HU214823B - Hirudint tartalmazó gyógyszerkészítmények - Google Patents
Hirudint tartalmazó gyógyszerkészítmények Download PDFInfo
- Publication number
- HU214823B HU214823B HU9602037A HU9602037A HU214823B HU 214823 B HU214823 B HU 214823B HU 9602037 A HU9602037 A HU 9602037A HU 9602037 A HU9602037 A HU 9602037A HU 214823 B HU214823 B HU 214823B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- glu
- hirudin
- gly
- asn
- cys
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/55—Protease inhibitors
- A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
- A61K38/58—Protease inhibitors from animals; from humans from leeches, e.g. hirudin, eglin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
A találmány fagyasztva szárítőtt gyógyszerkészítményekre vőnatkőzik,melyekre jellemző, hőgy hirűdint, káliűm-főszfátőt, cűkrőt és kívántesetben citrátőt tartalmaznak. ŕ
Description
A találmány hirudint tartalmazó gyógyszerkészítményekre, nevezetesen fagyasztva szárított stabil porkészítményekre vonatkozik.
A hirudin piócákban (Hirudo medicinalis) előforduló natív antikoaguláns, amely nem egyetlen polipeptidből áll, hanem egy legalább négy egyformán ható polipeptidből álló vegyületcsoport. A 4 polipeptid a hirudin 1. variáns (HV1), a hirudin 2. variáns (HV2; ismerteti a 158 564 számú európai szabadalmi bejelentés), a hirudin 3. variáns (PA; ismerteti a 86/03493 számú PCT szabadalmi bejelentés), és a dez-(Val)2-hirudin (ismerteti a 158986 számú európai szabadalmi bejelentés). Az egyes variánsok szerkezetileg több aminosav vonatkozásában is eltérnek (így a HVl-ben Val-Val-Tyr, a HV2-ben és HV3-ban Ile-Thr-Tyr, és a dez-(Val)2hirudinban Thr-Tyr az N-terminális szekvencia), ugyanakkor közös tulajdonságuk, hogy az N-terminálishoz hidrofób aminosavak, a C-terminálishoz poláris aminosavak sora kapcsolódik, közös bennük továbbá a tirozin szulfátmonoészter formában való jelenléte (Tyr63), a három diszulfid-híd és a véralvadásgátló hatás.
Az utóbbi néhány évben hirudin-variánsokat kódoló szintetikus géneket és a cDNS-eket klónoztak és expresszáltak mikroorganizmus gazdaszervezetekben. Az expressziós termékekből azonban hiányzott a szulfátmonoésztercsoport a Tyr63 helyzetben, ezért ezeket deszulfato-hirudinoknak nevezték; biológiai hatásuk egyébként közel azonos volt a természetes szulfátéit hirudinokéval. A deszulfáto-hirudin HV1-variánst Escherichia coliban (158564 és 168342 számú európai szabadalmi bejelentések) és Saccharomyces cevervisiae5 ben (168 342, 200 655, 225 633, 252 854 és 341215 számú európai szabadalmi bejelentések) expresszálták. A deszulfáto-hirudin HV2-variánst ugyancsak Escherichia coliban (158564 számú európai szabadalmi bejelentés) és Saccharomyces cerevisiae-ben (200655 számú európai és 86/01224 számú PCT szabadalmi bejelentések), a dez-(Val)2-deszulfato-hirudint pedig Escerichia coliban (158 986 számú európai szabadalmi bejelentés) fejezték ki.
A jelen találmány vonatkozásában a „hirudin” fogal15 mába beleértjük a deszulfato-hirudint, a hirudin vagy deszulfáto-hirudin irodalomban leírt variánsait, illetve mutánsait, s főként azokat, melyek deszulfato-hirudint vagy ennek valamely mutánsát kódoló DNS-t tartalmazó transzformált mikroorganizmus törzsből származnak.
Ilyen deszulfato-hirudinok például a deszulfáto-hirudin HVl-variáns, a módosított HV1 (a) és (b), a HV2, a módosított HV2 (a), (b) és (c), a HV3, a HV3 variánsai, valamint a dez-(Val)2-deszulfato-hirudin.
Az előnyös deszulfato-hirudinok közé a következők tartoznak:
Az I általános képletű 1. azonosítási számú szekvencia (SEQ ID NO: 1):
Val Val Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys 1 5 10 15
Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Gin Gly Asn Xaa Cys Ile Leu Gly Ser 20 25 30
Asp Gly Glu Xaa Asn Gin Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Xaa Pro 35 40 45
Gin Ser Xaa Asn Asp Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro Glu Xaa 50 55 60
- ebben a képletben
a) Xaa jelentése a 27., 36. és 47. pozícióban Lys, az 51. pozícióban His, és a 62. pozícióban egy Glu-Tyr-Leu-Gln sorrendű peptidrészlet (HV1), vagy
b) Xaa jelentése a 27. pozícióban Ile vagy Glu, a 36,
47., 51. és 62. pozícióban az a) pontban megadott jelentésű [módosított HV1, a)], vagy
c) Xaa jelentése a 36. pozícióban Ile vagy Glu, a 27.,
47., 51. és 62. pozícióban az a) pontban megadott jelentésű [módosított HV1, a)], vagy
d) Xaa jelentése a 47. pozícióban Ile vagy Glu, a 27.,
36., 51. és 62. pozícióban az a) pontban megadott jelentésű [módosított HV1, a)], vagy (I)
e) Xaa jelentése az 51. pozícióban Leu vagy Asp, a
27., 36., 47. és 62. pozícióban pedig az a) pontban megadott jelentésű [módosított HV1, a)], vagy
f) Xaa jelentése a 62. pozícióban a következő csoportok valamelyike: Glu-Tyr, Glu-Tyr-Leu, Glu-Asp-Leu-Gln, Glu-Glu-Leu-Gln, Glu-Tyr-Lys-Arg, Glu-Asp-Lys-Arg, Glu-Lys-Leu-Gln, Ser-Phe-Arg-Tyr, Trp-Glu-Leu-Arg, Glu-Tyr-Leu-Gln-Pro vagy Glu-Tyr-Leu-Gln-Arg, a 27., 36., 47. és 51. pozícióban pedig az a) pontban megadott jelentésű [módosított HV1, b)] -; vagy a II általános képletű, a 2. azonosítási számú szekvencia (SEQ ID NO: 2):
Leu Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys 1 5 10 15
Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Gin Gly Asn Lys Cys Ile Leu Gly Ser 20 25 30
Asp Gly Glu Lys Asn Gin Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Lys Pro 35 40 45
Gin Ser His Asn Asp Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin 50 55 60 65 (Π)
HU 214 823 Β vagy a III általános képletű, 3. azonosítási számú szekvencia (SEQIDNO:3):
Ile Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys
10 15
Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Lys Gly Asn Lys Cys Ile Leu Gly Ser 20 25 30
Asn Gly Lys Gly Asn Gin Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Xaa Pro 35 40 45
Glu Ser His Asn Asn Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Xaa Leu Gin
a)
b)
55 (III)
- ebben a képletben
Xaa jelentése a 47. pozícióban Asn és a 63. pozícióban Tyr (HV2), vagy 15
Xaa jelentése a 47. pozícióban Lys, Arg vagy His és a 63. pozícióban Tyr [módosított HV2, a)], vagy
65
c) Xaa jelentése a 63. pozícióban Glu vagy Asp és a 47. pozícióban Asn [módosított HV2, b)] vagy a IV általános képletű, 4. azonosítási számú szekvencia (SEQ ID NO: 4):
Val Val Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys
10 15
Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Lys Gly Asn Lys Cys Ile Leu Gly Ser 20 25 30
Asn Gly Lys Gly Asn Gin Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Asn Pro 35 40 45
Glu Ser His Asn Asn Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu Gin 50 55 60 65 (IV) vagy az V képletű, 5. azonosítási számú szekvencia (SEQ ID
NO: 5):
Ile Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys
10 15
Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Lys Gly Asn Lys Cys Ile Leu Gly Ser 20 25 30
Gin Gly Lys Asp Asn Gin Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Lys Pro 35 40 45
Gin Ser His Asn Gin Gly Asp Phe Glu Pro Ile Pro Glu Asp Alá Tyr Asp Glu 50 55 60 65
A HV3-ra és ennek variánsaira az jellemző, hogy az N-terminális részen 1 vagy 2 aminosawal, vagy a C-terminális részen 18, 10, 9, 6, 4 vagy 2 aminosawal megrövidült szekvenciájú a primer struktúrához képest.
A deszulfato-hirudinok különösen előnyös képviselői azok az I általános képletű vegyületek, amelyekben Xaa jelentése az a) pont szerint definíciónak felel meg, továbbá az a III általános képletű vegyület, melyben Xaa jelentése a 47. pozícióban Lys, a 63. pozícióban pedig Tyr.
A hirudinok legelőnyösebb képviselője a HV1 deszulfato-hirudin, amely egy olyan I általános képletű vegyület, amelyben Xaa jelentése a 27., 36. és 47. pozícióban Lys, az 51. pozícióban His, és a 62. pozícióban egy Glu-Tyr-Leu-Gln sorrendű peptidrészlet.
A találmány szerinti hirudinok szintetikusan, rekombináns technikával vagy piócából történő izolálás útján állíthatók elő.
A jelen találmány értelmében „mutáns” alatt olyan antitrombotikus hatású proteineket (muteineket) ér(V) tünk, amelyek a natív hirudintól vagy deszulfatohirudintól egyszeri vagy többszöri mutációban különböznek (352 227 és 352 228 számú európai szabadalmi bejelentések). Az ilyen mutánsokat önmagában ismert módszerekkel, például helyre irányított mutagenezissel állíthatjuk elő, az ezeket kódoló DNS-t klónozzuk, mikroorganizmus gazdaszervezetben, például Escherichia coliban vagy Saccharomyces cerevisiaeben expresszáljuk.
A találmány szerinti hirudinok alkalmazhatók szabad formában vagy só formájában. Minthogy több aminosav-egységen is lehetnek szabad aminocsoportok, ezek savaddíciós sóképzésre adnak lehetőséget. Elsősorban a szokásos, gyógyászatilag elfogadható savakkal képzett gyógyászatilag elviselhető sók jöhetnek számításba. A szervetlen savak alkalmas képviselői például a hidrogén-halogenidek (például sósav), a kénsav, a foszforsav és a pirofoszforsav. A szerves savak alkalmas képviselői például az arénszulfonsavak (például benzol-szulfonsav, p-toluolszulfonsav), a kevés szénatomos alkán-szulfonsavak
HU 214 823 Β
5% mannit: citromsav — dinátrium-hidrogénfoszfát-puffer (150 mM; pH 7,4) (például metán-szulfonsav), valamint a különböző karbonsavak, mint amilyenek az ecetsav, tej sav, palmitinsav, sztearinsav, almasav, borkősav, aszkorbinsav és citromsav. Minthogy több aminosav-egységen is lehetnek szabad karboxilcsoportok, melyek a peptid egészének savas karaktert adnak, ezek lehetővé teszik, hogy szervetlen vagy szerves bázisokkal, például nátrium-, kálium-, kalcium- vagy magnézium-sót, illetve ammóniából származó ammónium-sót képezzünk, vagy valamely gyógyászatilag elfogadható nitrogéntartalmú szerves bázist használjunk sóképzésre. Tekintve, hogy a hirudinok egyidejűleg tartalmaznak szabad karboxilés szabad aminocsoportokat, belső sók képzésére is lehetőség van. Mindenesetre a gyógyászatilag elfogadható sók az előnyösek.
Hirudin-tartalmú gyógyszerek kialakításánál problémát jelent, hogy a hirudin stabilitása vizes oldatban és por alakban is kívánnivalókat hagy maga után.
A hirudin gyenge stabilitása kromatográfiás elemzés közben, például fordított fázisú HPLC-vel (RP-HPLC) észlelhető.
Az RP-HPLC vizsgálat a következőképpen történik: LiChroCART 125-4 oszlopot (töltet: Merck LiCrospher 100 RP-18, 5 pm) alkalmazunk. Az A-oldószer 0,5% ammónium-acetátot tartalmazó, 10:90 térfogatarányú acetonitril/víz-elegy; a B-oldószer 0,5% ammónium-acetátot tartalmazó 25:75 arányú acetonitril/víz-elegy. Az elúciót 45 °C hőmérsékleten 0,5 ml/perc áramlási sebességgel végezzük. A kétkomponensű elúció lineáris gradienses, a zéró időpontban 23% B-oldószerrel indul és 24 perc után 46% B-oldószer van jelen. 70% B-oldószertartalom elérése után 2 perccel az oszlopot 23% B-oldószertartalmú eleggyel 7 percig ekvilibráljuk.
Az 1. ábrán rekombináns HV1 hirudin (CGP 39393) vizes oldatának (1 mg/ml hirudin) RP-HPLC technikával felvett kromatogramja látható.
A főcsúcs alatti relatív terület 95,15%. Ha a hirudin vizes oldatát szobahőmérsékleten tároljuk, idővel nő a melléktermékek mennyisége. Ez egyrészt a főcsúcs alatti terület csökkenésével, másrészt a kis csúcsok alatti terület növekedésével jár együtt. Ezek a változások hősokk-kezelés hatására, azaz emelt hőmérsékleten való tárolás hatására felgyorsulnak.
Meglepő módon azt találtuk, hogy a hirudin stabilitása kálium-foszfát alkalmazásával növelhető.
Vizsgálatot végeztünk deszulfáto-hirudin HV1gyel nátrium-szulfát illetve kálium-szulfát alkalmazásával a következőképpen. A hirudint feloldottuk 5%os izotóniás mannit-oldat és izotóniás citromsav/dinátrium-hidrogén-foszfát-puffer vagy izotóniás citromsav/dikálium-hidrogén-foszfát-puffer (mindkettő 7,4 pH-jú) keverékében. Az oldatokat fagyasztva szárítottuk, 46 °C-on 117 napig tároltuk, majd vízzel 1 mg/ml hirudin-koncentrációjú oldatot készítettünk belőle. A vizsgálatokat mannit és citromsav /foszfát egymáshoz viszonyított különböző arányainál végeztük. Vízben való feloldás után megmértük a főcsúcs százalékos területét és a következő eredményeket kaptuk.
70: 30 | 79,7 |
60: 40 | 83,7 |
50: 50 | 81,1 |
40: 60 | 85,9 |
30: 70 | 86,7 |
20: 80 | 75,1 |
0: 100 | 78,9 |
5% mannit: citromsav - dikálium-hidrogén- | |
foszfát-pujfer (150 mM; pH 7,4) 70:30 | 86,9 |
60:40 | 88,1 |
50: 50 | 87,0 |
40: 60 | 87,0 |
30:70 | 88,3 |
20: 80 | 87,9 |
0: 100 | 88,7 |
A főcsúcs százalékos területe 70,6% volt, ha a fa- |
gyasztva szárítás előtt csak vizet alkalmaztunk.
A fenti vizsgálatokban az egyetlen különbség az volt, hogy az egyik esetben nátriumtartalmú, a másikban káliumtartalmú puffért alkalmaztunk. Azt lehetett várni, hogy mindkettő pontosan azonos módon pufferolja az oldatokat. A stabilitási vizsgálatokban azonban a káliumtartalmú puffer jobb eredményeket ad mindegyik alkalmazott arányban. A nátriumtartalmú pufferrel kapott legjobb érték rosszabb, mint a káliumtartalmú pufferrel kapott legrosszabb érték. Ez teljesen váratlan hatás.
A fenti eredmények annál is inkább meglepőek, mivel a szakirodalomban nincs olyan adat, ami azt valószínűsítené, hogy a vizes oldat pH-jának szabályozására használt puffer megválasztása befolyásolná a fagyasztva szárított, szilárd készítmény stabilitását. Szakember ezért nem várt volna jelentős stabilitásbeli különbséget a két különböző foszfátpuffer alkalmazása esetén. A kálium-foszfátot tartalmazó, eddig nem ismertetett hirudintartalmú készítmények jelentősen nagyobb stabilitása - amit az összehasonlító vizsgálatok eredményei bizonyítanak - ezért nem volt előre látható, megjósolható a szakirodalomból, azaz nem volt kézenfekvő a technika állásának ismeretében.
Találmányunk tehát olyan fagyasztva szárított gyógyszerkészítményre vonatkozik, amely hirudint, kálium-foszfátot és cukrot, továbbá kívánt esetben egy citrátot is tartalmaz.
A találmány szerinti készítményt úgy állíthatjuk elő, hogy a komponensekből vizes oldatot készítünk és a kapott oldatot önmagában ismert módon fagyasztva megszárítjuk.
Kálium-foszfátként előnyösen dikálium-hidrogénfoszfátot alkalmazunk. Alkalmazása a fagyasztva szárítást megelőzően 0,1-0,5 mól, előnyösen 0,1-0,3 mól mennyiségben történhet.
Cukorként mannitot, trehalózt, szacharózt, szorbitot, fruktózt, glukózt, maltózt, laktózt vagy dextránt alkalmazhatunk, melyek közül a mannit és a trehalóz az előnyösek.
HU 214 823 Β
A cukrot a fagyasztva szárítást megelőzően adjuk az oldathoz, olyan mennyiségben, hogy az oldatban
5- 50% (tömeg/térfogat), előnyösen 5-20% (tömeg/térfogat) legyen a koncentrációja. A liofilizálás előtt az oldat előnyösen izotóniás, pH-ja pedig 4-10, előnyösen
6- 9, legelőnyösebben 6,5-8 közötti érték.
A citrát-puffert kívánt esetben a fagyasztva szárítást megelőzően adjuk az oldathoz, például citromsav formájában. A citrát molalitása 0,1-0,5, előnyösen 0,1-0,3.
A hirudin koncentrációja az oldatban a fagyasztva szárítást megelőzően 0,1-500 mg/ml, előnyösen 20-250 mg/ml.
A fagyasztva szárított termék hosszú időn át stabil anélkül, hogy hűtőszekrényben kellene tartani. Továbbá, ha a terméket újraoldjuk vízben, szintén hosszú időn át stabil, még ha stabilitása nem is olyan jó, mint a fagyasztva szárított poré.
A fagyasztva szárított anyag újraoldásával készült oldat szokványos ampullában vagy előtöltött kétkamrás fecskendőben tartható, felhasználható beadásra szánt többkompontnesű rendszerekben és természetesen azonnali beadással is alkalmazható.
A találmányt közelebbről az alábbi példákkal szemléltetjük.
1. példa
Rekombináns deszulfato-hirudin HV1 (CGP 39393, Ciba-Geigy) vizes oldatainak stabilitását a következő rendszerekben vizsgálatuk: (a) vizes oldatban, (b) 70 térfogatrésznyi 5%-os trehalóz-oldatot és 30 térfogatrésznyi citromsav/dikálium-hidrogén-foszfát (CKP) elegyet (150 mM, pH = 7,4) tartalmazó oldatban, (c) 30 térfogatrésznyi 5%-os mannit-oldatot és 70 térfogatrésznyi citromsav/dikálium-hidrogén-foszfát-elegyet (150 mM, pH = 7,4) tartalmazó oldatban, és (d) 30 térfogatrésznyi 5%os mannit-oldatot és 70 tömegrésznyi dikálium-hidrogénfoszfátot (150 mM, pH = 7,4) tartalmazó oldatban.
A hirudin koncentrációja minden esetben 30 mg/ml. Az oldatokat fagyasztva megszárítjuk és 46 °C hőmérsékleten tároljuk. Különböző időpontokban a mintákból 1 mg/ml hirudin-koncentrációjú oldatokat készítünk és a főcsúcs alatti területet RP-HPLC-vel meghatározzuk. Az eredményeket az 1. táblázat mutatja.
1. táblázat
Rendszer | A főcsúcs alatti terület (%) az eltelt napok száma szerint | ||||
11 nap | 42 nap | 103 nap | 132 nap | 162 nap | |
(a) | 85,1 | 80,4 | 71,9 | 65,5 | 61,0 |
(b) | 92,6 | 93,2 | 90,8 | 86,9 | 89,7 |
(c) | 93,9 | 90,8 | 85,0 | 83,1 | 83,6 |
(d) | 92,4 | 90,5 | 85,5 | 83,5 | 84,0 |
A táblázatban látható, hogy a minták nagyfokú stabilitást mutatnak hosszantartó 46 °C-os hőmérsékleten való tárolás esetén is.
2. példa
Rekombináns deszulfato-hirudin HV1 (CGP 39393, Ciba-Geigy) különböző cukor/citrát/foszfor-elegyekkel készült oldatainak stabilitását vizsgáltuk. 30 térfogatrésznyi cukorhoz minden esetben 70 térfogatrésznyi citrát/foszfát-elegyet adunk. A vizsgált összetételek a következők:
mán 5%: CKP - 100 mM dikálium-hidrogén-foszfát (1,74%); 7 mM citromsav (0,134%); 82 mM mannit (1,5%); 4 mM hirudin (0,3%).
suc 10%: CKP - 100 mM dikálium-hidrogén-foszfát (1,74%); 7 mM citromsav (0,134%); 87,6 mM szacharóz (3%); 4 mM hirudin (0,3%).
tre 10%: CKP - 100 mM dikálium-hidrogén-foszfát (1,74%); 7 mM citromsav (0,134%); 87,6 mM trehalóz (3%); 4 mM hirudin (0,3%).
Az oldatokat fagyasztva megszárítjuk és különböző hőmérsékleten tároljuk. Bizonyos tárolási idő elteltével 1 mg/ml hirudin-kondencátriójú oldatokat készítünk és a főcsúcs alatti területet RP-HPLC-vel meghatározzuk. Az eredményeket a 2. táblázat mutatja.
2. táblázat
Rendszer | A főcsúcs alatti terület (%) az eltelt napok száma szerint | |||
8 nap 79 °C | 55 nap 59 °C | 55 nap 46 °C | 132 nap 26 °C | |
VÍZ | 34,0 | 59,6 | 75,9 | 89,6 |
mán 1,5%: CKP | 67,0 | 82,2 | 91,0 | 94,6 |
suc 3%: CKP | 76,1 | 86,8 | 91,5 | 94,4 |
tre 3%: CKP | 80,2 | 87,0 | 91,3 | 94,3 |
A különböző hőmérsékleten tárolt poroknál látható a stabilitás javulása. 26 °C-on, mely valamivel magasabb, mint a szokványos szobahőmérséklet, 132 nap elteltével sem tapasztalható degradáció.
A táblázatokban a rövidítések jelentése a következő: man= mannit, suc= szacharóz, tre= trehalóz.
SZEKVENCIA LISTA
Általános információk:
(i) Bejelentő:
(A) Neve: Ciba-Geigy AG (B) Utca: Klybeckstrasse 141 (C) Város: Bázel (E) Ország: Svájc (F) Irányítószám: 4002 (G) Telefon: 0619691111 (H) Telefax: 061969 7976 (I) Telex: 962991 (ii) A találmány címe: Gyógyszerkészítmények (Pharmaceutical Compositions) (iii) A szekvenciák száma: 5
HU 214 823 Β (iv) Számítógépről leolvasható forma:
(A) Adathordozó: floppy disk (B) Számítógép: IBM PC kompatibilis (C) Operációs rendszer: PC-DOS/MS-DOS (D) Szoftver: Chemtext Version 1.50 SEQIDNO: 1 (i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 63-66 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Fonalszerkezet: egyfonalas (D) Topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: protein (iii) Hipotetikus jellemző: nincs (iv) Nem értelmezhető jellemző: nincs
Val Val Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys 15 10 15
Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Gin Gly Asn Xaa Cys Ile Leu Gly Ser 20 25 30
Asp Gly Glu Xaa Asn Gin Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Xaa Pro 35 40 45
Gin Ser Xaa Asn Asp Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro Glu Xaa 50 55 60
SEQ ID NO: 2 (i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 65 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Fonalszerkezet: egyfonalas (D) Topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: protein (iii) Hipotetikus jellemző: nincs (iv) Nem értelmezhető jellemző: nincs
Leu Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys 15 10 15
Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Gin Gly Asn Lys Cys Ile Leu Gly Ser
25 30
Asp Gly Glu Lys Asn Gin Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Lys Pro 35 40 45
Gin Ser His Asn Asp Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu 50 55 60
Gin
SEQ ID NO: 3 (D) Topológia: lineáris (i) A szekvencia jellemzői: (ii) A molekula típusa: protein (A) Hossz: 65 aminosav (iii) Hipotetikus jellemző: nincs (B) Típus: aminosav (iv) Nem értelmezhető jellemző: nincs (C) Fonalszerkezet: egyfonalas
Ile Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys
10 15
Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Lys Gly Asn Lys Cys Ile Leu Gly Ser 20 25 30
Asn Gly Lys Gly Asn Gin Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Xaa Pro 35 40 45
Glu Ser His Asn Asn Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Xaa Leu 50 55 60
Gin
SEQ ID NO: 4 (i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 65 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Fonalszerkezet: egyfonalas (D) Topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: protein (iii) Hipotetikus jellemző: nincs (iv) Nem értelmezhető jellemző: nincs
Val Val Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys 15 10 15
HU 214 823 Β
Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Lys Gly Asn Lys Cys He Leu Gly Ser 20 25 30
Asn Gly Lys Gly Asn Gin Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Asn Pro 35 40 45
Glu Ser His Asn Asn Gly Asp Phe Glu Glu Ile Pro Glu Glu Tyr Leu 50 55 60
Gin
SEQIDNO: 5 (i) A szekvencia jellemzői:
(A) Hossz: 66 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Fonalszerkezet: egyfonalas (D) Topológia: lineáris (ii) A molekula típusa: protein (iii) Hipotetikus jellemző: nincs (iv) Nem értelmezhető jellemző: nincs
Ile Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Glu Ser Gly Gin Asn Leu Cys Leu Cys
10 15
Glu Gly Ser Asn Val Cys Gly Lys Gly Asn Lys Cys Ile Leu Gly Ser 20 25 30
Gin Gly Lys Asp Asn Gin Cys Val Thr Gly Glu Gly Thr Pro Lys Pro 35 40 45
Gin Ser His Asn Gin Gly Asp Phe Glu Pro Ile Pro Glu Asp Alá Tyr Asp Glu 50 55 60
Claims (9)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Fagyasztva szárított gyógyszerkészítmény, amely 30 hirudint, kálium-foszfátot, cukrot és kívánt esetben citrátot tartalmaz.
- 2. Az 1. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely kálium-foszfátként dikálium-hidrogén-foszfátot tartalmaz. 35
- 3. Az 1. vagy 2. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, amely cukorként mannitot, trehalózt, szacharózt, szorbitot, fruktózt, glükózt, maltózt, laktózt vagy dextránt tartalmaz.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, amely hirudinként valamely deszulfato-hirudin-variánst vagy -mutánst tartalmaz.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, amely hirudinként deszulfato-hirudin HVl-et tartalmaz.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, amelyet a komponensek vízben való oldása, és a kapott oldat fagyasztva szárítása útján állítunk elő.
- 7. A 6. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amelynek fagyasztva szárítás előtti pH-értéke 4 és 10 között van.
- 8. A 6. vagy 7. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, amelynek fagyasztva szárítás40 előtti hirudin-koncentrációja 0,1-500 mg/ml.
- 9. A 6-8. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, amely fagyasztva szárítás előtt izotóniás.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB9401447A GB9401447D0 (en) | 1994-01-26 | 1994-01-26 | Pharmaceutical compositions |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU9602037D0 HU9602037D0 (en) | 1996-09-30 |
HUT74879A HUT74879A (en) | 1997-02-28 |
HU214823B true HU214823B (hu) | 1998-06-29 |
Family
ID=10749331
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9602037A HU214823B (hu) | 1994-01-26 | 1995-01-25 | Hirudint tartalmazó gyógyszerkészítmények |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6436901B1 (hu) |
EP (1) | EP0758905B1 (hu) |
JP (2) | JP3260760B2 (hu) |
AT (1) | ATE201996T1 (hu) |
AU (1) | AU1391595A (hu) |
CA (1) | CA2181907A1 (hu) |
DE (1) | DE69521315T2 (hu) |
DK (1) | DK0758905T3 (hu) |
ES (1) | ES2159621T3 (hu) |
FI (1) | FI962979A (hu) |
GB (1) | GB9401447D0 (hu) |
GR (1) | GR3036574T3 (hu) |
HU (1) | HU214823B (hu) |
IL (1) | IL112388A0 (hu) |
MX (1) | MX9603010A (hu) |
NO (1) | NO963113L (hu) |
NZ (1) | NZ278433A (hu) |
PT (1) | PT758905E (hu) |
WO (1) | WO1995020399A1 (hu) |
ZA (1) | ZA95577B (hu) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6267958B1 (en) | 1995-07-27 | 2001-07-31 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
DE19607239A1 (de) | 1996-02-27 | 1997-08-28 | Behringwerke Ag | Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend Hirudin und Verfahren zu deren Herstellung |
US6653062B1 (en) | 2000-07-26 | 2003-11-25 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Preservation and storage medium for biological materials |
WO2002064157A2 (en) * | 2001-01-23 | 2002-08-22 | Boston Scientific Corporation | Localized myocardial injection method for treating ischemic myocardium |
US7795205B2 (en) * | 2004-04-12 | 2010-09-14 | Canyon Pharmaceuticals, Inc. | Methods for effecting regression of tumor mass and size in a metastasized pancreatic tumor |
ES2290844T3 (es) | 2004-10-29 | 2008-02-16 | Pharma Mar S.A., Sociedad Unipersonal | Composiciones que comprenden ecteinascidinas y un disacarido. |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3342139A1 (de) * | 1983-11-22 | 1985-05-30 | Ciba-Geigy Ag, Basel | Desulfatohirudine, verfahren zu ihrer herstellung und pharmazeutische mittel |
CA1341417C (fr) | 1984-03-27 | 2003-01-21 | Paul Tolstoshev | Vecteurs d'expression de l'hirudine, cellules transformees et procede de preparation de l'hirudine |
DE3438296A1 (de) | 1984-04-18 | 1985-11-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue polypeptide mit blutgerinnungshemmender wirkung, verfahren zu deren herstellung bzw. gewinnung, deren verwendung und diese enthaltende mittel |
DE3445532A1 (de) | 1984-12-13 | 1986-06-19 | Plantorgan Werk Heinrich G.E. Christensen, KG, 2903 Bad Zwischenahn | Hirudin-pa, desulfatohirudine-pa, verfahren zur herstellung und pharmazeutische mittel, die diese wirkstoffe enthalten |
DE3804600A1 (de) | 1988-02-13 | 1989-08-24 | Basf Ag | Mischung aus einer thrombolytisch wirkenden und einer antithrombotischen substanz |
GB8817161D0 (en) * | 1988-07-19 | 1988-08-24 | Ciba Geigy Ag | Modified proteins |
IT1243358B (it) | 1990-07-23 | 1994-06-10 | Iketon Farmaceutici Srl | Composizioni farmaceutiche per la somministrazione orale di irudina |
AU659432B2 (en) | 1991-03-08 | 1995-05-18 | Novartis Ag | A method for the inhibition or prevention of tumor cell metastasis with hirudin |
GB9303275D0 (en) | 1993-02-18 | 1993-04-07 | Ciba Geigy Ag | Pharmaceutical compositions |
GB9401448D0 (en) | 1994-01-26 | 1994-03-23 | Ciba Geigy Ag | Stable dry powders |
-
1994
- 1994-01-26 GB GB9401447A patent/GB9401447D0/en active Pending
-
1995
- 1995-01-19 IL IL11238895A patent/IL112388A0/xx unknown
- 1995-01-25 ES ES95905223T patent/ES2159621T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-25 AT AT95905223T patent/ATE201996T1/de active
- 1995-01-25 WO PCT/IB1995/000053 patent/WO1995020399A1/en active IP Right Grant
- 1995-01-25 PT PT95905223T patent/PT758905E/pt unknown
- 1995-01-25 NZ NZ278433A patent/NZ278433A/en unknown
- 1995-01-25 DK DK95905223T patent/DK0758905T3/da active
- 1995-01-25 JP JP51996395A patent/JP3260760B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-01-25 AU AU13915/95A patent/AU1391595A/en not_active Abandoned
- 1995-01-25 HU HU9602037A patent/HU214823B/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-01-25 MX MX9603010A patent/MX9603010A/es unknown
- 1995-01-25 EP EP95905223A patent/EP0758905B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-25 CA CA002181907A patent/CA2181907A1/en not_active Abandoned
- 1995-01-25 DE DE69521315T patent/DE69521315T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-25 ZA ZA95577A patent/ZA95577B/xx unknown
-
1996
- 1996-07-25 NO NO963113A patent/NO963113L/no not_active Application Discontinuation
- 1996-07-26 FI FI962979A patent/FI962979A/fi unknown
-
1999
- 1999-05-03 US US09/303,970 patent/US6436901B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-06-21 JP JP2000191094A patent/JP2001026548A/ja active Pending
-
2001
- 2001-09-10 GR GR20010401431T patent/GR3036574T3/el unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DK0758905T3 (da) | 2001-09-03 |
WO1995020399A1 (en) | 1995-08-03 |
ATE201996T1 (de) | 2001-06-15 |
GR3036574T3 (en) | 2001-12-31 |
CA2181907A1 (en) | 1995-08-03 |
JPH09508377A (ja) | 1997-08-26 |
EP0758905A1 (en) | 1997-02-26 |
DE69521315T2 (de) | 2001-10-31 |
EP0758905B1 (en) | 2001-06-13 |
DE69521315D1 (de) | 2001-07-19 |
NZ278433A (en) | 1997-03-24 |
FI962979A0 (fi) | 1996-07-26 |
JP2001026548A (ja) | 2001-01-30 |
IL112388A0 (en) | 1995-03-30 |
ES2159621T3 (es) | 2001-10-16 |
JP3260760B2 (ja) | 2002-02-25 |
AU1391595A (en) | 1995-08-15 |
US6436901B1 (en) | 2002-08-20 |
FI962979A (fi) | 1996-07-26 |
HU9602037D0 (en) | 1996-09-30 |
NO963113D0 (no) | 1996-07-25 |
HUT74879A (en) | 1997-02-28 |
NO963113L (no) | 1996-09-17 |
GB9401447D0 (en) | 1994-03-23 |
PT758905E (pt) | 2001-11-30 |
MX9603010A (es) | 1998-01-31 |
ZA95577B (en) | 1995-07-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2314313C (en) | Stabilized teriparatide solutions | |
US5306709A (en) | Suppression of megakaryocytopoiesis by macrophage inflammatory proteins | |
US20030225000A1 (en) | Stabilized teriparatide solutions | |
CN101809029A (zh) | 具有延长目标肽的血浆半衰期作用的肽 | |
KR20070050454A (ko) | 섬유아세포 성장 인자 21의 뮤테인 | |
EP3195874A1 (en) | Vegf antagonist formulations | |
HU214823B (hu) | Hirudint tartalmazó gyógyszerkészítmények | |
EP0665019B1 (en) | Stable dry powders containing hirudin | |
MXPA96003010A (en) | Pharmaceutical compositions | |
US5472938A (en) | Pharmaceutical depot compositions containing hirudin | |
KR20220042129A (ko) | 신규한 세타 디펜신 유사체(novel theta defensin analogs) | |
JPH06247870A (ja) | インターロイキン−6を含有する医薬製剤 | |
US20040180835A1 (en) | Use of the protein uk114 or of fragments thereof for the treatment and prevention of the endotoxic shock | |
JPH01193231A (ja) | 抗腫瘍剤 | |
CA2092906A1 (en) | Stabilized, potent grf analogs | |
AU2003213511A1 (en) | Stabilized Teriparatide Solutions |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
DGB9 | Succession in title of applicant |
Owner name: NOVARTIS AG., CH |
|
HPC4 | Succession in title of patentee |
Owner name: NOVARTIS AG., CH Owner name: UPC GEN-PHARMA AG., CH |
|
HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |