HU230318B1 - Arundo donax fenntartható totipotens tenyészete - Google Patents
Arundo donax fenntartható totipotens tenyészete Download PDFInfo
- Publication number
- HU230318B1 HU230318B1 HU0500786A HUP0500786A HU230318B1 HU 230318 B1 HU230318 B1 HU 230318B1 HU 0500786 A HU0500786 A HU 0500786A HU P0500786 A HUP0500786 A HU P0500786A HU 230318 B1 HU230318 B1 HU 230318B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- medium
- tissue culture
- sustained
- plant
- plants
- Prior art date
Links
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 241001494508 Arundo donax Species 0.000 title claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 53
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 99
- 230000000408 embryogenic effect Effects 0.000 claims description 19
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 14
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 12
- HFCYZXMHUIHAQI-UHFFFAOYSA-N Thidiazuron Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC(=O)NC1=CN=NS1 HFCYZXMHUIHAQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 claims description 11
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 claims description 8
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 6
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 6
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 6
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 claims description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 claims description 5
- UZKQTCBAMSWPJD-UQCOIBPSSA-N trans-Zeatin Natural products OCC(/C)=C\CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 UZKQTCBAMSWPJD-UQCOIBPSSA-N 0.000 claims description 5
- UZKQTCBAMSWPJD-FARCUNLSSA-N trans-zeatin Chemical compound OCC(/C)=C/CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 UZKQTCBAMSWPJD-FARCUNLSSA-N 0.000 claims description 5
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 claims description 4
- 239000005595 Picloram Substances 0.000 claims description 4
- 239000002363 auxin Substances 0.000 claims description 4
- NQQVFXUMIDALNH-UHFFFAOYSA-N picloram Chemical compound NC1=C(Cl)C(Cl)=NC(C(O)=O)=C1Cl NQQVFXUMIDALNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LQXHSCOPYJCOMD-UHFFFAOYSA-N 7h-purin-6-ylazanium;sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.NC1=NC=NC2=C1NC=N2.NC1=NC=NC2=C1NC=N2 LQXHSCOPYJCOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 claims description 2
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 claims 2
- HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 2,4-Dichlorophenoxyaceticacid Chemical compound OC(=O)C(Cl)OC1=CC=C(Cl)C=C1 HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- VDRACTHWBNITQP-UHFFFAOYSA-N 2-(3-methylbutyl)-7h-purin-6-amine Chemical compound CC(C)CCC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 VDRACTHWBNITQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims 1
- 230000004992 fission Effects 0.000 claims 1
- 239000003630 growth substance Substances 0.000 claims 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 70
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 14
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 11
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 11
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 11
- 241000383566 Donax <angiosperm> Species 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 7
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 6
- IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N glufosinate-P Chemical compound CP(O)(=O)CC[C@H](N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 6
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N Phosphinothricin Natural products CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 5
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 4
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 4
- 239000005648 plant growth regulator Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 3
- 241000722731 Carex Species 0.000 description 3
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 3
- 241000233948 Typha Species 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 3
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 3
- OVSKIKFHRZPJSS-DOMIDYPGSA-N 2-(2,4-dichlorophenoxy)acetic acid Chemical compound OC(=O)[14CH2]OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OVSKIKFHRZPJSS-DOMIDYPGSA-N 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 241000234653 Cyperus Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000735470 Juncus Species 0.000 description 2
- HYVABZIGRDEKCD-UHFFFAOYSA-N N(6)-dimethylallyladenine Chemical compound CC(C)=CCNC1=NC=NC2=C1N=CN2 HYVABZIGRDEKCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 210000004081 cilia Anatomy 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- LCPDWSOZIOUXRV-UHFFFAOYSA-N phenoxyacetic acid Chemical compound OC(=O)COC1=CC=CC=C1 LCPDWSOZIOUXRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 2
- 229940023877 zeatin Drugs 0.000 description 2
- MWSOSEYIOCGKDW-UHFFFAOYSA-N 1,1,2-tris(chloranyl)ethene Chemical compound ClC=C(Cl)Cl.ClC=C(Cl)Cl MWSOSEYIOCGKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 2,4-D Chemical compound OC(=O)COC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- 241000928106 Alain Species 0.000 description 1
- 235000017166 Bambusa arundinacea Nutrition 0.000 description 1
- 235000017491 Bambusa tulda Nutrition 0.000 description 1
- 241000339490 Brachyachne Species 0.000 description 1
- ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N D-alpha-tocopherylacetate Chemical compound CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 description 1
- 244000116484 Inula helenium Species 0.000 description 1
- 241000256602 Isoptera Species 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- 241000833669 Lypha Species 0.000 description 1
- 241000218922 Magnoliophyta Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001230286 Narenga Species 0.000 description 1
- 241000253999 Phasmatodea Species 0.000 description 1
- 244000082204 Phyllostachys viridis Species 0.000 description 1
- 235000015334 Phyllostachys viridis Nutrition 0.000 description 1
- 240000004053 Rorippa indica Species 0.000 description 1
- 241000746413 Spartina Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N Trichloroethylene Chemical compound ClC=C(Cl)Cl XSTXAVWGXDQKEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000000260 Typha latifolia Species 0.000 description 1
- 241000233945 Typhaceae Species 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 241001520823 Zoysia Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011425 bamboo Substances 0.000 description 1
- 101150103518 bar gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000003673 groundwater Substances 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- -1 heme sulfate Chemical class 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 239000010815 organic waste Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 1
- 239000010908 plant waste Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 244000062645 predators Species 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000197 pyrolysis Methods 0.000 description 1
- 238000005067 remediation Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000021749 root development Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 230000011869 shoot development Effects 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 230000030118 somatic embryogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 210000005070 sphincter Anatomy 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 230000009772 tissue formation Effects 0.000 description 1
- 210000002105 tongue Anatomy 0.000 description 1
- 229960002415 trichloroethylene Drugs 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8259—Phytoremediation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B09—DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09C—RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
- B09C1/00—Reclamation of contaminated soil
- B09C1/10—Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes
- B09C1/105—Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes using fungi or plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
- C02F3/32—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the animals or plants used, e.g. algae
- C02F3/327—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the animals or plants used, e.g. algae characterised by animals and plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
- C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
- C12N15/8205—Agrobacterium mediated transformation
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
- Y02W10/00—Technologies for wastewater treatment
- Y02W10/10—Biological treatment of water, waste water, or sewage
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Soil Sciences (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Hydrology & Water Resources (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Description
Arundo donax fenntartható fcofcxpöbens tenyészete
A találmány az Egyszikűek osztályába tartozó növény, az. Arundo donax, nagy mennyiségben történő előállítási eljárására vonatkozik, pontos abban a találmány tárgya, transzgéníkus egyszikű növények előállítási képességével rendelkező klónozott egyszikű növény, az Arundo donax, előállítási eljárása, valamint az eljárással eiöállítött egyszikű növény alkalmazása.
Hagyományosan az egyszikű fajok regenerálható szövettenyészeteit éretlen embriókból vagy éretlen virágzatokból próbálják indukálni, Mindkét módszerről kimutatták, hogy működik TypAa glauoa, 7. angesóirólia és T. latifoiia esetében (Bogéra, D. D, et al., Plánt Cell Reports 18, 71-75 (1998)1, A negyedik északamerikai faj, a T. dorainguensiiS· szövettenyésztéséról még nem számoltak be.
| os< | s k kér Jü.hcüs | faj szővettényeszetét i | |
| ΐ o | arrna | K.S. et al., F | dánt Cell Bep, 17, 656-660 |
| et | al., Aqugtic B< | vtany 68, 239-247 (2000)), | |
| ír | oda lí | aat regenerálna | tő szövettényészetekről a |
| ja | ínak | esetében, az 1 | trianthus gigánteus, a Cype |
| tség | sásai, és a | Scizpus nemzetségbe tartóz |
sem. Az egyszikű fajok (főleg pázsitfűfélék) nagy részének tenyésztett sejtekből történő növényregensráciöját, melyről eddig beszámoltak, kallóséból hajtották végre, ezt egy nagy koncentrá2 dóban alkalmazott; erős auxInnal, úgymint a 2,4~diklőr-fénoxiecetsavval (2,4-G) iníciálták [Conger S.V. et al., 59-68, durrant Issues in klánt molecuiar and Celiular Biology (1995)],
Az egyik egyszikű a .Poaies rend Poaceae (Grumineseí családjánál az Arundo donax L. vagy olasznád, mely az egyik legnagyobb egyszikű a világon, és egy vonzó, erőteljes évelő nád, (Tucker, G. C,.f J. Ar.no.ld Arb. .71, 145-177 (1990) j. Ismeretes, hogy a nagyon erős, némileg fásodé, tömött szárak, melyek a vízszintes csomós gyökértörzsbei nőnek ki, 8-10 méter magasra nőnek, és az átmérőjük 1-4 cm. (Bailey, L.H., Manual ox cultivated plants: Most commonly grown in the Continental United States and Canada, Átdolgozott kiadás, MacMillan, heu York (1954); és Mabberley D,J., The plánt-book; a portable dictionary of the vasoular plants, 2, átdolgozás, Cambridge Univ. Press, Oxford (1997)]. Ez az egyik legnagyobb fűféie, és húsos kúszó gyökértörzsei vannak, melyek egy szilárd tömböt képeznek, amiből szívós rostos gyökerek erednek, melyek mélyen behatolnak a talajba. A szárak általában a növekedés második éve során ágaznak el, üregesek és 2-7 mm-es vastag faluk van.
A növénynek egy sor különböző neve van, ezek közé tartozik a carrizo, bambusznád, dunai nád, donax nád, őriásnád, provanszi nád és spanyolnád, Az A. donax valószínűleg Kelet-Azsia meleg régióinak édesvizeiből származik, évezredek óta termesztik Ázsiában, Észak-lVfrikában és Közép-Keleten, és az utóbbi évszázadban észak- és Dél-Amerlkában, Ausztráliában és Déi-Afrikában is. Az A. donax termesz réséről további információk, találhatóak, például a következő művekben:: Bell S. Ρ,, Eeology and management of Arundo donax, and approaches to riparian habitat restoration ín
Southern California, Plánt invasíons: Studi.es Fzom Horth America and Európa, Brock, J. H. et al,, szerkó 103-113, Sackhuys
Pnblishers·, Leiden (1997); Perdue, R. E., Econ. Bot, 12, 368-404 ‘19581; Fossa B. et al,, Bot. Aeta 111, 216-221 (1398; ; P.oys,
R., Ethnobotany of the Maya: The Department of Míddle American Research, M.A.R, 2. megjelent sorozat, Tulane U., New Orieans {1831·; Tshran, M, A., et ai,, The vegeatien of Tgypt, Chapman & Hali, London (1092); és Zóháfy b,, Plánt Life Palestíné, Rónáid
Press, New York (1962)1.
Az Egyszikűek osztályából származó növények, úgymint az A. donsz, gyakran több célra ís felhasználható növények. Az olasznádat például 5000 éve használják a fúvós hangszereknél, és ez a klarinétok és orgohásípofc nyelvsípjainak forrása, A mai modern technológia ellenére a fafűvős hangszerek nagy részét még mindig az A, donax száraiból készítik.
Az olasznádat az erózió gátlására is használják, és nagy lehetőséget látnak benne, mint energiahordozó növény, (Szabó P. et al,, Anal. AppI. Pyrolysis 36, 179-190 (1996)), A sna-skat horgászbotokhöz, sétabotokhoz, lábtörlőkhöz és valyogházak készitésében rácsozatként alkalmazzák. Az oiasznád az egyik forrása a papír- és müseiyemgyár fásra szolgáló cellulóznak, és más poiiszacharíáok előállításának [Neto, C. P, et al,, Ind, Crops & Prods, 6, 51-56 (1.997)). A papírgyártásra szolgáló rostpép egyik forrásának is tekintik [Perdue Β,, Arundo donax: Bource of Musical Beéds and Industrial Cellulose, www.wuarohive.wust i,edu/docZm1s o/org/doub1e re ed s/gene ra1/ca ne.h t mi,
Az olasznád nagyon gyorsan növekszik. Kedvező körülmények kö zott nem szokatlan a 0,3-0,7 méter/hét mértékű növekedési sebesség több héten át. A fiatal szárak jellemzően a teljes átmérő eléréséig növekednek a kezdeti növekedési időszakban, de a faluk ezután vastagszik meg (lásd ugyanott). A természetes elterjedési területén és a mediterrán területeken kívül azonban a növény .steril; virágzik, de nem hoz életképes termést, Hatékonyan szaporodik vegetatív módon a hajtások és rhizőmák darabjairól (Soose, A. 8, et ai., Weed Rés. 39, 117-127 (1999)]. Az olasznád hagyományos kertészeti szaporítása a rhizőmák feldarabolása. Az oiasznád szaporítása azonban akár a rhizöma feldarabolásával akár a hagyományos magról történő termesztéssel jelentős mennyiségű időt és fáradságot igényel a feldarabolás vagy vetés kezdetétől egy növekedő növény sikeres létrehozásáig. Ezen kívül a szaporítás hagyományos módszerei korlátozott lehetőséget biztosítanak a genetikai manipulációra, és a magok esetében nem teszik lehetővé a létrejövő utódok genetikai szabályozását. Ezek a hagyományos módszerek az üzemanyag vagy biomassza előállítására szolgáló programokban vagy a biológiai helyreállítási programokban felhasználható megfelelő számú növény előállításához nagy terület igényelnek.
Az olasznád az egyetlen egyszikű növény, melynek ilyen sok felhasználási területe van. Akár hangszerként vagy energiaforrásként akár ipari eljárások hasznos közegeként alkalmazva az ilyen fűszerö növények nagyon fontosak.
Következésképpen nagyon hasznos lenne egy olyan eljárás biztosítása, mellyel az Egyszikűek osztályába tartoző növények, és különösen a J'uncus app, , Scírpas spp,, Cyperus spp,, Carer spp. , ^rianthus spp, és lypha spp. növényei szaporithatőak lennének még olyan területeken is> ahol sterilek, ess mindezt olyan módón, mely kevesebb időt, kevesebb fáradságot és kisebb területet igényel, mint a hagyományos módszerek. Pontosabban, hasznos lenne egy olyan eljárást biztosítani, ami a növények jobb genetikai manipulálhatóságát és a növények kontrollálását lehetővé teszi. Ezenkívül, szinten hasznos lenne, ha az eljárás független lenne az évszakoktól és a szaporodás nagy sebessége fenntartható lenne, uöviden tehát a találmány egy új eljárásra vonatkozik egy Egyszikűek osztályába tartozó növény totipotens szövettenyészetének előállítására, mely során a növényből kiválasztunk egy élő szöveti explantátumat, és a szövetet egy primer tápközegen tenyésztjük, hogy totipotens szovettsnyészetet hozzunk létre,
Λ találmány egy új eljárásra is vonatkozik egy Egyszikűek osztályába tartozó növény mikroszaporitásra, mely során a növényből kiválasztunk egy élő szöveti explantátumot, és a szövetet egy primer tápkozegen tenyésztjük, hogy totipotens szövettenyészetet hozzunk létre; a totipotens szövetet egy szekunder tápközegen tenyésztjük, hogy teljes, gyökérrel és hajtással rendelkező fiatal növényeket hozzunk létre; és a fiatal növényeket t a 1 a j fo s n a k k i i ma t i zá I j u k,
Λ találmány egy új Egyszikűek osztályába tartozó növényre is vonatkozik, melyet a fentebb leirt eljárással állítottunk elő.
A találmány egy új transzgénikus, Egyszikűek osztályába tartozó növényre is vonatkozik, melyet a fentebb leírt eljárással állítottunk elő, és továbbá egy heterológ gént vittünk be a t o t ί ρ o t en s sz 0 ve tbe,
A találmány egy új eljárásra is vonatkozik egy környezet6 szennyező anyag el.tévő.1.1 fására szennyvízből, mely során előállítunk legalább 10 olyan növényt, mely azonos genetikai tulajdonSágokkal rendelkezik, a növényeket egy folyékony tápközegbe helyettük; és a növények gyökereit érintkezésbe hoztuk a környezetszennyező anyagot tartalmazó folyékony tápközeggel, ezáltal elérve, hogy a környezetszennyező anyag a folyékony tápközegből, eltávolitődjék,
A találmány egy környezeti szennyezőanyag bioremedíáciöjára ís vonatkozik egy földterületről, mely során előállítunk legalább 10 olyan növényt, mely azonos genetikai tulajdonságokkal rendelkezik, a növényeket egy talajba helyezzük; és a növények gyökereit érintkezésbe hozzuk a környezetszennyező anyaggal a földterületen, ezáltal elérve, hogy a környezetszennyező anyag a földterületről e11avο111őd j é k.
A találmánnyal elérhető különböző előnyök mellett megjegyzendő, hogy a találmány egy olyan eljárást biztosít, mellyel az Egyszikűek osztályába tartózó növények, különösen a Jühcus spp., Scirpus spp. , Cyperns spp,, Carex app., őrienthus spp., és Typha spp.. növényei szapörithstóák lennének akar olyan területekén is, melyeken ezeknek a nemzetségeknek a növényei sterilek. Ez az eljárás oly módon végrehajtható szaporítást biztosit, mely kevesebb időt, kisebb erőfeszítést és kisebb területet igényei, mint a hagyományos módszerek, bz az eljárás biztosítja a jobb genetikai manipulálhatóságot és a növények kontrollálását. Az űj eljárás biztosítja annak a lehetőségét, hogy ezeket a tevékenységeket az évszakoktól és független módon hajtsuk végre, és fenntartható legyen a szaporítás nagy sebessége.
Así ábrák rövid ismertetése
Αχ 1. ábra herbicidrezisztens embriogén szövet kialakulását mutatja be Apróbactérium turnébaölena-szel együtt tenyésztett expiantát untokon (IG. ábra), mely szembeállítható a kontroll explantátumokkai (melyeket nem hoztunk érintkezésbe az A. tumefaciens-szel;, melyeket 10 mg/1 foszfinotriclnnel elpusztítottuk (IA. ábra), és azokkal kontroll explantátumokat, melyek a fosz.finotric.ln távollétében kalluszt fejlesztettek (13, ábra), és olyan együtt tenyésztett explantátumokkai, melyek a foszfinotríein távollétében kalluszt fejlesztettek (IG, ábra).
A 2. ábra egy fényképet mutat be A. donax növényekről hat héttel azután, hogy cserepekbe ültettük, ezek olyan kiónok, melyeket tötipötehs szövettényészetekből á találmány szerinti eljárással növesztettünk.
A 3. ábra (A) növények fényképe hat héttel azután, hogy cserepekbe ültettük, mely növények az A. donax olyan kiönjei, melyeket totipotens szövebtenyészetekből a találmány szerinti eljárással növesztettünk, és (B) standard folyékony hidroponrkus tápközegben növesztett A, donax növények kiterjedt gyökérrendszere .
A 4. ábra a klónozott A, dönax növények alkalmazását mutatja be egy fitoreaktor rendszerben, melyet szerves anyagoktól való megtisztítására alkalmazunk, ahol (A) a növények felső részét mutatja egy fitoreaktor tartályban, melyeket egy standard hidroponíkus tápközegbe szuszpandáltunk, (B) az A. donax növények gyökereit mutatja be, miután 0,25 mM trikiőr-etén oldattal kezeltük, és (C) a kontroli növények levélzetét mutatja; 3-4 hét múlva a kezeit növények gyökerei teljesen heiyreálinak, és úgy tűnik, hogy ugyanolyanok mint a kontroll növények, melyet az (A) és ÍC) ábrán mutatunk bs.
A találmány értelmében felismertük, hogy regenerálható szövetek állíthatok ele az Egyszikűek osztályába tartozó növények szöveteiből, különösen a Pcacoac (pázsitfövek) családjába tartozó Juncus áPP’/ Scsrpss spp«, Cyperus épp., Cárex spp.z Erismtlrás spp,, Typha spp., Cynodon dactyíon, Di gl fari a sangulnalís, Erianthus gigantess, E, striofcus, fbscanfcnrs si.nensis, Paspa.,2» urviiieiy Euölcsm dichotomt;mz 2g$ sp I.z P&s s. 2, Seteria gigántea, Eorghum haiepeese, Spartina a 1 térni.flóra, S. cytosurcióes, J, pectinaca, S, spartinac és S. pátens növények, a Cyperacoae Másfélék) családba tartozó Carex acnta, Carex sp 2, Gypérns esonlentas, Cy, giganfceus, Cy, haspan, Cy, irta, Cy, odcratiis, Cy, pseudcvegotus, Cy, retrorsa, Soirpus acutus, S. americazrás, 5, osl.fáornicrás és S, validus növények,· a Juzraaceas (saittyőfélék) családjába tartozó Juncus ert.igulatu«, J. cc®pres:sys, J. diohotösrás, J, efususy J. roomerianüs és J. fcensis; valamint a Typhaceae (gyékény félék) családjába tartozó Typha angusrifolla, T, domingnensie és T, latifólia növények szöveteiből egy eljárással, ahol szabadföldön vagy üvegházban növesztett virágzás előtti hajtások csúcsain, melyek a fejlődő még nem, kibújt éretlen virágzatot teljesen elfedő harokievelekkel rendelkeznek, és amelyek felszínét sterilizáltuk, a leveleket letépjük, és a virágzatot keresztmetszeti darafooka vágjuk, és ezeket ezután egy szilárd típusú, növényi hormonokat tartalmazó primer tápközegben tenyésztjük, A primer tápközegen több hajtás képződik, de a hajtások nem nyúlnak meg, és igy az eljárás alkalmas totipotens szövettényészét hosszan fartő fenntartására és szaporítására.
M „totipotens kifejezés a leírásban alkalmazva, korlátlan képességet jelent bármely sejttípus előállítására, A totipotens sejteknek megvan az a képességük, hogy a teljesen kifejlődött növényben jelen lévő összes szövetté és szervvé átalakuljanak (specializálódjon). Hás szavakkal, a totipotens sejtek képesek teljes növények k é re gener á1ódn í.
A találmány egy más < tárgya eljárás teljes, gyökerekkel és restben meghosszabbodott hajtásokkal rendelkező fiatal növények regenerálására, mely során a szövetet mikrobajtatással szaporítják egy szilárd típusú növényi hormont tartalmazó szekunder tápközegen .
A találmány egy további tárgya eljárás hajtásnővekedés kiváltására egy szilárd típusú tercier tápközegen, mely nem tartalmaz nővé n y i h ormonokát.
A totipotens szövettenyészet alkalmas idegen gének bevitelére oly módon, hogy a totipotens szöveteket vagy az abból származó f 1 a t a1 növénye ke t Agrobacteriura t ume£ac iens~ sze1 teny éaztjü k együtt, vagy foiolístíc vagy más közvetlen DdS transzfer eljárásokkal heterölóg genetikai anyagot injektálva a totipotens regenerálható szövettenyészetbe. A heterölóg gének növényekbe vagy növényi szövetekbe történő bevitelének végrehajtására alkalmas technikákat Írnak le például Barcelo, P. et ai,, Advanoes ín Sotaníoal Research Incorporating Advances in Plánt Pathology, 34 , 59-126 (2001); Christou Pl, Partidé bomba ráment methods ín cell bíology 50, 375-382 (1995;; Christou, Pl, Fiold Crops: Rés. 45(1-3), 143-151 (1996); és Christou P., Trends in Plánt Sói
1(12), 423-431 (1996).
Általában ez az eljárás a következő lépéseket tartalmazza: A.
kérdéses egyszikű növény élő szövetének egy explantátumát nyerjük ki. Az explanfeátumot olyan tápközegben és körülmények között tenyésztjük, melyben totipotens szövet képződik, A tenyésztést sötétben ís végrehajthatjuk, Az egyik előnyös megvalósítási módban s zöldülést a tenyésztési lépésben létrehozott totipotens szövetben úgy váltjuk ki, hogy a szövetet fénynek tesszük ki, A tenyésztési lépésben létrehozott totipotens szövet ugyanabban a tápközegben és ugyanolyan körülmények között tartható fenn, hogy a totipotens szövet létrejötte folytatódjék, vagy hagyhatjuk, hogy gyökereket és hajtásokat képezzen, A gyökerekkel és hajtásokkal rendelkező regenerálódó szövetet ezután tovább tenyészthetjük hormonmentes tápközegben, hogy meghosszabbodott levelekkel és egészséges gyökérrendszerrel rendelkező fiatal növények fejlődjenek, A fiatal növényeket ezután talajba ültethetjük át, hogy akkiimatizálődjanak. Amikor a csíranövények akkiímatízálodtak a talajhoz, átültethetjük őket bármely kívánt helyre, ide értve a végső beültetés helyét,
Amikor egy egyszikű növényből egy élő szöveti expiantátnmot nyerünk ki a találmány szerinti alkalmazáshoz, a szövet bármilyen forrásból kapott élő szövet lehet. A genetikai anyagot kinyerhetjük egy élő egyszikű növényből, vagy előállíthatjuk szövettenyészetként, vagy bármely a találmány szerinti eljárás egyik lépéséből kapott szövetként,
Amikor az expiantátnmot egy élő egyszikű növényből nyerjük ki, előnyös, ha azt egy éretlen virágzatból vesszük. A találmány szerinti expiantátum kiinduló anyagát például a szabadföldön vagy üvegházban neveit virágzás előtti hajtások csúcsairól nyerhetjük ki, ahol a buroklevelek teljesen bezárják a fejlődő, de π
még nem előbújó éretlen, virágzatot. Úgy találtuk, hogy a virágzás előtti buroklevelek.be zárt éretlen virágzat előnyös, mivel es a többi szöveti forrásnál nagyobb mennyiségű regenerálható szövetet mutat.
Az explantátum tenyésztésre szolgáié előállításához az utolsó kivételével az összes buroklevelet óvatosan kibontjuk, úgy hogy a virágzatot ne fedjük fel. A. hajtáscsúcsokat ezután tisztán tartjuk vagy a felszínén sterilizáljuk, A felszíni sterilizáció egyik módszere, hogy a hajtáscsúcsokat 5-szörősére hígított kereskedelemben kapható fehéritőszer oldatába merítjük 15 percen á.t, mely 10 t.f/tf'% et.an.olt és 0,1% Tween 80 felületaktív anyagot tartalmaz, A hajtáscsúcsokat ezután háromszor steril vízzel leöblítjük a további felhasználás előtt. Az ilyen sterilizáció lecsökkenti vagy megszűnteti a környezetből származó bakteriális s zennyeződést,
A virágzatot ezután kimetsszük az összes buroklevél közül fertőzésmentes körülmények között, és keresztmetszeti darabokra vágjuk vagy szeleteljük, Bármilyen sterilizált éles pengét, kést vagy szikét használhatunk ehhez a lépéshez. A számos merlsztéma régiót tartalmazó fertőzésmentes éretlen, virágzat keresztmetszeti darabokra vágása regenerálható szövet képződését indukálja,
A felvágott virágzat darabjait ezután egy első tenyésztési lépésben tenyésztjük, melyben tótipotens szövet jön létre. Előnyös, ha az első tenyésztést sötétben hajtjuk végre, hozzávetőleg szobahőmérsékleten. Az is előnyös, ha a tenyésztést egy növényi hormonokat tartalmazó szilárd tápközegben hajtjuk, végre. Az első tenyésztési lépés időtartama elegendő hosszú ahhoz, hogy többhajtásos szövet képződése történjen, de hosszabbodás ne for12 dúljon elő, Előnyös ha az eisö tenyésztési lépés körülbelül két héttői körülbelül nyele hétig tart, és még előnyösebb, ha körülbelül négy hétig tart, és ennél is előnyösebb, ha az első tenyésztési lépés négy hétig tart.
Az első tenyésztési lépés előnyös hőmérséklettartománya körülbelül 15°C és körülbelül 3S*C közötti, előnyösebben körülbelül 20 ®C és 30BC. közötti, és ennél is előnyösebben 26eC és 28°C közötti, és még előnyösebben körülbelül zlC.
Az első tenyésztési lépésnél használható tápkozeg a növényi szövettenyészetre szolgáló alaptápközeg lehet. Megfelelő tápközegek közé tartozik például, a korlátozás szándéka nélkül, a DM-8 tápközeg (ahogy lentebb ismertetjük} vagy az MS tápközeg, vagy Gamborg-féle S5 tápközeg teljes vagy 1/2 erősségben. Előnyös, ha a primer tápközeget egy növényi hormonnal egészítjük ki. Megfelelő növényi hormonok közé tartoznak az auainok, úgymint 2,4-diklór-fenozl-ecetsav és a pikloram. Az előnyös megvalósítási módokban ezeket a hormonokat citokininekkeL, úgymint benzil-adenínnel, zeatinnal vagy tidiárutonnái együtt alkalmazhat) ük,
Az első tenyésztési lépés tápközegét például úgy állíthatjuk elő, hogy steril vízhez 4,3 g/i mennyiségben ME (Murashige és Skoog (19751 alapsökat [Sigma Élne Chemicals, St., Louis, MG); 3 ml Miller sőoldatot (€% tőmeg/tf ElLPCy) , 100 mg/1 mioinozitot, 2 ml Vitaminét [Marton és Browse, Alant Ceil Reports 10, 235-239 (1991)), 30 g/1 szacharózt adunk, és növényi növekédésszabályozőfckal, 400 μΜ adenin-bemiszuifáttal, 0,12 mg/Ί píklorammsi, 1 mg/1 indol-3-vajsavval; 0,5 mg/1 2,i-diklőr-fenoní-eeetsavval, 0,5 mg/1 izopentenil-adeninnel, 0,5 mg/1 transz-zeatinnaí, és 3 rng/1 tidiazuronnel egészítjük ki, és 2 g/1 Phyta.gei-~lel (Sigma
Fine Chetd.cals ) megszilárdít jak.
Előnyős, ha egy gélesíthanyagot, mint például Gelian gumit, például Phytageí-t, mely a Sigma CO.-tól (St. Louis, Möj szerezhető be, is alkalmazunk a tápközegben hagyományos mennyiségben. Kevésbé tiszta Cellán helyettesítők, úgymint Gelcarin, agatőt vagy agat is .alkalmazható»
Előnyös, ha az első tenyésztési lépés tápközegének pH-ját 5,8-ra állítjuk be, mielőtt a tápközegot sterilizáljuk. Például a fcápközeget egy nyomás alatti autoklávban sterilizálhatjuk 25 percen át körülbelül 109*C hőmérsékleten körülbelül 35 kPa nyomás mellett,
A meleg tápközeget egy steril Pet,ri-csészébe önthetjük ki, és szobahőmérsékleten hagyjak kihűlni. Λ feldarabolt explantátum anyagot ezután szétoszlatjuk a gélesedett tápközeg felszínén, és a Petri-osészét egy tetővel lefedjük, hogy a sterilitást megőrizzük. A lefedett csészéket ezután olyan helyre tehetjük, mely alkalmas a fentebb tárgyalt hőmérséklet megtartására.
Az is előnyös, ha a tenyésztés alatt álló szövetet sötétben tartjuk az első tenyésztési lépés alatt. Mindemellett alternatívaként a genetikai anyagot folytonos megvilágításnak tehetjük ki az első tenyésztési lépés alatt. Ha. folyamatos meg világi tást alkalmazunk, előnyös, ha annak az intenzitása körülbelül 30-50 pmőlm~2s”x, és izzószáláé és hideg fehér fluoreszcens csövek keveréke ,
Az első tenyésztési lépés alatt több hajtás kialakulása történik meg a szétdaraboit explantátumszövetből jelentős hajtáshosszabbodás nélkül, A tenyészet ebben az időpontban toripotens szövetet tartalmaz (mélyre a leírásban tötipotens, vagy regenerálható szövettenyészetként hivatkozunk} <. A totipotens szövet kis csoportjait ezután friss tápközegre vihetjük át, hogy még több hajtást hozzunk létre, vagy hormonmentes: tápközegre tehetjük gyökérrendszer és meghosszabbodott levelek kifejlődése céljából. Tehát a totipotens szövetet a genetikai anyag hosszan tartó fenntartására es szaporitására szolgáló regenerálható forrás kén t a1kaIma zhatjuk.
Az egyik előnyös megvalósítási módbán az első tenyésztési lépésben előállított etiolált, sötétben növesztett szövet zöldülését fénynél körülbelül két vagy három napon beiül beindíthatjuk egy szobában mesterséges megvilágításnál tenyésztve.
Az első tenyésztési lépés befejezése után a totipotens szövet egy második tenyésztési lépésben tenyészthető, melyben a hajtás sokszorozódása folytatódik és teljes növénykék jönnek létre. A második tenyésztési lépésben felhasználható tápközeg a Dd-5 tápközeg lehet (melyét lentebb ismertetünk) , vagy egy növényi szővettenyészeti alaptápközeg, úgymint MS vagy Gamborg-féle 85 tápközeg, teljes vagy feles erősségben. Előnyős, ha tápközeget egy növényi hormonnal egészítjük ki, és még előnyösebb, ha a növényi hormon olyan koncentrációban váh jelen, mely alacsonyabb, mint amit az első tápközegben alkalmazunk. AE alkalmazható növényi hormonok közé tartoznak például a cif okíninek, úgymint benzíladenln, zeatin és tidíazuron. Előnyösen a hormon tídiazuron,
Az egyik példában a második tenyésztési lépés tápközegét úgy állítjuk elő, hogy steril vízhez körülbelül 0,01-1 mg/1, előnyösen körülbelül 0,02 mg/1 eítokínint, úgymint tidíazuront, 30 g/1 szacharózt, és körülbelül 3 mi Miller söoldatot (6 tömeg/tfl
KH-jűOd adunk. A tápkőzeget gélesíthetjük és sterilizálhat juk a primer feápköregnél leírt módon.
Az első tenyésztési .lépésből származó totipotens szövetet ezután a szekunder tápközeg inokulálására alkalmazhatjuk. Az írnokaIáit szekunder tenyésztő tápközeget ezután sötétben vagy folyamatos fény mellett, körülbelül szobahőmérsékleten, körülbelül egy hét és körülbelül négy hét közötti ideig tenyésztjük. A második tenyésztés után a tenyészet gyökerekkel és részben meghosszabbodott hajtásokkal rendelkező teljes fiatal növényeket fog tartalmazni.
Ezen a ponton a csiranövényeket vagy közvetlenül talajba visszük át, hogy akklimatizáiödjanak, vagy egy harmadik tenyésztési lépésben tenyészthetjük, hogy lehetővé tegyük a hajtás meghosszabbodását, mielőtt átvinnénk a talajba.
Előnyös, ha a csiranövényeket egy tercier tápközegbe helyezzük, mely hasonló a második tenyésztési lépésben alkalmazott tápközeghez, de nincsenek benne növényi hormonok. A harmadik tenyésztési lépést lényegében szobahőmérsékleten hajtjuk végre, és körülbelül négy hét alatt.
A fiatal növényeket ezután a tercier tápközegből talajba visszük át, hogy akklimatizáiödjanak, /űrikor a fiatal növények hozzászoktak a talajhoz, átültethetjük éket bármely kívánt helyre, ide értve a végső elültetésük helyét is.
Az egyszikű növények olyan fajokból állnak, melyeknek számos különböző módon felhasználhatóak, és közülük egyesek kereskedelmi szempontból is jelentősek, Az oiasznád (A, donna A. i például rendkívüli növekedési sebességgel, rendelkezik, ami eléri a 6,3 tő cm-t naponta, és a levágása után gyorsan regenerálód!k, Az A.
donax több mint 4 méteres magasságot ér el kevesebb mint egy tenyessIdőszak alatt. Ezt a növekedési sebességet egy szokatlanul nagy fotoszintetikus kapacitás (a maximális fotoszintetikus Cég felvétel 19,8 és 36,7 pmől ms';s; között van), és nagyon nagy vízfelhasználás (2000 i/raő á lábonálló A donax-nál) tartja fenn. Az A. donax hektáronként a földfeletti biomassza 100 tonnáig terjedő mennyiségét képes előállítani. Észak-Amerikában és egyéb helyeken tiszta állományokat képez, mert természetes predátorai és kompeptitorai nincsenek. Nem szolgál lakóhelyül vagy táplálékul a vadon élő állatok számára, mivel olyan kémiai anyagokat tartalmaz, amik megvédik a rovarokkal és legelő állatokkal szemben, Képes vízben növekedni, és oxidálni tudja a azulfidokat és redukálni tudja a nehézfém-ionokat oxigént kibocsátva az anaerob szerves üledékbe, A kúszó gyökértörzs rostos gyökerei 4,9 m mélyig lehatolnak a homokba. Az á, donax jól fejlődik lúgos és savas körülmények között is, mérsékelt talajvízben és pH-függö módon abszorbeálja a nehézfémeket,
Az A. dönaxöf mát régóta alkalmazzák mézogazdáságí hulladékok kezelésére (más fajokkal együtt) és városi szennyvíz kezeiéséré szolgálő mocsaras területek létrehozására. Az A. donax tenyésztésének és regenerálásának képessége lehetővé teszi majd a genetikai transzformáció alkalmazását ennél a fajnál. így lehetővé válhat olyan transzgéníkus variánsok létrehozása, melyek például megnövekedett fítorémediácíös képességgel rendelkeznek.
A találmány egyik előnye, hogy képesek vagyunk arra, hogy éretlen virágzatokból nagy gyakorisággal növényregenerácíót kapjunk, Fenntartható többhajtásos tenyészeteket hoztunk létre olasznádbői, ahol a hajtás meghosszabbodását és a gyökérképződést a szintetikus tenyésatöközegban .lévő növényi .növekedésszabályozók típusa éa koncentrációja szabályozza. Az in vitro növesztett fiatal növényeket könnyen áttelepíthetjuk talajba,
Továbbá ágy véljük, hogy a hatékonyan termelt növényi klánokat tudományos kutatásokra ís felhasználhatjuk a fiziológia és a genetika területén. Az egyszikűek szövetei az in vitro szaporítás különböző stádiumaiban alkalmasak Idegen gének bevitelére. Az ilyen genetikai módosítások után lehetséges a teljes transzgénikus növények regenerálásai majd a transzgénikus egyebek kiónális szaporítása ezzel az eljárással. Ezek a hatékony ipari méretű mlkroszaporítási technikák lehetővé fogják tenni, hogy az &, donax genetikailag módosított kiónjai nagy számban hozzáférhetőek legyenek az ipari alkalmazások, úgymint a fítoremediácíós technológiák számára szabadföldön vagy b i o r eak t o r o kb a n.
A következő példák á találmány előnyös megvalósítási módjait írják ie. Az igénypontok oltalmi körébe eső egyéb megvalósítási módok szakember számára nyilvánvalóak a találmány itt ismertetett leírását vagy gyakorlati megvalósítását figyelembe véve. A leírás és a példák, csak a szemléltetés célját kivánják szolgálni, a taiáimány oltalmi körét és lényegét a példákat követő igénypontokban megjelölve. A példákban az összes százalékot, tömegszázaiákban adjuk meg, hacsak másképp nem jelezzük.
Ez a példa a teljes A. donsx fiatal növények képződését mutatja be a kimetszett szövetből, és a különböző tápközegek hatását mutatja be a hajtás- és gyökérrejlődésre.
Fejlődő virágzattal rendelkező hajtáscsúcs dudorokat gyűjtöttünk az olasznád egy nagyméretű betelepített paroellájárói az Egyesült Államok dél kelti részéről augusztusban . Egy kivételével az összes burokievelet óvatosan kibontjuk, úgy hogy a virágzat ne látsződjék. A hajtáscsúcsokat higany-kioríd és 0,1% Tween 80 felületaktív anyag oldatában 15 percig rázva fertőtlenítettük, A hajtáscsúcsokat háromszor steril vízzel leöblítettük. Az éretlen virágzatokat kimetszettük, feldaraboltuk és DM--8 vagy ΙΙχ-S tápközegre helyeztük sötétbe vagy folytonosan megvilágítva (izzószálas és fluoreszcens csövek keverékével, összeállított 30-50 úrnői m'^s1 fénybe - Sylvana and Power Twist Víta-Lite 40 W) 2628s€~ra.
A kalluszt minden negyedik hétben új tenyészetbe helyeztük a fennmaradáshoz. A regenerálódott és a meggyökeresedett növényeket elkülönítettük, üvegházban cserepekbe ültettük, és először műanyag burával lefedve tartottuk, hogy elősegítsük az akklímati záciot ..
A DM-8 tápközeg 4,3: g/i ME (Murashige és Skeog, 1.975) alapsökat (Sigma Fine Chemicals!, 3 ml Miller sőoldatot (0 tömeg/tf KrbPöd ; 100 mg/1 mioínozítot, 2 ml Vitamixet (Marton és Browse, 1991); 30 g/l szacharózt tartalmazott, az összes alkotórészt vízbe keverve, és növényi növekedésszabályozőkkal, Se mg/1 adenin-hemíszulfáttal, 0,12 mg/1 piklorammal, I mg/1 indol-3vajsavval, 0,5 mg/i 2, 4-dikiőr-fenoxi-ecetsavval; 0,5 mg/i ízöpentení1-adenínneI; 0,5 mg/i transz-zeatínnal, és 3 mg/1 tidiaznrcnnai egészítettük ki; és 2 g/i Pbytagei-lel (Sígma Fíne erteals a egs_.. l-.ra . t,
A DM-3 tápközeg csak a övény.i növekedésszabályozókban külön19 hözött, melyek a következők voltak: 10 mg/1 edenin-hemíszaifát; 0,2 mg/i 2,4-dí klör-fenoxi-ecetsav, 0,1 μ.Μ tioiazuron,
A OM-S 4,3 g/1 MS sókat, 80 g/1 szacharózt, 0,1 |íM.
t i d i a z u r o n.t t a r t a 1 ma z o 1t,
A hormonmentes tápközeg ugyanolyan volt, mint a DM-S, csak tídiazuron nélkül.
A Πι-S tápközeg 4,3 g/1 MS alapsókat; 200 mg/i ÍWhWt, 3 ml Miller sóoldatot, 200 mg/1 míolnozitot, 2: ml Vitamixet, 200 mg/1 A-glutamlnt; 30 g/1 szacharózt tartalmazott steril vízbe keverve, 1 mg/i 2,4-dlklór···fenoxi-eoetsav növényi növekedési szabályozóval kiegészítve; és 2 g/1 agarrai (granulált, Fisher Scíentífic, Fair haon, MO) megszilárdl iva.
Az összes szövetenyészet közeg ph-ját 5,8-xa állítottuk be a nyomás alatt tartott antoklávban 109 bO-on, 35 kPa nyomáson, 25 percig végzett sterílezés.
A.z éretlen virágzatot tartalmazó steril hajtáscsúcsokat kis keresztmetszeti darabokra (1-3 πω) vágtuk, és két különböző tápközegbe - ΙΧχ-S-be és DM-8-ba helyeztük. A harmadik-negyedik héten kallusz képződött a kocsányok és a virágtengely darabok csúcsain, és a vírágóarabokből (lásd az 1A. ábrát) < A II-,-S tápközegen lévő kallasz fehér és többé-kevésbé áttetsző volt, a differenciácíó jelel nélkül, és ezt nem vizsgáltuk a továbbiakban. A DM-8 tápközegen lévő kellesz fehér és többé-kevésbé áttetsző volt, kezdetbe:; hajtások nélkül, de már látszottak a differenelácíő jelei és a halvány sárgás szín. A DM-θ tápközegen, etiolált hajtások alakultak ki a primer kai löszből sötétben, ha az eredeti tápközegben hagytuk 4-6 héten át. A virágokból gyakran kibújtak a hajtások. Úgy tűnt, hogy a regeneráció módja sok hajtás képződése volt a sok. merisztémából, melyet mikrobaj tásképzödés követett.
A hajtások két nappal a friss hajtásregenerációs (DM-S) tápközegbe történő átvitel után váltak zölddé fénynél. A hajtásdiffereneiáció egy Időben haladt a zöld, regenerálódott kaliusz proliferáciöjával. A szubkultúrában növesztett kallusz a hajtássá alakulás különböző: tokait mutatta.
Érdekes módon, a hajtásregenerációs tápközeget alkalmazhattuk a hajtásszaporitáshoz valamint a teljes növény létrehozásához Is. A hajtások kis csoportjai, miután friss tápközegre helyeztük, még több hajtást hoztak létre, és egy hónapon belül további szétdarabolásra volt szükség. Sok hajtás 2 cm feletti hosszúságra nyúlt, és gyökereket fejlesztett {lásd az 1. táblázatot), tálcánként 70-90 hajtást eredményezve. A hajtásproliferáoló sebessége ugyanakkora maradt az egymásra következő szubkultűrás tenyésztési ciklusok után.
A hajtásmeghosszabfeodás változó volt, és a meghosszabbodott hajtásokat olyan sokszor el kellett különíteni, hogy már nem volt kényelmes Petri-csészében fenntartani az alfcenyészeteket. A regenerálódó szövetet két frakcióra osztottuk: meghosszabbodó hajtások és Induló hajtások.
I, táblázat: a tápközeg hatása a hajtásregeneráeiőra ós a hajtások gyökeresedésére: (Átlag ± SS (n-5) } ,
| Tápközeg | meghosszabbodott hajtások : száma / g szövet | gyökeres hajtások százaléka. |
| DM-8 | 19,6 ± 2,2 | 53 1 2,4 |
| DM-5 | 21,8 ± 2,3 | 71 ± 5,7 |
| DM-3 fényben | », 4 ± 1,2 | 56 i 3,5 |
A. meghosszabbodó hajtásosoportokat DM-5 tápközegbe tettük át Magen t a -1 á dá kba a 1 a c sony o it o k i.ni n (fc 1 di a ζ uron) s z i n fc me 11 e fct f ahol a hajtásproiíferáeiő folytatódott, A DM-5 hajtásproliferáoiós tápközeget alkalmaztuk a hajtás megsokszorozásához és a teljes növények létrehozására. Mint a 0Μ~8 tápköregnél, a kis hajtáscsoportok jöttek létre több hajtással a friss tápközegbe való átvitel után. A legtöbb meghosszabbodott hajtás 5 cr. feletti hosszúságú volt, és gyökereket fejlesztett (lásd az 1« táblázatot!, mely 80-100 hajtást eredményezett Magenta ládákként, A hajtásproliferacíó sebességé ugyanolyan maradt a szubkultúrák egymást követő körei után is. A regenerálódó kal.lusz.bol elkülönített teljes fiatal növények vagy hajtásos©portok egy egészséges gyökérrendszert és meghosszabbodott leveleket fejlesztettek a hormonmentes tápközegben. Magenta ládákban.
A DM-8 tápközegbol az induló hajtásokkal rendelkező szövetek frakcióját alacsony oitokin-színtű DM-3 tápközegben tenyésztettük tovább vagy sötétben vagy fényben. A DM-3 tápközegen a kallusz fénynél zöld volt, és teljésen beborították a rövid hajtások., és megtartotta eredeti regenerációs képességét legalább 18 hónapon át.. A hajtások nagy része nem hosszabbodott meg, de tovább szaporodott (lásd az 1. táblázatot). Ugyanezt a tápközeget alkalmazhatjuk a regenerálódó kallusz fenntartására sötétben. A kallusz halványsárga sötétben, és a hajtássokszorozédás domináns .a meghosszabbodással szemben <1, táblázat) ,
A DM-3 tápközeg sötétben tehát lehetővé teszi hogy hosszú roeag regenerálódó: kallusz tenyészettei rendelkezzünk, és elkerülhető, hogy a regenerálódó kallusz teljesen átalakuljon hajtásokká. A hajtásregeneráció könnyen végrehajtható úgy, hogy a kaiiusz részeit DM-8, DM-5 vagy hormonment.es tápközegbe visszük át. 200 feletti növényegyedet hoztunk létre, és nehézségek nélkül no.velő-kamra körülmények között növesztettük.
Szomatikus embriókat nem műtátkunk ki ezekben az Á, donax tenyészetekben az alkalmazott körülmények között. Anélkül, hogy ragaszkodni kívánnánk ehhez vagy bármely más elmélethez, feltété lestük, hogy az egypólusú hajtásmerísetémék szerveződése a szomatikus embriók teljes kifejlődés előtt a tűi korai csírázásnak az eredménye a pázsitfűfélékben, melyekre jellemző, hogy a regeneráció kizárólag szomatikus embríogenezissel fordul elő. hasd például Özíss-Akins, F, et ai., Frotoplasma 110, 417-420 (1982). Mindemellett a példák azt sejtetik, hogy a töfobbajtásos tenyészetek nagy mennyiségben képesek klánokat, előállítani
Ez a példa teljes fiatal növények előállítását mutatja be a kimetszett A. donax sejtszövetből.
Fejlődő virágzattal rendelkező hajtáscsúcs dudorokat gyűjtöttünk az olasznád egy nagyméretű betelepített parcellájáról. Egy kivételével az összes buroklevelet óvatosan kibontottuk, úgy hogy a virágzat ne látszódjék ki, A hajtáscsúcsokat 5-szörösére hígított kereskedelmi forgalomban beszerezhető, 10% (tf/tf; eta~ nőit és 0,1 töziog/tfl Tcesn 30~t tartalmazó fehérítőoldatban 15 percig rázva fertőtlenítettük. A hajtáscsúcsokat háromszor steril vízzel leöblítettük.
Az éretlen virágzatokat kimetszettük., feldaraboltuk és primer szilárd tenyésztöközegre helyeztük, mely 4300 mg/l MS (Murashige és Skoog (1975)) alapsókat, 3 ml Miller sőoldutot (őtömeg/tfi
KlbPQu), löö mg/I mioinozitot, 2 mi Vltaaixet [Márton and Srouse ¢1991) 1, 30009 my/i szacharózt tartalmazottf mély növényi nővekedésszabályozokkal, 80 mg/1 adeninnel, 0, 2 mg/i 2,4-dikiörfenoui-ecetsavvai, 0,1 mg/i tid.iazuron.nal volt kiegészítve, és 2000 mg/Ί Cellán gumival (Fhytagel márkájú a Sigma Finn Chemicals-tői) megszilárdítottuk. A primer expiantátumoc sötétben ínkubáltűk 2 5°Ό-οη négy héten át.
A harmadik-negyedik héten kaiiusz képződött a kocsányok és a virágtengely-darahok csúcsain., és a virágáérabokból. A kaiiusz fehér és többé-kevésbé áttetsző volt, először hajtások nélkül, de rövidesen a differenciáció jeleit mutatta, és halvány sárgás színű lett. Ez a regenerálödő szövettenyészet legalább három éven át fenntartható szubkultúrákat létrehozva minden negyedik héten a primer tenyésztoközegben sötétben.
A hajtások két nappal azután, hogy a hajtásregeneráciőhoz és szaporodáshoz szekunder tápközegre helyeztük és megvilágítottuk, zöldek lettek. Folyamatos megvilágítást alkalmaztunk (30-50 gmői mPs1; izzószálas és hideg fehér fluoreszcens csövek keveréke, Sylvans and Fcwer-Tuíst Vita-hite, 4 0 M) 25°C~on, A hajtásdifferenciáció a zöld regenerálódó kaiiusz proliferáciöjávai egyidőben folytatódott. A szubkultúrában tenyésztett kaiiusz a hajtássá alakulás különböző fokozatait mutatta .
A szekunder tápközeg 4300 mg/1 MS (Murashige és Skoog , 1975) alapsókat (Sigma Fine Chemicals), Miller féle söoidatot (6 tömeg/tft Ki-pPOh , 30 000 mg/i szacharózt tartalmazott, és 0,02 mg/1 tidíazuron növényi hormonnal volt kiegészítve, és 2 g/i Phytagei-iel (Sigma Fine Chemicals) megszílárdítva,
A kis növényeket és a sok hajtásból álló csomókat tercier tenyésztöközegbe vittük át, mely a szekunder tápközegtől csak abban különbözött, hogy nem tartalmazott hormonokat.
A meghosszabbodott és kigyökeresedett növényeket szétválasztottuk, üvegkárban cserepekbe ültettük, és először műanyag búra alatt tartottuk S napon át, hogy elősegítsük az akklimatírációjukat, A 2, ábra növények fényképét mutatja (A; hat héttel azután, hogy cserépben lévő földbe vittük át. A bemutatott növények az A. donax klönjaí, melyeket a találmány szerinti módszerrel növesztettünk a totipotens szövettenyészet szövetéből. A 3. ábra íA) ugyanazokat a hathetes növényeket mutatja, melyeket a 2, ábrán bemutattunk, együtt bemutatva ίβ) az ,á. donax egy folyékony hidroponíkus tápközegben növesztett nagyméretű: gyökérrecésserével, hegy hét elteltével a hajtásképzödés megfigyelésének eredményeit a 2, táblázatban mutatjuk be.
2. táblázat: A tápközegek hatása a hajtásregenerációra és a hajtások gyökérképzésére fát iag á SE fn~S)}.
| Tápközeg | meghosszabbodott haj tások száma / g szövet | gyökeres hajtások százaléka |
| Primer | 8,4 1 1,2 | 56 ± 3,5 |
| Szekunder | 21,ö ± 2,3 | 71 ± 5,7 |
A táblázatból látható, hogy a szövettsnyészetből kialakult hajtások száma és azoknak a hajtásoknak a száma, melyek gyökeret fejlesztettek, megnőtt miután a primer tápkőzegböl a szekunder tápközegbe helyeztük át.
Ez a példa egy heterológ gén bevitelét és expresszióját mu tatja be A. donax szövetbe a találmány szerinti eljárással.
As éretlen A. donax virágzat keresztmetszeti darabjait a 2, példában leírtak szerint preparáltuk ki, és tenyésztettük. A totipotens szövetet a pM5F3022 plazmádat hordozó Apróbaoterium tumefaoíens-azei együtt tenyésztettük, ahol a plazmád a növényi sejtekben történő pozitív szelekciót szolgáló bar gént hordozta. A gén a íoszfinotrícin antibiotikummai/herbiciddel szemben biztosi t re z i s ztenci át.
Az együttes tenyésztést 6 ml folyékony primer tenyésztőközegben hajtottuk végre négy napon át, sötétben, szobahőmérsékleten« Az expiantácuraokat ezután folyékony tápközeggel leöblítettük, és szilárd 10 mg/1 foszfInotrícin antibiotikumot/herbícidet tartalmazó szelektív és nem szelektív kontroll tépközegbe helyeztük. Mindegyik tápközeg 400 mg/ml tidaroiliint tartalmazott a maradék A. tumefacíens megsemmisítésére. Á kontrollok A. tumefaciens nélkül inkubált explantátumokat tartalmaztak. A géntranszfer hatásosságát (és az expresszié bizonyítékát) az 1. ábrán láthatjuk, ami herbicídrezísztens embríogén szövet kialakulását mutatja az Agrobseter.íam tumefscíens-szel együtt tenyésztett explantátumokoü (IC. ábra), Sz szembe állítható á kontroll növényekkel (melyeket nem hoztunk érintkezésbe A. tumefaoiens-szel), melyeket a 10 mg/1 foszfinotrioin elpusztított (1A. ábra). Szintén bemutatjuk azokat a kontroll explantátumokat, melyek kailuszt alakítottak ki a foszfinotricín távoliétében (IB. ábra), és azokat az együtt tenyésztett explanfatomokat, melyek kalluszt alakítottak ki a íoszfinotrícin távoliétében (ID. ábra).
Arra a következtetésre jutottunk, hogy megtörtént egy heterológ gén bevitele a totipotens szövetbe, és a gén a totipotens szövetből termelődött klónozott növényekben sxpresszálódétt.
Sz a példa az· A. donax ,L. ki óhoz ott nő vény einek működését mutatja be egy fítoreaktorban, szerves hulladékanyagok kitisztítására vízből,
A. donax hosszantartó totipotens tenyészeteit növesztettük a
2. példában leírt módon, és a totipotens szövetből származó klónozott növényeket egy standard folyékony hídroponikus oldatba telepítettük műanyag csövekbe (bemutatva a 4A. ábrán), Egy fítoreakf.orcsőbe triklőr-etént (triklőr-etílént) adtunk 0,25 mM koncentrációban, ügy gondoltuk, hogy- ez a szerves anyag magas koncentrációját képviseli, mivel a megengedett E2A koncentráció 0,005 mg/ml,
A 4, ábra a klónozott A. donax növények alkalmazását mutatja be a fitoreaktor rendszerben, ahol (A) a növények felső részét mutatja be á fitoreaktor tartályban egy standard hidroponikus tápközegbe szuszpenda..va, (B) az A. donax növények gyökereit mutatja be, miután 0,25 mb iríkiör-etén oldattal kezeltük, és (C) a kzxntrolinövények leveleit mutatja be. Egy 3-4 hetes helyreállítási időszak után a kezeit növények gyökerei teljesen helyreálltak, és ugyanolyannak tűntek, mint az (A) ábrán bemutatott kontroll növények.
Azt gondoljuk, hogy ez annak a ölzonyitékát mutatja, hogy a klónozott A, donax növények képesek a fítoreaktorokban a szennyvizek remediációját biztosítani..
Az összes leírásban felhozott irodalmi hivatkozás, ide értve a korlátozás szándéka nélkül az összes dokumentumot, pufoiikációt, szabadalmi leírást, szabadalmi bejelentést, bemutatást, szövegeket, beszámolókat, kézi.tatokat, brosúrákat, könyveket, Interneten megjelenő Ismereteket, folyóirat cikkeket, időszaki kiadványokat és hasonlónkat, referenciaként a leírásba épül teljes terjedelmében. A hívathozások ismertetését a leírásban csupán a szerzőik által tett állítások összefoglalásának szánjuk, és nem annak elismerésére, hogy bármely hivatkozás a technika állását képezné. Fenntartjuk azon jogunkat, hogy a felhozott hivatkozások hitelességét és helytállóságát kétségbe vonjuk.
A fentieket figyelembe véve látható, hogy a találmány különböző előnyeit érjük el, és más előnyös eredményeket is kaphatunk.
Mivel, különböző változtatásokat tehetünk a fenti eljárásokban és készítményekben anélkül, hogy a találmány oltalmi körétől eltérnénk, az összes fenti leírásban lévő és a csatolt ábrákon bemutatott anyag úgy értelmezendő, hogy a szemléltetést szolgálja nem korlátozó értelemben.
Claims (22)
1, Eljárás az Arundo donax fenntartható totípötens embriogén szövettenyészetének, és a kapott szövettenyészetből gyökerekkel és hajtásokkal rendelkező növénykék előállítására., aszal jellemezve, hogy az alábbi eljárási lépéseket foglalja magában:
(la) a növényből, elkülönítünk egy elő szöveti expiantátumot;
(Ih) a szövetet egy szilárd vagy folyékony, 3 különböző auxint és 3 különböző citoklnlnt tartalmazó primer tápközegen tenyésztjük, .így fenntartható totipotsns embriogén szövettenyészetet kapunk; és (le) a fenntartható totípotens embriogén szövet tenyészetet átvisszúk egy friss szilárd vagy folyékony, az (lo) lépésnél alkalmazottéval azonos összetételű, primer tápközegre, így tartjuk a fenntarhatő totípotens embriogén szővettenyészetet és a fenntartható totípotens embriogén szövettenyészet egy részéből gyökerekkel és hajtásokkal rendelkező növénykéket /fiatal növények/ tenyésztünk,
2, Az 1, igénypont szerinti eljárás, amely magában foglalja az 1. igénypont szerinti (Ib) lépésből a fenntartható totípotens embriogén szövettenyészet vagy az (le) lépés szerint tartott fenntartható totípotens embriogén szövettenyészet átvitelét egy további szilárd vagy folyékony egy auxint és egy citoklnlnt tartalmazó primer tápközegre, így tartjuk a fenntartható totípotens embriogén szövettenyészetet és ezáltal az (Ib) vagy (lej lépés szerinti fenntartható embriogén szövettenyészet egy részéből az I. .igénypont szerinti szilárd vagy folyékony tápközegen tartott fenntartható totípotens embriogén szövettenyészetből keletkezett hajtásokhoz képest kevesebb megnyúlt hajtású növénykéket tenyésztünk.
3. Az 1, vagy z. igénypont szerinti eljárás, amely magában f og.i.a.1 j a az 1. igénypont szerinti (lb> lépésből a fenntartható totipotens em.brfogén szövettenyészet, vagy az (ic) lépés szerint tartott fenntartható totipotens embriogén szövettenyészet, vagy a 2. igénypont szerint tartott fenntartható totipotens embriogén szövettenyészet átvitelét egy szilárd vagy folyékony citokinint tartalmazó szekunder; tápközegre, igy tartjuk a fenntartható totipotens embríogén szövettenyészetet ás ezáltal az 1, igénypont szerinti (ib) lépés, 1. igénypont szerinti (1c) lépés vagy 2. igénypont szerinti fenntartható totipotens embriogén szövettenyészet egy részéből gyökerekkel és hajtásokkal rendelkező növénykéket tenyésztünk, amelyek gyökerekkel rendelkező hajtásainak százaléka nagyobb az 1. vagy 2. igénypont szerinti szilárd vagy folyékony tápközegen tartott fenntartható totipotens embriogén szövettenyészethez hasonlítva.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tenyésztési lépést sötétben hajtjuk végre miáltal fenntartható totipotens embriogén szövettenyészetet állítunk elő, amelyet fcizöi™ dőlésre tovább tenyésztünk világosban az átviteli lépés előtt.
5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a növénykéket tenyésztés céljából, egy tercier tápközegre visszük át, amely hozzáadott ncvényx hormonoktól mentes, és amsiy elősegíti a hajtás megnyúlását.
6. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az explantátum virágzatot tartalmaz.
7. Áz előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az explantátum éretlen virágzat.
8. Áz előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a primer tápközeg három auxinja a 2,4™bíklór~ -fenoxi-ecetsav, piklorám és indol-vajsav, és a primer tápközeg három citokininje a tidiázuron, izöpentil-adenin ás transz~zentin.
9» A 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a növényi hormonok az alábbi koncentrációban vannak jelen: a 2,4••diklőr-fenoxi-ecetsav 0,5 mg/1? az indol-vajsav 1,0 mg/i; a piklorám 0,12 mg/1; as izopentil-ádenin 0,5 mg/1; a transz-zeatin 0,5 mg/i; és a tidiázuron .3 mg/i koncentrációban.
10, A 2. igénypont szerinti eljárás, ahol a tápközeg anxinja 2,4-díklőr-fenoxi-ecetsav és a tápközeg citokininje tidiázuron, továbbá ahol adott esetben a tápközeg további adenin-hemiszulfát növekedés szabályozót tartalmaz,
11, A lö, igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a 2,á-diklőr-fenoxi-ecetsav 0,2 mg/1; a tidiázuron 0,1 pH és az adenin-hémiszulfát 10 mg/1 koncentrációban van jelen,
12, A. 3, igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szekunder tápközeg citokinínjét az alábbiak által alkotott csoportból választjuk: tidiázuron, zesiin vagy benzíl-adenin és esek bármely kombinációja:,
13, A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a szekunder tápközeg citokininkénc tidiazuront tartalmaz.
14, A 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tidiázuron 0,02 mg/1 koncentrációban van jelen.
1.5« Az előző igénypontok, bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy egy heterolőg gént viszünk, be az explantáturnba vagy a fenntartható totipotens embriogén szövettenyészetbe.
16. A. 15, igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a heterolőg gén bevitelét ögy valósítjuk meg, hogy a fenntartható totipotens embriogén szövettenyészetet Agrro&aeterium tumefaoiens-szel tenyésztjük együtt, ami a nevezett gén átvitelét eredményezi az A. turnéba ciens-teöi a fenntartható totipotens embr i ogén szőve t tényés z etbe.
17. A 16. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a totipotens szövet és az Apróbaefeerium tusefaciens együttes tenyésztésének időtartama körülbelül négy nap.
18. A 15-17. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a heterolőg gén bevitelét DNS-transzferrel hajtjuk végre»
19. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a növénykéket talajban akklimatizáljuk.
20. Az 1-19. igénypontok bármelyike: szerinti eljárással előállított transzgénlküs növénykék alkalmazása fitoremedlációra.
21. A 20. Igénypont szerinti alkalmazás, ahol a fitoremediéciót fitoreaklórban végezzük.
22. A 20. vagy 21. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy legalább 10, azonos genetikai tulajdonságokkal rendelkező növényt folyékony tápközegbe helyezünk; és a növények gyökerét egy környezetszennyező anyagot tartalmazó folyékony közeggel hozzuk érintkezésbe.
23. A 20. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy legalább 10, azonos genetikai tulajdonságokkal rendelkező növényt talajba helyezünk; és a növények gyökerét egy környezetszennyező anyagot tartalmazó földterülettel hozzuk érintkezésbe.
na
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US26606701P | 2001-02-05 | 2001-02-05 | |
| US60/266,067 | 2001-02-05 | ||
| PCT/US2002/003494 WO2002063024A2 (en) | 2001-02-05 | 2002-02-05 | Sustained totipotent culture of selected monocot genera |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0500786A2 HUP0500786A2 (en) | 2006-05-29 |
| HUP0500786A3 HUP0500786A3 (en) | 2007-05-29 |
| HU230318B1 true HU230318B1 (hu) | 2016-01-28 |
Family
ID=23013023
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0500786A HU230318B1 (hu) | 2001-02-05 | 2002-02-05 | Arundo donax fenntartható totipotens tenyészete |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6821782B2 (hu) |
| HU (1) | HU230318B1 (hu) |
| WO (1) | WO2002063024A2 (hu) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7052912B1 (en) * | 2001-01-04 | 2006-05-30 | Woods Susan H | Methods and apparatus for the micro- and macropropagation of reed grasses |
| US6821782B2 (en) | 2001-02-05 | 2004-11-23 | University Of South Carolina Research Foundation | Sustained totipotent culture of selected monocot genera |
| EP2150100B1 (en) * | 2007-05-07 | 2012-07-11 | University of South Carolina | Method for micropropagation of monocots based on sustained totipotent cell cultures |
| US7863046B2 (en) * | 2007-05-07 | 2011-01-04 | The University Of South Carolina | Method for micropropagation of monocots based on sustained totipotent cell cultures |
| BR122018017045B1 (pt) * | 2008-05-23 | 2019-10-22 | Syngenta Participations Ag | método para identificar embriões haplóides |
| BR112012002983A2 (pt) | 2009-08-13 | 2016-04-19 | Treefree Biomass Solutions Inc | métodos para propagação vegetativa e plantas grama. |
| US9055721B2 (en) | 2010-08-19 | 2015-06-16 | The Institute For Advanced Learning And Research | Methods and media formulations for large-scale and efficient micropropagation of bio-energy grasses |
| WO2013016198A1 (en) * | 2011-07-22 | 2013-01-31 | Booshoot Llc | Compositions, methods, and systems for micropropagation of plants |
| CN110959531A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-04-07 | 北京市园林科学研究院 | 一种获取苔草无菌组培苗的方法 |
| CN116420618B (zh) * | 2023-04-04 | 2024-01-26 | 青岛农业大学 | 一种小花灯心草组织培养再生体系建立的方法 |
| CN118216429A (zh) * | 2024-04-25 | 2024-06-21 | 青岛农业大学 | 一种野生白颖苔草再生体系建立的方法 |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4337683A (en) | 1980-07-22 | 1982-07-06 | Backus John G | Synthetic woodwind instrument reed and method for its manufacture |
| ES2074999T3 (es) | 1987-05-20 | 1995-10-01 | Ciba Geigy Ag | Plantas de zea mays y plantas de zea mays transgenicas regeneradas de protoplastos o celulas derivadas de protoplastos. |
| DE58909753D1 (de) | 1988-03-08 | 1997-01-23 | Ciba Geigy Ag | Regeneration von fertilen Gramineen-Pflanzen aus der Unterfamilie Pooideae ausgehend von Protoplasten |
| US5767367A (en) | 1990-06-23 | 1998-06-16 | Hoechst Aktiengesellschaft | Zea mays (L.) with capability of long term, highly efficient plant regeneration including fertile transgenic maize plants having a heterologous gene, and their preparation |
| US5631152A (en) * | 1994-10-26 | 1997-05-20 | Monsanto Company | Rapid and efficient regeneration of transgenic plants |
| US5965796A (en) * | 1995-04-21 | 1999-10-12 | University Of Georgia Research Foundation Inc. | Metal resistance sequences and transgenic plants |
| US5876484A (en) | 1995-05-17 | 1999-03-02 | Phytotech, Inc. | Method for removing soluble metals from an aqueous phase |
| US5917177A (en) | 1995-12-13 | 1999-06-29 | Sankyo Seiki Mfg. Co., Ltd. | IC card reader |
| US5917117A (en) | 1996-03-21 | 1999-06-29 | Phytotech, Inc. | Inducing hyperaccumulation of metals in plant shoots |
| CA2273787A1 (en) | 1996-12-16 | 1998-06-25 | Monsanto Company | In-situ remediation of contaminated soils |
| US5829192A (en) | 1996-12-23 | 1998-11-03 | Gatliff; Edward G. | Method for focusing the growth of a vegetative root system to target a contaminated area |
| US5927005A (en) | 1997-04-09 | 1999-07-27 | Board Of Regents, The University Of Texas | Phytoremediation of heavy metals with creosote plants |
| CA2370451A1 (en) | 1999-04-29 | 2000-11-09 | Suzanne D. Rogers | Cloned and engineered plants and methods of use for bioremediation |
| US6087547A (en) * | 1999-05-25 | 2000-07-11 | University Of South Carolina | Method for decomposing toxic organic pollutants |
| US7052912B1 (en) * | 2001-01-04 | 2006-05-30 | Woods Susan H | Methods and apparatus for the micro- and macropropagation of reed grasses |
| US6821782B2 (en) | 2001-02-05 | 2004-11-23 | University Of South Carolina Research Foundation | Sustained totipotent culture of selected monocot genera |
| WO2002063023A2 (en) | 2001-02-05 | 2002-08-15 | The University Of South Carolina Research Foundation | Sustained totipotent regenerable tissue culture of arundo donax (giant reed) and totipotent tissue and plants produced therefrom |
-
2002
- 2002-02-05 US US10/068,584 patent/US6821782B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-02-05 HU HU0500786A patent/HU230318B1/hu unknown
- 2002-02-05 WO PCT/US2002/003494 patent/WO2002063024A2/en not_active Application Discontinuation
-
2004
- 2004-11-05 US US10/982,254 patent/US7303916B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUP0500786A2 (en) | 2006-05-29 |
| US20050102719A1 (en) | 2005-05-12 |
| HUP0500786A3 (en) | 2007-05-29 |
| US7303916B2 (en) | 2007-12-04 |
| US6821782B2 (en) | 2004-11-23 |
| WO2002063024A2 (en) | 2002-08-15 |
| US20020174455A1 (en) | 2002-11-21 |
| WO2002063024A3 (en) | 2003-10-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | High-frequency somatic embryogenesis from germinated zygotic embryos of Schisandra chinensis and evaluation of the effects of medium strength, sucrose, GA 3, and BA on somatic embryo development | |
| Rout | Micropropagation of Clitoria ternatea Linn.(Fabaceae)—An important medicinal plant | |
| Steinitz et al. | Vegetative micro-cloning to sustain biodiversity of threatened Moringa species | |
| US20020166149A1 (en) | Sustained totipotent regenerable tissue culture of Arundo donax (Giant Reed) and totipotent tissue and plants produced therefrom | |
| CN104813939A (zh) | 一种荷花再生体系的构建方法 | |
| CN102144556A (zh) | 瑶山苣苔组织培养及快速繁殖的方法 | |
| HU230318B1 (hu) | Arundo donax fenntartható totipotens tenyészete | |
| CN108575740B (zh) | 一种杨树体胚发生与植株建成的方法 | |
| Uji et al. | Factors influencing the induction of adventitious bud and callus in the brown alga Sargassum horneri (Turner) C. Agardh | |
| CN100346689C (zh) | 一种翅果油树试管苗的繁殖方法 | |
| CN108770692B (zh) | 椰子胚诱导培养基和基于椰子合子胚细胞薄层培养获得离体再生植株的方法 | |
| Aquea et al. | Synthetic seed production from somatic embryos of Pinus radiata | |
| Ipekci et al. | High frequency plant regeneration from nodal explants of Paulownia elongata | |
| CN101390496B (zh) | 离体快速繁殖地乌的方法 | |
| Abul-Soad et al. | Date palm somatic embryogenesis from inflorescence explant | |
| Fennell et al. | Micropropagation of the river lily, Crinum variabile (Amaryllidaceae) | |
| Chand et al. | Direct somatic embryogenesis from zygotic embryos of a timber-yielding leguminous tree, Hardwickia binata Roxb. | |
| Robert et al. | Successive grafting confers juvenility traits to adult Spanish red cedar (Cedrela odorata Linnaeus): a tool for the rescue of selected materials | |
| Grendysz et al. | Influence of micropropagation with addition of kinetin on development of a willow (Salix viminalis L.) | |
| Kim et al. | Somatic embryogenesis and plant regeneration in zygotic embryo explant cultures of rugosa rose | |
| Peña-Ramírez et al. | Tissue culture methods for the clonal propagation and genetic improvement of Spanish red cedar (Cedrela odorata) | |
| KR100294656B1 (ko) | 배양기 내에서 직접배발생을 통한 가시오갈피 묘목의 미세 번식방법 | |
| Ishii et al. | In vitro culture of various genotypes of male sterile Japanese cedar (Cryptomeria japonica D. Don) | |
| Madkami et al. | Rapid In Vitro Plant Regeneration From Nodal Explant of Mucuna Gigantea—An Endangered Medicinal Legume.(2022) | |
| ¿ edivá et al. | Micropropagation of common ash clones resistant to fungus Hymenoscyphus fraxineus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FH91 | Appointment of a representative |
Free format text: FORMER REPRESENTATIVE(S): PARRAGH GABORNE DR., S.B.G. & K. SZABADALMI UEGYVIVOEI IRODA, HU Representative=s name: DR. GAL MELINDA, S.B.G. & K. SZABADALMI UEGYVI, HU |
|
| FH92 | Termination of representative |
Representative=s name: PARRAGH GABORNE DR., S.B.G. & K. SZABADALMI UE, HU |
|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: THE UNIVERSITY OF SOUTH CAROLINA, US Free format text: FORMER OWNER(S): THE UNIVERSITY OF SOUTH CAROLINA RESEARCH FOUNDATION, US |