HU211141A9

HU211141A9 - 2-piperazinone compounds and their use

Info

Publication number: HU211141A9
Application number: HU95P/P00497P
Authority: HU
Inventors: Hirosada Sugihara; Zenichi Terashita
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date: 1991-08-23
Filing date: 1995-06-28
Publication date: 1995-10-30
Also published as: EP0529858A1; AU2090892A; HUT63154A; CN1069730A; NO923253D0; AU646966B2; ATE159249T1; US5294713A; FI923775A; CN1078968A; DE69222719T2; EP0529858B1; KR930004287A; NO923253L; CA2076619A1; DE69222719D1; FI923775A0

Description

A találmány tárgya új 2-piperazinon-származékok és gyógyászatilag alkalmazható sóik, valamint ezeket a vegyületeket hatóanyagként tartalmazó emlós sejtek adhézióját gátló készítmények.

A találmány továbbá szolgáltat eljárásokat a fenti 2-piperazinon-származékok előállítására.

Az állati sejtek sejtközi állományához való tapadásért felelős faktorként ismertek a fibronectin, vitronectin, isteopontin, kollagének, thrombospondin, fibrinogén és a von Willebrand-faktor. Ezek a proteinek -ArgGly-Asp- tripeptid csoportot tartalmaznak sejt érzékelő helyként. Ezt a tripeptidet egy receptorcsalád - az integrin - legalább egy tagja érzékeli. A receptorcsalád heterodimer proteinekből áll, két membránáthidaló alegységgel [E. Ruoslahti és M. D. Pierschbacher, Science, 239, 491 (1978)]. Az -Arg-Gly-Asp- aminosav szekvenciát felismerő szerkezetileg rokon receptorok az integrinek - esetében ismert, hogy hatást fejtenek ki az extracelluláris felületi glikoproteinen a vérlemezke GPIIb/IIIa-n, endotheliális sejteken, leukocitán, limfocitán. monocitán és granulocitán. Az -Arg-Gly-Aspaminosav szekvenciát tartalmazó vegyületek versengve kötődnek az intracelluláris tapadási faktorokhoz kötődni képes helyekhez, ezáltal megakadályozva az intracelluláris tapadási faktorok kötődését. Az intracelluláris tapadási faktorok közül ismert például a H-GlyArg-Gly-Asp-Ser-Pro-OH.

A véredények sérülése esetén a vérlemezkék aktiválódnak például az endotheliális (belhámi) kollagénekkel. amely a fibrinogénnek a vérlemezkékhez való kötődését, azaz vérlemezke aggregációt és így trombusképződést okoz. A vérlemezkék és a fibrinogén közötti kapcsolat a GP Ilb/IIIa közvetítésével jön létre, ez a vérlemezke aggregáció fontos jellegzetessége. A sejttapadást gátló anyagok képesek meggátolni a thrombin, epineptirin, ADP vagy kollagén okozta vérlemezke aggregációt.

A sejttapadást gátló anyagok emellett várhatóan megállítják a tumorsejtek áttételeződését azáltal, hogy meggátolják a tapadást azon a helyen, ahová a tumorsejtek beszűrődnek.

Az -Arg-Gly-Asp- aminosav szekvenciái tartalmazó lineáris vagy ciklikus peptideket ismertetnek sejttapadás gátló anyagként a például következő irodalmak: Journal of Biological Chemistry. 262, 17 294 (1987) és 89 910 207 számú EP szabadalmi bejelentés. Ezek a peptidszármazékok nem elég hatásosak és orális felszívódásuk nem kielégítő. Mivel ezeket a peptidszármazékokat enzimek, mint az aminopeptidáz, karboxipeptidáz, vagy különféle endopeptidázok, pl. a szerinopeptidáz, hidrolizálják, az ezeket az enzimeket tartalmazó oldatban vagy élő szervezetben stabilitásuk nem kielégítő. Mindezek miatt az előbbi peptidszármazékoknak klinikai alkalmazása terén még vannak megoldásra váró problémák.

A találmány oltalmi körébe tartozó új 2-piperazinon-származékok sejttapadást gátló szerként való alkalmazása sikeresen megoldja az előzőekben ismertetett problémákat.

A találmány tárgya közelebbről új (I) általános képletű vegyületek - ahol

G jelentése amidinocsoport vagy adott esetben ciklusos aminocsoport, amelyek szubsztituáltak lehetnek;

D jelentése 2-6 atomos láncú áthidaló csoport, amely adott esetben egy heteroatomon keresztül és/vagy egy 5-6 tagú gyűrűn keresztül kapcsolódik azzal a feltétellel, hogy az 5-6 tagú gyűrű, kapcsolódási helyétől függően, 2-3 atomos láncoknak számít;

R¹ jelentése hidrogénatom, benzilcsoport vagy rövid szénláncú alkilcsoport;

R² és R³ jelentése egymástól függetlenül egy maradék csoport, amely valamilyen α-aminosavból a -CH(NH₂)C00H csoport eltávolításával jön létre, vagy

R¹ és R²a szomszédos nitrogénatommal és szénatommal együtt egy 5-6 tagú gyűrűt képezhet;

X jelentése hidrogénatom vagy adott esetben szubsztituált rövid szénláncú alkilcsoport;

Z jelentése anion képzésre képes csoport vagy az élő szervezetben anionná való átalakulásra képes csoport és gyógyászatilag alkalmazható sóik, és közöttük főként az (Γ) általános képletű vegyületek - ahol

D jelentése 3-6 atomos láncú áthidaló csoport, amely adott esetben egy heteroatomon keresztül és/vagy egy 5-6 tagú gyűrűn keresztül kapcsolódik azzal a feltétellel, hogy az 5-6 tagú gyűrűn, kapcsolódási helyétől függően, 2-3 atomos láncnak számít;

R² és R³ jelentése egy maradék csoport, amely valamilyen α-aminosavból a -CH(NH₂)COOH csoport eltávolításával jön létre;

X jelentése hidrogénatom vagy rövid szénláncú alkilcsoport. amely (1) valamilyen adott esetben észterezett vagy amidált karboxilcsoporttal, (2) egy adott esetben szubsztituált fenilcsoporttal vagy (3) hidroxilcsoporttal lehet szubsztituálva;

Z jelentése adott esetben észterezett vagy amidált karboxilcsoport és gyógyászatilag alkalmazható sóik.

A találmány oltami körébe tartozik az új (I) általános képletű vegyületek és sóik előállítására szolgáló eljárás.

A G csoport adott esetben a szubsztituált, adott esetben ciklusos aminocsoportként aciklusos primer aminocsoport vagy aciklusos vagy ciklusos szekundervagy tercier aminocsoport lehet, amelyek 1-4 szénatomos alkilcsoporttal lehetnek szubsztituálva, vagy valamilyen, fiziológiailag funkcionálni képes védőcsoportot tartalmazhatnak.

Ilyen, fiziológiailag funkcionálni képes amino-védőcsoportok lehetnek a 2-5 szénatomos alkanoilcsoportok, így az acetil-, propionil- vagy butirilcsoport; az adott esetben szubsztituált benzoilcsoportok, így a benzoil-, 3,4,5-trimetoxi-benzoil-csoport; a-aminosavakból, így az L-alanilból, L-fenilalanilbóI vagy L-leucilból levezethető acilcsoportok, nevezetesen az a-aminosavak -COOH csoportjából az OH rész eltávolítása

HU 211 141 A9 után megmaradt csoportok; (2-5 szénatomos alkoxi)karbonil-csoportok, így metoxi-karbonil-, etoxi-karbonil-csoport; adott esetben szubsztituált fenoxi-karbonilcsoportok; adott esetben szubsztituált 8-14 szénatomos aralkil-oxi-karbonil-csoportok, így benziloxi-karbonilvagy p-metoxi-benziloxi-karbonil-csoport.

Az (I) általános képletben G jelentése ciklusos szekunder aminocsoportként (a), (b), (c), (d), (e) csoport; tercier aminocsoportként (f), (g) vagy (h) képletű csoport lehet.

Az adott esetben szubsztituált amidinocsoportok előnyös szubsztituensei az 1-4 szénatomos alkilcsoportok.

Különösen előnyös G csoportok a szubsztituálatlan amidinocsoportok és a szubsztituálatlan aminocsoportok.

A 2-6 atomos láncú, adott esetben 5-6 tagú gyűrűn és/vagy heteroatomon keresztül kapcsolódó D áthidaló csoportban lévő heteroatomok nitrogén-, oxigén- és kénatomok lehetnek. Az 5-6 tagú gyűrűk telített vagy telítetlen karbociklusos gyűrűk, vagy 1-4 heteroatomot, így nitrogén-, oxigén- vagy kénatomot tartalmazó telítetlen vagy telítetten heterociklusos gyűrűk lehetnek. Ilyen 5-6 tagú gyűrűk például az (i), (j), (k), (1), (m), (n), (o), (ö), (p), (r), (s), (t), (u) gyűrűk.

A fenti 5-6 tagú gyűrűk közül előnyösek azok, amelyek nem a gyűrű szomszédos helyein kapcsolódnak. Habár előnyös, ha a fenti 5-6 tagú gyűrűk kapcsolódó helyei egymástól számítva a második vagy harmadik helyek, ezek a gyűrűk, legyenek telítettek vagy telítetlenek, általában 2-3 atomos láncnak tekintendők és előnyös, ha a D csoport maga 2-6 atomos lánc. Különösen előnyös heteroatom a D áthidaló csoportban a nitrogénatom. Pontosabban, előnyös, ha a D csoport a szomszédos G = amidino-csoporthoz -NHcsoporton keresztül kapcsolódik. Az előzőekben említett 5-6 tagú gyűrű a szomszédos G = amidino-csoporthoz közvetlenül, -NH-csoporton keresztül, vagy metilén-láncon keresztül kapcsolódhat. D jelentésében az előbb említett 5-6 tagú gyűrű a szomszédos karbonilcsoporthoz közvetlenül, metilén-láncon keresztül, vagy heteroatom okon keresztül kapcsolódhat.

A D áthidaló csoportban a metilén lánc adott esetben (1) általános képletű csoporttal lehet szubsztituálva, ahol R° jelentése hidrogénatom vagy adott esetben fenilcsoporttal szubsztituált rövid szénláncú alkilcsoport, ahol a fenil-csoport szubsztituált lehet; R⁴ jelentése adott esetben fenil-csoporttal szubsztituált rövid szénláncú alkilcsoport ahol a fenilcsoport szubsztituált lehet, vagy adott esetben szubsztituált fenilcsoport, illetőleg benziloxic söpört. Ennek megfelelően D jelentése mint tipikus csoport a (2) általános képletű csoport lehet, ahol h és i jelentése egész szám, melynek értéke 0 vagy 1, m és k jelentése egész szám, melynek értéke 0, 1 vagy 2 lehet. A jelentése előnyösen 5-6 tagú gyűrű, főként ciklohexán, benzol, piperidin gyűrű vagy (D') általános képletű csoport, ez utóbbi különösen előnyös. A jelentésében 5-6 tagú gyűrűként a későbbiekben A| jelölésű jelölt gyűrűk előnyösek. Célszerűen h értéke 0 vagy 1, m értéke 0 vagy 1 és k értéke 0. Az A,-gyei jelölt 5-6 tagú gyűrűk közül a benzol és ciklohexán gyűrűk az előnyösek, legelőnyösebb a benzolgyűrű.

Az (I) általános képletben az alábbi csoportok: (3) ahol R°, R⁴ és m jelentése az előzőekben megadott, argininből, vagy homoargininből levezethető szubsztituensek.

D jelentésében az (ü), (v), (w) és (x) jelölésű csoportok különösen előnyösek.

R°, R⁴ és R¹ jelentésében az adott esetben szubsztituált rövid szénláncú alkilcsoportok alkilcsoportja, valamint X jelentésében a rövid szénláncú alkilcsoport, mint a G = szubsztituált amidinocsoport vagy aminocsoport szubsztituensei, 1-4 szénatomos alkilcsoportok, így metil-, etil-, propil-, izopropil-, n-butil- vagy szek-butil-csoportok lehetnek. X = szubsztituált rövid szénláncú alkil-ckt jelentése esetén tipikus szubsztituensek az adott esetben észterezett vagy amidált karboxilcsoportok, az adott esetben szubsztituált fenilcsoportok, az 5-6 tagú heterociklusos csoportok és a hidroxilcsoport. R°, R⁴ vagy X jelentésében az adott esetben szubsztituált fenilcsoporttal szubsztituált rövid szénláncú alkilcsoport esetében a benzolgyűrűn lehetséges szubsztituensek, vagy R⁴ = adott esetben szubsztituált fenilcsoport esetében a benzolgyűrű lehetséges szubsztituensei: 1-4 szénatomos alkil-cktok, így metil-, etil-, propil-, izopropil-, η-butil-, szek-butilcsoport; 1-4 szénatomos alkoxicsoportok, így metoxi-, etoxicsoport; halogénatomok, így klór-, fluor-, brómatom; és hidroxilcsoport.

X = adott esetben szubsztituált rövid szénláncú alkil-csoport jelentése esetén, ahol a szubsztituensek 5-6 tagú heterociklusos gyűrűk, ezek telített vagy telítetlen gyűrűk lehetnek, olyanok, amelyek 1-4 heteroatomot, így nitrogén-, kén- és oxigénatomot tartalmazó 5-6 tagú gyűrűk, így pl. benzol, piridin, imidazol, tiofén, tetrazol és oxadiazol gyűrű.

R² és R³ jelentésében bármely olyan csoport lehetséges lehet, amely egy a-aminosavból a -CH(NH₂)COOH csoport eltávolításával megmaradó csoport. R¹ és R² a szomszédos nitrogénatommal és szénatommal együtt 5-6 tagú gyűrűt képezhet. 5-6 tagú gyűrűként az (y) és (z) képletű csoportok az előnyösek.

R² és R³ esetében az eszenciális aminosavak maradékai az előnyösek. R² és R³ esetében az előnyös jelentések a hidrogénatom, 1-4 szénatomos alkilcsoport, adott esetben szubsztituált fenilcsoporttal szubsztituált 1-4 szénatomos alkilcsoport (lásd X jelentésénél az előzőekben) hidroxilcsoporttal szubsztituált 1-4 szénatomos alkilcsoport stb.: ilyenek lehetnek előnyösen a hidrogénatom, metil-, izopropil-, szekbutil-, izobutil-, hidroxi-metil-, benzil-, p-hidroxi-benzil-, ρ-metoxi-benzil-, karbamoilmetil-, karbamoil-etil-csoportok.

Az (I) általános képletű vegyületek esetében az R¹, R² és R³ helyén hidrogénatomot tartalmazó vegyületek előnyösek.

A Z helyén anionképzésre alkalmas vagy az élő szervezetben anionná átalakulni képes csoportként adott esetben észterezett vagy midált karbonilcsoportok vagy 5-6-tagú, a karboxil-csoporthoz hasonlóan savas karakterű heterociklusos csoportok jöhetnek szá3

HU 211 141 A9 mításba. Előnyös ilyen savas karakterű 5-6 tagú heterociklusos csoportok, amelyek szénatomjaikon keresztül kapcsolódnak, ilyen a tetrazol-5-il- és 5-oxo-2,5-dihidro-l,2,4-oxadiazol-3-il-csoport. Az előbbi képletben a Z = adott esetben észterezett vagy amidéit karboxilcsoport, vagy X = szubsztituált rövid szénláncú alkilcsoport esetén az észterezett vagy amidált karboxilcsoport szubsztituens az alkilcsoporton

O O

II II

C-R⁵ és C-R⁶ általános képletű csoport lehet, megfelelőleg.

Általában, R⁵ és R⁶ jelentése egymástól függetlenül hidroxilcsoport, 1-8 szénatomos alkoxi-csoport, így metoxi-, etoxi-, propoxi-, butoxi-csoport; 3-12 szénatomos alkenil-oxicsoport, így allil-oxi- vagy buteniloxi-csoport; vagy aralkil-oxi-csoport, így fenil-(rövid szénláncú alkil)-oxi-csoport, ahol a rövid szénláncú alkil rész kb. 1-4 szénatomos, ilyen a benzil-oxi-, fenetil-oxi- vagy 3-fenil-propil-oxi-ctM vagy R⁵ és R⁶ jelentése külön-külön -NR⁵R⁸ vagy -NR⁹R'° általános képletű szubsztituált aminocsoport lehet. Az -NR⁷R⁸és -NR⁹R'° általános képletű csoportokban R⁷ és R⁸, R⁹ és R¹⁰ jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom 1-6 szénatomos alkil-csoport, így metil-, etil-, propil-. butil- vagy hexilcsoport; 3-8 szénatomos alkenilcsoport. így allil-, 2-butenil-, 3-pentenil-csoport; 612 szénatomos aralkilcsoport, így benzil-, fenetil-, fenil-propil-. piridil-metil-csoport, ahol az aril rész adott esetben egy vagy két szubsztituenssel. így halogénatommal. mint a klór-, fluor-, brómatom, nitro-csoporttal. 1^4 szénatomos alkilcsoporttal, mint amilyen a metil-, etil-, propilcsoport, vagy 1-4 szénatomos alkoxi-csoporttal, mint amilyen a metoxi-, etoxi-, propoxicsoport. lehet szubsztituálva.

Ha az (I) általános képletű vegyületből valamilyen orálisan beadható „prodrug típusú készítményt kívánunk előállítani, R⁵ és R⁶ jelentése előnyösen hidroxilcsoport; adott esetben szubsztituált aminocsoport, így amino-. N-(l-4 szénatomos alkilj-amino- vagy N,Ndi-(rövid szénláncú alkil)-amino-csoport, így 1-6 szénatomos alkoxicsoport lehet, ahol az alkil rész szubsztituensei a következők lehetnek: hidroxil-csoport, vagy adott esetben szubsztituált aminocsoport, piperidinovagy morfolinocsoport; halogénatom, 1-6 szénatomos alkoxicsoport, 1-6 szénatomos alkil-tio-csoport vagy adott esetben szubsztituált dioxolenilcsoport, így pl. 5-metil-2-oxo-l,3-dioxolenil-csoport; vagy -OCH(R)OCOR¹² általános képletű csoport - ahol R jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, így metil-, etil-, n-propil-, izopropil-, η-butil-, izobutil-, t-butil-, n-pentil-, izopentil- és neopentilesöpört, vagy 5-7 szénatomos cikloalkilcsoport, R¹² jelentése pedig 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, így metil-, etil-, η-propil-, izopropil-, η-butil-, izobutil-, szek-butil-, t-butil-, n-pentil-. izopentil-, neopentilcsoport; 2-8 szénatomos alkenilcsoport, így vini-, propenil-, alkil-, izopropenilcsoport; 5-7 szénatomos cikloalkilcsoport, így ciklopentil-. ciklohexil-, cikloheptilcsoport; 5-7 szénatomos cikloalkilcsoporttal, így ciklopentil-, ciklohexil-, cikloheptil-csoporttal vagy arilcsoporttal, így fenilcsoporttal szubsztituált 1-3 szénatomos alkilcsoport, mint amilyen például a benzil-, p-klórbenzil-, fenetil-, ciklopentil-metil-, ciklohexil-metil-csoport; 57 szénatomos cikloalkilcsoporttal, például ciklopentil-, ciklohexil-, cikloheptilcsoporttal vagy arilcsoporttal, így fenilcsoporttal szubsztituált 2-3 szénatomos alkenilcsoport, ahol az alkenil rész vinil-, propenil-, allil-, izopropenilcsoport lehet: ilyen csoport például a cinnamilcsoport; arilcsoport, így adott esetben szubsztituált fenilcsoport, mint amilyen a fenil-, ρ-tolil-, naftilcsoport; 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó szénláncú alkoxi-csoport, így metoxi-, etoxi-, η-propoxi-, izopropoxi-, η-butoxi-, izobutoxi-, szek-butoxi-, t-butoxi-, npentil-oxi-, izopentil-oxi-, szek-butoxi-, t-butoxi-, npentil-oxi-, izopentil-oxi-, neopentil-oxi-csoport; 2-8 szénatomos egyenes vagy elágazó szénláncú alkeniloxi-csoport, így alkil-oxi-, izobutenil-oxi-csoport; 5-7 szénatomos cikloalkil-oxi-csoport, például ciklopentiloxi-csoport; 5-7 szénatomos cikloalkilcsoporttal, így ciklopentil-, ciklohexil-, cikloheptilcsoporttal vagy valamilyen arilcsoporttal, például adott esetben szubsztituált fenilcsoporttal szubsztituált 1-3 szénatomos rövid szénláncú alkoxi-, így metoxi-, etoxi-, η-propoxi-, izopropoxi-csoport; ilyenek lehetnek a benzil-oxi-, fenetil-oxi-, ciklopentil-metil-oxi-, ciklohexil-metil-oxicsoportok; 5-7 szénatomos cikloalkil- vagy ciklopentil-, ciklohexil-, cikloheptil-csoporttal, vagy valamilyen arilcsoporttal, így adott esetben szubsztituált fenilcsoporttal szubsztituált 2-3 szénatomos alkenil-oxi-, így vinil-oxi-. propenil-oxi-, allil-oxi-, izopropenil-oxicsoport. Ilyen lehet a cinnamil-oxi-csoport; vagy valamilyen aril-oxi-csoport, így adott esetben szubsztituált fenoxicsoport. például fenoxi-, ρ-nitrofenoxi-, naftoxicsoport.

Prodrugként való alkalmazása esetén Z jelentésében észterezett karboxilcsoportként és X = adott esetben szubsztituált rövid szénláncú alkilcsoport esetén szubsztituensként észterezett karboxilcsoportként a következő csoportok előnyösek: -COOMe, -COOEt, -COOtBu,-COOPr, pivaloil-metoxi-karbonil-, l-(ciklohexil-oxi-karbonil-oxi)-etoxi-karbonil-, 5-metil-2oxo-1,3-dioxolén-4-il-metoxi-karbonil-, acetoximetiloxi-karbonil-, propionil-oxi-metoxi-karbonil-, n-butiril-oxi-metoxi-karbonil-, izobutiril-oxi-metoxi-karbonil-, l-(etoxi-karbonil-oxi)-etoxi-karbonil-, l-(acetiloxi)-etoxi-karbonil-, 1 -(izobutiril-oxi)-etoxi-karbonil-, ciklohexil-karbonil-oxi-metoxi-karbonil-, benzoiloximetoxi-karbonil-, cinnamil-oxi-karbonil- és ciklopentil-karbonil-oxi-metoxi-karbonil csoport.

X jelentésében előnyös a hidrogénatom, benzil-, -CH₂C00H, -CH₂C00CH_?, -CH₂CONH₂, -CH₂CH₂COOH, -CH₂CH₂COOCH₃, -CH₂CH₂CONH₂ csoport jelentés, Z jelentésében pedig előnyös a -COOH csoport.

Az (I) általános képletben egy vagy több aszimmetriás szénatom lehetséges, így az R- és S-konfigurációjú molekulák egyaránt a találmány oltalmi körébe tartoznak.

HU 211 141 A9

Az (I) általános képletű vegyületek hidratálhatok, így az (I) általános képletű vegyületek hidrátjai is a találmány oltalmi körébe tartoznak.

Ha sejttapadást gátló anyagként az (I) általános képletű vegyületek sóit alkalmazzuk, akkor fiziológiásán alkalmazható sók használata kívánatos.

Fiziológiásán alkalmazható sók lehetnek a szervetlen sók, ilyen a hidroklorid, hidrobromid, szulfát, nitrát és foszfát; szerves savak, ilyen az acetát, tartarát, citrát, fumarát, maleát, toluolszulfonát, metánszulfonát; fémsók, így nátrium-, kálium-, kalcium- és alumíniumsók, valamint a bázisos sók, így a trietil-aminsó, guanidinsó, ammóniumsó, hidrazinsó, guininsó és cinkoninsó.

Előnyös (I) általános képletű vegyületek, ahol G jelentése szubsztituálatlan amidino- és szubsztituálatlan aminocsoport; D jelentése előnyösen a (2') általános képletű -(NH)_h-(CH₂)_m-(A,)_i-(CH₂)_k- csoport ahol a szubsztituensek jelentése a fentiekben megadott;

R¹ jelentése hidrogénatom; R² és R³ jelentése hidrogénatom, X jelentése rövid szénláncú alkilcsoport, így metil- vagy etilcsoport, amely benzil-, karboxilészterezett, különösen metilcsoporttal észterezett karboxilcsoport, vagy amidált karboxilcsoport; Z jelentése karboxilcsoport vagy élő testben karboxilcsoporttá átalakítható csoport.

Az (1) általános képletű vegyületek közül különösen előnyösek az alábbiak: (S)-4-(transz-4-guanidino-metil-ciklohexiI-karbonilglicil)-2-oxo-piperazin-l,3-diecetsav; (S)-4-(4-guanidino-metil-benzoil-glicil-2-oxo-piperazin-l,3-diecetsav;

(S)-4-(4-guanidino-benzoil-glicil)-2-oxo-piperazin1,3-diecetsav;

(S)-4-(4-guanidino-benzoil-szarkozil)-2-oxo-piperazin-l,3-diecetsav;

(S)-4-(4-guanidino-metil-benzoil-szarkozil)-2-oxo-piperazin-1,3-diecetsav;

(S)-l-karboxi-metil-4-(4-guanidino-benzoil-szarkoziI)2-oxo-piperazin-3-propionsav;

(S)-4-(3-guanidino-fenil-acetil-glicil)-2-oxo-piperazin1,3-diecetsav;

(S>4-(4-amidino-benzoil-glicil)-2-oxo-piperazin-l,3diecetsav;

(S)-4-[4-(2-amino-etil)-benzoil-glicil]-2-oxo-piperazin-l,3-diecetsav;

4-(4-amidino-benzoil-glicil)-2-oxo-piperazin-l-ecetsav; (S)-4-(4-amidino-benzoil-glicil)-3-metoxi-karbonilmetil-2-oxo-piperazin-1 -ecetsav;

(S)-4-[4-(2-amino-etil)-benzoil-glicil]-3-metoxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazin-1 -ecetsav; (S)-4-(4-amidino-benzoil-glicil)-3-benzil-2-oxo-piperazin-1-ecetsav;

(S)-4-(4-amidino-benzoil-glicil)-3-karbamoil-metil-2oxo-piperazin-1 -ecetsav;

(S)-4-(4-amidino-benzoil-glicil)-l-karboxi-metil-2oxo-piperazin-3-propionsav;

(S)-4-[4-(2-amino-etil)-benzoiI-glicil]-l-karboxi-metil-2-oxo-piperazin-3-propionsav;

(S )-4-[4-(2-ami no-etil )-ben zoil-glici 1 ]-1 -karboxi-metil-2-oxo-piperazin-1 -ecetsav;

(S)-4-[4-(2-amino-etil)-benzoil-glicil]-3-karbamoilmetil-2-oxo-piperazin-1 -ecetsav; (S)-4-[4-(2-amino-etil)-benzoil-glicil]-3-metoxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazin-1-ecetsav; (S)-4-[4-(2-amino-etil)-benzoil-glicil]-3-metoxi-karbonil-etil-2-oxo-piperazin-1 -ecetsav; (S)-4-[4-(2-amino-etil)-benzoil-glicil]-3-karbamoiletil-2-oxo-piperazin-1 -ecetsav és hidrogénkloridjaik.

A találmány oltalmi körébe tartozó (I) általános képletű vegyületeket úgy állíthatjuk elő, hogy

a) valamely (II) általános képletű vegyületet, ahol D és G jelentése az előzőekben megadott és valamely (ΙΠ) általános képletű vegyületet, ahol R¹, R², X, R³ és Z jelentése az előzőekben megadott kondenzációs reakcióban reagáltatunk egymással, vagy

b) valamely (IV) általános képletű vegyületet, ahol G, D, R¹, R² jelentése az előzőekben megadott és valamely (V) általános képletű vegyületet, ahol X, R³és Z jelentése az előzőekben megadott kondenzációs reakcióban reagáltatunk egymással, vagy

c) valamely (VI) általános képletű vegyület, ahol A' jelentése NC-(CH₂)_m-(A,)_i-(CH₂)_k- általános képletű csoport, ahol i jelentése 0 vagy 1; m és k értéke egymástól függetlenül 0, 1 vagy 2 és A¹ jelentése 5-6 tagú gyűrű, R¹, R², X, R³ és Z jelentése az előzőekben megadott, A' csoportjának cianocsoportját amidinocsoporttá alakítjuk, vagy aminocsoporttá redukáljuk, vagy

d) valamely (VII) általános képletű vegyület, ahol A jelentése H₂N-(CH₂)_m-(A₁)_i-(CH₂)_k- általános képletű csoport, ahol a szubsztituensek jelentése a fenti, R¹, R², X, R³ és Z jelentése az előzőekben megadott, A² csoportjának amino-csoportját guanidinocsoporttá alakítjuk.

Az a) és b) eljárásokban alkalmazott kondenzációs reakciót a közönséges peptidszintézisekben alkalmazott amidokötés kialakítással, pl. aktív észteres vegyes savanhidrides vagy savkloridos módszerrel hajthatjuk végre, pl. a (II) és (III) általános képletű vegyületek közötti, vagy a (IV) és (V) általános képletű vegyületek közötti kondenzációs reakciót úgy hajthatjuk végre, hogy a (II) általános képletű vegyületet vagy a (IV) általános képletű vegyületet valamilyen fenolszármazékkal, így 2,4,5-triklór-fenollal, pentaklór-fenollal, 2nitro-fenollal vagy 4-nitro-fenollal vagy valamilyen Nhidroxi-származékkal, így N-hidroxi-szukcinimiddel, N-hidroxi-5-norbomén-endo-2,3-dikarboximiddel (HONB), 1-hidroxi-benztriazollal (HOBT) vagy Nhidroxi-piperidinnel kondenzáltatjuk valamilyen katalizátor, így diciklohexil-karbodiimid jelenlétében ezeket aktív észterré alakítva, majd kondenzáltatva. Alternatív módon eljárhatunk úgy is, hogy a (Π) általános képletű vagy (IV) általános képletű vegyületeket izobutil-klór-formiáttal helyesebben klórhangyasav-izobutil-észterrel reagáltatjuk, így kapunk egy vegyes savanhidridet, amelyet azután kondenzációs reakcióba viszünk.

A (II) általános képletű vegyület és a (III) általános képletű vegyület közötti vagy a (IV) általános képletű és az (V) általános képletű vegyületek közötti kondenzációs reakciót úgy is végrehajthatjuk, hogy egyszerű5

HU 211 141 A9 en egy peptidkialakításnál alkalmazott reagenst használunk, ilyen a diciklohexil-karbodiimid, N,N'-karbonil-diimidazol, difenil-foszforil-azid vagy a dietil-ciano-foszfonát.

A fenti kondenzációs reakciókban a (II) vagy (IV) általános képletű vegyületekben jelenlévő amidinocsoport vagy guanidinocsoport előnyösen valamilyen szervetlen savval képzett só formájában, így pl. hidrokloridsó, szulfát-, nitrát-, hidrobromidsó formájában van jelen, vagy védócsoporttal, így terc-butoxi-karbonilcsoporttal vagy benziloxi-karbonilcsoporttal védett.

Az előbbi kondenzációs reakciókat meggyorsíthatjuk valamilyen szerves bázis, így trietil-amin, N-metilpiperidin, 4-N,N-dimetilamino-piridin hozzáadásával. A reakcióhőmérséklet általában -20 C-+50 °C-ig, előnyösen 0 °C-tól szobahőmérsékletig terjed. Az általánosan alkalmazott oldószerek lehetnek pl. a dioxán, tetrahidrofurán, acetonitril-, piridil, N,N-dimetil-formamid, dimetil-szulfoxid, N-metil-pirrolidin, kloroform és metilén-klorid, ezeket egymagukban vagy keverékeik formájában is alkalmazhatjuk.

A c) eljárásban a cianocsoportnak amidinocsoporttá való átalakítását önmagában ismert módon hajthatjuk végre. pl. a nitrilt hidrogén-szulfiddal és egy bázissal, így trietilaminnal reagáltatjuk, így egy tioamidot kapunk. amelyet aztán metilezünk pl. metil-jodiddal acetonban, majd a kapott metil-tioformidolil vegyületet, ez a (IV) általános képletű vegyület, amelyben cianocsoport helyett -C( = NH)SCH₃ csoport van jelen, ammónium-acetáttal reagáltatjuk.

A c) eljárásban a cianocsoportnak aminocsoporttá való redukcióját önmagában ismert módon előnyösen katalitikus redukcióval valamilyen katalizátor, így palládium alkalmazásával is végrehajthatjuk,

A d) eljárásban az aminocsoportnak guanidinocsoporttá való átalakítását önmagában ismert módon, pl. úgy hajthatjuk végre, hogy S-metil-izo-tiokarbamidszulfátot reagáltatunk a (VII) általános képletű aminoszármazékkal valamilyen bázis, így nátrium-karbonát vagy nátrium-hidroxid jelenlétében. Oldószerként metanolt, etanolt, dioxánt vagy Ν,Ν-dimetil-formamidot használhatunk külön vagy keverék formájában. A reakcióhömérséklet általában szobahőmérséklettől 100 °Cig, előnyösen +40 °C-tól +70 °C-ig terjedhet.

A végtermék karboxilcsoportjának védöcsoportját, vagyis az (I) általános képletű vegyületben Z¹vagy Z² esetében egy észtercsoportot, így benzil-észter- vagy butil-észter-csoportot önmagában ismert módon távolíthatjuk el, pl. egy olyan vegyületet, amely benzil-észter-csoportot tartalmaz, karbonsavszármazékká alakíthatunk úgy, hogy a benzil-észtercsoportot tartalmazó vegyületet hidrogénezzük valamilyen fémkatalizátor, így palládium vagy platina jelenlétében és a terc-butil-észter-csoportot tartalmazó vegyületet karbonsav-származékká alakíthatjuk az előzőt valamilyen savval, így trifluor-ecetsavval vagy hidrogén-kloriddal kezelve.

A reakcióban az (I) általános képletű vegyület sok esetben sók formájában képződik. Ha ez nem így történik, akkor az (I) általános képletű vegyületet kívánt esetben valamilyen sav, lúg vagy bázis hozzáadásával sóvá alakíthatjuk.

A fenti módon kapott (I) általános képletű vegyületet a reakcióelegyből ismert elválasztási és tisztítási eljárásokkal izolálhatjuk. Ilyen lehet az extrakció, koncentráció, semlegesítés, újrakristályosítás, oszlopkromatográfia, vékonyréteg-kromatográfia.

Az (I) általános képletű vegyületekben legalább két sztereoizomer lehetséges. A találmány oltalmi körébe tartoznak az izomerek és az izomerkeverékek is. Kívánt esetben ezeket az izomereket önmagukban is előállíthatjuk.

Az alább következő (I) reakcióvázlat szerinti reakciót alkalmazva a (III), (IV), (V), (VI) vagy (VII) áltaános képletű kiindulási vegyületek valamelyik izomerjét alkalmazva és a (IX), (X), (XII), (XIV), (XV), (XV), (XVII), (XVIII), (XIX), (XXI) vagy (XXIII) általános képletű kiindulási vegyületek valamelyik izomerjét alkalmazva az (I) általános képletű vegyület optikai izomerjét kapjuk. Az esetben, amikor a termék két vagy több izomer keveréke, ezek elkülöníthetők izomerekre ismert elkülönítési módszerekkel, pl. valamilyen optikailag aktív savval, így kámfor-szulfonsavval, borkösavval, dibenzoil-bőrkösavval képzett só segítségével egy optikailag aktív bázis, pl. cinkonin, cinkonidin, guinin, guinidin, α-metil-benzil-amin és dehidro-abietil-amin segítségével vagy különféle kromatográfiás módokon vagy frakcionált kristályosítással.

A (II) általános képletű kiindulási vegyület ismert vegyület és a (III), (IV), (V) és (VI) általános képletű kiindulási vegyületek pedig ismert analóg módszerekkel állíthatók elő. Ezek közé tartozik az alább következő 1. reakcióvázlatban ismertetett előállítási eljárások is.

A továbbiakban a (III) általános képletű vegyületeket egyszerűen ,,(III)”-ként jelöljük, és ezt a megoldást alkalmazzuk egyéb vegyületeknél is.

A fenti reakcióvázlatban az általános képletekben R amino védőcsoportot jelent az aminosavaknál és például lehet R benziloxi-karbonil-csoport vagy terc-butoxikarbonil-csoport, W¹ jelentése halogénatom vagy R⁹SO₂-O- csoport (ahol R⁹ 1-4 szénatomos alkilcsoport, trifluormetil-, fenil- vagy p-toluolcsoport lehet), W² jelentése halogénatom és W³ jelentése halogénatom vagy valamilyen aktív észter, mely O = C-W³általános képletű lehet. Az egyéb szubsztituensek jelentése pedig az előzőekben megadott.

A (II) általános képletű vegyület előállítását bemutató fenti reakcióvázlatot az alábbiakban részletezzük.

A (X) általános képletű vegyületet úgy kapjuk meg, hogy a (VIII) általános képletű vegyületet reagáltatjuk a (IX) általános képletű vegyülettel vagy a (X) általános képletű vegyületet reagáltatjuk a (XII) általános képletű vegyülettel egy aminocsoport ismert alkilezési reakciójával, pontosabban a (VIII) általános képletű vegyületet és a (IX) általános képletű vegyületet vagy a (XI) általános képletű vegyületet és a (XII) általános képletű vegyületet 0 °C-tól kb. 100 °C-ig terjedő hőmérsékleten valamilyen bázis, pl. egy szervetlen bázis vagy kálium-karbonát vagy nátrium-karbonát, kálium6

HU 211 141 A9 hidrogén-karbonát, cézium-fluorid vagy valamilyen szerves bázis, így trietil-amin, piridin, 4-N,N-dimetilamino-piridin jelenlétében hajtjuk végre és megkapjuk a (Π) általános képletű vegyületet. A reakció oldószereként szerves oldószert, így acetonitrilt, Ν,Ν-dimetilformamidot, tetrahidrofuránt, toluolt vagy metilén-kloridot alkalmazhatunk.

Ezután a (X) általános képletű vegyületet úgy állítjuk elő, hogy a (XII) általános képletű vegyületet a (XIII) általános képletű vegyülettel reduktív kondenzációs reakcióba visszük. A két vegyület közötti reakciót végrehajthatjuk katalitikus redukcióval katalizátorként fémet, így platinát, palládiumot és rádiumot vagy valamilyen megfelelő hordozóra lecsapott fémet használunk vagy végrehajthatjuk a reakciót valamilyen fémhidriddel, így lítium-alumíniumhidriddel, lítium-bórhidriddel, lítium-ciano-bórhidriddel, nátrium-bórhidriddel és nátrium-ciano-bórhidriddel is.

A redukciót általában valamilyen szerves oldószerben, pl. metanolban, etanolban, etil-éterben, dioxánban, metilén-kloridban, kloroformban, benzolban, toluolban, dimetil-formamidban, dimetil-acetamidban hajtjuk végre. A reakcióhőmérséklet a redukció végrehajtásának módjától függ. Előnyös a -20 °C-tól 100 °C-ig terjedő hőmérséklet. A reakciót általában atmoszferikus nyomáson hajtjuk végre, de a reakció körülményeitől függően kicsit megemelt vagy csökkentett nyomáson is dolgozhatunk.

A (XV) általános képletű vegyület előállítása, amely a (X) általános képletű vegyület és a (XIV) általános képletű aminosav N-védett származéka közötti kondenzációs reakcióval jön létre, egy közönséges peptidképző reakciója az aminosavaknak. Ezt a reakciót ugyanolyan reakciókörülmények között hajthatjuk végre, mint a (II) és (III) általános képletű vegyületek közötti kondenzációs reakciót. Az így kapott (XV) általános képletű vegyület ciklizációját a (XVI) általános képletű ciklikus vegyületté valamilyen savkatalizátorral végrehajtott ciklizációs reakcióval hajtjuk végre. Katalizátorként pl. szerves szulfonsavat, így paratoluol-szulfonsavat, kámfor-szulfonsavat, vagy metán-szulfonsavat alkalmazhatunk. A reakciót úgy hajtjuk végre, hogy a (XV) általános képletű vegyületet egy oldószerben, így toluolban, benzolban, etil-acetátban vagy 1,2-diklór-etánban 0tól 100 ‘C-ig, előnyösen 30 ’C-tól 80 ‘C-ig terjedő hőmérsékleten hajtjuk végre és megkapjuk a (XVI) általános képletű vegyületet.

A (XVI) általános képletű vegyületnek (XVII) általános képletű vegyületté való redukciója egy kettős kötés redukciója tulajdonképpen és a (XVII) általános képletű vegyületet pl. katalitikus redukcióval katalizátorként valamilyen fémet, pl. platinát, palládiumot vagy Raney-nikkel vagy valamilyen hordozóra lecsapott fémet alkalmazhatunk. A redukciót végrehajthatjuk valamilyen fémhidriddel is, pl. nátrium-borhidriddel vagy nátrium-ciano-borhidriddel. A fenti reakciókat általában valamilyen szerves oldószer jelenlétében, pl. metanolban, etanolban, dioxánban, etil-acetátban hajthatjuk végre. Bár a reakcióhőmérséklet a redukció fajtájától függ, előnyös a -20 ’C-tól kb. 100 ’C-ig tartő reakcióhőmérséklet. Ez a reakció kielégítően folyik normál nyomáson is, de kívánt esetben emelt nyomáson is végrehajthatjuk. Ha Rjelentése benziloxi-karbonil-csoport és a redukciót katalitikusán hajtjuk végre, az R védőcsoport eltávolítását egyidejűleg végrehajthatjuk és egy lépésben megkaphatjuk az (V) általános képletű vegyületet.

(XVII) általános képletű vegyületek védőcsoportjának eltávolítása és a (XIX) általános képletű vegyületek védöcsoportjának eltávolítása és ily módon a (XVII)-ből (V) és (XlX)-ből (III) általános képletű vegyületekké való átalakítás ismert a peptidkémiában az amino védőcsoportok eltávolításakor használt módszerekkel történhet és azon esetben, amikor R benziloxi-karbonil-csoport, a védőcsoportot katalitikus redukcióval távolíthatjuk el katalizátorként valamilyen fémet így platinát, palládiumot vagy rádiumot alkalmazva. Amikor R jelentése terc-butoxi-karbonilcsoport a védőcsoportot könnyedén eltávolíthatjuk valamilyen sav, így trifluor-ecetsav vagy hidrogénklorid segítségével valamilyen szerves oldószerben, így metanolban, etanolban, etil-acetátban vagy dioxánban.

A (V) általános képletű vegyület kondenzációs reakcióját a (XVIII) általános képletű aminosav-származék közötti kondenzációs reakciót, valamint a (III) és (XX) általános képletű vegyületek közötti kondenzációs reakció amino-kötés kialakításával jön létre. Ezeket a reakciókat lényegében ugyanolyan módon hajtjuk végre, mint a (II) és (III) vegyületek közötti kondenzációs reakciót.

Az előbbiekben részletezett reakciókban a vegyületek általában sók formájában vesznek részt. Ilyen sók pl. a szervetlen savas sók, így a hidrobromid, szulfát, nitrát vagy foszfát; szerves savas sók, így acetát, tartarát, citrát, fumarát, maleát, toluolszulfonát vagy metánszulfonát; fém sók, így nátrium-, kálium-, kalciumvagy alumíniumsók, valamint valamilyen bázissal képzett sók, így trietil-aminsók, guanidin-, ammónium-, hidrazin-, kinin- vagy cinkoninsók.

A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek, hidrátjaik és sóik gátolják a fibrinogén, fibronectin, von Willebrand faktor kötődését a vérlemezkék fibrinogén receptorához (glikoprotein Ilb/HIa), valamint gátolják ezek és más adhezív proteinek, így vitronectin, kollagén és laminin kötődését a különböző sejttípusok felületén lévő megfelelő receptorokhoz. Megelőzik a vérlemezke trombózis kialakulását és alkalmazhatók különféle betegségek kezelésében vagy profilaxisában. Ilyen betegségek például a perifériás artériás elzáródás, akut myokardiális infarktus (AMI), mélyvénás trombózis, tüdőembólia, boncolási aneurizma, átmeneti szkémiás attak (TIA), szélhűdés és más elzáró betegségek, labilis angina, disszeminált intravaszkuláris koaguláció (DIC), szepszis, műtéti vagy fertőzéses sokk, operáció- és szülés utáni trauma, érplasztika, szív-tüdő bypass és koronáriás bypass, inkompatibilis vértranszfúzió, placentaleválás, thrombo7

HU 211 141 A9 tikus thrombocitopenikus purpura (TTP), asztma, krónikus vagy akut vesebetegségek, diabetes, gyulladások, arterioszklerosis, hemolitikus urémiás szindróma (HÚS), szimmetrikus perifériás nekrózis, felfekvés és beépített anyagok kilökődése emlősökben, ideértve az embert is stb.

A fentiek mellett a találmány oltalmi körébe tartozó vegyületek a fentieken kívül alkalmazhatók a trombolitikus szerek hatásának fokozására és PTCR (perkután transzluminális koronáriás csatornaképződés) utáni újraelzáródás megelőzésére, PTCA (perkután transzluminális koronáriás érplasztika) utáni újraelzáródás megelőzésére, dialízis következtében fellépő trombocitopénia, valamint neparin kiváltotta thrombocitapénia megelőzésére, és a megsérült véredények és szerves okozta thrombusok kialakulásának megakadályozására. Mindamellett a találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek képesek meggátolni az áttételképződést és antitumor szerként használhatók. Az (I) általános képletű vegyületek gátolják a baktériumok szervezet elleni támadását és így a fertőzés elleni szerként alkalmazhatók. Az (I) általános képletű vegyületek antitrombotikus vagy antikoaguláns szerekkel - mint amilyen a heparin, aszpirin vagy walfarin - együtt is alkalmazhatók. Mindezek mellett az (I) általános képletű vegyületek gátolják a csontfelszívódást és az osteodast metabolizmus rendellenességek, így az osteoporózis profilaxisában és kezelésében.

Az (I) általános képletű vegyületek, hidrátjaik és sóik például beadhatók orálisan tabletták, lakkbevonatú tabletták, cukorbevonatú tabletták, kemény és lágy zselatinkapszulák, oldatok, emulziók vagy szuszpenziók formájában; beadhatók rektálisan, például kúpok vagy spray formájában. A vegyületek beadhatók parenterálisan is, például injektálható oldatok formájában.

A fent felsorolt orálisan beadható tabletta készítmények esetében az (I) általános képletű vegyületeket valamilyen gyógyászatilag inért, szervetlen vagy szerves adalékanyaggal keverhetjük össze. Ilyen adalékanyagok lehetnek például a laktóz, kukoricakeményítő és ennek származékai, talkum, sztearinsav vagy ennek sói, lágy zselatinkapszulák készítésénél alkalmazható adalékanyagok a növényi olajok, viaszok, zsírok, félszilárd és folyékony poliolok.

Oldatok és szirupok esetében alkalmazható adalékanyagok a víz, poliolok, szacharóz, invertcukor és glükóz, injektálható oldatok esetében alkalmazhatók a víz, alkoholok, poliolok, glicerin és növényi olajok. Kúpok esetében használhatunk természetes és keményített olajokat, viaszokat, zsírokat, félfolyékony és folyékony poliolokat. A fenti gyógyszerkészítmények tartalmazhatnak konzerválószereket, szolubilizálószereket, stabilizálószereket, nedvesítőszereket, emulgeálószereket, édesítőszereket, színezőanyagokat, ízesítőanyagokat, az ozmózisnyomás megváltoztatására szolgáló sókat, puffereket, bevonóanyagokat vagy antioxidánsokat is.

Az aktív vegyület dózisa széles határok közt változhat és az egyéni körülmények figyelembevételével meghatározása a szakember feladata. Általában kb. 0,1-20 mg/kg, előnyösen kb. 0,5-4 mg/kg/nap dózis alkalmazható orális beadás esetén. Parenterális beadásnál, főként betegek esetében kb. 0,01-2,0 mg/kg, célszerűen kb. 0,05-0,4 mg.

A találmányt a következő tszt- és előállítási példákkal szemléltetjük közelebbről, anélkül, hogy ezekkel korlátozni szándékoznánk bármi módon a jelen találmányt.

Inhibiciós (gátló) hatás vizsgálata (I) Gátló hatás tengerimalac vérlemezke aggregáció esetében.

A hím tengerimalacból szívcsapolással vett vért 3,15%-os nátrium-citrátba (1 ml nátrium-citrát 9 ml vérhez) gyűjtöttük. Ezt követően a vért szobahőmérsékleten 1000 g-vel 3-5 másodpercig centrifugáltuk így vérlemezkével dúsított plazmát (PRP) kapunk. Ezt a PRP-t 1000 g-vel tovább centrifugáltuk 10 percen át, így a vérlemezke-szegény plazmát (PPP) kaptuk. A vérlemezkék számát egy automatikus vérsejtszámlálóval (Sysmex E2500, Todiyon-densi) mértük. A PRP vérlemezke sűrűséget PPP-vel 400 ΟΟΟ/μΙ-reakció állítottuk be. A vérlemezke aggregációt 8 csatornás aggregométerrel (NBS HEMA TRACER VI NIKO Bioscience Inc.) mértük. A PRP-t (250 μΐ) 37 °C-on 2 percig előinkubáltuk, majd 2 percig inkubáltuk 25 μΐ fiziológiás sóoldattal vagy a különböző koncentrációjú vizsgálandó vegyületekkel, majd ADP-vel stimuláltuk (végső koncentráció: 1 μΜ). A kontroll és a vizsgálandó vegyületek esetében tapasztalt maximális aggregációs fokok összehasonlítása céljából meghatároztuk az inhibiciós fokokat. Az eredmények az 1-3. táblázatban láthatók.

(II) Gátló hatás humán vérlemezke aggregáció esetében

Az önként vállalkozó egészséges férfiakból vénás csapolással vett humán vért 3,8%-os nátrium-citrátba (1 ml 9 ml vérhez) gyűjtöttük. Ezt követően a vért szobahőmérsékleten 1000 g-vel 3-5 másodpercig centrifugáltuk, így vérlemezkével dúsított plazmát (PRP) kaptunk. Ezt a PRP-t 1000 g-vel tovább centrifugáltuk 10 percen át, így vérlemezkeszegény plazmát (PPP) kaptunk. A vérlemezkék számát egy automatikus vérsejtszámlálóval (Sysmex E2500, Todiyon-densi) mértük. A PRP vérlemezke sűrűségét PPP-vel 4 000 ΟΟΟ/μΙ-re állítottuk be. A vérlemezke aggregációt 8 csatornás aggregométerrel (NBS HEMA TRACER V NIKO Bioscience Inc.) mértük. A PRP-t (250 μΙ) 37 °C-on 2 percig előinkubáltuk, majd 2 percig inkubáltuk, majd ADP-vel való stimulálás után 2 percig inkubáltuk 25 μΐ fiziológiás sóoldattal vagy a különböző koncentrációjú vizsgálandó vegyületekkel, majd ADP-vel stimuláltuk (végső koncentráció: 3 μΜ). A kontroll és a vizsgálandó vegyületek esetében tapasztalt maximális aggregációs fokok összehasonlítása céljából meghatároztuk az inhibiciós fokokat. Az eredmények az 1-3. táblázatban láthatók.

HU 211 141 A9

1. táblázat (Γ) általános képletű vegyületek

In vitro vérlemezke aggregáció gátló hatás (IC₅₀: μΜ)

Példa száma	D	R¹ R² 1 1 -N-CH-CO-	X	R³	Z	Tengerimalac	Ember
5	(ν')	Gly	ch₂cooh	H	COOH	3,8	1,1
4	-NH-(CG₂)-	Gly	ch₂cooh	H	COOH	5,0	3,5
35	(ν')	Gly	H	H	COOH	5,2	1,1
32	(ν')	Gly	ch₂ch₂- COOH	H	COOH	3,1	0,96
22	(ν')	Gly	CH₂CONH₂	H	COOH	4,4	0,72
37	(ν')	Phe	H	H	COOH	7,0	0,52
12	(ν')	Sár	ch₂cooh	H	COOH	1,1	0,70

2. táblázat (Γ) általános képletű vegyületek

In vitro vérlemezke aggregáció gátló hatás (IC₅₀: μΜ)

Példa száma	D	R¹ R² 1 1 -N-CH-CO-	X	R³	Z	Tengeri malac	Ember
38	piperidino	Gly	CH₂COOH	H	COOH	9,6	1,6
8	(v)	Gly	ch₂cooh	H	COOH	1,3	0,66
10	(w)	Gly	ch₂cooh	H	COOH	0,34	0,26
16 _	(V)	Gly	CH₂Ph	H	COOH	4,6	0,99

3. táblázat

Példa száma	In vitro vérlemezke aggregáció gátló hatás (IC₅₀: μΜ)
Tengerimalac	Ember
39	0,165	0,11
45	1,6	1,5
46	0,13	0,23
47	2,8	4,2
50	0,345
51	0,37	0,46
54	4,1	0,66
55	0,21	0,094
57	1,75	2,6
59	0,056	0,048
60	0,078	0,093
61	0,16	0,13
63	0,46	0,72
65	4,6
66	0,066	0,052
69	1,5	1,6
71	0,11	0,074
76	0,11	0,15

Példa száma	In vitro vérlemezke aggregáció gátló hatás (IC50: μΜ)
Tengerimalac	Ember
77	2,5	4,7
80	0,12	0,11
81	2,3
84	0,11	0,12
85	4,1	5,6
87	0,15	0,18
88	0,084	0,14
89	0,20	0.38

GPIlb/IIIa-hoz kötött fibrinogén gátlás vizsgálata (1) Humán erithroleukémiás sejtek (a továbbiak50 bán HEL sejtek) kultiválása.

A HEL sejteket (HEL 92.1.7; ATCC szám: TIB180) az ATCC-től (Rockville, MD, USA) szereztük be. A sejteket 40 mM N-2-hidroxi-etiI-piperazin-l-N'-2etánszulfonsavat (a későbbiekben: HEPES) (pH = 7,0),

100pg/ml Kanamycint és 10% FCS-t (GIBCO Laboratories, Grand Island, NY, USA) tartalmazó RPMI táptalajon szaporítottuk. A kultiválást 37 °C-on, 5% CO₂ jelenlétében hajtottuk végre. A kultúrából egymást követő 3-4 napos intervallumokban 4-5-szörös hígítású másodlagos tenyészeteket készítettünk.

HU 211 141 A9 (2) HEL sejtekből származó GPHb/IIla tisztítása

A GPIIb/IIIa tisztítást L. A. Fitzgerald és társai [J. Bioi. Chem. 262, 3936 (1987)] módosított módszerével végeztük szobahőmérsékleten, ha más említés nincs. A kultiváció hetedik napján (lebegő sejtek) a táptalaj 7 literéből a sejteket centrifugálással (1000 g, 10 perc, 4 ’C) elkülönítettük, 20 mM Tris-HCl (pH = 7,5) pufferrel mostuk, ami 1 mM EDTA-t és 150 mM NaCl-t tartalmazott. Ezt követően a sejteket 80 ml szolubilizált pufferben [20 mM Tris-Hcl, 150 mM NaCl, 17c Triton X-100, 1 mM MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 0,1 mM (p-amidino-fenil)-metánszulfonil-fluorid (a későbbiekben APMSF), 10 NMR (CDC1₃): leupeptin, 0,02% NaN₃, pH = 8,4)] szuszpendáltuk.

A sejtszuszpenziót 4 ’C-on finoman kevertük 30 percig a GPIIa/IIIa szolubilizálása céljából, majd 4 ’Con centrifugáltuk (100 000 g, 1 óra) a sejttörmelés eltávolítása céljából, így 60 ml sejt-extrakciós oldatot kaptunk. Ezt a sejt-extrakciós oldatot Heparin-Sepharose CL-6B oszlopon (Pharmacia LKB Biotechnology AB, Uppsala, Sweden, átmérő 1,6x10,5 cm, 20 ml/óra) engedtük ál, a thromba spondin eltávolítása céljából oszlop pufferrel (20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl 0,17c Triton X-100, 1 mM APM SF, 1 NMR (CDC1₃): leupeptin. 0,057c Nan₃, pH = 7,4) átmostuk. Az oszlopon átengedett frakciót ConA-Sepharose oszlopra (Pharmacia LKB, átmérő 1,0x15 cm, 20 ml/óra) töltöttük, amilyen a GPIIb/IIIa adszorbeálódott, ezt aztán 0,5 M metil-a-D-mannopiranozidot tartalmazó oszlop pufferoldattal eluáltuk. Az így kapott eluátumot DEAEToyopearl 650 M oszlopon engedtük át (Tosoh, átmérő 1.6x10,5 cm, 20 ml/óra) ugyanezzel az oszlop pufferei kiegyenlítve, így eltávolítottuk a szennyező proteineket. A kapott frakciót Amicon YM10 membrán alkalmazásával 4 ’C-on koncentráltuk, a koncentrátumot Sephacryl S-300 oszloppal (Pharmacia LKB, átmérő 1,6x95 cm, 30 ml/óra) 2,3 mg tisztított GPIIb/IIIa-t kaptunk.

(3) Humán fibrinogén biotinilezése

A humán fibrinogén biotinilezését I. F. Charo és társai [1 Bioi. Chem. 266, 1415 (1991)] módszerével végeztük. A humán fibrinogént (Kabi Vitrum AB, Stockholm Sweden) PBS-ben feloldottuk 5 mg/ml koncentrációban. Az oldatot 1 éjszakán át 4 ’C-on dializáltuk 1 1 0,1 M NaHCO₃-0,l M NaCl (pH = 8,2) oldattal. Ezután az oldhatatlan anyagokat centrifugálással (100 000 g, 30 perc) eltávolítottuk és az oldatot ugyanezzel a pufferrel hígítottuk 1 mg/ml proteinkoncentrációig. Az így hígított oldathoz poralakú szulfoN-hidroxi-szukcinimido-biotint (Pierce Chemical Co., Rockford, IL, USA) adtunk 0,2 mg/ml végkoncentrációig és finoman kevertük a biotinilezett fibrinogén kialakítása céljából, ezt aztán dializáltuk 50 mM TrisHC1 (pH = 7,4) - 100 mM NaCl - 0,05% NaN, pufferrel. A dializátumot megosztottuk és 4 ’C-on tároltuk.

(4) Inhibiciós vizsgálat GPIlb/llla-hoz kötött fibrinogén esetében.

A kísérletet I. F. Charo és társai (lásd fent) módosított módszere szerint végeztük. A tisztított GPIIb/IIla-t A pufferrel (20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl₂, 0,027c NaN₃, pH = 7,4) hígítottuk 1 J-ig/1 koncentrációig. A hígított oldatot 96 helyes mikrotiter lemezekre helyeztük (Maxi Sorp; Nunc, Denmark) helyenként 100 μΐ szétosztásban, és a lemezeket 4 ’C-on 1 éjszakán át állni hagytuk, ez idő alatt a GPIIb/IIIa adszorbeálódik a mikrolemezeken. A lemezt aspiráltuk, majd 150 μΜ B puffért (35 μg/ml BSA, 50 mM TrisHC1, 100 mM NaCl, 2 mM CaCl₂, 0,027c NaN₃, pH = 7,4) adtunk hozzá és 30 ’C-on, 2 óra hosszat blokkolást hajtottunk végre. A lemezt kétszer mostuk 250-20 μΐ C pufferrel (1 mg/ml BSA, 50 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 2 mM CaCl₂, pH = 7,4). A lemezhez 100 μΐ, biotinilezett fibrinogént és egy antagonistát [1 NMR (CDC1₃): = 330 ng/ml] tartalmazó C puffért adtunk, és a lemezt 30 ’C-on 3 óra hosszat vagy szobahőmérsékleten 1 éjszakán át tároltuk. Ezt követően a lemezt kétszer mostuk 250-250 μΐ C pufferrel, amelyhez 100 μ] anti-biotin lúgos foszfatáz konjugátumot (Sigma Chemical Co., St. Louis, MD, USA; 200-szoros hígítás C puffer-oldattal) adtunk és a reakciót 1 óra hosszat 30 ’C-on hagytuk végbemenni. A lemezt kétszer mostuk 250-250 μΐ C pufferrel, amelyhez 100 μΙ ρ-nitrofenil-foszfát-oldatot (lúgos foszfatáz színkifejlesztő felszerelés; Bio-Rad Laboratories Richmond, CA, USA) adtunk. A reakciót szobahőmérsékleten hagytuk végbemenni, amíg 405 nm-nél az abszorbancia elérte az 1.0-1,2 értéket (1-3. ábra). Ezután 4 N nátrium-hidroxid hozzáadásával leállítottuk a reakciót. A 405 nm-nél észlelt abszorbanciát Titerteck Multiscan MC-vel (Flour Laboratories, Finland) határoztuk meg. Mellékesen megjegyezve a DMSO gátló hatást mutatott ebben a vizsgálatban, úgy találtuk, hogy a DMSO koncentráció legfeljebb 0,17c vagy ez alatti kell legyen.

Az IC₅₀ értéket az 50% abszorbanciát mutató inhibitor koncentráció jelenti: akkor a biotinilezett fibrinogén hozzáadása nélkül mért abszorbancia 0%, a biotinilezett fibrinogén hozzáadásával és gátlószer hozzáadása nélkül mért abszorbancia 100%. Egy előzetes mérést végeztünk 10-szeres hígítású sorozatokkal, majd az IC₅₀ érték környékén 3-szoros hígítású sorozatokkal, a többi értéknél 10-szeres hígítású sorozatokkal hajtottuk végre a kísérleteket. Egy adott hígítású oldatnál a két meghatározás átlagából határoztuk meg az IC₅o értéket. Az eredmények a 4. táblázatban láthatók.

4. táblázat

Példa szerinti vegyületek	GPIIb/lIIa-hoz kötött fibrinogén gátlása
5	20
6	46
8	18
9	73
10	4,8
12	10
16	32

HU 211 141 A9

Példa szerinti vegyületek	GPIIb/IIIa-hoz kötött fibrinogén gátlása
22	23
32	15
37	7,9
38	21
39	1,0
45	8,1
46	2,5
47	18
48	15
50	21
54	6,1
55	0,42
57	20
59	0,49
60	0,91
63	8,9
65	98
66	0,20
69	19
71	0,92
⁷⁶	1,0
77	45,0
80	0.89
81	37,0
84	1,0
85	32,0
87	1,6
88	2,3
89	3,6

A találmány szerinti vegyületek előállítását az alábbi példákkal illusztráljuk anélkül, hogy igényünket ezekre a példákra korlátoznánk.

1. példa

N-(2,2-Dietoxi-etil)-glicin-t-butil-észter g amino-acetaldehid-dietil-acetál, 28 g káliumkarbonát és 100 dimetil-formamid keverékéhez cseppenként 15 g klór-ecetsav terc-butil-észtert adunk szobahőmérsékleten 30 percig tartó keverés közben. Az elegyet 12 óra hosszat keverjük ugyanezen a hőmérsékleten, majd éténél meghígítjuk és vízzel mossuk. Az éteres fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson koncentrálva megkapjuk a nyers terméket. A nyers terméket szilikagélen kromatográfiával tisztítjuk. Eluens (normál hexán:etil-acetát 1:1 arányú elegye), ilyen módon 16,8 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen olajos anyag formájában.

Elemanalízis a C|₂H₂₅NO₄ (247,33) képlet alapján: számított: C58,’l7% H 10,19% N5,66%;

talált: C58,01% H 10,33% N5,46%.

2. példa

N-fN-Benziloxi-karbonil-Cb-t-butil-L-aszpartilj-N(2,2-dietoxi-etil)-glicin-t-butil-észter

6,8 gN-(2,2-Dietoxi-etil)-glicin-t-butil-észter, 8,1 g N-benziloxi-karbonil-L-aszparaginsav-P-t-butil-észter és 50 ml dimetil-formamid keverékéhez 5,5 g dietil-cianofoszfonátot, majd 2,8 g trietil-amint adunk 0 ”C-on 5 perc alatt. Az elegyet 30 percig keverjük ezen a hőmérsékleten, majd a keverést 12 óra hosszat folytatjuk szobahőmérsékleten. Ezt követően a reakcióelegyet etil-acetáttal hígítjuk, majd vízzel mossuk. Az etil-acetátos fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepárolva megkapjuk a nyers terméket. Ezt a nyers terméket szilikagélen oszlopkromatográfiával tisztítjuk, eluens (n-hexán:etilacetát = 4:l arányú elegye), ilyen módon 6,8 g cím szerinti terméket kapunk színtelen olaj formájában.

Forgatás: [a]§: -20,9° (c = 0,89 MeOH).

Elemanalízis a C₂₈H₄₄N₂O₉ (552,66) képlet alapján: számított: C 60,85% H 8,02% N 5,07%;

talált: C 60,59% H 8,25% N4,88%.

3. példa (S)-2-Oxo-piperazin-},3-diecetsav-di-(t-butil-észter)-hidroklorid

500 ml toluolban feloldunk 11 g 2. példa cím szerinti vegyületet és 380 mg p-toluol-szulfonsavat. Az oldatot 1 óra hosszat vízfürdőn 50-on nitrogén átáramoltatás közepette keverjük. A reakcióelegyet ezt követően hagyjuk lehűlni, majd telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk és csökkenteti nyomáson koncentráljuk. A kapott koncentrátumot 300 ml metanolban feloldjuk, amelyhez 1 g 10%-os csontszenes palládiumot és 3,5 ml 4 n sósav-dioxán elegyet adunk. Az így kapott elegyet keverjük erőteljesen 7 óra hosszat hidrogén átáramoltatás közben. Ezt követően a katalizátort eltávolítjuk és az oldatot csökkentett nyomáson koncentrálva 4,8 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen olajos termék formájában. Ezt a terméket éterrel feldolgozva amorf port kapunk.

Forgatás: [α]θ: -11,9° (c = 1,0 MeOH).

Elemanalízis a C₁₆H₂₈NO₅HC1 (364,87) képlet alapján:

számított: C 52,67% H8,01% N 7,68%;

talált: C 52,51% H 8,19% N7,81%.

4. példa (S)-4-Glicil-2-oxo-piperazin-],3-diecetsav-di-(tbutil-észter)-hidmklorid

3,7 g 3. példa cím szerinti vegyület, 3,3 g N-benziloxi-karbonil-glicin és 10 ml dimetil-formamid keverékéhez cseppenként keverés közben 0 °C-on 3,1 g dietildiano-foszfonátot, majd 3,2 g trietil-amint adunk 10 perc alatt. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük ugyanezen a hőmérsékleten, majd a keverést szobahőmérsékleten 3 óra hosszat folytatjuk. Ezt követően a reakcióelegyet jeges vízbe öntjük, amelyet aztán etil-acetáttal extrahálunk. Az extraktumot vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk és koncentráljuk, ily módon megkapjuk a nyers terméket. Ezt a nyers terméket 30 ml metanolban

HU 211 141 A9 feloldjuk. Ehhez 1 g 10%-os csontszenes palládiumot és 1,8 ml 4 n sósav dioxán oldatot adunk. Az elegyet 1 óra hosszat szobahőmérsékleten hidrogénatmoszférában keverjük. Ezt követően a katalizátort eltávolítjuk és a reakcióelegyet csökkentett nyomáson koncentrálva 2,6 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen olajos termék formájában. Ezt a terméket éterrel feldolgozva színtelen port kapunk.

Forgatás: [a]^: +79,7° (c = 1,1 MeOH).

Elemanalízis a C_]gH_3]N₃O₆HCl (421,92) képlet alapján:

számított: C 51,24% H 7,64% N 9,96%;

talált: C 50,99% H 7,64% N9,88%.

5. példa (S)-4-(transz-4-guanidino-metil-ciklohexil-karbonil-glicil)-2-oxo-piperazin-l,3-diecetsav-hidroklorid

285 mg transz-4-guanidino-metil-ciklo-hexán-karbonsav-hidroklorid, 215 N-hidroxi-5-norbornén-2,3dikarboxi-imid és 2 ml dimetil-formamid keverékéhez 310 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk. A keveréket 1 óra hosszat 0 °C-on keverjük, majd a keverést 2 óra hosszat szobahőmérsékleten folytatjuk. Ezt követően az oldhatatlan részeket kiszűrjük, majd a szűrletet lehűtjük jeges fürdőn és 500 mg (S)-4-glicil-2-oxo-pipe10 razin-l,3-diecetsav-di(t-butil-észter)-hidrokloridot, majd 120 mg trietil-amint adunk hozzá. Az elegyet 1 óra hosszat a fenti hőmérsékleten keverjük. Ezt követően csökkentett nyomáson bepároljuk, így nyers terméket kapunk, amelyet 3 ml metilén-kloridban feloldunk. Az oldathoz 3 ml trifluor-ecetsavat adunk 0 °C-on. Az elegyet ugyanezen a hőmérsékleten 1 óra hosszat keverjük, majd a keverést 1 óra hosszat szobahőmérsékleten folytatjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrátumot 10 ml 1 n sósav-dioxán elegyben feloldjuk. Az oldatot 1 óra hosszat hagyjuk állni szobahőmérsékleten, majd csökkentett nyomáson koncentráljuk. Ezt az eljárást ismételve nyers terméket kapunk, amelyet C|_g<)DS oszlopkromatográfiával kezelve (eluens: víz:acetonitril =97:3 arányú elegye) frakciókat nyerünk. A releváns frakciót fagyasztva szárítjuk, így 200 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]p: +65,8° (c =0,25 MeOH).

Elemanalízis a C_]9H₃₀N₆O₇HCl (490,94) képlet alapján:

számított: C 46,48% H 6,36% N 17,12%;

talált: C 46,19% H 6,60% N 17,02%.

Gyakorlatilag az 5. példában ismertetettek szerint eljárva az alábbi táblázatban összefoglalt vegyületeket állíthatjuk elő:

(Γ) általános képletű vegyület

Példa száma	X	Összegképlet	Számított/Talált	[a]g (C, XeOH)
6	-(CH₂)₄-	C,₆H₂6N₆O₇	C 40,79%; H 6.39%; N 17,81%	+83,0“ (0,28)
hcih₂o	(C 40,98%; H 6,23%: N 17,92%)
7	-(CH₂)₃-	c_!5h₂₄n₆o₇	C 40,98%: H 25,87%; N 19,16%	+75,3 (0,32)
HCI	(C 41,24%; H 5.77%; N 19,24%)
8	benzil-3-il	c₁₆h₂₄n₆0₇	C 46,86%; H 5,48%; N 17,18%	+58,5” (0,18)
HCI	(C 47,06%; H 5,20%; N 17,33%)
9	benzil-2-il	C₁₈H₂₄N₆O₇	C 47,01 %; H 5,48%; N 17,21%;	+78,5“
	HCI	(C 47,06%; H 5,20%: N 17,33%)	(0,25)
10	(ü)	C₁₈H₂₂N₆O₇	C 45,72%; H 5,17%; N 17,81%	+78,6 (0,80)
HCI	(C 45,91 %; N 4,92%; N 17,85%)

11. példa (S)-4-( N-metil-glicil )-2-oxo-piperazin -1,3-diecetsav-di-(l-butil-észter)-hidroklorid

1,3 g (S)-2-oxo-piperazin-l,3-diecetsav-di(t-butilészter)-hidroklorid és 1,1 g N-benziloxi-karbonil-szarkocin elegyéből kiindulva lényegében a 4. példában ismertettek szerint eljárva 700 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Elemanalízis a C₁₉H₃₃N₃O₆HC1 (435,95) képlet alapján):

számított: C 52,35% H 7,86% N 9,64%;

talált: C 52,29% H 7,93% N 9,35%.

12. példa (S)-4-{[N-( transz-4-guanidino-metil-ciklohexilkarbonil)]-N-metil-glicil]-2-oxo-piperazin-I,3-diecetsav-hidroklorid

A 500 mg 11. példa cím szerinti vegyületből kiin50 dulva az 5. példában ismertetettek szerint eljárva 220 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]²³: +51,2° (c = 0,25 MeOH). Elemanalízis a C₂₀H₃₂N₆O₇ HCI (504,97) képlet alapján:

számított: C 47,57% H 6,59% N 16,64%;

talált: C 47,50% H 6,88% N 16,48%.

13. példa

N-(N-Benziloxi-karbonil-L-fenilalanil)-N-(2,2-dietoxi-etil)-glicin-t-butil-észter

11,9 g N-(2,2-dietoxi-etil)-glicin-t-butil-észter,

13,3 g N-benziloxi-karbonil-L-fenilalanin és 50 ml dimetil-formamid keverékét 0 °C-ra lehűtjük, majd cseppenként 9,4 g dietil-cianofoszfonátot adunk és 5,9 g trietil-amint adunk hozzá. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük ugyanezen a hőmérsékleten, majd a keverést

HU 211 141 A9 óra hosszat folytatjuk szobahőmérsékleten. Ezt követően a reakcióelegyet etil-acetáttal hígítjuk, majd jeges vízbe öntjük. Az etil-acetátos fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson koncentráljuk, így nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket szilikagéles kromatográfiával tisztítjuk, eluensként n-hexén:etil-acetát = 9:1 arányú elegyét használva. Ilyen módon 20 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen olajos anyag formájában.

Forgatás: [a]²³: -11,1’ (c= 1,1 MeOH).

Elemanalízis a C₂₉H₄₀N₂O₇ (528,64) képlet alapján:

számított: C 65,89% H 7,63% N 5,30%;

talált: C 65,79% H7,61% N5,30%.

14. példa (S)-3-Benzil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-t-butil-észter-hidroklorid

9,0 g N-(N-Benziloxi-karbonil-L-fenilalanil)-N2,2-dietoxi-etil)-glicinből kiindulva a 3. példában ismertetettek szerint eljárva 1,3 g cím szerinti terméket kapunk színtelen prizmák formájában, olvadáspont: 206-208 ’C (etanolból átkristályosítva).

Forgatás: [a]²³: -93,2° (c = 0,95 MeOH).

Elemanalízis a C₁₇H₂₄N₂O₃ (340,85) képlet alapján:

számított: C 59,91% H 7,39% N 8,22%;

talált: C 59,89% H 7,44% N 8,23%.

75. példa (S)-3-BenziI-4-glicil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-tbutil-észté r- h id roklo rid ml acetonitrilben 2,45 g N-benziloxi-karbonilglicint oldunk fel. Az oldathoz 0 °C-on 1,3 g diciklohexil-karbodiimidet adunk. Az elegyet 1 óra hosszat ugyanezen a hőmérsékleten keverjük, majd a keverést 2 óra hosszat folytatjuk szobahőmérsékleten. Ezt követően az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük. A szűrlethez 1,0 g (S)-3-benzil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-t-butilészter-hidrokloridot, 35 mg 4-dimetil-amino-piridint és 1,1 g trietil-amint adunk. Az elegyet 48 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrátumot metilén-kloridban feloldjuk, amelyet 5%-os vizes kálium-hidrogén-szulfáttal, majd 10%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal mossuk. A metilén-kloridos fázist magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd az elegyet csökkentett nyomáson nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket 30 ml metanolban feloldjuk, amelyhez 100 mg 10%-os csontszenes palládiumot és 4 n sósav-dioxán elegyet adunk. A kapott elegyet 1 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük hidrogénáram átáramoltatás közepette. A katalizátort ezt követően kiszűrjük és a szűrletet csökkentett nyomáson bepárolva 400 mg cím szerinti vegyületet kapunk színtelen olaj formájában. Ezt az anyagot éterben feldolgozva amorf port kapunk.

Elemanalízis a C|₉H₂₇N₃O₄HC1 (397,90) képlet alapján:

számított: C 57,35% H 7,09% N 10,56%;

talált: C 57,17% H7,13% N 10,45%.

76. példa (S)-3-Benzil-4-(transz-4-guanidino-metil-ciklohexil-karbonil-glicil)-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-hidmklorid

500 mg (S)-3-Benzil-4-glicil-2-oxo-piperazin-lecetsav-t-butil-észterből kiindulva és az 5. példában ismertetettek szerint eljárva 235 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]²³: +68,7“ (c = 0,35 MeOH).

Elemanalízis a C₂₄H₃₄N₆O₅ HC1 (523,03) képlet alapján:

számított: C 55,11% H 6,74% N 16,07%;

talált: C 55,01% H 6,98% N 15,79%.

77. példa

N-fN-t-Butoxi-karbonil-Cri-benzil-L-aszpartill-N(2,2-dietoxi-etil)-glicin-t-butil-észter

16,6 g N-Dietoxi-etil-glicin-t-butil-észter és 21,7 g N-t-butoxikarbonil-L-aszparaginsav^-benzil-észterből kiindulva és a 2. példában ismertetettek szerint eljárva 22 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen olajos anyag formájában.

Forgatás: [α]²³: -18,9 (c = 0,30 MeOH).

Elemanalízis a C^H^I^Og (552,66) képlet alapján:

számított: C 60,85% H 8,02% N5,07%;

talált: C 60,81% H8,19% N4,95%.

18. példa (S)-4-t-Butoxi-karbonil-l-t-butoxi-karbonil-metil2-oxo-piperazin-3-ecetsav g N-(N-t-Butoxi-karbonil-O⁴-benzil-L-aszpartil)-N-(2,3-dietoxi-etil)-glicin-t-butil-észterből kiindulva és a 3. példában ismertetettek szerint eljárva 7,4 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen olajos anyag képében.

Elemanalízis a C₎₇H_2gN₂O₇ (372,42) képlet alapján:

számított: C 54,83% H 7,58% N 7,52%;

talált: C 54,69% H 7,87% N7,41%.

79. példa (S)-3-Karbamoil-metil-2-oxo-piperazin-l-ecetsavhidroklo rid

3,0 g (S)-4-t-butoxi-karboniI-l-t-butoxi-karbonilmetil-2-oxo-piperazin-3-ecetsav, 1,2 g N-hidroxi-szukcinimid és 500 ml dioxán keverékét 0 ’C-ra lehűtjük, majd 2,5 g diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. Az elegyet 1 óra hosszat ezen a hőmérsékleten keverjük, majd a keverést szobahőmérsékleten még 1 óra hosszat folytatjuk. Az oldhatatlan anyagokat szűréssel eltávolítjuk. 10 ml 25%-os vizes ammónia és 15 ml dioxán keverékéhez cseppenként erőteljes keverés közben az előzőek szerint készített aktív észteroldatot adjuk 5 perc alatt. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson koncentráljuk. A koncentrátumot metilén-kloridban feloldjuk, majd vízzel mossuk. A metilén-kloridos fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson koncentráljuk, így olajos terméket kapunk. Ezt az olajos terméket 30 ml difluor-ecetsav13

HU 211 141 A9 val feloldjuk. Az oldatot 1 óra hosszat hagyjuk állni szobahőmérsékleten, majd szárazra pároljuk. A maradékot 4 n sósav-dioxán elegyben feloldjuk, majd I óra hosszat hagyjuk állni és csökkentett nyomáson bepároljuk. Ezt az eljárást ismételve 1,1 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen olajos termék formájában. Ezt a terméket éterrel feldolgozva amorf port kapunk.

Elemanalízis a C_gH,₃N₃O₄HCl (251,67) képlet alapján:

számított: C 38,18% H5,61% N 16,70%;

talált: C 38,01% H 5,78% N 16,40%.

20. példa (S)-3-Karbamoil-metil-2-oxo-piperazin-1 -ecetsavbenzil-észter-hidroklorid

1,8 g (S)-3-karbamoil-metil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-hidroklorid, 3,0 g nátrium-karbonát, 20 ml dioxán és 20 ml víz keverékéhez erőteljes ekverés közben 2,0 g dit-butil-nitrogénkarbonátot adunk. Az elegyet erőteljesen keverjük 2 óra hosszat 0 °C-on. Ezt követően felére koncentráljuk, koncentrátumot éterrel mossuk és 20 ml 10%os vizes kálium-hidrogén-szulfát-oldatot adunk hozzá, majd extraháljuk. Az extraktumot vizes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson koncentrálva olajos terméket kapunk. Ezt az olajos terméket 10 ml dimetil-formamidban feloldjuk, amelyhez 720 mg kálium-hidrogén-karbonátot és 1,0 g benzil-bromidot adunk. Az elegyet 5 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten. Ezt követően etil-acetáttal hígítjuk, vízzel mossuk és vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson bepárolva nyers terméket kapunk. Ezt a kapott nyers terméket 2 n sósav-etil-acetát elegyben feloldjuk és az oldatot 1 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten. Ezt követően csökkentett nyomáson bepárolva olajos terméket kapunk, amelyet éterrel feldolgozva 1,0 g cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [α]β: -8,4° (c = 0,94 MeOH).

Elemanalízis a C|₅H|₉N₃O₄HC1 (341,79) képlet alapján:

számított: C52,71% H 5,90% N 12,29%;

talált: C 52,55% H 6,02% N 12,06%.

27. példa (S)-3-Karbamoil-metil-4-glicil-2-oxo-piperazin-]ecetsav-benzil-észter-hidroklorid ml acetonitrilben 1,4 g N-t-butoxikarbonil-glicint feloldunk. Az oldathoz 0 °C-on 890 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk, majd az elegyet 1 óra hosszat ugyanezen a hőmérsékleten keverjük és a keverést 3 óra hosszat szobahőmérsékleten folytatjuk. Az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük 900 mg (S)-3-karbamoilmetil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-benzil-észter-hidroklorid, 1,1 g trietil-amint és 30 mg 4-dimetil-amino-piridint oldunk. Az elegyet 12 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrátumot metilén-kloridban feloldjuk, 5%-os vizes kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, majd 10%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. Ily módon olajos terméket kapunk. Az így kapott olajos anyagot 10 ml 2 n sósav-dioxán elegyben feloldjuk, az oldatot 1 óra hosszat szobahőmérsékleten hagyjuk állni. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson koncentráljuk, majd éterrel feldolgozva 450 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Elemanalízis a Ci₇H₂₂N₄O₅HC1 (398,85) képlet alapján:

számított: C 51,19% H5,81% N 14,05%;

talált: C 51,12% H 5,99% N 14,21%.

22. példa (S)-3-Karbamoil-metil-4-(transz-4-guanidino-metil-ciklohexil-karbonil-glicil)-2-oxo-piperazin-]ecetsav-hidroklorid

177 mg transz-4-guanidino-metil-ciklohexán-karbonsav-hidroklorid, 135 mg N-hidroxi-5-norbornén2,3-dikarboimid és 2 ml dimetil-formamid keverékéhez 200 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk. Az elegyet 1 óra hosszat 0 °C-on, majd 2 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, majd az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük. A szűrletet 0 °C-on 300 mg (S)-3-karbamoil-metil-4-glicil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-benzilésztert és 100 mg trietil-amint adunk. Az elegyet 1 óra hosszat ugyanezen a hőmérsékleten majd 1 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk, így nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket 30 ml metanolban feloldjuk, ehhez 100 mg 10%-os csontszenes palládiumot adunk. Az elegyet 1 óra hosszat hidrogén átáramoltatás közepette keverjük. Ezután a katalizátort kiszűrjük és á szürletet csökkentett nyomáson koncentrálva nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket C_)gODS oszlopkromatográfiával kezeljük víz-acetonitril 97:3 arányú elegyét használva eluensként. A releváns frakciókat egyesítjük és fagyasztva szárítjuk. Ilyen módon 180 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [α]ρ: +78,6° (c = 0,25 MeOH).

Elemanalízis a C_I9H₃|N₇O₆H₂O (507,97) képlet alapján:

számított: C 44,93% H 6,75% N 19,30%;

talált: C 44,79% H 7,04% N 19,55%.

23. példa (S)-3-benziloxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazin-lecetsav-benzil-észter-hidroklorid

8,6 g (S)-4-t-butoxi-karbonil-l-t-butoxi-karbonilmetil-2-oxo-piperazin-3-ecetsav, 2,5 g benzil-alkohol, 50 mg 4-dimetil-amino-piridin és 30 ml metilén-klorid keverékéhez 0 C-on 6,2 g diciklohexil-karbodiimidet adunk. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük, majd az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük. A szűrlethez 30 ml trifluor-ecetsavat adunk és az elegyet 1 óra hosszat hagyjuk állni. Majd csökkentett nyomáson bepároljuk a koncentrátumot, 4 n sósav-etil-acetát-oldatban feloldjuk és az oldatot 30 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd szárazra pároljuk. Ezt az eljárást ismételve nyers terméket kapunk, amelyet éterrel feldolgozva

3.7 g cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

HU 211 141 A9

Elemanalízis a C_]5H₁₈N₂0jHC1 (342,78) képlet alapján:

számított: C 52,56% H 5,59% N8,17%;

talált: C 52,37% H 5,70% N 8,00%.

24. példa (S)-J -Karbamoil-metil-2-oxo-piperazin-3-ecetsavbenzil-észler-hidroklorid

7,5 g (S)-3-benziloxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-hidroklorid és 4,2 g nátrium-hidrogénkarbonátot 50 ml dioxán és 50 ml víz keverékében feloldunk. Az oldathoz 0 ’C-on 5,5 g di-t-butil-hidrogénkarbonátot adunk és az elegyet erőteljesen 1 óra hoszszat keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet eredeti térfogatának felére koncentráljuk, éterrel mossuk, majd 10%-os vizes káliumhidrogén-szulfát-oldattal mossuk és metilén-kloriddal extraháljuk. Az extraktumot vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd bepárolva nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket 50 ml dioxánban feloldjuk. Az oldathoz 2,6 g N-hidroxi-szukcinimidet, majd 5,2 g diciklohexil-karbodiimidet adunk. Az elegyet 1 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, az oldhatatlan anyagokat kiszűijük. A szűrlethez 10 ml 25%-os vizes ammóniát adunk és erőteljesen keverjük 1 óra hosszat. Ezt követően a reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrátumot metilén-kloridban feloldjuk és az oldatot vízzel mossuk. A metilén-kloridos fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson bekoncentrálva olajos terméket kapunk.

Ezt az olajos terméket 2 n sósav-dioxán elegyben feloldjuk és az oldatot 1 óra hosszat keverjük. Majd szárazra pároljuk, így egy nyers terméket kapunk, amelyet etanolból átkristályosítva 2,0 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen prizmák formájában. Olvadáspont: 201-202 ’C.

Forgatás: [a]g: -16,8’ (c = 1,8 MeOH).

Elemanalízis a C|₅H₁₉N₃O₄H₂O (359,81) képlet alapján:

számított: C 50,07% H6,16% N 11,68%;

talált: C 50,33% H6,16% N 11,39%.

25. példa (S)-l-Karbamoil-metil-4-glicil-2-Qxo-piperazin-3ecetsav-benzil-észter-hidroklorid

900 mg (S)-l-karbamoil-metil-2-oxo-piperazin-3ecetsav-benzil-észter-hidrokloridból kiindulva és a 21. példában ismertetettek szerint eljárva 520 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Elemanalízis a C_I7H₂₂N₄O₅HC1 (398,85) képlet alapján:

számított: C 51,19% H 5,81 % N 14,05%;

talált: C 51,07% H 6,03% N 14,05%.

26. példa (S)-]-Karbamoil-metil-4-(transz-4-guanidino-metil-ciklohexi!-karbonil-glicil)-2-oxo-piperazin-3ecetsav-hidroklorid

500 mg (S)-l-Karbamoil-metil-4-glicil-2-oxo-piperazin-3-ecetsav-benzil-észter-hidrokloridból kiindulva és a 22. példa szerint eljárva 210 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]g: +83,1’ (c = 0,28 MeOH).

Elemanalízis a C_I9H_3IN₇O₆HCI-2H₂O (498,97) képlet alapján:

számított: C 45,74% H 6,67% N 19,65%;

talált: C 45,43% H 6,45% N 19,35%.

27. példa

N-( 2,2-Dietoxi-etil )-glicin-benzil-észter g amino-acetaldehid-dietil-acetát, 14 g káliumkarbonát és 50 ml dimetil-formamid keverékéhez cseppenként keverés közben szobahőmérsékleten 13,8 g klór-ecetsav-benzil-észtert adunk 30 perc alatt. Az elegyet 12 óra hosszat keveijük, majd éterrel hígítjuk, vízzel mossuk és vízmentes magnézium-szulfát felett való szárítás után csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrátumot szilikagélen kromatográfiával tisztítjuk eluensként n-hexán:etil-acetát 3:2 arányú elegyét alkalmazva. Ilyen módon 12,3 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen olajos termék formájában.

Elemanalízis a C₎₅H₂₃NO₄ (281,35) képlet alapján: számított: C 64,04% H 8,24% N 4,98%;

talált: C 64,01% H 8,33% N5,17%.

28. példa

N-(N-t-butoxi-karbonil-Oⁱ-benzil-L-glutamil)-N(2,2-dietoxi-etil)-glicin-benzil-észter

7,0 g N-(2,2-dietoxi-etil)-glicin-benzil-észterből és t-butoxi-karbonil-L-glutaminsav-gamma-benzil-észter bői kiindulva a 2. példában ismertetettek szerint eljárva

5,5 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen olajos termék formájában.

Forgatás: [a]²³: -19,2’ (c = 0,60 MeOH).

Elemanalízis a C₃₂H₄₄N₂O₉ (600,71) képlet alapján:

számított: C 63,98% H 7,39% N 4,66%;

talált: C 64,12% H 7,50% N4,38%.

29. példa (S)-4-t-Butoxi-karbonil-1 -karboxi-metil-2-oxo-piperazin-3 -propionsav

5,5 g N-(N-t-butoxi-karbonil-0⁵-benzil-L-glutamil)-N-(2,2-dietoxi-etil)-glicin-benzil-észterból kiindulva és a 3. példában ismertetettek szerint eljárva megkapjuk a cím szerinti vegyületet színtelen olajos termék formájában.

Elemanalízis a C₁₄H₂₂N₂O₇ (330,34) képlet alapján:

számított: C 50,90% H6,71% N 8,48%;

talált: C 50,67% H 6,72% N 8,53%.

30. példa (S)-]-Benziloxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazin-3propionsav-benzil-észter-hidroklorid

3,0 g (S)-4-t-butoxi-karbonil-l-karboxi-metil-2oxo-piperazin-3-propionsav, 3,4 g benzil-bromid, 3,0 g kálium-hidrogén-karbonát és 15 ml dimetil-formamid keverékét 5 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten. Ezt követően a reakcióelegyet jeges vízbe öntjük, ame15

HU 211 141 A9 lyet ezután etil-acetáttal extrahálunk. Az extraktumot vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson bepárolva nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket 2 n sósav-etil-acetát elegygyel feloldjuk. Az oldatot 1 óra hosszat állni hagyjuk szobahőmérsékleten. A reakcióelegyet szárazra pároljuk, a maradékot éterrel feldolgozva 2,9 g cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [cc]g: -15,0’ (c = 0,77 MeOH).

Elemanalízis a C₂₃H₂₆N₂O₅HC1 (446,93) képlet alapján:

számított: C 61,81% H 6,09% N6,27%;

talált: C 61,72% H6,35% N6,51%.

31. példa (S)-l -Benziloxi-karbonil-metil-4-glicil-2-oxo-piperazin-3-benzil-észter-hidroklorid

2,7 g (S)-l-Benziloxi-karbonil-2-oxo-piperazin-3propionsav-benzil-észter-hidrokloridból kiindulva a

21. példában ismertetettek szerint eljárva 490 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Elemanalízis a C₂5H₂₉N₃O₆HCI (503,98) képlet alapján:

számított: C 59,98% H 6,00% N 8,34%;

talált: C 59,46% H 6,23% N 8,33%.

32. példa (S)-l-Karboxil-inetil-4-(transz-4-guanidino-metilciklohexil-karbonil-glicil)-2-oxo-piperazin-3-propionsav-hidroklorid

490 mg (S)-l-Benziloxi-karbonil-metil-4-glicil-2oxo-piperazin-3-benzil-észter-hidrokloridból kiindulva és a 22. példában ismertettek szerint eljárva 220 mg cím szerinti vegyületet kapuk amorf por formájában.

Forgatás: [a]$: +50,5° (c =0,25 MeOH).

Elemanalízis a C₂oH₃₂N₆0₇ HCl 5/2H₂O (550,01) képlet alapján:

számított: C 43,68% H 6,96% N 15,18%;

talált: C 43,81% H 6,95% N 15,37%.

33. példa

2-Oxi-piperazin-l-ecetsav-benzil-észter-hidroklorid

100 ml víz és 100 ml dioxán keverékében 13,7 g

2-oxo-piperazin-hidrokloridot és 16,8 g nátrium-hidrogén-karbonátot feloldunk. Az oldathoz 22,0 g di-t-butil-hidrogénkarbonátot adunk és az elegyet erőteljesen keverjük 3 óra hosszat 0 ’C-on. A reakcióelegyet ezt követően eredeti térfogatának felére koncentráljuk, majd metilén-kloriddal extraháljuk. Az extraktumot vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson bepárolva egy nyers terméket kapunk. A nyers terméket 50 ml acetonitrilben feloldjuk, ezt követően 18,5 g klór-ecetsav-benzil-észtert és 16,0 g cézium-fluoridot adunk. Az elegyet 2 óra hoszszat 50 °C-on keverjük, majd hagyjuk állni és lehűlni. A reakcióelegyet ezt követően szárazra pároljuk és a maradékot metilén-kloriddal feloldjuk, majd vízzel mossuk. A metilén-kloridos fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson bepárolva nyers terméket kapunk. A nyers terméket 2 n sósav-dioxán oldatban feloldjuk és az oldatot 2 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A keletkező kristályos csapadékot szűréssel elkülönítjük és etanolból átkristályosítva 9,9 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen prizmák formájában. Olvadáspont: 165’C.

Elemanalízis a C₁₃Hi₆N₂O₃ HCI (284,74) képlet alapján:

számított: C 54,84% H 6,02% N 9,84%;

talált: C 54,97% H5,81% N 9,88%.

34. példa

4-Glicil-2-oxo-piperazin-1 -ecetsav-benzil-észterhidroklorid g 2-Oxo-piperazin-l-ecetsav-benzil-észterből kiindulva és a 21. példa szerint eljárva 1,2 g cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Elemanalízis a Ci5H_l8N₃O₄HCl (341,79) képlet alapján:

számított: C 52,71% H 5,90% N 12,29%;

talált: C 52,50% H6,ll% N 12,58%.

35. példa

4-(transz-4-Guanidino-metil-ciklohexil-karbonilglicil)-2-oxo-piperazin-J-ecetsav-hidroklorid

450 mg 4-Glicil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-benzilészter-hidrokloridból kiindulva és a 22. példa szerint eljárva 190 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Elemanalízis a C₎₇H2₈N₆O5 ^I/₂H₂O (441,91) képlet alapján:

számított: C 46,21% H 6,84% N 19,02%;

talált: C 46,41% H7,19% N 18,79%.

36. példa

4-L-Fenil-alanil-2-oxo-piperazin-J-ecetsav-benzilészter-hidroklorid g 2-Oxo-piperazin-l-ecetsav-benzil-észter-hidrokloridból és 5,6 g N-t-butoxi-karbonil-L-fenil-alaninból kiindulva és a 21. példa szerint eljárva 1,5 g cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Elemanalízis a C₂₂H₂₅N₃O₄ HC1 (431,92) képlet alapján:

számított: C 61,18% H 6,07% N 9,73%;

talált: C 60,90% H 6,27% N 9,70%.

37. példa

4-(transz-4-Guanidino-metil-ciklohexil-karbonil-Lfenil-alanil)-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-hidroklorid 400 mg 4-L-FeniI-alanil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-benzil-észter-hidrokloridból kiindulva és a 22. példa szerint eljárva 97 g cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [oe]§: +3,3° (c = 0,25 MeOH).

Elemanalízis a C₂₄H₃₄N₆O₅ HCl-3/2H₂O (550,05) képlet alapján:

számított: C 52,41% H 6,96% N 15,18%;

talált: C 52,64% H 7,20% N 15,27%.

HU 211 141 A9

38. példa (S)-4-( ]-Amidino-piperidin-4-il-karbonil-glicil)-2oxo-piperazin-l,3-diecetsav-hidroklorid

Az 5. példában ismertetettek szerint eljárva (S)-4glicil-2-oxo-piperazin-1,3-diecetsav-di-t-butilészterből kiindulva azt N-amidino-piperidin-4-karbonsav-hidrokloriddal kondenzáltatva amorf port kapunk.

Elemanalízis a C₁₇H₂₆N₆O₇HC1 (462,89) képlet alapján;

számított; C 44,11% H 5,88% N 18,16%;

talált: C 43,84% H6,02% N 18,10%.

39. példa (S)-4-(4-Amidino-benzoil-glicil)-2-oxo-piperazin] ,3-diecetsav

320 mg 4-amidino-benzoesav-hidroklorid, 286 mg N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximid és 5 ml dimetil-formamid keverékéhez 412 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk. Az elegyet 1 órán keresztül 0 °C-on, majd 2 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, majd az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük, a szűrletet jéggel lehűtjük és 500 mg (S)-4-glicil-2-oxo-piperazin-l,3diecetsav-di(t-butil-észter)-hidrokloridot, majd 150 mg trietil-amint adunk hozzá. Az elegyet 1 óra hosszat ugyanezen a hőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet ezután csökkentett nyomáson bepárolva olajos terméket kapunk, amelyet 5 ml metilén-kloridban feloldunk. Az oldathoz 5 ml trifluor-ecetsavat adunk 0 °C-on és szobahőmérsékletre felmelegítjük, majd 1 óra hosszat keverjük. A reakcióelegyet koncentrálva nyers terméket kapunk, amelyet hidrokloridsóvá alakítunk 1 n sósavval, majd Cig-ODS oszlopon (víz:acetonitril = 98:2 arányú elegyét használva eluensként) tisztítunk. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. Ilyen módon 200 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [α]β: +83,0° (c = 0,995 H₂O).

Elemanalízis a Ci_gH₂|N₅O₆ HCl 2H₂O (462,89) képlet alapján:

számított: C 43,95% H 5,33% N 14,24%;

talált: C 44,26% H 5,37% N 13,90%.

ml vízben 3,9 g fentiek szerint kapott hidrokloridsót feloldunk. Az oldatot Amberlite XAD-2 oszlopkromatográfiával kezeljük, eluens: víz—> 10%-os acetonitril). A célfrakciót fagyasztva szárítva kapjuk az (S)-4-(4-amidino-benzoil-glicil)-2-oxo-piperazin-1,3diecetsavat színtelen por formájában. Az így kapott 1,13 g terméket 10 ml vízben feloldjuk, ehhez 30 ml etanolt adunk és az elegyet állni hagyjuk. A keletkezett csapadékot szűréssel elkülönítjük, így 0,46 g (S)-4-(4amidino-benzoil-glicil)-2-oxo-piperazin-1,3-ecetsavat kapunk színtelen kristályos anyag formájában. Olvadáspont: 254-258 °C (bomlás).

Forgatás: [a]§: +90,1° (c = 0,995 MeOH).

Elemanalízis a C|₈H_2]N₅O₇ ^I/₂H₂O képlet alapján: számított: C 50,47% H5,18% N 16,35%;

talált: C50,ll% H5,19% N 16,13%.

(XXIX) általános képletű vegyületek

Példa száma	RCO-	Összegképlet	Talál t/Számított	[a]²³ (C, H₂O)
40	(5)	C₁₆H₂₇N₇O₇HC1	C 41,01%; H 6,30%; N 20,93%	+61,0° (0,1)
(C 41,25%; H 6,06%; N 21,04%)
41	(6)	c₁₈h₂₂n₆o₂hci	C 45,99%; H 5,13%; N 17,65%	+80,4° (0,2)
(C 45,91%; H 4,92%; N 17,85)
42	(7)	C₂₀H₂₆N₆O₇ HC1 H₂O	C 46,19%; H 5,88%; N 16,07%	+95,6° (0,15)
(C 46,47%; H 5,65%; N 16,26%)
43	(8)	C₁₅H\|₉N₇O₇S HC1	C 37,56%; H 4,48%; N 20,24%	+66,4° (0,2)
(C 37,70%; H 4,22%; N 20,52%)
44	(9)	C_]8H₂₁N₅O₇HC1	C 47,19%; H 1,86%; N 15,25%	+73,7° (0,15)
(C 47,43%; H 4,86%; N 15,36%)
45	(10)	C₁₉H₂₉N₅O₇ HC1 H₂ö	C 46,47%; H 5,39%; N 14,08%	+92,6° (0,3)
(C 46,77%; H 5,37%; N 14,35%)

46. példa (S)-4-[4-(2-Amino-etil)-benzoil-glicil]-2-oxo-piperazin-l,3-di(ecetsav-trifluoracetát) ml dimetil-formamidban feloldunk 292 mg 4(2-t-butoxi-karbonil-amino-etil)-benzoesavat és 500 mg 4. példában kapott (S)-4-glicil-2-oxo-piperazin-1,3-diecetsav-di(t-butil-észter)-hidrokloridot. Az oldatot jégen lehűtjük és cseppenként 330 mg dietilcianofoszfanátol, majd 303 mg trietil-amint adunk hozzá. Az elegyet 2 óra hosszat keverjük, majd etil55 acetáttal hígítjuk és jeges vízre öntjük. A szerves fázist 5%-os vizes kálium-hidrogénszulfát-oldattal és nátrium-hidrogénkarbonát telített vizes oldatával mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. Akoncentrátumot 5 ml metilén-kloridban oldjuk, majd cseppenként 5 ml trifluor-ecetsavat adunk hozzá 0 °C-on. Az elegyet szobahőmérsékletre melegítjük és 1 óra hosszat keverjük. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson koncentrálva nyers terméket kapunk,

HU 211 141 A9 amelyet C_lg-ODS oszlopkromatografálva tisztítunk eluensként víz:acetonitril = 97:3 arányú elegyét alkalmazva. Az eluátumot fagyasztva szárítjuk. Ilyen módon 350 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában:

Forgatás: [a]^: +88,7’ (c = 0,2 MeOH).

Elemanalízis a Ci₉H₂₄N₄O₇ CF₃CO₂H képlet alapján:

számított: C 47,19% H4,71% N 10,48%;

talált: C 47,01% H4,99% N 10,45%.

A 46. példában ismertetettek szerint eljárva a következő táblázat szerinti vegyületeket állítjuk elő:

(XXX) általános képletű vegyületek

Példa száma	RCO-	Összegképlet	Talál t/Számított	[ot]²⁰ (C, H₂O)
47	H₂NCH₂J^/-CO-	C_IgH₂₂N₄O₇	C 45,95%; H 4,63%; N 10,49%	+90,4’
CF₃CO₂H	(C 46,16%; H 4,45%; N 10,77)	(0,2)
48	H₂N-(CH₂)₃^yCO-	QofLóNíOy	C 51,11%; H 5,57%; N 12,08%	+99,9’
HCl	(C 51,01%; H 5,78%; N 11,90%)	(0,2)

49. példa

4-(N-Benziloxi-karbonil-L-prolil)-2-oxo-piperazin1.3- diecetsav-dit-butilészter) ml dimetil-formamidban feloldunk 1,25 g benzil oxi-karbonil-L-prolint. Az oldatot lehűtjük -10 ’C-ra, majd 810 mg foszgén-iminium-kloridot adunk hozzá és az elegyet 2 óra hosszat keverjük. Ehhez az elegyhez cseppenként 5 ml dimetil-formamidot adunk, amely 1,8 g 3. példában ismertetettek szerint előállított (S)-2oxo-piperazin-1,3-diecetsav-di-t-butil-észtert tartalmaz. Ezt követően az elegyhez 2 ml trietil-amint adunk. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük. Ezután a reakcióelegyet etil-acetáttal hígítjuk és jeges vízre öntjük. A szerves fázist 5%-os kálium-hidrogén-szulfáttal és nátrium-hidrogén-foszfát telített vizes oldatával mossuk. Az extraktumot vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepárolva egy nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket szilikagéles kromatográfiával tisztítva, eluens etil-acetát, 1,0 g cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [ajjg³: +41,0° (c = 1,0 MeOH).

Elemanalízis a C₂₉H_4lN₃O_g képlet alapján: számított: C 62,24% ' H 7,38% N 7,51%;

talált: C 62,01% H 7,59% N 7,50%.

50. példa

4-(4-Guanidino-benzoil-prolil)-2-oxo-piperazin1.3- diecetsav-hidroklorid

560 mg 4-(N-benziloxi-karbonil)-L-prolil-2-oxopiperazin-l,3-diecetsav-di(t-butil-észter) és 100 mg 10%-os csontszenes palládiumot tartalmazó 10 ml metanol keverékét 1 óra hosszat szobahőmérsékleten hidrogénáramban keverünk. A katalizátort ezt követően kiszűrjük és a szűrletet koncentráljuk. A kapott olajos terméket 2 ml dimetil-formamidban feloldjuk. Az oldathoz 216 mg 4-guanidino-benzoesav-hidrokloridot, 180 mg N-hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximidet, majd 206 mg diciklohexil-carbodiímidet adunk. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük, az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük és a szűrletet bepárolva egy olajos termé25 ket kapunk. Ezt az olajos terméket 10 ml trifluor-ecetsavban feloldjuk és az oldatot 1 óra hosszat hagyjuk állni szobahőmérsékleten. Ezt követően koncentráljuk, így egy nyers terméket kapunk, amelyet hidrokloriddá alakítunk 1 n sósavval. A hidrokloridot C|_g-ODS oszloppal kezeljük (eluens víz:acetonitril 95:5 arányú elegye). Az eluátumot liofilizáljuk, így 210 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]^: +24,6° (c = 0,2 H₂O).

Elemanalízis a C₂₁H₂6N₆O₇HC1 képlet alapján:

számított: C 49,37% H 5,33% N 16,45%;

talált: C 49,35% H 5,29% N 16,54%.

51. példa

4-(4-Guanidino-benzoil-szarkoziI)-2-oxo-piperazin-l ,3-diecetsav-hidroklorid 5 ml dimetil-formamidhoz, amely all. példa szerint előállított 800 mg 4-szarkozil-2-oxo-piperazin-l,3diecetsav-di(t-butil-észter)-t, amely 300 mg trietilamint tartalmaz, cseppenként 0 ’C-on 5 perc alatt 1 ml dimetil-formamidot adunk, amely 400 mg 4-guanidino-benzoil-klorid-hidrokloridot tartalmaz. A reakció elegyet csökkentett nyomáson koncentrálva egy olajos terméket kapunk. Az olajos terméket 5 ml trifluor-ecetsavban feloldjuk és 1 óra hosszat állni hagyjuk. Ezt a reakcióelegyet csökkentett nyomáson koncentrálva nyers terméket kapunk, amelyet hidrokloridsóvá alakítunk 1 n sósavval, majd a hidrokloridot C_]g-ODS oszloppal kezeljük, eluens víz:acetonitril = 97:3 arányú elegye). Az eluátumot liofilizáljuk, így 250 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [ajjj: +61,5’ (c = 0,3 H₂O).

Elemanalízis a C₁₉H₂₄N₆O₇HC1 képlet alapján:

számított: C 47,06% H 5,20% N 17,33%;

talált: C 47,29% H 5,25% N 17,09%.

52. példa

N-(2,2-Dietoxi-etil)-L-fenil-alanin-t-butil-észter 2,58 g L-fenil-alanin-t-butil-észter-hidroklorid,

2,76 g kálium-karbonát, 0,1 g nátrium-jodid, 2,2 g 21

HU 211 141 A9 bróm-l,l-dietoxi-etán és 30 ml N,N-dimetil-formamid keverékét 24 óra hosszat keverjük 100 ’C-on. A reakcióelegyet ezután jeges vízbe öntjük, amelyet hexánnal extrahálunk. A szerves fázist vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrátumot szilikagéles oszlopkromatográfiával tisztítjuk (eluens etil-acetát:hexán 1:4—>1:2 arányú elegye). Ilyen módon 2,2 g cím szerinti vegyületet kapunk világossárga olajos termék formájában.

Forgatás: [oc]g: +10,0’ (c = 1,045 MeOH).

53. példa (5.5) -2-[ 3-t-Butoxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazinl-il]-2-benzil-ecetsav-t-butil-észter-oxalát

Az 52. példa szerint előállított N-(2,2-dietoxi-etil)L-fenil-alanin-t-butil-észtert a 2. példában ismertetett módon N-benziloxi-karbonil-L-aszparaginsav-t-butil észterrel kondenzáljuk. A kondenzátumot gyűrűzárási reakcióba visszük, majd redukáljuk a 3. példában leírt módon, így megkapjuk az oxalátot. Az oxalátot etilacetátból átkristályosítva megkapjuk a cím szerinti vegyületet színtelen kristályok formájában. Olvadáspont: 180-181 ’C (bomlás).

Forgatás: [α]²β³: -68,3’ (c = 0,205 MeOH).

Elemanalízis a C₂₂H₃₆N₂O₉ (528,64) képlet alapján:

számított: C 59,04% H7,13% N5,51%;

talált: C 58,93% H 7,08% N5,51%.

54. példa (5.5) -2-[4-(4-Amidino-benzoil-glicil)-3-karboximetil-2-oxo-piperaztn-l-il]-2-benzil-ecetsav-hidroklorid

420 mg benziloxi-karbonil-glicint tartalmazó 5 ml dimetil-formamidhoz szobahőmérsékleten 210 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük, majd az oldhatatlan anyagokat kiszűrjük. A szűrlethez 420 mg, az 53. példa szerint előállított (S,S)-2-[3-t-butoxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazin- l-il]-2-benzil-ecetsav-t-butil-észtcr-oxalátot és 500 mg trietil-amint adunk. Az elegyet 3 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten, majd etil-acetáttal hígítjuk és 5%-os vizes kálium-hidrogén-szulfát oldattal, majd 10%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk és vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, végül csökkentett nyomáson bepárolva olajos terméket kapunk. Ezt az olajos terméket 10 ml metanolban feloldjuk, ehhez 10%-os csontszenes palládiumot adunk. Az elegyet 1 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük hidrogénáramban. A katalizátort ezt követően kiszűrjük, majd a szűrletet koncentrálva egy olajos terméket kapunk. Az olajos terméket és 200 mg amidino-benzoesav-hidrokloridot a 30. példában leírtak szerint feldolgozva 100 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]g³: -30,9° (c = 0,2 H₂O).

Elemanalízis a C₂5H₂₇N₅O₇ HCI képlet alapján: számított: C 55,00% ’ H5,17% N 12,83%;

talált: C 54,72% H 5,47% N 12,86%.

55. példa

4-(4-Amidino-benzoil-glicil)-2-oxo-piperazin-Jecetsav

200 mg 4-Amidino-benzoesav-hidroklorid és 340 mg a 34. példa szerint előállított 4-glicil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-benzil-észterből kiindulva a 22. példa szerint eljárva 150 mg cím szerinti vegyületet kapunk színtelen prizmák formájában. Olvadáspont: 255 ’C (bomlás).

Elemanalízis a C]₆Hi₉N₅O₅-2H₂O képlet alapján: számított: C 49,48% H5,71% N 18,03%;

talált: C 49,57% H5,51% N 17,78%.

56. példa (S)-4-Glicil-]-metoxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazin-3-t-butil-észter-hidroklorid

4,1 g N-(2,2-dietoxi-etil)-glicil-metilészter és 6,4 g

N-benziloxi-karbonil-L-aszparaginsav^-t-butil-észter keverékéből a 2., 3. és 4. példa szerint eljárva 2,9 g cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [cx]g: +89,7’ (c = 0,2 MeOH).

Elemanalízis aC₁₅H₂₅N₃O₆ HCl képlet alapján: számított: C47?73%' H 6,90% NI 1,06%;

talált: C 47,45% H7,13% N 10,88%.

57. példa (S)-4-(4-Amidino-benzoil-glicil)-l-metoxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazin-3-ecetsav-hidroklorid 380 mg az 56. példa szerint előállított (S)-4-glicil3-metoxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazin-3-ecetsav-tbutil-észter és 200 mg 4-amidino-benzoesav keverékéből kiindulva a 39. példa szerintiek szerint eljárva 210 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]g: +91,4’ (c = 0,2 MeOH).

Elemanalízis a C₁₉H₂₃N₃O₇ HCl '/₂H₂Oképlet alapján:

számított: C 47,65% H 5,26% N 14,62%;

talált: C 47,82% H 5,32% N 14,53%.

58. példa (S)-4-(N-Benziloxi-karbonil-glicil)-3-metoxikarbonilmetil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-t-butil-észter 30 ml 1,9 g (2,2-dietoxi-etil)-glicin-t-butil-észter és

2,2 g N-benziloxi-karbonil-L-aszparaginsav-3-metilésztert tartalmazó metilén-kloridhoz szobahőmérsékleten 1,9 g l-etil-3-(3-dimetilamino-propil)-karbodiimid-hidrokloridot adunk. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük, majd 5%-os vizes kálium-hidrogén-szulfátoldattal, majd 10%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk és vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, végül csökkentett nyomáson koncentráljuk. A kapott olajos terméket 200 ml toluolban feloldjuk, ehhez 190 mg p-toluol-szulfonsavat adunk. Az elegyet 1 óra hosszat 50 ’C-on keverjük, majd telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson koncentráljuk. A kapott olajos terméket 30 ml dimetil-formamidban oldjuk. Az oldathoz 1,6 g benziloxi-karbonil-glicint, majd 1,9 g l-(3-dimetilami19

HU 211 141 A9 no-propil)-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot adunk. Az elegyet 3 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten, majd 5%-os vizes kálium-hidrogén-szulfát-oldattal és 10%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk, végül vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepárolva nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket szilikagéles kromatográfiával tisztítjuk, eluensként etil-acetátot alkalmazva. Ilyen módon 2,4 g cím szerinti vegyületet színtelen por formájában.

Forgatás: [a]§: +75,6° (c = 1,0 MeOH).

59. példa (S)-4-(4-Amidino-benzoil-glicil)-3-metoxikarbonilmetil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-hidrokloríd 10 ml metanolban 480 mg az 58. példában leírtak szerint (S)-4-(N-benziloxi-karbonil-glicil)-3-metoxikarbonil-metil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-t-butil-észtert feloldunk. Az oldathoz 100 mg 10%-os csontszenes palládiumot adunk és az elegyet 1 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten hidrogénáramban. Ezt követően a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet koncentrálva olajos terméket kapunk, amelyet 5 ml dimetil-formamidban feloldunk. Az oldathoz 200 mg 4-amidino-benzoesavhidrokloridot, majd 200 mg [l-(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimid-hidrokloridot adunk. Az elegyet 1 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, majd etilacetáttal hígítjuk 5%-os vizes kálium-hidrogén-szulfátoldattal. és 10%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonátoldattal mossuk, végül vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepárolva egy olajos terméket kapunk. Ezt az olajos terméket 5 ml metilén-kloridban feloldjuk. Az oldathoz 5 ml trifluorecetsavat adunk és az elegyet 1 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet koncentrálva egy nyers terméket kapunk, amelyet hidrokloridjává alakítunk 1 n sósavval, majd C_ig-ODS oszloppal tisztítva 250 mg cím szerinti vegyületet kapunk színtelen por formájában.

Forgatás: [α]β³: +90,0° (c = 0,2 H₂O).

Elemanalízis a ^9Η₂₃Ν₅0₇·ΗΟ képlet alapján: számított: C48,57% H5,15% N 14,90%;

talált: C 48,71% H 5,45% N 14,70%.

60. példa (S)-4-[4-(2-Amino-etil)-benzoil-glicil]-3-metoxikarbonil-metil-2-oxo-piperazin-J-ecetsav-hidroklorid ml metanolban az 58. példában ismertetettek szerint előállított (S)-4-(N-benziloxi-karbonil-glicil)3-metoxikarbonil-metil-2-oxo-piperazin-l-ecetsavt-butil-észtert feloldunk. Az oldathoz 100 mg 10%-os csontszenes palládiumot adunk és az elegyet 1 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően a katalizátort kiszűrjük és a szűrletet koncentrálva olajos terméket kapunk. Ezt az olajos terméket 5 ml dimetil-formamidban feloldjuk, amelyhez 290 mg 4(2-t-butoxi-karbonil-amino-etil)-benzoesavat adunk. Az elegyet jéggel lehűtjük, majd cseppenként 240 mg dietil-ciano-foszfonátot és 300 mg trietil-amint adunk hozzá. Az elegyet 1 óra hosszat keverjük, majd etilacetáttal hígítjuk 5%-os vizes kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, majd 10%-os vizes nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal mossuk, vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, végül csökkentett nyomáson koncentráljuk. A kapott olajos terméket 5 ml metilénkloridban feloldjuk és az oldathoz 5 ml trifluor-ecetsavat adunk, a kapott elegyet 1 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet koncentrálva egy nyers terméket kapunk, amelyet hidrokloriddá alakítunk 1 n sósavval, majd C_lg-ODS oszloppal tisztítva 300 mg cím szerinti vegyületet kapunk színtelen por formájában.

Forgatás: [a]g: +81,5° (c = 0,2 H₂O).

Elemanalízis a C₂₀H₂₆N₄O₇HCl képlet alapján: számított: C51,01% H 5,78% N 11,90%;

talált: C 51,09% H 5,98% NI 1,75%.

61. példa (S)-4-(4-Amidino-benzoil-glicil)-3-benzil-2-oxo-piperazin-1 -ecetsav

400 mg a 15. példa szerint előállított (S)-4-Glicil-3benzil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-t-butil-észtert és 200 mg 4-amidino-benzoesav-hidrokloridot a 39. példa szerint feldolgozva 100 mg cím szerinti vegyületet kapunk színtelen kristályok formájában. Olvadáspont: 290-296 °C (bomlás).

Forgatás: [α]ρ: +96,9° (c = 0,2, 1 n HCI).

62. példa (S)-3-Benzil-4-(N-benziloxi-karbonil-glicil)-2-oxopiperazin-/-ecetsav-pivaloil-oxi-metilészter 5 ml dimetil-formamidhoz a 14. példa szerint előállított 680 mg (S)-3-benzil-2-oxo-piperazin-lecetsav-t-butil-észter-hidrokloridot és 420 mg benziloxi-karbonil-glicint tartalmazó dimetil-formamidhoz szobahőmérsékleten 400 mg 1 -etil-3-(3-dimetilamino-propil)-karbodiimid-hidrokloridot adunk és az elegyet 1 órán át keverjük. Ezt követően etil-acetáttal hígítjuk 5%-os vizes kálium-hidrogén-szulfátoldattal, majd 10%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepárolva olajos terméket kapunk. Ezt a terméket ecetsavban feloldjuk és az oldatot 1 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegyet koncentrálva olajos terméket kapunk, amelyet 5 ml dimetil-formamidban feloldunk. Az oldathoz 450 mg pivaloil-oximetil-kloridot, 770 mg diizopropil-etil-amint és 520 mg nátrium-jodidot adunk. Az elegyet 6 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. Ezt követően csökkentett nyomáson bepároljuk. A koncentrátumot metilén-kloridban feloldjuk, vízzel mossuk vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott nyers terméket szilikagéles kromatográfiával tisztítjuk (eluens metilénklorid:etil-acetát 4:6 arányú keveréke). így 180 mg cím szerinti vegyületet kapunk színtelen habos termék formájában.

Forgatás: [d]g: +50,1° (c = 0,5 MeOH).

HU 211 141 A9

63. példa (S)-4-(4-Amidino-benzoil-glicil)-3-benzil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-pivaloil-oxi-metilészter-hidmklorid ml metanolban 550 mg (S)-3-benzil-4-(N-benziloxi-karboni-glicil)-2-oxo-piperazin-1 -ecetsav-pivaloiloxi-metilésztert feloldunk. Az oldathoz 100 mg 10%-os csontszenes palládiumot adunk és az elegyet 1 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, majd a katalizátort kiszűrjük. A szűrletet bepárolva olajos terméket kapunk, amelyet 5 ml dimetil-formamidban feloldunk. Az oldathoz 200 mg 4-amidino-benzoesav-hidrokloridot, 180 mg N-hidroxi-5-norbomén-2,3-dikarboximidet és 210 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk. Az elegyet 1 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet koncentráljuk csökkentett nyomáson. A kapott nyers terméket C_]8-ODS oszloppal tisztítva 120 mg cím szerinti vegyületet kapunk színtelen por formájában.

Forgatás: [a]§: +73,1° (c = 0,15 H₂O).

Elemanalízis a C₂₉H₃₅N₅O₇HC1H₂O képlet alapján:

számított: C 56,17%, H6,18% N 11,29%;

talált: C 56,05% H 6,35% N 11,20%.

64. példa (S)-4-Glicil-3-( I -metil-propil)-2-oxo-piperazin-] ecetsav-t-butil-észter-hidroklorid

2,5 g N-(2,2-dietoxi-etil)-glicin-t-butil-észterből és

2.65 g benziloxi-karbonil-izoleucinból kiindulva a 2.,

3. és 4. példában ismertetettek szerint eljárva 3,0 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen por formájában.

Forgatás: [a]^: +42,9’ (c = 1,2 MeOH).

65. példa (S)-4-(4-Guanidino-benzoil-glicil)-3-(l-metil-propil)-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-hidroklorid

364 mg a 64. példa szerint előállított (S)-4-glicil-3(l-metil-propil)-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-t-butil-észter-hidrokloridból és 215 mg 4-guanidino-benzoesavhidrokloridból kiindulva a 39. példa szerint eljárva 190 mg cím szerinti vegyületet színtelen por formájában.

Forgatás: [a]§: +25,7° (c = 0,2 H₂O).

Elemanalízis a C₂₀H₂₈N₆O₅ HCI képlet alapján: számított: C 51,23% H 6,23% N 17,92%;

talált: C 51,09% H6,48% N 17,71%.

66. példa (S)-4-(4-Amidino-benzoil-glicil)-l-karboxi-metil-2oxo-piperazin-3-propionsav

490 mg a 31. példa szerint kapott (S)-l-benziloxikarbonil-metil-4-glicil-2-oxo-piperazin-3-propionsavbenzil-észter-hidrokloridból és 200 mg 4-amidino-benzoesav-hidrokloridból kiindulva a 23. példa szerint eljárva 140 mg cím szerinti vegyületet kapunk színtelen prizmák formájában. Olvadáspont: 235-241 ’C.

Forgatás: [a]§: +66,6’ (c = 0,3 H₂O).

Elemanalízis a C₁₉H₂₃N₅O₇ ⁱ/₂H₂O képlet alapján: számított: C 51,58% Η 5,47% N 15,83%;

talált: C 51,63% H 5,86% N 16,01%.

67. példa

N-(2,2-Dietoxi-etil)-L-alanin-t-butil-észter

L-alanin-t-butil-észter 2-bróm-1,1 -dietoxi-etánnal reagáltatunk az 52. példában ismertetettek szerint, így megkapjuk a cím szerinti vegyületet sárgásbarna olajos termék formájában.

Forgatás: [oc]: -11,0° (c = 0,5 MeOH).

68. példa (5.5) -2-[3-t-Butoxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazinl-il}-2-metil-ecetsav-t-butil-észter-oxalát

A 67. példa szerint előállított N-(2,2-dietoxi-etil)L-alanin-t-butil-észterből kiindulva és az 53. példa szerint eljárva megkapjuk a cím szerinti vegyületet színtelen prizmák képében. Olvadáspont: 175-177 ’C (bomlás).

Forgatás: [α]ο^: -34,4’ (c = 0,45 MeOH).

Elemanalízis a C_]7H₃₀N₂O₅C₂H₂O₄ képlet alapján:

számított: C 52,77% H 7,46% N6,48%;

talált: C 52,67% H 7,54% N6,61%.

69. példa (5.5) -2-[4-(4-Amidino-benzoil)-glicil-3-karboximetil-2-oxo-piperazin-l-il]-2-metil-ecetsav-hidroklorid

A 68. példában előállított (S,S)-2-[3-t-butoxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazin-1 -il]-2-metil-ecetsav-t-butil-észter-oxalátból kiindulva és az 54. példában ismertetettek szerint eljárva megkapjuk a cím szerinti vegyületet színtelen por formájában.

Forgatás: [a]§: +52,7° (c = 1,0 H₂O).

Elemanalízis a C_]9H₂₃N₅O₇ HC1H₂O képlet alapján:

számított: C 46,77% H 5,37% N 14,35%;

talált: C 46,91% H 5,43% N 14,41%.

70. példa (S)-3-N-(4,4'-Dimetoxi-benzhidril)-karbamoil-metil-2-oxo-piperazin-1 -ecetsav-t-butil-észter-oxalát Az N-(2,2-dietoxi-etil)-glicin-t-butil-észtert az

N(a)-benziloxi-karbonil-N(3)-(4,4'-dimetoxi-benzhidril)-L-aszparaginnal kondenzáljuk a 2. példában ismertettek szerint eljárva. A kondenzátumot gyűrűzárásnak és redukciónak vetjük alá a 3. példában ismertetett módon, így megkapjuk a cím szerinti vegyületet, amelyet etanol-etil-éter elegyből átkristályosítva színtelen kristályos anyagot kapunk. Olvadáspont: 120-123 ’C.

Forgatás: [a]§: -5, Γ (c = 0,905 MeOH).

Elemanalízis a C₂₇H₃₅N₃O₆C₂H₂O₄ képlet alapján: számított: C 59,28% H 6,35% N7,15%;

talált: C 59,01% H 6,40% N 7,06%.

71. példa (S)-4-(4-Amidino-benzoil)-glicil-3-karbamoil-metil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav (S)-3-N-(4,4-dimetoxi-benzhidril)-karbamoil-metil2-oxo-piperazin-l-ecetsav-oxalátot az 54. példában ismertetett módon feldolgozva színtelen port kapunk, amelyet 50%-os metanolból átkristályosítva a cím sze21

HU 211 141 A9 rinti vegyületet színtelen kristályos anyag formájában kapjuk. Olvadáspont: 226-228 °C.

Forgatás: [a]^: +70,3° (c = 0,4 H₂O).

Elemanalízis a C_lgH₂₂N₆O₆-2 H₂O képlet alapján: számított: C 47,57% H 5,77% N 18,49%;

talált: C 47,35% H 5,64% N 18,28%.

72. példa (S)-2-Benzil-]-t-butoxi-karbonil-4-ciano-metil1,2,3,4-tetrahidropirazin-3-on

3,0 g 2,2-dietoxi-etil-amino-acetonitril, 4,85 g N-tbutoxi-karbonil-L-fenil-alanin és 50 ml metilén-klorid keverékéhez 3,6 g l-etil-3-(3-dimetil-amino-propil)-karbodiimid-hidrokloridot adunk és az elegyet 4 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk, majd 100 ml etil-acetátot és 50 ml vizet adunk hozzá. Az így kapott elegyet rázzuk, majd a szerves fázist elkülönítjük, vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, végül csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott 7 g koncentrátumot 100 ml etil-acetátben feloldjuk. Ehhez az oldathoz 0,5 g p-toluol-szulfonsavat adunk és az elegyet 4 óra hoszat 75-85 °C-ig terjedő hőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd bepároljuk. A koncentrátumot szilikagél oszlop kromatográfiával tisztítjuk, eluensként hxán:etil-acetát 3:1 arányú elegyét alkalmazva, majd etil-acetátból való átkristályosítás után 3.1 g színtelen prizmákat kapunk, melynek olvadáspontja 160-162 °C.

Elemanalízis a C_I8H_2]N₃O₃ képlet alapján: számított: C 66,04% H 6,47% N 12,84%;

talált: C66,15% H 6,57% N 12,84%.

73. példa (S)-3-Benzil-]-(tetrazol-5-il-metil)-2-piperazinonhidroklorid g (S)-2-benzil-l-t-butoxi-karbonil-4-ciano-metil1.2,3,4-tetrahidro-pirazin-3-on, 0,31 g nátrium-azid, 0,25 g ammónium-klorid és 6 ml N,N-dimetil-formamid keverékét 6 óra hosszat 100 °C-on keverjük. A reakcióelegyet jeges vízbe öntjük, majd metilén-kloriddal extraháljuk. A szerves fázist vízzel mossuk és vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd az oldószert csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradék 1 g-jának 15 ml etanolban készített oldatához 0,5 g 10%-os csontszenes palládiumot adunk, majd 20 óra hosszat hidrogénáramban keverjük. Ezt követően a katalizátort kiszűrjük, a szűrletet csökkentett nyomáson koncentráljuk. A koncentrátum 1 g-jához 8 ml etil-acetát-oldatot adunk, amelyet 4 n sósavban készítettünk, majd az elegyet 3 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. A kapott csapadékokat szűréssel elkülönítjük. Metanolból való átkristályosítás után 0,7 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen kristályok formájában. Olvadáspont: 245-247 °C (bomlás).

Forgatás: [α]θ: -105,7' (c = 0,455 MeOH).

Elemanalízis a C|3H₁₆N₆O HC1 1/5H₂ képlet alapján: számított: C 49,97% H 5,55% N 26,92%;

talált: C 49,96% H 5,60% N 26,51%.

74. példa (S)-3-Benzil-4-glicil-l-(tetrazol-5-il-metil)-2-piperazinon-hidroklorid

1,8 g a 73. példában ismertetettek szerint előállított (S)-3-benzil-1 -(tetrazol-5-il-metil)-2-piperazinon-hidrokloridból kiindulva a 4. példában leírtak szerint 0,75 g cím szerinti vegyületet színtelen por formájában.

Forgatás: [a]§: +59,1° (c = 1,085 MeOH).

75. példa (S)-4-[4-(2-Amino-etil-benzoil)-glicil]-3-benzil-l(tetrazol-5-il-metil)-2-piperazinon

0,2 g (S)-3-benzil-4-glicil-l-(tetrazol-5-il-metil)2-piperazinon-hidroklorid, 0,16 g 4-t-butoxi-karbonil-amino-etil-benzoesav, 0,1 ml trietil-amin és 10 ml metilén-klorid keverékéhez 0,14 g l-etil-3-(3-dimetil-amino-propil)-karbodiimid-hidrokloridot adunk. Az így kapott reakcióelegyet 20 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten, majd vizes kálium-hidrogén-oldattal, utána vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk, majd csökkentett nyomáson koncentráljuk. A koncentrátumot 5 ml etil-acetát és 4 ml metilén-klorid elegyében feloldjuk, az oldathoz 4 ml etil-acetát-oldatot adunk, amelyet 4 n sósavban készítettünk és az elegyet 24 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. A kapott csapadékot szűréssel elkülönítjük oszlopkromatográfiával tisztítjuk [töltet Amberlite XAD-2 (100 ml), eluens víz:metanol 4:1—>4:3]. Az így kapott frakciót liofilizáljuk. ilyen módon 0,20 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen por formájában.

Forgatás: [a]p: +81,4° (c = 0,46 MeOH).

Elemanalízis a C₂₄H₂₈N₈O_?-3/2H₂O képlet alapján:

számított: C 57,24% H6,21% N 22,25%;

talált: C 56,99% H 6,09% N 22,49%.

76. példa (S)-4-[4-l2-Amino-etil)-benzoil]-glicil-1 -karboximetil-2-oxo-piperazin-3-propionsav-hidroklorid 490 mg a 31. példa szerint előállított (S)-l-benzoiloxi-karbonil-metil-4-glicil-2-oxo-piperazin-3-propionsav-benzil-észter-hidroklorid és 290 mg 4-(2-N-benziloxi-karbonil-amino-etil)-benzoesav keverékét a 32. példában ismertetettek szerint feldolgozva 240 g cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]g: +62,7° (c = 0,26 H₂O).

Elemanalízis a C₂₀H₂₆N₄O7-HCl képlet alapján: számított: C 51,01% H 5,78% N 11,90%;

talált: C 51,29% H6,15% N 11,81%.

77. példa (S)-4-[4-(2-N,N-dimetil-amino-etil)-benzoil]-glicil]-karboxi-metil-2-oxo-piperazin-3-propionsav-hidroklorid

490 mg a 31. példa szerint előállított (S)-l-benziloxi-karbonil-metil-4-glicil-2-oxo-piperazin-3-propionsav-benzil-észter-hidroklorid és 230 mg 4-(2-N,N-dimetil-amino-etil)-benzoesav-hidroklorid keverékéből kiindulva a 32. példában ismertetettek szerint eljárva

HU 211 141 A9

310 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]^: +61,5° (c = 0,24 H₂O).

Elemanalízis a C₂₂H₃₀N₄O₇ HCl képlet alapján: számított: C 52,96% H 6,26% N 11,23%;

talált: C 52,93% H 6,84% NI 1,34%.

78. példa (S)-4-[(transz-4-amino-metil-ciklohexán)-l-il-karbonil]-glial-l-karboxi-metil-2-oxo-piperazjn-3propionsav-hidmklorid

490 mg a 31. példa szerint előállított (S)-l-il-benzil-oxi-karbonil-metil-4-glicil-2-oxo-piperazin-3-propionsav-benzil-észter-hidroklorid keverékéből kiindulva a 32. példa szerint eljárva 230 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]^: +70,1' (c = 0,31 H₂O).

Elemanalízis a C₁₈H₃₀N₄O₇ HCl ’/₂H₂0képlet alapján:

számított: C 48,36% H 6,83% N 11,87%;

talált: C 48,48% H6,73% N 11,58%.

79. példa (S )-4-(N-Benziloxi-karbonil)-glicil-1 -f-butoxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazin-3-propionsav-metilészter

N-Benziloxi-karbonil-L-glutamilsav-gamma-metilészterből kiindulva és az 58. példában ismertetettek szerint eljárva megkapjuk a cím szerinti vegyületet színtelen olajos termék formájában.

Forgatás: [ot]g: +60,9° (c = 1,3 MeOH).

80. példa (S)-4-[4-(2-Amino-etil)-benzoil]-glicil-3-metoxikarbonil-etil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-hidroklorid

490 mg a 79. példában ismertetett (S)-4-(N-benziloxi-karbonil)-glicil-l-t-butoxi-karbonil-metil-2-oxopiperazin-3-propionsav-metilészter és 270 mg 4-(N-tbutoxi-karbonil-amino-etilj-benzoesav keverékét a 60. példában ismertettek szerint feldolgozva 270 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [ot]d^: +57,8° (c = 0,26 H₂O).

Elemanalízis a C₂₁H₃₆N₄O₇ HC1 képlet alapján: számított: C 52,01% H6,03% N 11,55%;

talált: C 52,21% H 6,26% N 11,71%.

81. példa (S)-4-[4-(2-N,N-Dimetil-amino-etil)-benzoil]-glicil-3-metoxi-karbonil-etil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-hidroklorid

490 mg a 79. példában ismertetett (S)-4-(N-benziloxi-karbonil)-glicil-1 -t-butoxi-karbonil-metil-2-oxopiperazin-3-propionsav-metilészter és 230 mg 4-(2N,N-dimetil-amino-etil)-benzoesav keverékét a 60. példában ismertettek szerint feldolgozva 220 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]^: +55,7” (c = 0,29 H₂O).

Elemanalízis a C₂₃H₃₂N₄O₇ ¹/₂HC1 képlet alapján: számított: C 55,84% H6,62% N 11,32%;

talált: C 55,81% H7,16% N 11,21%.

82. példa (S)-4-(transz-4-Amino-metil-ciklohexán-l-il-karbonil)-glicil-3-metoxi-karbonil-etil-2-oxo-piperazin1 -ecetsav-hidroklorid

490 mg a 79. példában ismertetett (S)-4-(N-benziloxi-karbonil)-glicil-l-t-butoxi-karbonil-metil-2-oxopiperazin-3-propionsav-metilészter és 260 mg 4-(N-tbutoxi-karbonil-amino-metil)-ciklohexán-karbonsav keverékét a 60. példában ismertettek szerint feldolgozva 190 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]p: +67,5’ (c = 0,36 H₂O).

Elemanalízis aC₂₀H₃₂N₄O₇ ¹/₂HCl képlet alapján: számított: C 52,37% H7,14% N 12,21%;

talált: C 52,41% H 7,22% N 12,09%.

83. példa (S)-4-(N-Benziloxi-karbonil)-glicil-3-N-(4,4-dimetoxi-benzhidril)-karbamoi!-etil-2-oxo-piperazin-l ecetsav-t-butil-észter

A (2,2-dietoxi-etil)-glicin-t-butil-észtert és az N(oc)benzoxikarbonil-N(y)-4,4'-dimetoxi-benzhidril)-L-glutamint az 58. példátlan ismertetettek szerint feldolgozva, valamint a reakcióterméket etil-acetátból átkristályosítva megkapjuk a cím szerinti vegyületet színtelen prizmák formájában. Olvadáspont: 98 ’C.

Forgatás: [a]§: +39,4’ (c = 1,5 MeOH).

Elemanalízis a C₃₈H₄₆N₄O₉'/₂H₂O képlet alapján: számított: C 64,12% H 6,66% N 7,87%;

talált: C 64,08% H 6,75% N 8,23%.

84. példa (S)-4-[4-(2-Amino-etil)-benzoil]-glicil-3-karboniletil-2-oxo-piperazin-J-ecetsav-hidroklorid

700 mg a 83. példában ismertetettek szerint előállított (S)-4-(N-benziloxi-karbonil)-glicil-3-N-(4,4'-dimetoxi-benzhidril)-karbamoil-etil-2-oxo-piperazin-1 ecetsav-t-butil-észter és 265 mg 4-(N-t-butiloxi-karbonil-amino-etil)-benzoesav feldolgozásával a 60. példában ismertetettek szerint eljárva 250 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]^: +61,3’ (c = 0,27 H₂O).

Elemanalízis a C₂₀H₂₇N₅O₆ HCl H₂O képlet alapján;

számított: C 49,23% H 6,20% N 14,35%;

talált: C 49,38% H6,16% N 14,73%.

85. példa (S)-4'-[4-(2-N,N-Dimetil-amino-etil)-benzoil]-glicil-3-karbonil-etil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-hidroklorid

700 mg a 83. példában ismertetettek szerint előállított (S)-4-(N-benziloxi-karbonil)-glicil-3-N-(4,4'-dimetoxi-benzhidril)-karbamoil-etil-2-oxo-piperazin-lecetsav-t-butil-észter és 230 mg 4-(2-N,N-dimetil-amino-etil)-benzoesav feldolgozásával a 60. példában ismertetettek szerint eljárva 270 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [ex]θ: +54,2° (c = 0,40 H₂O).

Elemanalízis a C₂₂H₃|N₅O₆ HC1 képlet alapján:

HU 211 141 A9 számított: C 53,06% H6,48% N 14,06%;

talált: C 53,28% H 6,76% N 13,69%.

86. példa (S)-4-(transz-4-Amino-metil-ciklohexán-l-il-karbonil)-glicil-3-karbamoil-etil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-hidmklorid

700 mg a 83. példában ismertetettek szerint előállított (S)-4-(N-benziloxi-karbonil)-glicil-3-N-(4,4'-dimetoxi-benzhidril)-karbamoil-etil-2-oxo-piperazin-1 ecetsav-butil-észter és 260 mg transz-4-amino-metilciklohexán-karbonsav feldolgozásával a 60. példában ismertetettek szerint eljárva 190 mg cím szerinti vegyületet kapunk amorf por formájában.

Forgatás: [a]^: +62,6° (c = 0,43 H₂O).

Elemanalízis a C₁₉H3|N₅O₆ HC1 2 H₂O képlet alapján:

számított: C 45,83% H 7,29% N 14,06%;

talált: C 46,05% H 6,98% N 14,03%.

87. példa

4-(2-Amino-etil-benzoil)-glicil-2-oxo-piperazin-l ecetsav-hidroklorid

4-Glicil-2-oxo-piperazin-1 -ecetsav-benzil-észter és 4-(2-N-benziloxi-karbonil-amino-etil)-benzoesav feldolgozásával a 32. példában ismertetettek szerint eljárva megkapjuk a cím szerinti vegyületet.

Elemanalízis a C₁₇H₂₂NO₅HC1 képlet alapján: számított: C 51,19% H5,81% N 14,05%;

talált: C 51,33% H5,91% N 13,60%.

88. példa (S)-4-l4-(2-Amino-etil)-benzoil]-glicil-3-karbamoil-metil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-hidroklorid A 70. példában ismertetettek szerint előállított (S)3-N-(4,4'-dimetoxi-benzhidril)-karbamoil-metil-2-oxopiperazin-l-ecetsav-t-butil-észter-oxalát és 4-(2-t-butoxi-karbonil-amino-etil)-benzoesav feldolgozásával a 60. példában ismertetettek szerint eljárva kapjuk meg a cím szerinti vegyületet.

Forgatás: [ot]g: +69,4° (c = 0,775 H₂O).

Elemanalízis a Cj9H₂₅N₅O₅ HCl 2 H₂O képlet alapján:

számított: C 46,39% H6,15% N 14,24%;

talált: C 46,54% H5,88% N 13,91%.

89. példa (S)-4-[4-(2-Amino-etil)-benzoil]-glicil-3-benzil-2oxo-piperazin-l-ecetsav

A 15. példában ismertetettek szerint előállított (S)-3-benzil-4-glicil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav-t-but il-észter-hidroklorid és 4-(2-l-butoxi-karbonil-aminoetil)-benzoesav feldolgozásával a 60. példában ismertetettek szerint eljárva megkapjuk a cím szerinti vegyületet.

Forgatás: [a]g: +93,7° (c = 0,375 MeOH).

Elemanalízis a C->₄H₂₈N₄O₅-2,5 H₂O képlet alapján: számított: C 57*,94% H 6,69% N 11,26%;

talált: C 57,58% H 6,40% NI 1,06%.

A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületekből az alábbiak szerint állíthatunk elő gyógyszerkészítményeket.

Trombózis ellen a következő összetételű gyógyszerkészítményeket állíthatjuk elő:

7. Tabletták:

(1) (S)-4-(4-amidino-benzoil-glicil)-2oxo-piperazin-l,3-diacetát 10 g (2) laktóz 90 g (3) kukoricakeményítő 29 g (4) magnézium-sztearát 1 g

130 g

Az (1) és (2) teljes mennyiségét 17 g (3) anyaggal öszszekeverjük és a keveréket 7 g (3)-ból készült pasztával granuláljuk. A granulátummal 5 g (3)-at és a (4) összes mennyiségét összekeverjük. A keverékből sajtoló-tablettázó gép segítségével 1000 db, 7 mm átmérőjű tablettát készítünk, minden tabletta 10 g (1) hatóanyagot tartalmaz.

2. Injektálható oldat (1) (S )-4-(4-amidino-benzoil-glicil)-2oxo-piperazin-l,3-diacetát 10 g (2) nátrium-klorid 9g

Az (1) és (2) egész mennyiségét 1000 ml desztillált vízben feloldjuk. Az oldat 1-1 ml-ét 1000 db barna ampullába töltjük. A levegőt az ampullákból nitrogéngázzal kiszorítjuk és az ampullákat lezárjuk.

A műveletet steril körülmények között végezzük.

3. Tabletták (1) (S)-4-(4-amidino-benzoil-glicil)-lkarboxi-metil-2-oxo-piperazin-3-diacetát 10 g (2) laktóz 90 g (3) kukoricakeményítő 29 g (4) magnézium-sztearát lg

130 g

Az (1) és (2) összes mennyiségét 17 g (3) anyaggal összekeverjük és 7 g (3)-ból készült pasztával granuláljuk. A granulátummal 5 g (3)-at és a (4) teljes mennyiségét összekeverjük. A keverékből sajtolótablettázó gép segítségével 1000 db, 7 mm átmérőjű tablettát készítünk, minden tabletta 10 g (1) hatóanyagot tartalmaz.

4. Injektálható oldat (1) (S)-4-(4-amidino-benzoil-glicil)-lkarboxi-metíl-2-oxo-piperazin-3-propionsav 10 g (2) nátrium-klorid 9 g

Az (1) és (2) teljes mennyiségét 1000 ml desztillált vízben feloldjuk. Az oldat 1-1 ml-ét 1000 db barna ampullába töltjük. A levegői az ampullákból nitrogéngázzal kiszorítjuk és az ampullákat lezárjuk. Az eljárást steril körülmények között végezzük.

A jelen találmány olyan új vegyületeket és gyógyászati készítményeket szolgáltat, amelyek hatásosak számos betegség megelőzésében és kezelésében a sejtadhézió gátlása révén.

HU 211 141 A9

Claims

1. (I) általános képletű vegyületek - ahol

R² és R³ jelentése egymástól függetlenül egy maradék csoport, amely valamilyen α-aminosavból a -CH(NH₂)COOH csoport eltávolításával jön létre, vagy

R¹ és R² a szomszédos nitrogénatommal és szénatommal együtt egy 5-6 tagú gyűrűt képezhet;

Z jelentése anion képzésre képes csoport vagy az élő szervezetben anionná való átalakulásra képes csoport és fiziológiailag alkalmazható sóik.

2. (Γ) általános képletű vegyületek - ahol

X jelentése hidrogénatom vagy rövid szénláncú alkilcsoport, amely (1) valamilyen adott esetben észterezett vagy amidált karboxilcsoporttal, (2) egy adott esetben szubsztituált fenilcsoporttal vagy (3) hidroxilcsoporttal lehet szubsztituálva;

Z jelentése adott esetben észterezett vagy amidált karboxilcsoport és sóik.

3. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol G jelentése NH₂-csoport.

4. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol G jelentése

HN^ . C— képletű csoport.

H₂H ^X

5. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol D jelentése

-(NH)_h-(CH₂)_m-(A])_i-(CH₂)_k (2') általános képletű csoport, ahol h és i értéke egymástól függetlenül 0 vagy 1; m és k értéke egymástól függetlenül 0, 1 vagy 2; és Aj jelentése 5-6 tagú gyűrű.

6. Az 5. igénypont szerinti vegyület, ahol k = 0.

7. Az 5. igénypont szerinti vegyület, ahol k = 0 és A_t jelentése benzolgyűrű.

8. Az 5. igénypont szerinti vegyület, ahol k = 0 és A| jelentése ciklohexán gyűrű.

9. Az 5. igénypont szerinti vegyület, ahol h = 0, k = 0 és A] jelentése benzolgyűrű.

10. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol X jelentése benzilcsoport.

11. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol X jelentése -CH₂COOH vagy -CH₂CH₂COOH csoport.

12. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol X jelentése -CH₂COOCH₃ vagy -CH₂CH₂COOCH₃ csoport.

13. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol X jelentése -CH₂CONH₂ vagy -CH₂CH₂CONH₂ csoport.

14. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol R¹, R² és R³ jelentése hidrogénatom.

15. Az 1. igénypont szerinti vegyület, ahol Z jelentése -COOH csoport.

16. Az 1. igénypont szerinti (S)-4-(4-amidino-benzoil-glicil)-2-oxo-piperazin-l,3-diecetsav vagy hidrokloridja.

17. Az 1. igénypont szerinti (S)-4-(4-amidino-benzoil-gli cil)-1 -karboxi-metil-2-oxo-piperazin-3-propionsav vagy hidrokloridja.

18. Az 1. igénypont szerinti (S)-4-[4-(2-aminoetil)-benzoil-glicil]-l-karboxi-metil-2-oxo-piperazin3-propionsav vagy hidrokloridja.

19. Az 1. igénypont szerinti (S)-4-[4-(2-aminoetil)-benzoil-glicil]-l-karboxi-metil-2-oxo-piperazin1-ecetsav vagy hidrokloridja.

20. Az 1. igénypont szerinti (S)-4-[4-(2-aminoetil)-benzoil-glicil]-3-karbámoil-metil-2-oxo-piperazin1-ecetsav vagy hidrokloridja.

21. Az 1. igénypont szerinti (S)-4-[4-(2-aminoetil)-benzoil-glicil]-3-karbamoil-3-metoxi-karbonilmetil-2-oxo-piperazin-l-ecetsav vagy hidrokloridja.

22. Az 1. igénypont szerinti (S)-4-[4-(2-aminoetil)-benzoil-glicil]-3-metoxi-karbonil-metil-2-oxopiperazin-l-ecetsav vagy hidrokloridja.

23. Az 1. igénypont szerinti (S)-4-[4-(2-aminoetil)-benzoil-glicil]-3-karbamoil-etil-2-oxo-piperazin1-ecetsav vagy hidrokloridja.

24. Az 1. igénypont szerinti (S)-4-(4-amidino-benzoil-glicil)-3-metoxi-karbonil-metil-2-oxo-piperazin1-ecetsav vagy hidrokloridja.

25. Sejtadhézió gátló szer, azzal jellemezve, hogy valamely 1. igénypont szerinti vegyületet tartalmazza.

HU 211 141 A9

Int. Cl.⁶: C 07 D 241/04 ( I )

0 R¹ R² o II I I H

G-D-C-N —CH-C

R²I

N-CH- Z

HN

0 R¹ R² 0 . II I I II ^C-D-C-N-CH-C- N

R²

N-CH -Z ( I')

HN

H₂N ^h2^N\ z

HN

R¹ R² i

D-CON-CH-CON N-CH-Z _xMo (,··)

NH-X-CONHCH₂CON NCH₂CO₂H

CH₂CO₂H (I' )

II

G-D-C-OH ( ll ) r1 r² 0

I I Ί h-n-ch-c-n

R^Jl n-ch-z ( III )

HU 211 141 A9 Int.CL⁶: C 07 D 241/04

0 Rl r2 0 II I I II

G-D-C-N-CH- C-OH (IV)

R³ o r! r² 0

II I I II a'-c-n-ch-c

N N-CH-Z (VI )

0 Rl R² 0 , „

II I I II / \

A-C-N-CH-C-N N-CH-Z w

X 0 (VII )

RCONH

S~\ •CON N'^COOH 'COOH (XXIX)

RCONH· /\

-CON Ν' w

⁰

COOH ‘COOH (XXX)

HU 211 141 A9

Int. Cl.⁶: C 07 D 241/04

N-C-R²II

R° 0

HN

H₂N

R¹ R² \ I ¹ ^>-0- CON-CH-CON N /(sK x 0

R³

I

CH-Z ( 1' )

-+ NH y CH₂)^A -Fj+CH^ ( ² )

-f-NHJ^f-C^-y-A^CHj( 2 ' )

HN

NH-(CH₂)_m- CH^H2^N ,N-C-R²· / ¹¹R° 0 (5)

HN.

H2N

HU 211 141 A9

Int. Cl.⁶: C 07 D 241/04

HN (CH3)₂N'

NH—CO(7)

HU 211 141 A9

Int. Cl.⁶: C 07 D 241/04 — CH — (z)

N-C-R^ / II

R° 0 (D¹ )

HU 211 141 A9

Int.Cl.⁶: C 07 D 241/04 r3

CH₃0 | />—CH₂NH₂ + W'-CH-Z

1. reakcióvázlat ch₃o

Rch₃o (Vili ) (IX ) ch₃o ^>-ch₂nh-ch-z (X )

CH₃0

RCHoO.

R³ ch₃o ^>-ch₂-w² + h₂n-ch-z—- ^ch₂nh-ch-z (XIII ) (XII ) ch₃o (X ) ch₃o

CHO + (XII) ^CH3° (XIII) kondenzáció (X) + R - NH —CH—COOH x (xiv) ° _/CH₂CH(OCH₃)₂R—NH—CH—C —N

I ^CH-Z ^X '₃(XV) ^R ciklizácio

R³ /=\ ¹R-N N-CH-Z / {

X 0 (XVI ) redukció

R-N,

R³I .N-CH-Z

X 0 (XVII) ( XVII

HU 211 141 A9 Int.CL⁶: C07 D241/04 reakcióvázlat folytatása R³ vedocsoport eltávolítás ( v )

R¹ R² 0

R¹ R² + R-N-CH-COOH / \

HN N-CH-Z H (V) kondenzáció

II

R-N-CH-C-N ( XVIII )

R³ i

N-CH-Z vedocsoport eltávolítás (XIX)

R¹ R² 0

I I II /\ H-N-CH—C—N. zN-CH-Z ( III ) ) + a'-cow³(XX)

0 R¹ R² 0 R³ , íl I I H / \ I — A-C-N-CH-CN N-CH-Z (XXI)

0 R¹ R² 0

R³ (III) +A-C0W(XXII) kondenzáció

A - C-N-CH-CN

N-CH-Z

X 0 (XXIII)