HU221503B

HU221503B - Taxane having antitumor activity and pharmaceutical composition containing the same

Info

Publication number: HU221503B
Application number: HU9500152A
Authority: HU
Inventors: Ezio Bombardelli; Bruno Gabetta
Original assignee: Indena Spa
Priority date: 1993-05-20
Filing date: 1994-05-03
Publication date: 2002-10-28
Also published as: GR950300009T1; RU95105981A; NO950184L; EP0625517B1; CA2140519A1; NO950184D0; WO1994027984A1; SK280873B6; RU2129551C1; ITRM930334A1; SK6095A3; NO310510B1; PL307089A1; ITRM930334A0; DE625517T1; DE69322619D1; HU9500152D0; FI950207A; DE69322619T2; DK0625517T3

Abstract

A találmány tárgyát az új (1) szerkezeti képletű taxán képezi, amely aTaxus nemzetségbe tartozó növények gyökérkérgéből izolálható. Az (1)képletű vegyület tumorellenes aktivitása nagyobb, mint a taxolé,továbbá az (1) képletű vegyület a taxoltól eltérően hatásosadriamicinrezisztens sejtek és leukémia ellen is. ŕ

Description

A találmány tárgyát tumorellenes aktivitással bíró, taxánmagot tartalmazó új diterpénszármazékok képezik. Spektrometriás analízis szerint az új vegyületet az (1) szerkezetű képlettel jellemezzük, amely az 5β,20-εροxi-1,2α,4,7β, 10β, 13a-hexahidrotax-l 1 -én-9-on-4,10diacetát-2-benzoát 13 helyzetben (2R,3S)-N-hexanoil3-fenil-izoszerinnel alkotott észterének felel meg.

Az (1) képletű vegyületet a Taxus nemzetség gyökérkérgéből izoláltuk 0,02 és 0,06% közötti hozammal.

Az a növényi anyag, amelyből az (1) képletű vegyületet extraháltuk, előnyösen termesztett tiszafafajta gyökereiből állt, például Taxus média cv Hicksii kéregből. Ezt a fajtát jelenleg kertek kialakításánál díszítési célra alkalmazzák. Ez a tény lehetővé teszi, hogy elkerüljük a spontán növő tiszafák gyökereinek korlátlan begyűjtését, amely fák közismerten lassú növésűek, és ez gyors kiirtásukat jelentené.

Az (1) képletű vegyületet klórozott oldószerekkel, például diklór-metánnal extraháljuk, amelyet tisztán vagy alkoholokkal, például metil- vagy etil-alkohollal való elegyeként alkalmazunk. A növényi anyag extrahálását végezhetjük ketonok alkalmazásával is, használhatunk például acetont tisztán vagy vízzel elegyítve.

A gyökérkéreg-extraktum az (1) képletű vegyület mellett egy sor más jól ismert taxánt is tartalmaz, például taxolt [(2) képletű vegyület], cefalomanint [(3) képletű vegyület] és ezek 10-dezacetilszármazékait [(4) és (5) képletű vegyületek]. Ezek a vegyületek az (I) általános képletű vegyületek körébe tartoznak, ahol a (2) képletű vegyületben R’=C₆H₅; R=COCH₃; a (3) képletű vegyületben R’ = -C(CH₃)=CHCH₃;

R=H;

a (4) képletű vegyületben R’=C₆H₅; R=H; és a (5) képletű vegyületben R’ = -C(CH₃)=CHCH₃;

R=H.

Az (1) képletű vegyület fenti taxánoktól való elválasztására oszlopkromatográfiás eljárással végrehajtott tisztítás szükséges.

Erre a célra szilikagélt alkalmazunk előnyösen stacioner fázisban. Eluensként oldószerelegyeket alkalmazunk, amelyek alifás szénhidrogéneket, például n-hexánt, ciklohexánt vagy n-heptánt vagy aromás szénhidrogéneket, például toluolt tartalmaznak egy magasabb polaritású oldószerrel, például etil-acetáttal vagy acetonnal együtt.

Az (1) képletű vegyületet tartalmazó kromatográfiás frakciók kinyerése után a vegyületet kristályosítással izoláljuk, amit acetonból vagy diizopropil-éterből vagy ezeknek n-hexánnal vagy n-heptánnal alkotott elegyeiből végzünk.

Az új (1) képletű vegyület jelentős szerkezeti hasonlóságot mutat a (2) képletű tumorellenes hatású szerrel, a taxollal, amelytől a taxánmaghoz a 13-helyzetben kötött oldalláncban különbözik. Ezért az (1) képletű vegyület a növényi anyagból való extrahálás mellett elérhető félszintetikus eljárással is a (2) képletű taxol előállítására alkalmazott eljáráshoz [I. Ojima és munkatársai: Tetrahedron, 48, 6985 (1992)] hasonló eljárással.

Az (1) képletű vegyület és a (2) képletű taxol közötti szerkezeti hasonlóságok folytán az lenne várható, hogy tumorellenes aktivitásuk is hasonló.

Valóban, az (1) képletű vegyület in vitro aktivitása néhány tumorvonallal szemben, például emlő-, tüdő-, bél- és petefészekrák vonatkozásában összevethető a taxol aktivitásával, amint az az 1. táblázatban látható. Az új (1) képletű taxán azonban jóval nagyobb aktivitást mutat a taxolénál az adriamicinre (ADR) rezisztens tumorsejtek és leukémiás sejtek vonatkozásában.

1. táblázat

Az (1) képletű taxán és a (2) képletű taxol aktivitásának összehasonlítása különböző tumorvonalakon (IC₅₀, nmol/1)

Tumorsejtek	Taxán(1)	Taxol (2)
L1210 (patkány leukémia)	3,6±0,3	57,0±3,0
A121 (humán petefészek)	8,6±0,4	6,3 ±0,3
A549 (humán NSCLC)	3,9±0,3	5,4±0,5
HT-29 (humán bél)	5,4±0,5	6,0±0,6
MCF7 (humán emlő)	2,2±0,l	4,3±0,5
MCF7-ADR (ADR rezisztens)	430±22	>1000

In vivő vizsgálatokban az (1) képletű vegyület CremophorW tartalmú vizes oldatban beadva hatásosnak bizonyult szőrtelen egérbe beültetett tumor ellen. Ennek megfelelően az (1) képletű taxán várhatóan hasznos tumorellenes gyógyszer folyékony tumorok és hatóanyagrezisztens tumorok, például adriamicin-rezisztens tumorok kezelésére.

Az állatoknál hatásosnak talált dózis szerint ember számára az (1) képletű vegyület hatásos dózisa 150-250 mg/m² testfelület lehet 2-3 hetes időközökben ismételt ciklusokkal a metasztázis eltűnéséig.

A következőkben a találmány szerinti vegyület előállítását példában mutatjuk be.

Példa

5$,20-Epoxi-1,2a,4,7β,10β, 13a-hexahidrotax-l 1én-9-on-4,10-diacetát-2-benzoát 13 helyzetű (2R, 3S)-N-hexanoil-3-fenil-izoszerin-észtere [(1) képletű vegyület] kg Taxus média cv Hicksii porított kérget szobahőmérsékleten 130 liter 9:1 arányú metilén-klorid/metanol eleggyel extrahálunk, majd az extrahálást azonos oldószerelegy alkalmanként 80 literével háromszor megismételjük. Minden extrahálást 24 órán át végzünk.

Az egyesített extraktumokat vákuumban besűrítjük, a visszamaradó 4300 g anyagot 23 liter 9:1 arányú toluol/aceton elegyben felvesszük, majd szűrjük. Az oldhatatlan anyag kiszűrése után kapott oldatot oszlopkromatográfiás eljárással tisztítjuk 27 kg szilikagélen. Eluensként ugyanezt az oldószerelegyet alkalmazzuk. Az (1) képletű terméket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, és vákuumban szárazra pároljuk. A visszamaradó anyagot 80 ml 1:1 arányú n-hexán/aceton elegy 2

HU 221 503 Β1 bői kristályosítjuk. így 17,5 g (1) képletű vegyületet nyerünk, amelynek olvadáspontja 209 °C.

[a]_D - 42° (c=0,3, MeOH), M+ a m/z 847.

Az (1) képletű vegyület spektrofotometriás adatai a következők: 5

IR (nujol): 3500-3300,1710,1640 cm

UV (MeOH): 222 (13900), 232 (16250), 274 (1130),

282 (990) nm

CIMS (NH₃), m/z 865 (40%, M+NH₄), 848 (10, MH),

586 (30, M+NH₄)-279) 10

H-NMR (300 MHz, CDC1₃, ppm, J, Hz): 5,66 (d,

J=7,0, H-2), 3,78 (d, J=7,0, H-3), 4,93 (dd, J,=9,4,

J₂=2,0, H-5), 2,54 (ddd, J, = 15,5, J₂=9,4, J₃=6,6;

H-6a), 1,84 (ddd, Jj = 15,5, J₂=10,9, J₃=2,0; Η-6β),

4,39 (ddd, J₁₌10,9, J₂=6,6, J₃=4,l; H-7), 6,28 (s, 15

H-10), 6,23 (t, J=6,23, H-13), 2,24-2,32 (2H, m,

H-14), 1,26 (s, H-16), 1,14 (s, H-17), 1,81 (d,

J=l,2, H-18), 1,67 (s, H-19), 4,17 (d, J=8,6, H20a), 4,28 (d, J=8,6, Η-20β), 4,65 (dd, J, =4,9,

J₂=2,5, H-2’), 5,56 (dd, J,=8,9, J₂=2,5, H-3’), 2,18 20 (t, J=7,3, H-2), 1,56 (m, H-3), 1,28-1,20 (m, H4 e H-5), 0,83 (t, J=6,7, H-6), 8,10 (d, J=7,8,

PhCO H-2 e 6), 7,50 (t, J=7,8, PhCO H-3 e 5), 7,61 (t, J=7,8, PhCO H-4), 7,38 (m, 3’-Ph, H-2,3,4,5,6), 2,34 (s, COCH₃), 2,24 (s, COCH₃), 6,25 (d, J=8,9, NH), 2,49 (d, J=4,l, 7-OH), 1,84 (s, 1-OH), 3,55 (d, J=4,9, 2’-OH).

3C-NMR (75,43 Hz, CDC1₃): 78,99 (C-l), 74,93 (C-2), 45,57 (C-3), 81,07 (C-4), 84,37 (C-5), 35,59 (C-6), 72,15 (C-7), 58,56 (C-8), 203,63 (C-9), 75,55 (C-10), 138,06 (C-ll), 142,05 (C-12), 72,29 (C-13), 35,59 (C-14), 42,18 (C-15), 26,79 (C-16), 21,86 (C-17), 14,81 (C-18), 9,54 (C-19), 76,46 (C-20), 172,28 (ΟΙ’), 73,16 (C-2’), 54,53 (C-3’), 172,90 (C-l), 36,55 (C-2), 25,34 (C-3), 31,29 (C-4), 22,28 (C-5), 13,83 (C-6), 129,09 (PhCO, C-l), 130,19 (PhCO, C2 e C-6), 128,68 (PhCO, C-3 e C-5), 133,68 (PhCO, C-4), 133,11 (Ph, C-l), 126,94 (Ph, C-2 e C-6), 128,93 (Ph, C-3 e C-5), 128,23 (Ph, C-4), 22,58 (COCH₃), 20,84 (COCH₃), 171,23 (COCH₃), 170,23 (COCH₃), 166,95 (PhCO).

C₄₆H₅₇NO_l4:

talált: C%=65,11, H%=6,86, N%=l,60;

számított: C%=65,15, H%=6,78, N%=1,65.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. 5β,20-Εροχί-1,2α,4,7β,10β,13α-1ιεχ3ΐιίάπΗΒΧll-én-9-on-4,10-diacetát-2-benzoát 13 helyzetben 30 (2R,3S)-N-hexanoil-3-fenil-izoszerinnel alkotott, az (1) képletnek megfelelő észtere.
2. Eljárás az 1. igénypont szerinti (1) képletű vegyület előállítására, azzal jellemezve, hogy termesztett tiszafa növényi anyagát klórozott szénhidrogének- 35 kel vagy ezek rövid szénláncú alkoholokkal alkotott elegyeivel extraháljuk, az extraktumról az oldószert lepároltatjuk, a visszamaradó anyagot kromatografáljuk eluensként alifás vagy aromás szénhidrogéneknek nagyobb polaritású oldószerekkel alkotott ele- 40 gyeit alkalmazzuk, és az (1) képletű vegyületet tartalmazó frakciókból kinyert terméket kristályosítással tisztítjuk.
3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy növényi anyagként Taxus média cv Hicksii gyökérkérgét alkalmazzuk.
4. A 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az extrahálást metilén-klorid és metanol elegyeivel végezzük.
5. A 2-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kromatográfiás elválasztás során stacioner fázisként szilikagélt alkalmazunk, eluensként toluol és aceton elegyeit használjuk.
6. A 2-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy kristályosításra acetont, diizopropil-étert vagy ezek n-hexánnal vagy n-heptánnal alkotott elegyeit alkalmazzuk.
7. Tumorellenes aktivitással bíró gyógyászati készítmények, amelyek hatóanyagként egy, az 1. igénypont szerinti (1) képletű vegyületet tartalmaznak.