HU226017B1 - Patient-specific immunoadsorbents for extracorporal apheresis and methods of producing said immuno-adsorbers - Google Patents
Patient-specific immunoadsorbents for extracorporal apheresis and methods of producing said immuno-adsorbers Download PDFInfo
- Publication number
- HU226017B1 HU226017B1 HU9900462A HUP9900462A HU226017B1 HU 226017 B1 HU226017 B1 HU 226017B1 HU 9900462 A HU9900462 A HU 9900462A HU P9900462 A HUP9900462 A HU P9900462A HU 226017 B1 HU226017 B1 HU 226017B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- patient
- hsa
- specific
- immune
- antibodies
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 title claims description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 28
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 26
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 26
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 23
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 18
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 18
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 16
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 claims description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 12
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 11
- 230000002134 immunopathologic effect Effects 0.000 claims description 10
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 9
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 8
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 6
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 6
- -1 MgCl 2 Chemical compound 0.000 claims description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 claims description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 208000003343 Antiphospholipid Syndrome Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023345 Autoimmune Diseases of the Nervous System Diseases 0.000 claims description 2
- 208000035868 Vascular inflammations Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 2
- 229940088592 immunologic factor Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 claims 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 40
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 40
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 30
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 27
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 21
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 21
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 21
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 19
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 14
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 12
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 10
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 10
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 7
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- 238000002616 plasmapheresis Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 3
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 3
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960001269 glycine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009832 plasma treatment Methods 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010000 Agranulocytosis Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 206010036105 Polyneuropathy Diseases 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010088160 Staphylococcal Protein A Proteins 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 101000582398 Staphylococcus aureus Replication initiation protein Proteins 0.000 description 1
- 206010043561 Thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 201000007023 Thrombotic Thrombocytopenic Purpura Diseases 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 238000005815 base catalysis Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011443 conventional therapy Methods 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 201000005206 focal segmental glomerulosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 201000010901 lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003526 lymphopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006292 polyarteritis nodosa Diseases 0.000 description 1
- 230000007824 polyneuropathy Effects 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M potassium thiocyanate Chemical compound [K+].[S-]C#N ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- WGRULTCAYDOGQK-UHFFFAOYSA-M sodium;sodium;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na].[Na+] WGRULTCAYDOGQK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000009120 supportive therapy Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000009772 tissue formation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M1/00—Suction or pumping devices for medical purposes; Devices for carrying-off, for treatment of, or for carrying-over, body-liquids; Drainage systems
- A61M1/36—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits
- A61M1/3679—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits by absorption
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
- A61M1/00—Suction or pumping devices for medical purposes; Devices for carrying-off, for treatment of, or for carrying-over, body-liquids; Drainage systems
- A61M1/34—Filtering material out of the blood by passing it through a membrane, i.e. hemofiltration or diafiltration
- A61M1/3472—Filtering material out of the blood by passing it through a membrane, i.e. hemofiltration or diafiltration with treatment of the filtrate
- A61M1/3486—Biological, chemical treatment, e.g. chemical precipitation; treatment by absorbents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
- B01J20/3206—Organic carriers, supports or substrates
- B01J20/3208—Polymeric carriers, supports or substrates
- B01J20/3212—Polymeric carriers, supports or substrates consisting of a polymer obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
- B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
- B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
- B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
- B01J20/3268—Macromolecular compounds
- B01J20/3272—Polymers obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
- B01J20/3274—Proteins, nucleic acids, polysaccharides, antibodies or antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
- B01J2220/40—Aspects relating to the composition of sorbent or filter aid materials
- B01J2220/48—Sorbents characterised by the starting material used for their preparation
- B01J2220/4812—Sorbents characterised by the starting material used for their preparation the starting material being of organic character
- B01J2220/4856—Proteins, DNA
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/824—Immunological separation techniques
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/868—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, or immunotolerance
Description
A találmány tárgyát páciensre specifikus, a páciensek patológiás jelentőségű immunkomplexeiből elkülönített antigéneket és/vagy antitesteket tartalmazó, aktivált szilárd hordozóanyagra kötött immunadszorbensek képezik. A találmány tárgyát képezik továbbá eljárások az immunadszorbensek előállítására és az immunadszorbensek alkalmazásai.
A találmány szerinti immunadszorbensek specifikus antitesteken és/vagy antigéneken alapulnak, amelyek - immunpatológiás folyamatok előrehaladtával - számos betegség okozói és fenntartói. A találmány szerinti megoldás ennek megfelelően előnyösen alkalmazható a klinikai következményekért felelős immunpatológiás szabályozási ciklus irányított befolyásolására, anélkül, hogy a teljes immunrendszer károsodna. A hagyományos gyógyszeres immunszuppressziós kezelés során fellép ilyen károsodás.
A találmány szerinti eljárás ezenfelül előnyösen alkalmazható immunpatológiás szempontból jelentős endogén (testsaját) anyagok feldúsítására és tiszta állapotban való előállítására, új lehetőségeket nyitva ezzel a kóros állapot okainak vizsgálatára és terápiás eljárások kifejlesztésére.
Az immunreakciók funkcionális alapja igen összetett. Alapját a nemspecifikus védelem és a specifikus védelem helyi sejtes és immorális elemei és az egész rendszerre ható sejtes és humorális elemei közötti jól szabályozott kölcsönhatás képezi. A specifikus védelem a limfopoetikus rendszer (a nyirokszövet-képződés rendszere) aktivált sejtjeiből, valamint az általuk előállított közvetítőkből és antitestekből áll.
A stimulálás típusától függően különbözhet a fő védelmi aktivitás.
A szervezet védelmi állapotának ez a fokozódása vagy egy fertőzés során, természetes úton, vagy mesterséges úton, azaz gyógyszerek hatására következik be. Az események kifejthetik hatásukat az egész rendszerre, vagy helyileg, a légzőrendszer, emésztőrendszer és az urogenitális traktus nyálkahártyáin keresztül.
Természeténél fogva a szervezet azonnal reagál a fertőzésre. Az azonnali reakció mértéke az antigén típusától és az invázió helyétől függ. Elméletileg, azonos reakciók következnek be vakcinák vagy más endogén anyagok beadása esetén. A specifikus védelem amely például specifikus antitestek kimutatásával mérhető - csupán néhány nap elteltével válik hatásossá. A kibocsátásukat előidéző ok kiküszöbölése után a specifikus antitestek termelődése csökken, majd végül leáll. Az antitestek biológiai lebomlása után csupán a specifikus „memóriasejtek” jelenléte jelzi, milyen antitestekkel kellett a szervezetnek megküzdenie a múltban. Bizonyos körülmények között, főleg meg nem állapítható okok hatására, a szervezet endogén struktúrákkal szemben hiperaktívan reagál. A kifejlődő autoimmun reakció az endogén szövet folyamatos pusztulását okozza, amelynek bomlástermékei tovább stimulálják az immunrendszert. Amennyiben ezt a patológiás szabályozó ciklust nem szakítja meg semmi, következményei végzetesek lehetnek, minimálisan az érintett szövet számára.
Gyakran találkozhatunk olyan betegségekkel, amelyekben az immunpatológiás folyamatoknak szerepük van, vagy a betegség éppen immunpatológiás eredetű. Krónikus lefolyásuk és kezelésük nehézségei miatt jelentősen befolyásolják az ilyen betegségekben szenvedő emberek életét, a nemzetgazdaságnak is hatalmas kárt okozva. A leggyakrabban előforduló autoimmun betegségek egyike a rheumatoid arthritis, amelyben a népesség kb. 1%-a szenved. Ez a betegség legkorábban 40 éves kor táján jelentkezik. 10 év múlva a betegek kb. 50%-a keresőképtelenné válik, 10-20%-a pedig a legsúlyosabb állapotú rokkanttá. A kezelés eddigi - immunszuppresszióval és támogatóterápiával elért eredményei nem kielégítők, és a terápiát gyakran egyszerűen abbahagyják. Három év elmúltával a kezdetben alapvető terápiás szerekkel kezelt betegek legfeljebb 50%-a áll hatásos gyógyszeres kezelés alatt.
Mivel a hagyományos terápia gyakran nem kielégítő és nagymértékű mellékhatásokkal jár együtt, ezért folyamatosan kutatnak új terápiás eljárások után, amelyek alkalmasak lennének autoimmun betegségek kezelésére. [J. Sany: „Early approaches to immunotherapy of rheumatoid arthritis”, Eur. J. Rheumatol. Inflamm. 11, 139-147 (1991)].
A terápiás kezelések célja hatni a celluláris és humorális immunmechanizmusokra, valamint a közvetítőrendszerekre. A szóban forgó kísérletes próbálkozások kapcsán az állatkísérletek és klinikai vizsgálatok során elért első sikerekről már beszámoltak. Mindeddig nem volt lehetséges azonban határozott áttörést elérni a páciensek autoimmun betegségének előrejelzése terén.
Számos autoimmun betegség esetében, valamint sok olyan betegség esetében, amelyekben immunpatológiás folyamatok is szerepet játszanak, sikeresen alkalmaztak plazmacserét és plazmaszorpciót [R. T. Baldwin és munkatársai: „Guillain-Barre syndrome affér heart transplantation J. Heart Lungtransplan. 11, 817-819 (1992); J. Braun és munkatársai: „Severe lupus crisis with agranulocytosis and anuric renal failure due to a mesangial lesion” (WHO IIB) - successful treatment with cyclophosphamide pulse followed by plamapheresis (2) Br. J. Rheumatol. 30, 312-313 (1991); P. C. Dau: „Plasmapheresis in acute multiple sclerosis: Rational and results” J. Clin. Apheresis 6, 200-204 (1991); Η. H. Euler és munkatársai: „A randomized trail of plasmapheresis and subsequent pulse cyclophosphamide in severe lupus: Design of the LPSG trial” Int. J. Artif. Organs, 14, 639-646 (1991); D. C. Hess és munkatársai „Thrombotic thrombocytopenic purpura in systemic lupus erythermatosus and antiphopholipid antibodies: Effective treatment with plasma exchange and immunosuppression” J. Rheumatol. 19, 1474-1478 (1991); R. T. Korinthenberg és M. Sauer: „The Guillian-Barre syndrome in childhood. Clinical course and therapeutic measures Monatsschr. Kinderheilkd. 140, 792-798 (1992)].
A plazmacsere a legrégebbi terápiás eljárás membrán-plasmapheresissel vagy centrifugálással szeparált plazmával, amelyet eltávolítanak és egyidejűleg donorplazmával vagy emberi albuminnal helyettesí2
HU 226 017 Β1 tenek. A kezelés során a páciens plazmájának legkevesebb egyszeres és legfeljebb kétszeres mennyiségét cserélik le. Ez a módszer nem szelektív. Egy vagy néhány, patológiás szempontból fontos komponens lecserélése érdekében az egész plazmát lecserélik, és a páciens számára lényeges anyagokat távolítanak el. Ennek súlyos következményei vannak a páciensre nézve, amelyeket helyettesítési terápiával igyekeznek megelőzni. Ezenfelül felmerül a kórokozók átvitelének (például HÍV vagy hepatitis kórokozói) veszélye is.
A plazmaszorpció esetében az előzőleg szeparált plazmát adszorber anyagon vezetik keresztül. Egyes plazmakomponensekhez kötődő anyagok hozzákötődnek az adszorber anyagához, ezáltal eltávoznak a páciens plazmájából. Amikor a plazmaszorpciót immunológiai szempontból jelentős anyagok eltávolítására használjuk, immunadszorpciónak nevezzük. Az alkalmazott adszorber anyagától függően ez az eljárás változó szelektivitást és specifitást biztosít. Különböző ligandumokat és hordozókat alkalmaztak klinikailag az immunglobulinok és immunkomplexek adszorbeálására a szeparált plazmából.
1. táblázat
Példák extrakorporális apheresis-eljárásokban alkalmazott ligandumokra
Staphylococcus-eredelQ protein-A
Hidrofób aminosavak (triptofán vagy fenil-alanin)
Dextrán-szulfát
Aggregált IgG_
Emberi IgG elleni antitest
Vércsoportok antigénjei
Az alábbi táblázat olyan autoimmun betegségeket sorol fel, amelyeket sikeresen kezeltek extrakorporális immunadszorpcióval.
2. táblázat
Apheresissel/immunadszorpcióval sikeresen kezelt autoimmun betegségek
Gyors kifejlődésű veseglomerulus-gyulladás („glomerulonephritis”), fokális glomerulosclerosis Szisztémás bőrfarkas („lupus erythematosus) Antifoszfolipid szindróma
Érgyulladások, például periarteriitis nodosa, M. Wegener
Reumaszerű ízületi gyulladás („rheumatoid arthritis”)
Immunológiai trombocitopéniás purpura
Koagulációs faktorok elleni inhibitorok
Hiperimmunizált vagy ABO-inkompatibilis leendő transzplantátumrecipiensek Sokizom-gyulladás („polymyoisitis)
Idegrendszeri betegségek, például Guillain-Barrészindróma, polineuropátia, „amytrophic” laterális sclerosis, myastenia gravis, sclerosis multiplex
Az alábbiakban az autoimmun betegségek esetében alkalmazott gyógyszeres kezelések hátrányait ismertetjük. A gyógyszeres ímmunszuppresszió nem szelektív és nem specifikus. Az újabb immunológiai terápiák (monoklonális vagy poliklonális antitestek az immunsejtek és -közvetítők receptorstruktúrái vagy aktivációs markerei ellen) szintén nem szelektíven fojtják el („szuppresszálják”) az immunválaszt, és/vagy további immunválaszt indukálnak a szervezetben.
A továbbiakban a korábban autoimmun betegségek során alkalmazott apheresis-eljárások és adszorpciós eljárások hátrányait ismertetjük.
A jelen pillanatban létező összes apheresises/adszorpciós eljárás hátránya, hogy - a gyógyszeres immunszuppresszióhoz hasonlóan - nem eléggé szelektívek. Ez vonatkozik Balint és Hargreavans módszerére is (4681870-es számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom), amelyet már eddig is alkalmaztak Staphylococcus aureus protein-A megfelelő hordozón való immobilizálására. Ezzel az eljárással IgG-t és IgGkomplexeket távolítanak el a páciensek véréből nemspecifikusan. Ez áll arra az eljárásra is, amelynek során immunkomplexek immunadszorbenseiként hordozóhoz kapcsolt nem specifikus fehérjéket alkalmaznak, előnyösen különböző fajokból származó immunglobulinokat, amint azt Davis ismerteti (WO 86/07152-es számú nemzetközi közzétételi irat). Ezzel a módszemel az immunkomplexek eltávolíthatók, az autoimmun betegségek során mindig újonnan keletkező, reaktív egyedi összetevők azonban nem.
Liberti és Pollora (4 551 435-es számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) egy olyan eljárást ismertetnek, amellyel a vérből immunkomplexeket és más vegyületeket lehet eiiminálni specifikus antitesteket meghatározott koncentrációban a páciens véréhez adva, amelyek ott az eliminálandó vegyületekkel immunkomplexeket képeznek. A vérből történő elimináció olyan faktorok segítségével lehet elvégezni, mint például a C1q, reumatoid faktorok, Fc-receptorok és Fc-receptorokat hordozó sejtek, amelyek az elimináció során szilárd hordozón vannak immobilizálva. Az eljárás alkalmazása egyrészt az ok ismeretét tételezi fel (ami az esetek többségében nem teljesül), másrészt azt, hogy az okozó antigén tiszta formában hozzáférhető antitestek előállítása céljából. Magukat az immunkomplexeket nem specifikus módon távolítják el, nem protein-A révén, hanem olyan molekulák segítségével, amelyek fizikai okokból nagy affinitást mutatnak immunglobulinokhoz.
Figyelembe kell venni azt is, hogy a patofiziológiás szempontból számottevő immunstruktúrák különbözőek a különböző autoimmun betegségekben, sőt, egy és ugyanazon betegség immunitási jelenségei is többfélék. A jelenleg hozzáférhető apheresis-rendszerek nem csupán immunpatológiás szempontból számottevő, hanem fiziológiailag szükséges immunglobulinokat is eltávolítják. Ez utóbbiak pedig létfontosságúak az endogén védelem szempontjából. Az eredmény az immunrendszer általános gyengülése szeptikus komplikációk növekvő kockázata mellett.
HU 226 017 Β1
A találmány szerinti megoldás kidolgozása során célunk az volt, hogy az immunrendszer hibás működése által okozott betegségekben, vagy krónikussá vált, nehezen kezelhető immunpatológiás folyamatok eredményezte betegségekben szenvedő betegek számára elérhetővé váljék egy terápia. A találmány szerinti megoldás a páciens számára specifikus immunadszorbens kifejlesztésén alapul, amellyel lehetségessé válik a patogenitás szempontjából jelentős immunkomplexek, autoantitestek és antigének eltávolítása a beteg véréből vagy plazmájából adszorpció révén.
A találmány szerinti megoldás megvalósítja a kitűzött célt, összhangban az 1-7. igénypontokban igényeitekkel. Az aligénypontok az előnyös megvalósítási módokat fogalmazzák meg.
A cél elérése érdekében az immunkomplexeket a páciens plazmájából ismert eljárásokkal távolítjuk el, például protein-A-immunadszorbensekkel, és az eluálás után megfelelő módon biológiailag aktív komponenseikre bontjuk őket. A komponenseket ezután megfelelő hordozóanyaghoz kapcsoljuk elismert eljárásokat, például gélkromatográfiát alkalmazva, elválasztva őket, egyenként, vagy antitestek és antigének keverékeként. Ezen immunadszorbensek segítségével azután a betegség szempontjából fontos immunkomplexeket, antitesteket és antigéneket plasmapheresis segítségével specifikusan eltávolíthatjuk a páciens plazmájából. Az így elkészített oszlopokat újraaktiválhatjuk, és többszöri felhasználásra szánhatjuk őket. Az ilyen páciensre specifikus immunadszorbensek általában véve minden olyan betegségre elkészíthetők, amelyben autoimmun komplexek patogénként viselkednek.
A fenti célkitűzéseket a találmány szerinti megoldás megvalósítja, amint azt a szabadalmi igénypontok alapján is nyilvánvaló.
A találmány szerinti páciensre specifikus immunadszorbenseket páciensek patológiás jelentőségű immunfaktorainak immunkomplexeiből elkülönített antigének és/vagy antitestek alkotják, amelyek aktivált szilárd hordozóanyaghoz vannak kötve. Az antigének és/vagy az antitestek olyan betegekből vannak elkülönítve, akik hibás szabályozás által okozott vagy fenntartott betegségben szenvednek. Ilyen autoimmun betegségek vagy immunpatológiás reagálási állapotok többek között az alábbiak: reumaszerű izületi gyulladás („rheumatoid arthritis”), gyors kifejlődésű veseglomerulus-gyulladás („glomerulonephritis”), szisztémás bőrfarkas („lupus erythematosus”), antifoszfolipid szindróma, érgyulladások, szövetinkompatibilis leendő transzplantátumrecipiensek állapota, sokizomgyulladás („polymyoisitis”), idegrendszeri autoimmun betegségek, illetve fertőző betegségek eredményeképpen fellépő immunpatológiás hibás szabályozások. Minden biológiailag kompatibilis vegyület alkalmazható hordozóanyagként, amennyiben képes felületén kovalensen kötni immunkomplexek megfelelő komponenseit. Sepharose és cellulózgyöngyök előnyösen alkalmazhatók.
A páciensre specifikus immunadszorbensek előállítására szolgáló eljárás a következő lépésekből áll:
Mindenekelőtt az immunkomplexeket eltávolítjuk a páciensek plazmájából nem szelektív eljárásokkal, például protein-A-immunadszorbensek alkalmazásával, és a megfelelő eluálás után biológiailag aktív komponenseikre bontjuk őket. Ezután a komponenseket elkülönítve, egyenként vagy antitestek és antigének keverékeként - ismert eljárásokat (például gélkromatográfiát) alkalmazva - megfelelő hordozóanyaghoz kapcsolhatjuk. Az immunkomplexek komponensekre bontása történhet savas vagy lúgos közegben, előnyösen pH 2-5. terjedő vagy pH 10-12. terjedő pH-tartományban, szükség szerint frakcionálás és, ha szükséges, sók (például NaCI, MgÜ2, LiCI vagy guanidin-hidroklorid) vagy karbamid hozzáadása után. Ezek a körülmények alkalmasak arra, hogy a komponenseket egy adott koncentráció elérése után disszociált állapotban tartsák. A kapcsolás szilárd hordozókhoz elvégezhető a 2-12. terjedő pH-tartományban, elvileg ismert módon.
Az immunadszorbensek segítségével extrakorporális immunadszorpcióval specifikusan el lehet távolítani a páciens plazmájából a betegséggel összefüggő immunkomplexeit, antitestjeit és antigénjeit. Az erre alkalmas oszlopok újraaktiválhatóak, és többszöri alkalmazásra lehet őket tervezni. Általában véve lehetséges ilyen páciensre specifikus immunadszorbenseket tervezni minden olyan betegség esetében, amelyben autoimmun komplexek patogén szerepet töltenek be.
A terápiában való alkalmazáson kívül a találmány szerinti eljárás lehetővé teszi olyan anyagok izolálását a páciens véréből, amelyek legalább részben okozói az immunológiailag hibás szabályozásnak. Ez leegyszerűsíti az autoimmun betegségek vagy megzavart funkció következtében lefolyásuk közben intenzívvé váló betegségek patogenezisével kapcsolatos vizsgálatokat. A hagyományos megoldásokkal szemben a találmány szerinti megoldás előnyei a következők:
1. Nem csupán immunkomplexek, hanem azok eddig nem érintett egyedi komponensei is eltávol íthatók.
2. Az idegen immunglobulinokkal való helyettesítés nem szükséges. (Kizárható olyan kórokozók átvitele, mint például a HÍV, járulékos költségek nem lépnek fel.)
3. A betegség okának ismerete nélkül páciensre specifikus immunadszorbenseket állíthatunk elő alacsony költséggel. Így tehát ilyen autoimmun betegségek kezelésére is biztosíthatók specifikus terápiás készülékek, amelyek céltudatos kifejlesztését az ipar nem vállalta fel a magas költségek miatt.
4. Egy adott személy autoimmun betegségét okozó vagy annak fenntartásáért felelős antigének és/vagy antitestek specifikusan feldúsíthatok, izolálhatok és így további vizsgálatok céljából is előállíthatók.
A továbbiakban a találmány szerinti megoldást részletesebben is ismertetjük.
Autoimmun betegségekben, például rheumatoid arthritisben, lupus erythematosusban vagy sclerosis multiplexben szenvedő pácienseket extrakorporális aphoresisnek teszünk ki staphylococcus protein-A-immunadszorbenseket alkalmazva. Egy aphoresis-ciklus végeztével az oszlopot alaposan lemossuk detergenst
HU 226 017 Β1 tartalmazó pufferrel, vagy másik lehetőségként az adszorptív módon kötött plazmakomponenseket megnövelt sókoncentrációval mossuk le az oszlopról (például 1-3 M NaCI). Az adszorpcióval kikötődött plazmakomponensek felszabadulását a mosópuffer elektroforézisével vagy immunológiai vizsgálati eljárással ellenőrizzük. Ezután az immunglobulinokat, immunkomplexeket és a disszociált immunológiai komponenseket pH-gradiens alkalmazásával eluáljuk (például citrát- vagy acetátpufferben, pH 7 és pH 2 között), vagy koncentrált sóoldattal (4 és 7 között) változtatva a pH-t. Elektroforézissel, kromatográfiásan vagy más megfelelő elválasztási eljárással analizáljuk a frakciót fehérje-összetétele és az immunkomplexek disszociációs foka szempontjából.
Azon frakciókat használjuk fel a szilárd hordozóra való immobilizálás során, amelyek immunkomplexei reaktív komponenseikre estek szét. A kapcsolás előtt igény szerint további elválasztást hajthatunk végre megfelelő elválasztási eljárásokkal. Az immunkomplexek komponenseit egyedileg vagy keverékként hordozóanyaghoz kapcsoljuk, amely hordozót előzőleg ONB-karbonáttal vagy N-hidroxi-szukcinimid-etil-észterrel aktiváltunk ismert eljárások alkalmazásával. Az összes nem kötött komponens eltávolítása után egy páciensre specifikus és regenerálható immunadszorbenst kapunk, amelynek segítségével csupán az immunpatológiás humorális hibás szabályozásért felelős anyagokat távolíthatjuk el szelektíven a páciens véréből.
A találmány szerinti megoldást a továbbiakban kiviteli példák segítségével részletesebben is ismertetjük.
1. példa
Modellkísérletek immobilizált emberi IgG biológiai aktivitásának meghatározására kecske eredetű emberi IgG elleni antitesttel. (3. táblázat)
Az emberi IgG-t az elúciós körülmények figyelembevételével megfelelő hordozóhoz kötöttük (sepharose-6FF-hez és cellulózgyöngyökhöz). C1-CO-ONBaktivált, kb. 30 pmol ONB-karbonát-csoportot tartalmazó gélt alkalmaztunk az emberi IgG kapcsolására.
ml antiszérumot (5,3 mg emberi IgG elleni) meghígítottunk 1 ml PBS-sel és felvittük a megfelelő hordozókra (áramlási sebesség: 0,1 ml/perc). Az oszlopokat néhány oszloptérfogatnyi, 3 M NaCI-ot tartalmazó PBS-ben (pH 0,5) mostuk. Az eluálást pH 2,0-n, 0,05% Tween 20-at tartalmazó 0,1 M-os glicin-hidrokloriddal hajtottuk végre (áramlási sebesség: 1,0 ml/perc). A fehérjék koncentrációját spektrofotometriásán határoztuk meg, 280 nm-en, miután az eluátumokat 0,5 M K2HPO4-tal közömbösítettük. Az antitestek (a gél 1 ml-jére számított) relatív kötési kapacitását az IgG standard körülmények közötti kapcsolásához viszonyítottuk (0,5 M-os foszfátpuffer, 0,05% Tween 20, pH 7,2).
3. táblázat
Immobilizált (elúciós körülmények között kapcsolt) emberi IgG biológiai aktivitásának meghatározása emberi IgG elleni (kecske eredetű) antitesttel, affinitáskromatográfiát alkalmazva.
| ONB-aktivált hordozó | Kapcsolási körülmények | A kapcsolt emberi IgG mennyisége (mg/ml gél) | Ember elleni IgG-t kötő kapacitás (mg antitest/ml gél) | Az immobilizált IgG kötési hatékonysága (pg antitest/mg IgG) | A hordozó relatív aktivitása % |
| Cellulózgyöngy | 0,5 M foszfát p. pH 7,2 | 2,3 | 4,1 | 1800 | 100 |
| Cellulózgyöngy | 0,5 M foszfát p. pH 7,2 | 6,2 | 4,1 | 660 | 100 |
| Cellulózgyöngy | 0,1 M citrát p. pH 3,0 | 6,2 | 2,2 | 360 | 54 |
| Cellulózgyöngy | 0,1 M citrát p. pH 3,0 | 3,8 | 4,3 | 1100 | 105 |
| Cellulózgyöngy | 4,5 M MgCI2 pH 6,0 | 1,4 | 2,5 | 1790 | 61 |
| Sepharose 6FF | 0,5 M foszfát p. pH 7,2 | 3,5 | 3,2 | 910 | 78 |
| Sepharose 6FF | 0,1 M citrát p. pH 3,0 | 1,2 | 2,5 | 2080 | 61 |
| Sepharose 6FF | 0,1 M citrát p. pH 3,0 | 5,0 | 3,3 b) | 660 | 80 |
| Sepharose 6FF | 0,1 M citrát p. pH 3,0 | 5,0 | 3,8 c) | 760 | 93 |
| Sepharose 6FF | 0,1 M foszfát p. pH 12,0 | 2,8 | 3,2 | 1140 | 78 |
| Sepharose 6FF | 4 M guanidin-HCr | 2,0 | 3,7 | 1850 | 90 |
a) C1-CO-ONB-vel tercier aminok jelenlétébe (báziskatalízissel) aktiválva; az aktiválás mértéke: 20 pmol ONB-karbonát-csoport/ml gél; a kapcsolás hatékonysága: 57%.
b) 9,2 ml közömbösített elúciós pufferben végzett affinitáskromatográfiával tisztított 53 mg antitest; áramlási sebesség: 0,1 ml/perc; mosópuffer: 3 M-os NaCI (pH 5,0); eluálás 1 ml/perces áramlási sebességgel; a felvitt antitestek 63%-a eluálódott.
c) 9,2 ml közömbösített elúciós pufferben végzett affinitáskromatográfiával tisztított 53 mg antitest; áramlási sebesség: 0,1 ml/perc; mosópuffer: 3 M-os NaCI (pH 5,0); eluálás 0,5 ml/perces áramlási sebességgel; a felvitt antitestek 70%-a eluálódott.
HU 226 017 Β1
2. példa
Modellkísérletek bázis-aktivált ONB-karbonátsepharose-6FF-en immobilizált (emberi IgG elleni antitestet feleslegben alkalmazva, pH 3,0-n affinitáskromatográfiát végezve) emberi IgG, mint 5 antigén, kötési kapacitásának meghatározására Az emberi IgG-t (Sigma) kapcsolás céljából a kapcsolópufferben oldottuk, majd átszűrtük (0,2 pm-es pórusméret). Az oldatot hozzáadtuk az aktivált sepharose-hoz, amelyet előzőleg oldószerrel nedvesítettünk 10 meg. A kapcsolást szobahőmérsékleten végeztük el (1 órán át) óvatos mozgatással. Miután 1 órán keresztül blokkoltuk a gélt (1 M etanol-amin 0,1 M borátpufferben, pH 8,0-n), intenzíven mostuk (például fritten) mindig 10 oszloptérfogattal a következő sorrendben: kap- 15 csolópuffer - víz - 24 órán át 0,1 M borátpuffer, pH 8,3 - víz.
Az affinitáskromatográfiát 2-6 °C-on végeztük az ECONO-rendszerrel (Bio-Rad) Omn/Y/f-oszlop (5*0,3 I. D. (350 μΙ gél). Az áramlási sebességek választásunk alapján 0,25 és 1,0 ml/perc között változtak. Az eluálást UV-áramlási-fotométerrel mértük. Az antitestek kötése és PBS-sel való lemosása után az antitesteket a következő áramlási program alapján eluáltuk:
1. 30 percig PBS;
2. 60 percig 3 M-os NaCI, pH 5;
3. 30 percig PBS;
4. 60 percig 0,1 M-os glicin-hidroklorid, pH 2,0;
5. 30 percig PBS;
6. áramlási sebesség: 0,25 ml/perc.
4. táblázat
Emberi IgG, mint antigén (ag), kötési kapacitásának meghatározása, amely emberi IgG-t emberi IgG elleni antitestet (ab) feleslegben alkalmazva, pH 3,0-n affinitáskromatográfiát végezve, bázisaktivált ONB-karbonát-sep/iarase-6FFen immobilizáltunk
| Kísérletek száma | Immobilizált ag (mg/ml gél) | Felvitt antitest (ab) (mg/futtatás) | Az ab kötés körülményei | Kötési kapacitás | |||||
| ab koncentrációja (pg/ml) | aránya | kivitelezés módja | áramlási sebesség ml/perc | mosás PBSsel géltérfogat | eluált ab mennyisége (mg/ml gél) | %b (2 ab/ag) | |||
| 1. | 5,0 | 6,2 | 1030 | 2,5 | BA | 3h RT | | 20 | 10—4 | 104 |
| 2. | 5,0 | - | - | 2,5 | BAE | szakaszos | 3*1h 1*60h | 400 θ) | 7,1 | 71 |
| 3. | 5,0 | - | - | 2,6 | BAE | szakaszos | 1h1*16h | 320 a) | 7,5 | 75 |
| 4. | 5,0 | 3,1 | 210 | 4,2 | BAL | 0,02 | | 22 | 13,7 | 137 |
| 5. | 5,0 | 4,1 | 1050 | 2,3 | ML | 0,1 | | 22 | 7,1 | 71 |
| 6. | 5,0 | 4,1 | 210 | 2,3 | ML | 0,1 | | 86 | 7,7 | 77 |
| 7. | 5,0 | 5,7 | 300 | 3,3 | ML | 0,02 | | 22 | 11,4 | 114 |
| 8. | 5,0 | 5,6 | 925 | 3,2 | MC | 7h 0,5 | 2*1h2*16h | 200 a) | 9,7 | 97 |
| 9. | 5,0 | 7,2 | 210 | 4,1 | MC | 14h0,5 | 5*1h 1*16h | 300 a) | 9,7 | 97 |
| 10. | 5,0 | 4,2 | 525 c> | 2,4 | MCAC | 6h 0-5 | 2*1h2*16h | 400 a) | 9,7 | 97 |
| RT | szobahőmérséklet („room temperature”) |
| A | szakaszos eljárás („batch process”) |
| AE | a szakaszos eljárással felkötött (1. kísérlet) antitestek eluálása miután oszlopba töltöttük és PBS-sel mostuk a hordozót |
| AL | a szakaszos eljárással felkötött antitesteken kívül utólag is felvittünk antitesteket; mosás és eluálás oszlopon keresztül |
| L | „mikro”-affinitáskromatográfia a tisztított antitestek hagyományos felvitelével |
| C | „mikro”-affinitáskromatográfia, a tisztított antitestek keringetéssel vittük fel az oszlopra |
| CAC | „mikro”-affinitáskromatográfia antiszérummal, hígított PBS-ben, keringetéssel |
a) A feleslegben felvitt antitestek és/vagy az adszorptíven felvitt fehérjék eltávolítása végett PBS-sel mostuk. A mosást egy néhány órás (vagy 16 órás) időszakra megszakítottuk, ezután indítottuk el az elúciós programot.
b) Az emberi IgG elleni antitestek mennyiségét spektrofotometriásán határoztuk meg X280-nál (E°-1%=1,38), 0,5 M-os K2HPO4-tal való közömbösítés után. Akkor feltételeztük 100%-osnak a kötés kapacitását, amikor minden immobilizált IgG-molekula két molekula IgG elleni antitestet köt.
c) Antiszérum, 1:8 arányban hígítva PBS-ben.
HU 226 017 Β1
3. példa
a) HSA elleni (nyúl eredetű) antitest eluálása HSAval antitest-antigén komplexekből; optimális affinitáskromatográfiás eluálási körülmények meghatározása HSA-val burkolt 5 mikrotitrálólemezeket alkalmazva (5. táblázat)
A 96 lyukú mikrotitrálólemezeket HSA-val burkoltuk. Mindegyik lyukban 0,1 pg HSA elleni antitestet tartottunk egy ideig. Nyúl eredetű IgG elleni alkalikus foszfatázzal konjugált IgG-t alkalmaztunk kimutatásra 10 ELISA-eljárással, a szubsztrát a 4-nitro-fenil-foszfát, a hullámhossz λ=405 nm volt. A megfelelő elúciós puffer 200 μΙ-eit pipettáztuk a lyukakba. Az eluálást szobahőmérsékleten végeztük egy órán keresztül, miközben a mikrotitrálólemezt állandóan mozgattuk. A lyukak ala- 15 pos mosása után kimutattuk a HSA elleni antitestet. Az értékelés céljából mindig 8 lyukban mért adat átlagos értékét képeztük (%CV=4,4). A PBS-sel eluált HSA elleni antitestek százalékos arányát tekintettük 0%-nak.
5. táblázat
Elúciós puffer az antitest-antigén komplexek feloldására
Eluált HSA elleni antitestek (%)
| PBS, pH 7,3 | 0 |
| PBS+1%SDS, pH 7,3 | 51 |
| 0,10 M citrátpuffer, pH 2,5* | 100 |
| 0,10 M citrátpuffer, pH 3,0* | 73 |
| 0,10 M citrátpuffer, pH 3,5* | 27 |
| 0,10 M citrátpuffer, pH 4,0* | 8 |
| 0,10 M citrátpuffer, pH 2,5* | 100 |
| 0,1 M citrát-/foszfátpuffer, pH 7,3 | 0 |
| 0,1 M citrát-/foszfátpuffer, pH 6,0 | 0 |
| 0,1 M citrát-/foszfátpuffer, pH 5,0 | 0 |
| 0,1 M citrát-/foszfátpuffer, pH 4,0 | 2 |
| 3,00 M KSCN, pH 7,3 | 41 |
| 3,00 M NaCI, pH 5,0* | 0 |
| 3,00 M guanidin*/HCI, pH 7,3 | 66 |
| 4,00 M guanidin*/HCI, pH 7,3 | 90 |
| 6,00 M karbamid, pH 7,3 | 7 |
| 0,10 M borátpuffer, pH 11,0 | 35 |
| 0,10 M foszfátpuffer, pH 11,5 | 49 |
| 0,10 M foszfátpuffer, pH 12 | 91 |
* 0,015% Tween 20-szal.
b) HSA elleni antitest HSA-val képzett komplexének immobilizálása báziskatalízissel aktivált OA/S-kart>onáf-sepharose-6FF-re, kapcsoláskor az immunaffinitás-kromatográfia során alkalmazott eluálóközeget alkalmazva A kapcsolóközeget, amihez fehérjét adtunk, és amit
0,45 pm-es pórusméretű szűrőn átszűrtünk, nedves, aktivált ONB-karbonát-sep/?arose-6FF-hez adtuk hozzá. A kapcsolást egy órán keresztül szobahőmérsékleten végeztük, lassú mozgatás közben. Ezután újabb egy órán keresztül etanol-aminnal, borátpufferben, pH 8,1-en blokkoltunk. Az ONB-karbonát-csoportokat spektrofotometriásán határoztuk meg (Xmax = 267 nm).
A maximális immobilizálás számára referenciaként tekintett érték meghatározásához 0,5 M-os foszfátpuffert (pH 7,3) alkalmaztunk.
A mosást a 2. példában leírtakkal azonos módon végeztük.
A HSA elleni antitesteket egy korábbi kísérlet során, affinitáskromatográfia segítségével (0,05 M-os citrátpuffer, pH 2,0) nyertük, 0,5 M-os K2HPO4-tal közömbösítettük és -20 °C-on tároltuk, majd kiolvasztás után az oldat pH-ját 3,0 és 4,0 közé állítottuk be hígított HCIdal a kapcsolás céljából.
A HSA-t PBS-ben oldottuk, a megfelelő pH-t HCIdal állítottuk be, és - antigén-antitest keverék kapcsolása végett - hozzáadtuk az antitestoldathoz.
A fehérjemennyiséget spektrofotometriásán határoztuk meg 280 nm-en OD-t mérve (Εθ·1%=1,38 az antitestekre és E°'1%=1,67 a HSA-ra) a kapcsolópufferben. Miután a géleket 1 N-os NaOH-dal kezeltük, a felülúszóban Lowry módszerével meghatároztuk az immobilizált fehérjék mennyiségét.
A kapcsolás eredményét az immobilizált fehérje mennyiségét a felvitt fehérje mennyiségéhez viszonyítva adtuk meg, százalékosan.
6. táblázat
HSA elleni antitest HSA-val képzett komplexének (a továbbiakban: anti-HSA/HSA) immobilizálása báziskatalízissel aktivált ONB-karbonát-sepharose-6FF-re, kapcsoláskor az immunaffinitás-kromatográfia során alkalmazott eluálóközeget alkalmazva
| ONB-karbonát-csoportok n mennyisége (pmol/ml gél) | Kapcsolóközeg | Gélre felvitt minta pH (mg/ml gél) | Fehérje- mennyiség (mg/ml) | Immobilizált fehérje (mg/ml gél) | A kapcsolás eredménye (%) | |
| 19,8 | 0,5 M foszfátpuffer | 7,3 | 1,6 A | 0,3 | 1,1 | 70 |
| 31,6 | 0,5 M foszfátpuffer | 7,3 | 3,9 HSA | 3,9 | 1,7 | 43 |
| 5,1 | 0,1 M foszfátpuffer | 7,3 | 1,6A | 0,3 | 0,6 | 34 |
| 22,3 | eluálópuffer | 3,0 | 3,2 A | 0,6 | 2,3 | 70 |
| 20,3 | eluálópuffer | 3,0 | 5,0 D | 1,6 | 3,4 | 67 |
HU 226 017 Β1
6. táblázat (folytatás)
| ONB-karbonát-csoportok π mennyisége (pmol/ml gél) | Kapcsolóközeg | Gélre felvitt minta pH (mg/ml gél) | Fehérje- mennyiség (mg/ml) | Immobilizált fehérje (mg/ml gél) | A kapcsolás eredménye (%) | |
| 10,8 | eluálópuffer | 3,0 | 3,8 B | 0,5 | 2,3 | 60 |
| 19,8 | eluálópuffer | 4,0 | 3,8 B | 0,7 | 1,2 | 32 |
| 22,3 | eluálópuffer | 3,0 | 5,7 C | 0,9 | 2,9 | 50 |
| 19,8 | 4 M guadinin* HCI | 7,3 | 11,3B | 11,3 | 4,9 | 43 |
| 22,3 | 0,1 M foszfátpuffer | 12,0 | 4,8 B | 2,0 | 1,3 | 28 |
A HSA elleni antitest,
B HSA elleni antitest és HSA 1:1 arányú komplexe,
C HSA elleni antitest és HSA 1:2 arányú komplexe,
D emberi IgG elleni antiest és emberi IgG 1:1 arányú komplexe, * guanidin-hidroklorid.
4. példa 20
Antigének és antitestek biológiai aktivitásának (kötőképességének) kimutatása az anti-HSA/HSAmodell segítségével az immunkomplexek felbomlását okozó körülmények közötti immobilizálás után (7. táblázat) 25
Az 1. és a 3. példában leírt módon a báziskatalizissel aktivált PNB-karbonát-sepharose-6FF-t antiHSA/HSA-hoz kapcsoltuk a megadott elúciós körülmények között (pH 3,0, pH 4,0, 4 M-os guanidin-hidroklorid*). Miután az oszlopot mostuk, HSA-t vagy HSA elleni antitestet vittünk fel a kötésre alkalmas pufferben. Az oszlop PBS-sel való ismételt mosása után elvégeztük az eluálást (pH 2,0) és a fehérjekoncentráció fotometriás meghatározását.
Ezekkel a modellkísérletekkel azt mutattuk ki, hogy az immunkomplexekből (anti-HSA/HSA) származó antigén (HSA) és antitestek (HSA elleni antitestek, a továbbiakban: anti-HSA), amelyeket egy hordozón im30 mobilizáltunk a komplexet felbontó körülmények között, megtartják kötőképességüket. Az immunkomplexekből származó immobilizált HSA mindig megkötötte az antiHSA-t, amely, újra felszabadítva ismét nagy reaktivitással kötődött a HSA-hoz az ELISA-mérések tanúsága szerint. Feltételezve, hogy 1 mól HSA 1 mól antiHSA-t köt, 2,1 mg anti-HSA-t kötő, immunkomplexből származó 0,9 mg HSA-t immobilizáltunk 1 ml gélen (3. példa). Hasonló eredményeket sikerült reprodukálni az 5., 7., 13. és 16. kísérletben is. HSA elleni, nyúlban termeltetett IgG-t, amely hasonlóképpen immunkomplexekből származott, szintén hatékonyan immobilizáltunk a modell szerint, megadott standard kapcsolási körülményeket alkalmazva (a kapcsolás sikeréről nyúl eredetű IgG elleni IgG segítségével győződhetünk meg), mégis, a kapcsolást ebben az esetben nyilvánvalóan befolyásolja a molekula egy régiója, ami a HSA kötődése számára szférikus gátlást eredményez. Maguk az antitestek megtartják biológiai aktivitásukat.
7. táblázat
Antigének és antitestek biológiai aktivitásának (kötőképességének) kimutatása az anti-HSA/HSA-modell segítségével az immunkomplexek felbomlását okozó, megadott körülmények közötti - báziskatalízissel aktivált ONBkarbonát-sepharose-6FF membránon való - immobilizálás után
| Az immobilizálás körülményei* | 1 ml gélre felvitt fehérje | Koncentráció (pg/ml) | A kötődés körülményei | Mosás PBS-sel | A kötési kapacitás (pg/ml gél) | |
| 1. | 10,8 pmol antiHSA/HSA 1:1, pH 3 2,3 mg/ml | 3,0 mg HSA | 1055 | 0,3 ml/perc, 43 perc keringetés | 0,28 ml/perc 43 perc | 100-200 |
| 2. | 10,8 pmol antiHSA/HSA 1:1, pH 3 2,3 mg/ml | 13,4 mg HSA | 937 | 0,5 ml/perc, 120 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 100-200 |
| 3. | 10,8 pmol antiHSA/HSA 1:1, pH 3 2,3 mg/ml | 3,7 mg antiHSA | 164 | 0,5 ml/perc, 135 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 2100 (=0,9 mg HSA) |
| 4. | 19,8 μίτιοΙ antiHSA 1:1, pH 7 1,1 mg/ml | 6,1 mg HSA | 531 | 0,5 ml/perc, 120 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 100-200 |
HU 226 017 Β1
7. táblázat (folytatás)
| Az immobilizálás körülményei* | 1 ml gélre felvitt fehérje | Koncentráció (pg/ml) | A kötődés körülményei | Mosás PBS-sel | A kötési kapacitás (pg/ml gél) | |
| 5. | 19,8 pmol antiHSA/HSA 1:1, pH 4 1,2 mg/ml | 4,2 mg antiHSA | 368 | 0,5 ml/perc, 180 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 1211 (=0,5 mg HSA) |
| 6. | 19,8 μιηοΙ antiHSA/HSA 1:1,4 M guanidin-hidrokloridban 4,9 mg/ml | 8,3 mg HSA | 578 | 0,5 ml/perc, 90 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | nyomokban |
| 7. | 19,8 pmol antiHSA/HSA 4 M guanidin-hidrokloridban 4,9 mg/ml | 7,3 mg antiHSA | 470 | 0,5 ml/perc, 180 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 4714 (=2,1 mg HSA) |
| 8. | 19,8 pmol antiHSA/HSA 4 M guanidin-hidrokloridban 4,9 mg/ml | 5,1 mg antinyúl IgG | 360 | 0,5 ml/perc, 120 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 1977 (36%) |
| 9. | 10,8 μσιοΙ antiHSA/HSA 1:1, pH 3 2,3 mg/ml | 5.1 mg antinyúl IgG | 360 | 0,5 ml/perc, 120 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 480 (54%) |
| 10. | 19,8 pmol antiHSA 1:1, pH 7 1,1 mg/ml | 5,1 mg antinyúl IgG | 360 | 0,5 ml/perc, 120 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 2246 (100%) |
| 11. | 22 mmol anti-HSA 1:1, pH 3 2,3 mg/ml | 5,1 mg antinyúl IgG | 360 | 0,5 ml/perc, 120 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 2246 (48%) |
| 12. | 22,3 pmol antiHSA 1:1, pH 3 2,3 mg/ml | 13,8 mg HSA | 926 | 0,5 ml/perc, 120 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 100-200 |
| 13. | 22,3 pmol antiHSA/HSA 1:2, pH 3 2,9 mg/ml | 6,9 mg antiHSA | 477 | 0,5 ml/perc, 120 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 3586 (=1,6 mg HSA) |
| 14. | 22,3 pmol antiHSA/HSA 1:2, pH 3 2,9 mg/ml | 11,2 mg HSA | 784 | 0,5 ml/perc, 120 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 100-200 |
| 15. | 22,3 pmol antiHSA/HSA 1:1, pH 12 1,3 mg/ml | 6,8 mg HSA | 600 | 0,5 ml/perc, 70 perc keringetés | 0,5 ml/perc 60 perc | 100-200 |
| 16. | 22,3 pmol antiHSA/HSA 1:1, pH 12 1,3 mg/ml | 4,4 mg HSA | 424 | 0,5 ml/perc, 120 perc keringetés | 0,5 ml/perc 90 perc | 1579 (=0,7 mg HSA) |
a) A pmolban megadott mennyiségek az aktív csoportok számát jelzik /ml gélben.
A táblázatban alkalmazott rövidítések:
| anti-HSA | HSA elleni antitest (IgG) |
| anti-HSA/HSA | HSA elleni antitest (IgG) és HSA komplexe |
| antinyúl IgG | nyúl eredetű IgG elleni antitest |
5. példa
Lupus erythematosusban szenvedő beteg plazmájának affinitáskromatográfiája (standardeljárás)
Lupus erythematosusban szenvedő beteg plazmája hozzáférhető. Protein-A-oszlopot (Pharmacia) alkalmaztunk teljes mennyiségű γ-globulin kinyerésére. Az antitestek immobilizálását ONB-karbonát-aktivált sepharose-6FF-en végeztük (20 (pmol/ml).
HU 226 017B1
Pufferoldatok az immunadszorpcióhoz:
| PA-puffer, pH 7,0 | 1000 ml | A pH-t HCIdal vagy NaOH-dal állítottuk be |
| T rinátrium-citrát | 3,30 g | |
| Nátrium-acetátx3H2O | 5,45 g | |
| Nátrium-klorid | 4,9 g | |
| Dinátrium-hidrogén-fosz- fát | 2,91 g | |
| Kálium-dihidrogén-foszfát | 0,26 g | |
| PA-eluens, pH 2,2 | 1000 ml | A pH-t HCIdal vagy NaOH-dal állítottuk be |
| CitromsavxH2O | 6,12 | |
| Nátrium-citrát | 9, 00 g | |
| Mosópuffer: 3M-os NaCI, pH 7,0 | 1000 ml | A pH-t HCIdal vagy NaOH-dal állítottuk be |
| Trinátrium-citrát | 3,30 g | |
| Nátrium-acetátx3H2O | 5,45 g | |
| Nátrium-klorid | 175 g | |
| Dinátrium-hidrogén-fosz- fát | 2,91 g | |
| Kálium-dihidrogén-foszfát | 0,26 g | |
| Tween 20 | 0,5 g | |
| Citrátpuffer: 0,1 M, pH 2,2 | 250 ml | A pH-t HCIdal vagy NaOH-dal állítottuk be |
| Citromsav | 5,25 g |
A következő eljárásokat alkalmaztuk:
Egy protein-A-oszlopot (5 ml gél, Pharmacia) egyensúlyba hoztunk PA-pufferrel. Nagy sebességgel lecentrifugált friss plazma 20 ml-ét elegyítettük 1:2 arányban PA-pufferrel, és felvittük az oszlopra. A kromatográfiához egy Econo-rendszert alkalmaztunk (Bio-Rad). Egy ideig az oszlopon tartottuk a plazmát, majd újra felvittük, hogy teljes adszorpciót érjünk el. 5 oszloptérfogatnyi PA-val végzett intenzív mosás volt szükséges ahhoz, hogy eltávolítsuk a nem adszorbeálódott anyagot. A nem specifikusan kötődött fehérjéket 3 M NaCI-ot tartalmazó mosópufferrel távolítottuk el. Az immunkomplexekből származó immunglobulinok és fehérjék éles csúcsként eluálódtak 0,1 M citrátpufferben, 0,05% Tween 20 jelenlétében, pH 2,2 mellett. Az eluátum térfogata 6,5 ml volt. A fehérjekoncentráció UV-spektrofotometriával 280 nm-es hullámhossznál meghatározva 17,6 mg/ml-nek adódott. Az eluálás után közvetlenül az elkülönítve kinyert IgG-t és a fehérjéket az PNB-karbonát-aktivált „sepharose”-ra kapcsoltuk fel. Ebből a célból 6 ml gélt készítettünk a forgalmazó utasításai szerint, majd légtelenítve az eluátumhoz adtuk és 1 órán át rázattuk. Az oldott fehérjék pufferhatásának köszönhetően az eluátum pH-ja 3 és 4 között volt. A szabad kötéseket 1 M-os etanol-aminnal telítenünk kellett, 0,1 M borátpufferben, pH 8,0 mellett. A kötődés hatékonyságának meghatározása érdekében összehasonlítottuk a fehérje koncentrációját az egyesített, mosás után kapott oldatokban és a protein-A-eluátumban, és eredményként 57%-ot kaptunk. Alapos mosás után a gél készen állt az affinitáskromatográfiás kísérletekhez.
Ebből a célból 40 ml, páciensből származó plazmát lecentrifugáltunk, 1:2 arányban hígítottuk PA-val, majd két alkalommal átengedtük az oszlopon. A nem kötődött, vagy nemspecifikusan kötődött anyagot többszörös mosással eltávolítottuk, mindig 10 oszloptérfogatnyi PA-t, majd mosópuffert és újra PA-t alkalmazva. A specifikusan kötődött fehérjéket 0,1 M citrátpufferrel eluáltuk, pH 2,2-n (1. ábra).
A plazmafehérjéket és a kromatográfiásan nyert frakciókat standardeljárásokkal analizáltuk SDS-poliakrilamid-gélelektroforézis (SDS-PAGE) során (Miniprotean II, Bio-Rad). A gélek gradiensgélek voltak, a monomer koncentrációja 10% és 25% között változott. A festést coomassie brilliant blue R-250-nel végeztük (2. ás 3. ábra).
A 2. ábrán látható, hogy a protein-A-eluátumban az antitesteken kívül további fehérjék is találhatók. Immobilizálásuk után helyzetük olyan, hogy specifikusan kötik a beteg plazmájából származó megfelelő komponenseket. A eluálás során kapott 2. csúcs (0,1 M citrátpuffer, pH 2,2) fehérjéi közül néhányat azonosítottunk az affinitáskromatográfia után PAGE segítségével. Immunglobulinokon és néhány nagyobb molekulatömegű fehérjén kívül 3 fehérje, amely a protein-A eluátumban csupán alig látható csíkként volt kimutatható, határozottan feldúsult (3. ábra). Relatív molekulatömegük kb. 40 kD.
6. példa
Sclerosis multiplexben szenvedő beteg plazmájának affinitáskromatográfiája A plazma kezelése, a protein-A eluálása és az eluált fehérjék kapcsolása az 5. példában leírtakkal azonos módon történt. Miután az adszorptíve kötött fehérjéket lemostuk az immunadszorbensről (1. csúcs,
4. ábra), a specifikusan kötött fehérjéket a mátrixból az elúciós puffer segítségével távolítottuk el, amely - a PAGE tanúsága szerint (5. ábra) - egy, főként immunglobulinokat tartalmazó fehérjekeverék.
7. példa
Rheumatoid arthritisben szenvedő beteg plazmájának affinitáskromatográfiája A plazma kezelése, a protein-A eluálása és az eluált fehérjék kapcsolása az 5. példában leírtakkal azonos módon történt. Miután az adszorptíve kötött fehérjéket lemostuk az immunadszorbensről (1. csúcs, 6. ábra), a specifikusan kötött fehérjéket a mátrixból az elúciós puffer segítségével távolítottuk el, amely - a
HU 226 017 Β1
PAGE tanúsága szerint (7. ábra) - egy, főként immunglobulinokat tartalmazó fehérjekeverék.
Az alábbiakban megadjuk az ábrák rövid leírását.
1. ábra:
Páciens plazmájának standardeljárással készült elúciós profilja homológ antitestek és antigének sepharose-6FF-hez kapcsolásával készült oszlopon a plazma adszorpciója után.
A jelek a puffercserét jelzik a mosás és az eluálás kezdetekor (a mintafelvitelt nem jelöltük):
=mosópuffer; 2=0,1 M citrátpuffer, pH 2,2.
2. ábra:
A proetin-A-oszlopról eluált oldat poliakrilamid-gélelektroforézise az ONB-karbonát-aktivált „sepharose”hoz való kapcsolás után.
1, 2=5 vagy 10 μΙ anyag a kapcsolás előtt; 3=10 kD „vezető” standard; 4=y-globulin standard; 5, 6, 7, 8=mint 1-4, de kapcsolás után (azaz a nem felkötött anyag).
3. ábra:
A homológ plazma immunadszorbens oszlopon pH
2,2-nél végzett kromatográfiája során kapott eluátum poliakrilamid-gélelektroforézise.
1-7 és 9-15=csúcsok frakciói; 8, 17=10 kD-os fehérjemarker, 16=öblítés.
4. ábra:
Páciens plazmájának standardeljárással készült elúciós profilja homológ antitestek és antigének sepharose-6FF-hez kapcsolásával készült oszlopon a plazma adszorpciója után.
A jelek a puffercserét jelzik a mosás és az eluálás kezdetekor (a mintafelvitelt nem jelöltük):
1=mosópuffer; 2=0,1 M citrátpuffer, pH 2,2.
5. ábra:
A homológ plazma immunadszorbens oszlopon pH
2,2-nél végzett kromatográfiája során kapott eluátum poliakrilamid-gélelektroforézise.
= 10 kD-os standard; 2=Y-globulin standard; 3=csúcsnak megfelelő frakció (2. csúcs, 4. ábra); 4=a csúcsfrakció amicon centrifree®-n keresztüli párologtatás után.
6. ábra:
Páciens plazmájának standardeljárással készült elúciós profilja homológ antitestek és antigének sepharose-6FF-bez kapcsolásával készült oszlopon a plazma adszorpciója után.
A jelek a puffercserét jelzik a mosás és az eluálás kezdetekor (a mintafelvitelt nem jelöltük):
1=mosópuffer; 2=0,1 M citrátpuffer, pH 6-0, Tween; 3=0,1 M citrátpuffer, pH 2,2.
7. ábra:
A homológ plazma immunadszorbens oszlopon pH
2,2-nél végzett kromatográfiája során kapott eluátum poliakrilamid-gélelektroforézise.
1-4=mosópufferből származó fehérjék; 5-6=csúcsnak megfelelő frakciók (3. csúcs, 6. ábra); 7=10 kD-os standard; 8=y-globulin standard.
Claims (10)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Páciensre specifikus immunadszorbens, amely páciensek patológiás jelentőségű immunfaktorainak immunkomplexeiből elkülönített antigéneket és/vagy antitesteket tartalmaz, aktivált szilárd hordozóanyagra kovalensen kötött formában.
- 2. Az 1. igénypont szerinti, páciensre specifikus immunadszorbens, amely az immunrendszer hibás szabályozása által okozott vagy fenntartott betegségekben szenvedő páciensekből elkülönített antigéneket és/vagy antitesteket tartalmaz.
- 3. Az 1. vagy a 2. igénypont szerinti, páciensre specifikus immunadszorbens, amely autoimmun betegségben vagy reakciók immunpatológiás állapotaiban szenvedő páciensekből elkülönített antigéneket és/vagy antitesteket tartalmaz, amely betegség vagy állapot többek között az alábbiak bármelyike lehet: rheumatoid arthritis, glomerulonephritis, lupus erythematosus, sclerosis multiplex, antifoszfolipid szindróma, érgyulladások, hisztoinkompatibilis transzplantátumrecipiensek állapota, idegrendszeri autoimmun betegségek, vagy fertőző betegségek következtében kialakult immunpatológiailag hibás szabályozással jellemezhető állapotok.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti, páciensre specifikus immunadszorbens, amely rheumatoid arthritis, lupus erythematosusban vagy sclerosis multiplexben szenvedő páciensből elkülönített antigént és/vagy antitestet tartalmaz.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti, páciensre specifikus immunadszorbens, amely felszínén elegendő immunkomplex-komponens kovalens megkötésére képes biokompatibilis anyaghoz van kötve.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti, páciensre specifikus immunadszorbens, amely sepharose-hoz vagy cellulózgyöngyökhöz van kötve.
- 7. Eljárás 1-6. igénypontok bármelyike szerinti, páciensre specifikus immunadszorbens előállítására, azzal jellemezve, hogy egy páciens véréből vagy más testfolyadékából, célszerűen cerebrospinális folyadékából immunkomplexeket izolálunk, azt aktív komponenseire - antitestekre és antigénekre - bontjuk, és ezeket a komponenseket kovalensen szilárd hordozóanyaghoz kötjük.
- 8. A 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az immunkomplexeket egyedi komponenseikre bontjuk savas vagy lúgos közeg, előnyösen pH 2 és pH 5 közötti vagy pH 10 és pH 12 közötti pH-jú közeg alkalmazásával és/vagy a közeghez adott só - például NaCI, MgCIz, LiCI, karbamid vagy guanidin-hidroklorid- alkalmazásával, és, adott esetben frakcionálás és adott esetben - egy meghatározott koncentráció felett- a komponensek disszociált állapotának fenntartására alkalmas só - például NaCI, MgCI2, LiCI, karbamidHU 226 017 Β1 vagy guanidin-hidroklorid - hozzáadása után, ismert módon, kovalensen szilárd hordozóhoz kapcsoljuk őket, pH 2 és pH 12 közötti tartományban.
- 9. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti, páciensre specifikus immunadszorbens alkalmazása extrakorporális apheresisre.
- 10. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti, pá ciensre specifikus immunadszorbens alkalmazása im munpatológiás jelentőségű endogén anyagok kivoná sára és további feldolgozására.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19538641A DE19538641C2 (de) | 1995-10-05 | 1995-10-05 | Patientenspezifische Immunadsorber für die extrakorporale Apherese und Verfahren für deren Herstellung |
| PCT/DE1996/001910 WO1997014964A2 (de) | 1995-10-05 | 1996-10-03 | Patientenspezifische immunadsorber für die extrakorporale apherese und verfahren für deren herstellung |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP9900462A2 HUP9900462A2 (hu) | 1999-05-28 |
| HUP9900462A3 HUP9900462A3 (en) | 2001-03-28 |
| HU226017B1 true HU226017B1 (en) | 2008-03-28 |
Family
ID=7775080
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9900462A HU226017B1 (en) | 1995-10-05 | 1996-10-03 | Patient-specific immunoadsorbents for extracorporal apheresis and methods of producing said immuno-adsorbers |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6866846B1 (hu) |
| EP (1) | EP0859957B1 (hu) |
| JP (1) | JP3930564B2 (hu) |
| AT (1) | ATE215697T1 (hu) |
| AU (1) | AU727699B2 (hu) |
| CA (1) | CA2234088A1 (hu) |
| DE (2) | DE19538641C2 (hu) |
| DK (1) | DK0859957T3 (hu) |
| HU (1) | HU226017B1 (hu) |
| NO (1) | NO321159B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ330102A (hu) |
| PL (1) | PL184541B1 (hu) |
| RU (1) | RU2167705C2 (hu) |
| WO (1) | WO1997014964A2 (hu) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19538641C2 (de) * | 1995-10-05 | 2000-09-21 | Privates Inst Bioserv Gmbh | Patientenspezifische Immunadsorber für die extrakorporale Apherese und Verfahren für deren Herstellung |
| US6620382B1 (en) * | 1998-05-22 | 2003-09-16 | Biopheresis Technologies, Llc. | Method and compositions for treatment of cancers |
| US8197430B1 (en) * | 1998-05-22 | 2012-06-12 | Biopheresis Technologies, Inc. | Method and system to remove cytokine inhibitor in patients |
| AU4860600A (en) * | 1999-06-03 | 2000-12-28 | Advanced Extravascular Systems | One step removal of unwanted molecules from circulating blood |
| AU1267501A (en) * | 1999-09-07 | 2001-04-10 | Bioserv Ag | Novel autogenous vaccines used to obtain an immune tolerance |
| US8865172B2 (en) | 2000-05-08 | 2014-10-21 | Advanced Extravascular Systems, Inc. | Method for reducing the number of unwanted molecules in bodily fluids |
| DE10036742A1 (de) * | 2000-07-27 | 2002-02-21 | Aesku Lab Diagnostika | Vorrichtung zur Behandlung von Immunerkrankungen |
| AT410636B (de) * | 2001-03-23 | 2003-06-25 | Igeneon Krebs Immuntherapie | Verfahren zur herstellung eines impfstoffes |
| WO2003012396A2 (en) * | 2001-08-01 | 2003-02-13 | Chauhan Anil K | Immune complexes |
| JP2008511340A (ja) * | 2004-04-30 | 2008-04-17 | バイオフェレシス テクノロジーズ， インコーポレイテッド | 患者において可溶性ｔｎｆｒ１、可溶性ｔｎｆｒ２、および可溶性ｉｌ２を除去する方法およびシステム |
| DE102004037475A1 (de) * | 2004-07-30 | 2006-03-23 | Heinrich, Hans-Werner, Prof. Dr. | Filtersystem zur membrangetrennten, adsorptiven Behandlung partikelhaltiger Flüssigkeiten |
| US20060159680A1 (en) * | 2005-01-14 | 2006-07-20 | Smith Henry J | Targeted apherisis for the treatment of rheumatoid arthritis |
| EP2021025B1 (en) * | 2006-05-12 | 2016-08-17 | ITH Immune Therapy Holdings AB | Method and means for treating inflammatory bowel disease |
| WO2008001802A1 (fr) * | 2006-06-27 | 2008-01-03 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Substrat pour traitement de fluide biologique |
| DE102008025965A1 (de) | 2008-05-30 | 2009-12-03 | Heinrich, Hans-Werner, Prof. Dr. | Verfahren zur Isolierung von Zellen und Krankheitserregern aus Körperflüssigkeiten |
| WO2010029317A2 (en) | 2008-09-10 | 2010-03-18 | Ibd Column Therapies International Ab | Treating inflammatory conditions |
| US8979787B2 (en) * | 2011-01-20 | 2015-03-17 | Henry John Smith | Treatment of pre-eclampsia using targeted apheresis |
| US20130068691A1 (en) * | 2011-08-05 | 2013-03-21 | Henry John Smith | Targeted apheresis for the treatment of rheumatoid arthritis and immune disorders |
| NZ700025A (en) * | 2012-02-15 | 2018-07-27 | Biocon Ltd | A process for detection and optional quantification of an analyte |
| US9717841B2 (en) | 2012-09-11 | 2017-08-01 | Gary L. McNeil | Closed-circuit device and methods for isolation, modification, and re-administration of specific constituents from a biological fluid source |
| EP3477300A1 (de) * | 2017-10-25 | 2019-05-01 | Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG | Zellulose-basierter immunadsorber |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3964467A (en) * | 1973-01-30 | 1976-06-22 | Bio Response Inc. | Methods and apparatus for augmentation of the production of anti-bodies in animals and humans and the collection thereof |
| US4551433A (en) * | 1981-05-18 | 1985-11-05 | Genentech, Inc. | Microbial hybrid promoters |
| US4551435A (en) * | 1983-08-24 | 1985-11-05 | Immunicon, Inc. | Selective removal of immunospecifically recognizable substances from solution |
| US4681870A (en) * | 1985-01-11 | 1987-07-21 | Imre Corporation | Protein A-silica immunoadsorbent and process for its production |
| WO1986007152A1 (en) * | 1985-05-31 | 1986-12-04 | Biostar Medical Products, Inc. | Method and article for detection of immune complexes |
| DE3750544D1 (de) * | 1986-11-21 | 1994-10-20 | Imre Corp | Antigen-spezifisches Entfernen von zirkulierenden Immunokomplexen. |
| US5122112A (en) * | 1986-11-21 | 1992-06-16 | Imre Corporation | Antigen-specific removal of circulating immune complexes |
| DE19538641C2 (de) * | 1995-10-05 | 2000-09-21 | Privates Inst Bioserv Gmbh | Patientenspezifische Immunadsorber für die extrakorporale Apherese und Verfahren für deren Herstellung |
-
1995
- 1995-10-05 DE DE19538641A patent/DE19538641C2/de not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-10-03 EP EP96945812A patent/EP0859957B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-10-03 WO PCT/DE1996/001910 patent/WO1997014964A2/de active IP Right Grant
- 1996-10-03 HU HU9900462A patent/HU226017B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1996-10-03 AU AU17162/97A patent/AU727699B2/en not_active Ceased
- 1996-10-03 AT AT96945812T patent/ATE215697T1/de active
- 1996-10-03 RU RU98108614/14A patent/RU2167705C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-10-03 PL PL96325897A patent/PL184541B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-10-03 DK DK96945812T patent/DK0859957T3/da active
- 1996-10-03 CA CA002234088A patent/CA2234088A1/en not_active Abandoned
- 1996-10-03 JP JP51540697A patent/JP3930564B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-04-04 DE DE19714913A patent/DE19714913B4/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-10-03 NZ NZ330102A patent/NZ330102A/en unknown
-
1998
- 1998-04-03 US US09/054,888 patent/US6866846B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-03 NO NO19981530A patent/NO321159B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO981530D0 (no) | 1998-04-03 |
| RU2167705C2 (ru) | 2001-05-27 |
| ATE215697T1 (de) | 2002-04-15 |
| PL184541B1 (pl) | 2002-11-29 |
| EP0859957A2 (de) | 1998-08-26 |
| US6866846B1 (en) | 2005-03-15 |
| NZ330102A (en) | 2001-02-23 |
| DK0859957T3 (da) | 2002-07-29 |
| PL325897A1 (en) | 1998-08-17 |
| JP3930564B2 (ja) | 2007-06-13 |
| DE19714913B4 (de) | 2013-04-18 |
| EP0859957B1 (de) | 2002-04-03 |
| NO981530L (no) | 1998-06-04 |
| JP2000501949A (ja) | 2000-02-22 |
| NO321159B1 (no) | 2006-03-27 |
| HUP9900462A2 (hu) | 1999-05-28 |
| DE19538641A1 (de) | 1997-04-17 |
| WO1997014964A2 (de) | 1997-04-24 |
| DE19538641C2 (de) | 2000-09-21 |
| AU727699B2 (en) | 2000-12-21 |
| AU1716297A (en) | 1997-05-07 |
| WO1997014964A3 (de) | 1997-06-12 |
| DE19714913A1 (de) | 1998-10-08 |
| HUP9900462A3 (en) | 2001-03-28 |
| CA2234088A1 (en) | 1997-04-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU226017B1 (en) | Patient-specific immunoadsorbents for extracorporal apheresis and methods of producing said immuno-adsorbers | |
| JPS608865B2 (ja) | 生体高分子、低分子物質を可逆的または不可逆的に固定し得る陽イオン性物質 | |
| JP2001525200A (ja) | 血液からβ−２ミクログロブリンを除去する方法 | |
| WO1997014964A9 (de) | Patientenspezifische immunadsorber für die extrakorporale apherese und verfahren für deren herstellung | |
| CN111741783A (zh) | 治疗与补体因子相关的疾病的体外装置和方法 | |
| WO2001074420A1 (fr) | Adsorbants pour proteines de la famille hmg et colonne de purification de liquide organique | |
| JPH0133446B2 (hu) | ||
| US20220088279A1 (en) | Extracorporeal devices for methods for treating diseases associated with anti-neutrophil cytoplasmic antibodies | |
| JP3897985B2 (ja) | フィブリノーゲンおよび／またはフィブリンの濃度を減少させるための吸着剤を用いた吸着装置の製造 | |
| JP3926573B2 (ja) | フィブリノーゲンおよび／またはフィブリンの濃度を減少させるための吸着剤の製造法、吸着剤、および吸着装置の製造のための吸着剤の使用 | |
| US20020146413A1 (en) | System for treating patient with bacterial infections | |
| JP2777604B2 (ja) | 体液処理用吸着材 | |
| JPH02149341A (ja) | 血清アミロイドｐ蛋白用吸着体 | |
| Weber et al. | Extracorporeal removal of proinflammatory cytokines by specific adsorption onto microspheres | |
| Ostlund Jr | Immunosorbent Chemistry: A Study of Agarose‐Based Column Sorbents for the Removal of Low‐Density Lipoprotein (LDL) from Blood | |
| US6309999B1 (en) | Process for the preparation of an immunoadsorbent matrix | |
| JP2000237585A (ja) | 医療用吸着材料 | |
| Weber et al. | Specific blood purification by means of antibody-conjugated magnetic microspheres | |
| US20020146412A1 (en) | Method of treating patients with bacterial infections | |
| JPH09504532A (ja) | クロマトグラフィー法による第８因子を含むウィルス不活性化分画の製造方法 | |
| JPH0126709B2 (hu) | ||
| Piskin | Potential sorbents for medical and some related applications | |
| CA3179750A1 (en) | Compositions and methods for simplified high efficiency isolation of proteins | |
| JPH0233265B2 (hu) | ||
| Wang | Ion Exchange Resin in Hemoperfusion |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |