HU199151B - Process for producing bis-phosphonic acid derivatives - Google Patents

Description

A találmány tárgya eljárás új bisz-foszfonsav-származékok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására.

A találmány tehát egyrészt olyan új biszfoszfonsav-származékok és ezek gyógyászatilag elfogadható sói előállítására vonatkozik, amelyek az (I) általános képlettel jellemezhetők. Ebben a képletben

R* jelentése hidrogénatom vagy 1—10 szénatomot tartalmazó alkil-, 3—8 szénatomot tartalmazó cikloalkil-, fenilvagy olyan, 2—8 szénatomot tartalmazó alkenilcsoport, amely fenilcsoporttal vagy pedig fenil-(1—5 szénatomot tartalmazó) alkilcsoporttal van helyettesítve, és a fenilcsoport adott esetben

1—4 szénatomot tartalmazó alkoxicsoporttal helyettesítve lehet;

R² jelentése hidrogénatom vagy 2—4 szénatomot tartalmazó alkanoilcsoport;

R³, R⁴, R⁵ és R⁶ azonos vagy eltérő jelentéssel hidrogénatomot vagy 1—4 szénatomot tartalmazó alkilcsoportot jelent; azzal a megkötéssel, hogy ha R¹ jelentése metil-, etil-, izopropil- vagy terc-butilcsoport, akkor R², R³, R⁴, R⁵ és R° közül legalább áz egyik hidrogénatomtól eltérő jelentésű.

A találmány tárgya másrészt eljárás csontreszorpció-gátló és artritisz-elleni gyógyászati készítmények előállítására. Ezek a gyógyászati készítmények hatóanyagként az (I) általános képletű bisz-foszfonsav-származékokat vagy ezek gyógyászatilag elfogadható sóit tartalmazzák.

A szakirodalomból már ismertté váltak különböző bisz-foszfonsav-származékok. így például a 89 293/80 sz. japán közrebocsátási iratból a találmány szerinti vegyületekhez hasonló, a helyettesített izoxazolil-csoport

3-helyzetében amino-metilén-bisz-foszfonsav-maradékot tartalmazó, a (B) általános képlettel — a képletben

R‘“ jelentése hidrogén- vagy halogénatom vagy alkilcsoport,

R^2a jelentése hidrogénatom vagy alkilcsoport, és

Y jelentése oxigénatom vagy iminocsoport — jellemezhető vegyületek ismertek.

Az említett japán közrebocsátási iratban azonban csak olyan helyettesített izoxazolil-amino-metilén-bisz-foszfonsav-származékokat írnak le, amelyek metil-, etil-, izopropilvagy terc-butilcsoportot tartalmaznak alkilcsoportként az izoxazolilcsoport alkil helyettesítőjeként, továbbá csak szabad bisz-foszfonsav-származékokról tesznek említést.

Konkréten csak az (I”) általános képletű — a képletben R¹' jelentése metil-, etil-, izopropil- vagy terc-butilcsoport — jellemezhető vegyületek ismerhetők meg az említett japán közrebocsátási iratból.

Ezek a vegyületek az említett japán közrebocsátási irat szerint a mezőgazdaságban felhasználható vegyületek, elsősorban herbicid hatású vegyületek, azonban a leírásban még csak utalás sem található arra, hogy ezeknek a vegyületeknek gyógyhatásúk lenne.

A csontok olyan élő szövetek, amelyek részt vesznek a kalcium reszorpciójában és kicsapásában abból a célból, hogy egy élő szervezeten belül állandó szervetlen egyensúly alakuljon ki. A növekvő csontokban a szervetlen anyagok kicsapódása meghaladja a szervetlen anyagok reszorpcióját (azaz újraoldódását), azonban a csont-reszorpció gyakran meghaladja a csontképződési folyamatot bizonyos speciális megbetegedések, így például az úgynevezett hypercalcemia vagy a Paget-kór esetén. A csont-reszorpció által okozott megbetegedések kezelésére napjainkig, az 1 - (hidroxi-etilidén) -1,1-bisz-foszfonsavat (etidronate), vagy a diklór-metilén-bisz-fosz20 fonsavat (chlodronate) alkalmazták, ezek a vegyületek azonban nem kielégítők egyrészt, mert aktivitásuk nem eléggé nagy, másrészt ártalmas mellékhatásuk is van. így tehát az említett megbetegedések kezelésére kielégít25 hetően alkalmazható gyógyászati készítmények a mai napig nem ismeretesek.

Az izületi gyulladások (artritisek) az ízületek gyulladásos megbetegedései. Ezek közé tartozik a reumatikus izületi gyulladás (artritis) és más analóg, az ízületek gyulladásos folyamataival együttjáró megbetegedések.

Mindenekelőtt a reumatikus artritis a leginkább elterjedt megbetegedés. Ez egy olyan kriptogenetikus krónikus poliartritis, amelynél a fő károsodás abban áll, hogy az úgynevezett intrakapszuláris réteg szinoviális membránja gyúlladásos sérülést szenved. Az artritisek, így például a reumatikus artritis prog40 resszív megbetegedések olyan értelemben, hogy artrikuláris rendellenességeket, így például artrikuláris deformációt, vagy ankylosist okoznak. így tehát ha ezeket a megbetegedéseket nem lehet hatásosan kezelni, akkor _4fi bizonyos esetekben végül súlyos szomatikus ⁴⁰ rendellenességeket okozhatnak.

Az ízületi gyulladások gyógyászati kezelésére napjainkig a legkülönbözőbb gyógyhatású anyagokat használták, így például szteroidokat, például a kortizont és más adrenokortikális hormonokat; nem-szteroid típusú gyulladásgátló ágenseket, például az aszpirint, piroxicam-ot vagy az indometacint; aranytartalmú hatóanyagokat, például az arany-tiomalátot; antireumatikus ágenseket, így például a chloroquine-készítményeket, D-penicillamint; köszvény elleni hatóanyagokat, így például a colchicine-t; valamint immunoszupresszánsokat, így például a cyclop-P phosphamid, azathioprine, methotrexate és levamisole triviális nevű hatóanyagokat.

Ezek az említett hatóanyagok azonban különböző hátrányokkal rendelkeznek, így például olyan káros mellékhatásuk van, amely alkalmazásukat hosszú távon megnehezíti, vagy például hatásuk nem kielégítő.

-3199151

Nyilvánvaló tehát, hogy a klinikai gyógyászatban igen nagy jelentőséggel bírna olyan hatóanyagok alkalmazása, amelyek az ismert hatóanyagoknál kevésbé toxikusak, ugyanakkor kiváló megelőző és gyógyító hatásúak ízületi gyulladások vonatkozásában.

Felismertük, hogy a fentiekben említett (I) általános képletű vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik újak és az említett követelményeknek megfelelnek, azaz kiváló csontreszorpció-gátló aktivitásúak, és így képesek meggátolni a csont-reszorpció által okozott hypercalcemia-t, valamint kiváló antiartritikus hatásúak is.

A fentiekben megadott általános képletek helyettesítő-jelentéseinél az 1—4 vagy 1—5 szénatomot tartalmazó alkilcsoportok egyenes vagy elágazó láncúak. Példaképpen melegíthetjük a metil-, etil-, propii-, izopropil-, butil-, izobutil-, szek-butil-, terc-butil-, pentil(arnil-), izopentil- vagy neopentil csoportot. Az 1 —10 szénatomot tartalmazó alkilcsoportok egyenes vagy elágazó láncúak, és az előzőekben említett rövidszénláncú alkilcsoportokon túlmenően például az ilyen csoportokra megemlíthetjük az η-hexil-, n-heptil-, π-oktil-, n-nonil-, η-decil-, izoheptil-, 2-etil-butil-, 2-etil-pentil- vagy a 4-etil-heptilcsoportot. A 3—8 szénatomot tartalmazó cikloalkilcsoportokra példaképpen megemlíthetjük a ciklopropil-, ciklobutil-, ciklopentil- vagy ciklooktilcsoportot. A 2—8 szénatomot tartalmazó alkenilcsoportok közül egyenes vagy elágazó láncú csoportok, például a vinil-, alΙΠ-, izopropenil-, 2-butenil-, 2-metil-2-propenil-, 3-pentenil-, 4-metil-3-pentenil-, 4-tnetil-3-hexenil- vagy 4-etil-3-hexenilcsoport tartozik. Ezek az alkenilcsoportok adott esetben helyettesítve lehetnek fenilcsoporttal. Jellegzetes fenil-alkenil-csoportként említhetjük a sztiril3-fenil-2-propenil- vagy a 4-fenil-2-butenilcsoportot.

A „fenil-(1—5 szénatomos)alkilcsoport, amely adott esetben 1—4 szénatomot tartalmazó alkoxicsoporttal van helyettesítve kifejezés alatt például a benzil- fenetil-, fenil-propil- vagy fenil-butilcsoportot értjük, amelyek helyettesítetlenek, vagy metoxi-, etoxi-, propoxi-, butoxi-, izopropoxi- vagy izobutoxi-csoporttal lehetnek helyettesítve. Az említett alkoxiesoportok a fenilcsoport bármelyik helyzetében kapcsolódhatnak.

A „2—4 szénatomot tartalmazó alkanoilcsoport csoportra példaképpen megemlíthetjük az acetil-, propionil- vagy butanoilcsoport. A fenti helyettesítők közül R¹ jelentése előnyösen 1—5 szénatomos alkil- vagy cikloalkilcsoport. Még előnyösebben ez a helyettesítő metil-, pentil- vagy ciklopropilcsoport. Az R¹ csoport a fenti általános képletekben az izoxaz'ol gyűrű 4- vagy 5-helyzetében kapcsolódhat. A találmány szerinti vegyületek közé tartoznak tetraészterek (amelyekben R³, R⁴, R⁵ és R⁶ egyaránt rövidszénláncú alkilcsoportokat jelent), monoészterek, diész4 terek és triészterek (az utóbbiaknál R³, R⁴, R⁵ és R⁶ közül egy, kettő vagy három jelent

1—4 szénatmos alkiiesoportot.

A találmány szerinti szabad foszfonsavak sókat képezhetnek. Így tehát a találmány szerinti hatóanyagok közé tartoznak az (I) általános képletű vegyületek gyógyászatilag elfogadható sói. Az ilyen sókra példaképpen említhetünk szervetlen bázisokkal képzett sókat, így például alkálifémekkel, például nátriummal vagy káliummal képzett sókat, alkáliföldfémekkel, így például kalciummal vagy magnéziummal képzett sókat; ammóliumsókat; szerves bázisokkal, például metil-aminnal, etil-aminnal, dimetil-aminnal, dietil-aminnal, trimetil-aminnal, trietil-aminnal, ciklohexil-aminnal, etanol-aminnal, vagy dietanol-aminnal képzett sókat; és bázikus aminosavakkal, például lizinnel vagy ornitinnel képzett sókat.

A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületeket az A. reakcióvázlatban bemutatott módon állíthatjuk elő. Az A, reakcióvázlatban R¹, R², R³, R⁴, R⁵ és R⁶ jelentése a korábban megadott, R³’, R^4>, R⁵’ és R⁶’ azonos vagy eltérő jelentéssel 1—5 szénatomot tartalmazó alkiiesoportot jelent, R⁷, R⁸, R⁹ és R'° azonos vagy eltérő jelentéssel 1—4 szénatomot tartalmazó alkiiesoportot jelent és X jelentése halogénatom.

1. módszer

E módszer értelmében egy (II) általános képletű 3-amino-izoxazol-származékot, egy (III) általános képletű ortohangyasav-(rövidszénláncú)alkil-észtert és egy (IV) általános képletű dialkil-foszfitot összekeverünk megfelelő mennyiségekben vagy a (IV) általános képletű vegyületet fölöslegben használva, majd az elegyet melegítéssel reagáltatjuk. Nem feltétlenül szükséges a reakcióhoz oldószer használata. A reagáltatást általában 100°C és 200°C közötti hőmérsékleten, előnyösen 150°C körüli hőmérsékleten hajtjuk végre, 10—60 perces reakcióidővel.

Az így kapott (V) általános képletű reakciótermék elkülönítése és tisztítása céljából például a reakcióelegyet szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztíthatjuk, eluálószerként metanol és kloroform elegyét használva.

Ha egy (II) általános képletű 3-amino-izoxazol-származékot és egy (III) általános képletű ortohangyasav-(1—4 szénatomos)alkil-észtert reagáltatunk, akkor köztitermékként egy (IX) általános képletű imino-éter-származék — a képletben R*’, R⁷ és R⁸ jelentése a korábban megadott —, különíthető el.

Egy ilyen imino-éter-származék azután egy (IV) általános képletű dialkil-foszfittál továbbreagáltatva egy (V) általános képletű vegyületté alakítható.

Az (V) általános képletű reakciótermékek elkülönítése és tisztítása céljából tehát a reakcióelegyet közvetlen is alávethetjük szilikagélen oszlopkromatografálásnak, vagy pe-4199151 dig alternatív módon úgy járhatunk el, hogy először a reakcióelegyet kloroform és víz elegyével mossuk, az oldószert kidesztilláljuk és a maradékot vetjük alá szilikagélen oszlopkromatográfiás tisztításnak.

Az R² helyén 2—4 szénatomos alkanoilcsoportot hordozó végtermékek előállítása céljából valamely (V) általános képletű vegyületet (különösen valamelyik észterét) acilezünk. Az acilezéshez valamely (V) általános képletű vegyületet mólekvívalensnyi mennyiségben vett vagy fölöslegben vett acilezőszerrel reagáltatunk közvetlenül vagy pedig egy oldószerben. Acilezőszerként használhatunk például savanhidridet vagy savhalogenideket. A reagált'atáshoz oldószerként például benzolt, toluolt vagy dietilén-glikol-metilétert használhatunk. A reagáltatást célszerűen melegítés közben hajtjuk végre.

A képződött bisz-foszfonátok a megfelelő bisz-foszfonsavakká alakíthatók hidrolízis útján. A hidrolízist rendszerint úgy hajtjuk végre, hogy tömény sósavoldattal alkotott oldatot visszafolyató hűtő alkalmazásával forralunk. Alternatív módon a bisz-foszfonátokat reagáltathatjuk egy erős savval vagy egy trimetil-szilil-halogeniddel víztől mentes oldószerben. Az utóbbi módszerhez általában kereskedelmi forgalomban kapható, vízmentes hídrogén-bromid ecetsavval készült oldatát használjuk közvetlenül vagy megfelelően hígítva, hogy pedig jód-trimetil-szilánt használunk olyan oldószerekben oldva, mint például a szén-tetraklorid, dimetil-formamid, kloroform vagy toluol. Ami a hőmérsékletet illeti, a hidrolizálást. végezhetjük hűtés vagy melegítés közben. így például ha az észtert egy trimetil-szilil-halogeniddel hidrolizáljuk — 10°C-on vagy ennél alacsonyabb hőmérsékleten, akkor részlegesen hidrolizált terméket kapunk.

Ha a bisz-foszfonsavat sóvá kell alakítani, akkor egy bázissal, így például nátrium-hidroxiddal, kálium-hidroxiddal, ammóniával vagy szerves aminnal reagáltatjuk hagyományos módon.

2. módszer

E módszer értelmében egy mól (VI) általános képletű foszfor-trihalogenid és fölöslegben vett, előnyösen 2—10 mól (VII) általános képletű trialkil-foszfit elegyét először reakcióba visszük például 40—100°C-on, előnyösen 60—80°C-on 15—30 percen át, majd az így kapott reakcióelegyhez hozzáadjuk a (VIII) általános képletű szubsztituált izoxazol-3-formamidot és az így kapott reakcióelegyet például 40—100°C-on, előnyösen 60— 80°C-on néhány órán át reagáltatjuk. A reakció lefútását könnyen ellenőrizhetjük vékonyrétegkromatográfiásan (futtatószerként kloroform és metanol elegyét használva). A reakció befejeződése után a fölös trialkil-foszfitot desztillálással eltávolíthatjuk.

Ezt követően a kapott termék elkülönítését és tisztítását, illetve az acilezést és a hidrolizálást az 1. módszernél ismertetett módon hajthatjuk, végre.

A fentiekben említett előállítási módszereken túlmenően az (I) általános képletű vegyületek előállíthatok a legkülönbözőbb módszerekkel. így például a 89 293/80 japán közrebocsátási iratban ismertetett módszer értelmében először egy szabad bisz-foszfonsavat állíthatunk elő, majd az utóbbit kívánt esetben észterezhetjük vagy sóképzési reakcióba vihetjük.

Az (I) általános képletű végtermékek elkülönítését és tisztítását olyan hagyományos módszerekkel végezhetjük, mint például az extrahálás, kristályosítás, átkristályosítás vagy különböző kromatográfiás módszerek.

Az (I) általános képletű vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik tehát csontreszorpció-gátló hatásúak és ugyanakkor a csont-reszorpció által okozott hypercalcemia gátlására is képesek. így tehát az (I) általános képletű vegyületeket és gyógyászatilag elfogadható sóikat felhasználhatjuk csont-reszorpció által okozott hypercalcemia, Paget-kór, metasztázisos osteocarcinoma, osteopsathrosis, gyulladásos artritisek, így például krónikus reumás ízületi gyulladás után bekövetkező erős csont-reszorpció gyógyítására vagy megelőzésére. Az (I) általános képletű vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik ráadásul kiváló gyulladásgátló hatásúak, valamint nyugtató és fájdalomcsillapító hatásuk is van. Az (I) általános képletű vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik antiartritiszes hatását adjuvánssal kiváltott ízületi gyulladás vonatkoztatásában vizsgáltuk és a vizsgálatok során megállapítottuk, hogy egyaránt van megelőző és gyógyító hatásuk.

Az adjuvánssal kiváltott ízületi gyulladást széles körben hasznosítják az adott szakterületen az artritiszes megbetegedések tanulmányozására, minthogy ennek eredményeképpen úgynevezett polyarthritis chronica alakul ki, amely megbetegedés analóg az emberi reumás ízületi gyulladással.

Miként a későbbiekben részletesen ismertetjük, a találmány szerinti vegyületek az adjuvánssal kiváltott ízületi gyulladás vonatkoztatásában megelőző és gyógyító hatást mutatnak. Bár nem teljesen világos, hogy milyen mechanizmus alapján van a találmány szerint vegyületeknek antiartritiszes hatása, feltételezhető, hogy a találmány szerinti vegyületeknek közvetlen gátló hatása van az artritiszes megbetegedések szimptómái közül legalább a gyulladásos szimptómák vonatkozásában.

összefoglalóan megállapítható tehát, hogy a találmány szerinti vegyületek minden olyan ízületi gyulladás esetén hasznosíthatók, amelyek gyulladást okoznak. A találmány szerinti vegyületekkel kezelhető megbetegedések közé tartoznak reumás ízületi gyulladások, kriptogenetikus poliartritiszek, így az 5

-5199151 ifjúkori reumás artritisz (beleértve a Still-kórt), merevgörcsös csontvelőgyulladás, pszoriatikus artritisz, Reiter-kór, stb; reumás láz (akut reumás artritisz); artritiszes szimptómákat okozó megbetegedések, így többek 5 között köszvényes és metabolikus ízületi megbetegedések, például a köszvény, pszeudoköszvény, Wilson-kór; tüdő hipertrófiás ízületi gyulladása, sarcoidosis, fekélyesedő colitis, csipőbélgyulladás, Whipple-kór; máj- 10 megbetegedések, hemofiliás artritisz, hemoglobinopathia, hemochromatosis járulékos pajzsmirigy-hyperergasia, hypothyroidismus (pajzsmirigy csökkent működése), szisztémikus scleroderma (dermatosclerosis), szisztémikus bőrtuberkolózis, a Behcet-szindróma, traumatikus ízületi gyulladás, valamint fertőzéses ízületi gyulladások, igy például a genynyesedő ízületi gyulladás.

A következőkben azokat a kísérleti mód- 20 szereket, illetve eredményeket ismertetjük, amelyek bizonyítják a találmány szerinti (I) általános képletü vegyületek farmakológiai hatékonyságát.

(I) Hypercalcemía (emelkedett vérkalciumszint) vonatkozásában kifejtett gátló hatás

A kísérletekben mellékpajzsmirigy-hormon (paratiroid hormon; a továbbiakban a „PTH rövidítéssel fogjuk jelölni) beadása útján kiváltott hypercalcemiában szenvedő patkányokat használunk, és a kísérleti vegyület beadása következtében a vérszérum kalciumtartalmában bekövetkező csökkenést mérjük. 35

Kísérleti módszer

A Peptide Laboratory cég által gyártott humán 1—34 PTH-ból 30 μ/kg dózist feloldunk olyan fiziológiás konyhasó oldatban, 40 amely 0,1% BSA-t (borjuszérum-albumin) tartalmaz, így ml-ként 6 pg PTH-t tartalmazó fiziológiás konyhasó oldatot állítunk elő.

Ebből az oldatból intravénásán injektálunk 30 pg/kg dózist (azaz az oldat térfogatára vonatkoztatva testsúlykg-ként 5 ml-t) olyan ^5 5 hetes hím Wistar-patkányoknak, amelye8 két előzetesen 20 órán át éheztettünk. Szokásos módon normál kontrollcsoportnak csak. 0,1% BSA-t tartalmazó fiziológiás konyhasó oldatot injektáltunk. 45 perccel a PTH-injekció beadása után a patkányokat éterrel elkábítjuk, majd celiotomia-nak vetjük alá, amelynek során a vért a hasüregből vákuummal működtetett vérgyűjtö csővel összegyűjtjük. A vért azonnal 3000 fordulat/perc sebességgel centrifugálásnak vetjük alá 4°Con 10 percen át a vérszérum elkülönítése céljából. A vérszérumban a kalciumionok (Ca⁺⁺) koncentrációját azonnal megmérjük a Horiba Manufacturing Co. japán cég által Sera 250 márkanéven forgalomba hozott kalciumion-mérőberendezéssel.

A találmány szerinti vegyületeket feloldjuk nátrium-hidroxidot és sósavat használva 7,4 pH-értékű fiziológiás konyhasó oldatban szubkután beadás céljából olyan mennyiségekben, hogy a dózis 2 ml/kg legyen, illetve orális beadás céljából 7,4 pH-értékű desztillált vízben olyan mennyiségekben, hogy a dózis 5 ml/kg legyen. A PTH-injektálás után 24 vagy 72 órával beadjuk a találmány szerinti vegyületeket. A normális kontrollcsoportnak és a kontrollcsoportnak fiziológiás konyhasó oldatot vagy desztillált vizet adunk be. Fiziológiás konyhasó oldatban feloldunk az Armour Co. által gyártott lazaccalcitonint ( a továbbiakban ezt az anyagot az „SCI rövidítéssel fogjuk jelölni) olyan mennyiségben, hogy a dózis 2 ml/kg-nak feleljen meg, majd a PTH-injektálás után 30 perccel szubkután beadjuk.

Mindegyik csoport esetében az eredményeket „átlag± standard hiba értékben fejezzük ki, és az egyes csoportok eredményeit összehasonlítjuk úgynevezett egyutas variáció analízissel. A szignifikancia szintet 5%-nak vesszük.

Eredmények:

Az 1. és 2. táblázatban adjuk meg a szubkután, illetve orális beadás során kapott eredményeket.

Szubkután beadás	(a PTH-injektálás előtt 24 órával beadva)
Kísérleti vegyület	Dózis (/kg)	N	Szerűm Ca (mmól/liter)
normál kontroll	—	5	1,40 + 0,01**
kontroll	-	5	1,56 ± 0,01
12. példa szerinti
vegyület	30 mg	5	1,44 + 0,02**
14. példa szerinti
vegyület	30 mg	5	1,45 ± 0,02**

-6199151

1. táblázat (folytatás)

Szubkután beadás	(a PTK-injektálás előtt 24 órával beadva)
Kísérleti vegyület	Dózis (/kg)	N	Szérum Ca++ (mmól/liter)
normál kontroll	—	5	1,38 + 0,01**
kontroll	-	5	1,49 ± 0,00
SCT	0,03 IU	5	1,07 + 0,02**
1. előállítási	0,3 mg	5	1,43 ± 0,02**
példa szerinti	1,0 mg	5	1,40 ± 0,01**
vegyület	3,0 mg	5	1,36 ± 0,02**
normál kontroll		5	1,40 ± 0,01**
kontroll	-	5	1,52 + 0,01
2. előállítási
példa szerinti
vegyület	30 mg	5	1,41 ±0,02**

**.

P < 0,01

Szubkután beadás	(a PTH injektálás előtt 72 órával beadva)
Kísérleti vegyület	Dózis (/kg)
N	_ / ++ Szerűm Ca (mmól/liter)
normál kontroll	—	5	1,41 ± 0,01**
kontroll	-	5	1,52 + 0,00**
6. példa szerinti	0,1 mg	5	1,42 ± 0,02**
vegyület	0,3 mg	5	1,25 + 0,02**
8. példa szerinti	0,1 mg	5	1,41 ± 0,02**
vegyület	0,3 mg	5	1,27 ± 0,02
normál kontroll	-	5	1,41 ± 0,01
kontroll	-	j	1,50 + 0,02
21. példa szerin-	0,01 mg	5	1,47 ± 0,02**
ti vegyület	0,03 mg	5	1,38 ± 0,01**
	0,10 mg	5	1,22 + 0,03
normál· kontroll		5	1,41 ± 0,02*
kontroll	-	5	1,46 ± 0,02
22. példa szerin-	0,01 mg	5	1,45 ± 0,01**
ti vegyület	0,03 mg	5	1,35 + 0,01**
	0,1U mg	5	1,21 ± 0,02
normál kontroll	—	5	1,43 ± 0,00
kontroll	-	5	1,48 ± 0,02**
23. példa szerinti	0,03 mg	5	1,40 + 0,01**
vegyület	0,1 mg	5	1,33 + 0,01

-7199151

1. táblázat (folytatás)

Szubkután beadás kísérleti vegyület	Dózis (/kg)	(a PTH injektálás előtt 72 őra'val beadva)
N	Szérum Ca++ (mmól/liter)
normál kontroll		5	** 1,34 ± 0,02
kontroll	-	5	1,43 + 0,01**
25. példa szerinti	0,1 mg	5	1,39 ± 0,02**
vegyület	0,3 mg	5	1,22 ± 0,01
normál kontroll		5	1,35 + 0,02
kontroll	-	5	1,44 ± 0,01
25. pe'lda szerinti	0,3 mg	5	1,43 ± 0,03*
vegyület	1,0 mg	5	1,36 ± 0,02
normál kontroll	-	5	1,47 ± 0,02
kontroll	-	5	1,57 ± 0,02**
28. példa szerinti	0,1 mg	5	1,36 ± 0,01**
vegyület	0,3 mg	5	1,18 £ 0,02
ismert vegyület (1. jegyzet)	1,0 mg	5	1,43 ± 0,02
normál kontroll		5	1,35 ± 0,02
kontroll	-	5	1,44 ±
31. példa szerinti	0,1 mg	5	1,20 + 0,01**
vegyület	0,3 mg	5	1,05 + 0,03
normál kontroll	-	5	1,36 ± 0,01*
kontroll	-	5	1,45 ± 0,01
32. példa szerinti	0,1 mg	5	1,41 ± 0,02**
vegyület	. 0,3 mg	5	1,27 ± 0,02
normál kontroll		5	1,38 + 0,01
kontroll	-	5	1,48 + 0,02
Etidronate	10 mg	5	1,44 + 0,01**
1. példa szerinti	30 mg 0,03 mg	5 5	1,40 ± 0,01 1,42 + 0,02**
vegyület	0,1 mg	5	1,33 ± 0,01
kontroll		5	1,51 + 0,03
2. előa'llí tási példa szerinti	o, 1 mg	5	1,39 + 0,02**
vegyület	0,3 mg	5	1,22 + 0,02
normál kontroll		5	1,42 + 0,02*
kontroll	-	5	1,54 + 0,02
3. előállítási példa szerinti	0,3 mg	5	1,45 ± 0,01**
vegyület	1,0 mg	5	1,23 + 0,05

-8199151

1. táblázat (folytatás)

Szubkután beadás

Kísérleti vegyület (a PTH injektálás előtt 72 órával beadva)

Dózis N Szérum Ca⁺⁺ (/kg) (mmól/liter)

normál kontroll	-		5	1,47	+	0,02
kontroll	-		5	1,57	+	0,02
ismert vegyület	0,1	mg	5	1,58	+	0,00
(2. jegyzet)	0,3	mg	5	1,49	+	0,01,
	1,0	mg	5	1,39	+	0,02
ismert vegyület	0,3	mg	5	1,51	+	0,03.
(1. jegyzet)	1,0	mg	5	1,43	+	0,02'
	*. 1	? <	0,05	**.	P	< (

1· jegyzet, a 89293/80 számú japán közrebocsátási iratból ismert /(5-terc-butil-3-izoxazolil)-amino/-metilén-bisz(foszfonsav)

2. jegyzet, a 89293/80 számú japán közrebocsátási iratból ismert /(5-izopropil-3-izoxazolil)-amino/-metilén-bisz(foszfonsav)

2. táblázat

Orális beadas	(a PTH injektálás előtt 24 órával beadva)
Kísérleti vegyület Dózis	N Szérum Ca++
(/kg)	(mmól/liter)

normál kontroll	-		5	1,45	±	0,01*
kontroll	-		5	1,52	+	0,02*
1. előállítási pél-	100	mg	5	1,44	±	0,02**
da szerinti vegyület	300	mg	5	1,41	+	0,01
						**
normál kontroll	-		5	1,40	+	0,01
kontroll	-		5	1,52	+	0,02
8. pe'lda szerinti	30	mg	5	1,48	+	0,02**
vegyület	100	mg	5	1,35	+	0,02
normál kontroll			5	1,42	+	0,02*
'kontroll	-		5	1,54	+	0,02
21. példa	10	mg	5	1,52	+	0,02**
szerinti vegyü-	30	mg	5	1,36	±	0.06**
let	100	mg	5	1,33	t	0,04
normál kontroll	__		5	1,43	+	0,00
kontroll	-		5	1,48	+	0,02
23. példa sze-	30	mg	5	1,49	+	o.oo**
rinti vegyület	100	mg	5	1,41	+	0,02
*. P <	0,05			P <		0,01

-9199151

2. táblázat (folytatás)

Orális beadás	(a PTH injektálás előtt
72 órával	beadva)
Kísérleti vegyület	Dózis (/kg)	N	Szérum Ca++ (mmól/liter)
normál kontroll	—		5	1,40	+	* 0,01
kontroll	-		5	1,49	+	0,01
22. példa szerin-	30	mg	5	1,44	+
ti vegyület	100	mg	5	1,28	+	0,04
28. példa sze-	30	mg	5	1,46	±	θ,θ2**
rinti vegyület	100	mg	5	1,31	+	0,04
normál kontroll			5	1,46	+	0,01
kontroll	-		5	1,52	i	0,02
1. előállítási pél-	30	mg	5	1,48	±
da szerinti vegyület	100	mg	5	1,16	+	0,03
normál kontroll	—		5	1,41	+	Λ 0,02
kontroll	-		5	1,55	+	0,01
2. előállítási pél-	30	mg	5	1,46	+	θ>θ2**
da szerinti vegyület	100	mg	5	1,16	+	0,07

*. P <

(2) A csont-reszorpció gátlása

Egy patkány bal oldali mellső lábát mozgásképtelenné tesszük azáltal, hogy átvágjuk az úgynevezett brachiális izmot. A csontnál így kialakuló sorvadásra a kísérleti vegyület által kifejtett gátló hatást a következőképpen vizsgálhatjuk.

Kísérleti módszer

A kísérletekben 5 hetes Wístar-patkányokat használunk. A csont sorvadását Kenny, A.D. által a Calcif. Tissue Int., 37, 126—133 (1985) szakirodalmi helyen ismertetett módszerrel váltjuk ki. Közelebbről az állat (patkány) bal oldali mellső lábának plexus brachialis-át vágjuk, thiopentallal végzett érzéstelenítés közben úgy, hogy a bal oldali mellső láb mozgásképtelenné váljon. Semmilyen kezelést nem végzünk a jobb oldali mellső lábbal (kontroll céljából). Egy úgynevezett pszeudooperált csoportba tartozó patkányokat ugyanígy kezelünk azzal a különbséggel, hogy nem vágjuk át a plexus brachialis-t. Két hét

0,05, **. P < 0,01 elteltével mind a bal oldali, mind a jobb oldali felkarcsontot összegyűjtjük. A csontról a lágy összekötő szövetet eltávolítjuk, a csontokat gondosan rögzítjük, dehidratáljuk és zsír⁴θ taianítjuk etanollal és száraz tömegüket mérjük. Ezt követően 800°C-on 24 órán át izzítjuk a csontokat, majd a hamu tömegét is mérjük.

A kísérleti vegyületeket ugyanúgy ké45 szítjük elő, mint a fenti (1) kísérleti módszernél, és szubkután adjuk be naponta egyszer 14 napon át az operációt követő nappal kezdődően, az (1) módszernél ismertetett mó₅₀ dón. A kontrollcsoportnak és az úgynevezett pszeudooperált csoportnak csak fiziológiás konyhasó oldatot injektálunk ugyanilyen mó. dón.

Mindegyik csoportra a kísérleti eredményeket „átlag± hiba egységekben fejezzük ⁵⁵ ki, és az egyes csoportok között összehasonlítást végzünk úgynevezett 1-utas variáció analízissel. A szignifíkancia szint 5%.

-10199151

Eredméúyek.

3. táblázat

Do'zis (mg/kg)	N	Csonttömegben különbség	Csonthamu- töinegben különbség
(mg)	(a)	(mg)	(b)
Pszeudooperációs csoport	- 5	-0,4	** + 0,4	-0,4	+ 0,3
Kontrollcsoport	- 5	21,8	± 2>2**	14,7	± 0,7.
1. előállítási	3 4	8,0	± 1,0**	4,8	± 0,5;
pálda szerinti vegyület	10 5	3,2	+ 0,7	1,7	+ 0,5'
Ps zeudooperáciős csoport	5	1,1	i 3,0	0,4	+ 0,8
kontrollcsop. 2. előállítási példa szerinti	- 5	13,6	± 1,3 **	9,6	+ 0,9
vegyület	1,0 5	4,8	± 1,3	3,0	± 0,7

**. P < 0,01 (a) . a nem kezelt felkarcsont - a kezelt felkarcsont száraz tömege száraz tömege (b) . a nem kezelt felkarcsont - a kezelt felkarcsont hamujának tömege hamujának tömege

Patkánynál neuroktómia által kiváltott csontsorvadásra kifejtett hatás

3. táblázat

Szubkután beadás	(2 hét) Baloldali felkarcsont
Kísérleti vegyület	Dózis	N	száraz tömeg (mg)	Hamu tömege (mg)	Hamu tömege/ /száraz tömeg (%)
			**		**
Pszeudooperá-	-	5	120,6+2,7	66,6+1,5	55,2+0,1
ciós csoport
Kontrollcsop.	-	5	96,6+2,8**	51,3±,,4,,	55,3±0,1**
21. példa	0,01	5	1l6,5t1,5**	65,7±.0,9**	56,4+0,2**
szerinti	0,03	5	129,2±1,0**	73,6+0,7**	56,9±0,2**
vegyület	0,1	5	130,1±3,2	72,8±1,8	55,9±0,4

-11199151

3. táblázat (folytatás)

Szubkután beadás Kísérleti vegyület	(2 hét) Baloldali felkarcsont
Dózis	N	száraz tömeg (mg)	Hamu tömege (mg)	Hamu tömege/ /száraz tömeg (%)
Pszeudoope-		5	109,8±2,6	** 61,6±1,6	** 56,1+0,3
racíós csop. kontrollcso-		5	97,3+2,4	52,9±1,6	54,4+0,5
port 1. előállítási	0,1	5	** 113,9±2,0**	64,9±1,2**	** 56,9±0,1**
példa	0,3	5	114,4±2,6	65,4±1,6	57,2±O,3
szerinti vegyület	1,0	5	121,3±2,1**	70,1±1,1	xx 57,8+0,4
	**,	P <	0,01

3. táblázat

Orális beadás Kísérleti vegyület	(2 hét)	hamu tömege/ /száraz tömeg (7)
Dózis	Baloldali	felkarcsont hamu tömege (mg)
N	száraz tömeg (rag)
Pszeudooperaciós csoport Kontrollcsop.	—	5	120,6+2,7	66,6±1,5	-ifié 55,2±0,1
	5	96,6+2,8	51,3+1,4**	55,3±0,1**
21. példa szerinti	3	5	113,0+3,1	64,4+2,3**	54,4+0,2**
vegyület	10	5	115,2+4,0	67,0+1,2**	56,0±0,4**
	30	5	118,7+2,0	65,7+0,9	56,5±0,2
Pszeudoopera-	—	5	** 120,5+2,1	64,7±1,0	XX 53,7+0,2
ciós csoport Kontrollcsop.		5	1O6,O±1,9	54,8+1,0	51,6±0,4**
1. előállítási	10	5	102,8±2,2	54,9+1,3**	53,4+0,3**
példa szerinti	30	5	112,111,4,»	61,0±1>0**	54,4±0,3**
vegyület	1Ü0	5	123,9+2,3	68,9+1,3	55,6±0,2

**. P < 0,01

-12199151 (3) Antiartritiszes hatás

A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületeknek artritiszszel szemben kifejtett kiváló profilaktikus és gyógyító hatását a kővetkező kísérleti mód- 5 szerekkel vizsgálhatjuk, illetve igazolhatjuk.

Közelebbről az antiartritiszes hatás vizsgálata céljából olyan, adjuvánssal kiváltott artritiszt mint kísérleti modellt használunk, amely az emberi reumás ízületi gyulladásra a leginkább emlékeztethető. Kétféle kísérletet hajtunk végre. Az egyik kísérletben a vizsgált vegyületek terápiás hatásának azonosítása céljából a kísérleti vegyületeket már adjuvánssal kiváltott artritiSzben szenvedő állatoknak adjuk be. Egy másik vizsgálatban a vegyületet profilaktikus hatásának vizsgálata céljából a kísérleti vegyületeket az adjuváns beadása után adjuk be, majd vizsgáljuk az esetleg jelentkező artritisz kifejlődését.

A gyógyító, illetve megelőző hatás vizsgálatára szolgáló kísérleteket a következőkben részletesebben ismertetjük.

(3)-l kísérlet:

Terápiás hatás patkányoknál adjuvánssal kiváltott artritiszen

Hím 7 hetes Lewis-patkányok farkába szubkután injekció útján 6 mg/ml dózisban beadunk 0,1 ml olyan szuszpenziót, amely Mycobacterium butyricum vízmentes elpusztúlt sejtjeinek folyékony paraffinnal készült szuszpenziója. 17 vagy 18 nap elteltével mindkét hátsó mancs vastagságát mérjük. Olyan, egyedből álló patkánycsoportot különítünk el, amelyeknél az artritisz észrevehető módon kifejlődött. A csoport kialakítását követő napon a vizsgálandó vegyületet szub22 kután vagy orálisan beadjuk naponta egyszer 14 napon át. Az utolsó beadást követő napon mindkét hátsó mancs esetében a talpak vastagságát ismét megmérjük.

(3)-11 vizsgálat:

Megelőző hatás patkányoknál adjuvánssal kiváltott artritisz vonatkozásában

Hím 6- vagy 7-hetes Lewis-patkányok bal 10 hátsó mancsába szubkután injektálással 6 mg/ml dózisban 0,05 ml olyan szuszpenziót adunk be, amely Mycobacterium butyricum vízmentes elpusztúlt sejtjeinek folyékony parafinnal készült szuszpenziója. Az adjuváns ₁₅ injektálása után a kísérleti vegyületet beadjuk a patkányoknak naponta egyszer 21 napon át. Az utolsó beadást követő napon a patkányok mindkét hátsó lábának vastagságát mérjük.

A (3)-I és (3)-II kísérleteknél a találmány 20 szerinti vegyületeket feloldjuk fiziológiás konyhasó oldatban (pH 7,4) nátrium-hidroxidot és sósavat használva a szubkután beadás céljából olyan mennyiségekben, hogy a dózis 2 ml/kg legyen míg orális beadás cél25 jából 7,4 pH-értékű desztillált vízben olyan mennyiségben, hogy a dózis 5 ml/kg legyen. Egyidejűleg összehasonlító hatóanyagként indometacint szuszpendálunk 0,5%-os metil-cellulóz-oldatban olyan mennyiségben, hogy 3Q a dózis 5 ml/kg legyen. Mindegyik patkányt megmérünk a kísérleti vegyületek beadásának első napján, illetve utolsó napján, és így a tömegek közötti különbséget kiszámítjuk.

Mindegyik csoport esetében a kapott ered35 ményeket „átlag± standard hiba egységekben adjuk meg, és az egyes csoportok között összehasonlítást végzünk 1-utas variációs analízissel. A szignifikancia szint 5%.

4. táblázat

(3)—I kísérlet	Dózis (mg/kg)	Beadási mód	Szubkután Tömegkü- lönbség	beadás Mancs vastagsága (jobb ás bal mancs átlaga) (x 0,01 mm)
normál kontroll		se	aa 6 57+3	AA 658±1
(fiziológiás konyhasó oldat) artritiszes		se	6 32+1**	1401±32xa
kontroll Indometacin	1	PO	6 67+4	956±32**
1. előállítási	0,1	se	6 40+2**	1258±31**
példa szerinti	0,3	se	6 50±2**	1102±36a*
vegyület	1,0	se	6 56+4**
	3,0	se	6 56+1	974+32

-13I

5. táblázat

(3)-I kísérlet	Dózis (mg/kg)	Beadási mód	Orális Tömegkü- lönbség (ε>	beadás Mancs vastagsága (jobb e's bal mancs átlaga) (x 0,01 mm)
Normál kont-		po	6	41+4	** 736±5
roll (fiziológiás konyhasó oldat) artritiszes		po	6	21+2	1460+32
kontroll Indometacin	1	P°	6	** 5H4**	1044+46**
1. előállítási	100	po	6	50+3	1131+36

példa szerinti vegyület

normál kontroll	po	6	** 51,5+3,3	A* 747+2
(fiziológiás konyhasó oldat)
artritiszes	-	po	6	24,2+1,3	1435+48
kontroll				A*	A? A
Indometacin	1	po	6	58,2+1,9	931+26
21. példa	10	po	6	29,7+1,1	1317+35
szerinti ve-	30	po	6	30,0+1,1	1321+35**
gyület	100	po	6	29,7+4,5	1119+52
1. előállítási	10	po	6	23,3+0,9	1435+49*
példa szerin-	30	po	6	32,8+1,7**	1296+45**
ti vegyület	100	po	6	43,3+2,0	1083+36

6. táblázat (3)-II kísérlet

Szubkuta'n beadás

Dózis Beadás (mg/kg) módja

Tömeg- Mancs vastagsága külqnbség baloldali jobboldali

Artritiszes kontroll (fiziológia's konyhasó oldat)

Indometacin 1. előállítási pe'lda szerinti vegyület

-	se	6	230+4	1451+2,8	1298+33
			A	AA	AA
1	po	6	261+7	1096+41**	1028+47
0,1	se	6	238+2	1277+19**	1279+27**
0,3	se	6	239+2	1156+12**	1107+25**
1,0	se	6	233+3	1174+14	1110+28

**. P < 0,05 **. P < 0,01

-14199151

A fentiekben ismertetett kísérleti eredmények nyilvánvalóan bizonyítják, hogy a találmány szerinti eljárással előállított vegyületek gátló hatásúak legalább 0,01 mg/kg dózisban a mancsok duzzadása vonatkozásában, hogyha szubkután adjuk be ezeket a vegyületeket (lásd a (3)-I. kísérletet), és a konkrét esetben használt kísérleti vegyület D₅₀•értéke 0,57 mg/kg. Orális beadás esetén ez a kísérleti vegyület ugyancsak hatásos 100 mg/ /kg dózisban. A (3)-11. megelőző kísérletben a vegyület szintén hatásosnak bizonyul szubkután beadással. Közelebbről szignifikáns gátló hatást fejt ki adjuvánssal beoltott mancs esetében 0,1 mg/kg szubkután dózisban, illetve a másik mancs esetében adjuváns nélkül 0,3 mg/kg-os injekciós dózisban.

(4) Akut toxicitási vizsgálat

Az 1. előállítási példa szerinti vegyűletet szubkután patkányoknak beadva két egymást követő héten át folyamatosan 10 mg/kg/nap dózisban elhullást nem tapasztaltunk.

A találmány szerinti eljárással előállított (I) általános képletű vegyületek a szokásos módon gyógyászati készítményekké alakíthatók a gyógyszergyártásban szokásosan használt hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal összekeverve, és így például porokká, granulákká, tablettákká, kapszulákká, vagy pirulákká alakíthatók orális beadás céljából, továbbá injekciókká alakíthatók intra-artikuláris injektálás céljából, végül pedig nem-perorális beadás céljából például kúpokká, inhaláló szerekké vagy kenőcsökké alakíthatók. Ezekben a gyógyászati készítményekben a találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek dózisa számos tényezőtől függően, így például a beadás módjától vagy a paciens szimptomáitól függően széles határok között változhat, általában azonban felnőtt esetében naponta 10 mg és 1 g előnyösen 10 mg és 100 mg közötti orális beadás esetén, míg 0,1 mg és 100 mg közötti nem-orális beadás esetén.

A találmány szerinti eljárást a következő kiviteli példákkal kívánjuk szemléltetni. A kiindulási anyagok előállítását a referenciapéldákban ismertetjük. Egyes kiindulási anyagok előállíthatok például Kishimoto S. által az Industrial Chemistry, 66(12). 1831 (1963) szakirodalmi helyen ismertetett módszerrel vagy Karto, H. és munkatársai által a 4887/62 számú japán közrebocsátási iratban ismertetett módszerrel.

Az (I) általános képletű vegyületek körébe tartozó ismert vegyületek előállítását az úgynevezett előállítási példákban írjuk le.

1. referenciapélda (a 15. példa szerinti vegyülét kiindulási anyaga)

4,7. g fém nátrium 92 ml etanollal készült oldatához 0°C-on cseppenként hozzáadjuk 20 g 2-heptanon és 26 g dietil-oxalát elegyét, majd a jeges fürdő eltávolítása után a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 3 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyet bepároljuk, majd a visszamaradó sziruphoz először 200 ml vizet adunk, majd jeges hűtés közben a pH-értéket vizes 10%-os sósavoldattal 1-re beállítjuk. 300—300 ml benzollal háromszor végzett extrahálás után az egyesített extraktumot 100 ml vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk, így 38 g mennyiségben folyadék formájában hexanoil-piroszőlősav-etil-észtert kapunk.

g hexanoil-piroszőlősav-etil-észter 190 ml etanollal készült elegyéhez hozzáadunk

14,4 g hidroxil-amfn-hidrokloridot és 16 g nátrium-hidrogén-karbonátot, majd az így kapott, elegyet visszafolyató· hűtő alkalmazásával 3 órán át forraljuk. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékletre lehűtjük, majd az oldhatatlan anyagokat szűréssel elkülönítjük, és a szűrletet bepároljuk. A kapott maradékot 500 ml kloroformban oldjuk, majd a képződött oldatot vízzel mossuk és bepároljuk. így 36 g mennyiségben folyadék formájában 5-pentil-3- (etoxi-karbonil) -izoxazolt kapunk.

g 5-pentil-3-(etoxi-karbonil)-izoxazol 105 ml tömény vizes ammónium-hidroxid-oldattal készült elegyét egy éjszakán át intenziven keverjük, majd a reakcióelegyet szűrjük és a kiszűrt csapadékot vízzel mossuk és szárítjuk. így 20 g mennyiségben 5-pentil-3-karbamido-izoxazolt kapunk.

Ezt követően 77,5 ml, 8,3 g nátrium-hidroxidot tartalmazó 10%-os vizes nátrium-hipoklorit-oldathoz hozzáadunk 19 g 5-pentil-3-karbamido-izoxazolt, majd az így kapott elegyet szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet 40 perc leforgása alatt 60 ml forrásban lévő vízbe csepegtetjük, majd a képződött vizes elegyet visszafolyató hűtő alkalmazásával további 40 percen át forraljuk. Ezután a reakcióelegyet gyorsan lehűtjük, amikor kristályok képződnek. A képződött kristályokat kiszűrjük és vízzel mossuk. így 10 g 3-amino-5-pentil-izoxazoIt kapunk.

1. példa (X) képletű vegyület

4,9 g 3-amino-5-metil-izoxazol, 8,8 g ortohangyasav-etil-észter és 13,8 g dietil-foszfit elegyét 150°C-on 40 percen át keverjük, majd a reakcióelegyet szobahőmérsékletre visszahűtjük és a terméket sziíikagél oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként 2 térfogatit metanolt tartalmazó kloroformot használva. így 4,8 g mennyiségben olaj formájában a cím szerinti vegyűletet, azaz ((5-metil-3-izoxazol)-amino)-metilén-bisz (foszfonsav-dietil-észter)-t kapunk.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) tömegspektrum (a következőkben a „FAB Mass rövidítéssel jelöljük): 385 (M+l) (ii) magmágneses rezonancia spektrum (a következőkben az „NMR-spektrum

-15199151 rövidítés alatt fogjuk említeni): CDCI3 -bán:

δ: 1,3 (2H, CH₃CH₂OX4)

2,3 (3H. CH₃)

4,0-4,4 (8H, CH₃CÜ₂OX4)

4,52 (1H, NHCH-)

5,60 (1H, H az izoxazolgyűrűben)

2. példa — (XI) képletű vegyület

2,0 g 3-amino-5-ciklopropil-izoxazol, 3,0 g ortohangyasav-etil-észter és 9,1 g dietil-foszfit keverékét 160°C-on 2,5 órán át keverjük, majd a reakcióelegyet szobahőmérsékletre visszahűtjük és a terméket szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként 2 térfogat% metanolt tartalmazó kloroformot használva. így 2,5 g mennyiségben olaj formájában ((5-ciklopropil-3-izoxazolil)-amino) -met ilén-bisz/foszfonsav-dietil -észter) -t kapunk.

A termék íiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) halványsárga olaj (szobahőmérsékleten) (ii) FAB Mass: 411 (M+l), 365—273 (iii) NMR-spektrum (CDC1₃):

CH δ: 0,84-1,10 (4H,-CH^| *)

CH₂

1,34 (12H, -OCH₂CH₃)

1,92 (12H,-CH<| )

CH₂

2,04 (1H, NH)

4,04-4,40 (8H, -OCH₂CH₃)

4.48 (1H, -NHCH-)

5.48 (1H, (XII) képletű csoport.

A b) módszerrel előállított termék fizikai jellemzői megegyeznek az itt leírtakkal.

A 2. példában ismertetett módon állíthatók elő a következőkben ismertetésre kerülő vegyületek.

3. példa — (XIII) képletű vegyület ((5-Ciklohexil-3-izoxazolil)-amino)-metilén-bisz (foszfonsav-etil-észter) (i) sárga olaj (ii) FAB Mass: 453 (M+l), 407, 315 (iii) NMR-spektrum (CDC1₃): δ: 1,30 (12H, -OCH₂CH₃) ^CH₂—ch_2X

1,20-2,20 (10Η,-CH I I CH₂) ^x CH₂-CH₂

1,84 (1H, -NHCH-)

2,64 (1H, (XIV) képletű csoport 4,04-4,46 (8H, -OCH₂CH₃)

4.50 (1H, -NHCH-)

5.50 (1H, (XV) képletű csoport Kiindulási vegyület: 3-amino-3-ciklohexil-izoxazol.

4. példa — (XVI) képletű vegyület ((5-n-propil-3-izoxazolil) -amino) -metilén-bisz(foszfonsav-dietil-észter) (i) sárga olaj (ii) FAB Mass: 413 (M+l), 367, 275 (iii) NMR-spektrum (CDC1₃):

δ: 0,96 (3H, -CH₂CH₂CH₃) ₅ 1,30 (12H, -OCH₂CH₃)

1,68 (2H, -CH₂CH₂CH₃)

1,76 (1H, -NHCH)

2,59 (2H, CH₂CH₂CH₃)

4,02—4,46 (8H, -OCH₂CH₃)

4,48 (1H, -NHCH-)

5,54 (1H, (XV) képletű csoport

Kiindulási vegyület: 3-amino-5-n-propil-izoxazol.

5. példa — (XVII) képletű vegyület ((5-fenil-3-izoxazolil)-a minő)-metil én-bisz (foszfonsav-dietil-észter) (i) sárga olaj _9n (ii) FAB Mass: 447 (M+l), 401, 309 (iii) NMR-spektrum (CDC1₃):

δ: 1,30 (12H, -OCH₂CH₃)

4,06—4,44 (8H, -OCH₂CH₃)

4,62 (1H, -NHCH-)

6,10 (1H, (XV) képletű csoport 7,34—7,82 (5H fenilcsoport)

Kiindulási vegyület: 3-amino-5-fenil-izoxazol

6. példa — (XVIII) képletű vegyület

2,5 g ((5-ciklopropil-3-izoxazolil)-amino) -metilén-bisz(foszfonsav-dietil-észter) 25 ml tömény sósavoldattal készült oldatát visszafolyató hűtő alkalmazásával 3,5 órán át forraljuk, majd bepároljuk. A maradékhoz metanolt és acetont adunk, amikor 1,7 g mennyiségben ((5-ciklopropil-3-izoxazolil) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav)-at kapunk csapadékként.

(i) o.p.: 176—178°C (ii) FAB Mass: 299 (M+l), 217 (iii) NMR spektrum (D₂O)

CH₂ /

6:0,80-1,16 (4H,-CH ) \h₂ ch₂ z

1,84—2,12 (1H,-CH ) \h₂

4,08 (1H, -NHCH-)

5,82 (1H, (XV) képletű csoport (iv) Elemzési eredmények a

C₇H_l2N₂O₇P₂X0,5 H₂O képlet alapján:

C% H% N% P%

Számított: 27,37 4,27 9,12 20,17

Talált: 27,14 4,02 9,05 20,09.

A 6. példában ismertetett módon a következő vegyületek állíthatók elő.

7. példa — (XIX) képletű vegyület ((5-Ciklohexil-3-izoxazolil)-amino)-meti65 lén-bisz (foszfonsav)

-16199151 (i) o.p.: 208—209°C (ii) FAB Mass: 341 (M+l), 259, 177 (iii) NMR-spektrum (D₂O) ,CH₂—CH₂\

-2,12 (10H,-áT fi: 1,20-2,12 (10H,-CH CH₂) 'CH₂—CHf

2,68 (1H, (XX) képletű csoport 4,06 (1H, -NHCH-)

5,86 (1H, (XV) képletű csoport (iv) Elemzési eredmények a

C|₀H₁₈N₂O₇P₂X0,3 H₂O képlet alapján:

C% H% N% P%

Számított: 34,74 5,42 8,11 17,92

Talált: 34,65 5,14 8,15 18,06

8. példa — (XXI) képletű vegyület ((5-n-Propil-3-izoxazolil)-amino)-metilén-bisz(foszfonsav) (i) o.p.: 152—153°C (ii) FAB Mass: 301 (M+l), 219 (iii) NMR-spektrum (D₂O) fi: 0,92 (3H, -CH₂CH₂CH₃)

1,66 (2H, -CH₂CH₂CH₃)

2,62 (2H, -CH₂CH₂CH₃)

4,12 (1H, -NHCH-)

5,90 (1H, (XV) képletű csoport (iv) Elemzési eredmények a C₇H₁₄N₂O₇P₂X0,4 H₂O képlet alapján:

C% H% N% P%

Számított: 27,36 4,85 9,11 20,16 Talált: 27,34 4,55 9,13 20,39

9. példa — (XXII) képletű vegyület ((5-Fenil-3-izoxazoiil) -amino) -metilén-bisz(foszfonsav) (i) o.p. 237—238°C (bomlik) (ii) FAB Mass: 335 (M+l), 253 (iii) NMR-spektrum (D₂O-ban K₂CO₃-dal) 6:3,96 (1H, -NHCH-)

6,44 (1H, (XV) képletű csoport 7,44—7,90 (5H, fenil) (iv) Elemzési eredmények a C₁₀H₁₂N₂O₇P₂ képlet alapján:

C% H% N% P%

Számított: 35,94 3,62 8,38 18,54

Talált: 36,09 3,79 8,12 18,85.

10. példa — (XXIII) képletű vegyület

2,2 g 3-amino-5-etil-izoxazol, 3,4 g ortohangyasav-etil-ésfcter és 8,1 g dietil-foszfit elegyét 150—155°C-on 45 percen át keverjük, majd a reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk és a kapott maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként 0,5—2 térfogat% metanolt tartalmazó kloroformot használva. így 5,7 g menynyiségben olaj formájában ((5-etil-3-izoxazolil)-amino)-met ilén-bisz (foszfonsav-dietil-észter)-t kapunk.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) FAB Mass: 399 (M+l) (ii) NMR-spektrum (CDC1₃):

fi: 1,1-1,5 (15H, -OCH₂CH₃X4, -CH₂CH₃)

2,64 (2H, -CH₂CH₃)

4,0-4,4 (8H, -OCH₂CH₃X4)

4,50 (1H, -NHCH-)

5,56 (1H, N az izoxazolgyűrűben)

11. példa — (XXIV) képletű vegyület

60 ml ecetsavanhidridben feloldunk 6 g ((5-metil-3-izoxazolil) -amino) -metiién-bisz(foszfonsav-dietil-észter)-t, majd az így kapott oldatot visszafolyató hűtő alkalmazásával 1 éjszakán át forraljuk. Ezt követően a reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk, majd a visszamaradó szirupot kloroformmal feloldjuk. A kapott oldatot vízzel mossuk, szárítjuk, és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográ20 fiásan tisztítjuk, eluálószerként 0,5—2 térfogat% etanolt tartalmazó kloroformot használva. így 5,2 g mennyiségben halványsárga szirup formájában (N-acetil-(5-metil-3-izoxazolil)-amino)-metilén-bisz(foszfonsav-dietil25 -észter)-t kapunk.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők· (i) FAB Mass: 427 (M+l) (ii) NMR-spektrum (CDC1₃):

fi: 1,32 (12H, -OCH₂CH₂X4)

2,12 (3H, -NCOCH₃)

2,46 (3H, -CH₃)

4,0-4,4 (8H, -OCH₂CH₃X4)

6,06 (1H, -NCH)

6,56 (1H, H az izoxazolgyűrűben)

12. példa — (XXV) képletű vegyület Jeges hűtés közben 2 g (N-acetil-(5-metil-3-izoxazolil)-amino)-met ilén-bisz (foszfon40 sav-dietil-észter) 20 ml szén-tetrakloriddai készült oldatához hozzáadunk 2,68 ml jód-trimetil-szilánt, majd a reakcióelegy hőmérsékletét szobahőmérsékletre melegedni hagyjuk és ezután ezen a hőmérsékleten 1 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet bepárol⁵ juk, majd a maradékhoz metanolt adunk és a kapott elegyet ismét bepároljuk. Az így kapott maradékot dietil-éterrel, hexánnal és acetonnal mossuk. Az ekkor kapott csapadékot aceton és hexán elegyéből átkristályosítjuk, így 0,5 g mennyiségben (N-acetil-(5-metil-3-izoxa zolil)- amino) -met ilén-bisz (foszfonsav)-at kapunk kristályok formájában.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a követgg kezők:

(i) Elemzési eredmények a C₇H,₂N₂O₈P₂ képlet alapján:

C% H% N%

Számított: 26,77 3,85 8,92 „ Talált: 26,98 3,84 8,72 ⁶⁰ (ii) FAB Mass: 315 (M+l) (iii) NMR-spektrum (D₂O): fi: 2,10 (3H, NCOCHj)

2,48 (3H, -CH₃)

5,32 (1H, NCH)

6,50 (1H, H az izoxazolgyűrűben)

-17199151 .31

13. példa — (XXVI) képletű vegyület Jeges hűtés közben 1,6 g ((5-metil-3-izóxazolíl) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav-dietil-észter) 16 ml szén-tetrakloriddal készült oldatához cseppenként hozzáadunk 1,2 ml (2 mólekvivalens) jód-trimetil-szilánt, majd az így kapott elegy hőmérsékletét szobahőmérsékletre melegedni hagyjuk, és.ezután az elegyet ezen a hőmérsékleten 1 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet bepároljuk, majd a maradékhoz metanolt adunk és a kapott elegyet ismét bepároljuk. Az így kapott maradékot hexánnal mossuk, majd O,1N vizes nátrium-hidroxid-oldatban feloldjuk és a kapott oldat pH-értékét 7-re beállítjuk. Az oldatot ezután felvisszük HP-20 márkanevű gyantából készült oszlopra, majd vízzel eluálunk. így 0,2 g mennyiségben í(5-metil-3-izoxazolil)-amino)-metilén-bisz (foszfonsav-etil-észter-nátriumsó)-t kapunk csapadék formájában.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) Elemzési eredmények a C₉H₁₆N₂Na₂O₇P₂XH₂O képlet alapján:

C% H% N%

Számított: 27,71 4,65 7,18 Talált: 27,67 4,32 7,22 (ii) FAB Mass: 327 (M+l) (iii) NMR-spektrum (D₂O): δ: 1,18 (6H, -OCH₂CH₃X2)

2,30 (3H, -CH₃)

3,8-4,8 (4H, OCH₂CH₃X2)

3,96 (1H, -NHCH-)

5,82 (1H, H az izoxazolgyűrűben)

14. példa — (XXVII) képletű vegyület Jeges hűtés közben 1,6 g ((5-metil-3-izoxazolil)-amino)-metilén-bisz (foszfonsav-dietil-észter) 16 ml szén-tetrakloriddal készült oldatához hozzáadunk cseppenként 1,8 ml (3 mólekvivalens) jód-trimetil-szilánt. Ezután a hőmérsékletet szobahőmérsékletre emelkedni hagyjuk, majd az elegyet ugyanezen a hőmérsékleten 1 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet bepároljuk, majd a maradékhoz metanolt adunk és az így kapott elegyet ismét bepároljuk. A maradékot ezután vízzel mossuk, majd vízben feloldjuk. A kapott oldatot felvisszük HP-20 márkanevű gyantából készült oszlopra, majd vízzel eluálást végzünk. így 0,27 g mennyiségben ((5-metil-3-izoxazolil) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav-etil-észter)-t kapunk szilárd anyagként.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) Elemzési eredmények a C₇H₁₄N₂O₇P₂X0,5 H₂O képlet alapján)

C% H% N%

Számított: 27,17 4,85 9,06 Talált: 27,39 4,60 9,44 (ii) FAB Mass: 301 (M+l) (iii) NMR-spektrum (D₂O):

δ: 1,22 (3H, -OCH₂CH₃)

2,30 (3H, -CH₃)

3,8-4,2 (2H, -OCH₂CH₃)

4,12 (1H, -NHCH-)

5,88 (1H, H az izoxazolgyűrűben)

Í5. példa — (XXVIII) képletű vegyület g 3-amino-5-n-pentil-izoxazol, 2,3 g ortohangyasav-etil-észter és 7,2 g diétil-foszfit elegyét 150°C-on 60 percen át keverjük, majd a reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerxént 0 térfogat% és 3 térfogat% közötti menynyiségben metanolt tartalmazó kloroformot használva. így 3,2 g mennyiségben halványsárga olaj formájában ((5-n-pentH-3-izoxazo1 i 1) -amino) -metilén-bisz (foszforisav-dietil-észter)-t kapunk.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következok* (i) FAB Mass: 441 (M+l) (ii) NMR-spektrum (CDC1₃): δ: 0,9 (3H, CH₃)

1,2-1,8 (18H, ’(CH₂)₃-, OCH₂CH₃X4)

2,6 (2H, (XXIX) képletű csoport

4,0-4,4 (8H, OCH₂CH₃X4)

P /

P

5.5 (1H, H az izoxazolgyűrűben)

A b) módszerrel előállított termék fizikai jellemzői megegyeznek az itt leírtakkal.

A 15. példában ismertetett módon állíthatók elő a következő vegyületek.

16. példa — (XXX) képletű vegyület ((5-n-hexil-3-izoxazolil)-amino) -metilénbisz (foszfonsav-dietil-észter).

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők* (i) El Mass: 454 (M) (ii) NMR-spektrum (CDC1₃): δ: 0,9 (3H, -CH₃)

1,2-1,8 (20H, -(CH₂)₄-, OCH₂CH₃X4)

2.6 (2H, (XXIX) képletű csoport 4,0-4,4 (8H, OCH₂CH₃X4)

P

P

5,5 (1H, H az izoxazolgyűrűben) Kiindulási vegyület: 3-amino-5-n-hexil-iZoxazol.

17. példa — (XXI) képletű vegyület ((5- n-hepti 1-3-izoxazol il) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav-dietil-észter)

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők* (i) El Mass: 468 (M) (ii) NMR-spektrum (CDC1₃): δ: 0,9 (3H, -CH₃)

-18199151

1.1- 1,8 (22Η, <-(CH₂)₅-, OCH₂CH₃X4)

2,6 (2H, (XXIX) képletű csoport

4,0-4,4 (8H, OCH₂CH₃X4)

P z

4.5 (1H,CH^ )

P

5.5 (1H, H az izoxazolgyűrűben) Kiindulási vegyület: 3-amino-5-n-heptil-izoxazol.

18. példa — (XXXII) képletű vegyület ((5-n-oktil-3-izoxazolil) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav-dietil-észter).

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők* (i) FAB Mass: 483 (M+l) (ii) NMR-spektrum (CDC1₃): fi: 0,9 (3H, CH₃-)

1.2- 1,8 (24H, -(CH₂)₆-, OCH₂CH₃X4)

2.6 (2H, (XXIX) képletű csoport

4,0-4,4 (8H, OCH₂CH₃X4)

P /

4.5 (1H, CH )

P

5.5 (1H, H az izoxazolgyűrűben)

Kiindulási vegyület: 3-amino-5-n-oktil-izoxazol.

19. példa — (XXXIII) képletű vegyület ((5-izoamil-3-izoxazolil) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav-dietil-észter).

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők* (i) FAB Mass: 441 (M+l) (ii) NMR-spektrum fi: 0,9 (6H, (CH₃)₂-)

1.2- 1,7 (17H, CH(CH₃)₂-, OCH₂CH₃X4)

2.6 (2H, (XXIX) képletű csoport

4,0—4,4 (8H, OCH₂CH₃X4)

P z

p

5,6 (1H, H az izoxazolgyűrűben) Kiindulási vegyület: 3-amino-5-izoamil-izoxazol.

20. példa — (XXXIV) képletű vegyület ((5-metoxi-fenetil-3-izoxazolil) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav-dietil-észter).

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők* (i) Él Mass: 504 (M) (ii) NMR-spektrum (CDC1₃): fi: 1,2—1,4 (12H, OCH₂CH₃X4)

2,9 (3H, OMe)

3,8 (4H, -CH₂CH₂-)

4,0-4,4 (8H, OCH₂CH₃X4)

P z

4,5 (1H,CH^ )

P

5.5 (1H, H az izoxazolgyűrűben)

6,8—7,1 (4H, H a benzolgyűrűben)

Kiindulási vegyület: 3-amino-5-(4-metoxi-fenetil)-izoxazol.

21. példa — (XXXV) képletű vegyület 3 g ((5-n-pentil-3-izoxazolil)-amino)-metilén(foszfonsav-dietil-észter) 30 ml, tömény sósavoldattal készült oldatát visszafolyató hűtő alkalmazásával 3 órán át forraljuk, majd bepároljuk. A kapott szilárd anyagot acetonitrillel mosva 1,8 g mennyiségben ((5-n-pent il-3- izoxazolí 1) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav)-at kapunk csapadékként.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) Elemzési eredmények a C₉H|₈N₂O₇P₂ képlet alapján:

C% H% N% P%

Számított: 32,94 5,53 8,54 18,88

Talált: 32,88 5,36 8,56 18,86 (ii) FÁB Mass: 327 (M-l) (iii) NMR-spektrum (D₂O-ban K₂CO₃-dal) fi: 0,9 (3H, CH₃)

1,3-1,8 (6H, -CH₂)₃-)

2.6 (2H, (XXIX) képletű csoport

P

Z

P

5,8 (1H, (XXXVI) képletű csoport A 21. példában ismertetett módon állíthatók elő a következő vegyületek.

22. példa — (XXXVII) képletű vegyület . ((5-n-hexil-3-izoxazil)-amino)-metilén-bisz (foszfonsav).

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők* (i) o.p.: 238°C (bomlik) (ii) Elemzési eredmények a C,₀H₂₀N₂O₇P₂ képiéi alapján:

C% H% N% P%

Számított: 35,10 5,89 8,19 18,10

Talált: 35,38 5,72 8,11 17,84.

(iii) FAB Mass: 343 (M+l)

23. példa — (XXXVIII) képletű vegyület ((5-n-heptil-3-izoxazoliI)-amino) -metilén-bisz (foszfonsav).

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők’ (i) o.p.: 205°C (bomlik) ;'i) Elemzési eredmények a C_UH₂₂N₂O₇P₂ képlet alapján:

C% H% N% P%

Számított: 37,09 6,22 7,86 17,39

Talált: 37,09 6,15 7,83 17,28.

(iii) FAB Mass: 357 (M+l)

24. példa — (XXXIX) képletű vegyület ((5-n-oktil-3-izoxazolií)-amino) -metilén-bisz (foszfonsav).

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

-19199151 (i) o.p.: 225°C (bomlik) (ii) Elemzési eredmények a C₁₂H₂₄N₂O₇P₂ képlet alapján:

C% H% N%

Számított: 38,93 6,53 7,57 Talált: 38,93 6,51 7,64 (iii) FAB Mass: 371 (M+l)

25. példa — (XL) képletü vegyület ((5-izoamil-3-izoxazolil) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav).

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) o.p.: 196°C (bomlik) (ii) Elemzési eredmények a C₉H₁₈N₂O₇P₂ képlet alapján:

C% H% N% P%

Számított: 32,94 5,53 8,54 18,88

Talált: 32,66 5,50 8,66 18,72 (iii) FAB Mass: 329 (M+l).

26. példa — (XLI) képletü vegyület ((5-p-metoxi-fenetil-3-izoxazolil) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav)

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők* (i) o.p.: 265°C (bomlik) (ii) Elemzési eredmények a Ci3HigN₂O₈P₂ képlet alapján:

C% H% N% P%

Számított: 39,81 4,62 7,14 15,79

Talált: 39,69 4,46 7,19 15,71.

(iii) FAB Mass: 392 (M+l)

27. példa — (XLI1) képletü vegyület g 3-amino-5-n-butil-izoxazol, 3,7 g klórhangyasav-etil-észter és 12 g dietil-foszfit elegyét 150°C-on 60 percen át keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként 0 térfogat% és 3 térfogat% közötti mennyiségű etanolt tartalmazó kloroformot használva. így 5 g mennyiségben ((5-n-butil-3-izoxazolil) -amino)-metilén-bisz (foszfonsav-dietil-észter) -t kapunk halványsárga olaj formájában.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők* (i) FAB Mass: 247 (M+l) (ii) NMR-spektrum (CDC1₃): ó:0,9 (3H, CH₃-)

1,2-1,8 (16H, -(CH₂)₂-, OCH₂CH₃X4)

2,6 (2H, (XXIX) képletü csoport 4,0-4,4 (8H, OCH₂CH₃X4)

P /

P

5,5 (IH, H az izoxazolgyűrűben)

28. példa — (XLIII) képletü vegyület

4,8 g ((5-n-butil-3-izoxazolil)-amino)-metilén-bisz (foszfonsav-dietil-észter) 50 ml tömény sósavoldattal készült oldatát visszafolyató hűtő alkalmazásával 3 órán át forral20 juk, majd bepároljuk. A kapott szilárd csapadékot acetonitrillel mosva 2,5 g mennyiségben szilárd formában ((5-n-butil-3-izoxazoIil) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav) -at kapunk.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) o.p.: 200°C (bomlik) (ii) Elemzési eredmények a C₈H,₆N₂O₇P₂ képletü vegyületre:

C% H% N% P%

Számított: 30,58 5,13 8,91 19,72

Talált: 30,28 4,84 8,95 19,52 (iii) FAB Mass: (M+l)

29. példa — (XLIV) képletü vegyület

3,3 g 3-amino-5-(4-metil-3-pentenil)-izoxazol, 4,4 g ortohangyasav-etil-eszter és 20 g dietil-foszfit elegyét 150°C-on 60 percen át keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként 0 térfogat% és 3 térfogat% közötti mennyiségű metanolt tartalmazó kloroformot használva. így 3,6 g mennyiségben ((5-(4-metil-3-pentenil) -3-izoxazoHl) -amino) -metilén-bisz(foszfonsav-dietil-észter)-t kapunk halványsárga olaj formájában.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők* (i) El Mass: 452 (M) (ii) NMR-spektrum (CDC1₃):

CH₃ ch₃

5,6 (IH, H az izoxazolgyűrűben)

A 29. példában ismertetett módon állítható elő a következő vegyület.

30. példa — (XLV) képletü vegyület ((5-sztiril-3-izoxazol il)-amino) -metil én-bisz (foszfonsav-dietil-észter)

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők* (i) ’ El Mass: 472 (M) (ii) NMR-spektrum:

6:5,9 (IH, H az izoxazolgyűrűben)

6,7—7,5 (IH, H a sztirol alapján)

Kiindulási vegyület: 3-amino-sztiril-izoxazol

31. példa — (XLV1) képletü vegyület Jeges hűtés közben 3,5 g ((5-(4-metil-3-pentenil) -3-izoxazolil) -amino) -metilén-bisz(foszfonsav-dietil-észter) 35 ml szén-tetrakloriddal készült oldatához cseppenként hozzáadunk 6,2 g jód-trimetil-szilánt, majd a hőmérsékletet szobahőmérsékletre emelkedni hagyjuk, és ezután ezen a hőmérsékleten 1 órán át keverést végzünk. A reakcióelegyet bepároljuk, majd a maradékhoz metanolt adunk, és az így kapott elegyet ismét bepároljuk. Az ekkor kapott maradékot acetonnal, majd acetonitrillel mossuk. így 1,8 g menynyiségben ((5-(4-metil-3-pentenil) -3-izoxazo-20199151 lil) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav) -at kapunk szilárd anyagként.

A termék fizikó-kémiai jellemzői a követkczők* (1) o.p.: 213°C (bomlik) (ii) Elemzési eredmények a (+Η₁₈Ν₂Ο₇Ρ₂ képlet alapján;

C% H% N% P%

Számított: 35,30 5,33 8,23 18,21

Talált: 35,19 5,23 8,30 18,05 (iii) FAB Mass: 341 (M+l)

A 31. példában ismertetett módon állítható elő a következő vegyület.

32. példa — (XLVII) képletű vegyület ((5-sztiril-3-izoxazolil)-amino) -metilén-bisz (foszfonsav)

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) o.p.: 287°C (bomlik) (ii) Elemzési eredmények a C_I2H₁₄N₂O₇P₂ képlet alapján:

C% H% N% P%

Számított: 40,01 3,92 7,78 17,20

Talált: 39,73 3,96 7,61 17,46 (iii) FAB Mass: 459 (M-l)

33. példa — (XLVIII) képletű vegyület

2,9 g 3-amino-4-metil-izoxazol, 5,7 g ortohangyasav-etil-észter és 20,4 g dietil-foszfit elegyét 160°C-on 3 órán át keverjük, majd a reakcióelegyet csökkentett nyomáson bepároljuk és a kapott maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként kloroform és etil-acetát elegyét használva, így 3,2 g mennyiségben ((4-metil-3-izoxazolil)-amino)-metilén-bisz (foszfonsav-dietil-észter)-t kapunk 68—69°C olvadáspontú csapadék formájában.

34. példa — (XLIX) képletű vegyület

9,8 g 3-amino-5-metil-izoxazol 98 ml diklór-metánnal készült, jéghideg oldatához cseppenként hozzáadunk 40 ml, 5 : 3 térfogatarányú hangyasav-ecetsavanhidrid elegyet. Ezt követően az így kapott reakcióelegyet szobahőmérsékleten 1 éjszakán át keverjük, majd bepároljuk. A kapott maradékot dietil-éterrel mosva 10 g mennyiségben 5-metil-izoxazol-3-formamidot kapunk.

9,8 ml trimetil-íoszfités 1,3 ml foszfor(111) -triklorid elegyét 65°C-on 35 percen át melegítjük, majd hozzáadunk ,1 g 5-metil-izoxazolil-3-formamidot, Inajd az így kapott reakcióelegyet ugyanezen a hőmérsékleten 1 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet bepároljuk, majd a maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiás tisztításnak vetjük alá, eluálószerként kloroform és metanol elegyét használva. így 0,9 g mennyiségben ((5-metil-3-izoxazol il)-amino)-metilén-bisz (foszfonsa v-dimetíl-észter)-t kapunk kristályok alakjában.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) FAB Mass: 329 (M+l) (ii) NMR-spektrum (CDC1₃):

Ő: 2,30 (3H, d,

3,8-4,0 (12H, MeOX4)

4.64 (1H, CHNH)

5,60 (1H, (XXXVI) képletű csoport A 34. példában ismertetett módon előállíthatok a 2—5., 10., 15—20., 27., 29.,'30. és 33. példák vegyületei is.

1. előállítási példa — (L) képletű vegyület

4,8 g ((5-metil-3-izoxazolil)-amino)-metilén-bisz(foszfonsav-dietil-észter) 90 ml szén-tetrakloriddal készült, jéghideg oldatához cseppenként hozzáadunk 7,1 ml jód-trimetil-szilánt, majd az így kapott reakcióelegyet szobahőmérsékletre melegedni hagyjuk és ezen a hőmérsékleten 1 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet bepároljuk, majd a maradékhoz metanolt adunk, és az így kapott elegyet ismét bepároljuk. Az ekkor kapott szilárd anyagot forró acetonnal mosva 2,9 g mennyiségben ((5-metil-3-izoxazolil)-amino)-metilén-bisz (foszfonsav)-at kapunk színtelen csapadék formájában.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) Elemzési eredmények a C₅H,₀N₂O₇P₂ képlet alapján:

C% H% N%

Számított: 22,07 3,70 10,30 Talált: 22,13 3,80 9,96 (ii) FAB Mass: 273 (M+l) (iii) NMR-spektrum (D₂Ó):

ő: 2,30 (3H, d, metilcsoport az izoxazolgyűrűben)

4,08 (1H, t, NHCH)

5,88 (1H, d, H az izoxazolgyűrűben)

2. előállítási példa — (LI) képletű vegyület 4,9g ((5-etil-3-izoxazolil)-amino)-metilén-bisz(foszfonsav-dietil-észter) 46 ml tömény sósavoldattal készült oldatát visszafolyató hűtő alkalmazásával 3 órán át forraljuk, majd bepároljuk. A kapott szilárd anyagot acetonnal mosva 2,8 g mennyiségben ((5-etil-3-izoxazolil)-amino) -metilén-bisz (foszfonsav) - at kapunk szilárd csapadékként.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) Elemzési eredmények a C₆H,₂N₂O₇P₂ képlet alapján:

C% H% N%

Számított: 25,19 4,23 9,79 Talált: 24,89 4,30 9,55 (ii) FAB Mass: 287 (M+l) (iii) NMR-spektrum (D₂O): ő: 1,20 (3H, -CH₂CH₃)

2.64 (2H, -CH₂CH₃)

4,10 (1H, -NHCH-)

5,90 (1H, H az izoxazolgyűrűben)

3. előállítási példa — (LII) képletű vegyület:

-21199151

3,2 g ((4-metil-3-izoxazolil)-amino)-metilén-bisz(foszfonsav-dietil-észter) 32 ml tömény sósavoldattal készült oldatát visszafolyató hűtő alkalmazásával 4 órán át forraljuk, majd bepároljuk. A kapott szilárd anyagot metanol, acetonitril és aceton elegyével mosva 1,8 g mennyiségben ((4-metil-3-izoxazolil) -amino) -metilén-bisz (foszfonsav) -at kapunk szilárd anyagként.

A termék fiziko-kémiai jellemzői a következők:

(i) o.p.: 272—274°C (bomlik) (ii) Elemzési eredmények a C₅H_I0N₂O₇P₂ képlet alapján:

C% H% N%

Számított: 22,07 3,70 10,30 Talált: 21,90 3,70 9,99

A következőkben a találmány szerinti eljárással előállítható (I) általános képletű vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására adunk példákat.

(1) Tabletta:

Komponens Mennyiség

1. előállítási példa szerinti vegyület 5 mg laktóz 119 mg kukorica keményítő 67 mg hidroxi-propil-cellulóz 4 mg karboxi-metil-cellulóz-kalciumsó 4 mg magnézium-sztearát _1 mg összesen: 200 mg 5 g 1. előállítási példa szerinti vegyületet, 119 g laktózt és 67 g kukorica keményítőt egyenletesen összekeverünk, majd a kapott keverékhez 40 ml 10 tömeg%-os vizes hidroxi-propil-cellulóz-oldatot adunk, és az így kapott elegyet nedves granulálásnak vetjük alá. Az ekkor kapott szemcséket ezután összekeverjük 4 g karboxi-metil-cellulóz-kalciumsóval és 1 g magnézium-sztearáttal, majd a kapott keveréket tablettákká formázzuk. A kapott tabletták 200 mg tömegűek.

(2) Kapszula:

Komponens Mennyiség

1. előállítási példa szerinti vegyület 5 mg kristályos cellulóz 50 mg kristályos laktóz 144 mg magnézium-sztearát ___ 1 mg összesen: 200 mg

A fentiekben említett mennyiségek 1000-szeresét véve a fentiekben felsorolt komponenseket összekeverjük, majd zselatin-kapszulákba kapszulázzuk, kapszulánként 200 mg keveréket tartalmazó kapszulákat kapva.

Claims (12)

1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK

   1. Eljárás az (I) általános képletű bisz-foszfonsavszármazékok — a képletben R¹ jelentése hidrogénatom vagy 1 —10 szénatomot tartalmazó alkil-, 3—8 szénatomot tartalmazó cikloalkil-, fenil- vagy olyan,
2. 2—8 szénatomot tartalmazó alkenilcso22 port, amely fenilcsoporttál vagy pedig fenil-(1—5 szénatomot tartalmazó)alkilcsoporttal van helyettesítve, és a fenilcsoport adott esetben 1—4 szénatomot tartalmazó alkoxicsoporttal helyettesítve lehet;

   R² jelentése hidrogénatom vagy 2—4 szénatomot tartalmazó alkanoilcsoport;

   R³, R⁴, R⁵ és R® azonos vagy eltérő jelentéssel hidrogénatomot vagy 1—4 szénatomot tartalmazó alkilcsoportot jelent;

   azzal a megkötéssel, hogy ha R¹ jelentése metil-, etil-, izopropii- vagy terc-butilcsoport, akkor R², R³, R⁴, R⁶ és R® közül legalább az egyik hidrogénatomtól eltérő jelentésű —, valamint gyógyászatilag elfogadható sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy

   a) valamely (II) általános képletű 3-amíno-izoxazol-származékot — a képletben R¹ jelentése a tárgyi körben megadott — valamely (III) általános képletű ortohangyasav-(1—4 szénatomos) alkil-észterrel — a képletben R⁷, R⁸ és R⁹ egymástól függetlenül 1—4 szénatomos alkilcsoportot jelentenek .— és valamely (IV) általános képletű dialkil-foszfittal — a képletben R³’, R⁴’, R⁵' és R®’ azonos vagy eltérő jelentéssel 1—4 szénatomos alkilcsoportot jelentenek — reagáltatunk melegítés közben, vagy

   b) valamely (VIII) általános képletű helyettesített izoxazol-3-formamid-származékot — a képletben R¹ jelentése a tárgyi körben megadott — és egy (VI) általános képletű foszfor-trihalogenid — a képletben X jelentése halogénatom — és egy (VII) általános képletű trialkil-foszfit — a képletben R³’, R⁴’, R⁵’, és R⁶’ azonos vagy eltérő jelentéssel 1—4 szénatomos alkilcsoportot jelent — reakciótermékét reagáltatjuk, és kívánt esetben acilezést és/vagy hidrolizálást végzünk. (Elsőbbsége: 1988. 03. 09.)

   2. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan kiindulási anyagokat használunk, amelyek képletében R¹ jelentése hidrogénatom vagy 1—5 szénatomos alkilcsoport, R² jelentése hidrogénatom, míg R³, R⁴, R⁵ és R® hidrogénatomot vagy 1—4 szénatomos alkilcsoportot jelent. (Elsőbbsége: 1987.03.10.)
3. 3. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként olyan vegyületeket használunk, amelyek képletében R¹ jelentése 3—7 szénatomos cikloalkil-, propil- vagy fenilcsoport, R² jelentése hidrogénatom, míg R³, R , R⁵ és R® hidrogénatomot vagy 1—4 szénatomos alkilcsoportot jelent. (Elsőbbsége: 1987.09.30.)
4. 4. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás R² helyén hidrogénatomot vagy 2—4 szénatomos alkanoilcsoportot hordozó (I) általános képletű vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő kiindulási anyagokat használunk. (Elsőbbsége: 1987.10.19.)
5. 5. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként olyan

   -22199151 (II) általános képletű vegyületeket használunk, amelyekben R* jelentése 5—10 szénatomos alkilcsoport vagy adott esetben 1—4 szénatomos alkoxicsoporttal helyettesített fenil-(l—5 szénatomos)alkilcsoport. (Elsőbbsége: 1987.12.15.)
6. 6. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás, azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként olyan (II) általános képletű vegyületeket használunk, amelyekben R¹ jelentése adott esetben fenilcsoporttal helyettesített 2—8 szénatomos alkenilcsoport. (Elsőbbsége: 1987.12.24.)
7. 7. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás vagy a

   2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy R helyén metil- vagy pentilcsoportot tartalmazó (II) általános képletű vegyületet használunk. (Elsőbbsége: 1987.03.10.)
8. 8. Az 1. igénypont szerinti a) eljárás vagy a

   3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy R* helyén ciklopropilcsoportot tartalmazó (II) általános képletű vegyületet használunk. (Elsőbbsége: 1987.09.30.)
9. 9. Az 1. igénypont szerinti b) eljárás, azzal jellemezve, hogy R' helyén metil-, pentil- vagy ciklopropilcsoportot tartalmazó (VIII) általános képletű vegyületet használunk. (Elsőbb₅ sége: 1988.03.09.)
10. 10. Az 1. igénypont szerinti b) eljárás vagy a 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy (VIII) általános képletű vegyület10 ként 5-(n-pentil)-izoxazolil-3-formamidot használunk. (Elsőbbsége: 1988.03.09.)
11. 11. Az 1. igénypont szerinti b) eljárás vagy a 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy (VIII) általános képletű vegyület15 ként 5-ciklopropil-izoxazolil-3-formamidot használunk. (Elsőbbsége: 1988.03.09.)
12. 12. Az 1. igénypont szerinti b) eljárás vagy a 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemez20 ve, hogy (VIII) általános képletű vegyületként 5-metil-izoxazolil-3-formamidot használunk. (Elsőbbsége: 1988.03.09.)