HU210192B - Szilárd fázisú szintézis peptid-alkoholok előállítására - Google Patents

Abstract

A találmány tárgya új (XVIII) általános képletű eljárás peptid-alkoholok előállítására, amelyek a peptidlánc C-terminális végén két hidroxilcsoportot tartalmaznak, oly módon, hogy a peptid-alkohol és egy formilfenil-csoportokat tartalmazó gyanta acetál-származékát savasan hidrolizálják. Az eljárás előnye, hogy a hidrolízis enyhe reakciókörülmények között hajtható végre.

Description

A találmány tárgya szilárd fázisban végrehajtott eljárás olyan (XVIII) általános képletű peptid-alkoholok előállítására, amelyek a peptidlánc C-terminálisában két hidroxíl-csoportot tartalmaznak.

Különösen előnyös ez az eljárás az olyan peptid-alkoholok előállítására, amelyek a peptidlánc C-terminális végén két hidroxilcsoportot tartalmaznak. Az eljárás különösen előnyösen olyan peptid-alkoholok előállítására alkalmas, amelyek C-terminálisként treoninol-maradékot tartalmaznak.

Ilyen vegyűletek például a HU 206 890 számú szabadalmi leírásban ismertetett szomatosztatin vegyűletek.

A szilárd fázisú szintézis különösen gyors és előnyős eljárásnak bizonyult peptidek előállítására, ezért általánosan használt eljárássá vált.

A fenti eljárás során - ismert módon - először egy oldhatatlan szintetikus gyanta hidroxil- vagy aminocsoportjához egy aminosavat kötnek, ennek karboxilcsoportján keresztül, ezáltal egy észtert vagy amidot alakítanak ki. Ezt követően a kívánt sorrendben további aminosavakat kapcsolnak a fenti aminosavhoz, végül a kész polipeptidet lehasítják a gyanta-hordozóról.

A fenti szintézis egyszerűen alkalmazható közönséges, C-terminális aminosavakat tartalmazó polipeptidek előállítására. Azonban polipeptid-alkoholok amelyek a C-terminális végen amino-alkoholt tartalmaznak aminosav helyett - nem könnyen képeznek kötést a hordozó gyanta OH- vagy NH₂-csoportjaival és/vagy a szintézis befejeztével nem könnyen hasíthatok le a gyantáról.

A peptid-alhoholok előállítására szilárd fázisú eljárással az alábbi lehetőségek ismertek:

a) szokásos módon előállítják a C-terminálison aminosavat tartalmazó megfelelő polipeptidet (az OH csoportokat tartalmazó gyanta észtereként), majd bórhidriddel végzett redukálással lehasítják, és ezzel egyidejűleg a karboxilcsoportot alkohol csoporttá alakítják (4 254 0234 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás);

b) egy hidroxi-metil gyantához éterként egy terminális amino-alkoholt kapcsolnak karbonil-diimidazol alkalmazásával, és végül, a peptid szintézise után HCl/TFA-val vagy HBr/TFAval lehasítják [Kun-hwa Hsieh and G. R. Marshall, ÁCS National Meeting, New Orleans, 1977. 3. 21-25.].

A fenti eljárásokban azonban hasítást drasztikus körülmények között kell végezni.

Azt tapasztaltuk, hogy a peptid lehasítása a gyantáról, és ugyanakkor a C-terminális peptid-alkohol kialakítása enyhe reakciókörülmények között végbement, ha a C-terminális amino-alkoholt acetál-kötéssel kapcsoljuk a gyantához.

Az enyhe reakciókörülmények alkalmazása nyilvánvaló gyakorlati előnyt jelent mind a használt berendezések élettartama, mind a reaktánsok kezelése szempontjából. Ezenkívül a találmány szerinti eljárással figyelemreméltóan jó hozammal állítható elő a kívánt termék, tehát az eljárás várhatóan ipari méretekben is alkalmazható.

A találmány szerinti eljárás értelmében a C-terminális végen két alkoholcsoportot tartalmazó (XVIII) általános képletű peptid-alkoholokat - a képletben

Y jelentése peptid-alkohol-maradék, és

R! jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport úgy állítjuk elő, hogy a peptid-alkoholt tartalmazó (ír) általános képletű gyantát - a képletben

Y és Rj jelentése a fent megadott,

P jelentése egy, a szilárd fázisú peptidszintéziseknél ismert módon alkalmazott, szabad aminocsoportokat tartalmazó oldhatatlan szintetikus gyanta maradéka,

Z jelentése közvetlen kötés, vagy a gyantát az acetálozott formil-fenil-csoporttal összekötő, a szilárd fázisú peptidszintéziseknél ismert módon alkalmazott maradék, és az acetálozott formilcsoport a Z csoporthoz képest méta- vagy para-helyzetben kapcsolódik, valamint a polimer gyanta egy molekulájához több acetálozott formil-fenil-csoport is kapcsolódhat savasan hidrolizáljuk.

A reakciót - amelyet a találmány szerinti szintézisnek nevezünk a továbbiakban - az 1. reakcióvázlattal szemléltetjük. Areakcióvázlat képleteiben P, Z, R, és Y jelentése a fent megadott.

A fenti reakcióvázlat (ír) és (Ilr) képleteiben az egyszerűség kedvéért csak egyetlen helyettesítő csoportot tüntettünk fel a gyantán; azonban természetesen a polimer gyanta molekulájához több ilyen helyettesítő csoport is kapcsolódhat. A peptid-alkohol lehasítása a gyantáról az acetálcsoport hidrolízisével savas körülmények között történhet, például híg trifluor-ecetsavval. A hidrolízist szobahőmérsékleten játszathatjuk le.

Ha az (ír) általános képletben Z jelentése közvetlen kötés, az acetálcsoportokat hordozó fenilcsoportok a polimer csoporthoz közvetlenül kapcsolódnak, és a polimerhez tartoznak. A fenti (ír) általános képletű vegyületek például egy formilezett polisztirol-gyanta acetáljai lehetnek, ekkor az (ír) általános képletben P jelentése polietilén-lánc.

Abban az esetben, ha Z egy maradékot jelent, akkor ez a maradék egy olyan csoportot tartalmaz, amely a polimerhez közvetlenül vagy közvetve kötődő reakcióképes csoport, és egy másik, az (acetálozott) formil-fenil-csoporthoz közvetlenül vagy közvetve kötődő reakcióképes csoport közötti reakció eredményeként alakul ki. A Z csoport jelentése például egy (Hír) általános képletű csoport lehet, ahol

Q[ jelentése a polimerhez kötődő reakcióképes csoport maradéka,

Q₂ az (acetálozott) formil-fenil-csoporthoz kötődő reakcióképes csoport maradéka, (D) jelentése a Qj-et a polimerrel összekötő maradék E jelentése a Q₂-t az (acetálozott) formil-fenil-csoporttal összekötő maradék, és p és q értéke egymástól függetlenül 0 vagy 1.

A Q1-Q2 csoport előnyösen egy észter- vagy amidcsoport, különösen karbonamidcsoport. Q] jelentése előnyösen -NH- és Q₂ jelentése előnyösen -CO-csoport.

(D) és E jelentése egymástól függetlenül például 1-5 szénatomos alkilén- vagy alkilén-oxi-csoport.

HU 210 192 Β

Az olyan (ír) általános képletű vegyületek például, amelyek képletében Z jelentése (Illr) általános képletű csoport, olyan vegyületek lehetnek, amelyekben a

P-(D)-Qj jelentése egy amino-metilezett polisztirol-gyantamaradék, és a (p) általános képletű maradék egy (IVr) általános képletű maradékot jelent, ahol R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport, és m értéke 0 vagy 1, mimellett az acetálcsoport ismét m- vagy p-helyzetben kapcsolódik.

Ebben az esetben

Z jelentése tehát -CH₂-NH-CO-CH(R)-(O)_m- általános képletű csoport, és

P jelentése polisztirol gyanta-maradék.

A (IVr) általános képletű csoport jelentése előnyösen (q) általános képletű csoport.

Az amino-metilezett polisztirol helyett más polimereket is alkalmazhatunk, különösen szabad -NH₂-csoportot tartalmazó polimereket, például amino-etil-csoportokat tartalmazó poli (akril-amid)-okat.

Mint már említettük, az acetálozott formil-fenilcsoport a polimerhez előnyösen amid-kötéssel kapcsolódik. Ez biztosítja, hogy az acetilezett formil-fenilcsoport a polipeptid-szintézis során és a lehasítás során stabilan kötődik a gyantához, és a hasítás kívánt módon az acetál-kötésen megy végbe, ezáltal egyrészt peptidalkohol képződik, másrészt a formil-fenil-csoport a gyantán marad.

Kívánt esetben a peptid-alkohol a gyantától távolabbi helyzetben is kapcsolódhat, úgynevezett „spacer”-ek beépítésével a gyanta reakcióképes csoportjai - különösen aminocsoportjai - és az acetálozott formil-fenil-származék reakcióképes csoportjai - különösen karboxilcsoportjai - közé. Ebben az esetben a (Illr) általános képletben a (D) illetve E csoport a spacert is tartalmazza, és Q! illetve Q₂ a spacer reakcióképes csoportját jelenti.

A spacer egy ω-amino-karbonsav, például ε-aminokapronsav lehet.

Egy specifikus esetben, ha amino-metilezett polisztirolt, (IVr) általános képletű maradékot és ε-aminokapronsavat, mint spacert használunk, Z jelentése

-CH₂-NH-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH(R)-(O)_máltalános képletű csoport.

Az (ír) általános képletű vegyületeket a szilárd fázisú szintézisek végrehajtására szokásosan használt eljárásokkal állíthatjuk elő, kiindulási vegyületként egy (Vr) általános képletű vegyületet - a képletben A jelentése amino-védőcsoport, és az acetálcsoport a Z csoporthoz képest m- vagy p-helyzetben van használva. Első lépésben az összes A védőcsoportot lehasítjuk, majd a szabad aminocsoportot a soron következő, N-védett aminosavval reagáltatjuk, amíg az összes aminosavat a kívánt szekvenciában a gyantán lévő lánchoz kapcsoltuk.

A használt aminosavak és amino-alkohol amino-védőcsoportjaként olyan védőcsoportokat használhatunk, amelyek nem savas körülmények között hasíthatok le, mivel savas körülmények között az acetálcsoport hidrolízisét hajtjuk végre. Amino-védőcsoportként például trifluor-acetil-csoportot vagy Fmoc-csoportot (9-fIuorenil-metil-oxi-karbonil-csoportot) használhatunk. A fenti védőcsoportok bázikus közegben lehasíthatók, a peptid-kémia területén szokásos eljárással.

Csak az oldalláncban lévő védőcsoportok, és az utolsóként felhasznált aminosav amino-védőcsoportja lehet savra érzékeny, amelyeket a peptid-alkoholnak a gyantáról való lehasításával egyidőben hasítunk le.

Védőcsoportként előnyösen Boc-csoportot használunk. Bázisként előnyösen kálium-hidroxidot, piperidint vagy nátrium-bór-hidridet használhatunk.

A peptidláncot ismert módon építhetjük fel, szabad aminocsoportokat tartalmazó peptid-maradékból, és szabad vagy aktivált karboxilcsoportokat tartalmazó aminosavból.

A reakciót például hidroxi-benzotriazol és diciklohexil-karbodiimid hozzáadásával hajthatjuk végre.

Az (Vr) általános képletű vegyületeket például úgy állíthatjuk elő, hogy

a) egy (Ilr) általános képletű, aldehidcsoportot tartalmazó gyantát - ahol a -COH csoport a Z szubsztituenshez képest m- vagy p-helyzetben van - egy HOCHR_rCH(NHA)-CH₂OH általános képletű, N-védett, adott esetben aktivált formában lévő amino-alkohollal reagáltatunk, vagy

b) egy (Vllr) általános képletű gyantát egy (VIr) általános képletű vegyülettel - a képletben az acetálcsoport a Q’|-(E)_q-csoporthoz képest m- vagy p-helyzetben van és Q’j és Q’₂ két reakcióképes csoportot jelent, amelyek egymással reagálva Q_rQ₂-hidat alakítanak ki - reagáltatunk.

Az a) eljárás szerinti acetilezést katalizátorként sav jelenlétében végezhetjük. Savként például p-toluolszulfonsavat vagy p-(trifluor-metil)-szulfonsavat használhatunk.

A szabad alkohol-csoportot kívánt esetben védőcsoportként trimetil-szilil-csoporttal védhetjük.

A b) eljárás szerinti észterezési reakciót enyhe körülmények között végezhetjük, például egy karbonsavszármazékot egy hidroxil- vagy aminocsoportot tartalmazó polimerrel reagáltatunk.

A (VIr) általános képletű vegyületeket úgy állíthatjuk elő, hogy egy (VlIIr) általános képletű vegyületet egy HO-CHR,-CH(NHA)-CH₂OH általános képletű vegyülettel acetálozunk.

Az acetálozást az a) eljárással kapcsolatban ismertetett körülmények között végezhetjük.

A peptid-alkohol felépítése és gyantáról való lehasítása során egyéb reakciókat - például védőcsoportok eltávolítását, így például az S-védőcsoportok eltávolítását, vagy a cisztein-maradékok oxidálását - is elvégezhetünk.

A fenti reakciókat a peptid-alkohol lehasítása után folyadék fázisban is lejátszathatjuk.

A találmány szerinti szintézissel egyszerűen előállíthatok a C-terminális végen két alkoholcsoportot tartalmazó, gyógyászatilag hatékony vagy egyéb célokra alkalmas peptidek.

A találmányt közelebbről - korlátozás szándéka nélkül - az alábbi példákkal kívánjuk ismertetni.

HU 210 192 Β

A példákban megadott [a]_b értékeket nem korrigáltuk. A leírásban az alábbi rövidítéseket használjuk:

Boc	terc-butoxi-karbonil-csoport
Bút	terc-butil-csoport
DCCI	diciklohexil-karbodiimid
Fmoc	9-fluorenil-metoxi-karbonil-csoport
T	triptofán-maradék
Phe	fenilalanin-maradék
Cys	cisztein-maradék
Lys	lizin-maradék
Thr	treonin-maradék
Thr-ol	treoninol-maradék (CH3-CHOH-CH(CH2OH)NH-)
TFA	trifluor-ecetsav
HOBT	N-hidroxi-benzotriazol
HOSu	N-hidroxi-szukcinimid
SMS	oktreotid [(1) képletü vegyület]

Az összes peptidet poliacetát-polihidrát formában állítottuk elő, a peptid-tartalom 70-90%.

A nagynyomású folyadékkromatográfiás adatok azt mutatják, hogy a peptid más peptidekkel való szennyezettsége 5%-nál kisebb.

1. példa

Oktreotid [SMS, (1) képletü vegyület] előállítása

1) Acetál-ankor (p-formil-fenoxi-ecetsav N-CF₃COtreoninol-acetálja) előállítása

200 ml metanolhoz - amelyet nitrogénáramban keverünk 105 g (1,0 mmol) treoninolt adunk. Tiszta oldatot kapunk. Az oldathoz 0 °C-on 200 ml trifluor-ecetsav-metil-észter 250 ml metanollal készült oldatát adjuk. Az elegyet jeges fürdőn hűtve közelítőleg 10 °Con tartjuk.

1,5 óra elteltével az elegyben nem mutatható ki szabad treoninol. Az elegyet 40 °C-on koncentrálva fehér, kristályos maradékot kapunk.

A maradékot 200 ml etil-acetátban oldjuk 70 °C-on, és hexán hozzáadásával kicsapjuk. Az elegyet 0 °C-ra hűtjük, hexánnal mossuk és szobahőmérsékleten szárítjuk. N-trifluor-acetil-treoninolt kapunk.

50,3 g (0,25 mól) így kapott terméket 1,25 1 tetrahidrofuránban oldunk, és 75 ml trimetil-klór-szilánt adunk hozzá cseppenként. Közvetlenül ezután hozzáadjuk 70 ml trietil-amin és 250 ml tetrahidrofurán elegyét. A kapott fehér szuszpenziót 4 órán keresztül keverjük, majd szüljük és a szűrletet 40 °C-on bepároljuk. Olajat kapunk.

A kapott olajat 1,5 1 metilén-kloridban oldjuk és szobahőmérsékleten 90,4 g p-formil-fenoxi-ecetsavat adunk hozzá, részletekben. Hozzáadunk részletekben 9 ml trifluor-metánszulfonsav-trimetil-szilil-észtert. Az elegyet szobahőmérsékleten 24 órán keresztül keverjük, majd szüljük, és a maradékot metilén-kloriddal alaposan átmossuk.

A szűrletet 40 °C-on koncentráljuk. A kapott narancsvörös, gyantás anyagot szilikagélen kromatografáljuk. Az eluálást etil-acetáttal végezzük. A kívánt vegyületet tartalmazó frakciókat koncentrálva nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat szerint 97%-os tisztaságú cím szerinti vegyületet kapunk.

2) Védett oktapeptid felépítése

17,2 g amino-metilezett polisztirolt (Dow gyártmány 0,7 tömeg% N, 0,5 mmol amino-metil-csoport/gyantának felel meg) 80 ml 4:1 térfogatarányú metilén-klorid/dimetil-formamid elegyben szuszpendálunk. Egymás után hozzáadunk 4,17 g 1) lépés szerint előállított vegyületet, 1,6 g HOBT-t és 4,0 g DCCIt. Az elegyet szobahőmérsékleten 2 órán keresztül keverjük, ekkor Kaiser-teszttel negatív eredményt kapunk. Az elegyet szűrjük és mossuk. A mosott gyantát 100 mml 3:1 térfogatarányú tetrahidrofurán-metanol elegyben szuszpendáljuk és részletekben 10,4 g nátrium-bór-hidriddel kezeljük. Az elegyet szobahőmérsékleten 6 órán keresztül keverjük, majd szűrjük és a gyantát mossuk. A gyantát 4:1 térfogatarányú metilénklorid-dimetíl-foimamid elegyben szuszpendáljuk. Hozzáadunk 5,5 g Fmoc-Cys (S-Bu')-OH-t, 1,74 g HOBT-t és 3,6 g DCCI-t. Az Fmoc-csoportot piperidinnel hasítjuk le, a kezelési idő 2x20 perc.

A fentiek szerint eljárva, egymást kővető ciklusokban az alábbi N-Fmoc-védett aminosavakat kapcsoljuk a peptidlánchoz, HOBT/DCCI-t használva: ThrOH, Lys(Boc)-OH, D-TrpOH, Phe-OH, Cys(S-Bu^l)-OH, és D-Phe-OH. Fmoc-védett oktapeptidgyantát kapunk. A gyantán lévő peptid végkoncentrációja 0,26 mmol/g.

3) Oxidálás és lehasítás

A 2) lépésben kapott gyantát 100 ml 1:1 térfogatarányú trifluor-etanol/metilén-klorid elegyben szuszpendáljuk és 50 ml tributil-foszfinnal kezeljük. Az elegyet szobahőmérsékleten 70 órán keresztül keverjük. Az elegyet szűrjük, mossuk és 100 ml 1:1 térfogatarányú tetrahidrofurán/In amino-acetát elegygyel kezeljük. Hozzáadunk 1,1 ml 30%-os vizes hidrogén-peroxid-oldatot. Az elegyet szobahőmérsékleten 24 órán keresztül keverjük. A gyantát mossuk. Az elegyet 20 ml trifluor-ecetsavval, 80 ml metilén-kloriddal, 10 ml vízzel és 2 ml tioanizollal kezeljük. Az elegyet 2 órán keresztül keverjük, majd szűrjük, és trifluor-ecetsavval és metilén-kloriddal mossuk. A szűrlethez 200 ml dimetil-étert adunk. A kapott csapadékot leszűrjük. A maradékot vizes pufferoldatban oldjuk, és sómentesítjük, például Duolite-ot használva. Az oldatot fagyasztva szárítjuk. Cím szerinti vegyületet kapunk, acetát formában.

A szabad bázis formára számított hozam 70%.

A fentiek szerint eljárva állíthatjuk elő a 206 890 számú magyar szabadalmi leírásban ismertetett peptideket, például az (1) és (2) képletü vegyületeket is.

A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek farmakológiai aktivitásuk következtében gyógyszerkészítmények hatóanyagaként használhatók, vagy köztitermékként használhatók cukorral módosított peptidek előállítására.

Claims (8)

1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK

   1. Szilárd fázisú eljárás (XVIII) általános képletü peptid-alkoholok - a képletben Y jelentése peptid-alkohol-maradék, és

   HU 210 192 Β

   R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport előállítására, azzal jellemezve, hogy a peptid-alkoholt tartalmazó (ír) általános képletű gyantát - a képletben Y és Rj jelentése a tárgyi körben megadott,

   P jelentése egy, a szilárd fázisú peptidszintéziseknél ismert módon alkalmazott, szabad aminocsoportokat tartalmazó oldhatatlan szintetikus gyanta maradéka,

   Z jelentése közvetlen kötés, vagy a gyantát az acetálozott formil-fenil-csoporttal összekötő, a szilárd fázisú peptidszintéziseknél ismert módon alkalmazott maradék, és az acetálozott formilcsoport a Z csoporthoz képest méta- vagy para-helyzetben kapcsolódik, valamint a polimer gyanta egy molekulájához több acetálozott formil-fenil-csoport is kapcsolódhat savasan hidrolizáljuk.
2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy (ír) általános képletű vegyületként olyan vegyületet használunk, amelynek (IrA) általános képletű molekularészében P polisztirolcsoportot jelent, és Z jelentése az 1. igénypontban megadott.
3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy (ír) általános képletű vegyületként olyan vegyületet használunk, amelynek képletében

   Z jelentése -CH₂-NH-CO(R)-CH-(O)_m-, ahol

   R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport és m értéke 0 vagy 1, és

   P jelentése polisztirolcsoport.
4. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás (1) képletű oktreotid előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelően szubsztituált kiindulási vegyületeket használjuk.
5. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként olyan (ír) általános képletű vegyületet - a képletben Y, R_b P, és Z jelentése az 1. igénypontban megadott - alkalmazunk, amelyet úgy állítunk elő, hogy egy (Vr) általános képletű vegyület - a képletben P, Z és R_t jelentése az 1. igénypontban megadott, és A jelentése amino-védőcsoport - védőcsoportját eltávolítjuk, és a kapott szabad aminocsoportot a soron következő N-védett aminosavval kapcsoljuk, majd a kapcsolási reakciót lépésről lépésre megismételve kialakítjuk a kívánt peptid-alkohol szekvenciát.
6. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan (Vr) általános képletű vegyületet - a képletben P, Z, R, és A jelentése az 5. igénypontban megadott - alkalmazunk, amelyet egy (Il’r) általános képletű vegyület - a képletben

   P jelentése az 5. igénypontban megadott és Z’ jelentése a gyantát a formil-fenil-csoporttal összekötő, a szilárd fázisú peptidszintéziseknél ismert módon alkalmazott maradék, és a formilcsoport a Z’ csoporthoz képest m- vagy p-helyzetben kapcsolódik, és a gyanta több formil-fenil-csoportot tartalmaz egy HO-CHR,-CH(NHA)-CH₂OH általános képletű N-védett amino-alkohollal - a képletben Rj jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport és A jelentése az 5. igénypontban megadott való reagáltatásával állítunk elő.
7. 7. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan (Vr) általános képletű vegyületet - a képletben P, Z, R] és A jelentése az 5. igénypontban megadott - alkalmazunk, amelyet egy (Vllr) általános képletű vegyület - a képletben

   P jelentése az 5. igénypontban megadott, (D) jelentése 1-5 szénatomos alkiléncsoport vagy 1-5 szénatomos alkilén-oxi-csoport, és p értéke 0 vagy 1 egy (VIr) általános képletű vegyülettel - a képletben R] és A jelentése az 5. igénypontban megadott,

   E jelentése 1-5 szénatomos alkiléncsoport vagy 1-5 szénatomos alkilén-oxi-csoport, q értéke 0 vagy 1, és

   Q’ i és Q’₂ két reakcióképes csoportot jelent, amelyek egymással reagálva -NH-CO- csoportot képeznek való reagáltatásával állítunk elő.
8. 8. A 6. vagy 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy (VIr) általános képletű vegyületként a (Vl’r) képletű vegyületet alkalmazzuk.