CN111741783A - 治疗与补体因子相关的疾病的体外装置和方法 - Google Patents

Abstract

本公开涉及用于患有与补体因子相关的疾病的患者的体外治疗的装置。该装置适于从有需要的患者的血液或血浆中去除所述补体因子。本公开还涉及体外回路，其包括用于治疗患有与补体因子相关的疾病的患者的此类装置和方法。

Description

治疗与补体因子相关的疾病的体外装置和方法

相关申请的交叉引用

根据35 U.S.C.§119，本申请要求于2018年2月13日提交的美国专利申请序列号15/895,551的优先权，其全部公开内容通过引用并入本文。

技术领域

本公开涉及用于患有与补体因子相关的疾病的患者的体外治疗的装置。该装置适于从有需要的患者的血液或血浆中去除所述补体因子。本公开还涉及体外回路，其包括用于治疗患有与补体因子相关的疾病的患者的此类装置和方法。

背景技术

长期以来，人补体系统的治疗干预被认为是治疗各种缺血性、炎性和自身免疫性疾病的有前途的策略。有趣的是，目前只有少数药物，例如依库丽单抗，涵盖相对罕见的疾病，并且是在孤儿药物法规的帮助下开发的。然而，对于许多更常见的炎性或自身免疫性疾病，尚无补体药物可用，其部分原因是开发基于抗体的药物存在困难，这些药物结合了用于静脉内体内给药的药物的所有必要特征，例如稳定性、副作用或血浆半衰期。此外，使用所述药物的当前可用治疗的费用很高。因此，非常需要当前补体特异性治疗选择的任何扩展。

补体因子是构成个体的免疫系统的一部分的补体系统的成分。补体系统由许多不同的血浆蛋白组成，它们彼此反应以破坏病原体和/或诱导一系列有助于抵抗感染的炎症反应。一些补体蛋白仅通过蛋白水解裂解而被激活，并且可以被称为无活性的前体。这些前体广泛分布在人体的液体和组织中，而不造成任何有害影响。在感染部位，前体蛋白被局部激活并引发一系列非常有效的炎症事件，最终导致形成膜攻击复合物(MAC)，其在靶细胞的细胞膜上产生孔洞并造成其破坏(图1和图2)：参见Janeway CA Jr,Travers P,Walport M,et al.Immunobiology:The Immune System in Health and Disease.5th edition.NewYork:Garland Science；(2001)；以及The complement system and innate immunity；Horiuchi et al.,Inflammation and Regeneration(2016)36:11。

存在三种不同的途径，通过这些途径，补体激活由不同的分子触发以进行启动：凝集素途径(与甘露聚糖结合的凝集素途径)，其由与甘露聚糖结合的凝集素(一种血清蛋白)与细菌或病毒上的含有甘露糖的碳水化合物的结合触发；经典的抗体-抗原复合物途径，其由C1q与抗体-抗原复合物的结合触发，因此是先天性和适应性免疫的效应子机制之间的重要联系；替代途径在自发激活的补体成分与病原体表面结合时被启动(见图1)。每个途径都遵循一系列的反应序列，以生成一种称为C3转化酶的蛋白酶，该酶裂解非常核心的补体因子C3，以生成大量的C3b，其作为调理素和补体系统的重要效应子分子；以及C3a，其是炎症的肽介质。C3b还与C3转化酶结合以形成C5转化酶，该酶产生非常重要的炎症肽介质C5a；和较大的片段C5b，其有助于补体激活的后期事件，即MAC的形成。因此，由于C3和C5在补体激活中的关键位置，它们构成了影响级联的两个最有吸引力的靶标。然而，其他补体因子例如C1、C2和C4，由于它们在系统中的作用，形成同样有趣的靶标。

表I显示了最终形成MAC的终末补体成分及其功能(来自Janeway et al.(2001))。图1还显示了它们参与MAC形成和补体途径的示意图。

表I：形成膜攻击复合物的补体因子

结果，通过触发的酶级联发生补体激活。在这样的级联中，通过每个连续的酶促或裂解反应，在途径开始时扩增了少量补体蛋白的活化，从而导致了非常大的补体反应的快速产生。在健康的有机体中，有许多调节机制来防止不受控制的补体激活，这对于具有导致这种潜在的炎症和破坏性作用能力的途径至关重要。在控制CP中的C1r和C1s活化以及LP中的MASP和凝血系统中的几种酶方面，这一点很重要。这些机制在以下文献中进行了详细描述：Janeway CA Jr,Travers P,Walport M,et al.Immunobiology:The Immune System inHealth and Disease.5th edition.New York:Garland Science；(2001).The complementsystem and innate immunity；Horiuchi et al.,Inflammation and Regeneration(2016)36:11。同时，众所周知，许多疾病如上所述与补体激活的失调有关，通常与级联的异常或失控的、失调的激活或补体功能的执行不充分有关，这通常是遗传缺陷或途径中一种或多种成分受损的结果。已经描述了人类中所有可溶性补体因子的缺陷(参见例如H.D.Ochs et al.,“Primary Immunodeficiency Diseases:A Molecular&CellularApproach”,Oxford University Press,2006,Table 42.2and pages 593-600)。

经典途径中的缺陷可以与补体因子C1q、C1r、C1s、C4、C2、C1-Inh中的一个或多个相关。C1q、C1r、C1s或C4的主要缺乏与系统性红斑狼疮(SLE)或类风湿性关节炎(RA)的发展密切相关，这被认为部分是由于补体无法清除免疫复合物和垂死的细胞。当小复合物与脾脏和肝脏中巨噬细胞上的补体受体结合时，它们就会从循环中清除。没有补体，复合物可能会变得太大而无法容易地清除。生成的聚集体可以激活替代途径，从而使C3与再溶解的复合物一起沉积在基质中，而这些再溶解的复合物可以通过肝脏和脾脏的清除来处理。否则，这些大的复合物将不再可溶，并在组织中形成沉积物并成为炎症部位。垂死的细胞，如果不被非炎性CP活性清除，可能会成为改变的自身抗原的来源，其具有诱导自身抗体的可能性。

C2缺乏症是白种人群中最常见的补体缺乏症，纯合C2缺乏症患者的频率估计在1/10,000到1/20,000之间。与健康对照相比，SLE患者中C2缺乏的比例略高。在原发性免疫缺陷中，C2缺乏症发现于反复感染的幼儿中，主要是肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)或类似生物的上呼吸道感染。这些孩子经常有频繁的耳部感染和感冒。

遗传性血管性水肿(HAE)是由CP控制蛋白C1-Inh缺乏引起的疾病。这些个体在四肢、面部、嘴唇、喉部或胃肠道反复肿胀。患者在患处有饱胀感，但没有疼痛或瘙痒，除了腹部肿胀的人(他们经常经受急性腹痛)之外。后两个表现最令人担忧，因为如果气道阻塞会导致窒息，并且腹部区域的急性肿胀会产生剧烈疼痛，通常会导致探查术。产生肿胀的机制不涉及补体酶，而是涉及产生激肽的途径。通过该途径产生的舒缓激肽是导致组织通透性变化(其引起肿胀)的原因。急性治疗包括C1抑制剂(C1-INH，

)或替代疗法；艾卡拉肽(一种激肽释放酶抑制剂)；和艾替班特(一种舒缓激肽-2-受体拮抗剂)。预防性治疗包括减弱的雄激素和C1抑制剂。

还已知替代途径(AP)控制蛋白的缺乏。H因子的缺乏特异性地与多种症状有关。H因子的完全缺乏会导致AP的激活不受控制，并且会发生C3的消耗。由于C3水平低或不存在，这种形式的H因子缺乏症与晚期成分缺乏症的表现相似。该补体控制蛋白的作用对于维持许多组织的健康至关重要。除细菌感染外，H因子的缺乏或功能障碍以及由此导致的AP失调还与各种形式的肾脏疾病有关，包括非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)以及与年龄相关的黄斑变性(AMD)，尽管如下文所述这些疾病还与其他补体缺乏症相关。

特别过度或失调的补体激活会导致许多炎症、自身免疫和退行性疾病，这些疾病会对个体产生重大和威胁生命的影响。这些疾病中的一些是直接由补体因子、调节剂或受体的遗传变化、突变或多态性引起的(Morgan et al.Nature Reviews(2015)14:857-877)。例如，与原发性失调有关的疾病引起上述aHUS以及血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、血栓性微血管病、C3肾小球病、移植排斥和阵发性夜间血红蛋白尿(PNH)。与例如C5a相关的疾病包括但不限于aHUS、PNH、TTP、移植排斥、败血症、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、哮喘、系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎和慢性阻塞性肺部疾病(COPD)，参见Marc et al.Scand JImmunol(2010)71:386-91。近年来，对C3和C5(或其裂解片段C5a)二者进行了研究，因为它们已成为解决与补体失调有关的疾病的主要靶标。

人补体C5是分子量为190kDa的β₁-球蛋白。它由两条不同的多肽链组成，一条115kDA的α链和一条75kDa的β链。C5转化酶将C5裂解为C5a和C5b片段，这是形成膜攻击复合物的第一步。补体因子C5a指导肥大细胞脱粒、多形核白细胞趋化性和平滑肌收缩，再次参见图2。C5b-9复合物的组装由C5b与C6和C7结合的能力引发。尤其是，将C5a及其前体补体因子C5以及补体因子C3(Frémeaux-Bacchi et al.,Blood(2008)112:4948-4952)与aHUS一起进行了研究，该疾病通常表现为微血管性溶血性贫血(MAHA)、血小板减少症和急性肾功能衰竭，在严重情况下伴有红细胞破碎(血细胞增多症)，参见

et al.,TherapeuticApheresis and Dialysis(2017)21:304-319。aHUS的非典型形式与Shiga毒素无关，且该病症也不是血栓性血小板减少性紫癜(TTP)。

到目前为止，基本上有两种方法可以治疗aHUS或减缓aHUS的症状。血浆疗法已被用作一种治疗选择，其中血浆置换似乎比血浆输注更有效，尤其是在具有完全突变的H因子功能异常(CFH)的患者中。然而，血浆疗法似乎对于治疗具有膜辅因子蛋白突变的aHUS无效(Loirat et al.,Semin Thromb Hemost(2010)36:673-81)。另外，这种治疗是昂贵的，非常复杂并且与其他健康风险相关联，并且给患者带来负担。抗补体药物已经在治疗上述疾病方面获得了相当大的关注。依库丽单抗(Soliris；Alexion Pharmaceuticals,Inc.,Cheshire,CT)是一种人源化单克隆抗体，其阻止终末补体蛋白C5裂解为炎性C5a蛋白和C5b(裂解性C5b-9复合物的前体)，并且目前是唯一被批准的aHUS治疗。依库丽单抗已被证明在aHUS中是安全有效的(Cofiell et al.,Blood(2015)125:3253-3262)，并显著降低C5a和sC5b-9水平。依库丽单抗是一种高亲合力的人源化单克隆抗C5抗体，它通过与C5结合以阻断C5裂解为C5a和C5b的方式来阻断终末补体活性(WO 1995/029697 A1)。各种现有技术出版物涉及针对C5的抗体，并且通常以抑制C5α链转化为C5a和C5b的能力为特征。现有技术参考文献还描述了与该补体因子有关的几种疾病以及向患有与补体激活的失调有关的疾病的患者施用这种药物的方法(参见US 2012/0009184 A1、WO 2011/109338 A1、WO 2005/110481 A2、WO 2011/137395 A1、WO 2008/030505 A2、WO 2010/054403 A1、WO 2015/134894 A1、WO 2015/021166 A2、WO 2005/074607 A2、WO 2007/106585 A1、WO 2008/069889 A2、WO 2016/209956 A1、WO 2017/062649 A1、WO 2017/075325 A1、WO 2017/044811 A1、WO 2016/200627 A1、WO 2007/056227 A2、WO 2003/015819 A1、WO 2014/124227 A1、WO 2015/099838 A2)。

长期以来尝试开发除依库丽单抗外的补体C5激活的抑制剂。这些抑制剂靶向C5上游的因子，包括C5转化酶，补体成分C5、C5a和C5b以及C5a受体(图2)。已经积极地开发了各种类型的抗体和化合物，例如肽或非肽，并且这些物质充当补体成分C5和C5a的抑制剂以及C5a受体的拮抗剂。

迄今为止，仅提供了诸如依库丽单抗的药物来治疗与补体因子相关的疾病。抗补体药物具有影响上述生理作用的每一个和全部的潜力，并且不可避免的是，阻断任何补体途径的药物会增加感染的风险，无论是非选择性的还是针对某些类别的生物体。另一个主要问题是剂量；大多数补体蛋白在血浆中丰富并且快速转换，因此抑制剂的足够剂量可能具有挑战性。因此，很明显，会需要大剂量的补体靶向药物并频繁给药以在例如C3水平上阻断补体。例如，用于预防遗传性血管性水肿(HAE)的Cinryze(血浆来源的C1抑制剂；ShirePharmaceuticals)剂量为每3天静脉注射1,000单位(100-250mg)；成人PNH的依库丽单抗维持剂量为每2周900mg，而在非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)中，维持剂量为每2周1200mg。非人类灵长类中的研究支持这一点：5mg/kg静脉剂量的FD特异性Fab(lampalizumab，以前称为FCFD4514S，一种人源化单克隆抗体的抗原结合片段，其可与补体因子D结合，Roche/Genentech)在仅3小时内抑制了替代补体途径(Loyet etal.J.Pharmacol.Exp.Ther.(2014)351:527–537)。这些相对较高且频繁的剂量可以与靶向细胞因子的药剂形成对比，后者在疾病中以低得多的水平重新(de novo)释放；例如，肿瘤坏死因子(TNF)-特异性单克隆抗体(mAh)阿达木单抗(Humira；AbbVie)在每2周40mg的剂量下在类风湿性关节炎中有效。血浆C5浓度约为80mg/升，周转率约为60小时；因此，即使使用高剂量，在某些使用依库丽单抗治疗的患者中也可能发生突破性活性，因此需要监测血浆中的补体激活。由于C5在补体中没有限制，因此在C5阶段的级联抑制需要对C5的接近完全的阻断或消耗。剂量也很复杂，因为各个患者的血浆补体因子水平差异很大，并且由于许多因子是急性期反应物，在炎症中的合成显著增加，即使面对增加的消耗，这有时也会引起血浆水平升高。因此，可能需要大量药物来有效地抑制体内补体激活内的靶标蛋白。此外，由于其化学性质，抗补体剂在体内倾向于具有短的半衰期。这不一定是一种限制，因为在长期治疗中通常可以通过重复给药来实现完全覆盖。

为通常高剂量的抗补体药物(其大多数是抗体或肽)的给药提供替代方法将是一项重大进步，特别是对于患有伴发的ESRD并由于长期不可逆转的肾功能损失或由于与补体因子相关的疾病而需要进行血液透析的患者而言。此外，此类替代方案应具有成本效益，从而允许更频繁的治疗或在较不发达的国家也如此获得与补体因子相关的疾病的治疗。

关于例如aHUS，对于aHUS患者的治疗选择受到限制，并且如本文所述通常涉及血浆输注或血浆交换。在许多情况下，aHUS患者患有肾衰竭，这种肾衰竭通常变成慢性的。最近，在美国和欧洲国家已经开始使用

药物来治疗aHUS患者。尽管最终有了一种可用于治疗aHUS患者的药物，但仍需要降低这种治疗的复杂性和成本，尤其是在aHUS患者同时患有aHUS和肾衰竭并因此除了定期静脉注射

(依库丽单抗)之外还需要透析的情况下。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种血液处理装置，其适于从患有与涉及至少一种人补体因子和/或其任何裂解产物的急性或慢性不受控制的补体激活有关的疾病的患者的血液或血浆中去除此类补体因子和/或其裂解片段。

该装置被配置成通过将补体因子或其片段固定在与患者的血液或血浆接触的基质上而在体外从患者的所述血液或血浆中去除所述补体因子或其片段，并且其中所述基质包含载体和配体。载体可以由膜、树脂或无纺材料组成，并且配体是对靶标人补体因子或其片段具有高结合亲合力的配体。配体可以例如共价地、通过离子相互作用或络合而固定在载体上。

配体可以是靶向所选择的补体因子和/或其裂解片段的抗体或其抗原结合片段。配体也可以是肽适体。

该装置通常可以设计成中空纤维膜过滤器或透析器，其中该膜构成载体，在与血液接触的中空纤维的管腔侧结合有配体。膜可以是用于治疗肾衰竭的血液透析膜，其额外在其管腔侧用所述配体官能化；或者是血浆分离膜，其也额外在其管腔侧或者在中空纤维的外侧和/或其孔处用所述配体官能化。

本发明的一个目的是提供一种用于血液净化的血液透析仪，其可以用于同时治疗患有肾衰竭和由补体激活调节功能障碍引起的疾病的患者。根据一个方面，血液透析仪的中空纤维的管腔侧被针对靶标蛋白的配体官能化。

根据另一方面，其中膜具有允许靶标蛋白通过的孔径，例如血浆分离膜，中空纤维膜的外表面和/或孔被配体官能化。或者，将血浆分离中空纤维膜的管腔侧用配体官能化。

根据又一方面，该装置可以是用于治疗肾衰竭的血液透析过滤器，其中该过滤器还包括在至少一个端盖中的例如海绵形式的树脂或无纺材料，其被配体官能化以固定所述感兴趣的补体因子和/或其任何裂解片段。

该装置还可以是一个吸附筒，其包括选自树脂或无纺材料的基质，该树脂或无纺材料均被配体官能化，该配体被配置成结合或固定感兴趣的靶标补体因子和/或其任何裂解片段(靶标蛋白)。这种装置可以是用于血液处理的体外回路的构件，其被配置成提供血液透析、血液透析滤过、血液滤过或血浆去除(plasmapheresis)。该装置可以是血液回路内的唯一血液处理装置，或者可以位于例如血液透析、血液透析滤过或血液滤过回路中的透析器的上游或下游，或者可以在血液入口或出口直接连接至透析器，其中该装置被配置成用全血灌注。该装置还可以是体外血浆去除回路的构件，其中该装置被血浆或其成分灌注。该装置还可以用于治疗性血浆交换(TPE)治疗，其中将血浆从患者中去除，然后用替代物例如新鲜冷冻血浆来替换。根据本发明的一个方面，该装置用于在将供体的替代血浆施用于患者之前或期间，从其中去除靶标蛋白，例如补体因子。

该装置也可以是混合过滤器装置，其在过滤器的滤液空间中组合了中空纤维膜和基质(WO 2014/079680 A1)，其中所述基质由树脂组成，所述树脂用配体官能化以结合或固定并因此去除靶标补体因子和/或其至少一个裂解片段。这种过滤器可以是被配置成用于执行血液透析、血液透析滤过或血液滤过的体外回路的构件，其中所述过滤器位于用于血液透析、血液透析滤过或血液滤过的透析器的上游或下游，或者可以在没有这样的透析器的情况下用作所述回路内的唯一过滤器。这种装置可以与全血一起使用。

本发明的另一个目的是提供所述体外回路，其包括被配置成用于治疗与补体因子相关的疾病并且任选地用于治疗伴随肾衰竭的装置。

本发明的另一个目的是提供一种被配置成用于治疗患有与补体因子相关的疾病(例如补体级联失调)的患者的装置和体外回路以及治疗方法，其中患者正在经受此类疾病的急性期，需要立即和/或长时间对病症(例如败血症)进行密集治疗，并且其中补体功能失调不是由例如一个或几个补体因子的遗传性或获得性功能障碍引起的。这种治疗可以长时间进行，例如在CRRT中。本发明的另一个目的是提供一种装置和体外回路以及治疗方法，其被配置成治疗患有补体激活障碍(例如补体级联失调)的患者，该疾病是由例如至少一种补体因子的遗传性缺陷所引起的，并且其中患者正在接受维持治疗，包括用本发明的装置进行定期或间歇性的治疗，并任选与之一起或伴随进行肾衰竭的体外治疗，例如血液透析或HDF(血液透析滤过)。任选地，这种维持治疗与标准疗法组合进行，所述标准疗法包括给予至少一种用于治疗潜在疾病的药物。

本发明的另一个目的是提供一种治疗或减缓患者的与补体因子相关的疾病的至少一种症状的方法，其中该方法包括体外去除至少一种感兴趣的补体因子和/或其一种或多种裂解片段的步骤，这是通过使患者的血液或血浆流经被配置成结合或固定所述补体因子或其一种或多种裂解片段的基质，从而将其从患者的血液去除。这样的去除包括离体方法，其中例如在进一步使用之前，例如在用于输血之前，处理供体血液或供体血浆以去除这种靶标补体因子或其片段。

本发明的另一个目的是提供一种包含根据本发明的装置的体外血液透析、血液滤过或血液透析滤过回路，以用于治疗终末期肾脏疾病，其中患者不经受补体激活的任何遗传性或其他形式的慢性失调，但患有血液透析引起的临床并发症，包括慢性炎症、贫血以及增加的血栓形成和心血管疾病的风险，这些并发症是由于人工过滤器表面与血液成分的接触，或者换句话说，是由于生物材料表面触发的补体激活和随后的炎症和促凝反应。在血液透析治疗(包括HDF和HF)期间，通过伴随的去除补体因子抑制剂(例如C3或C5)来控制炎症触发因素，可以改善ESRD患者的生活质量，并可能有益地影响疾病状态。无论如何，通过根据本发明直接使血液透析仪的膜官能化或通过在透析仪的上游或下游采用诸如吸附剂筒之类的装置(其被配置成去除靶标补体蛋白并且其可以以成本有效的方式生产并且在标准血液透析治疗期间易于施用)，血液透析治疗的附加特征的可用性在成本控制是最重要的市场中将是特别重要的。

本发明的一个目的是提供一种用于治疗或预防慢性或急性炎性疾病的装置、体外回路和方法，其中所述装置被置于体外血液处理回路中并被配置成从患者的血液中去除靶标人补体因子。

本发明的另一个目的是提供一种治疗或减缓患者的与人补体因子5(C5)和/或C5a和/或C5b相关的疾病的至少一种症状的方法，其中该方法包括从患者的血液或血浆中体外去除C5、C5a或C5b、或C5和C5a二者、或C5和C5b二者、或C5a和C5b二者、或C5a、C5a和C5b的全部的步骤，这是通过使患者的血液或血浆流经被配置成固定所述成分及其组合的基质进行的。经常与其他关键补体因子(例如C3或C5及其任何片段)相关的所涉及的疾病包括但不限于aHUS、PNH、ANCA引起的肾小球肾炎(Schreiber et al.,JASN(2009):289–298)；慢性阻塞性肺疾病(COPD)(Marc et al.Scand J Immunol(2010)71:386-91)；呼吸窘迫综合征(ARDS)；肺损伤；类风湿关节炎、骨关节炎、牛皮癣、年龄相关性黄斑变性(AMD)、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)血管炎和缺血-再灌注损伤(Morgan et al.,Nat Rev Drug Discov.(2015)14:857-77)；多发性硬化症、脱髓鞘性周围神经病、动脉粥样硬化、多器官功能衰竭、局部缺血后再灌注引起的心肌损害、全身性炎症反应综合征(SIRS)、多器官功能障碍综合征(MODS)、败血性休克、中毒性休克综合征、败血症综合征(US 2012/0009184 A1)；Degos病(WO 2011/109338 A1)；抗神经节苷脂或抗糖脂抗体介导的神经病(急性运动性轴索神经病；急性炎性脱髓鞘性多发性神经病；Bickerstaffs脑干脑炎；急性眼瘫；共济失调的GuillainBarre综合征；咽颈臂无力；伴有抗糖脂抗体的慢性神经病综合征；抗MAG IgM副蛋白神经病；伴有抗二唾液酸抗体的慢性感觉共济失调神经病；IgM、IgG和IgA副蛋白神经病；伴随抗GM1和抗GM2抗体的运动神经病；慢性炎性脱髓鞘性神经病(CIDP)；多焦点运动神经病(MMN)；以及多灶性获得性脱髓鞘感觉和运动神经病(MADSAM))(WO 2008/030505 A2)；由包括病毒、细菌、真菌、朊毒体、蠕虫在内的感染物引起的补体介导的疾病(WO 2016/09483A2)；降低在哺乳动物移植受体中形成T细胞介导的同种异体移植血管病病变的可能性(WO2017/075325 A1)；癌(WO 2017/0246298 A1)；组织移植排斥；移植器官与受体的ABO不相容性以及移植器官的超急性排斥。

根据一个方面，可以通过根据本发明的涉及从患者的血液中去除例如C3和/或C5和/或C5a和/或C5b的装置和方法额外或可替代地解决的医疗需求或病症包括延长同种异体移植的细胞、组织或器官的存活时间和/或在移植之前和/或之后治疗接受ABO不相容移植的患者(WO 2007/103134 A2)，以及由于血液与人造表面接触(可能引起补体激活)而导致的炎症，例如血液透析引起的炎症和由心肺机(例如与冠状动脉旁路移植或心脏瓣膜置换的血管外科手术相关)、血浆去除等引起的炎症。

根据一个方面，本发明提供了一种治疗或减缓与人补体因子5(C5)和/或C5a相关的疾病的至少一种症状的方法，所述疾病选自由以下组成的疾病的组：aHUS、PNH、ANCA引起的肾小球肾炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、呼吸窘迫综合征(ARDS)；肺损伤；血液与人造表面接触引起的炎症，例如血液透析引起的炎症、心肺机或血浆去除引起的炎症、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)血管炎、全身性炎症反应综合征(SIRS)；多器官功能障碍综合征(MODS)；败血性休克；中毒性休克综合征；败血症综合征，并进一步提供了延长同种异体移植的细胞、组织或器官的存活时间和治疗在移植之前和/或之后接受ABO不相容移植的患者、组织移植排斥、移植器官超急性排斥的方法。根据另一方面，本文提供的装置和方法可用于单独或与其他疗法(例如，依库丽单抗的施用)组合来治疗aHUS。

本发明的另一个目的是提供一种治疗或减缓患者的与人补体因子3(C3)相关的疾病的至少一种症状的方法，其中该方法包括从患者的血液或血浆中体外去除C3以及任选额外地其裂解片段C3a和/或C3b中的至少一个的步骤，这是通过使患者的血液或血浆流经被配置成固定C3或C3a或C3b、或C3和C3a的组合、或C3和C3b的组合、或C3、C3a和C3b的组合的基质而进行的。除了上文针对C5和/或其片段提到的那些疾病以外，涉及C3和/或其任何片段的疾病具体包括但不限于aHUS(Frémeaux-Bacchi et al.,Blood(2008)112:4948-4952)、PNH、ANCA引起的肾小球肾炎(Schreiber et al.,JASN(2009):289-298).PMC.Web.2Feb.2018.)、血液透析引起的炎症(Reis et al.Immunobiology(2014)220:476482)和C3肾小球肾炎(Zhang et al.,Imunobiology(2015)220:993-998)。

本发明的一个目的是提供用于体外去除C3的装置，其包含坎普他汀(compstatin)或坎普他汀衍生物，例如APL-2或Cp40，作为它们的基质的成分。

本发明的另一个目的是提供一种治疗患有非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)的患者的方法。

附图的简要说明

图1示意性地描述了补体激活途径(Horiuchi et al.Inflammation andRegeneration(2016)36:11)；所涉及的补体因子C1、C2、C3、C4、C5以及补体因子C6、C7、C8和C0，其一起形成最终的MAC，另参见表I。三种途径(经典途径、凝集素途径和替代途径)被独立激活以形成C3。通过C3的级联激活导致产生各种片段，包括C3a、C3b、C3d、C4a和C5a，它们源自前体补体因子，并通过在靶标细胞表面上与受体结合而起到炎症介质的作用(另参见图2)。C5的另一个片段C5b与C6、C7、C8以及C9的多个副本一起导致形成膜攻击复合物，该复合物在靶标细胞膜中产生裂解孔(另参见图2)。C3和C5在级联中起着中心作用，因此是影响补体激活或使补体激活沉默的令人感兴趣的靶标，尤其是在失调的情况下。涉及的其他补体因子，例如也有助于级联内扩增的C4，以及C1或C2，同样是令人感兴趣的靶标蛋白。表述“MASP”是“甘露聚糖结合的凝集素相关的丝氨酸蛋白酶”的简写。

图2显示了也如图1所示的C5被C5转化酶激活的示意图(Horiuchi etal.Inflammation and Regeneration(2016)36:11)。C5的裂解导致C5a和C5b的产生。C5a与细胞壁中的C5a受体结合并介导几种生物学反应，例如嗜中性粒细胞动员、组胺释放、平滑肌细胞收缩、血管通透性增加和组织因子产生。C5b启动膜攻击复合物的形成，该复合物在细胞膜中产生裂解孔并触发炎症。这强调了任选地从补体激活级联中去除已经生成的靶标蛋白C5a和/或C5b以及C5是本发明的目的之一，以使失调的复合物激活有效和快速地沉默。

图3非常示意性地示出了包括根据本发明的血液处理装置的体外处理回路，该血液处理装置可以是筒或过滤器，其包括基于膜、树脂或无纺材料的载体，该载体上已结合有对靶标蛋白具有亲合力的配体。该回路可以在血液灌注模式下运行。在血液处理装置是中空纤维膜过滤器装置的情况下，处理模式可以是具有闭合的透析液/滤液端口的过滤器的血液透析、血液透析滤过、血液滤过或血液灌注。

图4A和图4B非常示意性地示出了包括根据本发明的血液处理装置的体外处理回路，该血液处理装置可以分别是包括树脂或无纺材料的吸附筒或包括膜的过滤器，该膜上已结合有对靶标蛋白具有亲合力的配体。血液处理装置可以位于血液透析仪的上游(透析仪前设置，图4A)或血液透析仪的下游(透析仪后设置，图4B)。回路中的非官能化的血液透析仪可以根据医疗需要以不同的处理模式进行操作，包括血液透析、血液透析滤过或血液滤过模式。

图5非常示意性地示出了包括根据本发明的血液处理装置的体外处理回路，其中该血液处理装置被血浆灌注。在所示的实施方案中，血浆分离过滤器用于从全血中分离血浆。血浆过滤器通过0.03μm至2μm的孔径产生包含靶标蛋白的血浆成分。将血浆灌注通过血液处理装置，该血液处理装置包括基于无纺材料、树脂或膜载体的基质，该基质上已结合有对靶标蛋白具有亲合力的配体。

图6A和6B示意性地描绘了靶标蛋白与环氧活化的载体或氨基载体的共价偶联。载体可以是树脂；膜，包括中空纤维膜、平板状膜或纤维毡；或无纺材料。图6A显示了蛋白通过蛋白的氨基直接与载体偶联(实施例2)。图6B示出了基于氨基树脂的使用的酶的共价固定。氨基树脂可以用戊二醛预活化，然后用于酶的共价固定。醛基与靶标蛋白的氨基很快地反应，并形成Schiff碱(亚胺)，从而在酶和载体之间形成稳定的多点共价结合。亚胺双键可以用硼氢化物进一步还原。

图7A描绘了在使人血浆与亲合树脂接触后，补体C5蛋白随着时间从人血浆中的消耗，根据本发明在该树脂上固定了针对C5的抗体(“C5-3”)。数据点已经根据实施例3通过Elisa测试测定。“空白树脂”是指与未结合有抗体的亲合树脂接触的人血浆样品。

图7B示出了图7A的饱和区域，以给出10分钟后C5消耗的更好的分辨率。所有亲合基质均能使补体C5蛋白产生良好的结合和消耗，其在0和1μg/ml C5蛋白的区域内略有差异。C5-3亲合基质显示了优异的结果。

图8示出了由从用于从人血浆中去除C5的亲合树脂洗脱的蛋白所制备的SDS PAGE(参见实施例3，特别是第3.3节，以及图7A和7B，其示出了血浆中C5的浓度降低)。可以看到C5α链的清晰条带。

具体实施方式

本发明基于这样的见解：可以有效地使用体外治疗来治疗由补体激活的障碍或失调引起的疾病，特别是涉及至少一种补体因子的疾病。

如本文所用，术语“补体激活障碍”，“补体激活失调”和“补体介导的疾病”是指其中涉及补体激活(例如，过度或不适当的补体激活)为辅助和/或至少部分原因的疾病。根据一方面，特别感兴趣的补体介导的疾病是其中已知一种或多种补体系统生物标记物，例如在患者的血清或尿液中发现的一种或多种遗传标记物或生物标记物，与诸如aHUS的疾病相关。根据另一方面，补体介导的疾病还包括与遗传倾向无关但涉及急性或慢性疾病或由急性或慢性疾病呈现的疾病，例如败血症或COPD。

本发明包括一种装置，其被配置成位于体外血液回路中，患者的血液流过该血液回路，并且该血液回路包括用于将血液从患者的血管系统以限定的流速输送到血液处理装置并且然后将经处理的血液返回至患者的装置，并且其中该装置被进一步配置成固定至少一种所述因子，从而将其从患者的血液中去除。

如本文所用，表述“补体成分”或“补体因子”是指参与补体系统的激活或参与一种或多种补体介导的活性的蛋白。经典补体途径的成分包括例如C1q、C1r、C1s、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和C5b-9复合物，也被称为膜攻击复合物(MAC)，以及前述任何一种的活性片段或酶促裂解产物(例如，C3a、C3b、C4a、C4b、C5a等)。替代途径的成分包括例如因子B、D和备解素。凝集素途径的成分包括例如MBL2、MASP-1和MASP-2。补体成分还包括可溶性补体成分的细胞结合受体，其中在可溶性补体成分结合后，该受体介导此类可溶性补体成分的一种或多种生物学活性。这样的受体包括例如C5a受体(C5aR)、C5a受体2(C5aR2，通常称为C5L2)、C3a受体(C3aR)、补体受体1(CR1)、补体受体2(CR2)、补体受体3(CR3，也称为CD45)等。应当理解，术语“补体因子”不旨在包括用作补体激活的“触发剂”的那些分子和分子结构，例如，抗原-抗体复合物、在微生物或人工表面上发现的外来结构等。

先前已经描述了用于从患者的血液中去除靶标成分的体外装置和方法。例如，WO2013/020967 A1公开了装置和基质用于固定和去除患者的血型抗体的用途。US 8,969,322B2描述了一种体外去除(apheresis)操作，用于通过包含硫酸葡聚糖的装置从患者的血液中去除可溶性Flt-1受体。

同样，如前所述，已知抗补体药物用于治疗由补体失调引起的疾病，并且其针对靶标补体因子，例如C5或C1。然而，尽管存在关于与所述补体激活失调有关的疾病以及通过针对所涉及的至少一种补体因子的抗体治疗至少其中一些的方法的大量文献，但是迄今为止，尚未描述体外治疗方法。

如本文所用，表述“(一种或多种)靶标蛋白”是指作为补体系统的成分并且参与补体激活的蛋白。因此可以以相同的含义使用表述“(一种或多种)补体因子”或“(一种或多种)补体成分”。根据本发明的一个方面，作为补体激活成分的所述靶标蛋白是该蛋白的突变形式，其中突变导致该蛋白的功能障碍或功能受损或导致该蛋白的功能亢进，包括例如增加酶活性、增加结合亲合力或提高稳定性以防止被酶改变，例如被裂解或降解。

根据本发明的一个方面，表述“(一种或多种)靶标蛋白”是指形成触发补体激活的至少一个或多个途径(包括凝集素途径(甘露聚糖结合的凝集素途径)、经典的抗体-抗原复合物途径和替代途径)的一部分的补体因子(或补体蛋白)。根据本发明的另一方面，表述“(一种或多种)靶标蛋白”是指形成替代途径的一部分的补体因子(或补体蛋白)。根据本发明的另一方面，表述“(一种或多种)靶标蛋白”是指形成经典途径的一部分的补体因子(或补体蛋白)。根据本发明的另一方面，表述“(一种或多种)靶标蛋白”是指形成凝集素途径的一部分的补体因子(或补体蛋白)。根据本发明的另一方面，表述“(一种或多种)靶标蛋白”是指至少一种补体因子，其参与膜攻击复合物的形成并选自由C5、C5a、C5b、C6、C7、C8和C9组成的因子的组，或是C9的一个以上单元的复合物。

根据本发明的另一方面，表述“(一种或多种)靶标蛋白”是指至少一种补体因子，其选自由因子B、备解素(因子p)、因子Ba、因子Bb、因子D、C1q、C1r、C1s、C4、C2、C2a C1-Inh、C3、C3a、C3b、C4、C5、C5a、C5b、C6、C7、C8、C9组成的因子的组，或是C9和C5b-9的一个以上单元的复合物。根据本发明的另一方面，表述“(一种或多种)靶标蛋白”是指选自由C3、C3a、C3b、C4、C5、C5a和C5b组成的因子的组中的至少一种补体因子。根据本发明的另一方面，表述“(一种或多种)靶标蛋白”是指选自由C3、C3a、C3b、C5、C5a和C5b组成的因子的组中的至少一种补体因子。根据本发明的又一方面，表述“(一种或多种)靶标蛋白”是指选自由C3、C3a、C5和C5a组成的因子的组中的至少一种补体因子。根据本发明的另一方面，“(一种或多种)靶标蛋白”是指选自由C5和C5a组成的因子的组中的至少一种补体因子。根据本发明的另一方面，“(一种或多种)靶标蛋白”是指选自由C3和C3a组成的因子的组中的至少一种补体因子。根据本发明的又一方面，“(一种或多种)靶标蛋白”是指选自由C3和C5组成的因子的组中的至少一种补体因子。

因此，一方面，本发明公开了包括基质的装置，该基质被设计用于在体外回路中特异性地从患者血液中去除至少一种与补体激活失调有关的靶标蛋白。根据另一方面，本发明公开了包括所述装置的体外回路，并描述了应当如何配置这种回路以有效地处理有需要的患者的血液。根据又一方面，本发明提供了一种用于降低受试者的体液中至少一种靶标蛋白的水平的方法，其包括通过使患者的血液或血浆通过根据本发明的装置从而从患者经体外去除靶标蛋白的步骤。根据一个方面，根据本发明的装置包括例如珠粒形式的吸附剂，当用于全血灌注(血液灌注)时，该装置的活性表面积为每个装置0.5至50000m²。根据另一方面，当用于全血浆灌注(治疗性去除)时，根据本发明的装置的活性表面积为每个装置0.5至50000m²。根据又一方面，所述用于血液灌注和/或全血浆灌注的装置的活性表面积为每个装置0.5至10000m²。

如本文所用的表述“血液”是指全血，其包含生物体的血液的所有成分，包括悬浮在血浆中的红细胞、白细胞和血小板。表述“血浆”是指这样的液体，其由约92％的水、7％的蛋白(例如白蛋白、γ-球蛋白、纤维蛋白原、补体因子、凝血因子)和1％的矿物质盐、糖、脂肪、电解质、激素和维生素组成，并构成全血的一部分，但不再包含红细胞和白细胞以及血小板。在本发明的上下文中，表述“血浆”还指标准含义的上文所定义的血浆的特定部分，例如血清。

可以使用各种已知方法来固定靶标，例如根据本发明的靶标蛋白。这样的固定优选是特异性的或选择性的，其中它固定感兴趣的靶标蛋白，而血液或血浆或其样品(体外)中存在的其他蛋白和成分没有被大量固定。

根据本发明的一个实施方案，一种这样的方法是亲合色谱法，也称为亲合纯化，其中靶标蛋白由于其与经固定的配体的特异性结合特性而从溶液中除去。亲合色谱法可以被定义为一种液相色谱，它使用生物学相关的试剂(即“亲合配体”或“配体”)来选择性地保留靶标分子或研究生物学相互作用(Hage te al.,J.Pharm.Biomed.Anal.(2012),69,93-105)；Ayyar et al.,Methods(2012)56:116-129)。“特异性结合”通常是指靶标分子(例如多肽)或分子复合物与结合分子例如抗体或配体之间的物理缔合。缔合通常取决于结合分子所识别的靶标的特定结构特征的存在，例如抗原决定子、表位、结合口袋或裂口。

亲合配体可以由多种结合剂组成，包括从蛋白或酶到抗体、抗原、DNA或RNA序列、仿生染料、酶底物或抑制剂或低质量化合物(例如药物或激素)。亲合配体被固定在载体上，并与之一起形成基质。然后将其用于选择性地结合样品内或来自样品(例如血液或血浆)的给定靶标或靶标组。由于许多亲合配体的选择性或高度选择性，即使基质存在于复杂的生物样品(例如血液或血浆)中，基质也可用于固定、结合、分离、测量或研究特定的靶标。在一些实施方案中，在测试条件下，例如在例如盐浓度、pH和/或温度等方面的生理条件(其合理地近似于根据本发明的使用过程中施加的相应条件)下，表现出特异性结合的两个分子(例如在配体和靶标蛋白之间)的亲合力(通过平衡解离常数K_d测量)为10^-4M或更小，10^-5M或更小，10^-6M或更小，10^-7M或更小，10^-8M或更小，10^-9M或更小，10^-10M或更小，10^-11M或更小，10^-12M或更小，例如在10^-13M至10^-4M之间(或在具有上述任意两个值作为端点的任何范围内)。结合亲合力可以使用本领域已知的多种方法中的任一种来测量。例如，在某些实施方案中，可以使用基于等温滴定量热法或表面等离子共振的测定法(例如，

测定法)。根据本发明的一个实施方案，配体对靶标蛋白的亲合力应为10^-6M至10^-13M。

因此，本文所用的表述“基质”是指可用于根据本发明的靶标蛋白的亲合色谱法的材料。在本发明的上下文中使用的这种基质包含结合有配体的载体。因此，载体可以用作配体的载体，尽管其也必须履行其他功能。

如本文所用，将配体“结合”至载体以提供可用于根据本发明的装置的基质的表述，是指将两个分子保持在一起的非共价或共价相互作用。根据本发明的一个实施方案，该表述是指共价相互作用，即共价结合的配体。非共价相互作用包括但不限于氢键、带电基团之间的离子相互作用、范德华相互作用和非极性基团之间的疏水相互作用。这些相互作用中的一个或多个可以介导两个分子彼此的结合。另外，结合可以是特异性的或选择性的，或者是非特异性的。根据本发明的一个实施方案，表述“结合”是指配体与载体的共价连接。根据本发明的另一个实施方案，表述“结合”是指将配体连接至载体的离子相互作用。

如本文所用，表述“(一种或多种)配体”通常是指以其对靶标蛋白的亲合力为特征的分子。该配体的特征还在于其对靶标蛋白的特异性。根据本发明的一个实施方案，其特征在于其固定化的可行性、其用于治疗或减缓与人补体因子相关的疾病的至少一种症状的方法中的稳定性、以及其在连接至基质后保持靶标结合能力，以持续延长的储存时间，以及使治疗持续至少2小时，优选至少4，至少8或至少12小时。

根据本发明的一个实施方案，配体代表一组天然来源的物质，例如抗体结合蛋白或其片段。在本发明的一些实施方案中，配体是抗体或其抗原结合片段、小分子、多肽、多肽类似物、拟肽或RNA或DNA或肽适体。在一些实施方案中，配体可以是结合并固定补体成分C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、因子D、因子B、备解素、MBL、MASP-1、MASP-2或任何这些成分的生物活性片段中的一种或多种的配体。

根据另一个实施方案，配体也可以是补体抑制性化合物的天然存在的或可溶的形式，例如CR1、LEX-CR1、MCP、DAF、CD59、因子H、眼镜蛇毒因子、FUT-175、坎普他汀和K76COOH。在一些实施方案中，配体可以是补体受体2(CR2)-H因子(FH)分子，其包含：a)包含CR2(例如人CR2)或其片段的CR2部分；和b)包含FH或其片段的FH部分。

示例性的CR2-FH融合蛋白在例如WO 2007/149567和WO 2011/143637中进行了描述和举例说明，其各自的公开内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，配体包含靶向结构域，例如CR2或抗C3d抗体，如例如在WO 2011/163412中所述，其公开内容通过引用并入本文。靶向结构域与其他补体配体的融合体可在本文所述的装置和方法中用作配体。

根据本发明的另一个实施方案，表述“(一种或多种)配体”表示亲合配体，其是肽并且已经基于它们的结合特性进行了选择。它们在本文中被称为“肽适体”。这样的肽适体是小的组合蛋白，其被选择以结合至其靶标分子上的特定位点(Reverdatto et al.,CurrTop Med Chem.2015；15(12):1082–1101)。肽适体由短的5至20个氨基酸残基的长序列组成，有时以环状嵌入到稳定的蛋白支架中。在本发明的上下文中，将它们本身固定或借助于接头固定或包埋在载体上的蛋白质支架内以形成根据本发明的装置的基质，其类似于抗体或其抗原结合片段。根据本发明的能够结合靶标蛋白的肽适体是已知的，例如环肽坎普他汀，其阻断C3与转化酶的结合(Ricklin et al.,Adv Exp Med Biol(2008)632:283-292)，以及其衍生物，例如APL-2(Apellis Pharmaceuticals)。坎普他汀因此也可以用作根据本发明的肽适体配体。坎普他汀抑制天然C3裂解成其活性片段C3a和C3b。结果，防止了C3b的沉积、替代途径的扩增以及所有下游补体作用。

术语“(一种或多种)抗体”是指免疫球蛋白，并且涵盖全长抗体和包含抗原结合位点的抗体片段。根据一方面，抗原是根据本发明的靶标蛋白。在本发明的某些实施方案中有用的抗体可以源自或衍生自哺乳动物，例如人、非人灵长类；啮齿类动物(例如小鼠、大鼠、兔子)；山羊；骆驼科动物；或鸟类(例如鸡)，并且可以是任何各种抗体同种型，例如哺乳动物同种型：IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类)、IgM、IgA、IgD和IgE或未在哺乳动物中发现的同种型，例如IgY(在鸟类中发现)或IgW(在鲨鱼中发现)。抗体片段(Fab)可以是例如Fab'、F(ab')2、scFv(单链变量)、单结构域抗体(例如VHH)或保留或包含抗原结合位点的其他片段。参见，例如Allen,T.,Nature Reviews Cancer,Vol.2,750-765,2002，及其中的参考文献。在本领域中称为双抗体、小抗体或纳米抗体的抗体可以用于各种实施方案中。双特异性或多特异性抗体可用于各种实施方案中。IgG免疫球蛋白(例如啮齿动物或人IgG)的重链和轻链包含四个框架区(FR1至FR4)，分别被三个互补决定区(CDR1至CDR3)隔开。CDR，特别是CDR3区，尤其是重链CDR3，在很大程度上负责抗体的特异性。抗体可以是嵌合抗体，其中例如将非人类来源(例如啮齿动物(例如鼠类)或非人灵长类来源)的可变结构域与人类来源的恒定结构域融合；或是“人源化”抗体，其中构成抗原结合位点的某些或全部互补决定区(CDR)氨基酸(有时与一个或多个框架氨基酸或区域一起)从啮齿动物抗体(例如鼠抗体)或噬菌体展示抗体“移植”至人抗体，因此保留了啮齿动物或噬菌体展示抗体的特异性。因此，人源化抗体可以是重组蛋白，其中仅抗体互补决定区是非人类来源的。应当理解，人源化过程中涉及的抗体序列的改变通常是通过核酸水平的技术，例如标准重组核酸技术来进行的。在一些实施方案中，仅移植特异性决定残基(SDR)，在抗体-配体相互作用中最关键的CDR残基。例如，通过使用已知结构的抗原-抗体复合物的三维结构的数据库或通过抗体结合位点的突变分析来鉴定SDR。在一些实施方案中，使用的方法涉及保留更多的CDR残基，即，移植所谓的“简化”CDR，包括所有SDR的CDR残基的段。参见，例如Almagro et al.(2008),Humanization of antibodies.Front Biosci.13:1619-33，其综述了获得人源化抗体的各种方法。应当理解，“源于或衍生自”是指指明了抗体序列或其一部分的遗传信息的原始来源，其可能不同于最初合成抗体的物种。例如，“人”结构域可以在其基因组中掺入有人免疫球蛋白基因的啮齿动物(例如小鼠)中产生，或者可以使用噬菌体展示产生。

抗体可以是多克隆或单克隆的，尽管出于本发明的目的，通常优选单克隆抗体用于产生根据本发明的装置。抗体可以是糖基化的或非糖基化的。产生特异性结合至实际上任何感兴趣的分子的抗体的方法是本领域已知的。例如，单克隆或多克隆抗体可以从天然来源，例如从产生抗体的动物的血液或腹水中纯化(例如，在用分子或其抗原性片段免疫后)，或者可以通过重组在细胞培养基中产生，例如从培养基中纯化。可以使用亲合纯化，例如蛋白A/G亲合纯化和/或使用抗原作为亲合试剂的亲合纯化。可以使用噬菌体展示和相关技术来确定合适的抗体。参见，例如Gary et al.(eds.)“Making and Using Antibodies:APractical Handbook”.2^nd edition,CRC Press,2014。产生抗体片段的方法是众所周知的。F(ab')2片段可以通过例如使用Immunopure F(ab')2制备试剂盒(Pierce)生成，其中使用固定的胃蛋白酶消化抗体，并在固定的Protein A柱上纯化。消化条件可以由本领域普通技术人员优化以获得F(ab')2的良好产率。可以通过标准蛋白凝胶电泳监测消化产生的F(ab')2的产率。可以通过木瓜蛋白酶消化抗体或通过减少F(ab')2中的S-S键来获得F(ab')。通常，scFv抗体在VH和VL结构域之间还包含多肽接头，尽管在某些实施方案中，其他接头也可用于连接结构域。

根据本发明的一个实施方案，多克隆抗体在根据本发明的装置中用作配体。多克隆抗体由产生抗体的生物体内的多个细胞系产生，并且作为群体(population)可以以一定范围的结合亲合力与单一抗原上的多种表位结合。如上所述，可以通过将抗原注射到动物中来根据众所周知的方法产生针对靶标的多克隆抗体。根据本发明的一个实施方案，生产动物是骆驼科动物。该抗原溶液可以包含称为佐剂的增强剂。在该初始注射之后，可以在大约一个月(例如3至4周)之后收集来自动物的血液样品，并测试针对所需靶标为特异性的抗体的存在。然后将另一种抗原注射剂(称为“加强剂(booster)”)注入到动物中。然后在此后(例如10天后)再次测试动物的血液中是否存在抗体。可以重复多次这种加强剂给药和抗体测试的程序，直到针对靶标蛋白的抗体浓度达到所需水平(即，通过血液测定确定)。此时，可以从动物收集含抗体的血清，并保存以备后用。在动物第一次与外源剂接触后产生的抗体通常为IgM类抗体。反复接触后，还将产生IgG类抗体。所述IgG类抗体通常最适合IAC应用。在用于IAC之前，应通过已知方法进一步纯化多克隆抗体，包括但不限于离子交换色谱、用硫酸铵或硫酸右旋糖酐沉淀或通过蛋白A或蛋白G柱进行分离。可以随后去除抗体混合物中不与靶标结合的那些抗体，例如，通过使用固定的抗原(靶标蛋白)柱。

根据本发明的另一个实施方案，单克隆抗体在根据本发明的装置中用作配体。可以通过分离单个产生抗体的细胞并将该细胞与癌细胞或骨髓瘤细胞组合来产生单克隆抗体。培养所得到的杂交细胞系(称为杂交瘤)，以用于长期产生抗体。由于单克隆抗体是从单个细胞系中产生的，因此它们以相同的结合亲合力与单个表位结合。检查杂交瘤的各个培养物是否产生特异性抗体，并且克隆产生期望的抗体的那些，例如具有期望的缔合平衡常数，以生产产生单克隆抗体的细胞的同质培养物。

术语“免疫亲合色谱”(IAC)通常用于这样的亲合色谱方法：其中基质包含抗体或其抗原结合片段(Moser et al.,Bioanalysis(2010)2:769-790)。靶标蛋白与固定抗体的这种选择性结合是抗体和抗原(例如本发明的靶标蛋白)之间可能发生的多种非共价相互作用的结果，并且可以导致缔合平衡常数为10⁵至10¹²M^-1。通常，能够在生物体中引发抗体产生的外源试剂被称为抗原。由于天然存在的抗原通常较大，通常会产生以一定范围的结合亲合力结合至抗原的几个不同区域的抗体。可以与抗体结合的抗原/靶标蛋白上的每个单独的位置称为表位。根据本发明的一个方面，只要相互作用的缔合平衡常数在10⁵至10¹⁵M^-1的范围内，抗体配体或其抗原结合片段就可以与靶标蛋白提供的任何表位结合。根据本发明的另一方面，相互作用的缔合平衡常数在10⁶至10¹²M^-1的范围内、在10⁶至10¹⁰M^-1的范围内、在10⁸至10¹⁰M^-1的范围内或在10⁸至10¹²M^-1的范围内。

根据本发明的一个具体实施方案，抗体或其抗原结合片段包含用于将它们固定在载体上的亲合标签。亲合标签可用于在抗体生产过程中纯化抗体和/或将其固定在本发明基质的载体上。亲合标签可以是短多肽序列或完整蛋白，作为靶标蛋白的融合伴侣进行共表达。除了促进纯化和快速固定外，融合标签有时还有利于增加重组蛋白的表达和溶解性。亲合标签可用于确保抗体正确定向，从而使功能结构域可用于相互作用。它们还提供了用于固定、定量和检测靶标蛋白的系统，因此对于包括免疫测定在内的分析目的也特别有吸引力。不同类型的亲合标签在本领域中是众所周知的(Terpe,Appl Microbiol Biotechnol(2003)60:523-533)，其中特别详细地描述了多组氨酸或Hi_S6标签，并且它们是将根据本发明的配体与载体材料结合的一种选择。其他可用于将抗体或其抗原结合片段与载体结合的亲合标签可以选自C-myc标签，FLAG标签和Hemagglutinin(HA)标签。

根据本发明的另一个实施方案，还可以通过使用二级配体吸附这些抗体而将抗体或其抗原结合片段固定在载体上。这可以通过使用已经与生物素反应或被生物素化然后被吸附到含有固定的亲和素或链霉亲和素的载体上的抗体来实现。一种可能的生物素化技术是将抗体与N-羟基琥珀酰亚胺-D-生物素在pH 9下孵育。然后，可以使用生物素与链霉亲和素或亲和素的非共价键来固定这些抗体。这些键具有在10¹³至10¹⁵M^-1范围内的缔合平衡常数。

根据本发明的另一个实施方案，如下文进一步详述和/或如现有技术(Cuatrecasas,J Biol Chem(1970)245:3059-3065；Nisnevitch et al.,J BiochemBiophys Methods(2001)49:467-480)所述，将抗体或其抗原结合片段共价连接至载体。共价偶联通常包括抗体或其片段的共价非位点定向连接，其基于利用载体和/或抗体或抗体片段上的官能团(Nisnevitch et al.,J Biochem Biophys Methods(2001)49:467-480,Section 2.3)。根据本发明的另一个实施方案，抗体或其片段的共价连接是抗体或抗原结合片段的位点定向连接(Nisnevitch et al.,J Biochem Biophys Methods(2001)49:467-480,Section 2.4；Makaraviciute et al.,Biosensors and Bioelectronics(2013)50:460-471)。

通常，包含抗体或其抗原结合片段的选择性免疫亲合基质的制备在本领域是公知的(Moser et al.,Bioanalysis(2010)2:769-790)。

如本文所用，表述“载体”是指基质充当“基材”或“载体材料”的部分，其中根据本发明的配体与该部分结合。这样的载体或载体材料有时也被称为“吸附材料”或“吸附剂”，并且这种表述应被本文所用的表述“载体”所涵盖。根据本发明的合适的载体在相关的pH范围和温度下应是均匀的、亲水的、机械和化学稳定的，在使用过程中没有或只有可忽略不计的配体浸出，有选择性，展现出最小的非特异性吸收，但应当是血液相容性的，即不引起包括补体系统激活或其他免疫途径在内的不良反应，对全血和/或血浆具有良好的流动特性，并为配体的连接提供大的表面积。

载体可以是树脂、膜或无纺材料。如本文所用，表述“树脂”是指不溶性材料，其可以采取具有孔和不透明外观的半透明凝胶或凝胶珠或微孔珠的形式，或者可以采取海绵的形式。这样的树脂可以是天然或生物聚合物、合成聚合物和无机材料。琼脂糖、右旋糖和纤维素珠是常用的天然载体。合成的聚合物或有机载体主要基于丙烯酰胺、聚苯乙烯和聚甲基丙烯酸酯衍生物，而多孔二氧化硅和玻璃是一些常用的无机载体。下面描述了可根据本发明使用的其他材料。

根据本发明的一个实施方案，树脂由以下物质构成：选自藻酸盐、壳聚糖、甲壳质、胶原、角叉菜胶、明胶、纤维素、淀粉、果胶和琼脂糖的聚合物；选自沸石、陶瓷、硅藻土、二氧化硅、玻璃、活性炭和木炭的无机材料；或选自以下的合成聚合物：聚乙烯(PE)、聚甲醛(POM)、聚丙烯(PP)、聚氯乙烯(PVC)、聚乙酸乙烯酯(PVA)、聚偏二氯乙烯(PVDC)、聚苯乙烯(PS)、聚四氟乙烯(PTFE)、聚丙烯酸酯(PAA)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)、聚丙烯腈(PAN)、聚酯、聚碳酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚酰胺、聚芳酰胺、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、聚砜(PS)、聚醚砜(PES)、聚芳醚砜(PEAS)、乙烯-乙酸乙烯酯(EVA)、乙烯-乙烯醇(EVOH)、聚酰胺-酰亚胺、聚芳醚酮(PAEK)、聚丁二烯(PBD)、聚丁烯(PB)、聚对苯二甲酸丁二醇酯(PBT)、聚己内酯(PCL)、聚羟基链烷酸酯、聚醚醚酮(PEEK)、聚醚酮酮(PEKK)、聚醚酰亚胺(PEI)、聚酰亚胺、聚乳酸(PLA)、聚甲基戊烯(PMP)、聚对苯撑醚(PPE)、聚氨酯(PU)、苯乙烯-丙烯腈(SAN)、聚丁烯酸、聚(4-烯丙基苯甲酸)、聚(丙烯酸缩水甘油酯)、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)、聚二乙烯基苯(PDVB)、聚(烯丙基缩水甘油基醚)、聚(乙烯基缩水甘油基醚)、聚(乙烯基缩水甘油基氨基甲酸酯)、聚烯丙基胺、聚乙烯基胺、所述聚合物的共聚物以及通过引入官能团而改性的任何这些聚合物。根据本发明的一个特定的实施方案，载体选自苯乙烯-二乙烯基苯(DVB)及其衍生物、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)及其衍生物以及聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA)及其衍生物。

如上所述，根据本发明的配体可以与载体共价结合。形成用于产生基质(其中所述配体可共价连接)的基础的载体必须提供或促进化学活化，从而允许配体的化学偶联。用于固定配体例如抗体或其片段的许多偶联方法是本领域公知的。通常，活化化学应在很宽的pH值、缓冲条件和温度范围内保持稳定，从而导致配体的浸出可忽略不计。偶联方法应避免配体的不正确取向、多位点连接或空间位阻，否则可能会导致结合位点被掩盖，从而导致活性丧失。为了将配体固定在载体上，可以考虑位点定向的连接和/或间隔基。可以优化单位体积基质的配体密度，以促进靶标的可及性和结合。

可以通过包括胺、醇、羧酸、醛和环氧基在内的常见的官能团完成偶联(图6A和图6B)。制备根据本发明的载体的方法是本领域已知的，并且描述于例如US 8,142,844 B2、US2015/0111194 A1和US 2014/0166580 A1中。这些参考文献还描述了可用于产生根据本发明的基质的间隔基基团(或“接头”基团)。

根据本发明的一个实施方案，配体被直接偶联或在添加间隔基的情况下经由胺官能团偶联。在第一步中，将胺基团引入到载体上。根据本发明，许多方法可用于将胺基团引入到基材上。例如，在膜沉淀之前将胺化的聚合物(例如，胺化的聚乙烯醇)添加到聚合物溶液中，或对膜进行后处理(例如使用APTMS(3-氨基丙基)三甲氧基硅烷-四甲氧基硅烷)将含羟基或/和羧基的膜硅烷化)，将PEI(聚(乙烯亚胺))或其他聚合物简单吸附到膜表面上，或用铵或其他有机胺蒸气对膜进行等离子处理，可以有效地用于将胺基团引入到膜上。在第二步中，碳二亚胺化合物可用于活化蛋白的羧基，以通过酰胺键直接与膜表面的伯胺缀合。最常用的碳二亚胺是用于水性交联的水溶性EDC(1-乙基-3-(-3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)和用于非水性有机合成方法的非水溶性DCC(N',N'-二环己基碳二亚胺)。根据本发明的另一个实施方案，可以将羟基引入到载体上。基于多糖(例如纤维素或纤维素衍生物)的基材已经在表面上带有OH基团。也可以将羟基引入到基材上，例如通过用氧气或空气进行等离子体处理。在用琥珀酸酐将羟基酰化后，所得的O-琥珀酸酯可以在碳二亚胺或其他偶联剂存在下与蛋白的胺反应，形成酰胺键。根据本发明的另一个实施方案，可以将羧酸基团引入到载体上。可以通过用二氧化碳进行等离子体处理将羧酸酯基团引入到基材上。对于蛋白固定，碳二亚胺/琥珀酰亚胺偶联化学可用于通过配体的胺基团进行表面连接。根据本发明的另一个实施方案，可以引入羰基(醛、酮)以用于随后的配体偶联。可通过使用高碘酸氧化OH基团而在基于多糖的固体基材上生成醛类。蛋白的伯胺(多肽的N端和赖氨酸的侧链)可以通过还原胺化和形成Schiff碱而与醛反应。然后，形成的Schiff碱在水溶液中水解，并且必须被还原成烷基胺键才能稳定。氰基硼氢化钠是一种温和的还原剂，其引发该反应，而不还原蛋白的其他化学基团。根据本发明的另一个实施方案，可以将环氧基团引入到载体上。几种表面上涂覆有高密度环氧官能团的预活化树脂是可商购的，参见下文。膜上环氧基的引入描述于例如WO 2005/026224 A1中。在开环过程中与亲核试剂反应的环氧基分别与蛋白的伯胺、巯基或羟基反应而形成稳定的仲胺、硫酯和醚键。环氧基容易与巯基反应，并需要接近生理pH(pH 7.5至8.5)的缓冲体系。环氧基需要高pH条件(pH 11至12)以与羟基反应，需要适度的碱性条件(pH>9)以与胺基团反应。在每种情况下，可以在载体和亲合配体之间引入链长不同的间隔基。

上面和下面提到的几种类型的载体可以有利地用于偶联例如用于免疫亲合色谱的抗体。免疫亲合载体可以基于诸如多糖的材料。合适的多糖是例如纤维素、硝酸纤维素、壳聚糖、胶原蛋白、淀粉和交联的多糖凝胶，例如琼脂糖、Sephadex或Sepharose。制备多糖基质的衍生物的方法早已为人所知，例如在US 4,411,832或US 3,947,352中有所描述。载体也可以基于合成有机载体。合成的聚合物基质包括亲水和疏水的合成聚合物及其组合。合成载体包括选自例如以下的载体：聚丙烯酰胺载体或它们的衍生物；聚甲基丙烯酸酯载体或其衍生物；聚苯乙烯载体或其衍生物；或聚醚砜载体或其衍生物。另外，可以在根据本发明的装置中使用衍生化的二氧化硅、玻璃或氮杂内酯珠。这样的装置优选利用有机载体。在本发明的上下文中，珠的使用可能是有利的。

根据本发明的一个实施方案，载体材料应该是多孔的，其中孔径在10至200nm的范围内。对于免疫亲合应用，已发现孔径在30至200nm或60至200nm的范围内是最佳的。但是，取决于所用的偶联化学、间隔基和配体，以及取决于靶标蛋白，其他孔径也可能是有利的。如果载体以珠的形式使用，则这种珠的直径可以在一定范围内变化。使用直径在50至1000μm之间的珠可能是有利的。使用直径在60至800μm，100至700μm，120至800μm范围内的珠可能也是有利的。

根据本发明的一个方面，载体带有将接头和/或配体偶联至其上所需的特定官能团。例如，许多官能化树脂是可商购的并且是本领域技术人员已知的。已经带有用于偶联配体且具有或没有间隔基的反应基团的预活化的树脂载体是可商购的，并且消除了如前所述的使用之前(即，偶联配体之前)的许多化学活化载体的步骤。这样的载体通常是如前所定义的树脂，而对于膜和/或无纺材料载体，通常必须在偶联之前进行活化步骤。在所述商业载体中可获得涉及伯胺、巯基、醛、羟基和羧酸的多种偶联化学，以用于共价连接配体。可商购的活化树脂的例子是UltraLink碘乙酰树脂、CarboLink偶联树脂、Profinity^TM环氧树脂、Affi-Gel 10和15、环氧活化的Sepharose^TM6B、Tresyl氯化物活化的琼脂糖、Tosoh

AF氨基或环氧650-M、ChiralVision Immobead^TM 350、ResindionReliZyme^TMEXE 135或SEPABEADS^TM和环氧基官能化的

Lifetech^TM甲基丙烯酸酯聚合物。

根据本发明的一个实施方案，用于配体偶联的载体是环氧官能化的，因为环氧基与不同蛋白基团(例如赖氨酸中的-NH₂或亲核试剂(氨基、硫醇、酚))形成非常稳定的共价键，并且可在温和的pH和温度条件下进行固定。

根据本发明的另一个实施方案，载体采取珠的形式。根据本发明的另一个实施方案，载体是环氧官能化的甲基丙烯酸酯聚合物。根据本发明的又一个实施方案，载体选自Tosoh

Epoxy 650-M、ChiralVision Immobead^TM 350、Resindion ReliZyme^TMEXE 135、Resindion SEPABEADS^TM和

Lifetech^TM。根据一个方面，使用

Lifetech^TM ECR8209F环氧甲基丙烯酸酯珠，其带有环氧基团作为可与配体结合的官能团。它们的平均孔径在1200至

之间，粒径在150至300μm之间。根据另一个方面，使用

Lifetech^TM ECR8215M环氧甲基丙烯酸酯珠，其带有环氧基团作为可与配体结合的官能团。它们的平均孔径在600至

之间，粒径在300至710μm之间。根据另一个方面，使用Purolite Lifetech^TM ECR8215F环氧甲基丙烯酸酯珠，其带有环氧基团作为可与配体结合的官能团。它们的平均孔径在1200至

之间，粒径在150至300μm之间。

根据本发明的另一个实施方案，也可以例如通过离子或通过络合将配体非共价地固定在载体上。然而，优选共价结合以避免配体从基质浸出到患者的血液或血浆中的风险。

根据又一个实施方案，根据本发明的载体包括磁珠。通过将磁铁矿包裹在琼脂糖或其他聚合物材料中来制备磁珠，在其上固定根据本发明的配体。随着配体和靶标蛋白的相互作用，在磁性的作用下，可以实现快速分离。尤其在体外应用中特别指出了磁珠的使用，其是在体外应用中并且其中用于固定靶标蛋白的基质被配置成监测血液或血浆样品或任何其他包含靶标蛋白的体外应用中靶标蛋白的存在和/或浓度，用于筛选或其他分析目的并且不属于体外血液回路的一部分。随着配体与靶标蛋白的相互作用，在磁性的作用下，可以实现靶标蛋白的快速分离。

根据本发明的另一个实施方案，载体是膜。由于与凝胶、树脂和珠粒相比，作为亲合基质组分的膜简单、易于处理、表面积减小和更低的扩散限制，因此已被用于蛋白纯化。膜已被成功地用作亲合膜，用于纯化重组抗体(Sun et al.,J.Sep.Sci.,31(2008),pp.1201-1206)。亲合膜适用于各种尺寸和格式。膜可采取中空纤维或者平板状膜的物理形式。

根据本发明的一个实施方案，载体膜是中空纤维膜。根据本发明的另一个实施方案，将多个中空纤维膜形成为中空纤维束，并嵌入壳体中，从而形成过滤器或过滤装置。根据一个实施方案，载体包括血液透析中空纤维膜透析器，其中过滤器是血液透析仪。这样的实施方案提供了两种功能的组合，并且可以有利地在体外血液回路中用作从有需要的人的血液或血浆中去除人补体因子5(C5)的装置，其中该装置包括被配置成固定C5的基质，因为该装置同时去除根据本发明的靶标蛋白并从患有肾衰竭的患者的血液中去除尿毒症毒素、过量的离子和水。因此，仅需要一种装置来治疗患有与人补体因子相关的疾病，特别是与C5相关的疾病以及肾衰竭或损害的患者，所述肾衰竭或损害是所述与人补体因子相关的疾病的常见结果，并且特别地也是aHUS患者中的常见结果。因此，体外回路与用于在肾衰竭治疗中进行血液透析的标准体外回路基本上没有区别。因此，显著简化了这种患有肾衰竭和与补体因子相关的疾病的患者的治疗，并且可以帮助减少患者的累积治疗费用并增加患者和主治医师的治疗选择。

在根据本发明的装置中用作载体的中空纤维或平板状膜可以由以下物质组成：纤维素、纤维素酯(乙酸纤维素和三乙酸纤维素)、聚(甲基丙烯酸甲酯)(PMMA)、聚酰胺(PA)、其他含氮聚合物(聚苯并咪唑、聚丙烯腈(PAN)、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、聚砜(PS)、聚醚砜(PES)、聚芳醚砜(PAES)、所述聚合物的组合以及通过引入官能团而改性的任何这些聚合物。根据本发明的一个实施方案，根据本发明的膜载体包含选自以下的聚合物：聚(甲基丙烯酸甲酯)(PMMA)、聚酰胺(PA)、聚丙烯腈(PAN)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、聚砜(PS)、聚醚砜(PES)、聚芳醚砜(PAES)、所述聚合物的组合以及通过引入官能团而改性的任何这些聚合物。根据本发明的另一个实施方案，根据本发明的膜载体包含选自以下的聚合物：聚酰胺(PA)、聚丙烯腈(PAN)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、聚砜(PS)、聚醚砜(PES)、聚芳醚砜(PAES)、所述聚合物的组合以及通过引入官能团而改性的任何这些聚合物。根据本发明的又一个实施方案，根据本发明的膜载体包含选自以下的聚合物：聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、聚砜(PS)、聚醚砜(PES)和聚芳醚砜(PAES)，所述聚合物的组合以及通过引入官能团而改性的任何这些聚合物。

为了进行偶联反应用于随后将配体结合在膜表面上，需要聚合物官能化步骤，可以使用例如在US 2015/0111194 A1和US 2014/0166580 A1中所述的已知的方法。例如，由烷烃链制成的合成材料如聚乙烯不包含合适的用于将分子偶联于其上的官能团。因此，必须在聚合物合成后以化学方式引入合适的官能团。改性聚合物的可能性是已知的等离子体官能化方法，该方法允许通过选择合适的气体等离子体而将官能团引入到聚合物中。该方法包括例如使用氨等离子体，其中在被处理的聚合物的表面上形成氨基官能团。因此，用氨等离子体处理例如聚乙烯导致带有一定量的氨基官能团的聚乙烯基质。然后，这些氨基可以与接头的合适官能团例如羧基反应。或者，可以通过等离子体活化将基质聚合物官能化以获得羧基。例如，在US 2007/0296105 A1中进一步描述了以连续方式使中空纤维膜官能化的方法。在所述方法中，所包含的由前体气体引入的官能团可以是氨基、羧基、醛、酯、环氧基、羟基或磺酸基团。可以用作根据本发明的载体的膜包括例如本领域已知的血浆分离膜和血液透析膜，包括但不限于公知的高通量膜、高截留膜或中等截留膜。血浆分离的目的是使血液中的总血浆蛋白处于分离的血浆部分中，而血液的较大的血球成分(如血细胞和细胞碎片)被膜保留。此外，这种血浆分离膜应表现出高的表面孔隙率和膜的总孔隙率以实现高的过滤性能。它还应具有亲水性、自发可润湿的膜结构、低结垢性能(用于长期稳定过滤)和低的蛋白吸附的特征。这种血浆分离膜优选具有与血液接触的光滑表面，从而避免或最小化血液处理过程中的溶血。在整个处理过程中，膜应显示出稳定的筛分和过滤性能。它应进一步表现出高的生物相容性、低或无补体激活和低血栓形成性。可用于提供根据本发明的装置的适合于血浆分离的膜在本领域中是已知的，并且已经在例如EP 1 875 956 A1或EP 1 875 957 A1中进行了描述。在EP 2 113 298 B1中已经描述了可以被改性并用作根据本发明的装置中的载体的其他膜，例如在

透析器中使用的高通量膜。在US2017/0165616 A1中已经描述了例如在

透析器中使用的中等截留膜，在EP1572330 A1中已经描述了例如在

透析器中使用的高截留膜。

根据本发明的一个实施方案，根据本发明的装置包括中空纤维膜，所述中空纤维膜选自血液透析中空纤维膜，其由聚砜、聚醚砜或聚芳醚砜和聚乙烯基吡咯烷酮制备。

可以有利地用于提供根据本发明的装置的中空纤维膜的内径优选在100至500μm的范围内。根据本发明的一个实施方案，中空纤维膜的壁厚在20至150μm的范围内。更低的壁厚是不利的，这是由于在生产过程中以及其在根据本发明的装置本身中使用的过程中，纤维的机械性能降低。更高的壁厚是不利的，因为它们需要增加的时间间隔来执行相转化过程，从而导致不稳定的处理条件和不稳定的膜。

在本发明的一个实施方案中，用于提供根据本发明的装置的膜是血浆分离膜或者被配置成允许根据本发明的靶标蛋白以高于0.5，优选高于0.7或高于0.9的筛分系数大量通过，通常是血液接触层的中空纤维的内层或内腔没有被官能化并且不带有任何配体。与之相比，配体通过接头与中空纤维的外层偶联，并且任选地还与连接内层和外层的层的至少一部分(即，膜的孔)偶联。因此，用配体进行的官能化仅存在于外面的滤液层上，并且任选地存在于连接膜的外层和内层的至少一部分孔表面结构上。可以采用这样的配置，以例如用于从全血中去除靶标蛋白(由于它们的尺寸，它们能够从内层到达外层)，而较大的血蛋白保留在膜的内腔侧。随着包括靶标蛋白在内的血液成分穿越到膜的外层，它们被固定在特定的配体上或与之结合。

根据本发明的另一个实施方案，特别是当膜载体是如上所述的血液透析膜时，中空纤维膜额外地或可替代地在中空纤维的内腔侧上用根据本发明的配体官能化，在该处它们可以直接与血液或血浆(其灌注中空纤维膜的内腔)中包含的靶标蛋白相互作用并结合或固定该靶标蛋白。

本发明的另一方面是血液处理装置，其包括用配置成结合或固定靶标蛋白的配体根据本发明进行功能化的膜。这种装置的示例是透析器、滤血器和超滤器。这样的装置通常包括壳体，该壳体包括带有端盖的管状部分。一束中空纤维膜通常以这样的方式布置在壳体中：其中在由纤维腔形成的第一流动空间与外部围绕膜的第二流动空间之间提供密封。在EP 0 844 015 A2、EP 0 305 687 A1和WO 01/60477 A2中公开了这种装置的示例。

根据另一方面，根据本发明的装置可以是如WO 2014/07680 A1中所公开的过滤装置，其在装置的滤液空间中既包括一束中空纤维膜又包括树脂，其中树脂优选地由珠组成。通过选择允许至少相关靶标蛋白通过膜壁的膜，可以以这样的方式配置这种装置，以用作根据本发明的去除靶标蛋白的装置。装置的滤液空间中的树脂用作基质并且包含树脂载体，例如本文或WO 2014/07680 A1中公开的，通过本文公开或本领域已知的方法将对靶标蛋白具有亲合力的配体与树脂载体结合。根据一方面，所述装置的中空纤维膜是血浆分离膜，其允许血浆和其中所含的靶标蛋白一起通过膜并与滤液空间中的基质相互作用，从而允许将靶标蛋白固定在基质上。清洗后的血浆将重新进入同一装置内的中空纤维膜，血液可以返回患者体内。这样的装置可以位于血液透析仪的上游或下游的体外回路中，例如在WO 2014/079681 A2中描述的那样，或者可以用作回路内的唯一血液灌注装置。在另一方面，配体也可以如上所述地与血浆分离膜结合或者仅与血浆分离膜结合，例如与膜的外部和/或孔结合。一方面，滤液空间中的树脂可以被配置成去除相同或不同的靶标蛋白。另一方面，该树脂可以被配置成特异性地或非特异性地去除不同于靶标蛋白的成分，例如，与补体激活无关的蛋白；诸如内毒素的化合物，例如在患者患有败血症或SIRS的情况下；或较小的化合物，例如尿毒症毒素或肝毒素。

根据本发明的又一个实施方案，载体是无纺材料。如本文所用，表述“无纺材料”是指被广泛地定义为通过机械、热或化学缠结纤维或长丝(和使膜穿孔)但不通过织造或编织而结合在一起的片、织物或网结构的材料。它们形成多孔结构，由于它们的高过滤效率、高表面积和高渗透性，其可以有效地用作根据本发明的装置中的载体材料。包含熔喷无纺材料和纺粘无纺材料的无纺材料及其生产方法，以及含有这种无纺材料的装置在本领域中是已知的，并且例如在以下文献中有所描述：EP 1 922 097 A1、WO 2007/025738 A2和Zhaoet al.,J Mem Sci(2011),369:5-12。无纺材料可以由以下组成：选自多糖、聚乳酸(PLA)、聚己内酯(PCL)和蛋白的生物聚合物；选自TiO₂、SiO₂或AlO₂的无机材料；或选自聚丙烯(PP)、聚乙烯(PE)、聚丙烯腈(PAN)、聚乙烯醇(PVA)、聚酰胺-酰亚胺(PAI)、聚氨酯(PUR)、聚醚砜(PES)、聚丙烯酸(PAA)、聚环氧乙烷(PEO)、聚苯乙烯(PS)和聚偏二氟乙烯(PVDF)的合成聚合物。

通常，根据本发明的装置被设计成具有圆柱形壳体的圆柱体，该圆柱形壳体具有用于用其处理的血液或血浆的至少一个入口和至少一个出口。在该装置是血液透析仪的情况下，该血液透析仪除了去除至少一种靶标蛋白之外，还用于治疗HD、HDF或HF中的肾衰竭，该装置还包括用于透析液的入口和出口。可以根据本发明使用的装置配置通常是已知的，并且在本发明的范围内。

配体，例如与根据本发明的靶标蛋白结合的抗体和适体结合片段，可以通过本领域已知的和如本文之前所述的方法产生，或者可以选自在以下科学和专利文献中所述的已知化合物列表。已显示靶向补体因子的化合物包括但不限于LFG316(抗C5；NovartisInternational AG,Basel,Switzerland)；Zimura(C5结合适体；Ophthotech Corporation,New York,NY,United States)；CLG561(抗备解素；Novartis and Alcon Inc,Hünenberg,Switzerland)；APL-2(C3抑制剂；Apellis Pharmaceuticals,Crestwood,KY,UnitedStates)；TNT003和TNT009(True North Therapeutics Inc.,CA,United States，靶标补体片段C1)；依库丽单抗(抗C5；Alexion Pharmaceuticals,Inc,Cheshire,CT,UnitedStates)；ALXN1210和ALXN550(靶向C5；Alexion Pharmaceuticals,Inc,Cheshire,CT,United States)；lampalizumab(抗CFD；Genentech,Inc,South San Francisco,CA,UnitedStates和F.Hoffmann-La Roche AG,Basel,Switzerland)；坎普他汀(例如可商购自TocrisBioscience,Bio-Techne Ltd.Belgium,Abingdon,UK)；Berinert(CSL Behring)；Ruconest(Salix Pharmaceuticals,NJ,United States)和Cinryze(Shire Pharmaceuticals,Dublin,Ireland)是C1INH制剂，其靶向C1；以及Coversin(C5-结合蛋白；Volution ImmunoPharmaceuticals,Geneva,Switzerland)；坎普他汀衍生物Cp40(AMY-101,AmyndasPharmaceuticals,PA,United States)；SOBI002，一种基于亲合抗体技术的C5阻滞剂(Swedish Orphan Biovitrum AB,Sweden；小(～12kDa)蛋白，通过噬菌体展示而获得，结合至C5并防止裂解)；MB12/22；MB12/22-RGD；ARC187；ARC1905；SSL7和OmCI(AlexionPharmaceuticals,Inc,Cheshire,CT,United States)。

根据本发明的一个实施方案，选自所述已知化合物的列表中的至少一种化合物被固定在根据本发明的载体上。根据本发明的装置的一个实施方案，所述装置包含至少一种选自所述已知化合物的列表的化合物。根据本发明的另一个实施方案，体外血液处理回路包括一种包含从所述已知化合物的列表中选择的至少一种化合物的装置。根据本发明的又一个实施方案，一种用于治疗与人补体因子相关的疾病的方法包括在体外回路中使用一种包含至少一种选自所述已知化合物的列表的化合物的装置。

根据本发明的一个实施方案，配体是依库丽单抗(Soliris,AlexionPharmaceuticals,Inc.)。依库丽单抗是靶向C5的静脉内(IV)施用的人源化单克隆抗体，已被批准用于治疗补体抑制的两种罕见遗传缺陷，非典型溶血性尿毒症综合征和阵发性夜间血红蛋白尿。依库丽单抗与C5结合，抑制其裂解成C5a和C5b，从而阻止MAC形成。APL-2(POT-4/AL-78898A，Apellis Pharmaceuticals)是玻璃体内施用的C3肽抑制剂。根据本发明的另一个实施方案，配体是lampalizumab(Le et al.J Pharmacol Exp Ther(2015)355:288-296)。Lampalizumab(INN)是与补体因子D结合的人源化单克隆抗体的抗原结合片段。根据本发明的另一个实施方案，配体为Cp40(AMY-101,Amyndas Pharmaceuticals,PA,UnitedStates)，其与C3结合(Zhang et al.,Imunobiology(2015)220:993-998)。根据本发明的又一个实施方案，配体是SOBI002，一种基于亲合体技术的C5-阻滞剂(Swedish OrphanBiovitrum AB,Sweden)。根据本文描述的任何装置和方法的另一个实施方案，配体是培克珠单抗(pexelizumab)，一种抗C5抗体的C5结合片段(Alexion Pharmaceuticals，Inc.)。在本文描述的任何装置和方法的一些实施方案中，补体抑制剂选自MB 12/22、MB 12/22-RGD。可商购的抗C5b抗体可从许多供应商获得，包括例如Hycult Biotechnology(产品目录号：HM2080；克隆568)和Abeam^TM(ab46l51或ab46l68)。

一种示例性的核酸，其编码示例性C5结合配体(派克珠单抗)，是GATATCCAGATGACCCAGTCCCCGTCCTCCCTGTCCGCCTCTGTGGGCGATAGGGTCACCATCACCTGCGGCGCCAGCGAAAACATCTATGGCGCGCTGAACTGGTATCAACAGAAACCCGGGAAAGCTCCGAAGCTTCTGATTTACGGTGCGACGAACCTGGCAGATGGAGTCCCTTCTCGCTTCTCTGGATCCGGCTCCGGAACGGATTTCACTCTGACCATCAGCAGTCTGCAGCCTGAAGACTTCGCTACGTATTACTGTCAGAACGTTTTAAATACTCCGTTGACTTTCGGACAGGGTACCAAGGTGGAAATAAAACGTACTGGCGGTGGTGGTTCTGGTGGCGGTGGATCTGGTGGTGGCGGTTCTCAAGTCCAACTGGTGCAATCCGGCGCCGAGGTCAAGAAGCCAGGGGCCTCAGTCAAAGTGTCCTGTAAAGCTAGCGGCTATATTTTTTCTAATTATTGGATTCAATGGGTGCGTCAGGCCCCCGGGCAGGGCCTGGAATGGATGGGTGAGATCTTACCGGGCTCTGGTAGCACCGAATATACCGAAAATTTTAAAGACCGTGTTACTATGACGCGTGACACTTCGACTAGTACAGTATACATGGAGCTCTCCAGCCTGCGATCGGAGGACACGGCCGTCTATTATTGCGCGCGTTATTTTTTTGGTTCTAGCCCGAATTGGTATTTTGATGTTTGGGGTCAAGGAACCCTGGTCACTGTCTCGAGCTGA。用于表达例如来自核酸的C5结合或C5a结合或C5b结合的多肽的可能的载体系统(例如质粒载体系统)是本领域公知的，并且可用于在许多细胞中的表达，包括在哺乳动物细胞中。抗体或其抗原结合片段可以在任何合适的宿主细胞中表达。合适的宿主细胞包括例如酵母、细菌、昆虫、植物和哺乳动物细胞，包括细菌如大肠杆菌；真菌如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)；昆虫细胞如SF9；哺乳动物细胞系(例如人细胞系)；原代细胞系(例如原代哺乳动物细胞)；中国仓鼠卵巢(“CHO”)细胞；和合适的骨髓瘤细胞系(例如NSO)。可以通过本领域公知的方法将表达载体以适合于核酸后续表达的方式引入到细胞中。

根据本发明的另一个实施方案，可以根据所寻求解决的疾病或病症来从以下文献所公开的抗体、片段或其衍生物中选择与用于提供根据本发明的装置的载体结合的抗体或其抗原结合片段：US 2012/0009184 A1、WO1995029697A1、WO 2007/103134 A2、WO 2011/109338 A1、WO 2011/137395 A、WO 2008/030505 A2、WO 2015/134894 A1、US 2017/0269102 A1、US 9732149 B2、WO 2017/044811、WO 2017/0246298 A1、WO 2007/056227 A2、WO 2003/015819 A1、WO 2016/011264 A1，通过引用将其全部内容明确地并入本文。

根据一个实施方案，使用通过本领域已知的方法产生针对补体因子C5的抗体或其抗原结合片段，并且其缔合平衡常数在10⁶至10¹⁵M^-1的范围内，在10⁶至10¹⁵M^-1的范围内，在10⁶至10¹²M^-1的范围内，在10⁸至10¹²M^-1的范围内，在10⁶至10¹⁰M^-1的范围内，在10⁶至10⁸M^-1的范围内，在10⁸至10¹⁰M^-1的范围内，或在10⁸至10¹²M^-1的范围内。

根据本发明，通过体外血液净化从人血液中去除补体成分或补体因子，例如C5，其中装置位于体外回路中，该装置包含配体，该配体具有结合并固定血液中的这种补体因子的能力。相关的体外血液净化以及装置和方法是本领域已知的。根据本发明的装置从患者血液中去除至少一种靶标蛋白的去除能力在10mg至1000mg的至少一种靶标蛋白的范围内。根据一方面，去除能力在50mg至800mg的至少一种靶标蛋白的范围内。根据另一方面，去除能力在150mg至500mg的至少一种靶标蛋白的范围内。

根据本发明，表述“体外血液净化”是指通过在患者身体之外(体外)的分流回路中从流动的血液中清除物质而从体液去除该物质的过程。所述物质可能包括内源性毒素(例如尿毒症毒素)；外源性毒素(例如乙二醇或真菌毒素)；施用的药物；病毒；细菌；抗体和蛋白(例如IMHA；重症肌无力)；异常细胞(即白血病)；和过量的水。治疗程序包括血液透析，包括间歇性血液透析(HD、HDF、HF)和连续性肾脏替代治疗(CRRT)；血液灌注和治疗性去除。

根据一方面，体外血液净化回路中的血液流速在20ml至700ml/分钟之间。除了根据本发明的血液处理装置之外，或者在血液透析仪被额外配置成固定靶标蛋白的情况下，在包括用于治疗肾衰竭的血液透析仪的体外回路中的典型透析液流速在0.5l/h至800ml/分钟的范围内。

在血液透析中，血液在体外回路中循环，其组成通过溶质和水经由扩散和/或对流力穿过界面半透膜发生的质量转移而改变。溶质转移的大小和范围取决于跨膜施加的力的性质、溶质的化学和物理特性(尤其还包括尺寸)以及膜的结构特性。血液透析是患有肾衰竭的患者的标准治疗方法。

血液灌注是一种吸附性体外疗法，用于处理无法通过血液透析有效清除的内源性和外源性中毒。吸附是溶质(例如蛋白)分子附着在材料表面(基质)上的原理。与血液透析过程中发生的血液和透析液之间的物理分离相反，在血液灌注过程中，血液直接暴露于具有选择性或非选择性结合血液路径中的溶质的能力的吸附剂。

在治疗性去除中，例如通过离心或借助于血浆膜或过滤器，将血液分离成其组成部分，并且在返回患者之前，对含有应当除去的溶质的部分(通常是血浆部分)进行特殊处理。本发明提供了一种去除处理，其中血浆(含有靶标蛋白)从患者的流动血液中去除，并且在与根据本发明的装置或基质接触之后返回患者(图5)。在其中用血浆灌注血液处理装置的体外回路中，典型的血浆流速在7ml/分钟至250ml/分钟之间的范围内。

根据一方面，根据本发明的体外血液回路被配置成执行血液透析。在这种情况下，根据本发明的装置例如是血液透析仪，其额外被配置成固定根据本发明的靶标蛋白。该回路可以根据医疗需要以不同的处理模式进行操作，包括血液透析、血液透析滤过、血液滤过模式。

根据一方面，根据本发明的体外血液回路被配置成提供连续的肾脏替代治疗(CCRT)。连续的肾脏替代治疗(CRRT)是缓慢的透析治疗，其被设置成每天24小时连续治疗，主要针对ICU设施中的重症患者。像慢性肾衰竭患者的间歇性HD一样，CRRT的溶质去除可以通过对流(血液滤过)、扩散(血液透析)或这两种方法的组合(血液透析滤过)来实现。此过程需要使用替代液，以防止医源性酸中毒和电解质消耗以及过多的液体去除。CRRT及其使用方法是本领域已知的。

根据另一方面，根据本发明的体外血液回路被配置成执行血液灌注。因此，根据本发明的血液处理装置被全血灌注并且位于体外回路内(图3)。根据本发明的一个方面，该装置是一种筒，其包括膜、无纺材料或树脂，其上已经结合了对靶标蛋白具有亲合力的配体。根据一个方面，当筒的基质包括其上已经结合了对靶标蛋白具有亲合力的配体的中空纤维膜束(过滤装置)时，处理模式可以是具有封闭的透析液/滤液端口的血液灌注。根据又一方面，筒可以位于血液透析仪的下游或上游，该血液透析仪被配置成对患者的血液进行血液透析(图4A和4B)，并且可以在选自血液透析、血液透析滤过和血液滤过的不同处理模式下进行操作。

根据一个方面，血液处理装置是如上所述的在过滤器的滤液空间中既包括中空纤维又包括树脂的过滤器。过滤器可以在血液灌注模式下操作，或者，如果与可以位于根据本发明的装置的上游或下游的血液透析仪组合，则处理模式可以是血液透析、血液透析滤过或血液滤过。

根据另一方面，根据本发明的血液处理装置用于从供体血液或血浆中离体去除靶标蛋白，例如C5、C5a、C5b或C3，然后将其灌注到受体，特别是在患者患有补体失调或有该风险的情况下。

根据本发明的装置、体外回路和方法可以用于治疗患有由补体激活失调引起的疾病的患者。根据一个实施方案，根据本发明的装置、体外回路和方法可以用于治疗患有由补体激活失调引起的疾病的患者。根据一个方面，所述失调包括所涉及的补体因子/靶标蛋白中的至少一种的缺乏或亢进。

根据一个方面，根据本发明的装置和方法适用于选自以下疾病，该疾病包括但不限于非典型溶血性尿毒症综合征；阵发性夜间血红蛋白尿；ANCA引起的肾小球肾炎；慢性阻塞性肺疾病(COPD)；类风湿关节炎；骨关节炎；银屑病；年龄相关性黄斑变性(AMD)；抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)血管炎；缺血-再灌注损伤；多发性硬化症；脱髓鞘性周围神经病；动脉粥样硬化；多器官衰竭；缺血后再灌注引起的心肌损害；败血性休克；中毒性休克综合征；败血症综合征；Degos病；抗神经节苷脂或抗糖脂抗体介导的神经病(急性运动性轴索神经病；急性炎性脱髓鞘性多发性神经病；Bickerstaffs脑干脑炎；急性眼瘫；共济失调的GuillainBarre综合征；咽颈臂无力；伴有抗糖脂抗体的慢性神经病综合征；抗MAG IgM副蛋白神经病；伴有抗二唾液酸抗体的慢性感觉共济失调神经病；IgM、IgG和IgA副蛋白神经病；伴有抗GM1和抗GM2抗体的运动神经病；慢性炎性脱髓鞘性神经病(CIDP)；多焦点运动神经病(MMN)；以及多灶性获得性脱髓鞘感觉和运动神经病(MADSAM))；血液透析引起的炎症；由包括病毒、细菌、真菌、朊毒体、蠕虫在内的传染原引起的补体介导的疾病。

根据本发明的一个方面，根据本发明的装置、体外回路和方法可以用于治疗患有诸如aHUS之类的疾病的患者，所述疾病由补体的替代途径的失调引起，包括(但不限于)：补体调节基因中的至少一个突变，所述基因选自H因子(CFH)、膜辅因子蛋白(CD46)、I因子(CF1)、血栓调节蛋白(THBD)；和/或激活基因中的至少一个突变，所述基因选自因子B(CFB)和C3；和/或至少是针对CFH的自身抗体；还可参见Rathbone et al.BMJ Open(2013)3:e003573。

根据另一个实施方案，根据本发明的装置、体外回路和方法可以用于支持ABO不相容的肾脏移植和/或延长同种异体移植物的寿命，包括治疗抗体介导的移植物排斥(AMR)，其中该装置配置成将靶标蛋白固定在其基质上，并且其中该装置位于体外血液处理回路中。

如前所述，对所述疾病的诊断和监测，包括监测治疗，并不总是那么简单，但通常可以通过涉及下文所述或如Cofiell等人所述(2015)的选定生物标记物的多个体外试验来证实。可以通过确认不存在(没有已确定的突变)或存在(已确定的突变)补体基因突变/多态性(包括但不限于基因CFH、CFI、CD46(MCP)、CFB和C3)来支持诊断。

关于aHUS，WO 2015/021166A2描述了评估aHUS发生的风险，诊断aHUS，确定受试者是否正经历aHUS的首次急性发作，监测aHUS的进展或减轻，和/或监测对于用补体抑制剂治疗的反应的方法。根据本发明的一个实施方案，可以如该参考文献中所述来监测根据本发明的aHUS的体外治疗。具体地，所述方法可以用于确定根据本发明的体外治疗的功效以及实现对该疾病而言的临床意义上的效果所需的体外治疗的频率。所述方法可以包括将测量的aHUS生物标记物蛋白的浓度或活性(如在从受试者获得的生物样品中测量的)与对照样品进行比较。在一些实施方案中，这样的对照样品是在根据本发明的体外治疗之前从受试者获得的。在另一个实施方案中，对照样品可以是(或可以基于)例如从尚未接受本发明治疗的一个或多个(2至40或更多)健康个体获得的样品的集合。所述健康个体未患有aHUS或者没有该嫌疑(也没有发展成aHUS的风险)。

因此，一方面，根据本发明的用于治疗患有非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)的患者的方法适用于已经确定血液或尿液含有升高水平的至少两种选自以下的与aHUS相关的生物标记物蛋白的患者：TNFR1、IL-6、补体成分因子B的蛋白水解片段Ba、可溶性C5b9(sC5b9)、凝血酶原片段F1+2、d-二聚体、凝血调节蛋白、补体成分C5a、β2微球蛋白(β2M)、簇蛋白、胱抑素C、脂肪酸结合蛋白1(FABP-1)、可溶性CD40配体(sCD40L)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、趋化因子(C-X-C基序)配体9、趋化因子(C-X-C基序)配体10、单核细胞趋化蛋白-1、血管细胞粘附分子-1和金属蛋白酶-1的组织抑制剂。根据另一方面，该方法适用于以下患者：除了所述至少两种生物标记物蛋白水平升高之外，该患者在用补体C5抑制剂治疗之前紧接着的三个月内接受过至少一次透析；和/或正在经历首次急性aHUS表现。在本文描述的任何方法的一些实施方案中，测量由Ba、sC5b-9和C5a组成的组中的至少两种的浓度。根据一个具体实施方案，测量C5a和C5b9之一或两者的浓度。补体水平可通过定量蛋白(C5AG/C5Complement,Antigen,Serum)的量的抗原测定法来检测。可以使用可商购的酶联免疫吸附测定试剂盒(Quidel,San Diego,CA)来测定血清C5b-9的水平。或者，可以例如通过使用“人补体C5 ELISA试剂盒”(Assaypro LLC,MO,United States)来测量去除患者的血液或血清中C5的进程。根据又一方面，对C5功能性(

补体系统筛选(EuroDiagnostica AB,

Sweden)和C5抗原的测量表明了根据本发明的治疗的影响。C5抗原和C5功能性的参考值分别为10.6-26.3mg/dl和29-53U/ml。还可以根据以下文献监测C5的去除和治疗进展：Volokhina et al Clinical Immunology(2015)160:237-243。

根据本发明的一个方面，用于治疗与补体因子相关的疾病的方法包括以下步骤：通过使所述患者的血液或血浆以与用补体C5抑制剂治疗之前患者血液或尿液中测得的浓度相比足够降低至少两种与aHUS相关的生物标记蛋白的浓度的频率流过被配置成固定C5的基质，而从所述患者体内去除C5。根据一个方面，根据本发明的单个体外治疗可以进行2至18小时、2至12小时、2至8小时、2至6小时、3至6小时、4小时。根据另一方面，当根据本发明指示时，可以重复单次治疗。根据另一方面，每周可以重复一次、两次、三次或四次2至6小时的单次治疗。在患有肾衰竭的患者中，可以在每次血液透析治疗的同时进行根据本发明的治疗。

根据本发明的另一个实施方案，根据以下文献进行根据本发明的体外治疗对于患者的适用性的诊断，并且用于监测根据本发明的aHUS的治疗的效力和进展：Gavriilaki etal.Blood(2015)125:3637-3646；以及还可参见Noris et al.Blood(2014)124:1715-1726，二者均通过引用并入本文，并且基于血清的测定法有助于将aHUS与也涉及C5和C5-9的其他血栓性微血管病相区别。在aHUS患者中，通过共聚焦显微镜和流式细胞术进行检查，与热灭活的对照或正常血清相比，可见在用aHUS血清孵育的糖基磷脂酰肌醇锚定的补体调节蛋白(GPI-AP)-缺陷型细胞上增加的C5b-9沉积。正常血清可以是例如人AB血清(H4522；Sigma-Aldrich,St Louis,MO)，并且可以用于对照样品中。因此，该方法包括通过共聚焦显微镜和流式细胞术确定，与热灭活的对照或正常血清相比，用aHUS血清孵育的GPI-AP-缺陷型细胞上C5b-9沉积的增加，并且任选地，额外确定与用来自健康对照组的血清相比，在用来自aHUS患者的血清(无活力的PIGA缺陷型TF-1细胞显著增加)孵育后，生化GPI-AP-缺陷型细胞和/或PIGA缺陷型细胞的细胞活力。该方法可用于诊断并筛选基因中的突变，该基因可调节或激活APC，包括补体因子H(CFH)和CFH相关蛋白、补体因子I、CD46(膜辅因子蛋白)、补体因子B、补体成分C3、血栓调节蛋白、纤溶酶原、二酰基甘油激酶-ε(DGKE)和CFH自身抗体。因此，本发明的一个目的是，提供一种治疗aHUS患者的方法，其中与热灭活的对照或正常血清相比，在用aHUS血清孵育后，该患者的糖基磷脂酰肌醇锚定的补体调节蛋白(GPI-AP)-缺陷型细胞上C5b-9的沉积增加。根据本发明的另一方面，所述方法包括以下步骤：通过使患者的血液或血浆以足够降低用aHUS血清孵育的糖基磷脂酰肌醇锚定的补体调节蛋白(GPI-AP)-缺陷型细胞上C5b-9的沉积的频率流过被配置成固定C5的基质，而以体外方式从所述患者体内去除C5。与热灭活的对照、TTP和正常血清相比，这种降低可以是降低10％至100％。与热灭活的对照或正常血清相比，它可以是降低20％至80％。与热灭活的对照、TTP和正常血清相比，可以减少至少50％。与热灭活的对照或正常血清相比，它还可以是降低至少75％。因此，如本文所用，表述“减缓”aHUS患者的病状涉及将用aHUS血清孵育的糖基磷脂酰肌醇锚定的补体调节蛋白(GPI-AP)-缺陷型细胞上C5b-9的沉积降低至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％；和/或与用补体C5抑制剂治疗之前患者血液或尿液中测得的浓度相比，将至少两种与aHUS相关的生物标记物蛋白的浓度降低至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。一方面，根据本发明的aHUS患者的治疗导致与正常血清相比，至少两种生物标记物减少和/或所述C5-9沉积物减少70％、90％或100％。该减少可以是在用根据本发明的装置进行至少一次治疗之后的总减少，或者是在几次治疗之后的减少。根据另一方面，将提供治疗，直到患者由于肾功能的恢复而不再需要透析。根据另一方面，将提供治疗，直到患者的血小板计数显示正常化。

根据另一方面，向此外还显示急性肾功能不全或衰竭或依赖于慢性肾脏替代疗法的患者提供该方法。

根据本发明的另一个实施方案，溶血测定法可用于确定需要根据本发明的治疗的那些患者。在研究单个补体成分测定法(例如C3或C5)之前，总补体(CH50)测定法可用作疑似补体缺陷的筛查。用于定量测定总补体活性的CH50体外免疫测定可商购自例如WakoDiagnostics,VA,United States。然后，可以通过对蛋白的量进行定量的抗原测定法来检测补体水平。补体级联的单个成分的缺乏将导致不可检测的总补体水平。CH50测试经典途径和膜攻击复合物的蛋白裂解被抗体包覆的绵羊红细胞的能力。裂解50％细胞的血清稀释液标志着终点。在C1至C8的纯合先天性缺陷中，CH50值为零，而在C9缺陷中，其CH50值为一半正常。此外，由于C3消耗，因子H或I的缺陷导致值较低。该测试不能测量替代途径激活蛋白的缺陷。因此，CH50结果是根据本发明的治疗进展的良好指标(Andreguetto et al.(2015)Abstracts/Molecular Immunology 67:119-1120,003)。根据本发明的另一个实施方案，可替代性溶血补体活性(AH50)可用于测量需要存在足够的因子B、因子D和备解素的替代途径的功能，因此可用于确定那些需要根据本发明的治疗的患者。

根据本发明的一个实施方案，本文所述的诊断和监测方法用于在治疗期间监测受试者或确定有效的治疗剂量或确定所需治疗的次数和频率。

根据本发明的另一个实施方案，在接受所述治疗之前或期间，将接受根据本发明的治疗方法的患者接种针对包囊细菌(包括脑膜炎球菌(meningococci)、肺炎球菌(pneumococci)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza))的疫苗，以消除在治疗期间感染的潜在风险。

根据另一方面，治疗与补体因子相关的疾病的方法可以与静脉内、口服或其他方式给予用于治疗与补体激活失调相关的疾病的药物同时进行或额外地进行。例如，除了施用阻断补体成分和/或其裂解的药物之外，还可以进行根据本发明的治疗方法，特别是在所述药物的临床效果不能完全令人满意的情况下。根据一个方面，除了施用依库丽单抗(

)外，还可以通过从患者尤其是依赖透析的患者的血液中去除C5和/或C5a和/或C5b来进行体外治疗aHUS的方法。根据另一方面，根据本发明的所述体外治疗与正在接受肾衰竭(其可以是急性或慢性的)治疗的患者的血液透析一起进行。

根据本发明的又一个实施方案，可以在两次治疗之间再生根据本发明的装置。

实施例

实施例1：制备包含环氧官能化的树脂的基质

首先，使树脂平衡。将树脂用固定缓冲液洗涤并过滤。树脂/缓冲液比为1/1(w/v)是优选的。选择固定缓冲液以使其与BAC B.V.(Naarden，Nether lands)生产的重组抗人C5抗体及其稳定性相容。该过程重复2至4次。通过将天然抗体溶解在固定缓冲液中来制备抗体溶液。例如，每克湿树脂可加载100至200mg抗体。蛋白浓度可以通过使用标准蛋白含量测定法来确定。将抗体溶解在足够量的缓冲液中，以使树脂/缓冲液的比为1/4(w/v)。可以根据所使用的抗体来优化该比例(范围可以从1/1到1/4变化)。固定开始于将包含抗体的固定缓冲液转移到固定容器中。然后添加环氧官能化的树脂，例如本文所述的

Lifetech^TM树脂。将浆液在70至80rpm下缓慢混合18小时，然后在不混合情况下再放置20小时。应避免在蛋白固定过程中进行磁力搅拌，因为这会损坏珠。取决于蛋白的稳定性，可以在20℃至30℃的温度下进行固定。固定不应在高温下进行，因为这会导致环氧环降解(水解)并促进微生物生长。最后，将液相过滤并收集。确定液体中的蛋白含量并评估固定产率。然后用洗涤缓冲液洗涤树脂。在温和搅拌下或在柱洗涤中，该过程重复2至4次。可以使用含0.5M NaCl的缓冲液进行额外的洗涤步骤，以完全解吸非共价结合的蛋白。通过过滤除去过量的水。然后可以在水分含量和特异性结合活性方面来表征固定的抗体。

实施例2：制备包含环氧官能化树脂的基质

首先，使树脂平衡。将树脂用固定缓冲液洗涤并过滤。树脂/缓冲液比为1/1(w/v)是优选的。选择固定缓冲液以使其与抗体及其稳定性相容。在第二步骤中，从25％(w/v)的戊二醛溶液开始，制备2％的戊二醛缓冲液。使用固定缓冲液来制备2％的戊二醛(v/v)溶液。在第三步骤中，通过将在步骤2中制备的2％戊二醛缓冲液添加到树脂中来活化氨基树脂。2％戊二醛缓冲液的最佳体积应在树脂/缓冲液比为1/4(w/v)的范围内。将浆液在20℃至25℃下混合60分钟。然后将珠过滤，并使用树脂/缓冲液比例为1/4(w/v)的固定缓冲液洗涤。应避免将预活化的树脂存放超过48小时。然后珠可用于进行固定步骤。在第四步骤中，制备蛋白(抗体)溶液。为此，将蛋白溶解在固定缓冲液中。例如，每克湿树脂可以装载1mg至100mg之间的抗体。可以通过使用标准蛋白含量测定法来确定蛋白浓度。

将蛋白溶解在缓冲液中，以使树脂/缓冲液的比为1/4(w/v)。此比率的优化可以在进一步的试验中进行(范围可以从1/1到1/4变化)。在第五步骤中，将蛋白固定。将固定缓冲液转移到固定容器中，并添加步骤3中制备的预活化的氨基树脂(例如，来自

Lifetech^TM)。将浆液在70至80rpm下缓慢混合18小时。在固定过程中应避免磁力搅拌，因为这会损坏珠。根据抗体的稳定性，可以在20℃至30℃下进行固定。固定不应在高温下进行，因为这可能导致步骤3中形成的树脂上的醛基发生副反应。最后，将液相过滤并收集。确定液体中的蛋白含量并评估固定产率。然后用洗涤缓冲液洗涤树脂。在温和搅拌下或在柱洗涤中，将该过程重复2至4次。可以使用含0.5M NaCl的缓冲液进行额外的洗涤步骤，以完全解吸非共价结合的蛋白。通过过滤除去过量的水。然后可以在水分含量和特异性结合活性方面来表征固定的抗体。

实施例3：从人血浆中消耗C5蛋白

3.1将C5从人血浆中结合至具有C5-3抗体的Capture

亲合基质

用其上已经固定有C5-抗体的琼脂糖珠基质测试了在被配置成固定C5的基质的帮助下，从人血浆中消耗所述补体因子的可行性。使用的基质是Thermo Fisher Scientific的Capture

C5亲合基质(CS C5AFF MTR，SKU 2943692005、2943692010或294692050)，其中单克隆C5抗体被固定在环氧化物活化的琼脂糖珠上，平均珠大小为65μm，以下称为“C5-3”。以乙醇中的悬浮液的形式提供基质。将100μL悬浮液转移到1.5mLEppendorf管中，并添加1mL pH 7.4的PBS缓冲液。小心混合后，将悬浮液离心(2000g/5分钟)。除去上清液，并将相同的洗涤程序重复3次。洗涤珠后，添加1mL人血浆(英国Octapharma Ltd.的Octaplas LG)，在恒定的小心摇动下于25℃反应1小时。在孵育0分钟、10分钟、20分钟、30分钟、最后在60分钟之后，取样。离心后，从样品各自的上清液中取出等分试样进行Elisa试验，该试验用于确定血浆中C5的消耗，将其与未处理的人血浆相比，而未处理的人血浆样品已从同一与C5-3基质反应的池中搁置一边。用相同的方法处理具有用于固定C5的其他抗体配体的其他基质(以下称为C5-1、C5-4和C5-8)。

3.2Elisa测试

Capture

亲合基质C5-3以及类似的具有其他抗体的亲合基质C5-1、C5-4和C5-8按3.1中所述进行处理。在使人血清与如前所述的基质接触后，将abl25963补体C5人ELISA试剂盒(Abcam plc,Cambridge,UK)用于上清液中补体C5的定量测定。根据试剂盒随附的使用说明，各自用200μL的上清液进行Elisa测试。用其上未固定有任何配体的琼脂糖基质处理的人血浆，将其作为对照进行Elisa测试。

表II(A)至(D)提供了各种测试的亲合基质的结果。

表II(A).使用Capture

亲合基质C5-8随时间从人血浆中消耗补体C5

表II(B).使用Capture

亲合基质C5-1随时间从人血浆中消耗补体C5

表II(C).使用Capture

亲合基质C5-3随时间从人血浆中消耗补体C5

表II(D).使用Capture

亲合基质C5-4随时间从人血浆中消耗补体C5

消耗实验的结果描述在图7A和7B中。

在另一个实验中，在静态实验中测试了各种亲合基质，其中将100μl的各Capture

亲合基质与各种浓度的在各种稀释下的人血浆(同样来自Octaplas LG，Octapharma Ltd.,UK)在Eppendorf管中孵育60分钟(表III)。另外，将样品按照上述3.2节的描述进行处理，并进行Elisa测试。在未与亲合基质接触的人血浆(对照)中检测到平均为75.474μg/mL的补体因子C5。在经处理的样品中发现平均约0.3至1.3μg/mL的补体因子C5。因此，在与各基质接触后，可以通过靶标的各种初始浓度来确认C5蛋白的显著且一致的降低。

表III：通过使血浆与其上已固定了对C5具有亲合力的抗体的亲合基质接触而从人血浆中消耗补体因子C5。通过Elisa测试确定血浆中C5的消耗。

3.3 SDS-PAGE

此外，制备了SDS-PAGE凝胶，以确定在孵育60分钟后与C5-3基质结合的固定的C5-蛋白。从根据3.1制备的基质中取样，而根据3.2测试消耗的上清液。在准备用于SDS凝胶的探针时，将样品保持在冰上。离心1000μL的珠悬浮液后，弃去上清液，如前所述用PBS缓冲液洗涤珠5次。在最后的洗涤步骤之后，将样品置于25℃并添加100μL 4x Laemmli缓冲液以洗脱C5蛋白。然后将珠在1000g离心120秒，并弃去珠。将剩余的溶液在70℃加热10分钟。对于SDS-PAGE，从900mL H₂O中的100mL 10x TGS制备1L运行缓冲液。每孔施加5μl样品。将4μL标记物添加到一个孔中。使凝胶在120V下运行90分钟。将凝胶与固定溶液(将200mL乙醇(40％)和50mL乙酸(10％)溶于250mL H₂O中制备500ml溶液)孵育15分钟。然后将凝胶在100mL H₂O中洗涤。然后除去水，并将凝胶用Coomassie Blue溶液在摇床上染色过夜。然后将凝胶在100ml水中洗涤3小时。图8显示了洗脱的C5α链的明显条带，其中已使用具有C5-3的亲合基质，而从不具有任何配体树脂上没有洗脱C5α链。还显示了按C5-3所述制备并提供其他C5-抗体的具有其他C5结合配体的亲合基质(被命名为C5-4、C5-1和C5-8)。

Claims (40)

1.一种血液处理装置，其适于在体外血液回路中从有需要的人的血液或血浆中去除至少一种人补体因子，其中所述装置包括被配置成固定所述补体因子的基质。

2.根据权利要求1所述的血液处理装置，其中所述装置包括被配置成固定C5的基质。

3.根据权利要求1所述的血液处理装置，其中所述装置包括被配置成固定人补体因子5a(C5a)和/或人补体因子5b(C5b)的基质。

4.根据权利要求2所述的血液处理装置，其中所述基质被配置成另外固定人补体因子5a(C5a)和/或人补体因子5b(C5b)。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的血液处理装置，其中所述血液处理装置位于体外血液回路中，患者的血液通过所述体外血液回路，并且所述体外血液回路包括用于将血液从所述患者的血管系统以限定的流速输送到所述血液处理装置并且然后将经处理的血液返回至患者的装置。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的血液处理装置，其中所述血液处理装置所位于的体外血液回路还包括位于所述血液处理装置的上游或下游的血液透析仪。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的血液处理装置，其中所述血液处理装置是用于血液的血液透析的血液透析仪，其被配置成另外固定C5和/或C5a和/或C5b。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的血液处理装置，其中所述血液处理装置是吸附筒，其被配置成固定C5和/或C5a和/或C5b并且用全血灌注。

9.根据权利要求1至5中任一项所述的血液处理装置，其中所述血液处理装置位于体外血液回路中，所述体外血液回路被配置成从血液中分离出包含C5、C5a和C5b的血浆成分，并且其中使血浆通过所述血液处理装置，然后将经处理的血浆返回至患者。

10.根据权利要求9所述的血液处理装置，其中所述血液处理装置所位于的体外血液回路包括允许分离所述血浆成分的血浆透析仪，并且其中所述血液处理装置位于所述血浆透析仪的血浆出口的下游。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的血液处理装置，其中所述基质包括载体和与所述载体结合的配体并且其能够固定至少人补体因子5。

12.根据权利要求11所述的血液处理装置，其中所述基质能够固定选自C5、C5a和C5b或其组合的人补体因子。

13.根据权利要求11或权利要求12所述的血液处理装置，其中所述配体是选自以下的抗体或其抗原结合片段：人源化抗体、重组抗体、双抗体、嵌合的抗体或嵌合性抗体、单克隆抗体、去免疫的抗体、完全人抗体、单链抗体、Fv片段、Fd片段、Fab片段、Fab'片段和F(ab')2片段。

14.根据权利要求11或权利要求12所述的血液处理装置，其中所述配体是肽适体。

15.根据权利要求11所述的血液处理装置，其中所述配体是选自以下的配体：依库丽单抗、LFG316、zimura、ALXN1210、ALXN550、coversin、SOBI002、培克珠单抗、MB12/22、MB12/22-RGD、ARC187、ARC1905、SSL7和OmCI。

16.根据权利要求11至15中任一项所述的血液处理装置，其中所述载体是选自以下的载体：中空纤维膜、平板状膜、纤维毡、树脂和无纺材料。

17.根据权利要求16所述的血液处理装置，其中所述树脂由以下物质构成：选自藻酸盐、壳聚糖、甲壳质、胶原、角叉菜胶、明胶、纤维素、淀粉、果胶和琼脂糖的至少一种聚合物；选自沸石、陶瓷、硅藻土、二氧化硅、玻璃、活性炭和木炭的无机材料；或选自以下的合成聚合物：聚乙烯(PE)、聚甲醛(POM)、聚丙烯(PP)、聚氯乙烯(PVC)、聚乙酸乙烯酯(PVA)、聚偏二氯乙烯(PVDC)、聚苯乙烯(PS)、聚四氟乙烯(PTFE)、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)、聚丙烯腈(PAN)、聚酯、聚碳酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚酰胺、聚芳酰胺、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、聚砜(PS)、聚醚砜(PES)、聚芳醚砜(PEAS)、乙烯-乙酸乙烯酯(EVA)、乙烯-乙烯醇(EVOH)、聚酰胺-酰亚胺、聚芳醚酮(PAEK)、聚丁二烯(PBD)、聚丁烯(PB)、聚对苯二甲酸丁二醇酯(PBT)、聚己内酯(PCL)、聚羟基链烷酸酯、聚醚醚酮(PEEK)、聚醚酮酮(PEKK)、聚醚酰亚胺(PEI)、聚酰亚胺、聚乳酸(PLA)、聚甲基戊烯(PMP)、聚对苯撑醚(PPE)、聚氨酯(PU)、苯乙烯-丙烯腈(SAN)、聚丁烯酸、聚(4-烯丙基苯甲酸)、聚(丙烯酸缩水甘油酯)、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)、聚二乙烯基苯(PDVB)、苯乙烯与二乙烯基苯(DVB)的共聚物、聚(烯丙基缩水甘油基醚)、聚(乙烯基缩水甘油基醚)、聚(乙烯基缩水甘油基氨基甲酸酯)、聚烯丙基胺、聚乙烯基胺，所述聚合物的共聚物以及通过引入官能团而改性的任何这些聚合物。

18.根据权利要求16和17所述的血液处理装置，其中所述树脂由选自以下的至少一种合成聚合物构成：聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)、苯乙烯与二乙烯基苯(DVB)的共聚物、聚丙烯腈(PAN)、聚酯、聚碳酸酯、聚对苯二甲酸乙二酯(PET)、聚酰胺、聚芳酰胺、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、聚砜(PS)、聚醚砜(PES)、聚芳醚砜(PEAS)、乙烯-乙酸乙烯酯(EVA)、乙烯-乙烯醇(EVOH)、聚酰胺-酰亚胺、聚芳醚酮(PAEK)、聚丁二烯(PBD)、聚丁烯(PB)、聚对苯二甲酸丁二醇酯(PBT)、聚己内酯(PCL)、聚羟基链烷酸酯、聚醚醚酮(PEEK)、聚醚酮酮(PEKK)、聚醚酰亚胺(PEI)、聚酰亚胺、聚乳酸(PLA)、聚甲基戊烯(PMP)、聚对苯撑醚(PPE)、聚氨酯(PU)、苯乙烯-丙烯腈(SAN)、聚丁烯酸、聚(4-烯丙基苯甲酸)、聚(丙烯酸缩水甘油酯)、聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA)、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)、聚二乙烯基苯(PDVB)、聚(烯丙基缩水甘油基醚)、聚(乙烯基缩水甘油基醚)、聚(乙烯基缩水甘油基氨基甲酸酯)、聚烯丙基胺、聚乙烯基胺，所述聚合物的共聚物以及通过引入官能团而改性的任何这些聚合物。

19.根据权利要求16所述的血液处理装置，其中所述中空纤维膜、纤维毡或平板状膜由至少一种多糖衍生物或选自以下的合成聚合物构成：聚丙烯酸酯(PA)、聚(甲基丙烯酸甲酯)(PMMA)或聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、聚砜(PS)、聚醚砜(PES)、聚芳醚砜(PAES)、所述聚合物的组合以及通过引入官能团而改性的任何这些聚合物。

20.根据权利要求16所述的血液处理装置，其中所述无纺材料由以下物质构成：选自多糖、聚乳酸(PLA)、聚己内酯(PCL)和蛋白的至少一种生物聚合物；选自TiO₂、SiO₂或AlO₂的至少一种无机材料；或选自以下的至少一种合成聚合物：聚丙烯(PP)、聚乙烯(PE)、聚丙烯腈(PAN)、聚乙烯醇(PVA)、聚酰胺-酰亚胺(PAI)、聚氨酯(PUR)、聚醚砜(PES)、聚丙烯酸(PAA)、聚环氧乙烷(PEO)、聚苯乙烯(PS)和聚偏二氟乙烯(PVDF)、所述聚合物的组合以及通过引入官能团而改性的任何这些聚合物。

21.一种体外血液回路，患者的血液通过所述体外血液回路，并且所述体外血液回路包括用于将血液从所述患者的血管系统以限定的流速输送到血液处理装置并且然后将经处理的血液返回至患者的装置，其中所述血液处理装置包括被配置成固定至少一种人补体因子从而将其从患者的血液中去除的基质。

22.根据权利要求21所述的体外血液回路，其中所述人补体因子选自人补体因子5(C5)、人补体因子5a(C5a)、人补体因子5b(C5b)及其组合。

23.根据权利要求21或权利要求22所述的体外血液回路，其中所述体外血液回路还包括用于血液的血液透析的血液透析仪，并且其中所述血液透析仪位于所述血液处理装置的上游或下游。

24.根据权利要求21或权利要求22所述的体外血液回路，其中所述血液处理装置是用于血液的血液透析的血液透析仪，并且其中所述血液透析仪被配置成另外固定人补体因子，所述人补体因子选自人补体因子5(C5)、人补体因子5a(C5a)、人补体因子5b(C5b)及其组合。

25.根据权利要求21至23中任一项所述的体外血液回路，其中所述血液处理装置是吸附筒，并且用全血灌注。

26.一种体外血液回路，患者的血液通过所述体外血液回路，并且所述体外血液回路被配置成用血浆过滤器从血液中分离血浆，其中使血浆通过血液处理装置，该血液处理装置适于从患者的血浆去除人补体因子，然后将经处理的血浆返回至患者，所述人补体因子选自人补体因子5(C5)、人补体因子5a(C5a)、人补体因子5b(C5b)及其组合。

27.根据权利要求26所述的体外血液回路，其中所述体外血液回路包括允许分离血浆的血浆过滤器，并且其中所述血液处理装置位于血浆透析仪的血浆出口的下游。

28.根据权利要求27所述的体外血液回路，其中在所述血浆过滤器的下游不设置血液处理装置，并且其中所述血浆过滤器本身适于从患者的血液中去除人补体因子5(C5)，并且其中将所述血浆直接返回至患者。

29.根据权利要求26和权利要求27所述的体外血液回路，其中所述血液处理装置是吸附筒，并且用血浆灌注。

30.一种治疗或减缓患者中人补体因子5(C5)相关的疾病的至少一种症状的方法，其中所述方法包括从患者体外去除C5的步骤，其中所述去除包括使患者的血液通过根据权利要求1至5中任一项所述的装置。

31.根据权利要求30所述的方法，其中从患者去除C5的步骤包括使患者的血液或血浆通过被配置成固定C5的基质。

32.根据权利要求30或权利要求31所述的方法，其中所述方法还包括从体外另外去除由人补体因子5a(C5a)和人补体因子5b(C5b)或其两者组成的C5的至少一种裂解产物的步骤。

33.根据权利要求30至32中任一项所述的方法，其中所述人补体因子5(C5)相关的疾病选自aHUS，非典型溶血性尿毒症综合征；阵发性夜间血红蛋白尿；ANCA引起的肾小球肾炎；慢性阻塞性肺疾病(COPD)；类风湿关节炎；骨关节炎；银屑病；年龄相关性黄斑变性(AMD)；抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)血管炎；缺血-再灌注损伤；多发性硬化症；脱髓鞘性周围神经病；动脉粥样硬化；多器官衰竭；缺血后再灌注引起的心肌损害；败血性休克；中毒性休克综合征；败血症综合征；Degos病；抗神经节苷脂或抗糖脂抗体介导的神经病(急性运动性轴索神经病；急性炎性脱髓鞘性多发性神经病；Bickerstaffs脑干脑炎；急性眼瘫；共济失调的GuillainBarre综合征；咽颈臂无力；伴有抗糖脂抗体的慢性神经病综合征；抗MAGIgM副蛋白神经病；伴有抗二唾液酸抗体的慢性感觉共济失调神经病；IgM、IgG和IgA副蛋白神经病；伴有抗GM1和抗GM2抗体的运动神经病；慢性炎性脱髓鞘性神经病(CIDP)；多焦点运动神经病(MMN)；以及多灶性获得性脱髓鞘感觉和运动神经病(MADSAM))；血液透析引起的炎症；由包括病毒、细菌、真菌、朊毒体、蠕虫在内的感染物引起的补体介导的疾病。

34.根据权利要求30至33中任一项所述的方法，其中所述人补体因子5(C5)相关的疾病选自非典型溶血性尿毒症综合征(aHUS)；慢性阻塞性肺疾病(COPD)；抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)血管炎；多器官衰竭；败血性休克和血液透析引起的炎症。

35.根据权利要求30至34中任一项所述的方法，其中通过共聚焦显微镜和流式细胞术进行测定，与体外测定中热灭活的对照或正常血清相比，患者的血清显示出在用aHUS血清孵育的GPI-AP-缺陷型细胞上增加的C5b-9沉积。

36.根据权利要求30至34中任一项所述的方法，其中所述患者的尿液包含升高水平的至少两种与aHUS相关的生物标记物蛋白，所述生物标记物蛋白选自TNFR1、IL-6、补体成分因子B的蛋白水解片段Ba、可溶性C5b9(sC5b9)、凝血酶原片段F1+2、d-二聚体、凝血调节蛋白、补体成分C5a、β2微球蛋白(β2M)、簇蛋白、胱抑素C、脂肪酸结合蛋白1(FABP-1)、可溶性CD40配体(sCD40L)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、趋化因子(C-X-C基序)配体9、趋化因子(C-X-C基序)配体10、单核细胞趋化蛋白-1、血管细胞粘附分子1和金属蛋白酶1的组织抑制剂。

37.根据权利要求35或权利要求36所述的方法，其中所述患者用补体C5抑制剂治疗之前紧接着的三个月内还接受过至少一次透析；和/或正在经历首次急性aHUS表现。

38.根据权利要求35或权利要求36所述的方法，其中与治疗前的值相比，所述治疗的持续时间和频率适于实现降低至少两种与aHUS相关的生物标记物蛋白的水平和/或通过共聚焦显微镜和流式细胞术所测定的在用aHUS血清孵育的GPI-AP-缺陷型细胞上的降低的C5b-9沉积。

39.根据权利要求30至38中任一项所述的方法，其中所述方法与患有肾衰竭的患者的血液透析治疗同时进行。

40.根据权利要求30至38中任一项所述的方法，其中所述方法与至少一种用于治疗与人补体因子5相关的疾病的药物的给药同时进行。

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