PL187264B1 - Zastosowanie ekstraktu z Cimicifuga racemosa do wytwarzania preparatów farmaceutycznych do leczenianowotworów zależnych od estrogenu - Google Patents
Zastosowanie ekstraktu z Cimicifuga racemosa do wytwarzania preparatów farmaceutycznych do leczenianowotworów zależnych od estrogenuInfo
- Publication number
- PL187264B1 PL187264B1 PL97323617A PL32361797A PL187264B1 PL 187264 B1 PL187264 B1 PL 187264B1 PL 97323617 A PL97323617 A PL 97323617A PL 32361797 A PL32361797 A PL 32361797A PL 187264 B1 PL187264 B1 PL 187264B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- estrogen
- pharmaceutical preparation
- extract
- tamoxifen
- proliferation
- Prior art date
Links
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 title 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 24
- 230000001833 anti-estrogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 claims abstract description 21
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 claims description 40
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 21
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 claims description 20
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 claims description 11
- 241000906543 Actaea racemosa Species 0.000 claims description 9
- 235000005301 cimicifuga racemosa Nutrition 0.000 claims description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 9
- 229940046836 anti-estrogen Drugs 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 229940045109 genistein Drugs 0.000 claims description 4
- TZBJGXHYKVUXJN-UHFFFAOYSA-N genistein Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O TZBJGXHYKVUXJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000006539 genistein Nutrition 0.000 claims description 4
- ZCOLJUOHXJRHDI-CMWLGVBASA-N genistein 7-O-beta-D-glucoside Chemical group O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 ZCOLJUOHXJRHDI-CMWLGVBASA-N 0.000 claims description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims 2
- 235000020228 cimicifuga racemosa extract Nutrition 0.000 abstract description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 16
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 16
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 10
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 9
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000206501 Actaea <angiosperm> Species 0.000 description 5
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000001076 estrogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-LJTCTKOTSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methyl-6-tritiopyrimidine-2,4-dione Chemical compound [3H]C1=C(C)C(=O)NC(=O)N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-LJTCTKOTSA-N 0.000 description 1
- -1 10 * Chemical compound 0.000 description 1
- GKAJCVFOJGXVIA-UHFFFAOYSA-N 4'-methoxy-3,3',5-stilbenetriol 3-glucoside Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C=CC1=CC(O)=CC(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)=C1 GKAJCVFOJGXVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014654 Aromatase Human genes 0.000 description 1
- 108010078554 Aromatase Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010027304 Menopausal symptoms Diseases 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003687 estradiol congener Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000321 herbal drug Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- GKAJCVFOJGXVIA-QGLKVJOYSA-N rhaponticin Natural products COc1ccc(C=Cc2cc(O)cc(O[C@@H]3O[C@@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)c2)cc1O GKAJCVFOJGXVIA-QGLKVJOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229960003454 tamoxifen citrate Drugs 0.000 description 1
- FQZYTYWMLGAPFJ-OQKDUQJOSA-N tamoxifen citrate Chemical compound [H+].[H+].[H+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 FQZYTYWMLGAPFJ-OQKDUQJOSA-N 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- GKAJCVFOJGXVIA-DXKBKAGUSA-N trans-rhaponticin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1\C=C\C1=CC(O)=CC(O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)=C1 GKAJCVFOJGXVIA-DXKBKAGUSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/71—Ranunculaceae (Buttercup family), e.g. larkspur, hepatica, hydrastis, columbine or goldenseal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
- A61P5/32—Antioestrogens
Abstract
1 . Zastosowanie ekstraktu z Cimicifuga racemosa do wytwarzania preparatu farmaceu- tycznego do leczenia nowotworów zaleznych od estrogenu w polaczeniu z preparatem far- maceutycznym zawierajacym substancje o dzialaniu przeciwestrogenowym. 5. Zastosowanie ekstraktu z Cimicifuga racemosa w polaczeniu z substancja o dziala- niu przeciwestrogenowym do wytwarzania preparatu farmaceutycznego do leczenia nowo- tworów zaleznych od estrogenu. PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie ekstraktu z Cimicifuga racemosa do wytwarzania preparatów farmaceutycznych do leczenia nowotworów zależnych od estrogenu.
Ekstrakty z kłącza Cimicifugae racemosae mają działanie podobne do estrogenu. W ekstrakcie tym znaleziono składniki, które wiążą się selektywnie z receptorami estrogenu i mogą obniżyć poziom gonadotropin u szczurów z wyciętymi jajnikami. Podawanie tych ekstraktów, w celu leczenia dolegliwości klimakterycznych i bolesnego lub nieprawidłowego miesiączkowania okazało się skuteczne.
Pacjentkom o wysokim ryzyku złośliwego raka sutka zabronione jest przyjmowanie środków farmaceutycznych zawierających estrogen, w celu łagodzenia dolegliwości klimakterycznych, ponieważ rozprzestrzenianie się nowotworów zależnych od estrogenu, w naturalny sposób wzmacniane jest przez dawki estrogenu. Ponieważ mechanizm działania substancji analogicznych do estrogenu jest jeszcze niejasny, podawanie tych substancji uważane jest przezornie za przeciwwskazane przy ryzyku nowotworu zależnego od estrogenu.
Wprawdzie doniesiono już (Nesselhut i inni w TW Gynokologie (1993) strony 249 do 250), że lek roślinny Rhaponticin i ekstrakt z Cimcifuga w niskim stężeniu wzmacniają proliferację komórek nowotworu złośliwego in vitro, natomiast w wyższych stężeniach - być może - hamują.
Nie opublikowano weryfikacji tych rezultatów, w związku z czym utrzymywany jest zakaz podawania leków roślinnych o działaniu analogicznym do estrogenu, pacjentkom o wysokim stopniu ryzyka względem nowotworów zależnych od estrogenu.
Znane jest leczenie nowotworów zależnych od estrogenu substancjami przeciwestrogenowymi. Najbardziej znaną substancją tego rodzaju jest obecnie tamoksyfen ((Z)-2-[4-(1,2-difenylo-1 -butenylo)-fenoksy]-N,N-dimetyloetyloamina).
W przypadku pacjentek, leczonych tego rodzaju substancjami przeciwestrogenowymi, z powyżej podanych powodów nie wchodzi w rachubę regulowanie dolegliwości klimakterycznych estrogenem lub substancjami analogicznymi do estrogenu.
187 264
Hamowanie proliferacji komórek rakowych sutka jest zależne od stężenia tamoksyfenu. Niemożliwe jest podwyższenie stężenia do zakresu, w którym z pewnością zapobiegnie się proliferacji komórek rakowych, ponieważ tamoksyfen w tych stężeniach jest toksyczny.
Celem wynalazku jest zastosowanie takiego środka farmaceutycznego, który umożliwi leczenie nowotworów również przy niskich stężeniach substancji przeciwestrogenowych.
Nieoczekiwanie stwierdzono, że ekstrakt z Cimicifuga racemosa nie tylko nie wzmacnia proliferacji komórek nowotworowych zależnych od estrogenu, lecz w połączeniu z substancją prz.eciwestrogenową zwiększa wyraźnie jej działanie hamujące, w taki sposób, że osiągalne jest całkowite wyhamowanie proliferacji, bez konieczności stosowania toksycznych stężeń substancji przeciwestrogenowej.
Zatem przedmiotem wynalazku jest zastosowanie ekstraktu z Cimicifuga racemosa do wytwarzania preparatu farmaceutycznego do leczenia nowotworów zależnych od estrogenu w połączeniu z preparatem farmaceutycznym zawierającym substancje o działaniu przeciwestrogenowym.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie ekstraktu z Cimicifuga racemosa w połączeniu z substancją o działaniu przeciwestrogenowym do wytwarzania preparatu farmaceutycznego do leczenia nowotworów zależnych od estrogenu.
Korzystnie substancją o działaniu przeciwestrogenowym jest tamoksyfen albo genistein.
Korzystna dawka mieści się w zakresie pomiędzy około 5 mg a około 500 mg substancji na dzień.
Korzystnie preparat farmaceutyczny zawiera substancje o działaniu przeciwestrogenowym o stężeniu w ekstrakcie od 0,01 M do 1M.
Wzmacnianie działania substancji przeciwestrogenowej dokładnie zbadano na podstawie standardowej substancji czynnej tamoksyfenu. Inne doświadczenia wskazują na to, że także przeciwestrogenowe działanie genisteinu wzmacniane jest ekstraktem z Cimicifuga racemosa. Korzystne rozcieńczenie ekstraktu mieści się w zakresie między 10'3 i 10’5, ponieważ rozcieńczenie 10‘2 wywołuje in vitro efekty toksyczne.
Wpływ ekstraktu z Cimicifuga racemosa na proliferację komórek nowotworowych zależnych od estrogenu, zwłaszcza komórek rakowych sutka, badano in vitro układem testowym komórek MCF-7.
Komórki MCF-7 są uznanym w metodzie in vitro modelem nowotworu zależnego od estrogenu, posiadającym zarówno receptory estrogenu, jak i aktywność aromatazy. Komórki raka piersi u ludzi wywodzą się z wysięku opłucnowego przy dającym przerzuty raku piersi i mają znaczne ilości receptorów 17-β (Schwarte A. Wirkspektrum ausgewahlter Flavonoide auf die humane Brustkrebslinie MCF-7: Eine in vitro Studi. Witten-Herdecke, Universitat, Bereich Medizin, Diss. 1994).
Wpływ ekstraktu z Cimicifuga na proliferację komórek MCF-7 oznaczano wbudowując radioaktywnie znaczoną tymidynę.
Przykład
Materiały i metody. Substancje testowane
17p-Estradiol (Sigma) i cytrynian tamoksyfenu (Sigma) rozpuszczano w DMSO (dimetylosulfotlenku) i w serii rozcieńczeń 1:10 rozcieńczano je dalej pożywką do hodowli komórkowej. Ekstrakt z Cimicifuga w serii rozcieńczeń 1:10 bezpośrednio rozcieńczano pożywką do hodowli komórkowej.
Wytwarzanie ekstraktu z Cimicifuga racemosa
Po sprawdzeniu identyczności, czystości i zawartości, 30 kg kłączy Cimicifuga racemosa macerowano przez 10 dni z 50 l alkoholu izopropylowego 40% (obj./obj.). Ekstrakt usunięto ze zbiornika, a kłącza wyciśnięto. Połączone frakcje dopełniono 40% (obj./obj.) alkoholem izopropylowym do końcowej objętości 35 l.
187 264
Test proliferacji MCF-7
Komórki MCF-7 pobrano z ATCC (HTB 22) i hodowano w pożywce podstawowej minimalnej Eagles MEM, z nie niezbędnymi aminokwasami, 1 mM pirogronianem sodu, 10 pg/ml insuliny i 10% FKS (płodowa surowica cielęca).
Przed poddaniem testom, komórki MCF-7 utrzymywano przynajmniej raz w pożywce Eagles MEM, bez czerwieni fenolowej z niezbędnymi aminokwasami, 1 mM pirogronianem sodu, 10 pg/ml insuliny i 5% FKS (płodowa surowica cielęca). W celu utrzymania bezestrogenowych warunków wzrostu hodowli, ze składu testowanej hodowli usuwano insulinę, a FKS zastępowano 5% FKS potraktowanym węglem drzewnym (CSF).
Do każdego wgłębienia 96 studzienkowej szalki mikrotitracyjnej (Nunc) dodano pipetką 200 pl zawiesiny komórek, w ilości 5 x 104 kom./ml i inkubowano w inkubatorze 24 godziny w 37°C i w atmosferze 5% CO2. Następnie wyrośniętą hodowlę ostrożnie zebrano i dodano pipetą po 150 pl pożywki hodowli komórkowej na wgłębienie.
Rozpuszczono badane substancje, rozcieńczono pożywką do hodowli komórkowej i pipetą umieszczono w 4 porównawczych wgłębieniach w ilości po 50 pl na wgłębienie. Jako kontrolę inkubowano jednocześnie pożywki hodowli komórkowej oraz odpowiednie rozcieńczenia rozpuszczalnika.
Po 2-3 dniach inkubacji w 37°C i w atmosferze 5% CO2 komórki napromieniowano 8 godzin za pomocą 25 pl/Napf (6-3H)-tymidyny (Amersham, aktywność właściwa 2 Ci/mmol). Następnie zebrano je standardowymi metodami (Celi Harvester Inotech) na filtrze z włókna szklanego i zliczono w płynie scyntylacyjnym w liczniku (Wallac). Wyniki wyrażono w jednostkach cpm (zliczenia na minutę).
Wytwarzanie FKS potraktowanego węglem drzewnym (CSF) tabletkę dekstranu powlekanego węglem aktywnym (Steranti Separe®) rozpuszczono w 10 ml FKS. Następnie surowicę inaktywowano 2 x 45 minut na łaźni wodnej w 56°C, po czym odwirowywano ją 10 minut przy 3000 obr./min. Roztwór zebrano i przesączono przez filtr o porach 0,2.
Test toksyczności
Do oznaczenia toksyczności poszczególnych badanych substancji przeprowadzono próby fluorescencji z zawiesiną komórek Hela.
Komórki Hela doprowadzono do gęstości komórek 2,5 x 105 kom./ml pożywki (Eagle's MEM + 5% FKS) i 100 pl zawiesiny nanoszono pipetą do wgłębień 96 studzienkowej szalki mikrotitracyjnej (Nunc). Po 24 godzinach inkubacji w 37°C w atmosferze 5% CO2, przygotowano szereg rozcieńczeń 1:2 substancji testowanych w pożywce i każde rozcieńczenie w ilości 100 pl na wgłębienie wkroplono pipetą do 4 porównawczych wgłębień. Szalkę inkubowano 48 godzin w 37°C, w atmosferze 5% CO2, po czym odwirowano ją przy 800 obr./min i pobrano ostrożnie hodowlę. Pipetką dodano po 200 pl na wgłębienie 0,1 mg/ml roztworu 4-metyloumbeliferyloheptanonu w PBS. Po 60 minutach oznaczono fluorescencję poszczególnych wgłębień w fluorymetrze do szalek mikrotitracyjnych (Fluoroskan II).
Wyniki
Na początku badań sprawdzono czułość układu testowego. Sprawdzono 17-3 estradiol w dawkach 10, 10’8 względnie 109
We wszystkich trzech przetestowanych dawkach 17-β estradiol wywoływał 80-100% wzrost proliferacji komórek MCF-7, w porównaniu do próbek kontrolnych, nie potraktowanych tym czynnikiem, co widoczne jest na fig. 1.
W każdym teście przeprowadzano pomiar kontrolny rozpuszczalnika. DMSO w maksymalnym, stosowanym w doświadczeniach stężeniu nie wywoływał żadnego znaczącego wzrostu lub hamowania proliferacji, w porównaniu do próbek bez tego rozpuszczalnika.
W dalszym doświadczeniu sprawdzono wpływ niesterydowego związku przeciwestrogenowego - tamoksyfenu na testowany układ.
Tamoksyfen w dawkach 104 i 10'5 mola wywoływał 100% względnie 77% hamowanie proliferacji, natomiast w dawce 10’6 przeciwnie, wywoływał 52% zwiększenie proliferacji, w porównaniu do próbek kontrolnych nie potraktowanych tym odczynnikiem.
187 264
Działanie przeciwproliferacyjne tamoksyfenu ujawniało się także przy stosowaniu razem ze stałymi dawkami estradiolu. Wywoływane estrogenem zwiększenie proliferacji mogło być hamowane przez tamoksyfen, w stopniu zależnym od dawki.
Wyniki tych wstępnych prób wykazały wyraźnie, że układ testujący MCF-7 nadaje się do badania zarówno działania estrogenu, jak i testowanych substancji przeciwestrogenowych.
Aby to zbadać, w następujących seriach doświadczeń obok sprawdzenia pożywki i rozpuszczalnika badano także działanie estrogenowe, przez dozowanie 17-β estradiolu w ilości 10'7 lub 10‘8 mola oraz działanie przeciwestrogenowe, przez dozowanie tamoksyfenu w ilości 10’6 mola.
Zanim dodano ekstrakt z Cimicifuga do układu z komórkami MCF-7, sprawdzono najpierw jego toksyczność w teście toksyczności z komórkami HeLa.
Do rozcieńczenia 10‘2 ekstrakt wykazywał toksyczność w stosunku do tego rodzaju komórek. Od rozcieńczenia 10‘3 nie stwierdzono żadnych różnic pomiędzy próbkami kontrolnymi z pożywką a próbkami z substancją testowaną (fig. 2). Aby móc wykluczyć niespecyficzny efekt cytotoksyczny, rozcieńczenie te traktowano jako maksymalną dawkę stosowaną w serii testów z komórkami MCF-7.
Wyniki przedstawione na fig.3 weryfikują hamowanie wzbudzanej przez estrogen proliferacji komórek, przez 105 molowy roztwór tamoksyfenu, 10‘8 molowy roztwór estradiolu, jak również przez połączenie tamoksyfenu i estradiolu, w porównaniu z proliferacją układu kontrolnego.
Na fig.3 widoczne jest również hamowanie proliferacji przez połączenie 10- molowego tamoksyfenu z ekstraktem z Cimicifuga racemosa w różnorodnych rozcieńczeniach 1:10, pomiędzy 10'3 i 10'8 Okazało się, że w rozcieńczeniach 10'3 do 10- hamujące działanie tamoksyfenu na proliferację jest wyraźnie wzmocnione, przy czym w rozcieńczeniu 10- proliferacja jest całkowicie stłumiona, a w rozcieńczeniu 104 prawie całkowicie stłumiona. W rozcieńczeniach 106 i wyższych hamujące działanie tamoksyfenu na proliferację nie jest wzmacniane.
Przez połączenie tamoksyfenu z ekstraktem z Cimicifuga w rozcieńczeniu 10- lub 10* osiąga się prawie całkowite hamowanie proliferacji komórek rakowych, bez konieczności stosowania wyższych stężeń tamoksyfenu, na przykład 10*, przy których obserwuje się wystąpienie efektu toksycznego.
187 264
Oznaczanie toksyczności
187 264
Wpływ ekstraktu Cimicifuga na wzbudzane tamoksyfenem hamowanie proliferacji komórek MCF-7.
187 264
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz.
Cena 2,00 zł.
Claims (8)
- Zastrzeżenia patentowe1. Zastosowanie ekstraktu z Cimicifuga racemosa do wytwarzania preparatu farmaceutycznego do leczenia nowotworów zależnych od estrogenu w połączeniu z preparatem farmaceutycznym zawierającym substancje o działaniu przeciwestrogenowym.
- 2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że substancją o działaniu przeciwestrogenowym jest tamoksyfen.
- 3. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że substancją o działaniu przeciwestrogenowym jest genistein.
- 4. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, albo 3, znamienne tym, że dawkuje się od około 5 mg do około 500 mg na dzień.
- 5. Zastosowanie ekstraktu z Cimicifuga racemosa w połączeniu z substancją o działaniu przeciwestrogenowym do wytwarzania preparatu farmaceutycznego do leczenia nowotworów zależnych od estrogenu.
- 6. Zastosowanie według zastrz. 5, znamienne tym, że substancją o działaniu przeciwestrogenowym jest tamoksyfen.
- 7. Zastosowanie według zastrz. 5, znamienne tym, że substancją o działaniu przeciwestrogenowym jest genistein.
- 8. Zastosowanie według zastrz. 5 albo 6, albo 7, znamienne tym, że dawkuje się od około 5 mg do około 500 mg na dzień.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19652183A DE19652183C1 (de) | 1996-12-14 | 1996-12-14 | Verwendung eines Extraktes aus Cimicifuga racemosa |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL323617A1 PL323617A1 (en) | 1998-06-22 |
| PL187264B1 true PL187264B1 (pl) | 2004-06-30 |
Family
ID=7814802
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL97323617A PL187264B1 (pl) | 1996-12-14 | 1997-12-10 | Zastosowanie ekstraktu z Cimicifuga racemosa do wytwarzania preparatów farmaceutycznych do leczenianowotworów zależnych od estrogenu |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6267994B1 (pl) |
| EP (1) | EP0847755B1 (pl) |
| AT (1) | ATE205721T1 (pl) |
| AU (2) | AU730372B2 (pl) |
| CA (1) | CA2245890C (pl) |
| DE (2) | DE19652183C1 (pl) |
| DK (1) | DK0847755T3 (pl) |
| ES (1) | ES2163085T3 (pl) |
| HU (1) | HU224316B1 (pl) |
| IL (1) | IL125776A (pl) |
| NO (1) | NO316106B1 (pl) |
| PL (1) | PL187264B1 (pl) |
| WO (1) | WO1998026791A1 (pl) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19812204A1 (de) * | 1998-03-19 | 1999-11-04 | Plantamed Arzneimittel Gmbh | Verwendung von Extrakten aus Cimicifuga racemosa und Belamcanda sinensis als estrogenartiges organselektives Arzneimittel ohne uterotrope Wirkung |
| DK1200107T3 (da) * | 1999-07-15 | 2006-01-16 | Uinv Kobenhavns | Præparater der har steroid östrogenvirkning, hvilke præparater ikke öger risikoen for brystcancer |
| DE10054641A1 (de) * | 2000-11-03 | 2002-05-16 | Schaper & Bruemmer Gmbh | Verwendung einer Zubereitung von Cimicifuga racemosa |
| DE10127897B4 (de) * | 2001-06-08 | 2006-04-20 | Bionorica Ag | Manteltablette mit Pflanzentrockenextrakten |
| DE10146159A1 (de) | 2001-09-19 | 2003-04-10 | Bionorica Ag | Verwendung von Extrakten aus Cimicifuga-Arten als organselektives Arzneimittel zur Behandlung von sexualhormonabhängigen Erkrankungen des Urogenitaltraktes |
| DE10206390A1 (de) * | 2002-02-15 | 2003-08-28 | Bionorica Ag | Verwendung von selektiv den Estrogenrezeptor beta modulierenden phytoestrogenhaltigen Extrakten |
| US20030224069A1 (en) * | 2002-06-03 | 2003-12-04 | Ven Subbiah | Triterpene glycosides for hormonal therapy |
| US20030224068A1 (en) * | 2002-06-03 | 2003-12-04 | Ven Subbiah | Compounds for hormonal therapy |
| EP1519717B1 (en) * | 2002-07-05 | 2010-09-29 | Temrel Limited | Controlled release composition |
| US20090264377A1 (en) * | 2002-12-27 | 2009-10-22 | Linda Saxe Einbond | Anti-neoplastic compositions comprising extracts of black cohosh |
| US7407675B2 (en) * | 2002-12-27 | 2008-08-05 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Anti-neoplastic compositions comprising extracts of black cohosh |
| US20090186837A1 (en) * | 2002-12-27 | 2009-07-23 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Anti-neoplastic compositions comprising extracts of black cohosh |
| JP2004307445A (ja) * | 2003-04-02 | 2004-11-04 | Pharmaton Sa | Ｓｅｒｍの副作用を改善する方法 |
| US20040228931A1 (en) * | 2003-05-12 | 2004-11-18 | Pharmachem Laboratories, Inc. | Novel composition for hormonal balance and uses thereof |
| ES2300783T3 (es) * | 2003-07-01 | 2008-06-16 | Max Zeller Sohne Ag | Procedimiento de extraccion vegetal y extracto. |
| DE102005005276A1 (de) * | 2005-02-04 | 2006-08-10 | Peter Heger | Verwendung von Hydroxystilben-haltigen Wirkstoffen zur Chemoprävention der Tumorgenese und/oder zur Inhibition der Tumorprogression bei endokrin-abhängigen und endokrin-unabhängigen Tumoren |
| AU2013285492B2 (en) | 2012-07-03 | 2015-11-12 | Max Zeller Soehne Ag | Novel pharmacological use of Cimicifuga extract |
| EP3906040A1 (en) * | 2018-12-31 | 2021-11-10 | Max Zeller Söhne AG | Combination of cimicifuga and petasites extracts for anticancer therapy and prophylaxis |
| IT201900000343A1 (it) | 2019-01-10 | 2020-07-10 | Herbal E Antioxidant Derivatives S R L Ed In Forma Abbreviata H&Ad S R L | Composizioni per il trattamento della menopausa, osteopenia e osteoporosi, disturbi metabolici e vascolari legati al climaterio |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02255622A (ja) * | 1989-03-28 | 1990-10-16 | Tsumura & Co | 制癌補助剤 |
| US5569459A (en) * | 1995-02-15 | 1996-10-29 | Bio-Virus Research Incorporated | Pharmaceutical compositions for the management of premenstrual syndrome and alleviation of menopausal disorders |
-
1996
- 1996-12-14 DE DE19652183A patent/DE19652183C1/de not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-11-29 AT AT97121030T patent/ATE205721T1/de active
- 1997-11-29 ES ES97121030T patent/ES2163085T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-29 EP EP97121030A patent/EP0847755B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-29 DK DK97121030T patent/DK0847755T3/da active
- 1997-11-29 DE DE59704654T patent/DE59704654D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-10 PL PL97323617A patent/PL187264B1/pl unknown
- 1997-12-11 AU AU48300/97A patent/AU730372B2/en not_active Ceased
- 1997-12-12 HU HU9901360A patent/HU224316B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1997-12-12 AU AU55490/98A patent/AU5549098A/en not_active Abandoned
- 1997-12-12 IL IL12577697A patent/IL125776A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-12-12 WO PCT/DE1997/002898 patent/WO1998026791A1/de active Application Filing
- 1997-12-12 CA CA2245890A patent/CA2245890C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-12-12 NO NO19975858A patent/NO316106B1/no not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-08-14 US US09/134,159 patent/US6267994B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO975858L (no) | 1998-06-15 |
| DE59704654D1 (de) | 2001-10-25 |
| IL125776A0 (en) | 1999-04-11 |
| CA2245890A1 (en) | 1998-06-25 |
| AU5549098A (en) | 1998-07-15 |
| DE19652183C1 (de) | 1998-02-12 |
| NO316106B1 (no) | 2003-12-15 |
| HU224316B1 (hu) | 2005-07-28 |
| ES2163085T3 (es) | 2002-01-16 |
| HUP9901360A2 (hu) | 1999-08-30 |
| ATE205721T1 (de) | 2001-10-15 |
| IL125776A (en) | 2003-12-10 |
| US6267994B1 (en) | 2001-07-31 |
| AU4830097A (en) | 1998-06-18 |
| EP0847755B1 (de) | 2001-09-19 |
| EP0847755A1 (de) | 1998-06-17 |
| NO975858D0 (no) | 1997-12-12 |
| PL323617A1 (en) | 1998-06-22 |
| AU730372B2 (en) | 2001-03-08 |
| HUP9901360A3 (en) | 2000-02-28 |
| WO1998026791A1 (de) | 1998-06-25 |
| DK0847755T3 (da) | 2001-11-12 |
| CA2245890C (en) | 2010-05-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL187264B1 (pl) | Zastosowanie ekstraktu z Cimicifuga racemosa do wytwarzania preparatów farmaceutycznych do leczenianowotworów zależnych od estrogenu | |
| Kuttan et al. | Potential anticancer activity of turmeric (Curcuma longa) | |
| Tuhin et al. | Wound healing effect of Euphorbia hirta linn.(Euphorbiaceae) in alloxan induced diabetic rats | |
| Brues et al. | Effects of colchicine and related substances on cell division | |
| Chan et al. | Triptolide induced cytotoxic effects on human promyelocytic leukemia, T cell lymphoma and human hepatocellular carcinoma cell lines | |
| Aravind et al. | Curcumin-albumin conjugates as an effective anti-cancer agent with immunomodulatory properties | |
| Razak et al. | Ameliorative effects of aquilaria malaccensis leaves aqueous extract on reproductive toxicity induced by cyclophosphamide in male rats | |
| Deepthi et al. | Evaluation of cytotoxic potential of Digera muricata leaf extract on lung cancer cell line | |
| Zingue et al. | The antimammary tumor effects of ethanolic extract of propolis from Adamawa region (Cameroon) are by apoptosis via reactive oxygen species‐mediated mitochondrial pathway | |
| Liehr et al. | Inhibition of estrogen-induced renal carcinogenesis in male Syrian hamsters by tamoxifen without decrease in DNA adduct levels | |
| Abbas et al. | Study of resveratrol against bone loss by using in-silico and in-vitro methods | |
| Banerjee et al. | Protective and therapeutic efficacy of pomegranate extracts in combination with 2-methoxyestradiol (2-ME) on S-180 ascitic tumour cells | |
| Chandra | Evaluation of Methanolic Extract of Clitoria ternatea Hepatoprotective & Nephroprotective Activity in Rats | |
| Oyedeji et al. | Effect of Corchorus olitorius extract on reproductive functions in male albino rats | |
| Volpato et al. | Effectiveness of Persea major Kopp (Lauraceae) extract against Enterococcus faecalis: a preliminary in vitro study | |
| Kumar et al. | Cytotoxic And Anti–Tumour Properties of Ethanolic Extract of Bacopa Monnieri (L) Penn | |
| Meles et al. | Measurement of Alkaloids Achyranthes Aspera Linn Level Using Thin Layer Chromatography Method and High-Performance Liquid Chromatography | |
| Satpathy et al. | Antioxidant enriched fraction from Pueraria tuberosa alleviates ovariectomized-induced osteoporosis in rats, and inhibits growth of breast and ovarian cancer cell lines in vitro | |
| Ilyas et al. | Effect of Zanthoxylum acanthopodium methanol extract on CDK4 expression to cervical cancer | |
| Maddi | Preliminary Phytochemical Analysis and in vitro Anti-cancer Screening of Ethanolic extract of Roots of Bauhinia tomentosa L. against HUH-7 Human Liver cancer Cell lines | |
| Chourasiya et al. | Genomic stability and tissue protection of Clerodendron inerme (L.) Gaertn leaves | |
| Charles et al. | Prevention of doxorubicin-induce renal function abnormalities by turmeric in Wistar rats | |
| Choudhuri et al. | CYTOTOXIC EFFECT OF TRICHOSANTHES DIOICA WALL. LEAVES ON COLORECTAL CARCINOMA CELLS AND CELL CYCLE ARREST | |
| Oyedeji et al. | Effect of Metronidazole on Reproductive Parameters in Male Wistar Rats | |
| Ekpenyong | Effect of Cymbopogon citratus Decoctions on Gasoline Vapour-induced Reproductive Toxicity in Female Rats |