HU219823B - Oligonukleotidok izoprenil-protein-transzferázok kifejeződésének gátlására - Google Patents

Oligonukleotidok izoprenil-protein-transzferázok kifejeződésének gátlására Download PDF

Info

Publication number
HU219823B
HU219823B HU9501913A HU9501913A HU219823B HU 219823 B HU219823 B HU 219823B HU 9501913 A HU9501913 A HU 9501913A HU 9501913 A HU9501913 A HU 9501913A HU 219823 B HU219823 B HU 219823B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
sequence
seq
antisense
oligonucleotide molecule
oligonucleotides
Prior art date
Application number
HU9501913A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT72133A (en
HU9501913D0 (en
Inventor
Soudhir Colote
Eduardo Pirotzky
Original Assignee
Société de Conseils de Recherches et d`Applications Scientifiques (S.C.R.A.S.)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Société de Conseils de Recherches et d`Applications Scientifiques (S.C.R.A.S.) filed Critical Société de Conseils de Recherches et d`Applications Scientifiques (S.C.R.A.S.)
Publication of HU9501913D0 publication Critical patent/HU9501913D0/hu
Publication of HUT72133A publication Critical patent/HUT72133A/hu
Publication of HU219823B publication Critical patent/HU219823B/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y205/00—Transferases transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5)
    • C12Y205/01—Transferases transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5) transferring alkyl or aryl groups, other than methyl groups (2.5.1)
    • C12Y205/01029—Geranylgeranyl diphosphate synthase (2.5.1.29)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

A találmány izoprenil-proteintranszferázok kifejeződését gátló hatásúoligonukleotidokra és ezek származékaira vonatkozik. A találmánytárgyát képezik továbbá a szóban forgó vegyületeket tartalmazógyógyszerkészítmények, amelyek emberi vagy állati szervezetek olyanmegbetegedéseinek gyógykezelésére alkalmasak, melyeknek kiváltója azabnormális és/vagy szabályozatlan sejtszaporodás. ŕ

Description

A találmány izoprenil-proteintranszferázok kifejeződését gátló hatású oligonukleotidokra és ezek származékaira vonatkozik. A találmány tárgyát képezik továbbá a szóban forgó vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények, amelyek emberi vagy állati szervezetek olyan megbetegedéseinek gyógykezelésére alkalmasak, melyeknek kiváltója az abnormális és/vagy szabályozatlan sejtszaporodás.
Bármely élő szervezetnek, legyen az akár egysejtű vagy többsejtű jellemző tulajdonsága a szaporodás. Ennek a jelenségnek előfeltétele, hogy az örökítőanyagokból (DNS stb.) pontos másolatok készüljenek és azok egyenlő mennyiségben kerüljenek a létrejövő utódsejtekbe. Sok különféle mitogénaktivitású molekula ismeretes, melyek sejtspecifikus módon hatnak. A polipeptid típusú, úgynevezett szignálmolekulák vagy növekedési faktorok nagyon kis mennyiségben, a célsejtekkel kapcsolatba lépve olyan eseménysort idéznek elő, mely kiváltja a DNS-replikációt és a mitózist.
A növekedési faktorok nem közvetlenül a sejtciklusra hatnak, hanem a célsejt plazmamembránjának felszínén lévő transzmembránreceptorok sorával lépnek kapcsolatba és aktiválják őket. Ez a mechanizmus a sejtben láncreakciót indít el, mely mitózishoz vezet. Ugyanaz a receptor sejttípusonként más-más intracelluláris jelenségek beindításáért lehet felelős.
A növekedési faktor és a receptor kapcsolódásának egyik legelső lépéseként a proteinkináz-enzim aktiválása és fehéijék foszforilálása következik be. Ebben a jelátvitelben közreműködő fehérjék egyike a ras fehérje, mely 21 kD molekulatömegű prenilezett protein. A prenilezés poszttranszlációs módosítás, melynek során a fehérjékben lévő cisztein- és izoprenilcsoportok között kovalens kötés jön létre. Ilyen módon az izoprenilezés biztosíthatja a famezil- vagy a geranil-geranil-csoport átvitelét a célfehérjére. Ez a módosítás lehetővé teszi, hogy bizonyos fehéijék a membrán aktív helyéhez kapcsolódjanak. A prenilezés gátlásának egyik következménye így az extracelluláris jelek sejtmaghoz történő továbbításának, és ezáltal a sejtszaporodás megindulásának a megakadályozása.
Ez idáig háromfajta enzimtipus ismeretes, mely a prenilezést katalizálja: a famezil-proteintranszferáz, valamint az 1. és 2. típusú geranil-geranil-proteintranszferáz. Valamennyi enzim felismeri a szubsztrátfehérjék karboxi-terminális végén lévő konszenzusszekvenciát.
Ezen enzimek szintézisének megszüntetése azzal a következménnyel jár, hogy a sejtszaporodáshoz vezető fő jelátviteli utak elzáródnak.
A hagyományosan alkalmazott hatóanyagok a fehérjékkel, a genetikai információ transzlációjának termékeivel lépnek kapcsolatba és gátolják funkciójukat. A jelen találmány ezzel szemben modem terápiás megközelítésre, „antisense” stratégiára irányul. Ez a megoldás a génexpresszió szelektív megváltoztatását jelenti oly módon, hogy valamely nukleotidlánc (oligonukleotid) kapcsolódik a vele komplementer szekvenciához a DNS-, mRNS- vagy pre-mRNS-molekulán, és ezáltal megakadályozza a megfelelő fehérje szintézisét. Az e célra alkalmazott molekulák közvetlenül a genetikai információ átvitelének láncolatában fejtik ki hatásukat.
A transzkripciós termékeket kódoló génszekvenciákkal komplementer oligonukleotidokat nevezik „antisense” oligonukleotidoknak. A transzkripciós termékeket kódoló génszekvenciákkal megegyező szekvenciájú oligonukleotidokat „sense” oligonukleotidoknak hívják. Kezdetben ezeket a vegyületeket arra a célra tervezték, hogy az adott géntermék képződését a megfelelő mRNS-nek az RNáz H enzim által katalizált hidrolitikus hasításával akadályozzák meg. Hamarosan kiderült azonban, hogy ezeknek az „antisense” oligonukleotidoknak a hatásmechanizmusa korántsem ilyen egyszerű. A szóban forgó oligonukleotidok ugyanis kölcsönhatásba léphetnek különféle nem nukleinsav jellegű sejtalkotókkal is. Az „antisense” oligonukleotidok hozzákapcsolódhatnak a génhez, és a keletkező hármas helikális szerkezet megakadályozhatja a transzkripciós termék keletkezését. Ezek az oligonukleotidok a pre-mRNSmolekula intron-exon kapcsolódási pontjaival is kölcsönhatásba léphetnek, megzavarva így a transzkripciós termék helyes hasítását. Az oligonukleotidok a citoplazmában az mRNS-molekulával hibridizálódva RNSDNS duplexet hozhatnak létre, mely egyrészt gyorsan lebomlik az RNáz H enzim hatására, másrészt pedig lehetetlenné teszi a riboszómakomplex továbbhaladását az mRNS-szálon, megakadályozva ezzel a transzlációt. Az oligonukleotidok, különösen pedig a módosított oligonukleotidok ezen túlmenően kölcsönhatásba léphetnek egy sor, a sejtben lévő vegyülettel, így például a fehéijékkel is. Mindezek a kölcsönhatások lehetnek szekvenciaspecifikusak (például a transzkripciós faktorok esetében) vagy nem szekvenciaspecifikusak (például a növekedési faktorok esetében). Ilyen módon oligonukleotidokkal (1-36. szekvencia) előidézhető a sejtbuijánzás leállítása bármelyik fenti mechanizmus vagy azok tetszőleges kombinációja által.
A találmány különösen a fentiekben említett enzimek szintézisének „antisense” oligonukleotidok alkalmazásával történő megakadályozására irányul. Ennek alapján a szóban forgó oligonukleotidok sejtburjánzást gátló ágensként használhatók a szív- és érrendszeri megbetegedések, a rákos folyamatok, bőrbetegségek, bizonyos vírusfertőzések, valamint egyéb, sejtbuijánzással járó kóros elváltozások kezelésében.
Az „antisense” technika alkalmazása során „antisense” oligonukleotidok vagy „antisense” RNS-molekulák használhatók. A két módszer mindazonáltal eltérő. Az utóbbiak esetében a génből származó DNS-szakaszt a normálissal ellentétes irányban építik be a vektor-DNS-be, és így a szóban forgó vektor transzkripciója során egyik DNS-láncon RNS-másolat készül. A fordított génfragmens beépítése olyan RNS in situ szintézisét eredményezi, mely komplementere a sejt által készített normális mRNS-molekulának. Ez az RNS, melyet „antisense” RNS-nek neveznek, hibridizálódni képes a normális körülmények között expresszálódó mRNSmolekulával, és így meggátolja a célfehérje transzlációját. Ezt a módszert alkalmazták Prendergast és munkatársai [Cell Growth and Differentiation, 4, 707-713
HU 219 823 Β (1993)] a famezil-proteintranszferáz szerepének vizsgálata során. A famezil-proteintranszferáz β-alegységét kódoló cDNS klónozását és tisztítását követően génmanipulált célsejtekben expresszálták in situ az „antisense” RNS-t.
Az „antisense” RNS-technika különösen alkalmas eszköz a fehétjék sejtben játszott szerepének felderítésére, de alkalmasint terápiás ágensként is szóba jöhet bonyolult génterápiás protokoll szerint. Az „antisense” oligonukleotidok azonban vonzóbb gyógyszerhatóanyagok, melyeket az engedélyező hatóság klasszikus kémiai vegyületnek tekint. Ezen túlmenően az oligonukleotidok nagy tételben egyszerűen szintetizálhatok klaszszikus vegyészeti módszerekkel, míg az „antisense” RNS-molekulák csak biológiai rendszerekkel állíthatók elő, és további nehézségek is mutatkoznak ipari méretű gyártásukat illetően.
Famezil-proteintranszferázok adagolási módszerére vonatkozik az EP 456180 számú szabadalom. Ez a módszer közelebbről a fameziltranszferázok potenciális inhibitorainak aktivitásmérését teszi lehetővé. Semmi esetre sem alkalmas ez a technika arra, hogy a famezil-proteintranszferázok új, potenciális inhibitorainak szerkezetét meghatározza, és a leírás nem tartalmazza a jelen találmány szerinti molekulák egyikét sem.
A jelen találmány olyan („antisense” vagy „sense”) oligonukleotidokra vonatkozik, amelyek szelektíven képesek hibridizálódni az izoprenil-proteintranszferázok alegységeinek, előnyösen az a- és/vagy β-alegységnek a génjével vagy annak transzkripciós termékeivel. A szóban forgó oligonukleotid mérete 2 és 50 egység közötti, előnyösen 8 és 35 egység közti. Legelőnyösebben a találmány szerinti oligonukleotid 10 és 25 egység közötti méretű.
A jelen találmány szerinti oligonukleotidok bármely ismert, az oligonukleotidok szintézisére szolgáló kémiai módszerrel előállíthatok. Legelőnyösebben a kereskedelemben kapható automata nukleinsavszintetizátorok alkalmazásával készíthetők el az oligonukleotidok. Az oligonukleotidok szintézisének egyik módja a sok közül a Beaucage és munkatársai által leírt βciano-etil-foszforamidát módszer [Tetrahedron Letters, 22, 1859-1862 (1981)].
A jelen találmány az ilyen oligonukleotidok származékaira is vonatkozik, így a molekula teljes gerincén, illetve a 3’-, az 5’- vagy mindkét végén módosított oligonukleotidokra is. Az oligonukleotidok érzékenyek az enzimatikus támadásra, a nukleázok nukleotidokká hidrolizálják őket. Az oligonukleotidok módosítás révén azonban ellenállóvá tehetők a nukleázokkal szemben. Ez történhet a cukorkomponens kémiai jellegének vagy a nukleotidok közötti foszfát-cukor kötésnek a megváltoztatásával. Utóbbi esetre megoldás, ha a foszfo-diészter-láncot például foszforo-tioát-, foszforo-ditioát-, metil-foszfonát-, foszforamidát-, foszfo-etil-triészter-, butil-amidát-, piperazidát- vagy morfolidátlánccal helyettesítjük. Más típusú módosítások a lánc teljes hoszszát, illetve a 3’- és/vagy 5’-véget érinthetik annak érdekében, hogy az oligonukleotidoknak nagyobb ellenálló képességet biztosítsanak a biológiai környezetben.
A nukleotidok közötti foszfátkötések például amidkötésekre cserélhetők (peptidnukleinsavak). Az oligonukleotidok membránon való átjutása elősegíthető hidrofóbbá tételükkel, ami megoldható oly módon, hogy hidrofób szubsztituenseket, például koleszterint, aromás csoportokat vagy alkalmas polimert kapcsolunk hozzájuk. Módosított bázisok is beépíthetők az oligonukleotid-lánc egyes részleteibe vagy akár annak teljes hoszszán. Nukleázrezisztenciát, fokozott hibridizációs képességet vagy jobb sejtbe való bejutást biztosító, konformációsán módosított nukleotidok (például az a-anomer konformációjú oligonukleotidok) építhetők be az oligonukleotid-lánc egyes részleteibe vagy akár annak teljes hosszán. így a „származék” kifejezés a fent leírt, illetve a szakmában jártas szakember által ismert egyéb módszerek bármelyikével módosított nukleotidokra egyaránt vonatkozik.
A találmány szerinti előnyös oligonukleotidok az 1-36. nukleotidszekvenciákkal jellemezhetők. Komplementerszekvenciáik, illetve „sense” oligonukleotid-párjaik a találmány értelmében szintén alkalmazhatók.
A találmány mindazokra az oligonukleotidokra is vonatkozik, melyek az 1 -36. szekvenciáknak legalább egy részletét tartalmazzák.
A találmány tárgyát képezik továbbá azok a gyógyászati készítmények, melyek aktív hatóanyagként legalább egy, a találmány szerinti „antisense” oligonukleotidot, valamint az adott alkalmazásnak megfelelően kiválasztott, gyógyászatilag elfogadható hígítóés/vagy hordozóanyagot tartalmaznak. A készítmény szolgálhat helyi vagy szisztémás kezelésre egyaránt. Az alkalmazás módjának megfelelően lehet injektálható folyadék, liposzómába zárt vagy elnyújtott hatású készítmény, illetve gél, kenőcs vagy más tetszőleges kiszerelési forma.
Végül a találmány a szóban forgó készítmény gyógyászati alkalmazására is vonatkozik abnormális és/vagy szabályozatlan sejtszaporodással járó emberi vagy állati megbetegedések kezelése során.
Az alábbi példák a találmány jobb érthetőségét szolgálják.
1. példa
Az „ antisense ” oligonukleotidok hatása patkány-simaizomsejtek szaporodására
Hím Wistar patkány aortából származó simaizomsejteket kollagenáz- és elasztázenzimekkel végzett emésztéssel izoláltunk, és DMEM táptalajon, 10% magzati botjúszérum (FCS), 2 mM glutamin, 50 egység/ml penicillin, valamint 50 pg/ml sztreptomicin jelenlétében tenyésztettünk. A 24 zsebes mikrotitrálólemezeken végzett 3. és 7. passzálás közötti sejteket használtuk fel.
Három nap tenyésztés után a sejteket szérumban pihentettük 72 órán át. Ezután a sejteket - adott esetben 1% szérum vagy 5 ng/ml bFGF (basic fibroblast growth factor) hozzáadásával végzett stimulálás után - a találmány szerinti termékekkel kezeltük 10~5 M koncentrációban, 24 órán át. Négy órával az inkubáció vége előtt a sejteket triciált timidinnel (1 pCi/ml) jelöltük. A be3
HU 219 823 Β épülést 5% triklór-ecetsav hozzáadásával 10 perc alatt leállítottuk, majd a sejteket 500 μΐ 0,5 N nátrium-hidroxid-oldattal kezeltük. Ezután 400 ml térfogatú aliquot mintákat vettünk, melyeket 400 μΐ 0,5 N sósavat és 10 ml Instagel-t tartalmazó szcintillációs edényekbe 5 mértünk.
Az oligonukleotidok aktivitását a sejtburjánzás százalékában mért értéke alapján határoztuk meg. A kapott eredményeket a következő táblázat tartalmazza.
Sejtszaporodás (%)
(nem stimulált) (bFGF stimulált)
Kontroll 100 100
1. szekvencia 38 37
2. szekvencia 35 40
3. szekvencia 75 90
4. szekvencia 114 100
5. szekvencia 24 13
Sejtszaporodás (%)
(nem stimulált) (bFGF stimulált)
6. szekvencia 49 70
7. szekvencia 40 40
8. szekvencia 119 70
21. szekvencia 88 100
22. szekvencia 89 86
23. szekvencia 58 59
30. szekvencia 121 225
31. szekvencia 103 111
32. szekvencia 111 204
33. szekvencia 9 2
34. szekvencia 10 2
35. szekvencia 13 2
36. szekvencia 12 2
2. példa
Dózis/hatás vizsgálat - Az „antisense” oligonukleotidok hatása patkány-simaizomsejtek szaporodására A kísérlet kivitelezése az 1. példában ismertetett módon történt. A sejteket a találmány szerinti vegyületekkel kezeltük ΙΟ-9 Μ, ΙΟ-8 Μ, ΙΟ-7 Μ, ΙΟ-6 M és 10~5 M koncentrációban.
Koncentráció Sejtszaporodás (%)
0 10’M 10-8 M 10_7M 10-6M ΙΟ-5 M
1. szekvencia 100 99 108 107 64 25
2. szekvencia 100 86 81 90 50 14
5. szekvencia 100 95 80 100 66 20
6. szekvencia 100 87 69 84 48 20
7. szekvencia 100 102 98 96 59 28
3. példa
A méret hatása az „ antisense ” oligonukleotidok in vitro biológiai aktivitására
A kísérlet kivitelezése az 1. példában ismertetett módon történt. A sejteket a találmány szerinti vegyületekkel kezeltük.
Koncentráció (μΜ) Gátlóhatás (%)
(nem stimulált) (bFGF-vel stimulált)
Kontroll - 0 0
5. szekvencia 10 76 87
30. szekvencia 10 -21 -125
31. szekvencia 10 -3 -11
32. szekvencia 10 -11 -104
2. szekvencia 1 33 4
33. szekvencia 1 87 85
34. szekvencia 1 83 89
35. szekvencia 1 81 89
36. szekvencia 1 85 89
HU 219 823 Β
4. példa
Az „ antisense ” oligonukleotidok in vivő sejtszaporodást gátló hatásának vizsgálata angioplasztiás modellen (patkány vagy nyúl)
Normális vémyomású hím Wistar patkányokat, illetve New-Zealand nyulakat érzéstelenítettünk és felnyitottunk, hogy hozzáférjünk a csípőartériához. Az artériát megtisztítottuk a környező kötőszövettől és French Fogarty katétert vezettünk bele. A ballont levegővel feltöltve kitágítottuk az artériát, majd háromszor fel- és levezettük, hogy laphámmentes sérülést hozzunk létre.
A 25%-os Pluronic gélben szolubilizált oligonukleotidot azonnal az artériára juttattuk, hogy azt körülvegye. A sebet bezártuk, majd az állatokat 21 nap elteltével megöltük. A laphámmentes artériából készített metszeteket hisztomorfometriás analízisnek vetettük alá, és az intimális, valamint a mediális területek nagyságát megmértük.
A sejtszaporodás százalékos mértékét az (intimális terület)/(intimális+mediális terület) arány alapján határoztuk meg.
1. táblázat
Nyúl-angioplasztiás modell
Koncentráció (Fg) Sejtszaporodás (%)
Kontroll 33,6+8,8
Placebo (Pluronic F127 gél) 31,7+5,9
2. szekvencia + 5. szekvencia 200 + 200 16,5+4,8
2. táblázat
Patkány-angioplasztiás modell
Koncentráció (Fg) Sejtszaporodás (%)
Kontroll 46,71+4,35
Placebo (Pluronic FI 27 gél) 45,20+3,99
2. szekvencia 200 28,63+5,51
2. szekvencia (sense) 200 26,92+3,40
5. szekvencia 200 34,99+3,06
5. szekvencia (sense) 200 38,37+2,54
Megállapodás szerint a leírásban mindenütt a „(sense)” kifejezés a megfelelő oligonukleotidszekvencia komplementerét jelenti.
5. példa
a) A farnezil-proteintranszferáz „sense” és „antisense” oligonukleotidok in vitro hatásának vizsgálata C6 patkány-gliomasejtekben
A sejteket ötezresével tenyészedényekben levő, 5% lószérummal, valamint 2,5% magzati borjúszérummal kiegészített táptalajra oltottuk, és a tenyészeteket 24 órán át inkubáltuk. Ezután a táptalajt lecseréltük szérummentes, lipofektint tartalmazó friss tápközegre, mely adott esetben különböző oligonukleotidokat tartalmazott 5 mM koncentrációban a transzfekció lefolytatása érdekében. Ötórás inkubálás után a táptalajt újból a kezdetire (5% lószérummal, valamint 2,5% magzati borjúszérummal kiegészítettre) cseréltük, és az inkubálást 37 °C-on további 72 órán át folytattuk. A sejtszaporodást tripszines emésztés utáni sejtszámméréssel értékeltük, melyet Coulter Counter modell-ZM-készülékkel végeztünk.
1. nap 3. nap
Kontroll 267 000+9 900 2 080 000+28 700
5. szekvencia 138 000+4 500 1 090 000+10 400
5. szekvencia (sense) 288 500+43 700 2 040 000+25 200
2. szekvencia 220 000+12 600 1 990 000+17 500
2. szekvencia (sense) 157 300+11 400 1 150 000+57 500
b) A farnezil-proteintranszferáz a-alegység „sense és „antisense oligonukleotidok hatásának vizsgálata az idő függvényében Az előzőekben leírt módon elvégzett kísérlet során a kontroll-, illetve az oligonukleotidokkal kezelt tenyészetekből párhuzamos mintákat vettünk a 3., 7. és 14. napon. A mérési eredményekből számított p érték valamennyi esetben 0,05% alatt maradt.
Nap Kontroll (sejtszám) 5. szekvencia (5 μΜ) (sejtszám)
0. 5 000 5 000
3. 950 000 350 000
7. 2 100 000 600 000
14. 3 750 000 1 350 000
6. példa
Sejtburjánzás-ellenes hatás vizsgálata patkányglioblasztómamodellen
a) Az „ antisense ” oligonukleotidok ex vivő hatása a C6 gliomasejtek tumorigenitására A sejteket az előző kísérletekben leírtak szerint kezeltük. 24 órával a farnezil-proteintranszferáz a-alegység „antisense” oligonukleotiddal (5 μΜ) végzett transzfekció után a kezelt, illetve kezeletlen sejtekkel 7-8 hetes, 180-200 g tömegű hím Sprague-Dawley patkányokat oltottunk be intracerebrálisan. Az állatokat 1,5 mg/kg (testtömegre számítva) xilazin, majd ezután 10 perccel 5 mg/kg ketamin ip. injektálásával érzéstelenítettük. A korábban tripszines emésztéssel kinyert sejtekből 3 pl foszfátpufferes sóoldat felhasználásával készített, 1,5xlO5 sejtet tartalmazó szuszpenziót sztereotaxikusan a bal vazális idegdúcba injektáltuk 3 mm-re a középvonaltól, 5 mm mélységben, 10 pl-es Hamilton5
HU 219 823 Β fecskendő alkalmazásával. Az előkísérletek során megbizonyosodtunk róla, hogy a patkányok átlagos túlélési ideje a tumor beültetését követően 24 nap. Az állatok agyának hisztológiai analízise igazolta, hogy a tumor beültetésének hatékonysága 100%-os. Két órával a vágás előtt valamennyi állatba 40 mg bróm-dezoxiuridint injektáltunk. Az állatokat lefejeztük, az agyakat eltávolítottuk, és két napon át 4 °C-on, 70%-os etanolba merítve fixáltuk. A sejtbuqánzás mértékét a két agyfélteke kétparaméteres DNS (BrdU) citofluorimetriás analízisével nyert értékek átlaga alapján határoztuk meg.
BrdU jelöltségi index
Kontroll 4,7+1,9
2. szekvencia (5 μΜ) 2,3+0,7
5. szekvencia (1 μΜ) 2,4+0,5
b) Az „antisense” oligonukleotidok in vivő hatása a C6 gliomasejtek tumorigenitására Petri-csészében készített 48 órás sejttenyészetből származó kezeletlen C6 gliomasejteket patkányok bal agyféltekéjébe injektáltunk sztereotaxikusan, az előzőekben leírt módon. Nyomban az injektálás után olyan Alzet-pumpát szereltünk az állatok hátára, amely vivőanyagot, „sense”, illetve „antisense” oligonukleotidot tartalmazott 5 μΜ napi dózist biztosító mennyiségben. A különböző anyagok eljuttatása az injektálás helyére 0,5 mm átmérőjű csövön át történt. Az adatok statisztikai kiértékelését a post hoc Duncan-teszttel végeztük.
BrdU jelöltségi index
Kontroll 8,02+0,24
5. szekvencia (sense) 6,82+0,26
5. szekvencia 4,94+0,30
SZEKVENCIALISTA (2) INFORMÁCIÓK AZ 1. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 1. szekvencia AGAAGCCATG AT (2) INFORMÁCIÓK A 2. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 2. szekvencia GGACGTGACT GT (2) INFORMÁCIÓK A 3. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 3. szekvencia AAGGAGTAGC AG (2) INFORMÁCIÓK A 4. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 4. szekvencia CAGGCAGTAG CA (2) INFORMÁCIÓK AZ 5. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 5. szekvencia CCCGTCGTCC AT (2) INFORMÁCIÓK A 6. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 6. szekvencia CTGTCCCTGT AC (2) INFORMÁCIÓK A 7. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 7. szekvencia ACTTCTCTCT CC (2) INFORMÁCIÓK A 8. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 8. szekvencia ACTTGGTCCT AA (2) INFORMÁCIÓK A 9. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 9. szekvencia GCCATCATTC TG
HU 219 823 Β (2) INFORMÁCIÓK A 10. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 10. szekvencia GATCTGGACC AC (2) INFORMÁCIÓK All. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 11. szekvencia CTCAATAGCA TC (2) INFORMÁCIÓK A 12. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 12. szekvencia GTTTTTGGGC TG (2) INFORMÁCIÓK A 13. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 13. szekvencia TCTCACATCC TC (2) INFORMÁCIÓK A 14. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 14. szekvencia TTGTAAGAAC TG (2) INFORMÁCIÓK A 15. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 15. szekvencia GAAGTGCTTC TC (2) INFORMÁCIÓK A 16. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 16. szekvencia GCCTCTTTTC AG (2) INFORMÁCIÓK A 17. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 17. szekvencia GGCATCTGTC AG (2) INFORMÁCIÓK A 18. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIA JELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEPRÁSA: 18. szekvencia CGGCTGGCAT CC (2) INFORMÁCIÓK A 19. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 19. szekvencia GAACTGACAC AC (2) INFORMÁCIÓK A 20. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 20. szekvencia ACGATCACAT CA (2) INFORMÁCIÓK A 21. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 21. szekvencia ATCAACATGC AG (2) INFORMÁCIÓK A 22. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 22. szekvencia CTGCATATCG AC (2) INFORMÁCIÓK A 23. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár
HU 219 823 Β (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 23. szekvencia CAGTGCACCA GC (2) INFORMÁCIÓK A 24. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 24. szekvencia CTGCAGCCTC GG (2) INFORMÁCIÓK A 25. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 25. szekvencia ACTCTCTGGA CC (2) INFORMÁCIÓK A 26. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 26. szekvencia CAAGAATCCT CG (2) INFORMÁCIÓK A 27. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 27. szekvencia ACATCTGCTC TG (2) INFORMÁCIÓK A 28. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 28. szekvencia TCTGTACTCG TC (2) INFORMÁCIÓK A 29. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 12 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 29. szekvencia CTACAGTACA GC (2) INFORMÁCIÓK A 30. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 15 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 30. szekvencia CCCGTCGTCC ATAGG (2) INFORMÁCIÓK A 31. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 18 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 31. szekvencia CCCGTCGTCC ATAGGGGA (2) INFORMÁCIÓK A 32. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 21 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 32. szekvencia CCCGTCGTCC ATAGGGGACG C (2) INFORMÁCIÓK A 33. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 15 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 33. szekvencia GGACGTGACT GTTTC (2) INFORMÁCIÓK A 34. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 18 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 34. szekvencia GGACGTGACT GTTTCCAC (2) INFORMÁCIÓK A 35. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 21 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 35. szekvencia GGACGTGACTBGTTTCCACTG A (2) INFORMÁCIÓK A 36. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 24 bázispár (B) TÍPUS: nukleotid (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris
HU 219 823 Β (iv) ANTISZENSZ: igen (xi)A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 36. szekvencia GGACGTGACT GTTTCCACTG AGTC

Claims (11)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Oligonukleotid-molekula, amely 10-25 egységből áll, és szelektíven képes hibridizálódni az izoprenilproteintranszferáz-enzimek alegységeinek génjével vagy annak transzkripciós termékeivel.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti olyan oligonukleotidmolekula, amely az 1-3., 5-7., 23. és 33-36. szekvenciák legalább valamelyikét tartalmazza.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti oligonukleotidmolekula, amely képes hibridizálódni az izoprenil-proteintranszferáz-enzimek a- és/vagy β-alegységeinek génjével vagy annak transzkripciós termékeivel.
  4. 4. Az 1-3. igénypont bármelyike szerinti oligonukleotid-molekula, ahol a szóban forgó izoprenil-proteintranszferáz a következő enzimek valamelyike: farnezil-proteintranszferáz, 1. típusú geranil-geranil-proteintranszferáz vagy 2. típusú geranil-geranil-proteintranszferáz.
  5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti oligonukleotid-molekula, amely módosított láncszerkezettel rendelkezik.
  6. 6. Az 5. igénypont szerinti oligonukleotid-molekula, amelyben a nukleotidbázisok legalább egyike módosított.
  7. 7. A 6. igénypont szerinti oligonukleotid-molekula, amelyben a módosított nukleotidbázis α-anomer konformációjú.
  8. 8. Az 5. igénypont szerinti oligonukleotid-molekula, amelyben a kötőcsoportok legalább egyike módosított.
  9. 9. Az 5. igénypont szerinti oligonukleotid-molekula, amely a 3’- és/vagy az 5’-helyzetben módosítva van.
  10. 10. A 9. igénypont szerinti oligonukleotid-molekula, amely a 3’- és/vagy az 5’-helyzetben hidrofób csoporttal vagy védőcsoporttal végzett szubsztitúcióval van módosítva.
  11. 11. Gyógyászati készítmény, amely hatóanyagként legalább egy, az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti oligonukleotid-molekulát tartalmaz, a kívánt úton történő alkalmazásnak megfelelő, gyógyászatilag elfogadható hígító- és/vagy hordozóanyagokkal elegyítve.
HU9501913A 1994-06-29 1995-06-28 Oligonukleotidok izoprenil-protein-transzferázok kifejeződésének gátlására HU219823B (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9413035A GB9413035D0 (en) 1994-06-29 1994-06-29 Antisense oligonucleeotides

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9501913D0 HU9501913D0 (en) 1995-08-28
HUT72133A HUT72133A (en) 1996-03-28
HU219823B true HU219823B (hu) 2001-08-28

Family

ID=10757497

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9501913A HU219823B (hu) 1994-06-29 1995-06-28 Oligonukleotidok izoprenil-protein-transzferázok kifejeződésének gátlására

Country Status (25)

Country Link
US (1) US5856461A (hu)
EP (1) EP0692535A1 (hu)
JP (1) JPH0851985A (hu)
KR (1) KR960000914A (hu)
CN (1) CN1124142A (hu)
AU (1) AU689887B2 (hu)
BR (1) BR9503015A (hu)
CA (1) CA2152233A1 (hu)
CZ (1) CZ291496B6 (hu)
DZ (1) DZ1903A1 (hu)
FI (1) FI953170A (hu)
FR (2) FR2721930B1 (hu)
GB (2) GB9413035D0 (hu)
HU (1) HU219823B (hu)
IE (1) IE950477A1 (hu)
MA (1) MA23595A1 (hu)
NO (1) NO952601L (hu)
NZ (1) NZ272398A (hu)
OA (1) OA10221A (hu)
PL (1) PL309384A1 (hu)
RU (1) RU2112766C1 (hu)
SE (1) SE9502259L (hu)
SK (1) SK83895A3 (hu)
TN (1) TNSN95068A1 (hu)
ZA (1) ZA955288B (hu)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11509204A (ja) * 1995-07-13 1999-08-17 ユニバーシテイ・オブ・シンシナテイ 神経線維腫症の治療に有用な化合物
CN1301731A (zh) * 1999-12-24 2001-07-04 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——多异戊二烯基合成酶蛋白9和编码这种多肽的多核苷酸
WO2002046414A2 (en) * 2000-12-07 2002-06-13 Bristol-Myers Squibb Company Human g-protein coupled receptor expressed highly in kidney
US20030212017A1 (en) * 2002-05-10 2003-11-13 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of farnesyl transferase beta subunit expression
US7507808B2 (en) * 2002-12-12 2009-03-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of endothelial lipase expression
CN100393209C (zh) 2003-09-09 2008-06-11 杰龙公司 用于端粒酶抑制的改性寡核苷酸
WO2008094640A2 (en) 2007-01-30 2008-08-07 Geron Corporation Compounds having anti-adhesive effects on cancer cells
JOP20200257A1 (ar) 2014-05-01 2017-06-16 Geron Corp تركيبات أوليجو نوكليوتيد وطرق لتحضيرها

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4571421A (en) * 1979-11-05 1986-02-18 Genentech, Inc. Mammalian gene for microbial expression
US5004803A (en) * 1988-11-14 1991-04-02 Genetics Institute, Inc. Production of procoagulant proteins
US5420245A (en) * 1990-04-18 1995-05-30 Board Of Regents, The University Of Texas Tetrapeptide-based inhibitors of farnesyl transferase
US5185248A (en) * 1990-05-08 1993-02-09 E. R. Squibb & Sons, Inc. Farnesyl-protein transferase assay for identifying compounds that block neoplastic transformation
JP3602530B2 (ja) * 1991-03-07 2004-12-15 ヴァイロジェネティクス コーポレイション 遺伝子操作したワクチン菌株
NZ244820A (en) * 1991-10-25 1994-01-26 Isis Pharmaceuticals Inc Oligonucleotide inhibitor of epstein-barr virus.
US5348853A (en) * 1991-12-16 1994-09-20 Biotronics Corporation Method for reducing non-specific priming in DNA amplification
US5585479A (en) * 1992-07-24 1996-12-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Antisense oligonucleotides directed against human ELAM-I RNA

Also Published As

Publication number Publication date
OA10221A (fr) 1997-09-19
HUT72133A (en) 1996-03-28
NO952601D0 (no) 1995-06-28
SK83895A3 (en) 1996-05-08
AU2329995A (en) 1996-01-11
FR2721827A1 (fr) 1996-01-05
BR9503015A (pt) 1996-06-04
US5856461A (en) 1999-01-05
SE9502259L (sv) 1995-12-30
ZA955288B (en) 1996-01-31
FR2721930A1 (fr) 1996-01-05
GB2290791B (en) 1998-08-05
HU9501913D0 (en) 1995-08-28
DZ1903A1 (fr) 2002-02-17
AU689887B2 (en) 1998-04-09
GB9413035D0 (en) 1994-08-17
NO952601L (no) 1996-01-02
CA2152233A1 (en) 1995-12-30
NZ272398A (en) 1996-04-26
RU95110774A (ru) 1997-04-20
JPH0851985A (ja) 1996-02-27
TNSN95068A1 (fr) 1996-02-06
CN1124142A (zh) 1996-06-12
FR2721930B1 (fr) 1997-01-03
GB2290791A (en) 1996-01-10
GB9513246D0 (en) 1995-09-06
MA23595A1 (fr) 1995-12-31
EP0692535A1 (fr) 1996-01-17
FI953170A (fi) 1995-12-30
RU2112766C1 (ru) 1998-06-10
CZ168895A3 (en) 1996-05-15
PL309384A1 (en) 1996-01-08
CZ291496B6 (cs) 2003-03-12
SE9502259D0 (sv) 1995-06-21
FI953170A0 (fi) 1995-06-27
IE950477A1 (en) 1996-01-10
KR960000914A (ko) 1996-01-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0690726B1 (en) Antisense inhibition of c-myc to modulate the proliferation of smooth muscle cells
EP0732929B1 (en) Therapeutic use of cis-element decoys in vivo
US6043352A (en) 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides
JP4643906B2 (ja) 遺伝子発現の標的化阻害のための合成二本鎖オリゴヌクレオチド
JP2015523853A (ja) Ａｔｐ２ａ２発現を調節するための組成物及び方法
JP2015518710A (ja) ヘモグロビン遺伝子ファミリー発現を調節するための組成物及び方法
WO1994017086A1 (en) Gene regulation by targeting putative intramolecular triple helix
SK1162002A3 (en) Oligonucleotide for inhibiting the expression of human eg5 and pharmaceutical composition comprising this oligonucleotide
JPH11507818A (ja) 脊椎動物テロメラーゼの必須オリゴヌクレオチド
HU219823B (hu) Oligonukleotidok izoprenil-protein-transzferázok kifejeződésének gátlására
TW390884B (en) Chirally enriched synthetic phosphonate oligomers
EP1071764B1 (en) Antisense oligonucleotides for the inhibition of integrin alphav-subunit expression
WANG et al. A comparison of guanosine-quartet inhibitory effects versus cytidine homopolymer inhibitory effects on rat neointimal formation
WO2001074346A2 (en) Sensitization of cells to cytotoxic agents using oligonucleotides directed to nucleotide excision repair or transcritpion coupled repair genes
PT1414961E (pt) Novos derivados oligorribonucleotídeos para a inibição orientada da expressão genética
US20030176384A1 (en) Antisense oligonucleotides for the inhibition of integrin alphav -subunit expression
Simons Endogenous expression modification: antisense approaches
WO2001027264A1 (fr) Ribozymes agissant sur un facteur de croissance provenant des plaquettes humaines
AU2003271376B2 (en) Antisense Oligonucleotides for the Inhibition of Integrin alpha-Subunit Expression
Han Sequence specificity of teniposide-induced deletion and insertion mutations at the aprt locus of chinese hamster cells

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee