HU223762B1 - Streptococcus equi vakcinák - Google Patents

Streptococcus equi vakcinák Download PDF

Info

Publication number
HU223762B1
HU223762B1 HU9801705A HUP9801705A HU223762B1 HU 223762 B1 HU223762 B1 HU 223762B1 HU 9801705 A HU9801705 A HU 9801705A HU P9801705 A HUP9801705 A HU P9801705A HU 223762 B1 HU223762 B1 HU 223762B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
vaccine
preparation
use according
vaccination
streptococcus
Prior art date
Application number
HU9801705A
Other languages
English (en)
Inventor
Antonius Arnoldus Christiaan Jacobs
Original Assignee
Akzo Nobel N.V.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=32669079&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU223762(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Akzo Nobel N.V. filed Critical Akzo Nobel N.V.
Publication of HU9801705D0 publication Critical patent/HU9801705D0/hu
Publication of HUP9801705A2 publication Critical patent/HUP9801705A2/hu
Publication of HUP9801705A3 publication Critical patent/HUP9801705A3/hu
Publication of HU223762B1 publication Critical patent/HU223762B1/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A61K39/092—Streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
    • A61K2039/522—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/829—Bacterial vaccine for equine species, e.g. horses
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/885—Streptococcus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

A találmány élő, attenuált, Streptococcus equi fajba tartozó baktériumalkalmazására vonatkozik, szisztémás beadás után hatásos vakcinaelőállítására, Streptococcus equi-fertőzés megelőzésére. ŕ

Description

A találmány élő, attenuált (gyengített) Streptococcus equi baktérium alkalmazására vonatkozik, vakcinák előállításához.
Régóta ismert, hogy a Streptococcus equi lovakban heveny felső légúti megbetegedést okoz [Sweeney és munkatársai: Compendium Equine 9, 689-693 (1987)]. Ezt az erősen ragályos betegséget láz, nyálkásgennyes orrfolyás, nyirokcsomók duzzanata, ezt követően a fej és a nyak nyirokcsomóinak tályogosodása jellemzi [Sweeney és munkatársai: Compendium Equine 9, 845-851 (1987)]. A nyirokcsomók duzzanata gyakran olyan mértékű, hogy a légutak beszűkülnek. Ez a jelenség magyarázza a betegség közönséges (angol) elnevezését: „strangles” (strangle=fojt, szorít). A bántalom magyar elnevezése; mirigykór.
A betegség ritkán végzetes kimenetelű, amint azt Sigmund ismerteti [Sigmund, Ο. H. és Fraser, C. M. szerk.: „The Merck Veterinary Manual” 5. kiadás, Merck and Company Inc., Rahway, N. J., 313-315 (1979)]. Ezzel ellentétben a megbetegedési arány (morbiditás) általában magas, fogékony populációkban akár 100% is lehet.
A betegség elleni vakcinák szintén régóta ismertek [Bazely, P. L.: Austr. Vet. J. 16, 243 (1940) és Bazely, P. L.: Austr. Vet. J. 18, 141-155 (1942)].
Eddig csak kétféle típusú vakcina volt hozzáférhető: a) hagyományos bakterineken alapuló vakcinák, és b) M-proteinen, egy immunogén fehérjén alapuló alegységvakcinák. Mindkét vakcinatípus alkalmazásának megvan a maga komoly hátránya. A bakterinek közismerten ártalmas reakciókat váltanak ki, és viszonylag alacsony mértékű védelmet nyújtanak (Subcommitee on the Efficacy of Strangles Bacterin, Report, American Association of Equine Practitioners). Srivastava és Barnum [Can. J. Comp. Med 45, 20-25 (1981)] kimutatták, hogy sem a kereskedelemben hozzáférhető, sem autológ elölt teljes baktériumot tartalmazó vakcinák nem képesek elegendő mértékű ellenanyagszintet indukálni, amely a mirigykór ellen védelmet nyújtana.
Woolcock [Austr. Vet. J. 51, 554-559 (1975)] kimutatta, hogy legalább részleges védettség kiváltásához olyan vakcinázási sorozatot kell alkalmazni, amely három adag tíznapos időközönként történő beadásából áll,. Boschwitz arra a következtetésre jutott a Streptococcus equi fő immunogén alegységét, az M-proteint illetően, hogy ezen antigénnel szemben képződött ellenanyagok nem elégségesek ahhoz, hogy lovakat természetes vagy kísérletes fertőzéstől megvédjenek [CornellVet. 81, 25-36(1991)].
Összehasonlító vizsgálatban, amelyben egész sejtes és M-alegység-vakcinákat hasonlítottak össze, Srivastava és Barnum [Can. J. Comp. Med. 49, 351-356 (1981)] ismét beszámoltak az ilyen típusú vakcinákkal elért igen gyenge eredményekről: ismételt emlékeztető vakcinázás szükséges ahhoz, hogy elfogadható ellenanyagszinteket kapjunk, és a magas ellenanyagszintek tartama rövid. Legalább évente újabb emlékeztető oltás beadása szükséges [Sweeney és munkatársai: Compendium Equine 9, 845-851 (1987)]. Ráadásul alig van összefüggés az ellenanyagtiterek és a védettség között. Még a közelmúltban megjelent közleményekben, amelyek szerint elölt Streptococcus equi baktériumot adagoltak intraperitoneálisan vagy szájon át, csak részleges védettségről számoltak be élő Streptococcus egu/-fertőzéssel szemben [Wallace és munkatársai: Vet. Immunoi, and Immunopath. 48, 139-154 (1995)]. Bakterineken és alegységeken alapuló vakcinák hozzáférhetők például a Forth Dodge Laboratories, Coopers Animál Health és a Mobay Company cégeknél (US-4 944 942 számú szabadalmi leírás).
A szakirodalomban egyre több bizonyíték utal arra, hogy a Streptococcus equi elleni immunitás inkább helyi, mint szisztémás. A helyi immunitás kiemelt jelentőségét a streptococcusfertőzéssel szembeni védettségben jól dokumentálta többek között Bessen és Fischetti [J. Exp. Medicine 167, 1945-1950 (1988); Infect. and Immun. 56, 2555-2672 (1988)].
Kimutatták, hogy a helyi immunitást a nyálkahártya-ellenanyagok közvetítik, amint azt többek között Bernadetté összefoglalta [J. Gén. Microbiol. 137, 2125-2133 (1991)].
Mivel az orr-garat üreg a Streptococcus equi természetes bejutási helye, napjainkban elfogadott, hogy sikeres vakcinázáshoz elengedhetetlen az orr-garat immunválasz stimulálása [Gálán és munkatársai: Inf. Immun. 47, 623-628 (1985); Gálán és munkatársai: Inf. Immun. 54, 202-206 (1986); Timoney és munkatársai: Kimura, Y., Kotami, S„ Shiokawa, Y., (szerk) „Recent Advances in Streptococci and Streptococcal diseases, Reed Books, Danbury, N. H.]
Az orr-garat immunválasz direkt stimulálásának bizonyított fontossága nagyban hozzájárult ahhoz a jelenleg elfogadott véleményhez, hogy egy (Streptococcus equi) vakcina kizárólag orron át alkalmazva nyújt legalább részleges védettséget.
Orron át adott élő, attenuált vakcinák esetében általános gond, hogy a beadott vakcina nem marad az orrüregben, hanem eltávozik, például tüsszentéssel, szivárgással vagy hasonló módon. Ez két okból is hátrányos: a vakcina nagy része szétfolyik a környezetben, és többletadagot kell beadni ahhoz, hogy megfelelő szintű vakcinázást érjünk el. Ezeket a hátrányokat azonban a gyakorlatban el kell fogadnunk, mivel ahogy fent ismertettük, jelenlegi ismereteink szerint az orron át történő vakcinázás az egyetlen mód arra, hogy legalább részleges védettséget érjünk el.
Tudomásunk szerint élő, attenuált törzset csak a WO 87/00436 számon közrebocsátott nemzetközi szabadalmi bejelentés ismertet. Ebben az iratban ismét megállapítják, hogy élő Streptococcus equi baktériummal, orron át vagy szájon át történő vakcinázás az egyetlen módja védettség elérésének, mivel más úton történő vakcinázás és/vagy alegységvakcinák hatástalanok. Ezen vakcina hátránya azonban, hogy egy nemkapszuláit (tok nélküli) mutánst tartalmaz. Ennek megfelelően, nem vált ki immunválaszt a baktérium lipopoliszacharidrésze ellen.
Célul tűztük ki a fent említett élő, attenuált vakcinákra jellemző hátrányok kiküszöbölését.
HU 223 762 Β1
Meglepetéssel tapasztaltuk, hogy szemben az orrgarat immunválasz direkt stimulálásának fontosságát hangsúlyozó elfogadott nézetekkel, látszólag tökéletes szintű védettség érhető el, ha élő, attenuált Streptococcus equi törzset lokális alkalmazás helyett szisztémásán adunk be. Ez a magas szintű védettség még meglepőbb azon tény ismeretében, hogy ugyanazon attenuált törzset orron át beadva, sokkal alacsonyabb fokú védettséget sikerül kiváltani.
Ennek megfelelően, a találmány tárgyát képezi élő, attenuált Streptococcus equi baktériumfaj alkalmazása vakcina előállítására, amelyet szisztémásán adagolunk Streptococcus equi-fertőzés megelőzésére.
A szisztémás alkalmazást úgy tekintjük, mint a lokális alkalmazás ellentétét. A lokális alkalmazás, amelyet ma a Streptococcus equi elleni vakcinázás egyetlen hatásos módjának tekintenek, azt jelenti, hogy a vakcinát nyálkahártyára visszük fel. A nyálkahártyák közvetlenül kapcsolatban vannak a külvilággal, és megtalálhatók például az emésztőtraktusban, az orrgarat üregben és a hüvelyben. Jelenleg számos helyi alkalmazás van gyakorlatban: orron át, szájon át és hüvelybe történő alkalmazás.
A szisztémás alkalmazás, amelyre a találmány vonatkozik, olyan alkalmazás, amely szerint a vakcinát a vakcinázandó állat bőre alá vagy bőrébe adagoljuk. Szisztémás alkalmazásra jól ismert példák az izomba történő vakcinázás, vagy a bőr alá történő beadás. Más szisztémás vakcinázási módok például az intradermális (bőrbe), intravénás és az intraperitoneális beadás.
Az intradermális vakcinázás napjainkban kedvelt eljárássá vált, mivel a vakcina egyszerűen beadható egy bőrre helyezett magas nyomású tűn átfújva. Másik kedvelt módja a vakcinák beadásának az izomba történő adagolás. Elsősorban azért, mert a gyakorló állatorvosok ehhez a beadási módhoz vannak szokva. Ráadásul, az izomba történő vakcinázás azzal az előnnyel rendelkezik, hogy a vakcina lassan szabadul ki az izomból a véráramba. így az immunrendszert hosszabb ideig stimulálja a vakcina hatóanyaga.
Ennek megfelelően a találmány szerinti megoldás egy előnyös megvalósítási módját képezi élő, attenuált Streptococcus equi baktériumfaj alkalmazása vakcina előállítására, izomba történő beadás céljára.
Élő, attenuált vakcinákban gyakran marad viszonylag nagymértékű virulencia. Minél nagyobb a virulencia mértéke, annál magasabb az indukált immunitás szintje. Másrészt viszont a nagymértékű virulencia hátránya természetesen az, hogy a virulens vakcinatörzsek kórokozó képessége közelebb lesz a természetes (vad/mezei) fertőzéshez. Élő Streptococcus equi baktériumokkal történő vakcinázás a gyakorlatban azt jelenti, hogy keressük az egyensúlyt az immunizálás helyén ártalmas reakciókkal járó, de jó védettség vagy immunizálási reakciók nélküli, de alacsony hatásfokú vakcinázás között.
Ennek megfelelően szükség volna egy élő, attenuált Streptococcus equi baktérium alkalmazásán alapuló vakcinázási eljárásra, amely egyrészt megfelelő védettséget nyújt, másrészt nem okoz ártalmas helyi reakciókat a vakcinázás helyén.
Meglepetéssel tapasztaltuk, hogy a nyálkahártya alatti lágy szövetbe történő vakcinázás nem várt módon megoldja ezt a nehézséget. Amikor élő, attenuált vakcinát ilyen szövetbe adunk be, a szisztémás beadás minden előnye megmarad, és ezen felül a beadás helyén semmilyen vagy csak jelentéktelen helyi reakciót tapasztalunk. Ilyen vakcinázásra alkalmas szövetek találhatók például a szájüregben. Az ilyen szövetek nyálkahártyaréteggel vannak borítva. Ezekbe a szövetekbe a vakcinázás történhet szisztémásán, azaz a nyálkahártyaréteg alá. A nyálkahártya alá történő vakcinázást általában szubmukozális beadásnak hívjuk.
Ennek megfelelően a találmány szerinti megoldás egy még előnyösebb megvalósítási módját élő, attenuált Streptococcus equi baktériumfaj alkalmazása képezi vakcina előállítására, nyálkahártya alá történő beadás céljára.
Amikor a vakcinázást a szájüregbe végezzük, a vakcinát előnyösen a pofa, a felső vagy alsó ajak nyálkahártyája alá adjuk be. A szájnyílás környékén, a ló ajkaiba a legegyszerűbb a vakcinát beadni, az állattal való bánás szempontjából.
Ennek megfelelően a találmány szerinti megoldás egy még előnyösebb megvalósítási módját élő, attenuált Streptococcus equi baktériumfaj alkalmazása képezi vakcina előállítására, ajakba történő beadás céljára.
Attenuált Streptococcus törzsként bármely olyan törzset alkalmazhatunk, amely olyan szinten rendelkezik valamely attenuált jellemzővel, hogy nem okoz elfogadhatatlan mellékhatásokat. Attenuált jelleget elérhetünk hagyományos attenuálási eljárásokkal, például különböző hőmérsékleten történő tenyésztéssel, mutagén anyagok jelenlétében történő tenyésztéssel, nagy energiájú besugárzással, ultraibolya fénnyel végzett kezeléssel és hasonló eszközökkel. Attenuált jelleget elérhetünk továbbá rekombináns DNS-technikákkal, például virulenciafaktorok deléciójával.
A vakcina előállítása során, a vakcinához gyógyászatban elfogadott vivőanyagot adhatunk. Lehetséges vivőanyagok a fiziológiás sóoldatok. Más, gyógyászatban elfogadott vivőanyag például a baktérium tenyésztésére alkalmazott tenyésztőfolyadék.
Szükség szerint adjuváns és egy vagy több emulgeáló anyag, például Tween® és Span® adható az élő vakcinához. Alkalmas adjuvánsok például az E-vitamin-acetát-szolubilizátum, alumínium-hidroxid, -foszfát vagy -oxid, (ásványi) olajemulziók, például Bayol® és Marcol®, valamint a szaponinok.
Ennek megfelelően, a találmány szerinti megoldás még előnyösebb megvalósítása szerint, az élő, attenuált baktérium mellett a találmány szerinti vakcina előállításához adjuvánst alkalmazunk.
A találmány szerinti megoldás ennél is előnyösebb megvalósítása szerint az élő, attenuált baktérium mellett más kórokozót vagy más kórokozóból származó antigénhatású származékot alkalmazunk a találmány szerinti vakcina előállításához. Ilyen kórokozó lehet például másik baktérium vagy parazita. A kórokozó le3
HU 223 762 Β1 hét továbbá vírusos eredetű. A másik kórokozó vagy annak antigénhatású származéka általában lópatogén. Az olyan vakcinának, amely tartalmaz egy további attenuált kórokozót, vagy másik attenuált kórokozóból származó antigénhatású származékot, az az előnye, hogy egyszerre több fertőzés ellen vált ki védettséget.
A találmány szerinti megoldás legelőnyösebb megvalósítása szerint a találmány szerinti vakcina előállításához Streptococcus equi TW 928 baktériumtörzset alkalmazunk, amelyet a 0786518 számú európai közzétételi iratban ismertetünk. Ezt a törzset letétbe helyeztük CBS 813.95 nyilvántartási szám alatt az alábbi intézményben: Centraabureau voor Schimmelcultures, P. O. box 273,3740 AG Baarn, Hollandia.
Élő, attenuált Streptococcus equi baktériumok tárolására számos eljárás ismert. Jól ismert eljárás például a hűtőszekrényben történő tárolás. Gyakran alkalmazott eljárás továbbá a glicerintartalmú pufferben, -70 °C-on történő tárolás. Baktériumok tárolhatók továbbá folyékony nitrogénben. A fagyasztva szárítás egy másik módja a konzerválásnak. Fagyasztva szárított baktériumok sok éven át tárolhatók és életben tarthatók. Fagyasztva szárított baktériumok tárolási hőmérséklete jóval fagypont felett lehet anélkül, hogy az káros lenne az életképességükre. Fagyasztva szárítás végezhető bármely jól ismert standard fagyasztva szárítási eljárás szerint. Adott esetben hasznos adalékanyagok - például a sovány tej, trehalóz, zselatin vagy a szarvasmarha-szérumalbumin - adhatók az elegyhez a fagyasztva szárítási eljárás alatt.
Ennek megfelelően, a találmány szerinti megoldás legelőnyösebb megvalósítása szerint a találmány szerinti vakcinát fagyasztva szárított formában állítjuk elő.
A beadható adagok részben az attenuálás mértékétől függenek. Általában a megfelelő adag 103-101t) élőcsíraszám-tartományban van. A vakcina lényegében minden arra alkalmas izomba fecskendezhető, de legegyszerűbben a nyak, az első és hátsó lábak izomzatába adható be.
A találmány szerinti megoldást a következő példákkal szemléltetjük, a korlátozás szándéka nélkül.
1. példa
Élő, attenuált vakcina előállítása
Attenuált Streptococcus equi TW 928 törzset szokásos körülmények között tenyésztettünk az alábbi tápfolyadékban:
triptóz 5,0 g
semleges szójapepton 5,0 g
élesztőkivonat 2,5 g
marhahúskivonat 5,0 g
D-glükóz 10,0 g
aszkorbinsav 0,5 g
B-glicerol-foszfát 19,0 g
magnézium-szulfát 7H2O 0,25 g
Desztillált víz 1 liter.
Élő, attenuált törzsként alkalmazva, a baktériumo-
kát a fenti összetételű tápfolyadékban adtuk be. Inaktivált vakcinaként alkalmazva, a baktériumokat először 0,02% benzalkónium-kloriddal inaktiváltuk.
Kísérletek
Kísérleti körülmények
Tizenkét darab, 13-16 hónapos korú, mirigykóron át nem esett lovat négy, háromfős csoportra osztottunk. Az I. csoportba tartozó lovakat a kísérlet 0., 21., és 42. napján orron át vakcináztuk 2*1 ml élő Streptococcus egu/'-vakcinával (mindkét orrlyukba 1-1 ml-t), amely 109·5 telepképző egységet („colony forming unit”, CFU) tartalmazott mililiterenként. A II. csoportba tartozó lovakat ugyanazon Streptococcus equi élő vakcina 2 ml-ével vakcináztuk nyakizomba adva, és a III. csoport lovait szaponinadjuvánsban 5*109 inaktivált teljes baktériumot tartalmazó vakcina 2 ml-ével vakcináztuk nyakizomba adva. A IV. csoport három lovát nem vakcinázott kontrollként kezeletlenül hagytuk. Az 56. napon mind a 12 lovat orron át fertőztük a Streptococcus equi Arnica törzs tenyészetének 3 ml-ével, amely ml-enként 109·3 CFU-t tartalmazott. Az állatok végbélben mért testhőmérsékletét a fertőzés előtt hetente kétszer, azután pedig naponta mértük. A kísérlet tartama alatt a lovakat egy biotechnikus naponta figyelte esetleges rendellenességekre nézve. Minden vakcinázás után a lovakat naponta megfigyeltük helyi vagy szisztémás reakciókra nézve mindaddig, amíg a reakciók két egymást követő napon át már nem mutatkoztak. Állatorvos által végzett klinikai vizsgálat a fertőzés előtt rendszeresen, azután pedig naponta történt. A fertőzés utáni 1-4. héten (klinikai tünetektől és állapottól függően) a lovakat leöltük és teljes kórbonctani vizsgálatnak vetettük alá, különös tekintettel a mirigykór tüneteire, valamint mintákat vettünk a Streptococcus equi visszaizolálása céljából.
Klinikai tünetek
Egy hónappal az első vakcinázás előtt a lovakat összezártuk, hogy kicserélődjön a mikrobiológiai flórájuk. Az első vakcinázás napján a lovak vagy nem mutattak klinikai tüneteket, vagy csak enyhe felső légúti tüneteket (például orrfolyást) mutattak, egyébként jó állapotban voltak. A vakcinázások után (a fertőzésig) a lovak vagy nem mutattak klinikai tüneteket, vagy ugyanazon felső légúti tüneteket mutatták, mint a vakcinázás előtt.
A kísérleti fertőzés után mindhárom kontroll-ló, mindhárom, orron át élő vakcinával kezelt ló, valamint mindhárom, inaktivált vakcinával izomba oltott ló egyértelműen mutatta a mirigykór tüneteit, amelyet hirtelen jelentkező magas testhőmérséklet, a fej és a nyak nyirokcsomóinak duzzanata és gennyes orrfolyás formájában jellemzett (az utolsó csoport a kontrollcsoporthoz képest valamivel kevésbé volt érintett). Ezzel éles ellentétben, az élő vakcinával izomba kezelt lovak teljesen mentesek maradtak a mirigykór tüneteitől. Ennél a csoportnál az észlelt tünetek csak alkalmanként jelentkező felső légúti tünetek voltak (azaz ugyanolyan tünetek, amelyeket a fertőzés és/vagy vakcinázás előtt észleltünk). A klinikai állapot értékelési (pontozási) rendszerét az 1. táblázatban ismertetjük. A klinikai állapotok pontértékeit a 2. táblázatban foglaljuk össze. A fertőzés utáni összes klinikai pontértéket a fertőzést követő minden egyes túlélt napon történt vizsgálat klinikai pontértékeinek összege adja.
HU 223 762 Β1
Eredmények
Amint azt a 2. táblázat világosan mutatja, az élő, attenuált Streptococcus egu/'-vakcinával izomba történő vakcinázás 98%-ban csökkenti egy virulens Streptococcus egu/-fertőzés klinikai tüneteit, míg ugyanazon vakcina orron át történő alkalmazása csupán 26%-kal. Ugyanezen vakcinatörzs inaktivált sejtjeivel (izomba) történő vakcinázás a fertőzés hatásait 39%-kal csökkenti.
Élő, attenuált Streptococcus egu/'-vakcinával izomba történő vakcinázás, az orron át, illetve inaktivált baktériumot alkalmazó vakcinázással szemben, látszólag teljes védettséget nyújt virulens Streptococcus equi törzsekkel történő fertőzéssel szemben.
fi-hemolitikus streptococcusokat kimutatni a kísérleti állatok orrmosó folyadékából A fertőzést követő első héten csak alacsony számban és csak néhány lóból izoláltunk Streptococcus egui baktériumokat. Ezt követően az izolált Streptococcus equi baktériumok gyakorisága és száma erősen növekedett, kivéve az izomba, élő baktériummal vakcinázott lovak esetében, és - úgy tűnik - összefüggést mutatott a gennyes orrfolyással, ami valószínűleg a kifakadt nyirokcsomótályogokból eredt. Az izolátumok azonosságát PCR-eljárással határoztuk meg, és megállapítottuk, hogy azonosak a fertőzésre alkalmazott törzzsel.
Eredményeink szerint, élő, attenuált Streptococcus egu/-vakcinák izomba történő alkalmazása kiküszöböli a vakcina szóródását a környezetbe, és jobb adagolási lehetőséget nyújt.
Kórbonctani, bakteriológiai és szövettani vizsgálatok eredménye
Kórbonctani vizsgálataink eredményei megerősítették a klinikai vizsgálatok során tapasztaltakat, azaz mindhárom, élő baktériumot tartalmazó vakcinával izomba oltott ló teljesen mentesnek tűnt a mirigykor makro- és mikroszkopikus tüneteitől, és a vakcina beadási helyétől eltekintve Streptococcus equi baktériumot nem tudtunk visszaizolálni. Ugyanakkor az összes többi ló (kivéve a 35-ös állatot) egy vagy több megnagyobbodott és eltályogosodott nyirokcsomót mutatott, amelyből Streptococcus equi volt izolálható. A 35-ös ló hátsó garati nyirokcsomóinak mikroszkopikus vizsgálata azt mutatta, hogy ennek a lónak is (enyhe) nyirokcsomó-gyulladása volt, amelyből izolálható volt Streptococcus equi, Megállapítottuk, hogy kórbonctani leletek teljesen alátámasztják a fertőzés utáni klinikai észleléseinket.
2. példa
Lovak vakcinázása az ajkak nyálkahártyája alá beadott élő, attenuált Streptococcus egui-vakcinával Ebben a kísérletben az ajak nyálkahártyája alá beadott, élő Streptococcus egu/-vakcina biztonságosságát és hatékonyságát vizsgáltuk.
Ajak nyálkahártyája alá beadható Streptococcus equi-vakcina elkészítése
A fagyasztva szárított vakcina ampulláinak tartalmát 1,0 ml desztillált vízben feloldottuk. Egy adag 200 μΙ visszaoldott vakcinának felelt meg. Első vakcinázás alkalmával a visszaoldott vakcina titere (csíraszáma) 3,0*109 CFU/ml, az emlékeztető vakcinázáskor pedig 1,2χ109 CFU/ml volt.
Kísérletek menete
Állatok:
Tíz darab, Streptococcus equi-re nézve szeronegatív, 9-11 hónapos, mirigykóron át nem esett Shetland típusú lovat vontunk be a kísérletbe.
Vakcinázás/kísérleti fertőzés
Kéthetes akklimatizálódás után, 5 lovat vakcináztunk az ajkak nyálkahártyája alá (2 helyre a felső, 2 helyre az alsó ajakba, egyenként 200 μΙ adagokat), élő, attenuált vakcinatörzzsel. Öt másik lovat nem vakcináztunk a vakcinatörzzsel. Négy héttel az első vakcinázás után az 5 vakcinázott állat a fentiek szerinti emlékeztető oltást kapott. Az emlékeztető vakcinázás után két héttel mindegyik lovat orron át kísérletileg fertőztük Streptococcus equi Arnica törzzsel.
A vakcinázást követően a lovakat naponta megfigyeltük szisztémás vagy helyi reakciókra nézve. A kísérlet végén - illetve súlyos klinikai tünetek esetén előbb - a lovakat leöltük, és kórbonctani vizsgálatnak vetettük alá.
Két héttel az emlékeztető vakcinázás után mindegyik lovat orron át kísérletileg fertőztük: vad típusú Streptococcus equi Arnica törzs glükózt tartalmazó M17-tápfolyadékban felvett, friss, 6 órás tenyészetének 2-2 ml-ét adtuk be mindkét orrnyílásba. Az élőcsíraszámot közvetlenül a beadás után határoztuk meg lemezen történő számlálással. Az élőcsíra-szám 7,7χ108 CFU/ml volt.
Helyi és szisztémás reakciók
A vakcinázás napján (közvetlenül előtte), 6 órával utána, majd a kísérlet során rendszeresen, a lovakat megfigyeltük szisztémás és helyi reakciókra nézve.
Végbélben mért testhőmérséklet
A -1., 0. (közvetlenül vakcinázás előtt és 6 órával utána), mindkét vakcinázást követő 1. és 2. napokon, továbbá a fertőzést követően rendszeresen (a leölésig) megmértük a végbélben a testhőmérsékletet.
Eredmények
Az élő, attenuált vakcinatörzzsel történt vakcinázás után 6 órával a végbélben mért testhőmérséklet emelkedését észleltük. A vakcinázást követő 6. órában az átlagos testhőmérséklet-emelkedés ±1 °C volt a kontrollállatokhoz képest, és ±1,7 °C a vakcinázás előtti testhőmérséklethez viszonyítva. A hőemelkedések másnapra elmúltak.
A vakcinázást követően úgy tűnt, hogy a lovak jó állapotban vannak, és az étvágyuk a megszokott, a vakcinázást követő 6. órában észlelt testhőmérsékletemelkedéstől eltekintve további szisztémás reakciót nem figyeltünk meg.
A vakcinatörzzsel történt vakcinázást követően apró, átmenetileg fennálló helyi reakciókat észleltünk. A reakciók többsége az első vakcinázás után 3 héttel, az emlékeztető vakcinázás után pedig 2 héttel eltűnt.
Kórbonctani és bakteriológiai vizsgálataink eredménye
A kórbonctani vizsgálatok során megállapítottuk, hogy a vakcinázott lovak nem kaptak mirigykórt, azaz
HU 223 762 Β1
védettek voltak. Az összes többi ló mirigykórban szén- Szemváladék 0=nincs
vedett, azaz tályogokat találtunk a hátsó garati nyirok- 1 =szerózus
csomókban, amelyekből visszaizoláltuk a Streptococ- 2=nyálkás-gennyes
cus equi baktériumot, vagy fibrotikus hátsó garati nyi- 3=gennyes (ha bőséges,
rokcsomókat találtunk, ami a mirigykór krónikusabb 5 plusz 1 pont)
változatára utal, amelyben a tályogok már (részben) Torokgyulladás 0=nincs
felszívódtak. 2=enyhe
Nem találtunk vakcinamaradványokat vagy helyi 4=közepes
szöveti reakciókat a vakcinázás helyén. 6=súlyos
Az eredmények alapján nyilvánvaló, hogy az élő, 10 Percenkénti légzésszám 0=<35
attenuált Streptococcus egu/'-vakcina teljes védettséget 1=36-45
váltott ki mirigykórral szemben (5/5 ló tejesen védett 2=46-55
volt), míg az összes kontrollállat mirigykóros lett. 3=56-65
Az attenuált törzzsel történt vakcinázás után úgy 4=>65
tűnt, hogy a lovak jó állapotban vannak, étvágyuk a 15 Légzés típusa 0=bordai-hasi
megszokott volt, és a végbélben mért testhőmérséklet 2=enyhén hasi
átmeneti emelkedésétől eltekintve, a vakcinázást kö- 4=hasi
vető 6. órában, egyéb szisztémás reakciókat nem ész- 6=erősen hasi
leltünk. Továbbá a vakcinázás után csak apró, átme- Sípoló zörej 0=nincs
netileg fennálló helyi reakciókat észleltünk, amelyek 20 2=enyhe
teljesen felszívódtak (boncoláskor nem találtunk vak- 4=közepes
cinamaradványt vagy a szövetek károsodását, illetve 6=súlyos
reakcióját). Hallgatózás! lelet 0=normális
Összefoglalva megállapíthatjuk, hogy egy élő, at- 2=enyhe zörej
tenuált vakcinatörzzsel az ajak nyálkahártyája alá tör- 25 4=száraz vagy nedves zörej
ténő vakcinázás teljes védettséget váltott ki mirigykór- 6=hang nélküli terület
ral szemben, és alkalmazása biztonsági szempontból Nyirokcsomó-tapintás 0=normális
is elfogadható. 2=enyhén megnagyobbodott
4=közepesen
1. táblázat 30 megnagyobbodott
Klinikai vizsgálatok pontozási rendszere 6=erősen megnagyobbodott
vagy kifakadt (ha fájdalmas
Általános benyomás 0=normális is, plusz 1 pont)
1=kevésbé aktív Gége tapintásra 0=nincs köhögés
2=enyhén bágyadt 35 1 =egy vagy két köhögés
4=bágyadt 2=több köhögés (ha
6=súlyosan bágyadt fájdalmas, plusz 1 pont)
Étvágy 0=normális Légcső tapintásra 0=nincs köhögés
4=étvágytalan 1 =egy vagy két köhögés
Testhőmérséklet 0=<38,5 40 2=több köhögés (ha
1=38,6-39,0 fájdalmas, plusz 1 pont)
2=39,1-39,5 Spontán köhögés 0=nincs
3=39,6-40,0 2=van, vizsgálat után
4=40,1-40,5 4=van, vizsgálat előtt
5=40,6—41,0 45 Sántaság 0=nincs
6=>41,0 3=járás közben észlelhető
Orrváladék 0=nincs 6=vonszolja vagy ugrálva
1 =szerózus viszi a sánta lábat (minden
2=nyálkás-gennyes duzzadt ízületre,
3=gennyes (ha bőséges, 50 sántaságtól függetlenül,
plusz 1 pont) plusz 3 pont)
HU 223 762 Β1
2. táblázat
Fertőzés utáni klinikai pontszámok áttekintése
Vakcinázott csoport Lovak száma Fertőzés utáni összes klinikai pontszám Leölés a fertőzés után Vizsgálati naponkénti klinikai pontszám
Össz- pont- szám Átlag Csökke- nés (%) Pont/nap Átlag Csökke- nés (%)
35 140 21 6,7
Orron át élő baktérium 38 294 218 26 10 29,4 17,3 16
39 220 14 15,7
34 9 21 0,4
Izomba élő baktérium 40 8 98 21 0,4 0,3 99
41 2 21 0,1
37 168 21 8,0
Izomba inaktivált baktérium 42 45 249 129 182 39 14 21 17,8 6,1 10,6 49
36 156 16 9,8
Kontroll 43 295 296 A 14 21,1 20,7 0
44 436 14 31,1
SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims (9)

1. Élő, attenuált, Streptococcus equi fajba tartozó baktérium alkalmazása szisztémásán beadható vakcina előállítására, Streptococcus equ/'-fertőzés megelőzésére.
2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás izomba ad- 30 ható vakcina előállítására.
3. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás nyálkahártya alá adható vakcina előállítására.
4. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás ajakba adható vakcina előállítására. 35
5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, az élő, attenuált baktérium mellett egy adjuvánst tartalmazó vakcina előállítására.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, az élő, attenuált baktérium mellett egy másik 40 attenuált kórokozót vagy más kórokozóból származó antigénhatású származékot tartalmazó vakcina előállítására.
7. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, a másik attenuált kórokozóként vagy másik kórokozóból származó antigénhatású származékként a következő anyagok közül egyet vagy többet tartalmazó vakcina előállítására: Potomac láz ágens, Rhodococcus equi, Clostridium tetani, Mycobacterium pseudomallei, Streptococcus zooepidemicus, hólyagosszájgyulladás-vírus, bornaibetegség-vírus, lóinfluenza-vírus, afrikailóbetegség-vírus, lóarteritisz-vírus, lóherpeszvírus 1-4, fertőző anémiavírus, lóenkefalomielitisz-vírus, japán enkefalitisz B-vírus.
8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, Streptococcus equi TW 928 törzset (CBS 813.95) tartalmazó vakcina előállítására.
9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, fagyasztva szárított vakcina előállítására.
HU9801705A 1997-07-29 1998-07-28 Streptococcus equi vakcinák HU223762B1 (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP97202365 1997-07-29
EP97202925 1997-09-24

Publications (4)

Publication Number Publication Date
HU9801705D0 HU9801705D0 (en) 1998-09-28
HUP9801705A2 HUP9801705A2 (hu) 1999-05-28
HUP9801705A3 HUP9801705A3 (en) 2001-11-28
HU223762B1 true HU223762B1 (hu) 2005-01-28

Family

ID=32669079

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9801705A HU223762B1 (hu) 1997-07-29 1998-07-28 Streptococcus equi vakcinák

Country Status (10)

Country Link
US (1) US6120775A (hu)
EP (1) EP0894500B1 (hu)
JP (1) JP4563520B2 (hu)
AT (1) ATE270112T1 (hu)
CA (1) CA2243730C (hu)
DE (1) DE69824794T2 (hu)
DK (1) DK0894500T3 (hu)
ES (1) ES2224331T3 (hu)
HU (1) HU223762B1 (hu)
PT (1) PT894500E (hu)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6682745B1 (en) 1998-07-28 2004-01-27 Christiaan Antonius Arnoldus Jacobs Use of bacterium for manufacture of a vaccine
DE60007668T2 (de) * 1999-01-26 2004-12-02 Akzo Nobel N.V. Verwendung lebender abgeschwächter Bakterien zur Herstellung eines submukosalen Impstoffes
GB2370770B (en) * 2001-01-03 2005-06-01 Simon Connolly Uses of Streptococcus Vaccines
US20030129161A1 (en) * 2001-09-17 2003-07-10 Hsien-Jue Chu Interleukin-12 as a veterinary vaccine adjuvant
GB0404586D0 (en) * 2004-03-01 2004-04-07 Britannia Pharmaceuticals Ltd Improvements in or relating to organic materials
US20100021498A1 (en) * 2006-03-28 2010-01-28 Jeffrey Weiser Live, attenuated pneumococcal vaccine
EP3167900B1 (en) * 2006-03-29 2018-11-21 Merial Limited Vaccine against streptococci
CA2708260A1 (en) 2007-12-13 2009-06-18 Intervacc Ab Improved immunizing composition
EA029938B1 (ru) * 2015-04-09 2018-05-31 Тоо "Акынтай" Вакцина против мыта лошадей

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4110433A (en) * 1976-04-23 1978-08-29 Philips Roxane, Inc. Equine rhinopneumonitis virus
DE3263103D1 (en) * 1981-06-19 1985-05-23 Secr Social Service Brit Protection against dental caries
AR241545A1 (es) * 1985-07-12 1992-08-31 Cornell Res Foundation Inc Un metodo para preparar una cepa de s. equi avirulenta a.t.c.c. 53186 para equinos.
US4788059A (en) * 1985-07-15 1988-11-29 Coopers Animal Health, Inc. Equine strangles vaccine and the method of preparing and using the same
IL86583A0 (en) * 1987-06-04 1988-11-15 Molecular Eng Ass Vaccine containing a derivative of a microbe and method for the production thereof
EP0381706B1 (en) * 1987-10-07 1995-04-26 Washington University A method of maintaining a desired recombinant gene in a genetic population of cells
ZA97452B (en) * 1996-01-25 1997-08-15 Trinity College Dublin Streptococcus equi vaccine.

Also Published As

Publication number Publication date
US6120775A (en) 2000-09-19
HUP9801705A3 (en) 2001-11-28
EP0894500A1 (en) 1999-02-03
CA2243730A1 (en) 1999-01-29
PT894500E (pt) 2004-10-29
JP4563520B2 (ja) 2010-10-13
DE69824794D1 (de) 2004-08-05
EP0894500B1 (en) 2004-06-30
ES2224331T3 (es) 2005-03-01
DK0894500T3 (da) 2004-11-15
JPH11100329A (ja) 1999-04-13
HU9801705D0 (en) 1998-09-28
DE69824794T2 (de) 2004-11-25
ATE270112T1 (de) 2004-07-15
HUP9801705A2 (hu) 1999-05-28
CA2243730C (en) 2009-12-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101315092B1 (ko) 로소니아 인트라셀룰라리스를 포함하는 면역원성 조성물
RU2194752C2 (ru) ШТАММ И КУЛЬТУРА ШТАММА Streptococcus equi TW 928 ДЛЯ ВАКЦИНАЦИИ ЛОШАДЕЙ
EP2421556B1 (en) Vaccines comprising attenuated mycoplasma bovis strains and method for the attenuation
EP2214702B1 (en) Mycoplasma bovis vaccine and methods of use thereof
JP2004536106A (ja) マイコプラズマ・ボビスワクチンおよび動物の肺炎を減少させる方法
US6585981B1 (en) Temperature-sensitive live vaccine for Mycoplasma hyopneumoniae
WO2003000204A2 (en) Multivalent mycoplasma bacterin
US4016253A (en) Vaccine for immunization of swine against Bordetella bronchiseptica infection and method of use
HU223762B1 (hu) Streptococcus equi vakcinák
US4225583A (en) Intra-respiratory vaccine for prevention of Bordetella bronchiseptica infection and method of use
US20240197851A1 (en) A vaccine for protection against streptococcus suis serotype 9, sequence type 16
CN115141772A (zh) 牛支原体组合物
EP2962696A1 (en) Novel veterinary vaccine compositions for use in the treatment of infectious diseases caused by or associated with Pasteurellaceae family bacteria
US20060110411A1 (en) Streptococcus equi vaccine compositions and method of use
EP0012718A1 (en) Intra-respiratory vaccine, modified bacteria strain used in it, vaccine dose form and process for preparing it
MXPA98006044A (en) Streptococcus vaccine e
CA1057658A (en) Vaccine for immunization of swine against bordetella bronchiseptica infection and method of use
AU2001277207A2 (en) Temperature-sensitive live vaccine for mycoplasma hyopneumoniae

Legal Events

Date Code Title Description
HFG4 Patent granted, date of granting

Effective date: 20041122

GB9A Succession in title

Owner name: INTERVET INTERNATIONAL B.V., NL

Free format text: FORMER OWNER(S): AKZO NOBEL N.V., NL

MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees