HU224316B1 - Cimicifuga racemosából származó extraktum alkalmazása antitumor hatású gyógyszerkészítmények elõállítására - Google Patents
Cimicifuga racemosából származó extraktum alkalmazása antitumor hatású gyógyszerkészítmények elõállítására Download PDFInfo
- Publication number
- HU224316B1 HU224316B1 HU9901360A HUP9901360A HU224316B1 HU 224316 B1 HU224316 B1 HU 224316B1 HU 9901360 A HU9901360 A HU 9901360A HU P9901360 A HUP9901360 A HU P9901360A HU 224316 B1 HU224316 B1 HU 224316B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- estrogen
- extract
- tamoxifen
- cimicifuga racemosa
- preparation
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 5
- 235000020228 cimicifuga racemosa extract Nutrition 0.000 title abstract description 6
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 title description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 claims abstract description 18
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 claims abstract description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 10
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 claims description 36
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 20
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 claims description 18
- 230000001833 anti-estrogenic effect Effects 0.000 claims description 10
- 229940046836 anti-estrogen Drugs 0.000 claims description 8
- 241000906543 Actaea racemosa Species 0.000 claims description 4
- 235000005301 cimicifuga racemosa Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 229940045109 genistein Drugs 0.000 claims description 2
- TZBJGXHYKVUXJN-UHFFFAOYSA-N genistein Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O TZBJGXHYKVUXJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000006539 genistein Nutrition 0.000 claims description 2
- ZCOLJUOHXJRHDI-CMWLGVBASA-N genistein 7-O-beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 ZCOLJUOHXJRHDI-CMWLGVBASA-N 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 16
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 241000206501 Actaea <angiosperm> Species 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000003687 estradiol congener Substances 0.000 description 2
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000001076 estrogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 238000002723 toxicity assay Methods 0.000 description 2
- JRHMPHMGOGMNDU-UHFFFAOYSA-N 2-(bromomethyl)-1-methoxy-4-nitrobenzene Chemical compound COC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1CBr JRHMPHMGOGMNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKAJCVFOJGXVIA-UHFFFAOYSA-N 4'-methoxy-3,3',5-stilbenetriol 3-glucoside Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C=CC1=CC(O)=CC(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)=C1 GKAJCVFOJGXVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014654 Aromatase Human genes 0.000 description 1
- 108010078554 Aromatase Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010013935 Dysmenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 206010067572 Oestrogenic effect Diseases 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 238000003271 compound fluorescence assay Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- GKAJCVFOJGXVIA-QGLKVJOYSA-N rhaponticin Natural products COc1ccc(C=Cc2cc(O)cc(O[C@@H]3O[C@@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)c2)cc1O GKAJCVFOJGXVIA-QGLKVJOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 229960003454 tamoxifen citrate Drugs 0.000 description 1
- FQZYTYWMLGAPFJ-OQKDUQJOSA-N tamoxifen citrate Chemical compound [H+].[H+].[H+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 FQZYTYWMLGAPFJ-OQKDUQJOSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- GKAJCVFOJGXVIA-DXKBKAGUSA-N trans-rhaponticin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1\C=C\C1=CC(O)=CC(O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)=C1 GKAJCVFOJGXVIA-DXKBKAGUSA-N 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/71—Ranunculaceae (Buttercup family), e.g. larkspur, hepatica, hydrastis, columbine or goldenseal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
- A61P5/32—Antioestrogens
Abstract
Ösztrogénfüggő tumorok kezelésére általánosan használt antiösztrogénhatóanyag hatását egy Cimicifuga racemosa extraktum egyidejű beadásamegnöveli, előnyösen naponként 5 mg és 500 mg közötti gyógyászatikészítmény adagolása esetén.
Description
A leírás terjedelme 8 oldal (ezen belül 3 lap ábra)
HU 224 316 Β1
A találmány Cimicifuga racemosából származó extraktum alkalmazására vonatkozik olyan gyógyszerkészítmények előállításánál, amelyek ösztrogénfüggő tumorok kezelésére alkalmasak.
A poloskavész (Cimicifugae racemosae) gyöktörzséből (rhizoma) származó extraktumok ösztrogénszerű hatásokat mutatnak. Az extraktumokban olyan komponenseket találtak, amelyek specifikusan kötődnek az ösztrogénreceptorokhoz, és az ováriumuktól megfosztott patkányoknál a gonadotropinszintet csökkenteni tudják. Ennélfogva ezen extraktumok felhasználása klimakterikus panaszok és dysmenorrhoea kezelésekor alkalmasnak bizonyult.
Emlőkarcinómára nézve veszélyeztetett betegeknek tilos klimakterikus panaszok szabályozására ösztrogéntartalmú gyógyszereket beadni, mivel az ösztrogénfüggő tumorok növekedését az ösztrogénadagolás természetszerűleg erősíti. Mivel az ösztrogénanalóg vegyületek hatásmechanizmusa még nem tisztázott, ezen anyagok beadása az ösztrogénfüggő tumorokra kockázatos, ezért ellenjavallt.
Nemrég beszámoltak arról (Nesselhut és munkatársai, TW Gynokologie, 1993, 249-250), hogy a Phytopharmaka Rhaponticin és Cimicifuga extraktum alacsony koncentrációkban a karcinómasejtek szaporodását in vitro felgyorsítja, magasabb koncentrációkban ezzel szemben lehet, hogy akadályozza.
Ezen eredmények hitelesítését még nem közölték, éppen ezért az ösztrogénanalóg hatású Phytopharmaka beadása ösztrogénfüggő tumoros betegek számára továbbra is tilos.
Ismert, hogy az ösztrogénfüggő tumorokat antiösztrogén hatóanyaggal kezelik. Jelen esetben az erre alkalmazott hatóanyag a tamoxifen [(Z)-2-[4-(1,2-difenil-1 -butenil)-fenoxi]-N,N-dimetil-etil-aminj.
Azon betegek esetében, akiket ilyesfajta antiösztrogén anyaggal kezeltek, a fent említett okok miatt a klimakterikus panaszok ösztrogénnel vagy ösztrogénanalóg anyaggal történő szabályozása nem jöhet számításba.
Az emlőtumorsejtek szaporodásának akadályozása függ a tamoxifen koncentrációjától. Egy olyan környezetben, ahol a tumorsejtek szaporodása biztosan gátolt, a tamoxifen koncentrációjának növelése nem lehetséges, mivel a tamoxifen ilyen koncentrációkban már toxikus.
A jelen találmány abból a problémafelvetésből indul ki, hogy tumorterápia alacsony antiösztrogénkoncentrációval is lehetővé váljon.
A jelen találmány tárgya egy Cimicifuga racemosa extraktum és antiösztrogén hatóanyag kombinációjának alkalmazása.
Meglepő módon kiderült, hogy a Cimicifuga racemosa extraktum az ösztrogénfüggő tumorsejteket nemcsak hogy nem erősíti, hanem az antiösztrogén hatóanyaggal való kombinációjában a szaporodásgátló hatása egyértelműen erősödik, olyannyira, hogy teljes szaporodásgátlás érhető el anélkül, hogy az antiösztrogén hatóanyag a toxicitás határait túllépné.
Az antiösztrogén hatóanyag hatásának növelését a tamoxifen standard hatóanyag segítségével alaposabban megvizsgáltuk. Más kísérletek arra utalnak, hogy a Cimicifuga racemosa extraktum a genistein antiösztrogénhatását is erősíti. Az extraktum előnyben részesített hígításai a 10-3 és 10~5 tartományba esnek, mivel a 10~2 nagyságú hígítás in vitro toxikus hatásokat idézhet elő. Az előnyben részesített adagolás 5 mg és 500 mg gyógyászati készítmény/nap között van.
A Cimicifuga extraktum jelen találmány szerinti hatása, amely az ösztrogénfüggő karcinómasejtek, különös tekintettel az emlőkarcinóma-sejtek szaporodására vonatkozik, in vitro körülmények között MCF-7 sejtekből álló tesztrendszeren bekövetkezett.
Az MCF-7 sejtvonal egy bevált in vitro modell ösztrogénfüggő tumorokra, amely mind ösztrogénreceptorokkal, mind aromatázaktivitással rendelkezik. Az emberi emlőrákvonalat egy áttételes emlőtumor mellhártya effúzióból vezették le, és ez a sejtvonal szignifikáns mennyiségű 17-(i-receptort tartalmaz [Schwarte, A. (1994) Wirkspektrum ausgewáhlter Flavonoide auf die humáné Brustkrebslinie MCF-7: Eine in vitro Studie, azaz Kiválasztott flavonoidok hatásspektruma az MCF-7 humán emlőrákvonalra: Egy in vitro tanulmány. Witten Herdecke, Universitát, Bereich Medizin, Diss. 1994],
A Cimicifuga extraktum MCF-7 sejtek szaporodására gyakorolt befolyását radioaktívan jelzett timidin beépítésével határoztuk meg.
Anyagok és eljárások
Tesztvegyületek
17-p-Ösztradiolt (Sigma) és tamoxifen-citrátot (Sigma) 1 M koncentrációjú oldatot készítve DMSO-ban (dimetil-szulfoxid) feloldottunk és egy 1:10 hígítási sorozatban ennek megfelelően továbboldottunk a sejttenyészet-médiumban. A Cimicifuga extraktumot egy 1:10 hígítási sorozatban közvetlenül a sejttenyészet-médiummal hígítottuk.
A Cimicifuga racemosa extraktum előállítása
Az azonosság, tisztaság és tartalom megvizsgálása után 30 kg felaprított gyógyszerdrogot, a Cimicifuga racemosa gyöktörzset 10 napon keresztül 50 liter 40 V/V%-os izopropil-alkohollal maceráltuk. Az extraktumot leengedtük, és a gyógyszernyersanyagot kisajtoltuk. Az egyesített frakciókat 40 V/V%-os izopropil-alkohollal 35 liter végtérfogatra töltöttük fel.
MCF-7 sejt szaporodási assay
Az MCF-7 sejteket az ATCC-től (HTB 22) szereztük be, és Eagle MÉM táptalajba (Eagle minimális esszenciális médiuma) kultiváltuk, amelyben voltak nem esszenciális aminosavak, 1 mM nátrium-piruvát, 10 pg/ml inzulin és 10% magzati borjúszérum (FKS). Az MCF-7 sejteket a tesztelés előtt legalább egy alkalomra olyan Eagle MÉM táptalajba helyeztük, amely nem tartalmazott fenolvöröset, és tartalmazott nem esszenciális aminosavakat, 1 mM nátrium-piruvátot, 10 pg/ml inzulint és 5% magzati borjúszérumot (FKS). Ahhoz, hogy a tesztben ösztrogénmentes növekedési feltételeket kapjunk, a kiindulási tesztkeveréket úgy módosítottuk, hogy a sejttenyészet médiumából az inzulint eltávolítottuk, és a magzati borjúszérumot (FKS) 5% „Characoal stripped” magzati borjúszérummal (CSF) helyettesítettük.
HU 224 316 Β1
Egy 5* 104 sejt/ml koncentrációra beállított sejtszuszpenzióból 96 lyukú mikrotiterlemezek (Nunc) lyukaiba 200 μΙ-t pipettáztunk lyukanként, és 24 órán keresztül, 37 °C-on, 5% CO2-tartalom mellett inkubáltuk. Ezután óvatosan levettük a fedőlemezeket, és 150 μΙ friss sejttenyészet-médiumot pipettáztunk minden egyes lyukba.
A tesztvegyületeket feloldottuk, ezeket a sejtkultúra-médiummal hígítottuk, és négy párhuzamosban 50 μΙ-t pipettáztunk belőlük lyukanként. Kontrollként a sejtkultúra-médiumokat, valamint a szóban forgó oldószerhígításokat minden alkalommal együtt inkubáltuk.
2-3 napig tartó, 37 °C-on, 5% CO2 mellett történő inkubáció után a sejteket 25 μΙ/lyuk koncentrációban 6-33-timidinnel (Amersham, speciális aktivitású 2 Ci/mmol) 8 órán keresztül pulzáltattuk. Ezt követően ezeket standard módszerek szerint (Cell Harvester Inotech) üvegszálas szűrőn arattuk, és egy folyadékszcintillációs számlálóval (Wallac) leszámoltuk őket. Az eredményeket cpm (counts per minute, azaz percenkénti beütésszám) értékben fejeztük ki.
A „Characoal-stripped” magzati borjúszérum (CSF) előállítása tabletta „Dextran coated charcoal tablet”, azaz dextránbevonatú aktívszén-tablettát (Steranti Separe®) 10 ml FKS-ben feloldottunk. Ezután a szérumot 2*45 percen át 56 °C-os vízfürdőben inaktiváltuk, és ezt követően 3000 rpm fordulatszámmal 10 percen keresztül centrifugáltuk. A fedőlemezeket eltávolítottuk és 0,2 μιτι pórusméretű szűrőn szűrtük.
Toxicitási assay
Az egyes vizsgálandó anyagok toxicitásának meghatározásához Hela szuszpenziós sejtekkel fluoreszcens assay-t végeztünk.
A Hela-sejtkultúra sűrűségét 2,5* 105 sejt/ml médium (Eagle MEM+5% FKS) koncentrációra állítottuk be, és a szuszpenzióból 100 μΙ-eket pipettáztunk 96 lyukú mikrotiterlemezekbe (Nunc). 24 órás, 37 °C-os, 5% CO2 mellett történő inkubáció után a tesztvegyületek 1:2 hígítási sorának egyes tagjaiból a médiumba raktunk és minden egyes hígításból négy párhuzamosban minden lyukba 100 μΙ-t pipettáztunk. E kiindulási szuszpenziókat 48 órán át 37 °C-on és 5% CO2 mellett inkubáltuk. Ezt követően a mikrotiterlemezeket 800 rpm fordulatszám mellett centrifugáltuk, és a fedőlemezeket óvatosan eltávolítottuk. 0,1 mg/ml 4-methylumbelliferyl-heptanoát PBS-ben készített oldatának 200 μΙ-ét pipettáztuk minden egyes lyukba. 60 perc múlva egy mikrotiterlemez-fluoriméterben meghatároztuk minden lyuk fluoreszcenciáját (Fluoroskan II).
Eredmények
A vizsgálatok megkezdéséhez mindenekelőtt a tesztrendszer érzékenységét vizsgáltuk meg. Pozitív kontrollként a 17-[i-ösztradiolt 10-7,10-8, illetve 10-9 M dózisokban teszteltük.
Mindhárom tesztelt dózis esetében az MCF-7 sejtek szaporodásának fokozódását indukálta a 17-3-ösztradiol a kezeletlen kontrolihoz képest 80-100%-kal, mint ahogy az az 1. ábrán látható.
Egy oldószerkontrollt is végeztünk mindegyik teszttel párhuzamosan. A DMSO a tesztben alkalmazott maximális koncentrációjában a kezeletlen kontrolihoz képest nem okozott szignifikáns szaporodásnövekedést vagy szaporodásgátlást.
Egy további szakaszban a nem szteroid antiösztrogén tamoxifen tesztrendszerre gyakorolt befolyását vizsgáltuk.
A tamoxifen a 10-4 és 10-5 M-os koncentrációkban 100%-os, illetve 77%-os szaporodásgátlást okozott, ezzel szemben a 10-6 M dózis esetén a kezeletlen kontrolihoz képest a beépülési ráta 52%-os emelkedése következett be.
A tamoxifen szaporodást gátló hatása is megmutatkozott, amikor a tamoxifent egy konstans dózisú ösztradiollal együtt alkalmaztuk. Az ösztrogén által indukált szaporodás növekedését tamoxifennel dózisfüggő módon gátolni lehetett.
Ezen előkísérletek eredménye egyértelművé tette az MCF-7 tesztrendszer alkalmasságát a tesztvegyületek mind ösztrogén, mind antiösztrogén hatásának kimutatására.
Ennek ellenőrzésére a következő kísérletsorozatokat végeztük el médium- és oldószerkontrollok (negatív kontrollok) mellett, miközben minden alkalommal az ösztrogénhatásra vonatkozó pozitív kontrollvizsgálatot is végeztünk, amely 17-p-ösztradiolt tartalmazott 10~7 vagy 10-8 M dózisokban, valamint antiösztrogénhatásra vonatkozó pozitív kontrollt, amely 10-5 M tamoxifent tartalmazott.
Mielőtt a Cimicifuga extraktumot az MCF-7 rendszerbe tettük, ennek toxicitását mindenekelőtt egy Hela-sejtekkel végzett toxicitási assay-ben ellenőriztük.
Erre a sejtvonalra az extraktum 10~2-es hígításig mutatott toxikus hatásokat. 10_3-os hígítástól nem volt a médiumkontroll és a tesztkörülmény között különbség megállapítható (2. ábra). Nemspecifikus citotoxikus hatások kizárása érdekében ezt a hígítást maximális dózisként alkalmaztuk az MCF-7 sejtek tesztsorozataiban.
A 3. ábra a kontrollrendszer, egy 10-5 M tamoxifenoldat, egy 10-8 M ösztradiololdat, valamint egy tamoxifen és ösztradiol kombináció esetén megvalósuló szaporodás összehasonlításával megvilágítja, hogy az ösztrogénindukált szaporodások tamoxifen által okozott gátlása is igazolható.
A 3. ábrán továbbá látható a 10~5 M tamoxifenoldat Cimicifuga racemosából származó különböző 10-3 és 10-8 közötti 1:10 arányú hígítású extraktumokkal képzett keverékeinek hatására bekövetkező szaporodásgátlás is. Látható, hogy a 10~3-10-5 hígításokban egyértelműen felerősödik a tamoxifen szaporodást gátló hatása, ahol a 10~3 hígítás esetén a szaporodás teljesen, és a 10-4 hígítás esetén a szaporodás szinte teljesen vissza van szorítva. 10~6 és ennél magasabb hígítások esetében a tamoxifen szaporodást gátló hatása nem erősödik.
A tamoxifen 10-3 vagy 10-4 hígítású Cimicifuga extraktummal való kombinációjával a tumorsejtek szinte teljes szaporodásgátlása érhető el anélkül, hogy magasabb, például 10-4 M tamoxifenkoncentrációt kellene alkalmazni, ami már toxikus hatásokat mutatna.
HU 224 316 Β1
Claims (5)
1. Cimicifuga racemosából származó extraktum alkalmazása ösztrogénfüggő tumorok kezelésére szolgáló gyógyszerészeti készítmény előállításához, mely 5 antiösztrogén hatóanyagot tartalmazó gyógyszerészeti készítménnyel van kombinálva.
2. Antiösztrogén hatóanyaggal kombinált Cimicifuga racemosából származó extraktum alkalmazása ösztrogénfüggő tumorok kezelésére szolgáló gyógyszerészeti készítmény előállításához.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti extraktum alkalmazása tamoxifennel kombinálva.
4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti extraktum alkalmazása genisteinnel kombinálva.
5. Az 1-4. igénypontok valamelyike szerinti Cimicifuga racemosából származó extraktum alkalmazása naponként körülbelül 5 mg és körülbelül 500 mg közötti gyógyászati készítmény adagolásban.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19652183A DE19652183C1 (de) | 1996-12-14 | 1996-12-14 | Verwendung eines Extraktes aus Cimicifuga racemosa |
| PCT/DE1997/002898 WO1998026791A1 (de) | 1996-12-14 | 1997-12-12 | Verwendung eines extraktes aus cimicifuga racemosa |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP9901360A2 HUP9901360A2 (hu) | 1999-08-30 |
| HUP9901360A3 HUP9901360A3 (en) | 2000-02-28 |
| HU224316B1 true HU224316B1 (hu) | 2005-07-28 |
Family
ID=7814802
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9901360A HU224316B1 (hu) | 1996-12-14 | 1997-12-12 | Cimicifuga racemosából származó extraktum alkalmazása antitumor hatású gyógyszerkészítmények elõállítására |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6267994B1 (hu) |
| EP (1) | EP0847755B1 (hu) |
| AT (1) | ATE205721T1 (hu) |
| AU (2) | AU730372B2 (hu) |
| CA (1) | CA2245890C (hu) |
| DE (2) | DE19652183C1 (hu) |
| DK (1) | DK0847755T3 (hu) |
| ES (1) | ES2163085T3 (hu) |
| HU (1) | HU224316B1 (hu) |
| IL (1) | IL125776A (hu) |
| NO (1) | NO316106B1 (hu) |
| PL (1) | PL187264B1 (hu) |
| WO (1) | WO1998026791A1 (hu) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19812204A1 (de) * | 1998-03-19 | 1999-11-04 | Plantamed Arzneimittel Gmbh | Verwendung von Extrakten aus Cimicifuga racemosa und Belamcanda sinensis als estrogenartiges organselektives Arzneimittel ohne uterotrope Wirkung |
| DK1200107T3 (da) * | 1999-07-15 | 2006-01-16 | Uinv Kobenhavns | Præparater der har steroid östrogenvirkning, hvilke præparater ikke öger risikoen for brystcancer |
| DE10054641A1 (de) * | 2000-11-03 | 2002-05-16 | Schaper & Bruemmer Gmbh | Verwendung einer Zubereitung von Cimicifuga racemosa |
| DE10127897B4 (de) * | 2001-06-08 | 2006-04-20 | Bionorica Ag | Manteltablette mit Pflanzentrockenextrakten |
| DE10146159A1 (de) | 2001-09-19 | 2003-04-10 | Bionorica Ag | Verwendung von Extrakten aus Cimicifuga-Arten als organselektives Arzneimittel zur Behandlung von sexualhormonabhängigen Erkrankungen des Urogenitaltraktes |
| DE10206390A1 (de) * | 2002-02-15 | 2003-08-28 | Bionorica Ag | Verwendung von selektiv den Estrogenrezeptor beta modulierenden phytoestrogenhaltigen Extrakten |
| US20030224069A1 (en) * | 2002-06-03 | 2003-12-04 | Ven Subbiah | Triterpene glycosides for hormonal therapy |
| US20030224068A1 (en) * | 2002-06-03 | 2003-12-04 | Ven Subbiah | Compounds for hormonal therapy |
| EP1519717B1 (en) * | 2002-07-05 | 2010-09-29 | Temrel Limited | Controlled release composition |
| US20090264377A1 (en) * | 2002-12-27 | 2009-10-22 | Linda Saxe Einbond | Anti-neoplastic compositions comprising extracts of black cohosh |
| US7407675B2 (en) * | 2002-12-27 | 2008-08-05 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Anti-neoplastic compositions comprising extracts of black cohosh |
| US20090186837A1 (en) * | 2002-12-27 | 2009-07-23 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Anti-neoplastic compositions comprising extracts of black cohosh |
| JP2004307445A (ja) * | 2003-04-02 | 2004-11-04 | Pharmaton Sa | Ｓｅｒｍの副作用を改善する方法 |
| US20040228931A1 (en) * | 2003-05-12 | 2004-11-18 | Pharmachem Laboratories, Inc. | Novel composition for hormonal balance and uses thereof |
| ES2300783T3 (es) * | 2003-07-01 | 2008-06-16 | Max Zeller Sohne Ag | Procedimiento de extraccion vegetal y extracto. |
| DE102005005276A1 (de) * | 2005-02-04 | 2006-08-10 | Peter Heger | Verwendung von Hydroxystilben-haltigen Wirkstoffen zur Chemoprävention der Tumorgenese und/oder zur Inhibition der Tumorprogression bei endokrin-abhängigen und endokrin-unabhängigen Tumoren |
| AU2013285492B2 (en) | 2012-07-03 | 2015-11-12 | Max Zeller Soehne Ag | Novel pharmacological use of Cimicifuga extract |
| EP3906040A1 (en) * | 2018-12-31 | 2021-11-10 | Max Zeller Söhne AG | Combination of cimicifuga and petasites extracts for anticancer therapy and prophylaxis |
| IT201900000343A1 (it) | 2019-01-10 | 2020-07-10 | Herbal E Antioxidant Derivatives S R L Ed In Forma Abbreviata H&Ad S R L | Composizioni per il trattamento della menopausa, osteopenia e osteoporosi, disturbi metabolici e vascolari legati al climaterio |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02255622A (ja) * | 1989-03-28 | 1990-10-16 | Tsumura & Co | 制癌補助剤 |
| US5569459A (en) * | 1995-02-15 | 1996-10-29 | Bio-Virus Research Incorporated | Pharmaceutical compositions for the management of premenstrual syndrome and alleviation of menopausal disorders |
-
1996
- 1996-12-14 DE DE19652183A patent/DE19652183C1/de not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-11-29 AT AT97121030T patent/ATE205721T1/de active
- 1997-11-29 ES ES97121030T patent/ES2163085T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-29 EP EP97121030A patent/EP0847755B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-29 DK DK97121030T patent/DK0847755T3/da active
- 1997-11-29 DE DE59704654T patent/DE59704654D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-10 PL PL97323617A patent/PL187264B1/pl unknown
- 1997-12-11 AU AU48300/97A patent/AU730372B2/en not_active Ceased
- 1997-12-12 HU HU9901360A patent/HU224316B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1997-12-12 AU AU55490/98A patent/AU5549098A/en not_active Abandoned
- 1997-12-12 IL IL12577697A patent/IL125776A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-12-12 WO PCT/DE1997/002898 patent/WO1998026791A1/de active Application Filing
- 1997-12-12 CA CA2245890A patent/CA2245890C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-12-12 NO NO19975858A patent/NO316106B1/no not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-08-14 US US09/134,159 patent/US6267994B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO975858L (no) | 1998-06-15 |
| DE59704654D1 (de) | 2001-10-25 |
| IL125776A0 (en) | 1999-04-11 |
| CA2245890A1 (en) | 1998-06-25 |
| AU5549098A (en) | 1998-07-15 |
| DE19652183C1 (de) | 1998-02-12 |
| NO316106B1 (no) | 2003-12-15 |
| ES2163085T3 (es) | 2002-01-16 |
| HUP9901360A2 (hu) | 1999-08-30 |
| ATE205721T1 (de) | 2001-10-15 |
| IL125776A (en) | 2003-12-10 |
| US6267994B1 (en) | 2001-07-31 |
| AU4830097A (en) | 1998-06-18 |
| EP0847755B1 (de) | 2001-09-19 |
| EP0847755A1 (de) | 1998-06-17 |
| NO975858D0 (no) | 1997-12-12 |
| PL323617A1 (en) | 1998-06-22 |
| PL187264B1 (pl) | 2004-06-30 |
| AU730372B2 (en) | 2001-03-08 |
| HUP9901360A3 (en) | 2000-02-28 |
| WO1998026791A1 (de) | 1998-06-25 |
| DK0847755T3 (da) | 2001-11-12 |
| CA2245890C (en) | 2010-05-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU224316B1 (hu) | Cimicifuga racemosából származó extraktum alkalmazása antitumor hatású gyógyszerkészítmények elõállítására | |
| Chen et al. | Melatonin protects against MPTP/MPP+‐induced mitochondrial DNA oxidative damage in vivo and in vitro | |
| Akinyemi et al. | Screening of some medicinal plants used in south-west Nigerian traditional medicine for anti-Salmonella typhi activity | |
| US5679716A (en) | Pharmaceutical composition for treating osteoporosis | |
| Razak et al. | Ameliorative effects of aquilaria malaccensis leaves aqueous extract on reproductive toxicity induced by cyclophosphamide in male rats | |
| Beigh et al. | Bleomycin-induced pulmonary toxicopathological changes in rats and its prevention by walnut extract | |
| Zingue et al. | Estrogenic effects of Ficus umbellata Vahl.(Moraceae) extracts and their ability to alleviate some menopausal symptoms induced by ovariectomy in Wistar rats | |
| Piwowarski et al. | Evaluation of the effect of Epilobium angustifolium aqueous extract on LNCaP cell proliferation in in vitro and in vivo models | |
| Lestari et al. | Supplementation with extract of pumpkin seeds exerts estrogenic effects upon the uterine, serum lipids, mammary glands, and bone density in ovariectomized rats | |
| Kuriakose et al. | Sub-acute toxicity assessment of taxol isolated from Fusarium solani, an endophytic fungus of Taxus brevifolia, in wistar rats and analyzing its cytotoxicity and apoptotic potential in lung cancer cells | |
| Deepthi et al. | Evaluation of cytotoxic potential of Digera muricata leaf extract on lung cancer cell line | |
| Yang et al. | Antrodia camphorata induces G 1 cell-cycle arrest in human premyelocytic leukemia (HL-60) cells and suppresses tumor growth in athymic nude mice | |
| Mahmoud et al. | Syzygium aqueum (Burm. f.) Alston prevents streptozotocin-induced pancreatic beta cells damage via the TLR-4 signaling pathway | |
| Li et al. | Dehydroepiandrosterone prevents H 2 O 2-induced BRL-3A cell oxidative damage through activation of PI3K/Akt pathways rather than MAPK pathways | |
| Abou‐Elhamd et al. | Effect of khat (catha edulis forsk) extract on testicular maturation in pre‐pubertal and pubertal rats: a morphological and biochemical study | |
| Bigoniya et al. | Radioprotective and in-vitro cytotoxic sapogenin from Euphorbia neriifolia (Euphorbiaceae) leaf | |
| Rodrigues et al. | Effects of estrogen-like plant compounds on the vaginal epithelium pituitary, adrenal glands, and uterus of rats | |
| Zingue et al. | Lupeol, the major compound of the dichloromethane extract of Millettia macrophylla Benth (Fabaceae), displays estrogenic effects in ovariectomized rats | |
| Almasoud et al. | Dose-dependent variation in anticancer activity of hexane and chloroform extracts of field horsetail plant on human hepatocarcinoma cells | |
| Pokale et al. | Piper longum (Linn.) restores ovarian function in Letrozole induced PCOS in Rats: Comparison with Metformin and Clomiphene citrate | |
| US20130288989A1 (en) | New use of chemical ingredients in cynomorium as phytoestrogen | |
| Foudah et al. | The Potential Hepatoprotective and Antioxidant Activities of Astragalus davisii against Paracetamol Induced Liver Damage in Rats | |
| EP2931287A1 (de) | Delphinidin zur bekämpfung von melanomzellen | |
| Tanideh et al. | Investigating the Effect of Hydroalcoholic Extract of Licorice Root to Prevent Ovariectomy-Mediated Complications | |
| Ruhmann-Wennhold et al. | An acute effect of estradiol on steroid hydroxylation by the rat adrenal |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20050613 |
|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |