HU197770B

HU197770B - Process for producing the new 9-square brackets open (2'r, 3'r, 4's)-3',4'-bis(hydroxymethyl)-2'-oxetanyl square brackets closed-hypoxanthine and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient

Info

Publication number: HU197770B
Application number: HU872464A
Authority: HU
Inventors: Nobuyoshi Shimada; Takayuki Tomizawa; Shigeru Hasegawa; Kaoru Matsuo; Akio Fujii; Hiroo Hoshino
Original assignee: Nippon Kayaku Kk
Priority date: 1986-03-07
Filing date: 1987-05-28
Publication date: 1989-05-29
Also published as: AU7341287A; JPS62208295A; US4845215A; AU599656B2; EP0292588B1; DE3778012D1; HUT46743A; EP0292588A1; ES2030013T3; JPH0560834B2

Description

A találmány tárgya eljárás az új, hipoxantin alapú (I) képletü vegyület és az ezt — — hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására.

Az adenozin-dezaminázzal végzett dezaminálás az adenozinnal és a 2’-dezoxiadenozinnal — amelyek purin-nukleozidok — kapcsolatosan ismeretes, valamint ismeretes a Cordyceptin és Formycin kapcsán, amelyek purin-nukleozid-antibiotikumok (lásd a Journal of Antibiotics, 18, Ser. A, 191 (1965) szakirodalmi helyen).

... A vírusfertőzések okozta betegségek kezelésénél mindig van igény új hatóanyagokra, mert az ilyen betegségek jellegüket tekintve számtalan változatban létezhetnek. Különösen ’ kívánatosak lennének olyan új vírusellenes anyagok, amelyek az Á1DS vírus (nemzetközileg javasolt neve a „Humán Immunodeficiency Vírus elnevezés rövidítéseként „HÍV vírus) és a B típusú hepatitisz vírus szaporodását gátolják.

Továbbá, a belső szervek átültetésének és az autoimmun betegségek szaporodásának folytán kívánatossá vált új immunszupreszszánsok kifejlesztése is.

Több vizsgálat után arra a felismerésre jutottunk, hogy az új, hipoxantin alapú (I) képletü vegyület vírusellenes és ímmunszupresszív hatással bír. Ezen a felismerésen alapszik a találmány.

A mellékelt 1. ábrán a találmány szerint előállított (I) képletü vegyület, azaz a 9-[ (2’R, 3’R, 4’S)-3’, 4’-bisz(hidroxi-metit)-2’-oxetanil] -hipoxantin deutero-dimetil-szulfoxidban, tetrametil-szilán belső standarddal mért Ή-mágneses rezonancia spektrumát mutatjuk be.

A találmány szerint az (I) képletü vegyületet a következő módon állítjuk elő. A (II) képletü adenin alapú vegyületet adenozin-dezamináz vagy ezzel azonos hatást gyakorló anyag hatásának tesszük ki, amely anyag származhat tenyésztett mikroorganizmusból, ebből előállított termékből vagy állati szövetből, így az (I) képletü hipoxantin alapú új vegyületet nyerjük. A reagáltatást pH 5 és 9 közötti, előnyösen 6 és 8 közötti, szokásosan _PH=7 értékű pufferben 0—90°C, előnyösen 5—70°C hőmérsékleten végezzük.

Alkalmazhatunk kereskedelmi forgalomban beszerezhető adenozin-dezaminázt a találmány szerinti eljárásban. Konkrét példaként említjük az EC3, 5, 4, 4 terméket, amely a Sigma Co. terméke. Ezen kívül például állati szövetből kivont vagy tenyésztett mikroorganizmusból nyert anyagot is használhatunk, Az enzimnek nem kell mindig tisztítottnak lennie. Ha a mikroorganizmus eredetű enzimet alkalmazunk, a tápközegben adenozin-dezamináz termelésére képes mikroorganizmus tenyésztésével kapott mikroorganizmus(sejt-) tenyészetet önmagában is alkalmazhatjuk. Ezen kívül használhatunk acetonnal szárított mikroorganizmus sejtekből készült nyers enzimet, mechanikusan feltárt 2 mikroorganizmus sejteket, ultrahang-hullámokkal kezelt mikroorganizmus sejtek felületaktív szerrel kezelt, toluollal kezelt vagy lizozimmal kezelt termékét. Ugyancsak használhatók a szintetikus polimereken rögzített mikroorganizmus sejtek. Konkrétan megnevezve a következő mikroorganizmusok használhatók:

Alkaligenes bookeri IFO 12948

Escherichia coli N1HJ

Escherichia coli 120551

Escherichia coli 120595

Escherichia coli 120628

Citrobacter freundii GN 346

Proteus morganii IFO 3168

Elytrosporanim brasiliense IFO 1259 Nocardia asteroides IFO 3423 Streptomyces alboniger IFO 12738 Streptomyces californicus IFO 12750 Streptomyces chrestomyceticus IFO 13444 Streptomyces subsp. lasaliensis ATCC 31180 Streptomyces tubercidicus IFO 13090 Streptomyces verticillus ATCC 31307 Aspergillus niger IFO 4066 Fusarium roseum IFO 7189 Penicillium chrysogenum JBI-FI Penicillium chrysogenum 51-20T

A találmány szerinti eljárás értelmében az (I) képletü vegyület előállítására a (II) képletü vegyületet és az adenozin-dezaminázt 1/2 és 1/30 mól/l közötti, előnyösen 1/ /10 mól/l-es foszfátpufferben reagáltatjuk pH 5 és 9 közötti, előnyösen pH~7,0 értéken, 5 és 70°C közötti, előnyösen 20 és 30°C közötti, szokásosan 25°C hőmérsékleten, 10 perc és 50 óra közötti, előnyösen 30 perc és 10 óra közötti, szokásosan néhány óra időtartamon át. A reakció során a reakcióelegyben a kívánt (I) képletü vegyület képződik. Ha tenyésztett mikroorganizmust alkalmazunk, valamely, az előzőekben megnevezett mikroorganizmust tápközegben 24 órán át tenyésztünk, majd a tenyészetet közvetlenül felhasználhatjuk. Előnyösen azonban az élő sejteket tartalmazó tenyészetet lecentrifugáljuk, a sejttömeget 1/20 mól/l-es, pH=7,0 foszfátpufferben felszuszpendáljuk, a kapott szuszpenziót összekeverjük a (II) képletü vegyülettel (oxetanocín), és a reakcióelegyet legfeljebb 20 órán át 20—70°C hőmérsékleten tartjuk, mialatt a kívánt (I) képletü vegyület képződik. A terméket -a reakcióelegyből ismert eljárásokkal különíthetjük el, azaz olyan eljárással nyerhetjük ki, amellyel az inaktív anyagot, például centrifugálással, eltávolítjuk, majd, a kívánt terméket a vízben vagy más szerves oldószerben való oldhatóság-különbség alapján különítjük el vagy aktív-szenes, adszorpciós-gyantás vagy ioncserélő-gyantás abszorpciós-deszorpciós eljárást vagy ezen eljárások megfelelő kombinációját alkalmazzuk.

Például a (II) képletü vegyületet az előzőekben említett enzimmel vagy az előzőekben ismertetett mikroorganizmusok mosott sejtjeivel reagáltatjuk, majd az inaktív anya-2197770 got, vagy a szükségtelen mikroorganizmus-sejteket centrifugálással eltávolítjuk. A felülúszót ezután porózus gyantával töltött oszlopra visszük, a termék a gyantán adszorbeálódik. Az oszlopot vízzel mossuk, majd a terméket hidratált metanollal eluáljuk róla. Az eluátumot besűrítjük és szárazra pároljuk. így az (I) képletű vegyületet színtelen por formájában nyerjük. Kívánt esetben Sephadex gyantákat is alkalmazhatunk.

A találmány szerinti eljárásban kiindulási anyagul alkalmazott (II) képletű vegyületek ismeretek (lásd a Journal of Antibiotics; 39 (11) 1623—1625 és 1626—1629, (1986) szakirodalmi helyen), és a Bacillus nemzetséghez (FERM BP-919) tartozó NK 84—0218 törzs tápközegben való tenyésztésével, majd a képződött és felhalmozódott (II) képletű vegyület szokásos módon való kinyerésével állíthatók elő. Az így kapott (II) képletű vegyület a

9-{(2’R, 3’R, 4’S)-3’, 4’-bisz (hidroxi-metil) -2’-oxetanil] -adenin (oxetanocin).

.Az (I) képletű vegyület sóit úgy állíthatjuk elő, hogy a vegyületet erős sav, például hidrogén-klorid vagy kénsav vizes oldatában (pH~2) oldjuk például melegítéssel, majd az oldatot lehűtjük, vagy a képződött só kicsapására az oldathoz vízzel elegyedő oldószert adunk.

Az így nyert (I) képletű vegyület, azaz a

9-[(2’R, 3’R, 4’S)-3’, 4’-bisz(hidroxi-metil)-2’-oxetanil]-hipoxantin fizikai-kémiai jellemzői a következők:

Megjelenési forma:

színtelen, por formájú

Elemzési eredmények a (C|₀H_l2O₄N₄) képlet alapján:

₅ számított: C% =47,62, H%=4,80, 0% =25,37 N%=22,21;

talált: C%=47,41, H%=4,96, O%=25,58

N% =22,05.

Molekula képlet (molekulatömeg)

C_I0H_i2O₄N₄ (252,24)

Olvadáspont: 203—205°C.

Fajlagos optikai forgatóképesség: [a]p°=-8,8° (C=0,455, H₂O)

Ultraibolya abszorpciós spektrum

Az ultraibolya abszorpció és a moláris abszorptivitás vízben, 0,1 n hidrogén-kloridban és 1,0 n nátrium-hidroxid oldatban a kö-

20	vetkező:	nm	(4,10)
H₂O λ max	(loge)=248,5
	0,ln	HC1
	λ	=249	nm	(4,08)
25	max	(loge)
	0,ln	NaOH
	λ	=253	nm	(4,12)
	max	(loge)

Infravörös abszorpciós spektrum

A kálium-bromid tablettában mért infravörös abszorpciós spektrum abszorpciós maximumai .(hullámszám cm’¹) a következők:

3400	3120	2870
1695	1590	1552
1450	1420	1376
1220	1150	1120 (váll)
970	900	845

1515	1492	(váll)	1465	(váll)
1340	1320	(váll)	1250	(váll)
1100	1050	(váll)	1012
788	720	(váll)	685

Oldószerekben való oldhatóság

A vegyület vízben, metanolban és dimetil-szulfoxidban oldható, propanolban, acetonban, etil-acetátban, éterben és benzolban oldhatatlan vagy csak gyengén oldódik.

Színreakciók

A Rydon-Smith reakció és a 10%-os kénsavval adott reakció pozitív, míg a ninhidrid reakció negatív.

R/ érték vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatban

Szilikagél vékonyréteg (0,25 mm, Kiesel gél 60 F254, Merck) és 4:1:2 arányú n-butanol — ecetsav — víz, illetve 10:0,5:1 arányú n-butanol — 28%-os vizes ammónia — víz kifejlesztő elegy alkalmazásával az R/ érték 0,43, illetve 0,10.

'H-magmágrieses rezonancia spektrum

Az 1. ábrán bemutatjuk a deutero-dimetil-szulfoxidban, tetrametil-szilán belső standarddal mért ’H-magmágneses rezonancia spektrumot.

^l3C-magmágneses rezonancia spektrum

A nehézvízben, dioxán (667,4) belső standard alkalmazásával mért ¹³C-magmágneses rezonancia spektrum kémiai eltolódásai (6-értékek) a következők:

159,7, 149,2, 147,3, 141,3, 124,5, 82,8, 80,4, ₅₅ 63,3 59,8, 45,5.

Amint azt a leírás további részében ismertetni fogjuk, a találmány szerint előállított (I) képletű vegyületek immunszupresszív és vírusellenes hatással bíró gyógyszerek, amelyek mind az állatgyógyászatban, mind a hu⁶⁰ mán gyógyászat terén alkalmazhatók. Gyógyszerként való alkalmazás céljára a hatóanyagból szokásos módon készítményeket állíthatunk elő és azokat ismert módon adhatjuk be. Azaz beadhatjuk például a találmány sze65 rint előállított készítményeket injekciók for-3197770 májában, orálisan vagy intrarektálisan. A hatóanyagokat formálhatjuk például injekciós-, por-, granulum-, tabletta- vagy kúp-készítményekké.

A készítmények előállítása során szükség szerint különféle, a gyógyszerkészítésben szokásosan alkalmazott segédanyagokat, így vivőanyagokat és egyéb segédanyagokat (például stabilizálószereket, antiszeptikumokat, csúszást elősegítő anyagokat és/vagy emulgálószereket) alkalmazhatunk, kivéve ha azok káros hatással vannak az (I) képletű vegyületre.

A készítmények (I) képletű vegyület tartalma széles tartományban változhat a készítmény típusától és egyéb tényezőktől függően. Általánosan megfogalmazva, a készítmények 0,01 —100 tömeg%, előnyösen 0,1 —

Koncentráció (mcg/lyuk)

125

62,5

31,3

b) HIV-vírus-(Humán Immunodeficiency Vírus) ellenes aktivitás lyukú tálcába ~100 000 sejt/ml koncentációjú MT-4 sejtet viszünk. Ehhez hozzáadunk előre meghatározott mennyiségű, találmány szerint előállított vegyületet tartalmazó 100μΙ oldatot, majd a sejteket 5 térf.% széndioxid-gázt tartalmazó inkubátorban 37°C-on 5 órán át tenyésztjük. Ezután 10³— 10⁴ fertőzés-egység HIV-t adunk hozzá és 4 napon át folytatjuk a tenyésztést. Ezután a tenyészfolyadék egy részét tárgylemez-üvegre visszük, acetonnal immobilizáljuk, majd tömeg% (I) képletű vegyületet és azt 100 tömeg%-ra kiegészítő mennyiségű hordozóanyagot vagy más, a gyógyszerek készítésénél szokásosan alkalmazott segédanya5 got tartalmaznak.

Az (I) képletű vegyület dózisa függ ugyan a tünetektől, általában azonban 0,01 —800 mg /nap/felnőtt személy dózist alkalmazunk. Folyamatos adagolás esetén kívánt esetben a dózis előnyösen csökkenthető.

Fiziológiás aktivitás

1) A következőkben az (I) képletű vegyület vírusellenes hatását mutatjuk be.

a) a vegyület vírusellenes hatását II tí15 pusú Herpes Simplex vírusnak Cercopithecus aetiops veséből származó Vevo-sejtqkre kifejtett sejtpusztító hatásának megfigyelésével mérjük.

87_T5 mcg/lyuk gátlási arány (%) fluoreszcens antitest eljárrással vizsgáljuk a vírus-antigén kifejlődését.

A fluoreszcens antitest eljáráshoz primer antitestként egy AIDS-beteg szérumát hasz35 náljuk, szekunder antitestként FITC-vel jelzett anti-humán IgG-t alkalmazunk.

A találmány szerint előállított vegyületek sejtpusztító hatását MT-4 sejteken mik40 roszkóposan vizsgáljuk vírus hozzáadása nélkül.

A találmány szerint előállított vegyületek hatása HIV-ra;

HIV-ra:

Koncentráció (/ug/ml)	Sejtpusztító hatás	Vírus antigén fejlődés' (¾)
100,	-	2
10	-	10
1	-	40

-4197770

Megjegyzés: A találmány szerint előállított vegyületet DMSO-ban oldott formában alkalmazzuk. A DMSO-ban önmagában csak 80—90% a vírus-antigén fejlődés.

Az előzőekben bemutatott eredményekből nyilvánvaló, hogy a találmány szerint előállított vegyület jelentős szaporodásgátló hatást fejt ki HIV-ra, ugyanakkor sejtpusztító hatása kicsi. E jellemzői következtében a vegyület várhatóan hasznos gyógyszer az AIDS kezelésére.

2) A következőkben a találmány szerint előállított (I) képletű vegyületek immunszupresszív hatását mutatjuk be:

T-limfocita sejtek blasztogenezis reakciójának gátlása Con A-val

BALB/C egerek lépsejtjeit szétoszlatva úgy öntjük mikrolemezre, hogy lyukanként (amelyek mindegyike 0,2 ml-es) 2X10⁵ sejt legyen jelen. A kontroll kivételével minden egyes lyukba bevisszük a vizsgálandó vegyületet különböző koncentrációkban. Ezután minden lyukba még 5 pg/l Con A-t adunk. Ezt követően a sejteket 37°C-on 72 órán tenyésztjük 5 térf% széndioxid-gázt tartalmazó légterű inkubátorban. A limfociták blasztogenezis reakcióját úgy vizsgáljuk, hogy a tenyésztés befejezése előtt 6 órával minden lyukba 1 pCi ³H-timidint adunk, és folyadékszcínti 1 lációs számlálóval mérjük ennek a tenyésztett sejtekbe való beépülését. Ha a csak Con A adagolásakor kapott beépülés-értéket Adpm-ként jelöljük, sé azt a beépülés-értéket, amely Con A és a vizsgált hatóanyag együttes adagolásakor mérhető, Bdpm-ként jelöljük, az egyes vizsgált hatóanyagok blasztogenezisre gyakorolt hatását az (1-Bdpm/Adpm) X100 képlet fejezi ki. Mértük az IC₅₀ értékét (mcg/ml), amelyre a találmány szerint előállított vegyületek esetén 14,5 mcg/ml értéket kaptunk.

Minthogy a találmány szerint előállított vegyület immunszupresszív hatással bír, hatóanyagként a találmány szerint előállított vegyületet tartalmazó immunszupresszánst meglehetősen hasznosnak találunk a szervvagy bőrátültetés esetén a valószínűen abnormálisán fokozott immunhatás okozta kilökődés gátlására, különféle autoimmunizációs betegségek kezelésére, így szklerózis multiplex, hemolitikus anémia, I-típusú diabétesz, súlyos izomgyengeség, Hashimoto tireoditisz, Paget szindróma és reuma, valamint allergiás betegségek kezelésére.

3) A találmány szerint előállított vegyület akut toxicitása (LD₅₀) egéren 200mg/kg (i.v.) vagy ezt meghaladó, amely érték alacsonyabb, mint a különféle ismert nukleinsav-típusú antibiotikumok toxicitása.

Az előzőekben ismertetett eredményekből nyilvánvaló, hogy a találmány szerint előállított (I) képletű vegyület vírusellenes hazású. Továbbá, minthogy ez a vegyület kémiai szerkezetét tekintve eltérő az eddig ismert nukleinsav-típusú antibiotikumoktól, várhatóan hasznos, új hatásmechanizmussal bíró vírusellenes szer lesz, amely szer különféle vírusok okozta betegségek, például herpesz, AIDS és B-típusú hepatitisz kezelésére alkalmas. Tovóbbá a találmány szerint előállított vegyület immunszupresszív aktivitása folytán várhatóan hasznos immunszupresszáns lesz.

A továbbiakban a találmányt példákban mutatjuk be, a példák nem korlátozó jellegűek.

1. példa g (II) általános képletű vegyületet 39 ml 0,1 mól/l-es foszfátpufferben oldunk. Az oldathoz 25 μΐ (9,9 egység) adenozin-dezaminázt (EC3, 5, 4, 4; a Sigma Co. terméke) adunk hozzá, a reagáltatást 25°C-on 5 órán át keverés mellett folytatjuk, majd a reakcióelegyet a reakció leállítására 5 percre 100°Cos hőmérsékletre melegítjük. Ezután az elegyet 50 ml MCI GeC CHP-20P területű oszlopra visszük. A termék az oszlopon adszorbeálódik. Az oszlopot vízzel mossuk, majd a terméket 150 ml 20% víztartalmú metanollal eluáljuk róla. Az eluátumot besűrítjük, és szárazra pároljuk. így 88,1 %-os hozammal 69 mg (I) képletű terméket nyerünk színtelen por formájában.

2. példa

500 ml-es Erlenmeyer lombikokba egyenként 100 ml, 0,3% húskivonat, l,0%pepton és 0,7% nátrium-klorid tartalmú (pH=7,0) tápközeget mérünk, és a lombikokat autoklávban 120°C hőmérsékleten 20 percig sterilezzük. Minden lombik tartalmát egy platina-kacsnyi Escherichia coli NIJH-val oltjuk be, és aerob rázott kultúrában 37°C-on 18 órán á’t tenyésztjük. Ezután 1000 ml folyékony tenyészetet 10 000 fordulat/perc mellett 10 percig centrifugálva összegyűjtjük az élő baktériumsejteket. A sejttömeget háromszor 1000 ml 1/20 mól/l-es, pH=7,0 foszfátpufferrel mossuk, majd 100 ml, a fentivel azonos pufferben szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 50 mg (II) képletű vegyületet adunk, és a reagáltatást 37°C-on végezzük 18 órán át rázatással. Ezt követően a reakcióelegyet a reakció leállítására 5 percig 100°C-on' tartjuk. Ezután a baktériumsejteket a fenti módon végzett centrifugálással elkülönítjük az elegyből, a felülúszót 50 ml MCI Gef® CHP-20P-vel töltött oszlopra visszük. A termék az oszlopon adszorbeálódik. Az oszlopot vízzel mossuk, a terméket az oszlopról 150 ml 20% víztartalmú metanollal eluáljuk, az eluátumot besűrítjük, és szárazra pároljuk. így 86%-os hozammal 43,0 mg (1) képletű vegyületet nyerünk színtelen por formájában.

3. példa

A 2. példa szerint járunk el a következő, táblázatban megadott mikroorganizmusok alkalmazásával. A (II) képletű vegyületnek (i) képletű vegyületté való konverzióját (%) a következő táblázatban adjuk meg.

-5197770

Mikroorganizmus	Reakció	hőmérséklet
-	37 °C	60 °C
Alkaligenes bookeri IF0 12948	54,0	0
Escherichia coli NIHJ	99,6	97,7
Escherichia coli 120551	100	100
Escherichia coli 120595	100	100
Escherichia coli 120628	89,2	0
Citrobacter freundii GN 346	98,6	100
Proteus morganii IF0 3168	100	95,9
Elytrosporanim brasiliense IE0 1259	40,4	31,9
Nocardia asteroides IF0 3423	24,0	27,1
Streptomyces alboniger IF0 12738	0	21,5
Streptomyces californicus IF0 12750	0	43,0
Streptomyces chrestomyceticus IFO 13444	0	22,3
Streptomyces subsp. lasaliensis ATCC 31180	0	43,8
Streptomyces tubéreidicus IFO 13090	66,7	30,3
Streptomyces verticillus ATCC 31307	67,6	49,4
Aspergillus niger IFO 4066	48,0	0
Fusarium roseum IFO 7189	74,7	0
Penicillium chrysogenum JBI-FI	11,6	0
Penicillium chrysogenum 51-20T	89,8	0

A további példákban készítmények formálását mutatjuk be.

1. formálási példa

Injekció készítése tömegrész (I) képletíí vegyülethez tisztított vizet adunk és 2000 rész végtérfogatra egészítjük ki. Teljes oldódás után a kapott oldatot GS-típusú Millipore szűrőn átszűrve sterilezzük. 2 g szürletet 10 ml-es fiolába mérünk és fagyasztva szárítjuk. így a kapott, fagyasztva szárított injekciós készítmény fiolánként 30 mg (I) képletű vegyületet tartalmaz.

2. formálási példa

Granulumok készítése tömegrész (I) képletű vegyületet,600 tömegrész laktózt, 330 tömegrész kristályos cellulózt és 20 tömegrész hidroxi-propil-cel’ulózt gondosan homogenizálunk, hengeres Típusú présen préseljük (Roller Compacter®), ⁶⁰ aprítjuk, majd szitáljuk. A 16 és 60 mesh közötti frakciókat alkalmazzuk granulumként.

3. formálási példa

Tabletták készítése tömegrész (I) képletű vegyületet, 120 65 tömegrész kristályos laktózt, 147 tömegrész

-6197770 kristályos cellulózt és 3 tömegrész magnézium-sztearátot tartalmazó elegyet V-típusú keverőben tablettákká formálunk. A kapott tabletták mindegyike 300 mg (I) képletű vegyületet tartalmaz.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás az új, (I) képletű 9-[(2’R, 3’R, 4’S)-3’, 4’-bisz(hidroxi-metil)-2’-oxetanil] -hipoxantin előállítására, azzal jellemezve, hogy a (II) képletű 9-[(2’R, 3’R, 4’S)-3’, 4’-bisz(hid roxi-metil) -2’-oxetanil] -adeninit adenozin-dezaminázzal kezeljük.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy Alkaligenes bookeri, Escherichia coli, Citrobacter freundii, Proteus morganii, Elytrosporanimbrasiliense, Nocardia asteroides, Streptomyces californicus, Strepíomyces chrestomyceticus, Streptomyces tu12 bercidicus, Streptomyces verticillus, Aspergillus niger, Fusarium roseum vagy Penicillium chrysogenum által termelt, tisztított adenozin-dezaminázt alkalmazunk.

5
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a kezelést pufferoldatban végezzük.
4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy pufferoldatként föszfátpuf10 fért alkalmazunk.
5. Eljárás gyógyászati készítmények, előnyösen immundepresszáns és/vagy vírusellenes hatású, még előnyösebben HÍV ellen ható készítmények előállítására, azzal jelle15 mezve, hogy az 1. igénypont szerint előállított (I) képletű 9-[(2’R, 3’R, 4’S)-3’, 4’-bisz(hidroxi-metil) -2’-oxetanil] -hipoxantint gyógyászati célra alkalmas hordozó és/vagy segédanyagokkal összekeverve gyógyászati készít

20 ménnyé alakítjuk.