiviteli módja szerint megfelelő kapcsolószerként a következőket alkalmazzuk: vegyes anhídrid képzők; etiLklórformíát, izobufllklőrformiát, szimmetrikus vegyes anhídrid képzők; foszgén, karhodiímidek, pl.: dioíklobexíl-karbodiimid, diizopropil-karhodiimíd, karbonil-diimidazcl, N-karhoxl~ -anhidridekkel, aktív észter képzőkkel: hidroxiszukcinimid, hídroxibenzotrlazol, N~hidroxi~5-nörbornén~2,3~dikarboximíd, 1 hidroxi-7-azabenzotriazol, pentafluorfenol, amínösavrtluöfsd képzőkkel: tetramétiHíuorförmámídíníurn hexafluorőföszfát, 2-díetilamino-kén-tnfluorid, aminosav-kloríd képzőkkel; tétrametíPkiőrformamídiníum hexafíuorofoszfát, 2-klór-1,3-dímetilimídazolidinium hexafíuorofoszfáf, foszfőnium reagensek: benzotriazöl-1-líoxitnsz(dinietilamino)íoszfonium hexafluorfoszfát, benzotriazöí-1-iloxiíripirrolidínofoszfoníum hexafluorfoszfát, szabenzőtnazöi-l-ilőxltripirrolidinofoszfoníum hexafluorfoszfát, bromo-tripirrolídínofoszfonium hexafluorfoszfát, 3AdietoxifőszfőrHoxi)-1,2,3-henzotnazin-4(3H)-on, urómíum reagensek: Ν,Μ,Ν’,Μ’-ieuameuj~w-4 s n-oenzomaxuí- segummum ir s -teiszraimewerranoj13 metilénj-IH-l^.ő-tnazoloH.ő-Öjpindiniüm 3-oxid bexafluorfoszfáŐH.N.N'.N'-tetrametlIO~( 1 H-benzotnazoí-1 -iljuronium-tetrafluorborát, 1 -[(dimetilamínö)-(dimetiiiminium)-metilpl H~1 ,2,3-íriazolo[4,5-bjpindin-3-oxíd hexafiuorfoszfát. 0-(azabenzotriazol-1 II)· -1,1 G^rtetrametlIéHuronium-hexaduorfosztat, O-(azabenzotriazol-1 -4)-1,1,3,3-pentametiiénuronlum hexafiuorfoszfát, O-(7~azabenzotríazol-1 -11)-1,3-dimetil- 1,3-dimetiiénuronium, oxyma reagensek: eW-(hídróXiímínó)oianoaoetát, (1-eiano-2-etoxF2-oxóefiiidénaminooxijdimetiiamíno-morfolíno-karőéníum hexafiuorfoszfát O-[(etoxikar~ boniQcíanometiíénamínőj-N.N.N'.N'-tetrametilluroniumHiexafluorfószfát Előnyös kapcsolószer például: 1-(bísz{dimet!lamíno)mefílénj-1 H-1 ,2,3'-tríazoioj4,S-őjpindinÍum-3-oxid-hexafluorfoszfát és az etíi~(hidroxíímíno}cíanoacetát.
A találmány szerinti al) védöcsoport eltávoiításí lépést emelt hőmérsékleten és nyomáson bármely Ismert módszerrel, például pöiisztirol, poiisztirohpolieíllén-glfkol kopolimer, poiietílén-glíkol, poliamid gyanta és Rink amid (2,4-dímetoxi-benzhidrtlamin) línker esetén ismert deprotektáló szereket alkalmazva [Murray Goodman, Ciaudio TonioSo, Luis Moroder: Synthesis of Peptídes and Peptidomímetícs (Methods In Örgenic Ghemístry) Houhen-Weyí: Vei, E 22 a-d 2ÖÖ2: Andrew B. Hughes: Amino Acíds, Peptides and Proteins in Örganic Chemístry, Voil-S, Wiíey-VGH 2011], előnyösen 2% DBU és 2% piperidin egy megfelelő oldószeres, előnyösen DMF-es oldatát alkalmazva végezzük. Az ezt követő mosást célszerűen az alkalmazott oldószerrel végezzük. Vagy
A találmány szerinti a2) semlegesítési lépést emelt hőmérsékleten és nyomáson bármely ismert módszerrel, például poiisztiroi, poiisztiroí-polléfilén-giíkol kopolimer, poíiefilén-giikoL poliamid gyanta és MBHA (mefil-béhzhídnlamin) linket esetén ismert, bázisokat, előnyösen trietií-amín egy megfejelő oldószeres, előnyösen DMF-es oldatát alkalmazva végezzük. Az ezt követő mosást célszerűen az alkalmazott oldószerrel végezzük.
A találmány szerinti a3) mosási iépést emelt hőmérsékleten és nyomáson bármely oldószerrel, célszerűen az előzőekben alkalmazott oldószerrel, például polisztirol, poliszííröt-polietiíén-giikoi kopolimer. pohetiíén-gíikoi, poliamid gyanta és kíórmetüfeníl, Wang (hidroxirnetiífeníl), SASRIN (metoxi-hidroximetílfenii), RAM (fenííacetamidometil), HMBA (bidroximetílbenzamíd), Barlos (klór-trifenilmétii-kiorid) línker esetén DVFrtel végezzük.
Q3S4/SH
A találmány szerinti b) kapcsolási lépést emelt hőmérsékleten és nyomáson például poliszáról, poíisziircl-poííétítén-gííkol kopoíimer, pohethén-glikol, poharaid gyanta gyanta és klórmetílíeniS, Wang (hidroximetilfenil), SASAIN (metoxi-hidroxímetilfeníl), RAM (feniíacetamidometil), HMBA (hidroximétilhénzamid), MBNA (metilhenzhidhíamin}, Rink amid (2,4-dímetoxi-benzhidrilamin), Baríos (klór-trifenilmetilklorid) linker esetén ismert kapcsolószerekkel [Murray Goodman, Claudlo Toniolo, Luis Moroder: Synthesis of Peptides and Peptidomimetics (Methods ín Organío Chemistry) Houben-Weyí: Vol. E 22 a-d 2002; Andrew B, Hughes: Amino Acids, Peptides and Proteins in Organic Chemistry, VoH-5, Wtley-VCH 2011), előnyösen HÁTÚ oldószeres, előnyösen DMP-es oldatát alkalmazva végezzük, A kapcsolást követő mosást célszerűen az alkalmazott oldószerrel végezzük.
A találmány szerinti c) védöcsoport eltávolítás lépést emelt hőmérsékleten és nyomáson ismert hasltöszereket, előnyösen DBU és piperidin oldószeres, előnyösen DMP-es oldatát alkalmazva végezzük. Az. eltávolítást követő mosást célszerűen az alA találmány szerinti d) kapcsolási lépést emelt hőmérsékleten és nyomáson ismert kapcsolószerekkel, előnyösen HATU oldószeres, előnyösen DMF-es oldatát alkalmazva végezzük. Á tkapcsolást követő mosást célszerűen az alkalmazott oldószerA találmány szerinti eljárással c) és d) lépések kívánt számú ismétlésével érjük el a kívánt pepiid lánchosszát.
Kívánt esetben a találmány szerinti eljárással az e) sapkázásl (capping) lépésben állítjuk elő a sapkázott flureszcens festékkel, biotinnal, acilcsoporttai ellátott szár[Murray Goodman, Claudlo Toniolo, Luis Moroder. Synthesis of Peptides tics (Methods in Organic Chemistry) Houben-Weyl, 2002:
m organic Chemistry, Voll ő, WH ,
2011Norbert Sewald, Hans-Dieter dakubke Peptides: Chemistry and Biology, WíieyVCH Weínheím, 2002).
A találmány szerinti e) sapkázásl (capping) lépést emelt hőmérsékleten és iául polisztíroi, polisztíröi-polietilén-gllköl kopoíimer, polietiíémglíkol, pogyanta és klórmefllfenil, Wang (hidroximetilfenil), SASRIN (metoxiI), PAM (fenilacétamidometil), HMBA (hidroximetílbenzamid), MBHÁ (metil-benzhldrilamln), Rink amid (2,4-dimetoxi-benzhidnlamín), Sarlós (klór-
trifeniSmetíl-klGFid) linkerre kötött peptid esetén a legutolsó d) lépésben kapott termék terminális védőcsoportjának eltávolítása után egy reaktív csoportján szabad egyéb reaktív csoportján védett vegyüíetteí ismert kapcsolószerekkel [Murray Goodman, Claudió Toniolo, Luis Moroden Synthesis of Peptldes and Peptídomímetíos (Méthods In Organlc Chemistry) Houben-Weyi: Vol, E 22 a-d 2002; Andrew B. Hughes; Amino Ácids, Peptldes and Protelns in Organlc Chemistry, Voíl-5, Wíley-VCH 2011], előnyösen HÁTÚ oldószeres, előnyösen DMF-es oldatát alkalmazva vagy aktiváló csoportot tartalmazó: egyéb reaktív csoportján védett vegyűlettel oldószeres, előnyösen DMP-es oldatot alkalmazva végezzük, A sapkázást követő mosást célszerűen az alkalmazott oldószerrel végezzük.
A találmány szerinti eljárással az adott gyantáról vagy linkerröl történő hasításnak megfelelően a pepiidet sav, amid, hidrazíd, alkohol, tíoészter, tioí, észter, alkohol származék formában nyerjük. A klórméWfenií linket esetén a hasítást hidrogénfluoríddaS vagy trifluormetánszulfonsavvaS végezve peptid sav származékot állítunk elő. Wang (hídroximefilfeníl) linker esetén a hasítást trifluorécétSávvai végezve peptid sav származékot állítunk elő. SASAIN (metoxí-hídroxlmetílfenii) linket esetén a hasítást trifluoreoetsavval végezve peptid sav származékot állítunk elő. PAM (fenílaeetamiöometií) linker esetén a hasítást bidorgén fluoríddal vagy trífluormetánszulfonsavvai végezve peptid sav származékot állítunk elő, MBNA (metilPenzhldnlamin) linker esetén a hasítást hidorgén-fluoríddal vagy trífluormetánszulfonsavvai végezve peptid amid származékot állítunk elő. Rink amid amit amid származékot állítunk elő. Barios (klór-trifeniimetil-klorid) linker esetén a hasítást tdfluorecetsavvaí végezve pepiid sav származékot állítunk elő. HMBA linker esetén a hasítást ammóniás metanollal vagy primer és szekunder aminokkal kivitelezve peptidamid származékot, hídazinokkal kivitelezve hidrazíd származékot, alkoholokkal kívitelezve észter származékot, lítium-borohidríddel peptid alkohol származékokat állítunk elő [Murray Goodman, Claudio Toniolo, Lola Mórodén Synthesis of Peptldes and Pepíidornsmeties (Methods in Organlc Chemistry) Houbon-Weyi, 2002; Andrew B. Hughes; Amino Ácids, Peptldes and Protelns in Organlc Chemistry, Vo!1-5, Wiley-VCH 2011 Norbert Sewald, Hans-Dieter Jakubke Peptides; Chemistry and Biology, WileyVCH Weinheim, 2002].
A találmány szerinti f) hasítás lépést bármely ismert hasítószerrel, előnyösen TFA oldatával végezzük, mely tartalmaz előnyösen 6-10% vizet és 2,5-5% gyökfogőt, mely előnyösen íriizopropíl-szílán és dilioíreitoí.
A gyantáról lehasitott peptidekbőí kívánt esetben az. általánosan ismert eljárásokká! sót vagy egyéb származékot képzőnk [Murray Goodman, Claudlo Toníölo, Luis
Mcroder: Syníhesis of
Houben-Weyl, 2002: Andrew B, Hughes; Amlno Adós, Peptídes and Proteins in Organic Chemisíry, Voll-5, Wlley-VCH 2011 Norbert Sewald, Hans-Oiétér dakubke Peptídes: Chemistryand Bioíogy, Wííey-VCH Weinheim, 2002],
A jelen találmány szerinti eljárással előállított vegyületek előnyös sói a gyógyászatilag elfogadható sók, amelyek a szokásos, önmagában ismert nem-toxikus sók lehetnek, ilyenek például a savaddíciós sók, mint például a szerves savakkal képzett sok (például aeetát, trífluoraoetát, maíeát, tartarát, fumaráh metán-szuifonáf, benzolszulfonát. farmiét, toluol-szulfonát és más, hasonlók), a szervetlen savakkal képzett sók (például hidrokiorid, hídrobromid, hídrojodíd, szulfát, nitrát, foszfát és más, hasonlók), továbbá a bázisokkal képzelt sók, mint például az amínosavak (például argrnrnnel, aszparaginsawa!, glutaminsavva! és más, hasonlókkal) képzett sók, az alkálifémsók (például nátriumsó, káliumsó es más, hasonlók), az aikáiiföldfémsők (például kaíolamsó, magnéziumsó és más, hasonlók), az ammóniumsók, valamint a szerves bázisokkai képzett sók (például trimelil-aminnal, trietil-aminnal, piridinnel,
Unnál, dícíklohexii-amínnal es más. hasonlókkal
Az eljárás az áramlási sebesség, hőmérséklet és nyomás szabályozására alkalmas eszközzel ellátott áramlásos berendezésekben végezhető, amely a leírásban szereplő paraméterek kialakítására képes. Például ilyenek a kővetkező gyártók készülékei: Thalesnano Inc., http://wvw.thalesnano.com/; Future Chemsíry Holding BV„ http://www.futurechemistry.com/; Syrris Ltd. http://www.syrris.com/; üniqsis Ltd. http://www.unigsis.com/: Chemfrix BV http://www,chemtrix.com/fiow~chemisfry
Az áramlási sebesség 0,01 - 10 ml/min határok között változtatható a berendezés függvényében, előnyösen 0,1 ml/min.
A szintetizált végyülétek analitikájában felhasznált műszerek és eljárások; HPLC-MS: Díonex-Thermo LCQ Fleet, Phenomenex Luna C18 öum 1ÖÖA 4,8*250mm; A eluens 0,1% ecetsav vízben, B eluens 0,1% ecetsav acetomtrílben
A kapcsoltság a következő módon számítható;
Ismertek az R és T HPLC-MS ionkromatogram görbe alatti területek, ahol R az el nem reagált reaktáns kiindulási anyagot, míg T a terméket jellemzi. Ezekből a kapcsoltság a következő módon számítható;
K(%)^P7(R+T)]*1ÖO
Kapcsoltság Phenoménex Luna
318 Sor !LC~MS készülék alkalmazásával határozzuk meg.
c 6% B -> 80% B 25 min; 1,2 ml/min.
A kapcsoltság a peptídek előállításánál az eljárás hatékonyságának legfőbb mutatója, hiszen egy több lépéséé eljárás során a tisztítást akadályozó, nehezítő melléktermékek az egyes kapcsolási lépéseknél fellépő nem kielégítő kapcsolás következtében alakulnak ki, és mennyiségük a lépés szám emelkedésével sokszorozödik. Például, ha minden egyes kapcsolási lépés 99% kapcsoltsággal játszódik le, akkor a 10 lépés után a nyerstermék tisztasága maximum 90%. Ha 10Ö lépés szükséges, akkor a fenti körülmények esetén, a nyerstermék tisztasága maximum 37%. Azonban ha egy lépés 95% kapcsoltsággal játszódik le, akkor 10 lépés után a nyerstermék tisztasága maximum 80%, míg 100 lépés után maximum 0,6% (Norbert Sewaid, Hans-Dieter Jskubke: Peptides: Chemistry and Biology, Wlley-VCH Weinheim, 2002 pp< 229), Tehát már néhány százaléknyi javulás a végső hozam jelentős növekedéséhez vezet,
A termelés meghatározása irodalomból ismert módón történt,
A gyanta fölföttségén azt az értéket értjük, amely megmutatja, hogy 1 gramm gyantán hány mmol aminocsoport található. Ezen érték gyártó által meghatározott.
A leírásban példákon keresztül mutatjuk be az eljárás megvalósítását, áítalánoés hatékonyságát, anélkül, hogy csak a jelen példákra korlátoznánk az öl· talmi kört.
Példák:
Általános szintetikus lépések
a) A szilárd hordozó előkészítése al) az előzetesen duzzasztott polísztirol, polísztirol-pöíietíiért-glíkol kopoiimer, pöíiefiíén-glíkol, poliamid gyanta és Rink amid (2,4-dlmetoxi-benzhidrilamin) linker esetén a szilárd hordozón elhelyezkedő linker csoportról a védőcsopcrt eltávolítása 80 bar nyomáson és 70 °C hőmérsékleten 2%DBU és 2% piperidin DMF-es oldatát alkalmazva. majd a szabad linket csoportot tartalmazó szilárd hordozó mosása 80 bar nyomáson és 70 °C hőmérsékleten; vagy épés az előzetesen duzzasztott polisztirol, polisztiröl-poSietilémgliköl kopolimer, pöiietiiémgliköl, poliamid gyanta és MBHÁ (metil-benzhidrsíamin) linkért tartalmazó szilárd hordozón elhelyezkedő linker csoport semlegesítése SÖ bar nyomáson és 70 °C hőmérsékleten 10% trietíl-amin DMF-es oldatát alkalmazva, majd a szabad linker csoportot tartalmazói szilárd hordozó mosása 80 bar nyomáson és 70 °C hőmérsékleten; vagy l lépés a szabad linket csoportot tartalmazó polisztirol, polisztírol-polietiíén-giikoí kopolimer, poiíetilén-gSikol, poliamid gyanta és kSórmetiSfenil, VVang {hidroximetilíenii}, SASRIN (metöxFhidroximetiífenil), RAM (féniiaceíamidometii), HMBA (hidroximetilbenzamid}, Sarlós (klór-ínfenilmetiFklorid) linkért tartalmazó szilárd hordozó mosása 60 bar nyomáson és 70 °G hőmérsékleten;
b) lépés, amely során az egyik terminális csoportján szabad, a másik terminális csoportján. és adott esetben egyéb reaktív csoportján, védett aminosav kapcsolása a linkeren keresztül a szilárd hordozóhoz 80 bar nyomáson és 70 ÖC hőmérsékleten HATÓ kapcsolószert alkalmazva, majd következik a szilárd hordozó mosása 80 bar nyomásön és 70 ÓC hőmérsékleten;
c) lépés az előző b) lépésben kapott szilárd hordozóhoz kapcsolt aminosav terminális védöcsoportjának eltávolítása 80 bar nyomáson és 70 °C hőmérsékleten 2%DBU és 2% piperidin BMF-es oldatát alkalmazva, majd a szabad linker csoportot tartalmazó szilárd hordozó mosása következik 60 bar nyomáson és 70 °C hómérséidetan,
d) lépés, amely során az újabb, a megfelelő terminális csoportján szabad, a másik terminális csoportján és adott esetben egyéb reaktív csoportján védett, aminosav kapcsolása a c) védőcsoport-eitávoütási lépésben kapott termékhez. 60 bar nyomáson és 70 °C hőmérsékleten HA'TU kapcsolószert alkalmazva, majd a szilárd hordozó mosása következik;
a c) és d) lépések kívánt számú ismétlésével a peptídlánc növelése á kívánt hosszúeléréséig; majd kívánt esetben is;? s <$ zöm
e) sapkázási (cappingj lépést a legutolsó d) lépésben kapott termék terminális védőcsoportjának eltávolítása után 80 bar nyomáson és 70 °C hőmérsékleten ismert bidroxiszukcínimíd észterekkel vagy szabad karbonsav funkció esetén ismert kapcsolószerekkel, pl HATU-val, vagy karbonsavszármazékokkal, pl, karbonsavklohddal, karbonsavanhidriddeí végezzük, melyet a mosás követ.
f) hasítás lépést szobahőmérsékleten 90% TFA oldatával végezzük, mely tartalmaz előnyösen 5-10% vizet és 2,5-5% gyökfogót, mely előnyösen tnizopropil-sziíán és ditiotreitol. Wang (hidroxímetílfenil), linker esetén az így végrehajtott hasítás során peptid sav, míg Rink amid {2,4-dimetoxí-benzhidnlamin) linker esetén peptíd amid származékot kapunk.
Kívánt esetben f) hasítási lépés során vagy utána a kapott termék sóvá és/vagy származékká alakítása, és/vagy hidrolízise elvégezhető ismeri módon.
Általános eljárás peptidek előállítására
A szintézis léptéke 0,03 mmol. Az első lépés 0,03 mmol anyagmennyiségnyi gyanta duzzasztása, melyet á duzzasztott gyanta peptídszintézis reaktorba töltése követ, Ezt követi a töltött reaktor folyadékáramba kötése, a 0,1 mí/min foiyadékáram beindítása, a 80 bar nyomás és 70 °C hőmérséklet beállítása. Ezután következik az a) általános lépésnek megfelelően linkeren léve aminocsopori deprotektálása, ez TentaGel Research Rink amid gyantán rajta van, melyhez 2% DBU és 2% plperídín DMF-es oldatát alkalmazzuk 5 percen keresztül. Folyamatos áramban 0,5 ml élegyet használunk, Ezt a mosás követi, ilyenkor 3 percen át DMF oldószert áramoltatunk át a peptídszintézis reaktoron. Ezután következik a b) általános lépésnek megfelelően a kapcsolási lépés kivitelezése, mely során 0,045 mmol mennyiségű Fmoc védett ami· nosavat, 0,045 mmol HATU aktiválószeri és 0,09 mmol DIPEA bázist alkalmazunk 1 ml DMF-ben oldva. Ezt az elegyet reeírkuláltatjuk 15 percen át a reaktoron. Ezután újabb mosás következik. A c) deprotektálási általános lépés követi, melyhez 2% DBU és 2% piperidin DMF-es oldatát alkalmazzuk 5 percen keresztül. Folyamatos áramban 0,5 ml elegyet használunk. Ezt a mosás követi ilyenkor 3 percen át DMF oldószert áramoltatunk át a peptídszintézis reaktoron, A d) kapcsolási lépés során 0,045 mmol mennyiségű Fmoc védett aminosavat, 0,045 mmol HATU akfiválőszert és 0,99 mmol DIPEA bázist alkalmazunk 1 ml DMF-ben oldva. Ezt az elegyet reeírkuláltatjuk 15 percen át a reaktoron. Ezután újabb mosás következik. A c) és d) általános lépést addig
UO35 -Ví.fö végezzük, míg a kívánt peptidlánc eí nem készül a gyantán. Az utolsó c) lépés után kívánt esetben az e) sapkázásí lépés kivitelezése kővékezik, mely során legutolsó d) lépésben kapott termék terminális védöcsoportjának eltávolítása után 0,045 mmol menynyíségü karbötdfluoreszoeM 0,045 mmol HÁTÚ áktiváíószert és 0,09 mmol DIPEA bázist alkalmazunk 1 ml DMF-ben oldva, vagy 0,045 mmol mennyiségű ecetsavanhidridet és 0,09 mmol DIPEA bázist alkalmazunk 1 ml DMF-ben oldva. Ezt az elegyet recírkuláltatjuk 15 percen át a reaktoron. Ezután újabb mosás következik,
Az utolsó lépés az f) hasítási iépési előtt fél órán át hagyjuk az oszlopot lehűlni szobahőmérsékletűre. A hasítási iépési során 2mí TEA, víz, tri-izopropíFszílán, ditiotreitoi 90:5.2,5:2,5 elegyét alkalmazzuk szobahőmérsékleten, 2 órán át, atmoszférikus nyomáson recirkuláltátva.
Ezt követően a nyers mintát HPLC-MS vizsgálatnak vetjük aiá. Egy aminosav kapcsolásához, mosásához, deprotektálásáhöz összesen 2,1 mi DMF-et használunk
1-4* összehasonlító példa
ALFE-NH2 peptid előállítása különböző hőmérsékleteknél és atmoszférás nyomáson
Az ALFE-NH^ peptid elöáílítása gyantához kötött LEE pepiidből kiindulva különböző hőmérsékletek esetén atmoszférás nyomáson 1,5 ekvivalens aminosav kapcsolása mellett.
Az általános d) előállítási lépésnek megfelelően 0.03 mmol skálán elvégezzük a TentaGel RRAM gyantán lévő LFE pepiidre 14 mg (0,045 mmol) Fmoc-Aia~OH kapcsolását, 17 mg (0,045 mmol) HATU és 18 uL (Ö,Ö9 mmo!) DIPEA aikaimazásával atmoszférás nyomáson és különböző hőmérséklet értékek és 0,1 ml/min áramlási se1, Táblázat A kápcsöítság alakulása á hőmérséklet fű pepiid előállításánál
Példa Hőmérséklet (°C) Kapcsoltság (K az ALFE-NH?
(összehasonlító) (Összehasonlitő) (összehasonlító) fós sze hasonlító';70
Mint látható, egyetlen, könnyen vivaíens feleslegben történő ka;
°C esetén is.
számító, Fmoc-Ala-OH 1,5 ekéi is közel 14 % kapcsolatién termék marad
ALFE-NH;? pepiid előállítása különböző nyomásértékeken és 70 °C hömérsékten
Az ALFE”NH2 pepiid előállítása gyantához kötött LFE pepiidből kiindulva különböző nyomásértékeken és 70 °C hőmérsékleten 1,5 ekvivalens aminosav kapcsolása mellett.
Az általános d) előállítási lépésnek megfelelően 0,03 mmol skálán elvégezzük a TentaGel RRAM gyantán lévő LFE pepiidre az Fmoc-Ala-OH aminosav kapesolását, 14 mg (0,045 mmoi) Fmop-Ala-OH, 17 mg (0,046 mmol) HATU és 16 uL (0,09 mmol) DIPEA alkalmazásával 70 °C hőmérsékleten és különböző nyomásértékek esetén,
2, Táblázat A kapcsoltság alakulása a nyomás függvényében az AtFE-NH? pepiid előállításánál 70 °C hőmérsékleten.
Példa Hőmérséklet PC) Nyomás (bar) Kapcsoltság (K %)
3 {Összehasonfítő) 70 1 88
6 70 20 92
7 70 40 97
8 70 80 >99
9 70 80 >99
A táblázat adataiból látható, hogy a kapcsoltság lényegében teljessé tehető Fmoc-Ala-OH 1,5 ekvivalens feleslegben történő kapcsolásásnál emelt hőmérsékleten nyomás alkalmazásával.
1042, példa
Az ALFE-NH? pepiid előállítása 60 bar nyomáson és 70 ÖC hőmérsékleten különböző aminosav ekvivalenciákat alkalmazva.
Az általános d) előállítási lépésnek megfelelően elvégezzük a 0,03 mmol TentaGel RRAM gyantán lévő LFE pepiidre az Fmoc-Aia-ÖH aminosav kapcsolását, 14 mg (0,045 mmol). vagy 11 mg (0,036 mmol), vagy 9 mg (0,03 mmol), Fmoc-AlaOH, 17 mg (0,045 mmol), vagy 14 mg (0,036 mmol) vagy 11 mg (0,03 mmol) HATU és
UViíSV/ötí uL (0,09 mmoi), vagy 13 uL (0,072 mmoi), vagy 11 uL (ö,06 mmoi) OIPEA alkalmazásával 70 °C hőmérsékleten és 80 bar nyomás és Ö J ml/min áramlási sebesség esetén.
3„ Táblázat Á kapcsoltság alakolása az aminosav felesleg függvényében az ALFE~NHS pepiid előállításánál 70 °C hőmérsékleten és 80 bar nyomáson
Példa Aminosav ekvivalencia Kapcsoltság (K %)
10 1,5 4 9 >99 Ö7
11 12 1 94
Eljárás természetes o-aminosavak kapcsolására 13*32* példa
Természetes o-aminosavak kapcsolása gyantán lévő LFE pepiidre 80 bar nyomásértéken és 70 °C hőmérsékleten 1,5 ekvivalens aminosav kapcsolása mellett,
Az általános d) előállítási lépésnek megfelelően 0,03 mmoi skálán elvégezzük a TentaGel RRAM gyantán lévő LFE pepiidre az Fmoc védett természetes a-aminosav kapcsolását 1,5 ekvivalnes aminosav, 17 mg (0,048 mmoi) HÁTÚ és 16 ol. (0,09 mmoi) DIPEA alkalmazásával 70 ÜC hőmérsékleten és 80 bar nyomáson, 0,1 ml/min áramlási sebbesség mellett,
4. Tábláotx Természetes cnaminosavak kapcsolása gyantán lévő LFE pepiidre 80 bar nyomásértéken és 70 °C hőmérsékleten 1,5 ekvivalens aminosav kapcsolása mellett. Példa Aminosav
Fmoc-Ala-OH
Fmoc*Arg(Pbf)~OH
Fmoc-Asp(OíRu)~OH
Emoe-Asn(Trt)~OH
Fmoc-Tyr(tBo)-OH
Pmoc-Thr(fBu)-OM
Fmoc-Phe-OH
Pmoc-Pro-GH
Fmoc-Gln(Trt)-OH
Termék 1 Capcsoltság (K %
alfe~nh2 >99
RLFE-NHg >99
QLFE-NHs 99
NLFE-NH, >99
ylfe~nh2 >99
TLFE-NH3 >99
FLFE-NHs >99
PLEE-NHg >99
ÖLFE-NHg >99
7IÖ3SX/O
Példa Aminosav Termék Kapcsoltság
22 Frnoc-Met-OH MLFE-NH? >89
23 Fmoo-Glu(OtBu)-OH ELFE-NHs >99
24 Fmoc-Lys(8oc)~OH klfe~nh2 >99
25 PrnöoAfel-OH VLFE-IMHa 99
28 Fmoc-Gly-OH GLFE-NH* >99
27 Fmoc-Cys(Trt)~OH CLFE-NHs 99
28 Fmoc-lie-OH ilfe~nh2 99
29 Fmoc-Leu-OH LLFE-NH2 Cl £££ MU >99
31 Fmoc-T rp(Boc)-ÖH OLr WLFE-NHs >89
32 Fmoc~His(T rt)~OH hlfe-nh2 >99
A fenti adatok mutatják, hogy a találmány szerinti d) eljárási lépésben ogy-ogy amínosav kapcsolása gyakorlatilag teljes.
Eljárás nehéz szekvenciák előállítására
33*34, példa,
Acyl carrier protein 65-74 (AGP 65-74) szegmens VQAAIDYING-NH2 nehéz szekvencia szintézise
Az acyl carrier protein 65-74 (AGP 86-74) szegmensé nehéz szekvencia és a biokatív acyl carrier protein szintézisének kulcsa (LES P. MIRANDÁ AND PAUL F, ALEVVÖÖD Pföc, hfeíí, Acad. Sci USA 1998, 96, 1181-1186). Két módon végezzük el a pepiid szintézisét. Az első esetben Tentagei RRAM gyantán 80 bar nyomásértéken és 70 °C hőmérsékleten 1,5 ekvivalens aminosavak kapcsolása mellett, áramlásos reaktorban a találmány szerinti eljárással végezzük a szintézist (áramlási sebesség 0,1 ml/mín), A második esetben mikrohullámú reaktorban végezzük a szintézist azonos gyantán, azonos hőmérsékletén, azonos kapcsolószerrel, azonos aminosavakkal, azonos ekvivalenssel A 10 darab kapcsolás összes termelése a találmány szerinti eljárással eljárva 86%.
δ< Táblázat Acyi carrier protein 85-74 (ACP 85-74) szegmens nehéz szekvencia szín-
Példa Eljárás Hőmérséklet PQ Aminosav ekvivalens Termelés o
33 Találmány szerinti (80 bar nyomás) 70 1,5 88
34 (összehasonlító) Mikrohulláma (nyomás nélkül) 70 1,5 82
38« példa
A GiLWSVAV-NHa nehéz szekvencia szintézise.
A GILTVSVAV-NH^ pepiid nehéz szekvencia és a CDS+ T-sejt epifőp protein egy szakasza, meiy szintézisének kuícsa a GiLTVSVÁV nehéz szekvencia (Bernadett Bacsa, Kata Horváti, Szíivia Bősze, Fntz Ándreae, C Oiiver Kappe Journal of Organic Chemistry, 2008, 73, 7532-7542).
Két módon végezzük el a pepiid szintézisét. Az első esetben Chemmatrix gyantán 80 bar nyomásértéken és 70 °C hőmérsékleten 1,5 ekvivalens aminosavak kapcsolása mellett, áramíásos reaktorban (áramlási sebesség 0,1 ml/min) a találmány szerinti eljárással végezzük a szintézist. A második esetben mikrohullámú reaktorban végezzük a szintézist azonos gyantán, azonos hőmérsékletén, azonos kapcsolészerrei, azonos aminosavakkai, azonos ekvivalenciával. A 9 darab a találmány szerinti eljárással elvégzett kapcsolás összes termelése 88%.
6, Táblázat, A GILTVSVAV-NHs nehéz szekvencia szintézise.
Példa Hőmérséklet Technológia Í°C) Aminosav ekvivalenaa Termelés (%)
35 Találmány szerinti (80 bar nyomás) 70 1,8 88
38 (osszeha- Mikrohullámú 70 '1,8 39
sonlító) (nyomás nélkül)
X».
Eljárás β-paptidok előállítására
A β-peptidek biológiai hatással rendelkező vegyületek, melyek szintézise az alkalmazás szempontjából kulcsfontosságú. Az ACPC tartalmú peptidek fontos farmakológiái hatása az antibaktenáíis hatás. (Richard P. Cheng, Sámuel H. Geílman, Wiiíiam P. DeGrado Chem. Rév. 2001,101, 3219-3232).
Alternáló kíralitásű o/sz-2-amino-CÍkSopentánkarbonsav hexamer H<[1S,2Rj
ACPC-[1R,2S]-ACPC)3-NH2 szintézise:
'-X
Q·
Hgti A~NK Ő' 'r
NH A NB dz >
\x >4
- btt'i f? 1M.H
O? r/
0.
NR?
Két módon végezzük el a peptid szintézisét. Az első esetben Tentagel RRAM gyantán 60 bar nyomásértéken és 70 °C hőmérsékleten 1,5 ekvivalens aminösavak lása mellett, áramlásos reaktorban (áramlási sebesség 0,1 ml/mín) a találmány szerinti eljárással végezzük a szintézist. A második esetben mikrohullámú reaktorban végezzük a szintézist azonos gyantán, azonos hőmérsékleten, azonos kapcsolószerrel, azonos aminosavakkal, azonos ekvivalenciával. A 8 darab találmány szerinti eíjárássaí végzett kapcsolás összes termelése 98%.
Táblázat Aíterm dó kíralitásű e/sz~2-amíno-cikíopentánkarbonsav hexamer szintezi-
Példa Technológia Hőmérséklet Aminosav Termelés
...................................... (öC) ekvivalencia (%)
37 38 (Ősszeha- találmány szerinti (80 bar nyomás) 70 1,5 06 47
sonlító) Mikrohullámú (nyomás nélkül) 70 1,5
hexamer
H-([1 R,2Cj-AGPC)s-NH2 szintézise
ν.
Ο
Η?Ν >--ΝΗ
X % /X f /
Q .... / Q
-ΝΗ %···ΝΗ V-NH y..NH V-NI0’ “V
Két módon végezzük el a pepiid szintézisét. Az első (Rapp Poiymere) gyantán 60 bar nyomásértéken és 70 °C hőmérsékleten 1,5 iens aminosavak kapcsolása mellett, áfámlásos reaktorban (áramlási rnl/min) a találmány szerinti eljárással végezzük a szintézist, A második rohullámü reaktorban végezzük a szintézist azonos gyantán, azonos hőmérsékleten, azonos kapcsolószerrel, azonos amlnosavakkal, azonos ekvivalenciával. A találmány szerinti eljárással végzett 6 darab kapcsolás összes termelése 87%.
8. Táblázat Monoton kiralitásó e/sz~2-amínö-cikíopentánkarbonsav hexamer szintézise
Hőmérséklet Amínosav Termelés
eeioa recnnosogsa PC) ekvivalencia (%)
30 találmány szerinti (50 bar nyomás) 70 1,5 87
40 (összeha- sonistő) Mikrohullámú (nyomás nélkül) 70 1,6 32
41-42. példa
Szinaptetoxikus β-amiloíd olígomert semlegesítő β-peptid-konjugátum fragmensének ([1S>2SbACHC^3-Mrg-([1S(2S>ACHCh^'~/tAsp4W!2S]-ACHO-Gty~ G ly-Cys-N H a) szí ntéz lse.
A 2 -aminocfklohexánkarbonsavat (ACHC) tartalmazó β-peptid-konjügátom semlegesíti a szinaptotoxíkus β-amiioidot (Fulop, L; Mandiiy, I, M,; Juhász, G.; Szegedi, V.; Hetenyi, A,; Weber, E: Bozso, Z.; Simon, D,; Benko, R.; Király, Z.; Martinék, T, A. P/os One 2012, ?), mely szintézisének kulcsa az alábbi képietü szekvencia szintézise.
i
COOH ο,
ΗχΝ ,á~NH 0' /···
A....
ΝΗ
Ολ ν -ΝΗ \--NH >~ΝΗ θ' .0
Ο. ζ......4 > -ΝΗ I ÍNSH
ΗΝ-™<
ΝΗ
ΝΗ·>
ζ >···ΝΗ ό
ί Ö \ // Λ~·Λ
ΝΗ
Az ACHC nehéz és dupla ássál tehet csak teljessé tenni (dustin K. Murray, Bílal Farooqi, Jack D. Sadowsky, Mark Sealf, Wesiey A. Freund, Lloyd M. Smith, Jiandong Chen. Samuéi H, Geiiman d. ΛΜ CHEM. SOC. 2005, 127, 13271-13280).
Két módon végezzük el a peptíd szintézisét. Az első esetben Tentagel RRAM (Rapp Polymere) gyantán 60 bár nyomásértéken és 70 °C hőmérsékleten 1,5 ekvivalens amlnosavak kapcsolása mellett, a találmány szerinti eljárással áramlásos reaktorban (áramlási sebesség 0,1 ml/min) végezzük, a szintézist. A második esetben mikrohullámú reaktorban végezzük a szintézist azonos gyantán, azonos hőmérsékleten, azonos kapcsolószerrel, azonos aminosavakkal, azonos ekvivalenciával. A találmány szerinti eljárással végzett 9 kapcsolás összes termelése 97%.
9, Táblázat Szlnaptoíoxikus β-amsloid oligomert semlegesítő β-peptid-konjugátum fragmensének szintézise.
Példa Technológia Hőmérséklet (eC) Aminosav ekvivalencia Termelés (%)
41 Találmány szerinti (60 bar nyomás) 70 1,5 97
42 (összehasonlító) Mikrohullámú {nyomás nélkül) 70 T5 28
kapott biológiailag aktív peptidek a szokásos módon gyógyszerkészítménnyé alakíthatók, példa
Sejt-penetráló gamma pepiid H-(GÁAP)6-NH;? szintézise
ίA garnma-aminoproiin oligomerek sejtpenetráió hatással rendelkeznek: FarreraSinfreu J, Giralt E. Castei S, Albericio F, Royo M 2ÖÖ5, 127, 9459-9468.
Két módon végezzük el a peptid szintézisét. Áz első esetben Tentagei RRAM (Rapp Polymere) gyantán 86 bar nyomasértéken és 70 °C hőmérsékleten 1,5 ekvivalens aminosavak kapcsolása mellett, a találmány szerinti eljárással áramlásos reaktorban (áramlási sebesség 0,1 ml/min) végezzük a szintézist. A második esetben mikrohullámú reaktorban végezzük a szintézist azonos gyantán, azonos hőmérsékleten, azonos kapcsolószerrel, azonos aminosavakkal, azonos ekvivalenciával. A találmány szerinti eljárással végzett 6 kapcsolás összes termelése 92%.
1Ö. Táblázat Sejt-penetráló gamma peptid szintézise.
Példa Technológia -iömérséklei Aminosav Termelés >7
PC) ekvivaiencla
43 Találmány szerinti (60 bar nyomás) 70 1.5 92
44 (összehasonlító) Mikrohullámú (nyomás nélkül) 70 1,5 37
eljárásokká szokásos módon alakíthatók.
45-45, példa
Sapkázotf sermorehn, fluoreszcens jelöléssel ellátott GH-RH analóg, Fluoreszoeinil-YADÁÍFTNSYRKVLGQLSARKLLQÖlMSR-NHg [Prakash A, Goa KL BioDrugs: Clinioal Immunotherapeutics, Biopharmaoeutioals and Gene Therapy 1999, 12, 139--1 57j szintézise.
A sermorehn sejtmembránon történő penetrálását lehet fluoreszoein festékkei jelzett módon mérni [Beata Koíesinska, Dominika d. Podwysocka, Magnós A Rueping,
Dieter Seebacn, Faustín Kamena, Páter Walde, Márkus Sauer, Barbara Windschiegi, Míra Meyer-Acs, Marc Ver dér Brüggen, and Sehastian Giehrsng CHEMISTRY & BIODÍVERSITY 2013, 10, 1-38].
Két módon végezzük el a peptid szintézisét. Az első esetben Tentagei RRAM (Rapp Poíymere) gyantán 60 bar nyomásértéken és 70 ÖC hőmérsékleten 1.5 ekvivalens aminosavak kapcsolása mellett, a találmány szerinti eljárással áramlásos reaktorban (áramlási sebesség 0,1 mí/min) végezzük a szintézist. A sapkázási lépést 1,5 ekvivalens karboxifluoreszceínnel végeztük 1,5 ekvivalens HATU kapcsolószerrel, 3 ekvivalens DIPEÁ-vaí 1 ml DMF-ben oídva 15 percen át recirkuláltatva 60 bar nyomásértékén és 70 °C hőmérsékleten. A találmány szerinti eljárással végzett 20 kapcsolási isi lépés összes
A második esetben mikrohullámú reaktorban végezzük a szintézist azonos gyantán, azonos hőmérsékleten, azonos kapcsolószerrel, azonos aminosavakkal, azonos ekvivalenciával
11, Táblázat Fiuoreszcein
Példa szintézise. Hőmérséklet Aminosav ekvivaíencsa
Í°C)
Termelés /%) (ősszéhasonl
Találmány szerinti (60 bar nyomás)
Mikrohullámú (nyomás nélkül)
1.5 78
1.5 19
A fenti eljárásokkal kapott biológiailag aktív peptidek a gyógyszerkészítésben szokásos módon gyógyszerkészítménnyé alakíthatók.
47-48. példa
Sapkázott” AcR[1S,2S>-ACPC)i2~NH2 acefíiezett y-szekretáz gátló ACPC oligomer szintézise [V. Imamura, N. Umezawa, S. ösawa, N. Shimada, T. Higo. S. Yokoshíma, T. Fukuyama, T, Iwatsubc, N. Kató, T. Temita and T. Híguchí, Journal of Medicina/ Chem/stry 2013, 56,1443-1454.]
Löasa/síí
Két módon végezzük el a peptid szintézisét. Az első esetben (Rapp Polymere) gyantán 60 bar nyomásértéken és 70 °C hőmérsékleten 1,5 ekvivalens aminosavak kapcsolása mellett, a találmány szerinti eljárással áramlásos reaktorban (áramlási sebesség 0,1 ml/mín) végezzük a szintézist. A sapkázási lépést 1,5 ekvivalens ecetsav-anhidriddeí végeztük, 3 ekvivalens DIFEA-val 1 ml DMF-ben oldva 15 percen át recírkuláliatva 60 bar nyomásértéken és 70 °C hőmérsékleten. A találmány szerinti eljárással végzett 12 kapcsolás és 1 sapkázási lépés összes termelése 94%.
A második esetben mikrohullámú reaktorban végeztük a szintézist azonos gyantán, azonos hőmérsékleten, azonos kapcsolószerrel, azonos amínosavakkal, azonos ekvivalenciával,
Táblázat y-Szekretáz gátló acetilezett ACPC oligomer szintézise.
Hőmérséklet Amínosav Termelés (°C) ekvivalencia (%) (összehaTalálmány szerinti (60 bar nyomás)
Mikrohullámú (nyomás nékui)
1,5
1.5
A fenti eljárásokkal kapott biológiailag aktív peptidek a gyogyszerkészitésben szokásos módon gyógyszerkészítménnyé alakíthatók.
4MÖ, példa
H-AHPA-Leu-NH2 Bestatíne amid szintézise [Hirayama, Y; Sakamaks, S; Takayanagi, N; Tsuji, Y; Sagawa, T; Chiba, W; Mafsunaga, T; Níltsu, Y Canoer & oóemotóerapy 2003 30 1113-1138.]
Két módon végezzük ei a peptid szintézisét. Az első esetben Tentagel RRAM (Rapp Polymere) gyantán 60 bar nyomásértéken és 70 °C hőmérsékleten 1,5 ekvíva31 lens aminosavak kapcsolása mellett, a találmány szerinti eljárássá! áramlásos reaktorban (áramlási sebesség 0,1 ml/mín) végezzük a szintézist, A találmány szerint! eljárással végzett 2 kapcsolás összes termelése 97%.
A második esetben mikrohullámú reaktorban végezzük a szintézist azonos gyantán, azonos hőmérsékleten, azonos kapcsolószerrel, azonos amioosavakkal, azonos ekvivalenciával.
13, Táblázat H-AHRA-Leo-NH?. szintézise.
Hőmérséklet Aminosav Termelés
Példa Technológia (CC) ekvivalencia (%)
49 Találmány szerinti yg (60 bar nyomás) 1,5 97
50 (összeha- Míkrohuüámú yg sorúitól (nyomás nélkül) 1,5 43
H-AHPA-Leu-OH Restellne szintézise fHírayama, Y; Sakamakí, S; Tékayanagl, N; Tsuji, Y; Sagawa, T; Chiba, H: Matsunaga, T; Nlitsu, Y Canoer & cdemomerapy 2003 30 1 113-1138.]
Két módon végezzük el a pepiid szintézisét. Az első esetben polisztirol gyantán Wang (hidroximetilfenil) iínkerrel 80 bar nyomásértéken és 70 °C hőmérsékleten 1,5 ekvivalens amlnosavak kapcsolása mellett, a találmány szerinti eljárással áramlásos reaktorban (áramlási sebesség 0,1 ml/mín) végezzük a szintézist. Wang (hidroximetilfenii) iinkerrel kivitelezve a hasítást pepiid sav származékot kapunk, A találmány szerinti eljárással végzett 2 kapcsolás összes termelése 98%.
A második esetben mikrohullámú reaktorban végezzük a szintézist azonos gyantán, azonos hőmérsékleten, azonos kapcsolószerrel, azonos amínosavakkal, azonos ekvivalenciával.
14. Táblázat H-AHPA-Leu-OH szintézise, _ __ __
Hőmérséklet Aminosav Termelés
(°C> ekvivalencia (%)
51 Találmány szerinti (60 bar nyomás) 70 1,6 98
52 (összeha- btikroőuhámú 70 1.5 57
soníitő) (nyomás nélkül)
7163 S4/‘SS

Claims (17)

  1. Szabadalmi Igénypontok
    1» Áramíásos kémiai eljárás peptidek ás enantiomereik, díszlereornereik, sztereolzomereik, ezek keverékei és mindezek sói, és/vagy származékái előállítására szilárd hordozón, amely a következő lépéseket tartalmazza:
    a) a szilárd hordozó előkészítése a kapcsoláshoz;
    b) egy, az egyik terminális csoportján szabad, a másik terminális csoportján, és adott esetben egyéb reaktív csoportján, védett aminosav kapcsolása a szilárd hordozóéi az előző lépésben kapott szilárd hordozóhoz kapcsolt aminosav terminális portjának eltávolítása; majd
    d) újabb, a megfelelő terminális csoportján szabad, a másik terminális csoportján és adott esetben egyéb reaktív csoportján védett, aminosav kapcsolása a c) lépésben kapott termékhez: majd a e) és d) lépések kívánt számú ismétlése; és ezután kívánt esetben
    e) a d) lépésben kapott termék terminális védőosoportjának eltávolítása után annak sapkázása egy reaktív csoportján szabad vagy aktiváló csoportot tartalmazó, egyéb reaktív csoportján védett vegyúlettel;
    f) az előző d) vagy e) lépésben kapott peptid íehasítása a szilárd hordozóról, és kívánt esetben az sóvá és/vagy származékká alakítása, és/vagy hidrolízise, azzal jellemezve* begy az á)-e) lépéseket 30-150 nG hőmérsékleti tartományban és 20 bar - 500 bar nyomás tartományban végezzük és a d) lépésben a c) lépésben kapott termék és a kapcsolandó aminosav mólaránya legfeljebb 1:1,5,
  2. 2. Az 1, igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, begy az a) lépés az alábbi lépéseket foglalja magában:
    al) a szilárd hordozón elhelyezkedő llnker csoportról a védőcsoport eltávolítása és a szabad linket csoportot tartalmazó szilárd hordozó mosása; vagy a2) a szilárd hordozón elhelyezkedő llnker csoporton lévő funkciós csoport semlegesítése és a szilárd hordozó mosása; vagy a3) vagy a szabad llnker csoportot tartalmazó szilárd hordozó mosása.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás ázzál jéllémezve* hogy az a)~e) lépéseket 70 X hőmérsékleten és 60 bar nyomáson végezzük.
    * ,*·
  4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a d) lépésben a c) lépésben kapott termék és a kapcsolandó aminosav mólaránya legfeljebb 1:1,2.
  5. 5. Az 1-4, igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy ez eljárást szilárd hordozóként előnyösen polisztiroi-poiietilén-gíikoi kopolimer vagy po~ iietilén-glikol gyantán végezzük 2,4-dimetoxi-benzhidrilamin Sinkerrel.
    8, Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a a b), d) és e) lépéseket kapcsolószerként karbodiímidekkeí: előnyösen dícikiohexíl· -karbodiimiddéS, diizepropii-karbodíimiddeí, karbonil-diimidazolial, aktív észter képzőkkel; előnyösen hidroxiszukcinimiddel, hidroxibenzotriazollal, N-hidroxr-S-norbornén-2,3-dikarboximidde!, l-hidroxÍ-7-azabenzotriazolÍal, pentafloorfenoiíal, áminosav-fioorid képzőkkel: előnyösen íeframetiMluorformamidinium hexafluorofoszfáttai, aminosavklorid képzőkkel; előnyösen (etrametiS-klőrformamidinium hexafluorofoszfáttai, foszfónium reagensekkel: előnyösen benzotnazoM -iloxi-tnsz(dimeti!amino}foszfoníum-hexaflüorföszfátfai, benzotríazol-l-iioxi-trípírrohdinofoszfonium-hexaflooríoszfáttat azabenzotriazoí-ldloxí-tnpirrolidinöfoszfoníum-hexafiüorföszfáttal, bróm-tripirrolidihofoszfoníum-hexafluorfoszfáttal, 3-(díetoxifoszforiloxi)~1,2,3-benzotríazin-4{3H)-onnal, erőműm reagensekkel: előnyösen N,N,N\NMetramef!l-Ö-(1H~benzotriazoí~1-il}uronium-hexafluorfoszfáttal, 1 -jbisz{dímetilamlno)metilén]~1 H-1,2 t3-tríazolo[4,5-bjpíridiniom-3-oxid-hexafloorfoszfáttal, N;NfN\N4etrametiS-G-(1H-henzötriazö!-1-il)uronium~ tetrafluorboráttal, 1 -[(dimetilaminoí-(dimetiliminium)metílj-l H~1 ^.S-triazoloH^-bjpindlh-S-oxid-hexafiuorfoszfáttal, Ödazabenzötriazol-141)-1,1,3,3-tatrametiSénuröniumhexafluorfoszfáttal O-(azabenzotriazol-1 -il}-1,1 ,3,3~pentametilénurönium~hexafluorfoszíáttai, O-(7-azabenzotríazol-1-il)-1,3-dimetii-l ,3-dimetiíénuronium, oxyma reagensekkel: előnyösen etil-(hidroxiimino)cianoacetáttaí, (1~cíano-2~etoxi-2-oxoetilídénamí~ nooxijdimetilamino-morfolíno-karbénium-hexafluorfoszfáttal, O-Í(etoxikarbonil}danometiíénamino]“N,N,N\N'-tetrametiíiuronium»hexafluörfoszfáttal, előnyösebben (1-[bísz(d!metilamlno)mefilénj-1 H-1,2,3~tríazolo[4,S~őjpiridiníum 3-oxid-hexafluorfoszfát) vagy efil~(hidröxiirninö)cianoaeetát kapcsolószerrel végezzük.
  6. 7. A 6, Igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy kapcsolószerként 1-[bísz-(dimetilamino)mefilénj~1H-1,2,3-tríazolo[4,5~ő]píndiniom3-oxid-hexafloorfoszfátot vagy efíl~(hidroxiimino)danoacefátot alkalmazunk.
    X·*·
  7. 8. Az 1-7, igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az eljárást szerves oldószerekben, ezek elegyesben vagy keverékeiben végezzük.
  8. 9. A 8, igénypont szerinti eljárás ezzel jellemezve, hogy szerves oldószerként szénhidrogén, halogénezett szénhidrogén, keton, alkohol, éter, nitni, amid vagy amin típusú oldószert alkalmazunk.
  9. 10. A 9. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy szerves oldószerként hexánt, díetií-étert, dioxánt, tetrahidrofuránt, Ν,Ν-dímetíl-formamidoi. N-metil-pirrölidont aeetöhítnlt N^-diizopropil-éfil-amint alkalmazunk,
  10. 11. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a b) lépésben kapcsolt aminosavat, és d) lépés(ek}ben kapcsolt amínosav(ak)aí tetszőleges sorrendben és számban, alábbi aminósavakbéí álló csoportból választjuk: A, C, D, E, F, G, Η, I, K, L, Μ, N, P, G, R, S, T, V, W, Y, AGPC, ACHC, β-hAsp, β-hArg, D-naftilalanin, D-4-klórfenilalanin, D~(3'-piridil)-alanin-D-citruilín-D~alanin, D-Leu, Piroglutamin, S-izöpropiiaminogSícin, D-4-karbamidofeníialanin, L- (4-(2,8díoxohexabidropirimídín-4-karboxamidö)feníiaianiní D-naftilalanin, D~Trp, D-Ser(OtBu), DArg; Hidroxiprölin, tiofenilalanín, (Sj-I^SX-tetrahidroísokinolsn-G-karbonsav, (3aS,7aS)-oktahídro-1H-indol-2-karbonsav, (R}-{1-amino-3-met.ílbuti!)boronsav, S-terc~ butiigiicin, (2S,3P)-AHPA, (2S,3R)-a-hídroxi-p~homoíeuoin, 3-amíno-2hidroxídekánsav, NMeTyr, dezamino-ciszteín, D-Tyr(Ei), homoarginin, (2S,3R4R8£)3-hidroxí~4-metil-2'-(metiiamino)okt-6-énsav, S-etílgíicin, N-metíiglicin, /V-metil-L-leucin, D-alanín, /V-metií~L-vaSin, NMeGly, L-ornithín, S-antranlloil-L-aianin, βhídroxiglutaminsav, aminoglicin, ACPC, ACHC, (2S,3S)~AHPBA, GAAP, amely aminosavak adott esetben az N- vagy C-terrnínálís csoportjukon és adott esetben az oldalánoukban található reaktív csoportjukon védöcsoporttal ellátottak.
  11. 12. Áz 1-11. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a c) és d) lépéseket legalább egy alkalommal Ismételjük,
  12. 13. A 12, igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a ej és d) lépéseket 1-100 alkalommal ismételjük.
  13. 14. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az e) lépési hidroxiszukeínimid észterekkel vagy szabad karbonsav funkció esetén ismert kapcsolószerekkel, vagy karbonsavszármazékokkal, előnyösen karbonsavkloríddal, karbonsavanhídríddeí végezzük, amelynek során acilezett származékokat kapunk.
    >;· <* ,κ
  14. 15. A 14. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az e) lépést karboxifluoreszoeínnel vagy ecetsav-anhídríddeí egy kapcsolószer jelenlétében végezzük, amelynek során fluoreszceinneí jelölt vagy acetíiezett származékot kapónk.
    15. Az 1-15. igénypontok bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az f) lépésben a hasítást peptid-sav származék előállítására klórmetilfenSÍ, fenílaoetamídometíl línker esetén hídrogén-fluoriddai vagy trifluormetánszuifonsavvai; hidroxímetiífenil, metoxi-hidroximetilfeníl, klor-irífeniimeiií-kloríd linker esetén tnfluorecetsavval végezzük, vagy peptíd-amid származékok előállítására a hasítást metil-benzhidriíamin línker esetén hídrogén-fluoriddai vagy trifloormetánszolfonsavval; vagy 2,4-dimetöxÍ-benzhídrÍÍamÍn linker esetén influorecetsavvai; vagy hidroximetiíbenzamíd linker esetén ammóniás metanollal vagy primer és szekunder amtnokkai végezzük, vagy hidroximetílbenzamid linker esetén a hasítást pepiidhjdraztd származékok előállítására hidrazinokkaí, peptid-észter származékok előállítására alkoholokkal, peptid-alkohol származékok előállítására lítiom-borohidriddel végezzük.
  15. 17. A 16. Igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a hasítási peptidsav származékok előállítására hidroxímetilfeníl línker esetén és pepiid-amíd származékok előállítására 2,4-dímetoxi-benzhídriiamin linker esetén frifluorecetsavva! végezzük,
  16. 18. Az 1 -17. igénypontok bármelyike szerinti eljárás az
    ALFE-NHá, RLFE-NH2, DLFB-NHs, NLFE-NHa, YLFE-NH·?, TLFE-NHy, FLFE-NH2, PLFE-NFh, QLFE-NHz, MLFE-NH2, EUFE-NHz, KLFE~NH2, VLFE-NHz, GLFE-NHz CLFE-NH;;, ILFE-NHy, LLFE-NH2l SLFE-NHg, WLFE~NH2i HLFE-NH2> VQAAÍDY!NG-NH2< GILTVSVAV-NH2, M-([1S,2R]~ACPC í1R,2S]-ACPC)3~NH2f H*([1R,2Sj“ACPC)g-NH2, [1 S,2S]-ACHC-p3~hArg-{[1 S,2SFACHC)2~p3~bAsp-[1 S 2SJ ACHC-Gly-Gly-Cys~NH2> H-(GAAP)8~NH2, Fluoreszceinil-YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDÍMSR-NHy Ac-([1S,2SFACPC) :2-NH2., H-AHPÁ-Leu-NH, peptídek előállitására, azzal jellemezve, hegy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
  17. 19. Az 1-18. igénypontok bármelyike szerinti eljárás az alábbi csoportból választott peptid:
    Arg5.8, RGiKiWFGNRRMKWKK, ACRG-ACPC, ACRC-ACHC, ACTH(1~24), SYSMEHFRWGKPVGKKRRFVKVYP, H-Hís-Ser-G!n-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp~Tyr~ -Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ála-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr37
    -OH, H-His-Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Gíu-Leu-Ser-Arg-leu-Arg-Asp-Ser-Aia-ArgLeu~Gín~Arg-Leu~Leu-Gln~Gíy-Leu-VakNH2; píroGíu-His-Trp~Ser~Tyr~G!y-Leu-Arg-Pro-Gíy-NH;?, acetíi-D-3~(2'-naftH)~alansn~ D-A-kíórfeniialaninD-S-CS'-pirídö)- aianin-L· -szerin-L-tirozin-D-citruüín-L· ieucin-L-argínín-L-prohn-D- alanin-amid, Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt, (4R)~N-{4-[(2S)-2-{[(1R)-2[4-(karbamoiiamino)feníl31-(((18)-1-(((23)-1-(2-(((1 R)-1-karbamoitetil)karbamoill}pírrolidin-1~íl)-‘l-oxO-6-[(propán~2-iS)aminö]bexán~2-Hjkarbamo!Í}-3~metilbuW]karbamoíí}eiiijkarbamoií}-2~((2S)~2~((2R)~2~ -((2R)~3-(4-klórfenii)-2~((2R)-2-acatam!do-3~(naftaíin-2-il)propánamido]propánamído]-3-{pirídín~3-!l)propánamído)-3~hitíroxípfOpánamido]etH]fanil}-2l8-dÍoxo-1<3-diazinán~4-karboxamíd, (23>N-((2S)~1 -(((23)-1 -(((23)-1 -(((23)-1 -(((2R)~1 -(((23)-1 -(((2S)-5-(diaminometilidénamino)-1~[(2S)-2~(etíikarbamoil)p!rrolfdin-1-iíJ-1-oxopentán-2-il]amino]~4-metíl-1-oxopentán-2”íl(amino}-3~(1 Η~ίπάοΙ-3-ίΙ)-1 ~oxopropán-2-í!)amino)~3-(4~h!droxífenil)-1~oxopropán-2-í0amino]-3~hidfOxi-1-oxöpropán-2“il]am!no]~3-(1H~!ndol-3~íl)~1-οχορΓορ3η-2~ί03η7ΐηο}·3-(1Η-ίπΊίΡ3ζοΙ~5-ΐ0-1-οχορΓορΡη-2~ίΙ]~5-οχορίΓΓθΗΡίη-2^ΗΓΡοχamid, Pyr-HiS-Trp-SaFlyr-D-T rp-Leu-Arg*Rro-G|y»NHz Pyr-Hís-Trp-Sar-I yr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NH-NH-CO-NH2i Pyr-His-Trp-8er-Tyr-D-3er(OtBu)-Lau-Arg-Pro-NHEí, Η··3©Γ-ν8ΐ-3θΓ-ΘΙυ~ΠΘ-Οίη-Ε©υ-Μ©1-Ηίδ~Α®η~Ιβυ-Ο^-Εγδ-Ηίδ~Ιβυ-Α5η-3βΓΑΙβόΟΟ-Α^-νοΡΟΕΑΤφ-Ιβϋ-ΛΓρ'Ενδ-Ενδ-ίΘυ-Οίη-ΑδρΛΑΰ-Ηίδ-Αδη-ΡΚβ-ΟΗ, SQEPPISLDLTFHLLREVLEMTKADQLAQQAHSNRKLLDJA, HO-Tyr-Ala-Asp-Ala-lle-Phe-Thr-A5n-Ser-Tyr-Arg~L.ys-VabLeu-Gly~Gín~Lea-3ar-Aia-Arg-LyS“L.eu~Leu-Gln-Asp-ile~Met-Ser-Árg-Gln-G!n-GIy-Glü-3er-Asn-Gin-GÍu-Árg~Giy-ÁÍa-Arg-Ala-Arg-Leu-NHg, HG-G!n-Leu-8ar-Ala-Arg4.ys-Leu~Leu-Gln-Asp-fte-yet-Ser-Arg-Gln-Gín-GÍy~GÍM~Ser-Asn-Gín-Giu-Arg-G!y~Aía~Arg-Aía-Arg-L.eU“NH2,
    Pyr-His-Pro~NH2í SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEWEEAEN, RLDVY,
    HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFÍEWLKNGGPSSGAPPPS, H His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Tbr-Sar~Asp~Vaí-Ser-Ser-Ty!'-Leu-Glu-Gly-Gln-ASa-Aía-Lys(y-Glu-palmitO!i)-Glii-Phe-ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH, FPRPGGGGNGDFEEiPEElL, Pyr-His~Trp-Sar~Tyr-Gly-Leu-Árg-Pto-Gly-NH2) D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gíy-Thi-Ser-D-Tic-Oíc-Arg, YADAÍFTNSYRKVLGGLSARKLLGDIMSRG, [(1R)~3-met)l~1-({(2S)-3-fenil-2~((pírazín~2-fíkarboníl)amínoJpropanoil)amíno)butíl]boronsav( N-[2,2~dfmetil~1~ (metílkarbamoíl)· -propíl]-2(hidroxí”(h!droxikarbamoii)fnetíl)~4~metil-pentánamid,
    GIGKFLKKAKKFGKAFVKILKK, GIGKFLHSAKKFGKAFVGEIMNS, I8367, RGGLCYCRGRFCVCVGR, LRWPVWPWRRK-NHg, (2S(3R)-AHPÁ~L~Leu, (28,3/?)7 3.5354/05-3
    -ΑΗΡΑ-1-ΡΓθ-1~Ρίθ~1-Αΐ3·-ΝΗ2, {2δ%Α}~·3-^ίηο~2%ίάΓ0χ95^70ΗΚβχοηοίΙ~1~ν9ΐ~ΙΛ/3ί -L-Asp-OH, ^S.SRpAHPA-Vai-Phe-OH, (2S,3R)-Uu~Prp-Pro-OH, 3-amÍno~2-hídroxi -dekanoii-Aia-Vaí-NMeTyr-Tyr-OH, CYIQNCPLG-NHz, 3^erkaptopropiöOíPD-Tyr(Et) -fte-Thr-Asn-Cys-Pro-Orn-Gíy-'NHg, H- Cya-Tyr-Pha-GIn-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH;? dezam/AoCys-Tyr-Phe-GIn-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NHí, NMaminoíminomei!Í)-N5--(3 -ΓηβΓΚ3ρίο-1~οχορίΌρΠ)-ί_-Ιν'3ίί~ρΙνοΗ-Ι-α-·3δρ3ΓϋΙ··Ι'·ίΓνρ1ορΚΠ·Ρ··ρΓου-Ι-οίδζίΘίη3ηιί3; KCNTATCATGRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY~NH2, H«[(2S,3R4R6E)-3 -·ΚίάΓθχΐ~4“Γηο1ϋ~2~(ι·η©1ΐΐ3ηΊίηο)οΚί-δ-'6ποϋ3'·1·-2-·3ΓηίηοΡυί3ηοίΡΛ/-ΠΊθΙϊ^Ποϋ“Λ/-Γηο1ίΡΙ~ΐβυ -θίΡΕ-νοΗΙ-Λ/~ηΐΘίΙΙ-1-Μυοϋ·-Ε-3ΐ3ηίΙ-0~3ί3η!ΐ-Λ/''ΓηΘΐί!~14θυοΗ~Αί~ηιο1Η-1·-Ι©υοίΙ--Λ(~ηι©ΐ!Μ-va-Íín-ΟΗ, Ac~YTSLÍHBLiEESGNQGEKNEGELLELDKWASLWNWF-NH2f H-Val-Pro -NMeQly-ÖH, H-DPhe-Cys-Phe~D-Trp~Lys~7hr~Cys-Thr(öl}, N-de-kanoií-L-triptofiFL -3δ2ρ3Γ39ίηΐΡΙ~Η3ζρ8ΛίΡΕ~ίΓ©οηΗ9ίΐοΗ~1-θΓηίΙΗ~1-8δζρ3ΛίΙ-0~3ί3ηϊΡ0·33ζροάί!9Ηάϊ~0~ -δζ©ΓΗ“10Γθο~3~ηιβ1ΐΡΙ~9ίϋί3?7#-3-3ηΐΓ3ηΐ1οΗ-1-8ΐ3ηίη: H-VakOrn-teu-D-Phe-Pro-Val
    -Gm-Leu-D-Phe-Pro-OH eiőáihtására, azzal jsitemazwhogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmasuk.
HU1400114A 2014-02-28 2014-02-28 Eljárás peptidek előállítására HU230584B1 (hu)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU1400114A HU230584B1 (hu) 2014-02-28 2014-02-28 Eljárás peptidek előállítására
PCT/HU2015/000022 WO2015128687A1 (en) 2014-02-28 2015-02-27 Continuous flow peptide synthesis
EP15715810.6A EP3110828B1 (en) 2014-02-28 2015-02-27 Continuous flow peptide synthesis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU1400114A HU230584B1 (hu) 2014-02-28 2014-02-28 Eljárás peptidek előállítására

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUP1400114A2 HUP1400114A2 (en) 2015-09-28
HU230584B1 true HU230584B1 (hu) 2017-01-30

Family

ID=89991427

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU1400114A HU230584B1 (hu) 2014-02-28 2014-02-28 Eljárás peptidek előállítására

Country Status (3)

Country Link
EP (1) EP3110828B1 (hu)
HU (1) HU230584B1 (hu)
WO (1) WO2015128687A1 (hu)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2907454C (en) 2013-03-21 2021-05-04 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Synthesis of hydantoin containing peptide products
SG11201506885UA (en) 2013-03-21 2015-09-29 Sanofi Aventis Deutschland Synthesis of cyclic imide containing peptide products
US20190309014A1 (en) * 2016-07-04 2019-10-10 Emcure Pharmaceuticals Limited Process for preparation of icatibant acetate
AU2018221670B2 (en) * 2017-02-17 2021-02-04 Fresenius Kabi Oncology Ltd. An improved process for the preparation of boronic acid esters
US20200247841A1 (en) * 2017-09-27 2020-08-06 Biocon Limited Synthesis of icatibant
EP3807292A4 (en) 2018-06-14 2022-03-16 CEM Corporation SOLVENT SYSTEM FOR SOLID PHASE PEPTIDE SYNTHESIS
EP3808759A4 (en) * 2018-06-15 2021-08-11 Yokogawa Electric Corporation METHOD FOR PRODUCING AMIDE
US20220259258A1 (en) * 2019-06-14 2022-08-18 Mytide Therapeutics, Inc. A Manufacturing Process for Peptide and Protein Production
CN112159456A (zh) * 2020-10-13 2021-01-01 大连阿拉宁生物技术有限公司 一种多肽的绿色合成方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4192798A (en) * 1978-11-20 1980-03-11 Bioresearch, Inc. Rapid, large scale, automatable high pressure peptide synthesis
EP0073828A4 (en) * 1981-03-10 1983-11-09 Biores Inc PEPTIDE SYNTHESIS HIGH YIELD.
US4861866A (en) * 1987-01-21 1989-08-29 Eldex Laboratories, Inc. Continuous flow peptide synthesizer
US7393920B2 (en) * 2003-06-23 2008-07-01 Cem Corporation Microwave-assisted peptide synthesis

Also Published As

Publication number Publication date
HUP1400114A2 (en) 2015-09-28
WO2015128687A1 (en) 2015-09-03
EP3110828B1 (en) 2020-12-09
EP3110828A1 (en) 2017-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU230584B1 (hu) Eljárás peptidek előállítására
US7589170B1 (en) Synthesis of cyclic peptides
US10407468B2 (en) Methods for synthesizing α4β7 peptide antagonists
KR102397271B1 (ko) Amg 416의 제조 방법
EP1115739B1 (en) Auxiliary for amide bond formation
KR100871489B1 (ko) 카할라이드 화합물
KR20130127443A (ko) 데가렐릭스 및 이의 중간 화합물의 제조 방법
JPWO2009014177A1 (ja) ジベンゾフルベン誘導体の淘汰方法
JP5212371B2 (ja) ペプチドの製造方法
CN105408344B (zh) 肽-树脂结合物及其用途
JP2017523957A (ja) Ｄ−アルギニル−２，６−ジメチル−ｌ−チロシル−ｌ−リシル−ｌ−フェニルアラニンアミドの製造方法
Ruczyński et al. Problem of aspartimide formation in Fmoc‐based solid‐phase peptide synthesis using Dmab group to protect side chain of aspartic acid
US10858390B2 (en) Use of excess carbodiimide for peptide synthesis at elevated temperatures
Nelli et al. An activated building block for the introduction of the histidine side chain in aliphatic oligourea foldamers
JP2017523956A (ja) Ｄ−アルギニル−２，６−ジメチル−ｌ−チロシル−ｌ−リシル−ｌ−フェニルアラニンアミドの調製方法
Nandhini et al. 2-Methoxy-4-methylsulfinylbenzyl Alcohol as a Safety-Catch Linker for the Fmoc/t Bu Solid-Phase Peptide Synthesis Strategy
Góngora-Benítez et al. A universal strategy for preparing protected C-terminal peptides on the solid phase through an intramolecular click chemistry-based handle
EP2195329B1 (en) Method for chemical synthesis of polypeptides and proteins
Pineda-Castañeda et al. Designing Short Peptides: A Sisyphean Task?
US5942601A (en) Peptide synthesis with sulfonyl protecting groups
AU766495B2 (en) Synthesis of cyclic peptides
Kaudela MASTERARBEIT/MASTER’S THESIS
AU768649B2 (en) Auxiliary for amide bond formation
Stasiak et al. Peptides derived from α-hydroxymethylserine: Aspects of solid-phase synthesis
Hall Poster presentation abstracts