HU208790B - Process for producing pharmaceutical compositions against arc and aids, comprising euphorbia hirta l. plant or its parts or their extracts - Google Patents

Description

A találmány tárgya eljárás új ARC (AIDS related complex) - és AIDS-es megbetegedések ellen hatásos gyógyszerkészítmények előállítására az Euphorbia hirta L. növényből vagy annak részeiből.

Az Euphorbia hirta L. növény trópusi és szubtrópusi vidékeken fordul elő, a növény részeit és annak főzeteit vagy kivonatait már javasolták amőbás fertőzések, bélférgek, valamint hasmenés, fekély és rákos daganatok és megbetegedések elleni szerként. Ezen korábbi javaslatok alapján rendkívül meglepő volt az a felismerés, hogy az ebből a növényből forró vízzel, vagy vizes alkohollal, vagy nátrium-káliumkloridot tartalmazó foszfát pufferrel készített kivonatok, illetve az ezekből előállított folyékony vagy szilárd gyógyszerkészítmények alkalmazhatóak ARC-os és AIDS-es megbetegedések gyógykezelésére. Erre a felismerésre az Euphorbia hirta L. növénnyel vagy az abból készített főzetekkel szerzett eddigi tapasztalatok semmilyen alapot nem szolgáltattak, hiszen az amőbás vagy bélférges fertőzések, vagy akár a hasmenés vagy a rákos és egyéb rosszindulatú daganatos, vagy a fekélyes megbetegedések elleni hatás nem áll kapcsolatban, az ARC- és AIDSelleni hatással. Eddig még nem tapasztaltak az ismert amőba- vagy bélféreg-ellenes, vagy rákos és egyéb rosszindulatú daganat- és fekély-ellenes szereknél ARC- vagy AIDS-ellenes hatást, sem pedig az eddig ismert és alkalmazott ARC- és AIDS-ellenes szerek esetében nem számoltak be bélféreg- vagy daganat-, vagy fekélyellenes hatásról. Ismeretes az is, hogy az eddig több-kevesebb eredménnyel alkalmazott gyógyszerkészítmények toxikusak, alkalmazásuk ezért különös elővigyázatosságot igényel. Éppen ezért fordult különösen az utóbbi időben az érdeklődés a természetes eredetű, nem vagy csak kevéssé toxikus szerek felé különböző megbetegedések esetén is. Ezért bír különös jelentőséggel az a felismerés, hogy az egyáltalán nem toxikus Euphorbia hirta L. növény, valamint annak vizes, vagy vizes-alkoholos kivonatai, vagy nátrium-kálium-kloridot tartalmazó foszfát pufferes kivonatai és az ezekből elkülönített száraz anyagok igen jó hatást mutatnak az ARC-os és AIDS-es megbetegedések gyógykezelése terén is. E felismerés alapján a találmány tárgya eljárás ARC-os vagy AIDS-es megbetegedések gyógykezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására, amelyek hatóanyagként az Euphorbia hirta L. növény részeit, vizes, vagy vizes-alkoholos, vagy nátrium-kálium-kloridot tartalmazó foszfát-pufferes kivonatát, vagy az ezekből elkülönített szárazanyagát tartalmazzák. Az Euphorbiaceák családjába tartazó Euphorbia hirta L. növény trópusi és szubtrópusi vidéken fordul elő. Ezt a növényt, illetőleg ennek kivonatait már amőbás fertőzések, férgek, hasmenés, rákos és fekélyes megbetegedések ellen ajánlották.

A jelen találmány szerint felismert új gyógyászati hatás az ARC-os és AIDS-es megbetegedések elleni hatékonyság alapvetően különbözik az Euphorbia hirta

L. említett ismert gyógyászati alkalmazásaitól és azok alapján semmiképpen nem volt előrelátható vagy feltételezhető. Az amőbás fertőzések, férgek ellen, valamint a rákos daganatok és fekélyek kezelésére alkalmazott szerek egyikénél sem tapasztaltak eddig - amint fentebb már említettük - ARC-os vagy AIDS-es megbetegedések gyógyulását elősegítő hatékonyságot, és az ismert szerek hatásmechanizmusának ismerete sem ad alapot az Euphorbia hirta L. most felismert új gyógyászati hatásának feltételezésére. Az eddig javasolt természetes eredetű, az Euphorbia hirta L. kivonataihoz hasonlóan nem toxikus szereknél sem tapasztalták eddig, hogy azok ARC-os és AIDS-es megbetegedések elleni esetleges hatékonysága amőba- és féreg-ellenes vagy akár hasmenést vagy rákos daganatot, vagy fekélyt gátló hatással járna együtt, így tehát semmilyen eddigi ismeret nem utalt a találmány szerinti új hatás feltételezhetőségére.

A találmány kidolgozása során vizsgálatok irányultak az Euphorbia hirta L. kivonataiban jelenlévő hatóanyag illetőleg hatóanyagok kémiai természetének felderítésére is. Bár ezek a vizsgálatok még nem zárultak le, már többféle olyan anyag jelenléte volt a növény kivonataiban azonosítható, amelyek vagy legalább egy részük feltételezhetően közrejátszik a felismert új gyógyhatásban. A növény vizes vagy vizes-alkoholos kivonataiban, illetőleg magukban a szárított növényi részekben kimutatható hatóanyagok azonosítására vonatkozó vizsgálataink eddigi eredményeit az alábbiakban ismertetjük:

Szárított Euphorbia hirta L. növényanyag fitokémiai azonosítása és minősítése.

A légszáraz Euphorbia hirta L. herbájának fítokémiai analízisével az alábbi vegyületcsoportok azonosíthatók: flavonol glikozidok, amelyek aglikonja túlnyomórészt kvercetin és kvercetin-7-metiléter; cserző hatású növényi polifenolok, β-szitoszterin, kampesztrin, sztigmaszterin és triterpén típusú származékok.

Az azonosítás módja:

a/ Flavonoidok: 0,50 g drogot a DAB 8 módszere szerint 20 ml acetonban, 4 ml koncentrált sósav és

1,5 ml 1%-os hexametilén-tetramin jelenlétében 30 percig 100 °C-on vízfürdőn hidrolizálunk, majd belőle 100 ml-es acetonos törzsoldatot készítünk. Ennek 50 ml-ét 50 ml desztillált vízzel elegyítjük és etilacetáttal kimerítően extraháljuk. Az etilacetátos fázisokat desztillált vízzel semlegesre mossuk és vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, szűrés után csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, majd 2 ml metanolban feloldjuk. A törzsoldat 5-10 μΐ-es részleteit kromatográfiás módszerrel (vékonyrétegr-komatográfia, magasnyomású folyadékkromatográfia) referencia anyagok felhasználásával azonosítjuk.

Pl. vékonyréteg-kromatográfia.

Kifejlesztő rendszer: toluol:jégecet:etilacetát:víz (3:16:50:4).

Reagens: Naturstoff reagens (Wagner), UV₃₆₅ nm. b/ Polifenolok. Jelenlétüket a növényminta metanolos kivonatának kromatográfiás tanulmányozásával vizsgáltuk.

HU 208 790 Β

Pl. vékonyréteg-kromatográfía.

Hordozó: szilikagél-GF₂₅₄ (Merck) 0,2 mm. Kifejlesztő rendszer: kloroform:etilacetát:jégecet:viz (5:5:1,1:3)

Reagens: 1%-os alkoholos FeCl₃ c/ Szterolok és triterpének. 1,0-1,0 g porított növény mintáit Soxhlet készülékben vízfürdőn kimerítően extraháltuk n-hexánnal (A kivonat), kloroformmal extrahálva nyertük a B kivonatot.

Az A és B kivonatokat külön-külön szárazra pároljuk csökkentett nyomáson, 40 °C-on. A maradékot egyenként elszappanosítjuk úgy, hogy 5-5 ml 5%-os alkoholos káliumhidroxid oldattal 90 percig forró vízfürdőn refluxáljuk. A reakcióidő letelte után 1%-os ammóniumszulfáttal hígítjuk és dietiléterrel kimerítően extraháljuk. Az éteres fázisokat vízmentesítés után szárazra pároljuk és 1-1 ml kloroformban vesszük fel, majd vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel, referencia anyagok felhasználásával vizsgáljuk.

Hordozó: szilikagél-GF₂5₄ (Merck)

Kifejlesztő rendszer:benzol:metanol:izopropiléter (180:7,5:22,5) Reagens: 5%-os alkoholos foszformolibdénsav, majd 5 perces melegítés 500 “C-on.

Az Euphorbia hirta-ból előállított tinktúra, liofilizátum és száraz extraktum mindegyikében azonosíthatók a jellemző flavonoidok, polifenolok és szterolok, triterpének. A különösen jellemző flavonoidokra vonatkozólag mennyiségi meghatározást is végeztünk a DAB 8 (8. Német Gyógyszerkönyv) módszere szerint: a száraz drog 0,50-0,80 tömeg% hiperozidban kifejezett összes flavonoidot tartalmaz.

Az Euphorbia hirta L. friss, vagy szárított leveléből és szárából (herba) előállított termékek: vizes kivonat, nátrium-kloridot tartalmazó foszfát pufferes kivonat, tinktúra, liofilizátum, száraz extraktum (porlasztva szárított) előnyösen használható fel további gyógyszerformák előállítására.

A tinktúrából, vizes kivonatból, a nátrium-káliumklorid tartalmú foszfát pufferes kivonatból cseppek, elixírek, szirupok, a liofilizált és porlasztva szárított termékekből tabletta, granulum, kemény zselatin, kapszula, szuszpenziós típusú kenőcs, por, végbélkúp állítható elő egyedi kiszerelésű, illetve nem egyedi kiszerelésű formában. A liofilizátum különösen előnyösen használható fel injekciós készítmények előállítására is.

További gyógyszerkészítmények előállításánál az Euphorbia hirta vizes kivonatát, nátrium-kálium-klorid tartalmú foszfát-pufferes kivonatát, tinktúrát, liofilizátumot és száraz extraktumot önmagukban vagy alkalmasan megválasztott segédanyagokkal együtt használjuk. A különböző alakú, folyékony vagy szilárd gyógyszerkészítmények előállítási módját az alábbi példák szemléltetik.

1. példa

Vizes kivonat (tea) előállítása

Az Euphorbia hirta L. szárát és levelét szárított (légszáraz) állapotban IV. szitafinomságúra porítjuk, a por 3 g-jából 1.0 liter forró vízzel kivonatot készítünk, az oldhatatlan növényi részeket 15 percig tartó centrifugálással (5.000 RPM), vagy szűrőpapíron át történő szűréssel távolítjuk el.

2. példa

Nátrium-kálium-klorid tartalmú foszfát pufferes kivonat

8,0 nátriumkloridot, 0,2 g káliumkloridot, 0,05 g káliumdihidrogénfoszfátot és 1,15 g dinátriumhidrogénfoszfátot kétszer desztillált vízzel 1000 ml-re kiegészítve feloldunk, az így nyert puffer-oldat pH-értéke 7,2.

Az Euphorbia hirta L. szárát és levelét légszáraz állapotban porítjuk, majd a szárított por 10 grammját a fentebb leírt módon elkészített 7,2 pH-jú kálium-nátrium tartalmú foszfát puffénál 100 grammra kiegészítjük, az extrakciót szobahőmérsékleten egy napig tartó rázással végezzük. Az extraktumot az oldhatatlan növényi részektől kétszer, 15 perces centrifugálással (5.000 RPM) tisztítjuk meg.

3. példa

Tinktúra előállítása

Az Euphorbia hirta L. szárát és levelét (légszáraz) állapotban IV. szitafinomságúra porítjuk, majd áztatásos vagy perkolációs technikával, 30%-os etilalkohol (v/v) felhasználásával tinktúrát készítünk. Az áztatást célszerűen 6 napig folytatjuk úgy, hogy naponta többször összerázzuk, közben sötét, hűvös helyen tároljuk. A kivonatot többrétegű mullon, majd papíron szüljük, végül 48 óráig sötét helyen ülepítjük. A tinktúra előállításánál a porított drog:kivonószer aránya 1:6.100 g szárított növényanyagból 500 g tinktúrát nyerünk. A tinktúra világos sárgásbarna színű, áttetsző, jellemző szagú.

4. példa

Liofilizátum előállítása

Az Euphorbia hirta L. szárát és levelét légszáraz állapotban IV. szitafinomságúra porítjuk, vagy ugyanezen növényrészecskéket frissen használjuk fel. A friss növényrészeket négyszeres, a porított szárított növényt hatszoros mennyiségű 50 °C hőmérsékletű vízzel turboextrakcióval kivonjuk (20 perc). A keveréket centrifugáljuk (10 perc fordulatszám 3000). A felülúszót szűrjük, majd víztartalmát liofilizálással (fagyasztva szárítással) eltávolítjuk. A nyert termék kitermelési adata 5:1,2, azaz 5 rész növényanyagból (légszáraz),

1,2 rész liofilizátumot nyerünk, a liofilizátum sárgásbarna színű, enyhén higroszkópos laza por. Jellemző szagú, kesernyés ízű.

5. példa

Porlasztva szárított száraz kivonat előállítása

Az Euphorbia hirta L. szárított, porított növényanyagból 30%-os (v/v) etilalkohollal az 1. pont szerinti tinktúrát készítünk. A tinktúrát rotációs vákuumbepárlóban, csökkentett nyomáson, 40 °C hőmérsékleten bepároljuk úgy, hogy kb. az eredeti térfogat 1/3-át nyerjük. Időközben a lombik falán kiváló klorofillt és gyantás anyagokat szűréssel eltávolítjuk. A tiszta oldatot porlasztásos technikával, vákuumban szárazra pároljuk.

HU 208 790 Β

A nyert tennék kitermelési adata 5:0,92, azaz 5 rész növényanyagból (légszáraz) 0,92 rész porlasztva szárított extraktumot nyerünk. A porlasztva szárított anyag sárgás-barna színű, enyhén higroszkópos por. Jellemző szagú, kesernyés ízű.

6. példa

Tabletták előállításása g száraz poralakú koncentrátumhoz amelyet az

5. példa szerint állítottunk elő - 9 g gyógyszerészeti minőségű poralakú keményítőt keverünk, és ezt a keveréket 1 g egyenkénti tömegű tablettákká sajtoljuk.

Az Euphorbia hirta L. növényt és részeit, valamint ezek kivonatait vagy hatóanyagait, valamint az ezekből előállított gyógyászati készítményeket a találmány értelmében az ARC-os és AJDS-es megbetegedések esetén eredményesen használhatjuk fel.

Toxicitási vizsgálatok a/ Az Euphorbia hirta L. növény 5. példa szerint készített liofilizált porából 6, illetve 10 tömeg/térfogat %-os oldatokat készítünk, majd 10-10 CFY mindkét nemű patkánynak gyomorszondán keresztül 5 ml/100 g-ot adunk be. Sem elhullás, sem toxikus tünetek nem észlelhetőek.

b/ Az Euphorbia hirta L. növény 2 példa szerinti kivonatából nőstény ~20 g-os Balb/c egereknek 0,2 ml-t adagolunk parenterálisan.

Semmiféle toxikus tünet nem észlelhető, c/ Az invitro hatékony antivirális koncentráció alkalmazásakor sejtkárosító hatást nem észleltünk.

ARC- és AIDS-ellenes hatás vizsgálata in vitro Az ARC- és AIDS-ellenes hatást a szakirodalom ajánlásainak figyelembevételével (Johnson, Victoria

A.: Evaluation of candidate anti-HIV agents in vitro; In: Aldovini, Anna and Walker, B. D. (Eds.): Techniques in HÍV research. 225. o. Stockton Press, New York-London-Tokyo-Melboume-Hong-Kong, 1990.) a HIV-1 és SIV_mac reverz transzkriptáz enzim aktivitások meghatározásával vizsgáltuk.

A vírus (HTLVhib törzs) replikációját MT4 lymphoblastoid sejtvonalon a cytopathiás hatás mikroszkópos vizsgálatával, a kultúrák felülúszójában a reverz transzkriptáz aktivitás mérésével, valamint immunfluoreszcenciával értékeltük. Megállapítottuk, hogy a kivonat 200-800-szoros hígításban, az inokulummal egyidőben alkalmazva gátolja az in vitro vírusszaporodást.

Permanensen vírustermelő (HÍV provírust tartalmazó) sejtekben antivirális hatást nem lehetett kimutatni. Cytotoxikus hatást a kivonat 50-100-szoros hígítása mellett tapasztaltunk. A gátló hatás a HIV-re nézve specifikus, mivel két más családba tartozó vizsgált vírus (herpes és rhabdo) replikációja a szer jelenlétében zavartalan volt.

Az extraktum közvetlenül és specifikusan gátolta a HIV-1 és a SIV_mac reverz transzkriptáz enzim aktivitását, a kontrollként vizsgált bovin leukosis vírusét ezzel szemben nem.

Claims (7)

1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK

   1. Eljárás az Euphorbia hirta L. növény kivonatát vagy ennek szárazanyagát tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy a növény ismert módon előállított vizes vagy vizes-alkoholos kivonatát vagy ennek elkülönített és adott esetben gyógyszerészeti vivőanyaggal és/vagy más segédanyaggal összekevert szárazanyagát ARC-os és AIDS-es megbetegedések ellen hatásos gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az Euphorbia hirta L. növény kivonatának előállítására a növényt vagy részeit szárított állapotban extraháljuk.
3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az extrakciót fonó vízzel vagy forró, legfeljebb 30 tömeg%, előnyösen legfeljebb 20 tömeg% alkoholt tartalmazó vízzel végezzük.
4. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy alkoholként etanolt alkalmazunk.
5. 5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kivonat szárazanyagának előállítására a vizes vagy vizes-alkoholos kivonatot liofilizáljuk vagy porlasztásos eljárással beszárítjuk.
6. 6. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hatóanyagot oldattá, tinktúrává vagy teává alakítjuk.
7. 7. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hatóanyagot, a száraz poralakú extraktumot ampullákba töltjük, vagy gyógyszerészeti vivőanyag alkalmazásával tablettákká vagy drazsékká alakítjuk.